JPH01279841A - 肝炎ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は肝炎ワクチンに関する。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）はヒトの血清肝炎を起すウ
ィルスとして知られ、輸血を要する患者や臨床検査、血
漿製剤に従事する者にしばしば感染し、誠にやっかいな
問題を引き起す。今日トＩＢＶはコア抗原（Ｈ８ＣＡＣ
Ｊ）と表面抗原（ＨＢＳＡＱ）及びｅ抗原とから成り立
ちコアの中にＤＮＡポリメラーゼを持つ直径的４０ｎｍ
の大型粒子であることが知られており（（１１１０Ｔｅ
ｃｈｎｉｃａｌ　Ｒｅｐｏｒｔ　５ｅｒｉｅｓ　Ｈａ　
５７０、Ｖｉｒａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓ　）　１９７５
　）　、またアンチートＩＢｓ（八ｎｔｉ−ＨＢＳ）が
、このＨＢＶの感染を予防しうろことも既に明らかにさ
れている。

従来ｌ−Ｉ　Ｂ　ｓ　Ａ　ａは、これを含む血漿または
血漿画分を密度勾配超遠心分離法によって、密度１．２
０−１．２３の両分を得る方法（（Ｊ、Ｌ。

Ｇｅｒｉｎ、　Ｐ、　Ｖ、　Ｈｏ１ｌａｎｄおよびＲ，
Ｉｔ、　Ｐｕｒｃｅｌｌ　）　：（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｒ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　）第７巻、第５６９−５７６ペ
ージ（１９７１年）及び（Ｎ、　５ｕｋｅｎｏ、　Ｒ。

５ｈｉｒａｃｈｉ、　Ｒ，５ｈｉｒａｃｈｉ、　Ｊ、　
ＹａｓａｇｕｃｈｉおよびＮ、　ｌ５ｈｉｄａ　）　：
同誌、第９巻、第１８２−１８３ページ（１９７２年）
〕によって比較的純粋に得られていた。

更に新しくはアフィニティークロア１へグラフィー法が
提案されている〈白石広行、石田名香川、助野典ａ二日
本ウィルス学会抄録昭和４８年１１月４．５．６日発表
、東京において）。この方法の概要は次のとおりである
。

精製Ｈ［３Ｓ　Ａ　Ｑを動物、例えば山羊に免疫して得
た山羊抗ＨＢｓ血清にＩ−Ｉ　Ｂ　ｓ　Ａ　ａを含まな
いヒトの血清を加えて混在するヒト血清成分に対する抗
体を吸収沈殿させ、上清を硫酸アンモニウム沈殿分画性
によってγ−グロブリン抗ＨＢ　５（ａｎｔｉＨＢｓ）
を得る。臭化シアンで活性化したセファロース−４８（
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　−４Ｂ　）　トコ（ＤａｎｔｉＨ
８８とをカップリングさせ、この生成物のカラムを準備
する。トｌＢ５Ａｇを含むヒト血漿、またはこれから常
法によって分画されたα−及びβ−グロブリン画分を０
．０１Ｍリン酸緩！ｌｉ液に懸濁し、遠心分離し、得ら
れる上清について上記のカラムを用いてクロマトグラフ
ィーを行う。カラムに結合したＨＢｓＡａを０．４Ｍ−
グリシン−）Ｉ（、Ｊ　（１１Ｈ２，５）！ｌ衝液で溶
出し、溶出液を０．０１Ｍリン！！２１！ｌｉ液に対し
て透析し、ＨＢＳＡＧ溶液を得る。この溶液を、前記の
カラムと同様に、ただし、山羊抗ＨＢＳ血清を用いる代
りに、動物、例えば馬に免疫して得た馬抗ヒト血漿血清
を用いる以外は同様にｌｆＪしたカラムを用いてクロマ
トグラフィーにかけ、微量に混在する血漿成分をカラム
にとどめＩ［ＨＢｓＡａ溶液を通過部分として集める。

ＨＢｓＡｑを構成するサブユニットについては、１−Ｉ
　Ｂ　Ｓ　Ａ　Ｑを切断することによって見いだされる
ペプチドを検索し、勺ブユニットは種々の分子量のポリ
ペ１チドを含むことが多くの報告者によって報告されて
いる。すなわち、ゲリン（前出）はＨＢＳＡＱは、分子
量２６．０００．３２．０００及び４０，０００のポリ
ペプチドからなることを報告している。その外、それが
、２５．０００及び３２．０００の分子量のポリペプチ
ド（（Ｇ。

Ｎ、Ｖｙａｓ、　Ｅ、　Ｈ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ、　ＧＧ
Ｂ　Ｋｌａｕｓ　　およびＨ，Ｅ、　　Ｂｏｎｄ）　　
：　　（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｉｇ＋
ｎｕｎｏｌｏｇｙ　　）第１０８巻、第１１１４−１１
１８ページ（１９７２年’））　、３９，０００．３２
，０００．２７゜０００及び２２．０００のポリペプチ
ド並びに微醋の１６，０００及び１０．０００のもの（
（Ｇ、　Ｒ，Ｄｒｅｓｓｍａｎｎ、　Ｆ、　Ｂ、　ｔｌ
ｏｌｌｉｎｇｅｒ、　Ｊ、　Ｒ。

５ｕｒｉａｎｏ、　　Ｒ，Ｓ、　　Ｆｕｊｉｏｋａ、　
　Ｊ、　　Ｐ、　　８ｒｕｎｓｃｈｗｉｇおよびＪ、　
Ｌ、　Ｈｅ１ｎｉｋ）　：　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ　、第１０巻、第４６９−４７６ページ
（１９７２年）〕及び分子ｍ１ｏｏ、ｏｏｏのポリペプ
チドを主成分とし、６５，０００．３６，０００及び２
０゜ＯＯＯのもの（Ｃ，Ｒ，ｌｌｏｗａｒｄおよびＡ、
　Ｊ。

Ｔｕｃｋｅｒｍａｎ　）　：　（ｌ１ｃｐａｔｉｔｉｓ
　Ｍｅｍｏｒａｎｄａ　）　、ｌ−１−５７６，１９７
３年１０月、Ｕ、Ｓ、Ａ、）　１７）＋＋７１ニットか
ら構成されることが報告されている。またＮ、　５ｕｋ
ｅｎｏ、　Ｓ、八ｉｋａｗａ′Ｉ３よびＮ、　ｌ５ｈｉ
ｄａ　：同誌、Ｈ−２９２，１９７２年４月、ｔｌ、ｓ
、Ａ、）Ｌｔ、ＨＢＳＡＱを尿素の存在においてドデシ
ル硫酸ナトリウムによって切断するドデシル硫酸ナトリ
ウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳ｗＪＰ！Ｉ易分子
聞分析法（Ｃｏｌｏｗｉｃｋ−にａｐｌａｎ　：　Ｍｅ
ｔｈｏｄ　ｉｎＥｎｚｙｓｏｌｏｇｙ　　第２６巻、第
３ページ（１９７２年））によってそれが分子ｆｆ１２
５，０００．２８゜０００及び３３．０００のポリペプ
チドのナブユニットからなることを報告している。

このようなＨ［３Ｓ　Ａ　Ｏのサブユニットの探索は、
そのサブユニットと抗原性との関係を明らかにし、より
抗原性の特異部位を取り出すことを目的としており、ひ
いては効率的なワクチン、試薬の原料としての利用、Ｈ
ＢＳＡＱの抗原基の研究への利用を図ろうとするもので
ある。

本発明の共同研究者らも先に、このＨＢｓＡｑの抗原性
を持つサブユニットの回収法として、ＨＢＳＡＧを脱す
ビド化（ｄｅｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）すルコとのできる
ある種の界面活性剤の存在下で加熱処理することによっ
て、ＨＢＳＡ（７としての抗原性を保持した分子間約５
５．０００の単一のポリペブタイドのみのサブユニット
からなる大きさが約１８−２０ｎｌの均一な球形粒子（
１−ＩＢＡａ５５）に変換することができることを内示
している（特開昭５０−１６０４２０号）。

本発明者らは、またＨＢＳＡＱの抗原性を持つ粒子の回
収法として新たな方法を発明し、その方法によって新規
性状を有する、すなわち等電点ｐｌ＋５．５−６．５、
分子Ｒ２−４百万、比重１．８０〜１．２４．直径１８
０〜２２０人の球形粒子の高い抗原性を保持した均一な
変性ＨＢＳＡＧ粒子を提供することにも成功している（
特開昭５３−１０４７２４号）。

本発明者らは、これらの成功に引き続き、実際にワクチ
ンとして用いつるベプタイドを得るための研究を続けて
きた。

ワクチンとしては精製して得たＨＢＳＡＱ粒子をそのま
ま用いることもできるが、その場合感染性を有したＨｅ
ウィルスを完全に除去することはほとんど不可能で、し
たがってホルマリンや加熱処理によって混入が予測され
るＨｅウィルスを不活性化させる方法が検討されている
。しかし、不活性化したかどうかを証明する方法として
、現在トＩＢウィルスに感染する動物として知られてい
るのはチンパンジーのみであることからチンパンジーを
用いたテストが必要である。しかし現状では世界中のチ
ンパンジーの数も限られ、経済的にも高価なテストで、
将来継続して不都合なくテストが行える保証もない、ま
たＨＢＳＡＧ粒子のままでは、ヒト血清タンパクの完全
な除去も極めて困難で、これらタンパクが不活性化処理
を通じて変性すれば副作用の原因にもなるおそれがある
。

これに対し、精ｔＪＨＢｓＡｑより分子量の小さいリブ
ユニットと分離してベプタイドを得、これをワクチンと
することができれば、粒子の大きいＨｅウィルスの混入
してくるおそれもなく、ＨＢ　Ｓ　Ａ　０粒子において
はなんらかの親和性でこれより分離が困難であった血清
タンパク成分も分離除去が容易である。

ＨＢワクチンとして用いられるベプタイドは、ＨＢ　Ｓ
　Ａ　ＣＪの抗原性を有していることが必須である。既
に説明したように、Ｈ［３ＳＡＱ粒子はこれに対する化
学処理のわずかな相違によって各種分子量のサブユニッ
トに分離されるが、ワクチンとして用いる場合にはその
安全性と有効性が変動してはならず、またワクチン性剤
としての安定性が確保されなければならないから、一定
のポリペブタイドであることが最も望ましい。

本発明は、このような事柄を背景としてなされれたもの
であり、ＨＢ　Ｓ　Ａ　にＪの抗原性を有した、分子ｆ
ｆ１２４．０００〜２８，０００からなる糖ベプタイド
を得る方法を発明し、安全、かつ有効で安定なるＨ　Ｂ
ワクチンを提供することに成功した。

本発明はヒト血漿よりＮ製して得られる１１［３ｓＡＱ
を用い、界面活性剤及び還元剤を存在させて加熱するこ
とによって、ＨＢｓＡａを勺ブユニツ）・の糖ベブタイ
ドに切断し、これが再重合することのないように、界面
活性剤及び還元剤を存在させてゲル濾過法によって分画
し、分子ｆｉｔ　２４．０００〜２８．０００の糖ペブ
タイドから成る両分を分別し、用いた界面活性剤を除去
するための吸着補助剤と糖ペブタイドの溶解性を維持さ
せるための溶解補助剤とを用いながら透析して、生理的
に受入れられる中性付近の溶液として回収した糖ベプタ
イドからなるＨＢワクチン及びその製造方法である。

本発明において用いられるＨ　Ｂ　Ｓ　Ａ　Ｑとして公
知の方法によって血漿または血清から純粋に得たものを
用いることができる。また血漿または血清の代りにα−
及びβ−グロブリンを含む血漿両分、例えばコーンのア
ルコール分画法におけるＮ−１画分もまた原料として好
ましい。

本発明に用いられる界面活性剤はドデシル硫酸ナトリウ
ムなどのアルキル硫酸エステル塩、あるいはアルキルリ
ン酸エステル塩などから選ばれるアニオン界面活性剤で
ある。界面活性剤の添加針は０．１〜１０％、好ましく
は０．５〜２．０％である。アニオン界面活性剤の添加
植は多くても差し支えないが濃度が高いと固体化しやす
く、したがって、温度を高く保つ必要があるので好まし
くないことになる。

本発明に用いられる還元剤は、２−メルカプトエタノー
ル、ジチオスレイトール、グルタチオンなどから選ばれ
るチオール型還元剤である。還元剤の添加室は０．１〜
１０％、好ましくは０．５〜２．０％である。

加熱は中性付近の！１衝液中、１００〜４０℃で２〜６
０分間、好ましくは１００〜９０℃で、１〜５分間ある
いは７０〜５０℃で２０〜４００〜４０分 間の処理で生成した糖ベプタイドは、界面活性剤及び還
元剤の存在しない条件では再結合するので、アニオン界
面活性剤及びチオール基を有した還元剤の存在している
条件においてゲル濾過し、各種の生成されたベブタイド
及び糖ベブタイドを分子量の大ぎさによって分画する。

ゲル濾過は界面活性剤として、例えばドデシル硫酸ナト
リウムを０．０５〜２％、好ましくは０．１〜０．５％
、及び還元剤として、例えば２−メルカプトエタノール
０．０５〜２％、好ましくは０．１〜０．５％存在する
中性付近のｖｌｌ液液用いて、１５〜４５℃、好ましく
は３５〜４０℃にて行う。

ゲル濾過剤はセルロース、アガロース、交差結合デキス
トランなどの高分子多糖体顆粒あるいは交差結合ポリア
クリルアミドであり、商品とじてはセファクリルＳ１セ
フアデツクス、セファロース、パイオーゲル（Ｂｌｏ−
Ｇｅｔ　）　Ｐ、バイオ−ゲルＡなどが例示されるが、
分子ふるい作用を有する担体であればこれらに限定され
ない。

ゲル濾過の結果、分子量が約６８．０００、約２７．０
００及び約２２．０００その他から成る幾つかの画分が
得られるが、これらのうち分子量的２４，０００〜２８
，０００から成る両分を分取する。

このようにして得られた両分は適当な濃度になるよう濃
縮し、両分に含まれていたアニオン界面活性剤及びチオ
ール基を有した還元剤を除去して、生理的に受は入れら
れる溶液とするのであるが、界面活性剤及び還元剤は共
に完全に除去されてしまうと糖ベプタイドの溶解性が砥
石し、その溶液を長期間保管したいような場合、沈殿を
析出するおそれがあるので、プルロニック（Ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ）Ｆ１ａ、ツウイーン（Ｔｗｅｅｎ　）　８０な
どの非イオン界１Ｉｉｉ活性剤から選ばれた溶解補助剤
を溶液中に保たせるようにするのがよい。

濃縮した後の溶液は、中性付近のｌ！衝液に対して透析
することによって、加熱反応に用いた界面活性剤と還元
剤を除去するが、この際完全な除去はなかなか国璽であ
る。

そこで透析外液にプル０ニツクＦ６８、ツウインーン８
０などの非イオン性界面活性剤から選ばれた溶解補助剤
を０．０１〜０．１％含有し、アニオン界面活性剤及び
還元剤を吸着除去するための吸着剤としてパイオーラッ
ド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　）　Ａ　Ｇ−２（商品名）などの
塩基性貼イオン交換吸着剤を加えたものを用いる。

このようにして得られた溶液は、中性付近の生理的に等
張で、一定量の糖ベブタイド濃度となるように調製し、
除菌濾過した後、官憲に分ｔ↑してＨｅワクチンの製造
を完了する。

Ｈｅワクチンの有効性は、これのＨＢｓＡｇ抗原力価と
共にこれをウサギ、モルモットなどの実験動物に注射し
てＨＢｓＡｑに対する抗体の産生をみることによって求
めることができる。

本発明の糖ベブタイドの理化学的特徴は、実施例１で得
られたものを用いて求めた。

（１）　　分子量 本発明の糖ペプタイドを、ドデシル硫酸ナトリウム・ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動法によって分子量を測定
したところ、約２７．０００であった。またセファデッ
クスＧ−１００によるゲル濾過分析では分子１２４．０
００〜２８．０００であった。従って分子量を２４，０
００〜２８．０００とすることが、最も信頼度の高い範
囲と思われる。

（２）　　溶解性 本発明の糖ベブタイドの水に対する溶解性は、中性付近
で約５％以Ｆであり、それ以上ではタンパク乳濁色を呈
するようになる。この溶解性は塩化す］−リウム溶液、
リン／ｉ！２塩ｍｓ液、トリス−ＨＣＩＭＷＲ液におい
ても大差はないが、０．０１〜０．１％程度のプルロニ
ックＦ６８あるいはツウイーン８０などの算イオン界面
活性剤から選ばれた溶解補助剤の存在で溶解性は高まる
。

（３）　　紫外線吸収 本発明のベプタイドの水溶液の２８　Ｏｎ１ｍにおける
吸光度から求めた分子吸光係数Ｆ１％ＣＭ ２８０　ｎｌは３５であった。

（４）温度安定性 本発明の糖ペブタイドの０．０５％のプルロニックＦ６
８を含有するａｌ１７．２のりンＮ塩緩衝液を６０℃±
０．５℃で１　ｖｇ間間熱熱ても、そのＨＢＳＡＯの抗
原性は失われなかった。

（５）　　呈色反応 本発明のベブタイドの水溶液について、ローリ−・フォ
リン法で試験した結果、ベブタイド特有の青色を呈した
。また６規定塩酸溶液中、１１０℃で２２時間加水分解
した後ニンヒドリン反応で試験した結果、α−アミノ酸
にょる紫青色を呈した。糖類試験のためのα−ナフトー
ル硫酸反応（モリッシュ（Ｈｏｌｉｓｈ）反応）では紫
色を呈しフェノール硫酸反応でかっ色を♀して共に陽性
であった、 ！６）　　ＩＩ４成アミノ酸 本発明の糖ベプタイドを常法によって加水分解して、ア
ミノ酸自動分析装置を用いて、アミノ酸組成を求めた。

結果は第１表のとおりである。

第１表 精製トＩＢｓＡＱのアミノ酸組成に対する分析結果も第
１表に含めて示しであるが、この結果と本発明の糖ペブ
タイドの結果と比べるとき大きな差異は認められない。

このことからこの糖ベブタイドはＨＢｓＡｏの主たる部
分を構成していることが推察される。

（７）糖質部分の構成糖 シアル酸はチオバルビッール酸法（デイ、アミツク（０
，八ｍ１ｎｏｆｆ）法〕により、伯の糖は、試料をメタ
ノライシス後トリメチルシリル化し、ガスクロマド・マ
スフラグメントグラフィーによって、本発明の糖ベプタ
イドに含まれる糖の組成に関する分析を行った。結果は
第２表に示したとおりである。

第２表 フコース　　　　　　検出されず マンノース　　　　　３．０％　（２，４〜３．５％）
ガラクトース　　　　　２．３％　（１，２〜３．２％
）グルコース　　　　　　３．６％　（２，８〜４．４
％）Ｎ−アヒチ／Ｌ／　　　　　　２．５％　（２，２
〜２．７％）グルコ勺ミン Ｎ−アセチル　　　　　検出されず ガラクトサミン シアルＭ　　　　　　　　０．２％ 総糖含ｆ１　　　　　　　１１．６％　（１０〜１２．
５％）（８）　　タンパク質と糖質の構成比率本発明の
糖ベブタイドのセミミクロケルブール法によるタンパク
質定量結果は８７〜９０％であった。残る１３〜１０％
の糖質は前記（９）記載の１２．５〜１０％とよく一致
する。

（９）　　色及び形 本発明の糖ペブタイドは、乾燥させたときほぼ白色の不
定形粉末となった。

本発明を更に具体的に説明するために以下実施例を掲げ
るが、実施例の記載は本発明をなんら限定するものでは
ない。

例１ ＨＢＳＡＱ陽性と判定されたヒト・プール血漿１１を、
抗Ｈａｓ抗体グロブリン（ヤギ）結合セファロース４　
Ｂ　（ａｎｔｉ−Ｈ８ｓ　ａｌｏｂｕｌｉｎ　ｃｏｕｐ
ｌｅｄＳｅｐｈａｒｏｓｅ　４Ｂ）で作成したカラムを
通過さゼ、ＨＢＳＡＣＩをカラムに吸着させる。吸着カ
ラムは０．１５Ｍ塩化塩化セシウム溶液して洗浄後、０
．４Ｍグリシン−ＨＣ１＊衝液でＨ［３ＳＡｑを溶出さ
せる。

溶出液は０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液で透析した後、
抗ヒト血漿抗体グロブリン（ヤギ）結合セファロース４
Ｂで作成したカラムを通過させ、ヒト血漿成分をカラム
に吸着させる。吸着せずに通過した溶液は濃縮した後、
塩化セシウムによりリニア・グレデイエント超遠心分離
を行い、密度１．１９〜１．２３の両分を集め、濃縮し
て２Ｉ！ｌｌと・した。

このものは抗ヒト血漿抗体グロブリン（ヤギ）に対して
免疫電気泳動を行った結果、ヒト血清成分の存在を認め
ず、電子顕微鏡観察で直径２２０１の均一なＨＢＳＡＱ
の小型球形粒子から成り立っており、大型υ子の存在は
認めず、ＲＰ　１−１Ａ法による測定で抗原価は１　：
　１．２８０．０００であつだ。回収率は５２％であっ
た。この精製ＨＢＳＡＧをＨＢ糖ベブタイドワクチン製
造の材料とした。

Ｎ製ＨＢ　Ｓ　Ａ　Ｑの溶液に、ドデシル硫酸ｔトリウ
ム及び２−メルカプトエタノールをそれぞれ１Ｗ／Ｖ％
濃度となるように加え、１００℃で２分間加熱処理した
後、別にあらかじめ０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、
０．１％２−メルカプトエタノール及び０．１５Ｍ塩化
ナトリウムを含有する１／１００Ｍリンｌ！２塩緩衝液
、ｐｌ＋７．２で平衡化したセファクリルＳ−２００の
カラムを用いて３７℃にてゲル濾過した。そのときの両
分像は第１図に示ずとおりである。

第１図のＦ３両分を集め、再ゲル濾過を行って混在して
いるＦ　画ヅ５成分（Ｆ３両分は主としてＦ　及びＦ４
両分成分から成り立っている）を完全に分離した侵、０
．５％のバイオ−ラッドＡＧ−２と０．０２％のプルロ
ニックＦ６８を含有したリン酸緩衝液で透析する。透析
の終った液は０．０２％プルロニックＦ６８含有０．１
５Ｍ塩化犬トリウム溶液を加えて希釈して糖ベプタイド
が６０μ９／ｄとなるように調製し、除菌濾過後１ｔｄ
ずつ容器に小分けしたｌ−（Ｆ３ワクチン製剤５１０本
を得た。

このようにして得た）−ＩＢワクチンを３匹のウサＶに
注）１した。注射は１回０．５Ｍｌを背部皮下及び皮肉
に行い、２′！Ａ間間隔で３回注射した侵２週間接に採
血し、その血漿についてＰＨＡ法で１１　Ｂ　Ｓ抗体価
を測定したところ、それぞれ１：２５６．１　：８．０
００．１　：８，０００の）−ＩＢｓ抗体産生を認めた
。

例２ 例１の粘製Ｈａｓへ〇を用い、実施例１で用いた２−メ
ルカプトエタノールの代りにジチオスレイトールを用い
て６０℃、３０分間加熱処理した後、別にあらかじめ０
．１％ドデシル１ａ酸ナトリウム、０．１％ジチオスレ
イトール及び０．１５ＭＩ！化ナトリウムを含有する１
／１００Ｍリン酸塩！１ｉ液、ｐＨ７，２で平衡化した
セファデックスＧ２００のカラムを用いて３７℃にてゲ
ル線通した。

実施例１と同様にしてＦ３自分を集め、再ゲル濾過を行
って混在しているＦ４両分成分を完全に分離してから実
施例１とＩ［１様に操作して）−１［３ワクチン製剤１
２０本を得た。

このものの２匹のウサギに対するｌｌＢｓ抗体産（ｔは
、−１’Ｌぞれ１：　１．０２４及び４．０９６Ｆあっ
た。

例３ 実施例１において、１３画分を集め、再ゲル濾過して混
在しているＦ４両分成分を完全に分離したものにつき０
．０２％のツウィーン８ｏを含有した０、１５Ｍｊｍ化
ナトリウム溶液で透析した後ＥｉＪじ液で希釈して糖ペ
プタイドが５０μｇ／ｌＩＩ！となるように調製した。

この液に０．１％の水酸化アルミニウムを加え、除菌濾
過後１１Ｉｅずつ容器に小分けしたＨ　８ワクチン製剤
５９０本を得た。

このようにして得たＨ　Ｂワクチンを３四のモルモツ］
・に注射した。注射は実施例１と同様にして行った。結
果はそれぞれのモルモットに１：５１２．１　：３２，
０００，１　：３２．０００（７）ＨＢＳ抗体産生を認
めた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１においてゲル濾過して得たｉｉ！ｉ
分の画分像グラフである。 図中、Ｆ、［、Ｆ　　、Ｆ　　及びＦ５それぞれの画分
ｅ示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次の理化学的性質を有するＨＢ＿ｓＡ＿ｇ由来の、糖ペ
   プタイド：（ａ）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミド
   による電気泳動分析で２４，０００〜２８，０００、（
   ｂ）溶解性：水に対する溶解性は、中性付近において約
   １５％であり、それ以上ではタンパク乳濁色を呈する。 （ｃ）紫外線吸収：２８０ｎｍにおける分子吸光係数（
   Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）は３５である。 （ｄ）温度安定性：水溶液を６０℃±０．５℃で１時間
   加熱してもその抗原性は失われない。 （ｅ）呈色反応：ローリー・フオリン反応によりペプタ
   イドの、また加水分解後ニンヒドリン反応により、アミ
   ノ酸の呈色反応を示し、またα−ナフトール硫酸反応（
   モリシユ反応）及びフエノール硫酸反応で、それぞれ紫
   色とかつ色の糖類の呈色反応を示す。 （ｆ）構成アミノ酸：アスパラギン酸、スレオニン、セ
   リン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、
   システイン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイ
   シン、チロジン、フェニルアラニン、リジン、ヒスチジ
   ン、アルギニン、（ｇ）糖質部分の構成糖： マンノース（２．４〜３．５％）、ガラクトース（１．
   ２〜３．２％）、グルコース （２．８〜４．４％）、Ｎ−アセチルグルコサミン（２
   ．２〜２．７％）、シアル酸 （０．２％）で、フコースとＮ−アセチルガラクトサミ
   ンは含有しない。 （ｈ）タンパク質と糖質の構成比率： 重量比で糖質１０〜１３％、および （ｉ）色及び形：ほぼ白色、不定形である、Ｂ型肝炎ワ
   クチン。