JPH01305036A - 血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤 - Google Patents
血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤Info
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- JPH01305036A JPH01305036A JP63135281A JP13528188A JPH01305036A JP H01305036 A JPH01305036 A JP H01305036A JP 63135281 A JP63135281 A JP 63135281A JP 13528188 A JP13528188 A JP 13528188A JP H01305036 A JPH01305036 A JP H01305036A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白
成分製剤に関する。
成分製剤に関する。
（従来技術〕
血漿蛋白成分を血漿分画から得る場合には、肝炎ウィル
ス等の夾雑ウィルスの混在を否定することができない。
ス等の夾雑ウィルスの混在を否定することができない。
従って、血漿蛋白成分製剤は血液製剤化技術において、
夾雑ウィルスの不活化方法として広く知られている６０
℃１１０時間の液状加熱処理を施されていることが極め
て重要である。
夾雑ウィルスの不活化方法として広く知られている６０
℃１１０時間の液状加熱処理を施されていることが極め
て重要である。
ところで本発明者らは、上記の６０゛Ｃで１０時間の条
件下での加熱処理によってはウィルスの種類によっては
充分に不活化できないのではないかという危惧を持って
いる。
件下での加熱処理によってはウィルスの種類によっては
充分に不活化できないのではないかという危惧を持って
いる。
そこで、本発明者らは血漿蛋白成分を殆ど不活化させる
ことなく、夾雑ウィルスを実質的に不活化させることを
目的として液状加熱処理条件について検討を重て来たと
ころ、５０〜７０℃で１５〜３０時間という従来より過
酷な加熱処理条件でも所期の目的が達成できることを見
出した。
ことなく、夾雑ウィルスを実質的に不活化させることを
目的として液状加熱処理条件について検討を重て来たと
ころ、５０〜７０℃で１５〜３０時間という従来より過
酷な加熱処理条件でも所期の目的が達成できることを見
出した。
また、その際、少なくとも垢の存在下に加熱処理を行う
ことが、効果の発現に大いに寄与することを見出した。
ことが、効果の発現に大いに寄与することを見出した。
本発明は以上の新知見に基づいて完成されたものである
。
。
〔課題を解決するための手段］
即ち、本発明は下記（１）〜（３）に関するものである
。
。
（１）血漿蛋白成分含有水溶液を５０〜７０℃で１５〜
３０時間加熱処理することを特徴とする血漿蛋白成分の
加熱処理方法。
３０時間加熱処理することを特徴とする血漿蛋白成分の
加熱処理方法。
（２）少なくとも糖の存在下に加熱処理を行う請求項（
１）記載の加熱処理方法。
１）記載の加熱処理方法。
（３）血漿蛋白成分含有水溶液の状態において５０〜７
０℃で１５〜３０時間加熱処理してなることを特徴と１
−る血漿蛋白成分製剤。
０℃で１５〜３０時間加熱処理してなることを特徴と１
−る血漿蛋白成分製剤。
本発明・′）血漿蛋白成分はヒト血漿に由来するもので
あれば特に限定されない、具体的には、血液凝固因子（
例えば、第■因子、第■因子、第■因子複合体、第ＸＩ
［［因子など）、フィブロネクチン、プラスミノゲン、
アンチトロンビン■、アルブミン、ハプトグロビン、コ
ロニー形成刺激因子などが挙げられる。
あれば特に限定されない、具体的には、血液凝固因子（
例えば、第■因子、第■因子、第■因子複合体、第ＸＩ
［［因子など）、フィブロネクチン、プラスミノゲン、
アンチトロンビン■、アルブミン、ハプトグロビン、コ
ロニー形成刺激因子などが挙げられる。
この血漿蛋白成分は未精製、部分精製、高度精製のいず
れの段階にあってもよい。
れの段階にあってもよい。
また、水溶液中における血漿蛋白成分の含量としては、
０．１〜３０ ｗ／ｖ％、好ましくは１〜１０ｗ ／
ｖ％程度が例示される。当該水溶液のｐＨは一般に４〜
１０であり、好ましくは適当な緩衝液によってｐ１１６
〜８程度に調製される。
０．１〜３０ ｗ／ｖ％、好ましくは１〜１０ｗ ／
ｖ％程度が例示される。当該水溶液のｐＨは一般に４〜
１０であり、好ましくは適当な緩衝液によってｐ１１６
〜８程度に調製される。
血漿蛋白成分含有水溶液を加熱処理する際には、従来公
知の安定化剤を加えることが好ましい。安定化剤として
は塘（単＃Ｍ類、二Ｉ！類、糖アルコールなど）、アミ
ノ酸、有機酸塩、無機塩、界面活性剤、アルブミンなど
が挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。特に
好ましい安定化剤は糖である。
知の安定化剤を加えることが好ましい。安定化剤として
は塘（単＃Ｍ類、二Ｉ！類、糖アルコールなど）、アミ
ノ酸、有機酸塩、無機塩、界面活性剤、アルブミンなど
が挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。特に
好ましい安定化剤は糖である。
単糖類としてはグルコース、マンノース、ガラクトース
、果糖などが、二ｔＪ！［としてはシｇ糖、麦芽糖、乳
糖などが、糖アルコールとしてはマンニント、ツルピン
ト、キシリットなどが好適なものとして例示されるが、
これらに限定されるものではない。糖類の添加量は、血
漿蛋白成分含有水溶液１００ｄ当たり１０〜２００ｇで
ある。
、果糖などが、二ｔＪ！［としてはシｇ糖、麦芽糖、乳
糖などが、糖アルコールとしてはマンニント、ツルピン
ト、キシリットなどが好適なものとして例示されるが、
これらに限定されるものではない。糖類の添加量は、血
漿蛋白成分含有水溶液１００ｄ当たり１０〜２００ｇで
ある。
中性塩としては塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム、塩化マグネシウムなどのアルカリ金属または
アルカリ土類金属のハロゲン酸塩などが例示され、その
添加量は、血漿蛋白成分含有水溶液ｌｏｏｍ当たり０．
１〜１０ｇである。
ルシウム、塩化マグネシウムなどのアルカリ金属または
アルカリ土類金属のハロゲン酸塩などが例示され、その
添加量は、血漿蛋白成分含有水溶液ｌｏｏｍ当たり０．
１〜１０ｇである。
アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイ
シン、イソロイシン、リジン、アルギニンなどが例示さ
れ、その添加量は血漿蛋白成分台を水溶液１００ａ＋！
当たり１〜３０ｇである。
シン、イソロイシン、リジン、アルギニンなどが例示さ
れ、その添加量は血漿蛋白成分台を水溶液１００ａ＋！
当たり１〜３０ｇである。
有機酸としては、有機カルボン酸（炭化水素残基にカル
ボキシル基が置換したもの）であることが好ましく、炭
化水素残基は飽和されていても不飽和であってもよ（、
また鎖状（直鎖状または分枝状）、環状のいずれでもよ
い、当該炭化水素残基としてはアルキル基、アリール基
（たとえばフェニル基）などが例示される。当該有機酸
におけるカルボキシル基は複数個であってもよいが、１
または２個が好ましい、また当該有機酸は、水酸基で置
換されていてもよい、有機酸塩における塩としては、生
理的に許容されるものであれば特に制限はなく、好まし
いものとしては、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリ
ウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩など
）、特に好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩が挙げ
られる。
ボキシル基が置換したもの）であることが好ましく、炭
化水素残基は飽和されていても不飽和であってもよ（、
また鎖状（直鎖状または分枝状）、環状のいずれでもよ
い、当該炭化水素残基としてはアルキル基、アリール基
（たとえばフェニル基）などが例示される。当該有機酸
におけるカルボキシル基は複数個であってもよいが、１
または２個が好ましい、また当該有機酸は、水酸基で置
換されていてもよい、有機酸塩における塩としては、生
理的に許容されるものであれば特に制限はなく、好まし
いものとしては、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリ
ウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩など
）、特に好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩が挙げ
られる。
かかる有機酸の好ましい炭素数は、３〜１５程度である
。
。
有機酸塩の具体例としては、プロパン酸、ブタン酸、ペ
ンタン酸、カプリン酸、カプロン酸、マロン酸、コハク
酸、グルタル酸、アジピン酸、クエン酸、マンデル酸な
どの生理的に許容される塩、特にアルカリ金属塩（ナト
リウム塩、カリウム塩）が挙げられる。
ンタン酸、カプリン酸、カプロン酸、マロン酸、コハク
酸、グルタル酸、アジピン酸、クエン酸、マンデル酸な
どの生理的に許容される塩、特にアルカリ金属塩（ナト
リウム塩、カリウム塩）が挙げられる。
有機カルボン酸塩の添加量は、血漿蛋白成分含有水溶液
１００−当たり１〜３０ｇである。
１００−当たり１〜３０ｇである。
界面活性剤としては、アルキルフェニルポリオキシエチ
レン〔たとえば、トリトン（Ｔｒｉ ｔｏｎ ” ）、
ノニデント（Ｎｏｎｉｄｅｔ＠） ）のような非イオン
性剤、胆汁酸塩（例えばナトリウムタウロコラート）の
ようなアニオン性剤、またヘンズアルコニウムクロライ
ドのようなカチオン性剤、プロピレンオキシドの高分子
量共重合体のような界面活性を持つ多価アルコール〔プ
ルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ”） Ｆ６８］などが
例示され、その添加量は、当該水溶液１００ｄ当たり０
．００２〜０．０５ ｇ程度が好ましい、アルブミンは
ヒト血清由来または遺伝子組喚えによって得られたもの
が好ましい。添加量としては当該水溶液１０Ｃ１ｄＩ′
、ｌ：＝’・ｌ′ＩＱ、Ｉ−Ｌｏｇ程度が好ましい。
レン〔たとえば、トリトン（Ｔｒｉ ｔｏｎ ” ）、
ノニデント（Ｎｏｎｉｄｅｔ＠） ）のような非イオン
性剤、胆汁酸塩（例えばナトリウムタウロコラート）の
ようなアニオン性剤、またヘンズアルコニウムクロライ
ドのようなカチオン性剤、プロピレンオキシドの高分子
量共重合体のような界面活性を持つ多価アルコール〔プ
ルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ”） Ｆ６８］などが
例示され、その添加量は、当該水溶液１００ｄ当たり０
．００２〜０．０５ ｇ程度が好ましい、アルブミンは
ヒト血清由来または遺伝子組喚えによって得られたもの
が好ましい。添加量としては当該水溶液１０Ｃ１ｄＩ′
、ｌ：＝’・ｌ′ＩＱ、Ｉ−Ｌｏｇ程度が好ましい。
加熱処理は、５０’Ｃへ一１０゛Ｃ好ましくは約６０℃
にて１５〜３０時間、好まし±す０時間行われる。
にて１５〜３０時間、好まし±す０時間行われる。
かくして得られた製剤は溶液状であり、高度精製血漿蛋
白成分を出発材料とした場合はそのまま、粗製品を用い
た場合は公知の精製法に準じて処理を行った後、必要な
らば、透析、除菌濾過を行った後、包装単位に従って分
注されて。その貯蔵方法は、高温を避ければ特に限定さ
れるものではないが、３０℃以下に保存することが好ま
しい。また、当該血漿蛋白成分製剤は所望により凍結乾
燥製剤としてもよい。
白成分を出発材料とした場合はそのまま、粗製品を用い
た場合は公知の精製法に準じて処理を行った後、必要な
らば、透析、除菌濾過を行った後、包装単位に従って分
注されて。その貯蔵方法は、高温を避ければ特に限定さ
れるものではないが、３０℃以下に保存することが好ま
しい。また、当該血漿蛋白成分製剤は所望により凍結乾
燥製剤としてもよい。
当該処理を経た血漿蛋白成分は、そのまま、または自体
公知の製剤化処理を行って、たとえば注射用蒸留水で溶
解または希釈して投与される。投与量は各々の血漿蛋白
成分が通常用いられる量である。
公知の製剤化処理を行って、たとえば注射用蒸留水で溶
解または希釈して投与される。投与量は各々の血漿蛋白
成分が通常用いられる量である。
本発明によれば、血漿蛋白成分の生理活性をあまり損失
することなく、各種ウィルスを実質的に完全に不活性化
できる。
することなく、各種ウィルスを実質的に完全に不活性化
できる。
従って、本発明により得られた血漿蛍白成分製剤は、医
療上極めて安全性が高く、また有効性にも優れたものと
言える。
療上極めて安全性が高く、また有効性にも優れたものと
言える。
本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げて説明
するが、本発明はこれらによって何ら限定されるもので
はない。
するが、本発明はこれらによって何ら限定されるもので
はない。
実施例１（血液凝固筒■因子）
部分精製した第■因子溶液ｌａ１にシボ＃ａ２．０ｇを
加え、３７℃に加温して溶解させる。この溶液をｐＨ１
，０に調製したのち、６０℃の温浴中で２０時間加熱す
る。次に限外濾過装置を用いてシボ゛・−を除去し、第
■因子を濃縮する。第■因子の活之残存率は５６％であ
った６ 実施例２（血液凝固筒■因子） クリオプレシビテイトの抽出液ｌｌ１１にソルビトール
２．０ｇを加え、３７℃の温浴中で加温して溶解させる
。この溶液をｐＨ７，０に調製したのち、６０℃の温浴
中で２０時間加熱する。次に限外濾過装置を用いてソル
ビトールを除去し、第■因子を濃縮する。第■因子の活
性残存率は５８％であった。
加え、３７℃に加温して溶解させる。この溶液をｐＨ１
，０に調製したのち、６０℃の温浴中で２０時間加熱す
る。次に限外濾過装置を用いてシボ゛・−を除去し、第
■因子を濃縮する。第■因子の活之残存率は５６％であ
った６ 実施例２（血液凝固筒■因子） クリオプレシビテイトの抽出液ｌｌ１１にソルビトール
２．０ｇを加え、３７℃の温浴中で加温して溶解させる
。この溶液をｐＨ７，０に調製したのち、６０℃の温浴
中で２０時間加熱する。次に限外濾過装置を用いてソル
ビトールを除去し、第■因子を濃縮する。第■因子の活
性残存率は５８％であった。
実施例３（血液凝固第■因子複合体）
正常人血漿からコーンの冷エタノール分画法により得ら
れた第１画分を用いて、ＤＥＡＥセルロース カラム
クロマトグラフィー法〔ダイク。
れた第１画分を用いて、ＤＥＡＥセルロース カラム
クロマトグラフィー法〔ダイク。
ジー、ダブル、アールら、ブリティッシュ ジャーナル
オブ ヘマトロジー（Ｄｉｋｅ、 Ｇ、Ｗ、Ｒ，、ｅ
ｔａｌ、、 Ｂｒ１ｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、第２２巻、第４６９頁（１
９７２）３により第■因子含有粉末品（１■蛋白当たり
の第■囚子活性１ｓｔＪ位）を調製した。この第■因子
含有製剤１００ｇを６．５ Ｉ！、の水で溶解した後、
シａ 糖（１ｇ ／ｍｌ）、グリシン（２，２Ｍ）およ
び塩化カルシウム（０，５Ｍ）を添加した。この第■因
子含有製剤溶液のｐＨを７．６に調整後、５０ｄ容バイ
アル瓶に２０戚ずつ小分は分注した後、６０℃で２０時
間加熱処理した。
オブ ヘマトロジー（Ｄｉｋｅ、 Ｇ、Ｗ、Ｒ，、ｅ
ｔａｌ、、 Ｂｒ１ｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、第２２巻、第４６９頁（１
９７２）３により第■因子含有粉末品（１■蛋白当たり
の第■囚子活性１ｓｔＪ位）を調製した。この第■因子
含有製剤１００ｇを６．５ Ｉ！、の水で溶解した後、
シａ 糖（１ｇ ／ｍｌ）、グリシン（２，２Ｍ）およ
び塩化カルシウム（０，５Ｍ）を添加した。この第■因
子含有製剤溶液のｐＨを７．６に調整後、５０ｄ容バイ
アル瓶に２０戚ずつ小分は分注した後、６０℃で２０時
間加熱処理した。
実施例４（血液凝固筒χ■因子）
１））１７．０の０．０５ Ｍ ＩＪン酸緩衝液に溶解
した活性１００単位／ｄの第Ｘ１ｌｌ因子を含有する水
溶液１１にマンニトール１５０ｇ、カプリル酸ナトリウ
ム１５０ｇを添加した。これをよく攪拌した後、６０℃
で２０時間加熱する。冷却後、沈澱を回収し、再びｐＨ
１，０の０．０５ Ｍリン酸緩衝液に熔解した。この溶
解液をｐＨ７，２の０．００５Ｍ ＥＤＴＡ含有０．
０５ Ｍリン酸緩衝液に対して透析して澄明な液を得る
。この液に上記と同様の緩衝液であらかじめ平衡とした
ＱＡＥ・セファデックスを湿重量で５００ｇ加えて第Ｘ
Ｉ［ｌ因子を吸着させ、これから０．５ Ｍの塩化ナト
リウムで溶出されてくる両分を集めて、２．２５％グリ
シンを加えた０、５％塩化ナトリウム溶液に対して透析
し、除閉濾過、分注後凍結乾燥する（加熱処理時の活性
残存率は９０％）。
した活性１００単位／ｄの第Ｘ１ｌｌ因子を含有する水
溶液１１にマンニトール１５０ｇ、カプリル酸ナトリウ
ム１５０ｇを添加した。これをよく攪拌した後、６０℃
で２０時間加熱する。冷却後、沈澱を回収し、再びｐＨ
１，０の０．０５ Ｍリン酸緩衝液に熔解した。この溶
解液をｐＨ７，２の０．００５Ｍ ＥＤＴＡ含有０．
０５ Ｍリン酸緩衝液に対して透析して澄明な液を得る
。この液に上記と同様の緩衝液であらかじめ平衡とした
ＱＡＥ・セファデックスを湿重量で５００ｇ加えて第Ｘ
Ｉ［ｌ因子を吸着させ、これから０．５ Ｍの塩化ナト
リウムで溶出されてくる両分を集めて、２．２５％グリ
シンを加えた０、５％塩化ナトリウム溶液に対して透析
し、除閉濾過、分注後凍結乾燥する（加熱処理時の活性
残存率は９０％）。
実施例５（フィブロネクチン）
プールした正常成人血漿よりコーンのエタノール分画に
よって得られる第１両分を０．０５５ Ｍクエン酸ナト
リウム緩衝液、ｐＨ６，０に溶解し、これに０．０１Ｍ
のイプシロンアミノカプロン酸およびアプロチニン１０
単位／ｌＩｒ１を加え、更にリジン−セファロースによ
りプラスミンおよびプラスミノゲンを除去したのち、ヘ
パリン１０単位／−を加えて０〜２℃に４８時間静置し
て沈澱を集める。
よって得られる第１両分を０．０５５ Ｍクエン酸ナト
リウム緩衝液、ｐＨ６，０に溶解し、これに０．０１Ｍ
のイプシロンアミノカプロン酸およびアプロチニン１０
単位／ｌＩｒ１を加え、更にリジン−セファロースによ
りプラスミンおよびプラスミノゲンを除去したのち、ヘ
パリン１０単位／−を加えて０〜２℃に４８時間静置し
て沈澱を集める。
沈澱は０．０５ Ｍリン酸緩衝液、ｐｎｓ、ｏと１Ｍグ
リシンおよび６．５％エタノールを含む０．０５５ Ｍ
クエン酸緩衝液とでそれぞれ洗浄したのち、０．０５５
Ｍクエン酸緩衝液、ｐＨ６，３５を加えて室温にもたら
し、沈澱を溶解させる。これを０〜２℃に放置後沈澱を
分けとりＣＩＧ（フィブロネクチン）を含有する両分タ
ライオフィブリノゲンを得る。
リシンおよび６．５％エタノールを含む０．０５５ Ｍ
クエン酸緩衝液とでそれぞれ洗浄したのち、０．０５５
Ｍクエン酸緩衝液、ｐＨ６，３５を加えて室温にもたら
し、沈澱を溶解させる。これを０〜２℃に放置後沈澱を
分けとりＣＩＧ（フィブロネクチン）を含有する両分タ
ライオフィブリノゲンを得る。
タライオフィブリノゲン（沈ｉ＃）を、０．０５ Ｍト
リス−リン酸緩衝液、ｐＨ７，０に溶解し、これを同一
緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セファデックスに吸着さ
せ、同一緩衝液および０．０９ Ｍ ）リス−リン酸緩
衝液、ｐＨ７，０で洗浄したのち、０．２Ｍトリス−リ
ン酸緩衝液、ｐＨ７，０でＣＩＧの溶出を行う。
リス−リン酸緩衝液、ｐＨ７，０に溶解し、これを同一
緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セファデックスに吸着さ
せ、同一緩衝液および０．０９ Ｍ ）リス−リン酸緩
衝液、ｐＨ７，０で洗浄したのち、０．２Ｍトリス−リ
ン酸緩衝液、ｐＨ７，０でＣＩＧの溶出を行う。
０、０５ Ｍ ）リス−リン酸緩衝液、ＰＨ８，０に溶
解した３０■／ｄのＣＩＧを含存する水溶？１ｉｌＮに
ンヨｖ！１ ｋｇを添加した。これをよく攪拌した後、
６０℃で２０時間加熱した。冷却後、０．９％塩化ナト
リウム溶液に対して透析し、遠心分離して澄明な液を得
た。
解した３０■／ｄのＣＩＧを含存する水溶？１ｉｌＮに
ンヨｖ！１ ｋｇを添加した。これをよく攪拌した後、
６０℃で２０時間加熱した。冷却後、０．９％塩化ナト
リウム溶液に対して透析し、遠心分離して澄明な液を得
た。
このようにして得られたＣＩＧにつき一元免疫拡散法で
ＣＩＧを定量したところ、ＣＩＧの回収率は７９％であ
った。
ＣＩＧを定量したところ、ＣＩＧの回収率は７９％であ
った。
実施例６（プラスミノーゲン）
コーンの冷エタノール分画法で得られた両分■＋■をｌ
ｗ ／ ｖ％塩化ナトリウム、ｌ ｗ ／ ｖ％グリ
シン溶液に懸濁し、攪拌後、遠心分離により上澄を分離
した。この上澄をＤｅｕｔｓｃｈ、 Ｄ、 Ｇ、 ら
〔５ｃｉｅｎｃｅ、 」刊、 １０９５． （１９７０
））の方法に準じ、リジン−セファロースカラムに注入
し、プラスミノーゲンを吸着させ、次いで生理食塩溶液
で洗浄した後、０．２５ Ｍリジンと０．９％グリシン
とを含む溶媒（ｐＨ７，２）を用いて吸着したプラスミ
ノーゲンを？容出せしめた。
ｗ ／ ｖ％塩化ナトリウム、ｌ ｗ ／ ｖ％グリ
シン溶液に懸濁し、攪拌後、遠心分離により上澄を分離
した。この上澄をＤｅｕｔｓｃｈ、 Ｄ、 Ｇ、 ら
〔５ｃｉｅｎｃｅ、 」刊、 １０９５． （１９７０
））の方法に準じ、リジン−セファロースカラムに注入
し、プラスミノーゲンを吸着させ、次いで生理食塩溶液
で洗浄した後、０．２５ Ｍリジンと０．９％グリシン
とを含む溶媒（ｐＨ７，２）を用いて吸着したプラスミ
ノーゲンを？容出せしめた。
この精製プラスミノーゲン液１ｄにシｇ塘１ｇおよびア
プロチニン５０ＫＩＵを加え、６０℃ｌ２Ｏ時間加熱処
理を行い、残存プラスミノーゲンの力価を求めた。
プロチニン５０ＫＩＵを加え、６０℃ｌ２Ｏ時間加熱処
理を行い、残存プラスミノーゲンの力価を求めた。
プラスミノーゲンの力価は、Ｆｒｉｂｅｒｇｅｒらの方
法（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｊｖｉｎｇｓｔｏｎ、 １
２８＋ １９７９）に準じ発色合成基質Ｓ−２２５１を
用いて測定した。その結果、９２％の残存率を示した。
法（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｊｖｉｎｇｓｔｏｎ、 １
２８＋ １９７９）に準じ発色合成基質Ｓ−２２５１を
用いて測定した。その結果、９２％の残存率を示した。
実施例７（アンチトロンビン−■）
コーンの冷アルコール分画法で得られた画分■−１のペ
ースト１０ｋｇを生理食塩水１００Ｎに懸濁し、硫酸バ
リウムを５ ｗ ／ ｖ％になるように加え、室温で３
０分間攪拌した。この上清液をＰＨ６，５に調整し、ポ
リエチレングリコール＃４０００を１３ｗ／Ｖ％になる
ように加え、生じた沈澱を遠心分離して除き、さらにポ
リエチレングリコール＃ ４０００を３０ｗ／ｖ％にな
るように加え、生じた沈澱を遠心分離して回収した。こ
の沈澱を冷生理食塩水約２０１に溶解し、予め生理食塩
水で調製されたヘパリンセファロースのカラムへ注入し
、アンチトロンビン−■をカラムに吸着させた。このカ
ラムを０．４Ｍの塩化ナトリウム溶液で洗浄したのち、
２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流して溶出部
分を回収した。
ースト１０ｋｇを生理食塩水１００Ｎに懸濁し、硫酸バ
リウムを５ ｗ ／ ｖ％になるように加え、室温で３
０分間攪拌した。この上清液をＰＨ６，５に調整し、ポ
リエチレングリコール＃４０００を１３ｗ／Ｖ％になる
ように加え、生じた沈澱を遠心分離して除き、さらにポ
リエチレングリコール＃ ４０００を３０ｗ／ｖ％にな
るように加え、生じた沈澱を遠心分離して回収した。こ
の沈澱を冷生理食塩水約２０１に溶解し、予め生理食塩
水で調製されたヘパリンセファロースのカラムへ注入し
、アンチトロンビン−■をカラムに吸着させた。このカ
ラムを０．４Ｍの塩化ナトリウム溶液で洗浄したのち、
２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流して溶出部
分を回収した。
このアンチトロンビン−■の水溶液にシｓｔＪ！ｉ（溶
液１ｍ当たりＩｇ）およびグリシン（７容液１ｌｔ１当
たり０．３ ｇ ）を加え、ＰＨ７，８に調整した後６
０℃で２０時間の加熱処理を施し、続いて０．９％塩化
ナトリウム溶液に対し１夜透析を行いつつ濃縮してアン
チトロンビン−■の１ｗ／ｖ％水溶液を得、必要に応じ
て濾過または遠心分離を行って澄明な液とした。
液１ｍ当たりＩｇ）およびグリシン（７容液１ｌｔ１当
たり０．３ ｇ ）を加え、ＰＨ７，８に調整した後６
０℃で２０時間の加熱処理を施し、続いて０．９％塩化
ナトリウム溶液に対し１夜透析を行いつつ濃縮してアン
チトロンビン−■の１ｗ／ｖ％水溶液を得、必要に応じ
て濾過または遠心分離を行って澄明な液とした。
このアンチトロンビン−■の１ｗ／ｖ％水？容ン夜にマ
ンニトール２Ｗ／ｖ％とクエン酸ナトリウム０．２Ｗ／
Ｖ％を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少
量の冷蒸留水希釈し、ＩＮの水酸化ナトリウムでｐＨ７
，６に調整した後、滅菌したミリポアフィルタ−で除菌
濾過し、５００単位づつ分注し、凍結乾燥を行って乾燥
製剤とした。
ンニトール２Ｗ／ｖ％とクエン酸ナトリウム０．２Ｗ／
Ｖ％を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少
量の冷蒸留水希釈し、ＩＮの水酸化ナトリウムでｐＨ７
，６に調整した後、滅菌したミリポアフィルタ−で除菌
濾過し、５００単位づつ分注し、凍結乾燥を行って乾燥
製剤とした。
実施例８（アルブミン）
正常人血漿からコーンの冷エタノール分画法により得ら
れた第Ｖ画分を精製して純度９６％以上のアルブミン画
分を得た。これをアルブミン濃度５ ｗ ／ ｖ％温溶
液調製した後、６０℃で２０時間加熱処理した。
れた第Ｖ画分を精製して純度９６％以上のアルブミン画
分を得た。これをアルブミン濃度５ ｗ ／ ｖ％温溶
液調製した後、６０℃で２０時間加熱処理した。
実施例９（ハプトグロビン）
大血漿よりコーンの低温エタノール分画法で得た両分Ｉ
Ｖ３０ｋｇにＰＨ８，２の０．０５モル酢酸アンモニウ
ム緩衝液１４５２を加え懸濁した。これに１％リバノー
ル水溶液１２０２を加え３時間かきまぜ、２時間静置後
、沈澱を分離し、得られた上清液に８ｋｇの酸性白土を
加えて２時間攪拌後濾過して澄明な濾液を得た。濾液に
ＩＮ酢酸を加えてｐＨを７，０とした後、硫酸アンモニ
ウムを３０％飽和となるまで加え、生じた沈澱を除去後
、硫酸アンモニウムを追加して４０％飽和とじて、生じ
た沈澱を採取した。得られた沈澱を０．０５ Ｍ酢酸ナ
トリウム溶液１０ｉ！、に溶解しくハプトグロビンとし
て４％）これに２０％（Ｗ／Ｖ）となるようにマンニト
ールを加え、温浴中６０℃で２０時間の加熱処理を施し
た。加熱処理した液は０．０５モルの酢酸緩衝液（ｐＨ
５，０）に対し、透析した後２００ｇのＱＡＥ−セファ
デックスＡ−５０をあらかじめ同−液で平衡化したもの
と混じ、ハプトグロビンを吸着させた。ハプトグロビン
を吸着した上記ＱＡＥ−セファデックスＡ−５０をイオ
ン強度０．０５の緩衝液（組成：０．０５Ｍ酢酸、０．
０５ Ｍ酢酸ナトリウム３水和物）で洗った後、イオン
強度０．３の緩衝液（組成： ０．３ Ｍ酢酸＋０．３
Ｍ塩化ナトリウム）で洗い、ハプトグロビンを溶離し
た。ｌ離液に硫酸アンモニウムを加えて５０％飽和とし
て生じた沈澱を濾取し、得られた沈澱を生理食塩水１．
５２に溶解し透析後０．２μのミリポアフィルタ−で除
菌濾過してハプトグロビン水溶液を得た。
Ｖ３０ｋｇにＰＨ８，２の０．０５モル酢酸アンモニウ
ム緩衝液１４５２を加え懸濁した。これに１％リバノー
ル水溶液１２０２を加え３時間かきまぜ、２時間静置後
、沈澱を分離し、得られた上清液に８ｋｇの酸性白土を
加えて２時間攪拌後濾過して澄明な濾液を得た。濾液に
ＩＮ酢酸を加えてｐＨを７，０とした後、硫酸アンモニ
ウムを３０％飽和となるまで加え、生じた沈澱を除去後
、硫酸アンモニウムを追加して４０％飽和とじて、生じ
た沈澱を採取した。得られた沈澱を０．０５ Ｍ酢酸ナ
トリウム溶液１０ｉ！、に溶解しくハプトグロビンとし
て４％）これに２０％（Ｗ／Ｖ）となるようにマンニト
ールを加え、温浴中６０℃で２０時間の加熱処理を施し
た。加熱処理した液は０．０５モルの酢酸緩衝液（ｐＨ
５，０）に対し、透析した後２００ｇのＱＡＥ−セファ
デックスＡ−５０をあらかじめ同−液で平衡化したもの
と混じ、ハプトグロビンを吸着させた。ハプトグロビン
を吸着した上記ＱＡＥ−セファデックスＡ−５０をイオ
ン強度０．０５の緩衝液（組成：０．０５Ｍ酢酸、０．
０５ Ｍ酢酸ナトリウム３水和物）で洗った後、イオン
強度０．３の緩衝液（組成： ０．３ Ｍ酢酸＋０．３
Ｍ塩化ナトリウム）で洗い、ハプトグロビンを溶離し
た。ｌ離液に硫酸アンモニウムを加えて５０％飽和とし
て生じた沈澱を濾取し、得られた沈澱を生理食塩水１．
５２に溶解し透析後０．２μのミリポアフィルタ−で除
菌濾過してハプトグロビン水溶液を得た。
加熱処理前後でハプトグロビンの機能を示すヘモグロビ
ン結合能を測定したところ、残存率は８５％であった。
ン結合能を測定したところ、残存率は８５％であった。
実験例１ （安定化効果）
（１）血液凝固筒■因子の場合
実施例２に準じて６０゛Ｃ１３０時間の液状加熱処理を
行い、加熱前の第■因子活性（■：Ｃ）を１００とした
時の加熱後残存活性率（％）を経時的に求めた。第■因
子活性は活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ
）により測定した。結果を第１表に示す。
行い、加熱前の第■因子活性（■：Ｃ）を１００とした
時の加熱後残存活性率（％）を経時的に求めた。第■因
子活性は活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ
）により測定した。結果を第１表に示す。
第１表
（２）血液凝固筒■因子（複合体）の場合実施例３に準
じて６０℃１２５時間の液状加熱処理を行い、加熱前の
第■因子活性を１００とした時の加熱後残存活性率（％
）を経時的に求めた。第■因子活性は一段法による凝血
測定法（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ。
じて６０℃１２５時間の液状加熱処理を行い、加熱前の
第■因子活性を１００とした時の加熱後残存活性率（％
）を経時的に求めた。第■因子活性は一段法による凝血
測定法（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ。
Ｍｅｄ、、 ２６７ １２５−１３０ （１９６２））
により測定した。結果を第２表に示す。
により測定した。結果を第２表に示す。
第２表
実験例２（ウィルス不活化効果）
（１）血液凝固筒■因子の場合
実施例２に準じて調製した第■因子含存水溶液に第３表
に記載のウィルスを懸濁させた５０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７）を添加した。
に記載のウィルスを懸濁させた５０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７）を添加した。
６０℃で２０時間液状加熱処理を行い、経時的に残存す
る各ウィルスの感染性をプラーク形成法により測定した
。結果を第３表に示す。
る各ウィルスの感染性をプラーク形成法により測定した
。結果を第３表に示す。
（２）血液凝固第■因子の場合
実施例３に準じて調製した第■因子含有水溶液に第４表
に記載のウィルスを！Ｑ′／ＩＡさせた５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７）を添加した。
に記載のウィルスを！Ｑ′／ＩＡさせた５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７）を添加した。
６０℃で２０時間液状加熱処理を行い、経時的に残存す
る各ウィルスの感染性をプラーク形成法により測定した
。結果を第４表に示す。
る各ウィルスの感染性をプラーク形成法により測定した
。結果を第４表に示す。
Claims (3)
- （１）血漿蛋白成分含有水溶液を５０〜７０℃で１５〜
３０時間加熱処理することを特徴とする血漿蛋白成分の
加熱処理方法。 - （２）少なくとも糖の存在下に加熱処理を行う請求項（
１）記載の加熱処理方法。 - （３）血漿蛋白成分含有水溶液の状態において５０〜７
０℃で１５〜３０時間加熱処理してなることを特徴とす
る血漿蛋白成分製剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63135281A JPH01305036A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63135281A JPH01305036A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01305036A true JPH01305036A (ja) | 1989-12-08 |
Family
ID=15148037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63135281A Pending JPH01305036A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01305036A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10251161A (ja) * | 1997-03-11 | 1998-09-22 | Green Cross Corp:The | 浮腫治療効果増強剤 |
| JPH11139987A (ja) * | 1997-09-04 | 1999-05-25 | Becton Dickinson & Co | 添加剤製剤およびその使用方法 |
| WO2004089402A1 (ja) * | 2003-04-09 | 2004-10-21 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | アルブミン製剤の製造方法 |
| JP2009062384A (ja) * | 2008-10-22 | 2009-03-26 | Csl Behring Gmbh | ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 |
| JP2015532301A (ja) * | 2012-10-03 | 2015-11-09 | シーエスエル・ベーリング・エルエルシー | タンパク質の精製方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56139422A (en) * | 1980-03-05 | 1981-10-30 | Cutter Lab | Sterilized and therapeutically active protein composition |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
| JPS62283931A (ja) * | 1986-05-29 | 1987-12-09 | Green Cross Corp:The | プラスミノ−ゲンの安定化方法 |
-
1988
- 1988-05-31 JP JP63135281A patent/JPH01305036A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56139422A (en) * | 1980-03-05 | 1981-10-30 | Cutter Lab | Sterilized and therapeutically active protein composition |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
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| JPH10251161A (ja) * | 1997-03-11 | 1998-09-22 | Green Cross Corp:The | 浮腫治療効果増強剤 |
| JPH11139987A (ja) * | 1997-09-04 | 1999-05-25 | Becton Dickinson & Co | 添加剤製剤およびその使用方法 |
| WO2004089402A1 (ja) * | 2003-04-09 | 2004-10-21 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | アルブミン製剤の製造方法 |
| AU2004228847B2 (en) * | 2003-04-09 | 2010-06-17 | Km Biologics Co., Ltd. | Process for producing albumin preparation |
| US8258264B2 (en) | 2003-04-09 | 2012-09-04 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Process for producing albumin preparation |
| JP2009062384A (ja) * | 2008-10-22 | 2009-03-26 | Csl Behring Gmbh | ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 |
| JP2015532301A (ja) * | 2012-10-03 | 2015-11-09 | シーエスエル・ベーリング・エルエルシー | タンパク質の精製方法 |
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