JPH01308485A - アルキル置換ケイ光化合物複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ケイ光化合物とリガンド、受容体又は担体と
の複合体及びその複合体を使用するタンパク質結合ケイ
光分析に間する。

ケイ光化合物は多様な用途を有する０例えば、ケイ光免
疫分析、組織化学的染色、デイスプレー、インキなどに
有用である。その中で、本発明が対象とするのは、多様
なリガンド（抗原でも受容体でもよい）の測定に使用さ
れるケイ光化合物との抗原複合体（受容体複合体を含む
）の使用である。

リガンドの大部分は血清のような生理的液体中で分析さ
れる。その際に、血清がかなりのバックグラウンドケイ
光を生ずることがある。天然に存在するケイ光体から発
せられるバックグラウンドケイ光を減少させる１方法は
、比較的長波長で吸収を行うゲイ光化合物を提供するこ
とである。このような化合物はストークスシフトが大き
く、分析条件下で安定で、溶液状態の物質およびこのケ
イ光体が結合する相手方の化合物の両方からの非特異的
妨害を比較的受けず、量子収率が高いという要件を満足
するのが望ましい、更に、用途によっては、消光剤分子
、すなわち一定の距離内にあるときにそのケイ光体の励
起状態のエネルギーを吸収して、ケイ光体がゲイ光を発
しないようにすることができる分子とケイ光体をカップ
リングさせるのが望ましい。

文献には多数のフルオレセイン誘導体が報告されている
。下記は本発明に最も関連性があると考えられる従来化
合物であり、ケミカルアブストラクツ（Ｃ，Ａ、）にお
ける引用で述べる０位置番号は基本分子である３°、６
′−ジヒドロキシスピロしイソベンゾフラン−１（３Ｈ
）、９’−（９Ｈ）キサンチン］−３−オンに基づく。

２′、７°−ジ（ｎ−ヘキシル）またはジ（ｎ−ヘプチ
ル）−４°、５°−ジブロモ−４，７−ジクロロ−２Ｃ
，Ａ、３１．１６２１（に製造が報告されている、以下
同じ）；２′、７”−ジ（ｎ−ヘキシル）−、Ｃ，Ａ。

ｌＬ、　１６２１　；２’、７’−ジ（アルキル）−、
Ｃ，Ａ。

３１．１３８８．２’、７°−ジエチルまたは２°、７
゜−ジプチルー、Ｃ，Ａ、２７，５０５６；２°、７°
−ジメチル、Ｃ、Ａ　、　１１．１８９７２ｓ；２′、
４’、５’、７″−テトラブロモ−５または６−カルボ
キシ−、Ｃ，Ａ、　Ｑ、１３２１０ｈ。

本発明の化合物は、リガンドと受容体からなる特異的結
合対の構成成分との新規なケイ光複合体（ｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ）を包含する。この複合体は、特に免疫分析にお
ける試薬として多様な用途を有する。

本発明の化合物は、普通少なくとも２個のクロロ置換基
を有する２、７−ジ脂肪族−９−置換−６−ヒドロキシ
−３Ｈ−キサンチン−３−オン類であり、その前駆物質
はキサンチンの２位または９位に結合している脂肪族ま
たは芳香族の基に結合基または官能基を有している。

より具体的には、本発明はフルオレセインの類似物であ
るケイ光化合物、特に２，７−ジ脂肪族−置換−９−置
換−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン類が
特異結合対の一方又は担体に結合した複合体に関する。

この化合物は通常１．８−位置以外の位１に少なくとも
２個のクロロ置換基を有し、２位または９位、特に９位
の炭化水素置換基に結合している特異的結合対の１成分
への結合のための結合用の官能基を有する。

この複合体は特異的結合対の構成要素の分析における試
薬として特に有用である。

本発明の複合体のケイ光性前駆物質は炭素数が約１５以
上、通常は２１以上で、約４０以下、特に炭素数的２２
〜３６である。これは１，８−位置以外の位置に少なく
とも２個、最大６個程度までの塩素原子（クロロ基）を
有しているのが好ましい、塩素のほかに存在しうるヘテ
ロ原子は臭素、カルコゲン（特に酸素とイオウ）および
窒素であり、ヘテロ原子は少なくとも４個、通常は２０
個以下、特に約１６個以下、好ましくは約１２個以下の
範囲内で存在する。塩素以外のへテロ原子としては、酸
素が少なくとも３個、通常は少なくとも５個存在し、キ
サンチン環の一部を構成する酸素以外の酸素原子は非オ
キソ型カルボニルまたはオキシ、特に酸、エステルまた
はエーテル（普通は炭素と水素だけに結合）として存在
する。ここで非オキソ型カルボニルとは、ヘテロ原子（
例えば酸素原子）に結合されているカルボニル（−Ｃ（
０）−）の意味である。イオウは一般にスルホニル、チ
オエーテルまたはメルカプトとして存在し、窒素は一般
にアミンまたはアミド（炭素と水素のみに結合）として
存在する。

このケイ光化合物は、０．０５Ｎリン酸緩衝液（ｐＨ８
）中で約５０ｏｎ−より長波長に吸収極大を有し、同じ
媒質中での吸光係数が少なくとも約６５，０００、通常
は少なくとも７０，０００であり、同じ媒質中でのスト
ークスシフトが少なくとも約１０ｎｍ、通常は少なくと
も約１２ｎ−であるという特徴を更に有する。

本発明の９−置換−２，７−ジアルキル置換キナンテン
は、一般に下記−最大で表わされる。

上記式中 ρは脂肪族基、一般に脂肪族ヒドロカルビレン（炭素と
水素のみからなる；飽和または不飽和、分岐鎖または直
鎖の何れでもよい）、特にアルキレン、より具体的には
（ＣＨｚ）　　であり（εは１〜ε １２、通常は１〜６．特に１〜４の数値）；ρの炭素数
は一般に１〜１２９通常は１〜６．特に１〜４であり； ２個のψ′は同一でも異別でもよいが、一般にαに結合
している場合を除いて同一であり、それぞれ水素または
非オキソ型カルボニル官能基であるか、または一方のψ
°のみが非オキソ型カルボニル結合官能基であってもよ
く； Ｌはキナンテン骨格の９位とψの間の直接結合または炭
素数１〜２０１通常は１〜１６．特に１〜１０の一般に
有機の２価の基であり、ここで該２価基は通常炭素数的
２〜６の脂肪族鎖または炭素数的６〜１２１通常６〜１
０の芳香族鎖酸いはこの両者からなる炭化水素鎖を有し
；Ｌは芳香族の場合には、ハロ、特にクロロ；非オキソ
型カルボニル；不活性イオウ酸、エステルおよびアミド
を含むチオ；アミノ、特に第三アミノまたはアミド：な
らびにオキシから選ばれた置換基を一般に０〜４個、通
常は１〜４個、特に２〜４個有しており、この置換基は
一般に炭素数０〜４のもので、飽和炭素原子に結合して
いるペテロ原子閏には少なくとも２個の炭素原子が介在
しており； αは特異的結合対を構成しうる有機化合物、すなわちリ
ガンドまたは受容体の何れかであり；αがψまたはψ゛
に共有結合しており、この共有結合は一般にアミド、メ
チレン第ニアミノ、エーテル、チオエーテルまたはアゾ
結合を含み；ψは、αに結合していない場合には末端が
ヘテロ原子含有官能基となる基であり、この末端のへテ
ロ原子含有官能基は、Ｌの炭素原子に直接結合している
か、或いは炭素数１〜４１通常は２〜４のアミノ酸、ア
ルキレンアミノまたはアルキレンオキシ基を１単位とす
る１〜４単位のオリゴマーを介して結合していてもよく
；上記末端官能基は一般に、オキソ型カルボニルおよび
非オキソ型カルボニルを含むオキソ；アミノ；オキシ：
チオ；または活性ハロゲン；特に非オキソ型カルボニル
であり、ここでオキソ型カルボニルとは、炭素又は水素
に結合されているカルボニル（−Ｃ（０）−）の意味で
ありニ ジは、平均で少なくとも１からαの分子量を５００、通
常は１０００で割った値までの数値である。

ゲイ光性の基（カッコ内の基）には、キサンテノンの１
，８−位置を除いた位置に結合した２〜６個のクロロ置
換基が存在しているのが望ましい。

ま□た、４，５−位置は非置換でもよいが、一方または
両方（通常は両方）がブロモ、クロロまたは炭素数１〜
６１通常は１〜３のアルキルで置換されていてもよい。

このゲイ光化合物又は有機化合物（α）との複合体は、
担体（ｓｕｐｐｏｒｔ）に共有結合または非共有結合に
より結合させうる。この担体はケイ光体または有機化合
物の何れかを介して結合させることができる。担体につ
いては後で詳述する。

一般に、９−フェニル置換基を有する本発明の化合物は
下記−最大で表わされる： 上記式中、 Ｒは、炭素数１〜８１通常は１〜６．特に１〜４゜好ま
しくは１〜３の、置換または非置換、飽和または不飽和
の脂肪族基、特に炭素数１〜６１通常１〜４のアルキル
またはカルボキシアルキルであり； Ｚはカルボキシであり； ＷはＹへの直接結合または０〜１６．すなわち０である
か、通常は１〜１６．特に１〜８個の炭素原子と０〜１
０１通常は２〜８個のへテロ原子を含有する２価の基で
あり；該へテロ原子はカルコゲン（酸素とイオウ）また
は窒素であって、カルコゲンは炭素のみに結合した状態
で存在しくすなわちオキシまたはオキソ型）、窒素は炭
素と水素のみに結合した状態で存在しくアミノおよびア
ミド）；炭素は一般にエチレン性不飽和結合を０〜２個
有する芳香族または脂肪族のもの、特に脂肪族不飽和結
合を有しないものであり；Ｗは好都合には炭素数１〜４
の単位（例、アルキレン、アミノ酸、オキシアルキレン
、アミノアルキレンなど）のモノマーまたはオリゴマー
であり； Ｙは、Ａと一緒になって、アミノ、ヒドロキシ、メルカ
プトのようなＡがＹと一緒になっていないときにＡに存
在していたヘテロ官能基（ヘテロ原子含有官能基）と共
有結合を形成することのできる活性官能基、例えばオキ
ソ型および非オキソ型カルボニル、オキシ、チオ、アミ
ノ、活性ハロゲン、活性オレフィン、無機アシル基（例
、スルホニル）などを形成していてもよく、或いはＹは
メチレンまたはへテロ原子含有の何れかの結合官能基と
して作用し； Ａは、特異的結合対の一方、すなわちリガンドテ または受容体であり、リガンドはハブ４ン性または抗原
性のものでよく、−最に分子量は約１２５から上限は無
限であり、大ていはリガンドまたは受容体の性質に応じ
て範囲は変動するけれども大部分のリガンドの分子量の
上限は１０，０００，０００．より普通には２，０００
，０００であり；鯵はＯ〜３．より普通には０〜２であ
り；ｎは、平均で１からＡの分子量を５００で、より一
般には１０００で、しばしば２０００で割った値までの
数値であり、分子量が６００，０００をこえる特異的結
合対では、ｎは一般にＡの分子量を５０００で割った値
をこえないであろう、更に、通常は少なくとも２個のク
ロロ置換基が、特定の原子が指示されていない任意の利
用可能な位置に結合して存在している。また、４．５−
位置は既述のように置換されていてもよい、更に、この
複合体またはケイ光体前駆物質は分子量が少なくとも約
１０，０００から無限までの担体に結合していてもよい
。

好ましい群の化合物は一般に下記−最大を有する。

上記式中、 Ｒ゛は炭素数１〜６２通常は１〜４．好ましくは１〜３
のアルキレンであり； Ｄは水素またはカルボキシであり； Ｚ゛はカルボキシであり； 躊“は０〜３１通常はＯ〜２であり； Ｙｏは、Ａｏと一緒になって、非オキソ型カルボニル（
そのイオウ類似物を含む）、少なくとも１個の水素原子
に結合したアミノ、メルカプト、活性エチレン（通常は
α−カルボニルを有する）、ハロメチルカルボニル（ハ
ロゲンは原子番号１７〜５３のもの）、スルホニルなど
の活性官能基を形成してもよく；Ａｏと一緒にならない
場合には、Ｙｏはメチレンまたはへテロ原子含有型の結
合官能基であり、ヘテロ原子含有型は通常アミド、エス
テル０、エーテルまたはアゾ結合であり；Ｗｏは、Ｙｏ
への直接結合、または水素以外の原子（炭素と窒素と酸
素とイオウ、好ましくは炭素と窒素と酸素）の数が１〜
１６２通常は１〜１２゜好ましくは１〜８であり、０〜
８個の炭素原子と０〜８個のへテロ原子が存在し、炭素
およびヘテロ原子の数の合計が少なくとも１である結合
基であり、ここで窒素は水素と炭素のみに結合するアミ
ンまたはアミドの何れかであり、酸素とイオウはオキシ
（チオ）またはオキシ（チオノ）として炭素のみに結合
し、炭素は一般にエチレン不飽和結合を０〜１個含有す
る脂肪族基として存在し、通常脂肪族不飽和結合は含有
せず；Ｗｏは炭素数１〜８、通常１〜４のアルキレンも
しくはアルケニレン、炭素数１〜８１通常１〜４のオキ
ソアルキレンもしくはオキソアルケニレン、イミノ（Ｎ
Ｈ）、Ｎ−ホルミルアミノ酸もしくはＮ−ホルミルポリ
アミノ酸（例、グリシンもしくはポリグリシン、このア
ミノ酸は約１〜４単位存在し、末端カルボキシはＹ’Ａ
’である）などでよく； ｎｏは、平均で少なくと６１がらＡｏの分子量を５００
で、通常は１０００で、より普通には２０００で割った
値までの数値であり、Ａｏの分子量が５００．０００を
こえる場合には、ｎ”の上限はより通常にはＡｏの分子
量を５０００で割った値であり；合計で最大５個、通常
は４個以下のカルボキシル基と０〜６個、好ましくは２
〜５個のクロロ基が利用可能な炭素原子に結合しており
；Ａｏは特異的結合対の一方の要素、すなわちリガンド
または受容体であり、ここでリガンドはハプテンまたは
抗原でよく、ハプテン性リガンドには医薬、ホルモン、
汚染物質、化学工業の対象となる化合物、農薬、代謝産
物などの対象となる化合物が含まれ：抗原は細胞、ウィ
ルス、ファージなどに存在するように、主にタンパク質
、多糖類または核酸単独、またはこれらが相互にもしく
は他物質と組合わさったものである。ハプテンは分子量
が一般に約１２５〜２０００、より普通には１０００以
下であるのに対し、抗原は分子量が一般に約２０００、
より普通には約５０００から、上限は無限、通常は１０
，０００，０００以下、より普通には２，０００，００
０以下である。

４．５−位置は好ましくは非ｆ換か、クロロ置換である
。

さらに、上記の複自体は担体に結合させてもよい、各種
の担体、例えば可溶性または不溶性、水性らしくは有機
溶媒で膨潤性または非膨潤性、天然または合成、有機ま
たは無機、多孔性または非多孔性などの何れの担体も使
用できる。各種の重合体型の物質には、ビニルポリマー
およびコポリマー、多糖類、シリコーン、ガラス、思索
粒子（黒鉛、炭など）、金属もしくは金属化合物、ポリ
アミノ酸、核酸などが含まれる。

−ｍに、複合体形成に使用される前駆物質であるゲイ光
化合物は下記−最大で表わされる：上記式中、 Ｒ１は炭素数１〜６９通常１〜４．好ましくは１〜２の
アルキレンであり； ｐｌは水素またはカルボキシ、好ましくは水素であり； Ｚｌはカルボキシであり； Ｅａは水素、炭素数１〜６、通常は１〜３のアルキルま
たはクロロであり； Ｅｌはクロロであり； Ｗｌは結合、または水素以外の原子（すなわち、炭素と
窒素とイオウ、特に炭素と窒素と酸素）の数が１〜１２
、通常１〜８で、鎖中の原子数が一般に１〜８、通常１
〜６である結合基であり；ここで炭素は脂肪族であり、
窒素は炭素と水素のみに結合したアミドまなはアミノ、
特にアミノとして存在し、酸素とイオウは炭素のみに結
合したオキシ、オキソまたはこれらのイオウ類似物とし
て存在し；゛ Ｗｌは一般にエチレン性不飽和結合を０〜１ｆｌｌ有す
る飽和または不飽和、−最に飽和の脂肪族基であって、
例えば炭素数１〜８、通常は１〜４のアルキレンもしく
はアルケニレン、Ｎ−ホルミルアミノ酸もしくはＮ−ホ
ルミルポリアミノ酸（末端カルボキシはＹＩＡＩから誘
導）、アミノ、メルカプトなどであり； Ｙ　Ｉ　ＡＩは一緒になって炭素または窒素のみに結合
している結合用の官能基を形成し、ただしＹＩとＡ１が
窒素に結きしている場合にはＹ　Ｉ　Ａ　Ｉはカルボニ
ル（その窒素およびイオウ類似物も含む）であり；窒素
に二重結合していてもよく；ＹＩＡＩは非オキソ型カル
ボニル、ハロアセチル、゛原子番号９〜５３のハロゲン
、特にクロロまたはブロモ、マレイミド、メルカプト、
アミノまたは中心原子としてリンまたはイオウを含有す
る無機アシルであってもよく； Ｃは０〜３、通常は０〜２であり、分子内にはＹ　Ｉ　
Ａ　Ｉ以外のカルボキシル基が合計で５個以下、通常は
４個以下、好ましくは約２１ＩＩ以下存在し；Ｘは０〜
４、好ましくは２〜４であり、分子内にはクロロ基が合
計で６個以下、通常は４個以下存在し、ｘ＋ｓ’の和は
４以下である。

−船釣に、リガンド受容体または担体に結合した本発明
の組成物は下記の一般式を有する二上記式中、 Ｅｂは水素またはクロロ、ブロモ又はＣ１〜コアルキル
基であり； Ｒ２はクロロであり； Ｚ２はカルボキシであり； Ｒ２は炭素数１〜６、通常は１〜３、好ましくは１〜２
のアルキレンであり； Ｒ２は水素またはカルボキシ、好ましくは水素であり； Ｗ２はＹ２への直接結合または結合鎖であり、後者の場
合、結合鎖は水素以外の原子数が１〜１２、通常は１〜
１０、好ましくは約１〜８で、鎖中の原子数が約１〜１
０、通常的１〜８、好ましくは約１〜６のものであり；
該水素以外の原子は炭素と酸素と窒素とイオウ、特に鎖
中においては炭素と酸素と窒素であり；ここで酸素とイ
オウはオキシまたはオキソとして炭素のみに結合し、窒
素はアミノまたはアミドとして炭素および水素のみに結
合しており、飽和炭素原子に結合しているヘテロ原子は
沙なくとも２１１１の炭素原子によって離間されており
； Ｗ２は特にアルキレンまたは式（−ＣＯＮ　Ｈ−アルキ
レン−）ａのカルボキサミドアルキレンもしくはポリ（
カルボキサミドアルキレン）であり、ここでアルキレン
の炭素数は約１〜２であり、ａは約１〜４、通常１〜３
の範囲内であり：Ｙ２は、非オキソ型カルボニル、カル
バモイル、チオカルバモイル、メチレン、アミノまたは
チオ、特に非オキソ型カルボニル基もしくはそのイオウ
類似基を有する官能基であり； Ｘ２は０〜４であり； −２は０〜３、特に１〜２であり； Ｒ２は１からＡ２の分子量を５００、通常は１０００、
より普通には２０００で割った値までの数値であり、Ａ
２が分子量約１２５〜２０００のリガンドである場合に
は、Ｒ２は一般に約１〜２０の範囲内であり、Ａ２が分
子量約２０００〜６００，０００のリガンドである場合
にはＲ２は一般に約１〜１００、より普通には約２〜５
０の範囲内であり； Ａ２は分子量が少なくとも約１２５から１０．０００，
０００或いはそれ以上に及びうるハプテンまたは抗原性
のリガンドであり、ハプテンの場合は分子量が約１２５
〜２０００であり、抗原は分子量が一般に約５０００か
ら１０，０００，０００まで、より普通には約５０００
ないし２，０００，０００、特に約５０００〜６００，
０００の範囲内であり、リガンドは、少なくとも１個の
決定群またはエピトープ（ｅｐｉｔｏｐｉｃ）サイトを
有する化合物であり、この決定群サイトを識別すること
のできる受容体と共に特異的結合対を構成するものであ
り；或いはＡ２は分子量が約１０，０００〜１．Ｇｏｏ
、０００の受容体であってもよい。

最後に、場合によっては、ケイ光化合物またはこれとリ
ガンドとの複合体を、担体に結合させるのが望ましいこ
ともある。この場合、結合はケイ光化合物またはリガン
ドの何れかから、一般にはリガンドから引出されうる。

このような場合、結合基は、ケイ光化合物またはリガン
ドに既に存在している任意の好都合な官能基、或いは特
にリガンドの方に新たに導入した官能基でよい、このよ
うな担体と結合した組成物は一般に下記−最大（各符号
は大体において複合体に対する前出の一般式から誘導さ
れている）で表わされる。

上記式中、 下記を除くすべての符号は既に定義した通りであり； Ｒ３は少なくと６１からＡ２の分子量を５００２通常は
ｔｏｏｏ、より普通には１５００で割った値までの数値
であり、ただしｑが０のときＲ３は１であり；ｑは０ま
たは１であり； ｐは少なくと６１から担体の分子量を５００．担体の分
子量が５００，０００をこえる場合にはより普通には１
０００で割った値までの数値であり、ｐの上限は一般に
は担体の分子量を５ｏｏｏ　、より普通にはｉｏ、ｏｏ
ｏで割った値であり： “担体”は、分子量が少なくとも約１０，０００で、複
数の結合用官能基（例、カルボキシ、ヒドロキシまたは
アミン）を有し、通常は多糖類またはけ加ポリマーのよ
うに重合体である天然またはき成の高分子担体であり、
この担体はＡ２またはカッコ内の複自体に残っている任
意の好都合な官能基により複合体に結合している。すな
わち結合様式は本発明にとって重要ではない０例えば、
Ａ２がポリアミノ酸である場合には、担体のカルボキシ
ル基を利用してアミド結合を形成してもよいし、或いは
マレイミド基を導入してメルカプト基に結合させてもよ
い。

当然ながら、本発明の化合物は、その特性に項著な影響
を及ぼさずに、上記の各種の一般式の範囲内から逸脱す
るように変性させることもできる。

例えば、１または２以上の酸性アニオン基をエステル化
またはアミド化してもよく、或いはフェニル環をアルキ
ル基ならびにシアン、ニトロなどの他の基で置換するこ
ともできる。しかし、このような変化は多くの場合に追
加の合成工程を必要とし、これは得られた生成物の分光
学的または化学的性質に向上があったとしても、その向
上の程度により正当化されるほどのことはない。

次に本発明の各成分について考慮すると、まずフルオレ
セイン誘導体に関しては、本発明の範囲内に包含される
フルオレセイン誘導体前駆物質の例として下記のものが
挙げられる。

亀上民 ２．７−シメチルー４，５−ジクロロ−９＝（２’、４
’、５°−トリカルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ
−３−キサンテン−３−オン；２．７−ジエチル−４，
５−ジクロロ−９−（２°、４°、５°−トリカルボキ
シ−３″、６”−ジクロロフェニル）−６−ヒドロキシ
−３Ｈ−キサンテン−３−オン； ２．７−ジヘキシルー９−（２°、４’、５°−トリカ
ルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチ
ン−３−オン； ２．７−シメチルー４．５−ジクロロ−９−（２’−カ
ルボキシ−４゛−イソチオシアナト−３°、５゜−ジク
ロロフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−
３−オン； ２．７−シメチルー９−（２°−力ルボキシ−４゛−イ
ソシアナト−３゛、５°、６’−トリクロロフェニル）
−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン； ２．７−シメチルー９−（４°−カルボキシ−５゛−カ
ルボキシフェニル）グリシルグリシルグリシンアミド−
６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン； ２．７−ジ（カルボキシメチル）−９−（４°、５゜−
ジカルボキシ−２°、３’、６’−トリクロロフェニル
）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン； ２．７−ジ（カルボキシプロピル）−４，５−ジクロロ
−９−（３°、４′−ジカルボキシフェニル）−６−ヒ
ドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン；２．７−ジニ
チルー９−（２’−力ルボキシ−４゜−アミノ−３″、
５°−ジクロロフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キ
サンチン−３−オン；２．７−シメチルー９−（２°−
カルボキシ−４′−メルカプトフェニル）−６−ヒドロ
キシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン； ２．７−シメチルー９−（２’−力ルボキシ−４゛−カ
ルボキシメチルフェニル）−６−ヒドロキシ−３８−キ
サンテン−３−オン； ２．７−シメチルー９−［２°−カルボキシ−４゜−（
４”−カルボキシブチル）フェニル］−６−ヒドロキシ
−３Ｈ−キサンチン−３−オン；２．７−シメチルー４
．５−ジクロロ−９−［２’、４°−ジカルボキシ−５
゛−（カルボキサミドメチレン）フェニル］−６−ヒド
ロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン； ２．７−シメチルー４，５〜ジクロロ−９−（３゜−カ
ルボキシプロピル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチ
ン−３−オン。

既に述べたように、フルオレセイン誘導体前駆物質はリ
ガンドおよび／または担体と結合させて複合体を形成さ
せる０次に適用可能なリガンドについて説明する。

ｆＡｎａｌｔｅ 本発明のリガンド被分析物はモノエピトープまたはポリ
エピトープ性であるという特徴を有する。

ポリエピトープ性リガンド被分析物は一般にポリアミノ
酸、すなわちポリペプチドおよびタンパク質、多糖類、
核酸ならびにこれらの混合物である。

このような集合混合物には細菌、ウィルス、染色体、遺
伝子、ミトコンドリア、細胞核、細胞膜などがある。

たいていは、本発明で使用するポリエピトープ性リガン
ド被分析物は分子量が少なくとも約５０００、より普通
には少なくとも約１０，０００である。ポリアミノ酸の
類では、対象となるポリアミノ酸は−最に分子量が５０
００〜５，０００，０００、より普通には約２０　、０
００〜１，０００，０００であり；対象となるホルモン
は分子量が通常は約５０００〜６０，０００の範囲内で
ある。

多様なタンパク質を、類似の構造特徴を有するタンパク
質、特定の生物学的機能を有するタンパク質、特定の微
生物、特に病気の原因となる微生物に関連するタンパク
質などの分類で考慮することができる。

下記は構造により分類したタンパク質の種類である。

１０タミン類 ヒストン顕 アルブミン類 グロブリン類 硬タンパク質類 リンタンパク質類 ムコタンパク質類 色素タンパク質類 リポタンパク質類 核タンパク質類 糖タンパク質類 １０チオグリカン類 上記に分類されないタンパク質（例、ツマトロピン、プ
ロラクチン、インシュリン、ペプシン） 人の血漿中に存在する多数のタンパク質は臨床的に重要
であり、これらには次のものが含まれる。

プレアルブミン アルブミン α、−リポタンパク質 α１−酸糖タンパクク α、−抗トリプシン α１−糖タンパク トランスコルチン ４．６Ｓ−ボストアルブミン トリアトファン欠乏α、−糖タンパク質α１に一糖タン
パク質 チロキシン結合性グロブリン インター−α−トリプシン阻害因子 Ｇｃ−グロブリン （Ｇｅ　　１　　１） （Ｇｃ　　２　　１） （Ｇｅ　　２−２） ハプトグロビン （Ｈｐ　　１　１） （Ｈｐ　　２−１） （Ｈｐ　　２　２） セルロプラスミン コリンエステラーゼ α２−リポタンパク質 ミオグロビン Ｃ−反応性タンパク質 α２−マクログロブリン α２−ＨＳ−糖タンパク質 Ｚｎ−α２−糖タンパク質 α２−ノイラミノー糖タンパク質 エリスロボイエチン β−リポタンパク質 トランスフェリン ヘモベキシン フィブリノーゲン プラスミノーゲン β２−糖タンパク質■ β２−Ｎタンパク質■ 免疫グロブリンＧ、（ＩｇＧ）又はγＧ−グロブリン分
子式：γ２に２又はγ２λ２ 免疫グロブリン＾、（Ｉｇ＾）又はγ＾−グロブリン分
子式：（α２に２）。又は（α２λ２）ｎ免疫グロブリ
ンＭ、（ｒｇＭ）又はγ台−グロブリン分子式：（μ２
に２）Ｓ又は（μ２λ２）５免疫グロブリンＤ、（１，
０）又はγＤ−グロブリン（γＤ） 分子式：（δ２に２）又は（δ２λ２）免疫グロブリン
Ｅ、（ＩｇＥ）又はγＥ−グロブリン（γＥ） 分子式：（ε２によ）又は（６２λ２）遊離におよびλ
Ｌ鎖（ｌｉｇｈｔ　　ｃｈａｉｎｓ）相補因子： Ｃ’Ｉ Ｃ’ｌＱ Ｃ’ｌｒ Ｃ’ｌｓ Ｃ’２ Ｃ’３ βＩＡ α２Ｄ Ｃ’４ Ｃ’５ Ｃ’６ Ｃ’７ Ｃ’８ Ｃ’９ 重要な血液凝固因子には下記のものがある。

Ｉ　　　　フィブリノーゲン ■　　　　プロトロンビン １１ａ　　　　）ロンビン ■　　　　組織性トロンボプラスチン ■と■　　プロアクセレリン、促進剤グロブリン ■　　　　プロコンパ−チン ■　　　　抗血友病性グロブリン（Ａ　ＨＧ　）■　　
　　クリスマス因子、血漿トロンボプラスチン成分（Ｐ
ＴＣ） Ｘ　　　　スチュアートープロワー因子、アウトプロト
ロンビン■ て　　　　血漿トロンボプラスチン前駆体（ＰＴＡ） ■　　　　ハゲマン因子 ＸＩ［［フィブリン安定化因子 重要なタンパク質ホルモンには次のものがある。

ベラ　ドお　び　ンパ　　ホルモン 上皮小体ホルモン チロカルシトニン インシュリン グルカゴン レラキシン エリスロボイエチン メラノトロピン（黒血法刺激ホルモン、インテルメジン
） ソマトトロピン（成長ホルモン） コルチロトロピン（向側腎皮質性ホルモン）チロトロピ
ン（向甲状腺性ホルモン） 卵胞刺激ホルモン 黄体形成ホルモン（間質細胞刺激ホルモン）黄体乳腺刺
激ホルモン（ルテオトロビン、プロラクチン） ゴナドトロピン（胎盤性性腺刺激ホルモン）組１ＪソＬ
Ｔ−之一 セクレチン ガストリン アンギオテンシン■および■ プラデイキニン 人胎盤性ラクトゲン か　のベラ　ドホルモン オキシトシン パンプレッシン 放出因子（ＲＦ） ＣＲＦ、ＬＲＦ、ＴＲＦ、ソマトトロピン−ＲＦ。

ＧＲＦ、ＦＳＨ−ＲＦ、Ｐ　Ｉ　Ｆ、ＭＩＦ対象となる
他の重合体物質はムコ多糖類および多糖類である。

微生物から誘導゛される抗原性多糖類の例を次に示す。

ヘモセンシチ Ｚ凶立玄− 化膿連鎖球菌　　　　　　　　　　　多糖類（Ｓ　ｔｒ
ｅｐｔｏｅｏｃｃｕｓ　　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）肺炎双球
菌　　　　　　　　　　　　多糖類（Ｄ　１ｐｌｏｅｏ
ｃｅｕｓ　　　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）髄膜炎菌　　　
　　　　　　　　　　多糖類（Ｎ　ｅｉｓｓｅｒｉａ　
　輪ｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）淋　菌　　　　　　　　
　　　　　　多糖類（Ｎ　ｅｉｓｓｅｒｉａ　　ｇｏｎ
ｏｒｒｈｅａｅ）ジフテリア菌　　　　　　　　　　　
多糖類（Ｃｏｒｙｎｅｂａａｔｅｒｕ＋＊　　　ｄｉｐ
ｈＬｈｅｒｒｉａｅ）アクチノバチルス・マルレイ；　
　　粗製エキス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　　
ｅ＋ａｌｌｅｉ）アクチノバチルス・ウイテモリ （Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　　ｗｈｉｔｅｍｏ
ｒｉ）フランジセラ・ツラレンシス　　　　リボ多糖類
（Ｆ　ｒａｎｃｉｓｅｌｌａ　　ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ
）ペスト菌　　　　　　　　　　　　　多糖類（Ｐａｓ
ｔｅｕｒｅｌｌａ　　ｐｅｓｔｉｓ）パスツーレラ・ム
ルトシダ　　　　きよう膜抗原（Ｐａｔｔｅｕｒｅｌｌ
ａ　　＋ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）プルセラ・アボルツス　
　　　　　　粗製エキス（Ｂ　ｒｕｃｅｌ　１ｍ　　ａ
ｂｏｒｔｕｓ）インフルエンザ菌　　　　　　　　　多
糖類（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　　１ｎｆｌｕｅｎｚａ
ｅ）ヘモフィルス・ベルツツシス　　　　粗製（Ｈａｅ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ　　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）トレボネマ
・レイテリ　　　　　　　多糖類（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ
　　ｒｅｉｔｅｒｉ）ペイヨネラ　　　　　　　　　　
　　リボ多糖類（Ｖｅｉｌ！ｏｎｅｌｌａ） エリシベロトリックス　　　　　　　多糖類（Ｅ　ｒｙ
ｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ） リステリア・モノシトゲネス　　　　多糖類（Ｌ　１ｓ
ｔｅｒｉａ　　　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）クロモ
バクテリウム　　　　　　　　リボ多糖類（Ｃｈｒｏｍ
ｏｂａｃ　ｔｅｒ　ｉ　ｕｓ）ミコバクテリウム・ラベ
ルクロシス　９０ｇフェノール（Ｍｙｅｏｂａｃｔｅｒ
ｕｍ　　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）　　　　抽出した
ミコバクテリアの食塩 水工キスおよび 菌体とツベルク リンの多糖類分 画 クレブシェラ・アエロゲネス　　　　多糖類（ＫＩｅｂ
ｓｉｅｌＬａ　　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）クレブシェラ・
クロアカニ　　　　　多糖類（Ｋ　１ｅｂｓｉｅｌｌａ
　　ｃｌｏａｃａｅ）サルモネラ・チフオサ　　　　　
　　リボ多糖類。

（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｔｙｐｈｏｓａ）　　　　
　　　多糖類サルモネラ・チフィームリウム；　　　多
糖類（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｔｙｐｈｉ−ｍｕｒｉ
ｕｍ）サルモネラ・デルビイ （Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｄｅｒｂｙ）サルモネラ・
プロルム （Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｐｕｌｌｏｒｕｍ）シゲラ
・ディセンテリアエ　　　　　多糖類（Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ　　ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）シゲラ・フレクスネリ （Ｓｈｉｇｅｌｌａ　　ｆｌｅｘｎｅｒｉ）ゾンネ菌　
　　　　　　　　　　　粗製、多糖類（Ｓ　ｈｉｇｅｌ
　ｌａ　　５ｏｎｎｅｉ）リケッチア類　　　　　　　
　　　　粗製エキス（Ｒ１ｅｋｅｔｔｓｉａｅ） カンジダ・アルビカンス　　　　　　多糖類（Ｃａｎｄ
ｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓ）エンタモエバ・ヒストリ
チ力　　　　粗製エキス（Ｅ　ｎｔａｍｏｅｂａ　　ｈ
ｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）分析を受ける微生物は、そのま
までも、或いは溶解、粉砕そ、の他の破砕処理したもの
でもよく、得られた組成物または部分（例、抽出による
もの）を分析する。対象となる微生物は下記を含む。

コ１ネバ　−１　ム　（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ
）ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ＋＠ｄ
ｉｐＬｈｅｒｉａｅ）ｉｌＪＩＪＩＪｌ　　（Ｐｎｅｕ
ｓｏｅｏｃｃｉ）肺炎双球菌（Ｄ　１ｐｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ　　ｐｈｅｕｍｏｎｉａｅ）［（Ｓ　Ｌｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃ　ｉ　）化膿連鎖味（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓ　　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）唾液連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　　５ａｌｉｖａｒｕｓ）”　　　　
　（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）黄色ブドウ球菌（
Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ）白
色ブドウ球菌（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａ
ｌｂｕｓ）カイ４（Ｎ　ｅ　ｉ　ｓ　ｓ　ｅ　ｒ　ｉ　
ａ　ｅ　）髄膜炎菌（Ｎ　ｅｉｓｓｅｒｉａ　　＋＊ｅ
ｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）淋菌（Ｎ　ｅｉｓｓｅｒｉａ　
　ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）１泊１目１ 大腸菌群細菌： 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ）アエロ
ゲネス菌（Ａ　ｅｒｏｂａｃｔｅｒ　　ａｅｒｏｇｅｎ
ｅｓ）　　　’肺炎桿菌（Ｋ　Ｉｅｂｓｉｅｌｌａ　　
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）サルモネラ属： 腸チフス菌（Ｓ　ａｌ＋５ｏｎｅｌ　ｌａ　　ｔｙｐｈ
ｏｓａ）豚コレラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｅｈｏ
ｌｅｒｅｓｕｉｓ）ネズミチフス菌（Ｓａｌ＋＊ｏｎｅ
ｌｌａ　　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）シゲラ属： シガ赤病菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　　ｄｙｓｅｎｔｅｒｉ
ａｅ）シュミツッ赤痢菌（Ｓｂｉｇｅｌｌａ　　ｓｃｈ
＋＊１ｔｚｉｉ）シゲラ・アラビノタルダ（Ｓｈｉｇｅ
ｌｌａｉｒａｂｉｎｏｔａｒｄａ） フレクスナー赤痢菌（Ｓｌ＋ｉｇｅｌｌａ　　ｆｌｅｘ
ｎｅｒｉ）ボイド赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　　ｂｏｙ
ｄｉｉ）ソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　　５ｏｎｎ
ｅｉ＞丈ｍ久賜ヱ１１ プロテウス属： 尋常変形ｍ　（Ｐ　ｒｏｔｅｕｓ　　ｖｕｌｇａｒｉｓ
）奇怪変形菌（ＰｒｏＬｅｕｓ　　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ
）モルガン変形菌（Ｐ　ｒｏｔｅｕｓ　　ｍｏｒｇａｎ
ｉ）緑膿菌（Ｐ　ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ）アルカリ大便菌（Ａ　ｌｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ　　ｆａｅｅａｌｉｓ）コレラ菌（Ｖ　１ｂｒｉｏ　
　ｃｈｏｌｅｒａｅ）ヘモフイルスーボルーーー インフルエンザ菌（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　　１ｎｆｌ
ｕｅｚａｅ）へモタイルス・ドウクレイ（Ｈ、ｄｕｃｒ
ｅｙｉ）へモタイルス・ヘモフィルス （Ｈ、ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ） ヘモフィルス・アエギプチクス （Ｈ、ａｅｇｙｐＬｉｃｕｓ） バラインフルエンザ苗（Ｈ，ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚ
ａｅ）百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　　ｐｅｒｔｕ
ｓｓｉｓ）パスコ」こ之１エ ペスト菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　　ｐｅｓｔｉｓ）
肩先病菌（ＰａｓＬｅｕｒｅｌｌａ　　ｔｕｌａｒｅｕ
ｓｉｓ）Ｚル」」１引 マルタ熱菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　　ｍｅｌｉｔｅｎｓｉ
ｓ）牛流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　　ａｂｏｒｔｕｓ）
豚流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　　５ｕｉｓ）虹りばＵ匪
ヱ１］１１ 炭ソ薗（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ａｎｔｈｒａｅｉｓ）枯
草菌（、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｉｓ）巨大
国（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）セレ
ウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｃｅｒｅｕｓ）多 ボツリヌス菌（Ｃ１ｏｓｔｒｉｄｉｕｔ＆ｂｏｔｕｌｉ
ｎｕｍ）破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｔｅｔ
ａｎｉ）ウエルチ菌Ａ型（ＣＩｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　
ｐｅｒｆｒｉＢｅｎｓ）ノーと菌（ＣＩｏｓｔｒｉｄｉ
ｕｍ　　ｎｏｖｙｉ）セプチツクス菌（ＣＩｏｓｔｒｉ
ｄｉｕｍ　　ｓｅｐｔｉｃｕｍ）ヒストリチフス菌（Ｃ
Ｉｏｓｔｒｉｄｉｕｍｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ） 第三型ロデラ菌（ＣＩｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｔｅｒｔ
ｉｕｍ）クロストリジウム・ビフエルメンタンス（Ｃ１
ｏｓｔｒｉｄｉｕ＋ｅ　　ｂｉｆｅｒｗ＋ｅｎｔａｎｓ
）スポロゲネス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｓｐｏ
ｒｏｇｅｎｅｓ）ｈｏｓｉｎｉｓ） 生型結核菌（Ｍ　ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｂｏｖ
ｉｓ）鳥型結核菌（Ｍｙｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａ
ｖｉｕｍ）ライ菌（Ｍ　ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　
１ｅｐｒａｅ）パラ結核性腸炎菌（Ｍ　ｙｅｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ） ｆｉ（真菌様細菌） 手放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　　１ｓｒａｅｌｉ
ｉ）および（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　　　ｂｏｖｉｓ
）アクチノマイセス・ネスルソデイ （Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　　ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ）
ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａａｓｔ
ｅｒｏｉｄｅｓ） ノカルジア・ブラジリエンシス（Ｎｏｃａｒｄｉａｂｒ
ａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ） 入ζ二Ｎ二久１ 梅毒トレボネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　　ｐａｌｌｉ
ｄｕｍ）フランベジア・トレボネーマ（Ｔ　ｒｅｐｏｎ
ｅｍａｐｅｒｔｅｎｕｅ） ビンタ・トレボネーマ（Ｔ　ｒｅｐｏｎｅｍａ　　ｃａ
ｒａｔｅｕｍ）小スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ　　
ｍ１ｎｕｓ）ストレプトバチルス・モニリホルミル （Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　　ｍｏｎｉｌ
ｉｆｏｒｍｉｓ）オーベルマイエ回帰熱スピロヘータ （Ｂ　ｏｒｒｅｌ　ｉａ　　ｒｅｅｕｒｒｅｎｔｉｓ）
黄ソ出血病レプトスピラ （Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ　　ｉｃｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒ
ｈａｇｉａｅ）犬レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ
　　ｃａｎｉｃｏｌａ）（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　　　
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｌへ１α乳１１ 単球病リステリア（１，、ｉｇｊ６ｒｉｌｌ　　＠ｏｎ
ｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）豚丹毒菌（Ｅ　ｒｙｓｉｐｅｌ
ｏｔｈｒｉｘ　　ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ソ径肉
芽腫菌（Ｄ　ｏｎｖａｎｉａ　　ｇｒａｎｕｌｏｍａｔ
ｉｓ）バチルス型バルトネラ（Ｂａｒｔｏｎｌｌａｂａ
ｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ） ヅラニノｊコム應−（細菌様寄生虫） 発疹熱リケッチア（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａ　　ｐｒｏｗ
ａｚｅｋｉｉ）リケッチア・ムーセリ（Ｒ１ｃｋｅｔｔ
ｓｉａ　　ｍｏｏｓｅｒｉ）斑点熱リケッチア（Ｒｉｃ
ｋｅｔｔｓｉａ　　ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）コノリ・リ
ケッチア（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａ　　ｃｏｎｏｒｉ）リ
ケッチア・オーストラリア（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａａｕ
ｓｔｒｉｌｉｓ） リケッチア・シビリクス（Ｒ１ｅｋｅｔｔｓｉａｓｉｂ
ｉｒｉｃｕｓ） リケッチア・アカリ（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａ　　ａｋａ
ｒｉ）つつが虫リケッチア（ＲｉｃｋｅｔｔｓｉａＬｓ
ｕｔｓｕｇａＩｌｌｕｓｈｉ） Ｑ熱すケッチア（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａ　　ｂｕｒｎｅ
ｔｉｉ）リケッチア・キンタナ（Ｒ１ｃｋｅｔｔｓｉａ
　　ｑｕｉｎｔａｎａ）ム１辷９７（分類不可能な寄生
虫、細菌／ウィルス性） クラミジア薬剤（名称未確定） 真１ （Ｃｒｙｐｔｏｃｏｅｃｕｓ　　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ
）プラストマイセス・デルマチジス （Ｂ　ｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ　　ｄｅｒｗ＋ａｔｉｄｉ
ｓ）ヒストプラズマ・カブスラツム （ＨｉｓＬｏｐｌａｓｍａ　　ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）
コクシジオイデス・イミチス （Ｃｏｅｃｉｃｌｉｏｉｄｅｓ　　ｉ＋ｌ１ｍ１ｔｉｓ
）パラコクシジオイデス・プラジリエンシス（Ｐａｒａ
ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ　　ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉ
ｓ）ガロ癒カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａ
ｎｓ）アスペルギルス・フミガラス （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｆｕｎｉｇａＬｕｓ）か
さ状ケカビ（Ｍｕｃｏｒ　　ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒ（Ａ
ｂｓｉｄｉａｃｏｒｙ＋ａｂｉｆｅｒａ）） 藻菌類： リゾプス・オリザエ（Ｒｈ　１ｚｏｐｕｓ　　ｏｒｙｚ
ａｅ）リゾプス゛アルリスズ（ＲＩ＋１ｚｏｐｕｓ　　
ａｒｒｈｉｚｕｓ）リゾプス・ニグリカンス（Ｒｈｉｚ
ｏｐｕｓｎｉｇｒｉｃａｎｓ） スポロトリカム・ジエンキイ（Ｓ　ｐｏｒｏｔｒｉｅｈ
ｕｍｓｅｈｅｎｋｉｉ） フオンセカエア・ペトロゾイ（Ｆ　ｏｎｓｅｅａｅａｐ
ｅｄｒｏｓｏｉ） フオンセ力エア・コンパクタ（Ｆ　ｏｎｓｅｅａｅａＨ
ｍｐａｃｔａ） フオンセ力エア・デルマチジス（Ｆ　ｏｎｓｅｅａｅａ
ｃｌｅｒｍａｔｉｄｉｓ） クラドスポリウム・カルリオニイ （Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　　ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）
タイアロフオラ・ベルルコサ（Ｐ　ｈｉａｌｏｐｈｏｒ
ａｖｅｒｒｕｃｏｓａ） アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｎｉｄｕｌａｎｓ） マゼレラ・マイセトミ（Ｍａｄｕｒｅｌｌａ　　ｍｙｃ
ｅｔｏｍｉ）マゼレラ・グリセア（Ｍａｄｕｒｅｌｌａ
　　ｇｒｉｓｅａ）アレシエリア・ボイジイ（Ａｌｌｅ
ｓｃｈｅｒｉａｂｏｙｄｉｉ） タイアロスホラ・ゼアンセルメイ （Ｐ　ｈｉａｌｏｓｐｈｏｒａ　　ｊｅａｎｓｅｌｍｅ
ｉ）ミクロスボルム・ギプセイム （Ｍ　１ｅｒｏｓｐｏｒｕ＋＊　　ｇｙｐｓｅｕｍ）ト
リコフィトン・メンタグロフィテス （Ｔ　ｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　　＋＊ｅｎｔａｇｒｏ
ｐｌ＋ｙｔｅｓ）ケラ千ノマイセス・アジニルロイ （Ｋｅｒａｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　　ａｊｅｌｌｏｉ）ミ
クロスボルム・カニメ（Ｍ　ｉｅｒｏｓｐｏｒｕｍｃａ
ｎｉｓ） トリコフィトン・ルブルム（Ｔ　ｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏ
ｎｒｕｂｒｕ輪） ミクロスボルム・アンドゥイニ（Ｍ　ｉｃｒｏｓｐｏｒ
ｕｍａｎｄｏｕｉｎｉ＞ 単純性庖疹 水痘 帯状庖疹 ウィルスＢ シトメガロウイルス 塵Ｉ挫ム工］−乙苅一 天然痘（痘ｆｌ） 種痘 牛痘ウィルス 変態痘 伝染性軟属腫 ビコル　ウィルスＰ　１ｃｏｒｎａｖｉｒｕｓボリオウ
イルス コックスサラキーウィルス エコーウィルス（Ｅ　ｅｈｏｖｉｒｕｓ）リノウイルス
（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）払羞力上鉋にムＩ− インフルエンザ（Ａ、ＢおよびＣ） バラインフルエンザ（ｌ〜４） 耳下腺炎ウィルス ニューカッスル病ウィルス 麻疹ウィルス 牛疫ウィルス 犬ジステンパーウィルス 呼吸シンシチウムウイルス 風疹ウィルス アルポウ　ルスＡｒｂｏｖｉｒｕｓ 東部馬脳炎ウィルス 西部馬脳炎ウイルス シンドビス（Ｓ　１ｎｄｂｉｓ）ウイルスチクグンヤ（
Ｃｈｉｋｕｇｕｎｙａ）ウイルスセムリキ森林ウイルス マヨラ（Ｍａｙｏｒａ）ウィルス セントルイス脳炎ウィルス カリフォルニア脳炎ウィルス コロラドチック熱ウィルス 黄熱病ウィルス デング熱ウィルス レ　　ウ　　ルス　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ レオウィルス１〜３型 肚遺力上ΩにムＩ− Ａ型肝炎ウィルス Ｂ型肝炎ウィルス 腫洟盈上臼にムガー ラウシャ−（Ｒａｕｓｃｌ＋ｅｒ）白血病ウィルスクロ
ス（Ｇｒｏｓｓ）ウィルス マロニー（Ｍａｌｏｎｅｙ）白血病ウィルスモノエピト
ープ性リガンド被分析物は一般に分子量が約１００〜２
０００　、より普通には１２５〜１０００である。対象
となる被分析物には薬物、代謝産物、殺虫剤、汚染物質
などがある。

対象となる薬物に含まれるものとして、まずアルカロイ
ドがある。アルカロイドには、モルフインアルカロイド
（モルヒネ、コデイン、ヘロイン、デキストロメトルフ
ァン、これらの誘導体および代謝産物を含む）、コカイ
ンアルカロイド（コカイン、ペンゾイルエクゴニン、こ
れらの誘導体および代謝産物を含む）、麦角アルカロイ
ド（リゼルグ酸のジエチルアミドを含む）、ステロイド
アルカロイド、イミナゾイルアルカロイド、キナゾリン
アルカロイド、インキノリンアルカロイド、キノリンア
ルカロイド（キニーネおよびキニジンを含む）、ジテル
ペンアルカロイド、ならびにこれらの誘導体および代謝
産物がある。

別の群の薬物はステロイドであり、これはエストロゲン
、ゲストロゲン、アンドロゲン、副腎皮質ステロイド、
胆汁酸、強心剤グリコシドおよびアグリコン（ジゴキシ
ンおよびジゴキシゲニン、サポニンおよびサボゲニンを
含む）、ならびにこれらの誘導体および代謝産物がある
。ジエチルスチルベストロールのような擬ステロイド物
質も包含される。

次の群の薬物は５または６員環のラクタムであり、これ
にはバルビッール酸化合物（例、フエノバルビタール、
セコバルビタール）、ジフェニルヒダントイン、プリミ
ドン、エトスクシミドおよびこれらの代謝産物がある。

次の群の薬物はアルキルの炭素数が２〜３のアミノアル
キルベンゼンであり、これにはアンフェタミン、カテコ
ールアミンの類が包含され、具体的にはエフェドリン、
Ｌ−ドーパ、エピネフリン、ナルセイン、バパベリン、
これらの代謝産物および誘導体が含まれる。

次の群の薬物は、ベンゾ複素環化合物であり、これには
オキサゼパム、クロルプロマジン、テグレトール、イミ
プラミン、これらの誘導体および代謝産物が含まれ、複
素環はアゼピン、ジアゼピンおよびフェノチアジンであ
る。

次の群の薬物はプリンであり、これにはテオフィリン、
カフェイン、これらの代謝産物および誘導体が含まれる
。

次の群の薬物はマリファナから誘導されるものであって
、これにはカンナビノールおよびテトラヒドロカンナビ
ノールが含まれる。

次の群の薬物は、ビタミンＡ、Ｂ（Ｂ、□など）、Ｃ、
Ｄ　、ＥおよびＫ、葉酸、チアミンのようなビタミン頭
である。

次の群の薬物はプロスタグランジンであって、これはヒ
ドロキシル化および不飽和の程度と位置で各種の種類に
分かれる。

次の群の薬物は抗生物賞であり、これにはペニシリン、
クロロマイセチン、アクチノマイセチン、テトラサイク
リン、テラマイシン、これらの代謝産物および誘導体が
含まれる。

次の群の薬物はヌクレオシドおよびヌクレオチドであり
、これにはＡＴＰ、ＮＡＤ、ＦＭＮ、アデノシン、グア
ノシン、チミジンおよびシチジンならびにこれらの適当
な糖およびリン酸置換生成物が含まれる。

次の群の薬物はその他の雑多な薬物であり、これにはメ
タトン、メブロバメート、セロトニン、メペリジン、ア
ミトリブチリン、ノルトリブチリン、ライドカイン、プ
ロ力インアミド、アセチルプロ力インアミド、プロ１ラ
ノロール、グリセオフルビン、パルプロ酸、ブチロフェ
ノン、抗ヒスタミン剤、抗コリン剤（例、アトロビン）
、これらの代謝産物および誘導体がある。

次の群の化合物はアミノ酸および小ペプチドであり、こ
れにはポリョードチロニン（例、チロキシンおよびトリ
ョードチロニン）、オキシトシン、ＡＣＴＨ、アンギオ
テンシン、メチオニン−およびロイシンーエンクファリ
ン、これらの代謝産物ならびに誘導体が含まれる。

疾病症状に関係する代謝産物にはスペルミン、ガラクト
ース、フェニルピルビン酸およびポルフィリン１型があ
る。

次の群の薬物は、ゲンタマイシン、カナマイシン、トブ
ラマイシンおよびアミカシンのようなアミノグリコキシ
ドである。

対象となる殺虫剤にはポリハロゲン化ビフェニル、リン
酸エステル、チオホスフェート、カルバメート、ポリハ
ロゲン化スルフエナミド、これらの代謝産物および誘導
体がある。

受容体型の被分析物に関しては、分子量は一般にｔｏ、
ｏｏｏないし２Ｘ　１０’、より普通には１０．０００
ないし１０“の範囲内である。免疫グロブリンＩ　ＨＡ
　、　Ｉ　ｇＧ　、　Ｉ　ｇＥおよびＩｇＭについては
、分子量は一般に約１６０，０００〜１０＠の範囲内で
ある。酵素の分子量は一般に約１０，０００〜６，００
０．０００である。天然受容体は多岐にわたり、一般に
分子量は約２５．０００以上であって、１０１またはそ
れ以上に達することもあり、アビジン、チロキシン結合
性グロブリン、チロキシン結合性プレアルブミン、トラ
ンスコルチンなどの物質を包含する。

本発明のフルオレセイン誘導体の多くの応用において、
リガンドを担体に結合させることが望ましい、この結合
は、直接、リガンドを中間に介在させて、またはリガン
ドに結合させながら担体直接に行われる。

多様な担体が使用できる。担体すなわち粒子は天然物、
天然物を合成手段により変性したもの、および合成物か
ら得ることができる。特に重要なものは、多糖類、特に
架橋多糖類、例えばアガロース（Ｓ　ｅｐｈａｒｏｓｅ
として市販）、デキストラン（Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘおよ
びＳ　ｅｐｈａｅｙｌとして市販）、セルロース、でん
ぷんなどである、その他の材料にはポリアクリルアミド
、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエ
チルメタクリレートとメチルメタクリレートのコポリマ
ー、シリコーン、ガラス（Ｂ　ｉｏｇｌａｓとして市販
）、核酸、ポリアミノ酸、菌体などがある。固体粒子の
ほかに、内部液体を収容し、成る空間を区画する作用を
する親油性または両親媒性膜を有する液状粒子も使用で
きる。このような粒子には小胞、細胞およびリポゾーム
がある。

粒子は、多孔質または非多孔質、水性または有機媒質で
膨潤性または非膨潤性、架橋または非架橋、表面が平滑
または粗面などの点に関して何れでもよく、−最にヒド
ロキシル、アミノ、カルボキシなどの多様な官能基を有
し、これらの官能基は主鎖に直接結合しているか、また
は結合鎖によって結合している。

多孔性粒子は多様なカットオフ（ｃｕｔ　　ｏｆｆ）値
を有し、分子Ｉは一最に約ｉｏ、ｏｏｏから数百万以上
にも達するが、通常は２０，０００，０００をこえない
。

既に述べたように、フレオレセイン化合物とリガンドお
よび／または担体との間には多様な結合鎖が使用できる
。結合基の選択は、利用可能な、もしくは容易に導入で
きる官能基の種類、結合鎖の所望の長さ、結合鎖を特定
の環境に備えさせることが望ましいかどうか、化学的ま
たは物理的性質（例、正または負への帯電、溶解度の増
大、双極子効果）などに応じて大幅に変動しよう。

次の表は、フレオレセイン化合物をリガンドに結合する
のに使用できる多様な結合基を示す。

第ｙｊ丸 −ＣＯ２１１−（ＮｌｌにＣｏ）　　−−Ｎｉ１２−Ｃ
Ｏ２１１ｏｒ−ＳＯｓｌｌ　　　−（ＮＨ（：’ＮＨ）
　　、ＮｔｌＧ’Ｎｌｌ−−ＣＯ２１１−ＮＨＣ’　Ｎ
（ＣＩｌ、Ｃ１１２＞２ＮＧ’　ＮＨ−上の表において
、 Ｇは炭素数１〜８、通常は１〜６のアルキレンであり；
Ｇｏは炭素数２〜６、通常は２〜４のアルキレンであり
；ｇとｇｏはそれぞれ１〜６、通常は１〜４である。上
の表は単により普通の結合基の例示にすぎず、他の結合
基も特殊な情況では利用できる０例えば、チロシルのよ
うにフェノール基が存在する場合にはアリールジアゾニ
ウム官能基を使うことができる。また、フルオレセイン
化合物とリガンドの官能基を逆にする（それに件なって
結合基の方向も逆向きになる）ことができることも理解
されよう。

本発明の前駆体化合物は多くの望ましい性質を有する。

この生成物は顕著な水溶性を有し、それによりこれを多
様なポリペプチドに結合して複合体を形成しても、ポリ
ペプチドの水溶性にｇ！４著な悪影響を及ぼしたり、ポ
リペプチドが本発明の前駆体化合物の分光学的性質に悪
影響を及ぼすことがない。

本発明の化合物の分光学的性質に関しては、この化合物
は一最に５００ｎｍ、より普通には５１０ｎｍをこえた
比較的長波長で吸光する。すなわち、生理的液体を扱う
ときに見られるような天然のケイ光は、この天然ケイ光
体を著しく励起しない波長範囲の励起光線を使用するこ
とにより実質的に避けられる。また、本発明の化合物は
比較的急峻な吸光ピークおよび発光ピークを示す、その
ため、ゲイ光体と消光体の間で効率的な重なりを得るこ
とができ、約７０人の距離までで効率的な消光が可能と
なる０本発明のケイ光化合物はまたストークスシフトが
大きいので、吸光帯と発光帯のピークが少なくとも１０
ｎｍ、Ｌばしば少なくとも１５ｎｍは離れる。この大き
なストークスシフトにより、１ＩＩ１１測されるケイ光
に対するバックグラウンドの妨害が最小限ですむ。

本発明の前駆体化合物は慣用手段によって製造される。

適当なレソルシノールとカルボン酸もしくは無水物をル
イス酸（例、塩化亜鉛）の存在下に混合し、混合物を目
的生成物を形成するのに十分な時間加熱する。その後、
生成物を常法により精製してもよい。

本発明の前駆体化合物は、特にタンパク結合分析におけ
るリガンドおよび／または担体への複合体形成材料とし
て、多様な用途がある。この複合体は、検体中の対象化
合物の存在を定性的、半定量的または定量的に測定する
のに使用できる。被検出化合物が生理的液体中に含まれ
ている場合、この種の液体としては、血清、尿、唾液、
リンパ液などがある。対象化α物が化学工業または環境
問題に関連する物貰である場合、試料（検体）は水性媒
質、有機媒質、土壌、無機混合物などであることがある
。

免疫分析または他の診断的応用に使用するためには、分
光学的に活性な前駆体化合物を、被分析物の受容体また
はリガンドを含む対象化合物に結合させる（ここで、受
容体とは成る空間的および極性分子構造に特異的に結合
する分子を意味し、リガンドはこのような構造を有する
有機分子である）、被分析物は一般にハプテンまたは抗
原である。使用化合物が結合のための利用可能な官能基
を有していない場合には、このような官能基を導入し、
しかも得られた生成物に免疫学的性質が残るように変性
を行う、リガンドとなりうる被分析物の類似物買である
化合物は、リガンド類似物と呼ばれる。

既述のように、本発明の前駆体化合物は、既知の免疫分
析法により測定しうる化合物に結合させてもよい、得ら
れた複合体（ま、免疫媒質中で検体中の対象化合物すな
わち被分析物と競合する試薬である。従って、複合体は
、受容体（通常は抗体）に対して対象化合物と競争する
ことのできる対象化合物の構造の実質的部分をなお保有
している。

分光学的に活性な前駆体化合物に結合される被分析物も
しくはその類似物、受容体またはリガンドはモノエピト
ープ性またはポリエピトープ性という特徴を有する。

分析は一般に、分光学的に活性な前駆体化合物の周囲環
境の変化またはケイ光体−消光体の対がその消光体がケ
イ光体と相互作用するのに十分な近さの範囲内まで近ず
くことによる分光学的性質の変化に基づく、或いは、対
になっているケイ光体とそうでないケイ光体を分離し、
この２ａの両分の一方または両方のケイ光体を検出する
方法も採用できる。

第１の分析法においては、リガンドおよびケイ光体に対
する受容体または抗体を使用し、リガンドに対する受容
体およびケイ光体に対する受容体の同時結合が阻止され
るという立体排除を利用する。更に、ゲイ光体に対する
受容体く抗ケイ光体）がケイ光体に結合した場合には、
そのケイ光体のケイ光は実質的に減少する。ケイ光の阻
害が完全でない場合には、抗ケイ光体に消光体を結合さ
せておくことによりゲイ光のより一層の減少を達成する
ことができる。この分析法は米国特許第３．９９８．９
４３号明細書に詳述されている。この文献で使用される
フルオレセインを本発明のケイ光性前駆体化合物に代え
ても構わない、この分析法は該特許の３〜５欄に記載さ
れている。

−ａに、この方法は、被分析物を含有することが疑われ
る検体を、リガンド−ゲイ光体複合体、抗ケイ光体およ
びリガンドの受容体または抗リガンド（リガンドが被分
析物である場合）と混合することからなる。これらの材
料をｐＨが約５〜１０、通常は約６〜９の範囲内の水性
媒質中で、約１０〜４５℃の範囲内の温度において混合
し、ゲイ光を変化率（ｒａｔｅ）方式または平衡方式の
何れかで測定する。変化率方式では全部の材料を混きし
てから約１秒ないし１時間以内に測定を行うのに対し、
平衡方式では約２４時間まで、またはそれ以上の長時間
にわたって測定を行うこともある。

別の免疫分析法では、ケイ光体−消光体の対を使用し、
この対の一方をリガンドと抗リガンドからなる特異的結
合対の一方の成分に結合しておき、他方の発色成分はそ
の特異的結合対の同一または異なる成分に結合しておく
０例えば、ケイ光体と消光体を抗リガンドの異なる分子
に結合させてもよい、こうすると、得られた２種類の抗
リガンド複合体を抗原と混合すると、ケイ光体と消光体
が消光距離の範囲内に近づく、或いは、発色物質の対の
一方をリガンドに結合し、他方の発色物質を抗リガンド
に結合することもできる。この分析法は米国特許第３，
９９６，３４５号明細書の第１７欄から第２３欄に詳述
されている０発色物質とリガンドおよび受容体との比率
は、該特許の第４〜６欄に記載されている。

この分析法は上述した第１の方法と実質的に同様に行わ
れるが、ただしこの分析ではケイ光体復合体と消光体積
合体を検体と共に加え、ケイ光の測定は既知量の被分析
物を含有する分析媒質との比較により行う。

本発明の前駆体化合物を利用してその他の分析法も実施
できる。その例としては、米国特許出願連続番号８２４
，５７６号明細書に記載の重原子消光を利用する方法ま
たは生理的液体その他の分析すべき検体中に本来的に存
在するゲイ光化合物が発する光より実質的に長波長の光
を発するケイ光分子を必要とするその他の分析法が挙げ
られる。

また、本発明の複合体は、米国特許出願連続番号９６４
，０９９号明細書に記載のように担体と組合わせて使用
することもできる。この分析法は、ケイ光体分子がバル
ク溶液（ｂｕｌｋ　　５ｏｌｕｔｉｏｎ）状態で信号変
調物質との相互作用に利用でき、または粒子に結合され
る（その場合に粒子の周囲環境はこの相互作用を妨げる
）ことに基づく、或いは、ゲイ光体複合体が粒子に結合
されたときにゲイ光信号を変調する環境を粒子が与える
こともできる。

え−１ 以下の参考例及び実施例は、制限を目的とするものでは
なく、単に例示のために挙げたものである。

参考例及び実施例において、特に指定のない限り、温度
はすべて℃であり、部と％はすべでｆｆｉ量による。た
だし、液体の混合物では、部と％は容置による。参考例
又は実施例で使用した略号は次の通りである。

ＴＬＣ−薄層クロマトグラフィー Ｔ　ＨＦ−テトラヒドロフラン ＤＣＣ−ジシクロへキシルカルボジイミドＮＨ３−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドＴ、−トリョードチロニン Δ、４−メチル無水フタル酸（ｚｏ、ｏｇ）を２０％発
煙硫酸（２５ｍｆ）に溶解し、粉末ヨウ素（０，５１？
）を加えた。混合物を９０〜１００℃に加熱し、塩素ガ
スをこの溶液中に連続的に吹き込んだ、２４時間加熱し
た後、更に０．５ｇのヨウ素を加え６、加熱を更に２４
時間続けた。２日間の加熱後に、白色の固体が析出した
。反応混合物を冷却し、１００＠１の氷冷水中に投入し
、ヂ過して、白色の固体を得た。

この固体を冷水（２０ｍｍりで洗浄した後、真空乾燥し
た。生成物である３　、５．６−ドリクロロー４−メチ
ルフタル酸および無水物（１）の試料を加水分解して、
白色粉末、融点２２６−２２８℃を得た。

Ｂ８機械的撹拌機と水凝縮器を備えた１１の三ツロフラ
スコに上記の生成物（１）（２０ｙ、０．０７５モル）
を入れ、１０％Ｘ＊ＣＯコ４００社を加えた。得られた
スラリーを１２０℃の油浴で固体がすべて溶解するまで
（約１時間）還流加熱した。し−ブタノール１０１１１
を加えた後、粉末状のＫＭ　ｎ０４３３．０ｇ（０，２
モル）をこの高温撹拌溶液に少しづつ加えた。ＫＭｎＯ
４の堆積を避けるように注意する必要がある。更に１０
０＠ｌｆ）　１０％Ｋ　ｘ　ＣＯ３を使用して、ＫＭ　
ｎ０４を洗浄した。ＫＭｎＯ，を全部添加し終った後、
反応をＴＬＣで検査した。

［ＴＬＣは次の方法により行った６反応混合物の試料を
６　Ｍ　　Ｈ２Ｓ　Ｏ、で酸性化した。過剰のＫＭ、Ｏ
，をシュウ酸の飽和溶液と反応させ；得られた溶液をエ
ーテルで抽出した。このエーテル溶液をジアゾメタンの
エーテル溶液と反応させ、Ｎ２下にｆ４縮した。このメ
チルエステルの１００％ベンゼンでのＴＬＣを測定した
。　Ｒｒ＝０．３゜〈！）から誘導されたジカルボン酸
のメチルエステルのＲｒは０．５であった］。

ＴＬＣですべてのジカルボン酸が消失してしまった後、
反応を止めた。ｔ−ブタノールを留去し、撹拌している
スラリーを６Ｍ　　Ｈ，ＳＯ，でｐＨ１に酸性化した。

過剰のＫ　Ｍ　ｎＯ、を固体シュウ酸との反応により除
去した。シュウ酸の添加中に６Ｍ硫酸を加えて混合物の
ＤＨを１に保った。

得られた溶液をＲｏｔｏｖａｐで濃縮して、白いスラリ
ーを得た。６Ｍ塩酸を全容禎が約３００ｍ１になるまで
加えて固体をすべて溶解させた。得られた溶液を室温で
３０分間撹拌して、ｖ＆細な白色沈殿を生じさせた。こ
のスラリーをエーテル（３Ｘ　４００＠１）で抽出した
。白い無機塩が水層の方に残った。エーテル抽出液をＲ
ｏｔｏｖａｐで蒸発させ、残留する油状物をＲｏｔｏｖ
ａｐで乾燥ベンゼンを使用して共沸蒸留により乾燥した
。白い粉末（２０ｙ）が単離された。この粉末を酢酸エ
チル−四塩化炭素から再結晶して、１９．５．の３，５
．６−ドリクロロトリメリツト酸（ＩＩ）、融点２３８
−２４０℃を得た。

Ｃ，２５０ｍ１の丸底フラスコで、上記のトリクロロカ
ルボン酸（ＩＩ）（１０ｙ）を３０ｍ１の無水酢酸に溶
解し、この混合物を窒素下で１４０〜１４５℃に４５分
間加熱した。冷却後、Ｒｏｔｏｖａｐで高真空下、３５
〜４０℃に加熱して無水酢酸を除去した。

無水酢酸を完全に除去した後、フラスコをそのまま高真
空下に１晩放置して、無水酢酸の最後の痕跡を除去し、
得られた生成物（Ｉ［［）を次の工程にそのまま使用し
た。

Ｄ、上で得たトリクロロ酸無水物（ｍ）（９，５ｇ）を
広口管の巾で粉末状の４−メチルレソルシノール（８，
５ｇ、高真空で１晩乾燥したもの）と混合し、１８５〜
１９０℃の予熱された油浴で加熱した。

無水Ｚ。Ｃｍ！２（ｌｙ）をこの混合物に加え、時々ス
パチュラで混合しながら加熱を１．５時間続けた。赤色
の硬い塊状物が得られた。内容物を冷却し、赤色の固体
を管からかき集めた。

この固体を８％ＮａＯＨ水溶液３００社に撹拌しながら
溶解し、水浴で冷却し、１：ｌＨＣｌでｐｌ−１１に酸
性化した。黄色の固体が析出した。この沈殿をＰ別し、
水（１５０＋＊１）で洗浄し、高真空下で１晩乾燥した
。乾燥後の黄色固体の量は約１５．５ｇであった。

乾燥した黄色粉末を酢酸エチル２００ｍ１と共に１晩ｆ
ｉ！拌し、混合物を濾過し、固体を１５ｕ１の酢酸エチ
ルで洗浄しな、Ｐ液の酢酸エチル溶液をＲｏＬｏｖａｐ
で約３５〜４０℃の温度でほぼ乾固状態まで濃縮した。

残渣を２００Ｔｍｌのベンゼンと共に２時間撹拌し、濾
過した。Ｐ別された固体を２００繭ｌのＣＨ，Ｃ１，と
共に３〜４時間撹拌し、また濾過した。残留する固体は
９．０ｇであった。そのＴＨＦ：ＣＨｔＣ１’ｚ（１：
１）中でのＴＬＣは、これが殆んど純粋で、ＴＬＣでの
主要スポットは１個だけであり、一対の小スポットがほ
ぼ溶媒前面と共に移動することを示した。この黄色の固
体をこれ以上精製せずに次の反応に使用した。

上記の黄色固体混合物（８，０ｙ）を、新たに蒸留した
Ｔ　ＨＦ　（Ｃａ　Ｈｍ上で蒸留）１５０ｍｊ！に溶解
し、３、ＯｇのＤＣＣを加えた。得られた透明溶液を１
晩撹拌した。翌日、生成した白色固体をｒ別し、この固
体を１５ｍ１の乾燥ＴＨＦで洗浄した後、ｒ液と洗液を
合わせて室温でＲｏｔｏｖａｐにより蒸発乾固した。固
体残渣に２００社の１−ヘキサンを加え、混合物を２時
間撹拌して、過剰のＤＣＣを除去した。黄色固体を一過
し、５０ｍｆのｎ−ヘキサンで洗浄した。残った固体は
、ＴＬＣ（溶媒系ＴＨＦ：ＣＨ，Ｃｌ２＝６０：４０）
が示すところによると、未反応物質（Ｖｌ）と無水物（
■）の混合物である。

［Ｗ：２，７−シメチルー９−（２°、４°−ジカルボ
キシ−３゛、５°、６’−トリクロロフェニル）−６−
ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン；■：２．７
−シメチルー９−（３°、４°−ジカルボキシ無水物−
２′、５’、６°−トリクロロフェニル）−６−ヒドロ
キシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン］。

参考例１で得た黄色固体を乾燥ＴＨＦ（３００ｍＮ）に
溶解し、３−β−コレスタニルグリシネートｓ、ｓＩＩ
と混合し、この温き物を室温で１晩撹拌した。

次いで溶媒を除去し、残留する固体を水（１５０ｍｌ）
と共に２時間撹拌した。得られた混合物を希塩酸でｐＨ
１に酸性化し、低温室で撹拌を更に１時間続けた。析出
しな黄色固体をＰ別し、１００ｄの氷冷水で洗浄し、真
空乾燥した。そのＴＬＣ（Ｔ　ＨＦ　：ＣＨ２Ｃ１ｚ＝
　１　：　１　）は、これが主要化合物２種類だけの混
合物であることを示した。この黄色固体をＴＨＦと共に
シリカゲル（３０ｙ＞に吸収させ、乾燥した。乾燥粉末
をシリカゲル（２００ｇ）の乾燥カラム上に投じ、Ｔ　
ＨＦ　：　ＣＨ２Ｃ１２混合物（１：４）で溶離し、こ
の溶離の状況をＴＬＣで追跡した。スポットの移動速度
が速い方の溶離液を集め、溶媒を除去して、上記目的化
合物のコレスタニルエステル誘導体を黄色粉末（２，６
ｇ）として得た。

上記エステルの加水分解は、上記エステル１，５ｇをＴ
ＨＦｌｏｍｌに溶解し、ＮａＯＨ水溶液（水７０ｍｅ中
１ｙ）を加え、得られた溶液を室温で２４時間撹拌する
ことにより行った。白色固体が析出した。

このアルカリ性溶液をエーテル（３Ｘ　５０ｎ１）で抽
出し、水溶液を濃塩酸でｐＨ２に酸性化した。黄色の固
体が析出した。この溶液をエーテル（３×１００ｍ１）
で抽出し、エーテル溶液を食塩水（２×１５ｍ４）で洗
浄し、エーテル除去後に得られた黄色固体を４時間真空
乾燥した。残留する固体をＣＨ２ＣＪ！２（４５社）と
共に１晩撹拌すると、黄色粉末の析出を生じた。これを
枦別し、更にＣＨ２Ｃｂ　（２０ｍｌ＞で洗浄し、最終
的に真空乾燥して黄色固体（７００＋＊ｙ）を得た。

実ｍ 参考例２の生成物（色素）（６０ｍｇ）を乾燥ＴＨＦ’
（１ｍｌ）に溶解し、ＮＨＳ（３０Ｍｆ）を加えた後、
ＤＣＣ（３０ｍｆＩ）を加え、室温で３時間撹拌を行っ
た。析出した白色固体をｒ去した。Ｐ液を真空濃縮し、
残渣を１０＋ｓ１のｎ−ヘキサンと共に３０分間撹拌し
て過剰のＤＣＣを除去した。得られた黄色粉末を枦別し
て、そのまま使用した。

＋３）　　ＥＵのＮ　Ｉ−ｆ　Ｓエスール　ヒ　ＬＧ　
の「１ヒトＩｇＧ（１０す）をｐＨｓ、ｏの０．０５Ｍ
リン酸緩衝９ｉ１．２彌ｉ’に溶解し、氷冷浴で０〜５
℃に冷却した。

このタンパク実溶液を高速撹拌しながら、これに上でｉ
［ＱしたＮＨＳエステル１．２１６１Ｆの乾燥ＤＭＦ（
４０μｍ）中の溶液を２０分間かけて添加した（Ｎ　Ｈ
Ｓエステルの添加中に溶液のｐＨは痕跡量の固体Ｎ　ａ
ｘ　ＣＯｓの添加により８．０に保持した）、添加完了
後、混合物を室温で１．５時間撹拌し、次に２ＮＮ　Ｈ
２０Ｈ’（ｐＨ８，ＩＣｌｍＦＪｍＮｄヲ加え、混合物
を低温室で更に１時間撹拌した０反応混合物を遠心分離
機にかけ、上澄み液をセファデックス（Ｓｅｐｌ＋ａｄ
ｅｘ）Ｇ　　２５のカラムに通して、ｐｌ（８，０の０
．０５Ｍリン酸緩衝液を使用して精製した。移動速度が
より速い複合体は、吸光のλ＋ａａｘが５２１〜５２２
ｎＩ１１で、発光のλ＃Ａａｘが５３７〜５３８ｎｍで
あることが見出された。この複合体の色素／タンパク質
比はＵＶ計算に基いて７．５６であることが判明した。

一般に、下記の反応工程の全工程において化合物の露光
を避けるように特に注意を払った。

Ａ、Ｔ３（１ｇ）を乾燥メチルアルコール（１５ｍｆｆ
ｉ）に懸濁させ、塩化水素ガスの緩慢な流れをこの懸濁
液に２０分間通した。透明な溶液が得られた。

Ｒｏｔｏｖａｐで室温において溶媒を除去し、残渣の白
色固体を真空乾燥して、そのまま使用した。

Ｂ、トリエチルアミン（１００μｍ）を含有する乾燥Ｄ
ＭＦ（１ｍｌ’）巾の上記エステル（７ｏ＋＊ｙ）の混
ご物に、参考例２の生成物のＮＨＳエステル（７０ｍｇ
から上記の方法にしたがってＦＩ製したもの）を加え、
この溶液を１晩撹拌した。ＤＭＦを真空除去し、残渣を
希塩酸で処理して黄色の固体を析出させ、これを炉別し
、水洗し、真空乾燥した。そのＴＬＣ（ＴＨＦ　：ＣＨ
ｚＣ１ｘ＝４０　：６０）は、その主スポットが１個で
あることを示した。

この生成物を１６プレート（２０Ｘ　２０ｃｒｓ）およ
び上記の溶媒系を使用した調製用ＴＬＣにより精製した
。主スポットをメタノールで溶出させ、メタノールを除
去して約４０ｍｇを得た。

Ｃ０上記生成物（３０ｍｇ）のＩＮ　　ＮａＯＨ＜２＋
ｍｌ）中の溶液を室温で２時間撹拌した。この溶液を希
塩酸で酸性化し、析出した黄色固体を炉別し、乾燥した
。この酸を更に２１１製用Ｔ　Ｌ　Ｃ（ＣＨ２Ｃ１２：
ＭｅＯＨ：Ａｃ０）１＝７５：２５：１）で精製し、生
成物をシリカゲルからメタノールで溶出させた。メタノ
ールを除去した後、残渣をＩＮ　　Ｎａ○１（に溶解し
、溶液をｒ過し、希塩酸で酸性化した。析出した黄色沈
殿をア別し、水洗し、１晩６５℃で真空乾燥して、目的
とする酸生成物（１３＋ｎｇ）を得た。その０．０５Ｍ
リン酸１１％液中でのＵＶスペクトルは吸光のλ＋５ａ
ｘ＝　５１９　ｎｍ、発光のλｍａｘ＝５３３〜５３４
ｎ論であった。

Ｄ、関連出願の米国特許出願連続番号。

０１７．８７４号明細書（１９７９，３，３出願）に記
載のようにしてＢＨＰ活性化デキストラン７０（シグマ
社）からアミノデキストランを調製した。

すなわち、ＢＨＰ活性化デキストラン７０　（５００ｖ
１ｇ）を緩衝液（０，１５Ｍ　　Ｎ　Ｈ、ＯＨと０．１
ＭＮａＨＣＯｚ−ＮａｉＣＯｚ、ｐＨ９，０）１０ｔｄ
と共に室温で１晩撹拌した。β−メルカプトエタノール
（７０μｍ）を加え一撹拌を室温で１０時間続けた。

週末にかけて室温で水に対して透析すると、透析後の全
体績は約１４ＴＭｌ（約５００＋ａｇのデキストラン７
０を含有）になった。

Ｅ、上記のＣで得た酸１０ｍｇを、Ｄ　ＣＣ（９Ｂ）と
ＮＨ９（５ｍｙ）を含有する乾燥ＴＨＦ（１＋ａｌ）に
とかし、この溶液を１晩撹拌した。白色の固体が析出し
た。濾過後、Ｐ液を真空濃縮した。残渣をＩＩ−ヘキサ
ン（１０＋ｔｌｊりで冷浸し、黄色固体（約２０Ｂ）を
分離した。ＴＨＦ：Ｃ１−ｈｃｊ！ｚ（１：１）中での
ＴＬＣ検査によると、この黄色固体は殆んどがＮ　Ｉ−
Ｉ　Ｓエステル（Ｒ大）で、少量の出発物質（Ｒｒ小）
が共存することが示された。

Ｆ、上で製造したアミノデキストラン溶液（３００μｆ
）を０．Ｉ　Ｎ　　ＮａＨＣＯｓ　　ＮａｔＣＯｓ溶液
（ｐＨ９，０）　３００μ！で希釈し、これにＥで調製
したＮ　ＩＩ　Ｓエステル０．５鴫２のＴ　ＨＦ　２５
μ！中の溶液を加えた。得られた溶液を室温で１．５時
間撹拌した。この溶液に３Ｎ　　ＮＨ，○Ｈ浴溶液ｐＨ
８，０）０．３Ｉｌｌｊ！を加え、混合物を室温で４５
分間撹拌した。

２分間の遠心分ＭＩ＆、上澄み液をセファデックスＧ−
２５のカラム（Ｉ　Ｘ　３０ｃＩ１１）で０．ｌＮＮａ
１ｌＣＯ＊　　Ｎ　　ＮａｚＣＯｔ緩１液（ｐＨ９，０
）を使用して精製した。移動がより速い複合体を捕集し
た（クロマトグラフ後の複合体溶液の全量は約２ｍ１）
、その吸光のλｍａｘ＝５２１〜５２２ｎｍで、発光の
λｍａｘ＝　５３７〜５３８ｎｍであった。量子収率は
参考例２の基本フルオレセイン誘導体に比較して４３％
であった（共に５００ｎｍで励起したときの発光ピーク
面積に基づいて）。

Ａ１反応フラスコで、４−メチルレソルシノール１．３
５ｇ、無水トリメリット酸１ｇおよびＺ　ｎＣ１２１０
０ｍｇを混合し、この混合物を１９５〜２００℃に１５
分間加熱した。得られた固体を水で冷浸し、濾過した。

この沈殿を５％ＮａＯＨに溶解し、５分間撹拌、濾過し
、ｒ液を希塩酸でｐＨ２に酸性化した。析出した固体を
取得後、メタノールから再結晶して、橙赤色の固体、融
点〉２８０℃を得た。

Ｂ、上記生成物の一部をＤＭＦに溶解し、氷酢酸中の２
．２当量の塩素を加えた０反応がもはや起らなくなるよ
うに思われた後、生成物を単離し、ＣＨＣ１＊：ＭｅＯ
Ｈ（８０：　２０　＞を使用した調製用ＴＬＣ″′Ｃ″
精製した。

反応フラスコに４−（２°−カルボキシエチル）レソル
シノール１．１ｆ、無水フタルＭ０．４５ｙおよびＺｎ
Ｃｌ２２５０ｍｆを入れ、この混合物を１６０〜１７０
℃に０．５時間加熱した。水で処理して沢過した後、得
られた固体を５％ＮａＯＨに溶解し、この溶液を１５分
間撹拌し、濾過し、ｒ液を希塩酸でｐＨ２に酸性化し、
析出した黄色固体をＰ別し、乾燥した。生成物を酢酸エ
チルで冷浸し、更に調製用Ｔ　Ｌ　Ｃ（ＣＨＣｌｓ：Ｍ
ｅｏ　Ｈ：氷Ａｃ０Ｈ＝８０：２０：０．５）で調製し
た。

二も乙へＩＬ 前記と同様の方法により、反応フラスコに４−（３°−
カルボキシプロピル）レソルシノール２．６ｇ、３．５
．６−ドリクロロー１，２．４−ベンゼントリカルボン
ｉｉ！　１．９５ｇおよびＺｎＣＮ２１００ｒｇｙを入
れ、この混合物を１８０〜１８５℃に４０分間加熱した
。混合物を前述と同様に処理し、ｆｉｆ＆のＦｌ製用Ｔ
ＬＣによる生成物の精製をＣＨＣｉ５：　Ｍ　ｅｏ　Ｈ
：Ａｃ０Ｈ＝８０：２０：１を使用して行った。

次の表は、各参考例で得られたケイ光化合物の分光学的
性質を示す。

１１及 吸光　　発光 １１色−λｊｌａＸ’　　Ａ　＋ａａｘ　　εＸ　１０
’　　Ｗｌ　　　　５１６　　５３１　　７０．５　　
　７６２　　　５１８　　５３２−３　７２．０　　　
７０３＾　　　５００　　５１８−９　６７．３　　　
９２４　　　５００−１　５２１−２　７０．０　　　
８８５　　　５１９　　５３５　　６９．０　　　６４
１、　０．０５Ｍリン酸桜街液（・ｐｌ−１８，０）中
での測定値。

２、　０．０５Ｍリン酸緩衝液中で４７５　ｕ＃ｌで励
起して１ｌｌｑ定した発光ピークに基づくフルオレセイ
ンとの比較。

前出の参考例から、本発明の前駆体化合物が多くの望ま
しい性質を有することは明らかである。

これらの１ヒな物は５００１１Ｍまたはこれより長波長
で吸光し、ストークスシフトが大きく、その分光学的性
質はタンパク質に複合化（結合）することにより悪影響
を受けない。

トリクロロ酸無水物（Ｉ［［）の代わりにコハク酸無水
物を使用した以外は実施例１と同様な方法により、上記
の化合物を製造した。該化合物の吸光λ―ｎｘは約４９
４ｎ＋ａであり、発光λｗａｘは約５１２＋１輪であっ
た。

１１匠Ｌ ２７−ジメ　ルー４５−ジメ　ルー９−　ルトリクロロ
酸無水物（ＩＩＩ）の代わりにコハク酸無水物を使用し
、適切に置換したレソルシノールを使用した以外は実施
例１と同様な方法により、上記の化合物を製造した。該
化合物の吸光λｍｎ×は約５０９ｎｍであり、発光λｍ
ａには約５２６ｎｍであった。

え１匠ｌ え： 卆−ム　の−・血 ジメチルポルムアミド中でパラジウム（０）触媒存在下
で、５−ヨーｌ；−２°、３°−ジデオキシウリジンを
Ｎ−トリフルオロアセチルプロパルギルアミンに結合さ
せることにより、上記複合体を製造した。得られたヌク
レオシド誘導体を、その５°−三ＩＭ塩体に変換し、脱
アシル化して５（３−アミノ−１−プロピニル）−２°
、３゛−ジデオキシウリジン三燐酸塩を得た。このアミ
ンは上記複合体−サルコシンの０−アシル保護体と結合
されたものであり、次いで脱保護像化した。得られた生
成物は、約５３８ｎｍの発光λ−ａ×であった。

式−： を　　　　る　　ム　　の、　・金 相、当するアデノシンを使用する以外は、実施例１０で
記載したと同様な方法で上記の複合体を製造した。

参考例１と同様の方法により標記の化合物を得た。吸光
λｍａには５１３ｎｍであり、発光λｗａｘは５２９〜
５３１旧倫であった。

参考ＩＭ２の化合物をブロム化することにより、上記の
化合物を得た。該化合物の吸光λ−ｆｉＸは５３２−５
３３０Ｉ１１であり、発光λｗａｘは５４７〜５５０ｎ
ｍであった。

実施例１の方法に従って、参考例２の化合物を、ＢＳＡ
に結合させた。得られた生成物の吸光λ醜ａｘは５２２
〜５２４ｎ論であった。

本発明の有用性を更に実証するために、本発明の範囲内
の化合物をゲイ光前駆体化合物として使用して免疫分析
を行った。この分析は免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）に関
するものであった。この分析を行うための試薬類の調製
において下記の溶液を使用した。

緩衝液：０．０１Ｍ　　Ｎａ、ＨＰＯ４，０，１５Ｍ　
　ＮａＣ１゜２％Ｐ　Ｅ　Ｇ　　６０００．０．０５％
Ｎ　ａ　Ｎ　ｓ　。

ｐＨ８，Ｏ； 試薬Ｂ希釈剤：　　０．０５Ｍ　　）リズマベース（ｔ
ｒｉｚｍａｂａｓｅ）　、０．０２Ｍグリシン、０．０
１Ｍベンズアミジン−ＨＣｌ。

０．１５Ｍ　　　ＮａＣｆｆ１，０．０５％　Ｎ　ａ　
Ｎ　ｓ　。

ｐＨ８，０゜ 試薬Ａ希釈剤、０．０５Ｍ　　トリズマベース、１％胆
汁酸塩、０．ＯＩＭ　　ベンズアミジン−ＨＣ１，０，
０５％　ＮａＮ３．ｐＨ８，０；検定剤希釈剤：　　０
．ＯＩＭ　　ＮａｚＨＰ　Ｏ４，０，１５ＭＮａＣｆ、
０．０１Ｍベンズアミジン−ＨＣ１，ｏ、０１％　Ｎａ
Ｎ　３．ｐＨ７，２゜試薬Ａは、ローダミン−抗（ｈＩ
ｇＧ）複合体（ローダミン／タンパク質の比は１１）を
試薬Ａ希釈層で１：３０まで希釈したものである。試薬
Ｂは２．７−シメチルー９−（２°、５°、６°−トリ
クロロ−３°または４°−カルボキサミドグリシン−４
°または３′−カルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ
−３Ｈ−キサンチン−３−オンとｈＩｇＧとの複合体（
ケイ光体／タンパク質の比は約２）を試薬Ｂ希釈剤で１
　：２６．７まで希釈したものである。

検定剤はフレオン−硫酸デキストラン処理した血清を検
定剤希釈剤で希釈して得たものであるが、ただし２４　
ｗａｇ／ｐａｌ検定剤は未希釈の血清を使用している。

負（ネガチブ）検定剤は分析用ｗＩｉｔｔ液である。

分析は、Ｖａｒｉａｎ　　Ｆ　Ｉｕｏｒｉｃｌ＋ｒｏ−
ゲイ光計（改造）を使用して２５℃で行い、ゲインとし
てはケイ光体自体の３．８Ｘ１０−”Ｍ濃度の標準溶液
を使用して１６００に設定されたゲイ光信号を用いた。

分析は、検定剤または試料１６μｌを分析用線Ｆｆ！液
４００μ！で希釈したものに試薬ＡおよびＢ各５０μｌ
を加え、更に４００μｌの分析用緩衝液を加えることに
より行った。５秒後に、ケイ光の変化を６秒間にわたっ
て測定して、ケイ光の変化速度（変化率）を求めた。

０、１．６．５．６．１１．２．１７．６および２４．
０Ｂ／ｍｊ！の各１＋ＩｇＧ濃度を利用して種型曲線を
ＦＩ製した。

次いで、多数の試料（検体）を使用してｂＩｇＧ濃度を
測定し、−ｍに利用されているＲＩＤまたは比濁法によ
る結果と比較した１次の表にその結果を示す。

箪ＡＵ− 相関　標準 肛暫夾−１良ＬＪＪＪＬ　肥　乳漿　１（ＲＩＤ　　　
５０　　−０．１２　１，１２　０．９７　１．４９比
濁法１　　２５　　　３．８７　０．７２　０，９１　
１．７６比濁法２　１２　　　３．２５　０．５９　０
．９６　０．６５上の結果から明らかなように、本発明
の複合体を使用した分析法と他の一最に利用されている
分析法の間に確固たる関係が存在する。即ち、相関係数
の欄かられかるように、本発明の複合体を使用した分析
法は、ＲＩＤ法（０，９７）及び比濁法（０，９１及び
０．９６）と非常に良い相関を示し、本発明の複合体を
使用した分析法が非常にすぐれていること分示す、２種
類の比濁法の結果に明らかなずれがあるが、これは恐ら
く各方法でそれ自体の評価法を採用したことに起因しよ
う。

本発明は、長波長で吸光が起り、吸光係数が高く、吸収
帯およびケイ光帯が急峻で、吸収帯とゲイ光帯の間が実
質的に離間しているという重要な分光学的性質を有する
新規前駆体化合物及びその′Ｆ！１．９体を提供する。

このような性質は、ケイ先決の発展および多様な物質の
検出にとって特に望ましく重要である。

以上に本発明を詳述したが、本発明の範囲を逸脱せずに
成る種の変更・修正が可能であることは当然である。

特許出願人　　サイバー・カンパニー

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．　式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｅ＾ｂは水素、クロロ、ブロモ又はＣ＿１＿〜
   ＿３アルキル基であり； Ｒ＾２はＣ＿１＿〜＿３のアルキレン基であり；Ｄ＿２
   は水素又はカルボキシル基であり；そしてＬψは、 （ｉ）　式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ｛式中、Ｅ＾２はクロロであり、Ｚ＾２はカルボキシル
   基であり、ｗ＾２はＹ＾２への直接結合又はカルボキサ
   ミドアルキレン基（該アルキレン基はＣ＿１〜＿２であ
   る。）であり、Ｙ＾２は水素又はカルボキシル基であり
   、ｍ＾２は０〜３であり、そしてｘ＾２は０〜４である
   。但し、Ｄ＾２及びＹ＾２のうちの一つはカルボキシル
   基である。｝又は （ｉｉ）　Ｌは、Ｃ＿１〜＿６のアルキレン基であり、
   そしてψはカルボキシル基である。］を有する化合物と
   ； 上記式のＤ＾２、Ｙ＾２又はψを介して結合されている
   リガンド、受容体又は担体或いはこれらの組合せと； から構成される複合体。
2. ２．　リガンドが分子量約２０００〜６００，０００の
   ポリアミノ酸である、特許請求の範囲第１項記載の複合
   体。
3. ３．　担体が多糖類である特許請求の範囲第１項記載の
   複合体。
4. ４．　リガンドが分子量約２０００までのハプテンであ
   る、特許請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の複合
   体。
5. ５．　リガンドがヌクレオシド又はヌクレオチドである
   、特許請求の範囲第１項記載の複合体。
6. ６．　タンパク質結合ケイ光分析を実施する方法におい
   て、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｅ＾ｂは水素、クロロ、ブロモ又はＣ＿１＿〜
   ＿３アルキル基であり； Ｒ＾２はＣ＿１＿〜＿３のアルキレン基であり；Ｄ＾２
   は水素又はカルボキシル基であり；そしてＬψは、 （ｉ）　式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ｛式中、Ｅ＾２はクロロであり、Ｚ＾２はカルボキシル
   基であり、Ｗ＾２はＹ＾２への直接結合又はカルボキサ
   ミドアルキレン基（該アルキレン基はＣ＿１＿〜＿２で
   ある。）であり、Ｙ＾２は水素又はカルボキシル基であ
   り、ｍ＾２は０〜３であり、そしてｘ＾２は０〜４であ
   る。但し、Ｄ＿２及びＹ＿２のうちの一つはカルボキシ
   ル基である。｝又は （ｉｉ）　Ｌは、Ｃ＿１＿〜＿６アルキレンの基であり
   、そしてψはカルボキシル基である。］を有する化合物
   と； 上記式のＤ＾２，Ｙ＾２又はψを介して結合されている
   リガンド、受容体又は担体或いはこれらの組合せと； から構成される複合体をケイ光試薬として使用すること
   を含む、前記分析方法。