JPH01309700A - 第１０３因子の動態測定のための方法および該測定のための手段を含むキツト - Google Patents
第１０３因子の動態測定のための方法および該測定のための手段を含むキツトInfo
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- JPH01309700A JPH01309700A JP1085879A JP8587989A JPH01309700A JP H01309700 A JPH01309700 A JP H01309700A JP 1085879 A JP1085879 A JP 1085879A JP 8587989 A JP8587989 A JP 8587989A JP H01309700 A JPH01309700 A JP H01309700A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
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- G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血液凝固東回１因子の定性および定ｍｌ的測定
のための方法および該測定のため手段を含むキットに関
する。
のための方法および該測定のため手段を含むキットに関
する。
第雇因子は血漿（ｐｌａｓｍａ ）中をプロ酵素として
循環しそして必要とされる時にトロンビンにより活性化
されるトランスグルタミナーゼである。更に血漿板や胎
盤も第刈１活性を示す。画用因子の生化学的作用は、水
素結合を介して会合するフィブリンモノマーを架橋させ
てその結果不溶性フィブリンクロットを生じさせること
より成る。フィブリン安定化作用のほか、第Ｘ■因子は
クロッ）Ｋ生長する線維芽細胞の発達速度を増大させる
ことから、ｆＩＪ傷治癒上大変重要である。
循環しそして必要とされる時にトロンビンにより活性化
されるトランスグルタミナーゼである。更に血漿板や胎
盤も第刈１活性を示す。画用因子の生化学的作用は、水
素結合を介して会合するフィブリンモノマーを架橋させ
てその結果不溶性フィブリンクロットを生じさせること
より成る。フィブリン安定化作用のほか、第Ｘ■因子は
クロッ）Ｋ生長する線維芽細胞の発達速度を増大させる
ことから、ｆＩＪ傷治癒上大変重要である。
東側因子の臨床上の意義の故に、この凝固因子の測定は
極めて重要である。定量的測定には本質的に次の方法が
用いられる：タンパク質、例えばカゼイン、へり放射性
標識基質の取り込み、クロットの溶解度／不溶度の測定
；電気免疫拡散およびクロット形成の際のアンモニア含
量の測定。これら検出方法に伴う欠点は、時間がかかり
、あるいは、操作が簡便でない点である。
極めて重要である。定量的測定には本質的に次の方法が
用いられる：タンパク質、例えばカゼイン、へり放射性
標識基質の取り込み、クロットの溶解度／不溶度の測定
；電気免疫拡散およびクロット形成の際のアンモニア含
量の測定。これら検出方法に伴う欠点は、時間がかかり
、あるいは、操作が簡便でない点である。
そこで本発明の目的は、より簡便でより迅速な第澗因子
（Ｆ ＸＩＩＩ ）測定の方法および該測定のための手
段を含むキットを提供することにある。
（Ｆ ＸＩＩＩ ）測定の方法および該測定のための手
段を含むキットを提供することにある。
Ａｎａｌｙｔｉｏａｌ Ｂｉｏｏｈｅｍｉｓｔｒｙ
１ ４４、１ ６５−１７１（１９８５）Ｋは、基質
がＨａｍｍｅｒｓｔｅｎ”カゼインであるフイプリノゲ
ンが除かれていない血漿中ノＦｘＩＩＮヲクリシルーゾ
ロリルアルギニループロリンを添加して測定することが
開示されている。
１ ４４、１ ６５−１７１（１９８５）Ｋは、基質
がＨａｍｍｅｒｓｔｅｎ”カゼインであるフイプリノゲ
ンが除かれていない血漿中ノＦｘＩＩＮヲクリシルーゾ
ロリルアルギニループロリンを添加して測定することが
開示されている。
選択された検出方法は、３Ｈ−プトレッシンの取込みで
あった。
あった。
Ｃ！１ｉｎｉｏａｌ Ｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ ３１．３５
−４０（１９８５）には、基質カゼイン／エチルアミン
およびアンモニア試薬ＮＡＤＨ／ＧＬＤＨ／ケトグルタ
レートを用いてＦＸ［Ｉにより触媒されるアンモニア発
生を測定することが開示されている。
−４０（１９８５）には、基質カゼイン／エチルアミン
およびアンモニア試薬ＮＡＤＨ／ＧＬＤＨ／ケトグルタ
レートを用いてＦＸ［Ｉにより触媒されるアンモニア発
生を測定することが開示されている。
我々は驚くべきことに、血漿中のＰ″）０１１の測定は
、Ｆ■■基質としてのグルタミン含有ペプチドをフィブ
リン重合阻害剤と組合せて使用し、そして次にＮＡＤ）
（依存反応を行うことにより、形成されるアンモニアを
介してＦＸ［Ｉを測定することＫより改良され優ること
を見出した。
、Ｆ■■基質としてのグルタミン含有ペプチドをフィブ
リン重合阻害剤と組合せて使用し、そして次にＮＡＤ）
（依存反応を行うことにより、形成されるアンモニアを
介してＦＸ［Ｉを測定することＫより改良され優ること
を見出した。
第１図は光学密度の変化率（ＯＤ／時間）を検体中の第
Ｘｎｌ因子の金遣の関数として示したものである。検体
中の異なる濃度のＦ Ｘｌｎは、異なる規定された量の
血漿およびＦＸＩ’ｎ欠乏血漿を混合することにより作
った。
Ｘｎｌ因子の金遣の関数として示したものである。検体
中の異なる濃度のＦ Ｘｌｎは、異なる規定された量の
血漿およびＦＸＩ’ｎ欠乏血漿を混合することにより作
った。
従って、本発明は、検体とフィブリン凝集阻害剤、例え
ばＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ 、の存在下にトロ
ンビンで活性化し、そして第琲因子の基質、第１級アミ
ン、そして必要な場合には緩衝物質の溶液とインキュベ
ートし、そして形成されるアンモニアをＮＡＤＨ，ＧＬ
ＤＨおよびケトグルタレートを用いて測定し、そして前
記ＦＸＩＩＩの基質をグルタミン含有ペプチドとするこ
とより成るＦＸ［ＩＩ含有検体、例えば血漿、中の第雇
因子の測定方法に関する。
ばＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ 、の存在下にトロ
ンビンで活性化し、そして第琲因子の基質、第１級アミ
ン、そして必要な場合には緩衝物質の溶液とインキュベ
ートし、そして形成されるアンモニアをＮＡＤＨ，ＧＬ
ＤＨおよびケトグルタレートを用いて測定し、そして前
記ＦＸＩＩＩの基質をグルタミン含有ペプチドとするこ
とより成るＦＸ［ＩＩ含有検体、例えば血漿、中の第雇
因子の測定方法に関する。
未処理検体、例えば血漿、は（必要な場合には緩衝溶液
を用いて調製された）トロンビン溶液で直接に予め活性
化しておき、そしてこれによって生じる活性化された第
■因子を、次のＮＡＤ）（−依存測定を用いて測定する
。アッセイ混合物中のフイプリノゲンの干渉作用は、フ
ィブリンモノマーの凝集を防げる物質、例えばＧｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＰｒｏまたはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 、を添加することにより補償される
。フィブリン凝集阻害剤としてはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏを用いるのが好ましい。
を用いて調製された）トロンビン溶液で直接に予め活性
化しておき、そしてこれによって生じる活性化された第
■因子を、次のＮＡＤ）（−依存測定を用いて測定する
。アッセイ混合物中のフイプリノゲンの干渉作用は、フ
ィブリンモノマーの凝集を防げる物質、例えばＧｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＰｒｏまたはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 、を添加することにより補償される
。フィブリン凝集阻害剤としてはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏを用いるのが好ましい。
ＦＸＩＩＩの本漬としては、Ｘ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｎ−８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌｙ
アミドまたはＸ −Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−
８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌ＊ｕ−Ｇｌｙアミド（式中
Ｘはプロトン、天然アミノ酸または相当するＤアミノ酸
またはこれらアミノ酸により形成されるジはプチドであ
る）なる配列、より選択される低分子量グルタミン含有
ペプチド、好ましくはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−８ｏｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１＊−
Ｃ）ｌｙアミド、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｎ−８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌ
ｙ−アミド、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ −８ｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１＊−Ｇｌｙアミド、より好ま
しくはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−８ｓ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｓ−Ｇｌｙが用いられる。
ｙ−Ｇｌｎ−８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌｙ
アミドまたはＸ −Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−
８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌ＊ｕ−Ｇｌｙアミド（式中
Ｘはプロトン、天然アミノ酸または相当するＤアミノ酸
またはこれらアミノ酸により形成されるジはプチドであ
る）なる配列、より選択される低分子量グルタミン含有
ペプチド、好ましくはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−８ｏｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１＊−
Ｃ）ｌｙアミド、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｎ−８＠ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌ
ｙ−アミド、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ −８ｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１＊−Ｇｌｙアミド、より好ま
しくはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−８ｓ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｓ−Ｇｌｙが用いられる。
この方法によればＦＸ［ＩＩ含有溶液中のＦＸｍを正確
かつ迅速に測定することができる。アッセイ手順は好ま
しくは次のステップを含むニー供試検体を容器に入れる
。
かつ迅速に測定することができる。アッセイ手順は好ま
しくは次のステップを含むニー供試検体を容器に入れる
。
−（必要な場合には、緩衝溶液に溶解した）フィブリン
凝集阻害剤を添加する。
凝集阻害剤を添加する。
−トロンビンを添加し、そして混合物を３〜１０分間イ
ンキュベートする。
ンキュベートする。
一アンモニア発生を、好ましくはＮＡＤＨ５ＧＬＤＨ。
ケトグルタレート、アミンおよび基質の系により、測定
する。
する。
この測定法はほんの僅な検体量しか必要としない。ＦＸ
［ｌＩ測測定好ましくは１−キュベツト中、６７℃で行
われ、また使用検体量は２５〜２００μｔ１特に好まし
くは５０μｔである。
［ｌＩ測測定好ましくは１−キュベツト中、６７℃で行
われ、また使用検体量は２５〜２００μｔ１特に好まし
くは５０μｔである。
ＦＸＩＩＩはＣａイオン含有溶液中、フィブリン凝集阻
害剤の存在下にトロンビンを添加することにより活性化
される。このために、２５００工Ｕ／ｌ〜２００００
Ｉ Ｕ／ｌ 、好ましくは７０００ＩＵ／４゜トロンビ
ンを好ましくは、１０ｍＭ〜７５ ｍＭ ｓ好ましくは
３０ｍＭ 、 ＨＥＰｇＳ 、そして７５ｍＭ〜２００
ｍＭ、好ましくは１００ ｍＭ 、 ＮａＣ２である緩
衝液に溶解する。この緩衝剤は２０ｍＭ〜２００ｍＭ１
好ましくは６０鮨、のＣａイオン濃度、および２、５
ｍＭ 〜５０ ｍＭ ％好ましくは１７ｍＭのチオール
濃度、好ましくはジチオトレイトール濃度を有する。フ
ィブリン凝集阻害剤、好ましくはＧＩＹ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ 、はこの緩衝剤に０．５ ｍＭ−２０ｍＭ
。
害剤の存在下にトロンビンを添加することにより活性化
される。このために、２５００工Ｕ／ｌ〜２００００
Ｉ Ｕ／ｌ 、好ましくは７０００ＩＵ／４゜トロンビ
ンを好ましくは、１０ｍＭ〜７５ ｍＭ ｓ好ましくは
３０ｍＭ 、 ＨＥＰｇＳ 、そして７５ｍＭ〜２００
ｍＭ、好ましくは１００ ｍＭ 、 ＮａＣ２である緩
衝液に溶解する。この緩衝剤は２０ｍＭ〜２００ｍＭ１
好ましくは６０鮨、のＣａイオン濃度、および２、５
ｍＭ 〜５０ ｍＭ ％好ましくは１７ｍＭのチオール
濃度、好ましくはジチオトレイトール濃度を有する。フ
ィブリン凝集阻害剤、好ましくはＧＩＹ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ 、はこの緩衝剤に０．５ ｍＭ−２０ｍＭ
。
好ましくは１．５ｍＭ、の濃度で添加しておき、またｐ
Ｈは塩酸または水酸化ナトリウム溶液で７．０〜８．２
、好ましくは７．６に調整しておく。１００μｔ１好ま
しくは１５Ｃ１ｐｔのこの緩衝剤を検体に添加し、そし
てその混合物を５〜１０分間、好ましくは５分間、イン
キュベートする。
Ｈは塩酸または水酸化ナトリウム溶液で７．０〜８．２
、好ましくは７．６に調整しておく。１００μｔ１好ま
しくは１５Ｃ１ｐｔのこの緩衝剤を検体に添加し、そし
てその混合物を５〜１０分間、好ましくは５分間、イン
キュベートする。
第■因子の活性時間経過後、検出試薬を、好ましくは調
整済溶液として、添加する。各々の場合に、キュベツト
中の全溶液を１ｍとする。
整済溶液として、添加する。各々の場合に、キュベツト
中の全溶液を１ｍとする。
検出試薬の調整済溶液は、α−ケトゲルタレ−） （１
ｍＭ 〜２０ｍＭ、好ましくは７ｍＭ）およびＮＡＤＨ
（０，０５ｍＭ 〜０．５ｍＭ 、好ましくは０．１２
５ｍＭ）、およびＧＬＤＨ（５００１Ｕ／ｌ〜６０００
工Ｕ／４．好ましくは３０００ＩＵ／ｌ）および基質と
アミンを含有する。適切な場合には、この溶液は更に緩
衝物質、好ましくはトリエタノールアミンを２０〜２０
０ｍＭ、特に好ましくは１００ｍＭの濃度で含有する。
ｍＭ 〜２０ｍＭ、好ましくは７ｍＭ）およびＮＡＤＨ
（０，０５ｍＭ 〜０．５ｍＭ 、好ましくは０．１２
５ｍＭ）、およびＧＬＤＨ（５００１Ｕ／ｌ〜６０００
工Ｕ／４．好ましくは３０００ＩＵ／ｌ）および基質と
アミンを含有する。適切な場合には、この溶液は更に緩
衝物質、好ましくはトリエタノールアミンを２０〜２０
０ｍＭ、特に好ましくは１００ｍＭの濃度で含有する。
使用される基質は前述の如くグルタミン含有ペプチドで
あり、前述のアッセイ混合物に選択される最終はプチド
濃度は、アッセイ混合物１ｄあたり０．２〜５ｎ！、好
ましくは１■、の範囲である。
あり、前述のアッセイ混合物に選択される最終はプチド
濃度は、アッセイ混合物１ｄあたり０．２〜５ｎ！、好
ましくは１■、の範囲である。
第１アミンはアミンとして有利であることが判明してい
るところ、これらにはエタノールアミン、プトレッシン
、カダベリン、ジアミノエタンおよびアミノエタン、好
ましくはグリシンエチルエステルまたはグリシンメチル
エステル、などの物質が包含される。これらのアミンは
好ましくは基質と共に検出試薬の調整済溶液中に取り込
まれるが、使用アミン濃度は５ｍＭ〜７５ｍＭ ｚ好ま
しくは２５ｍＭである。
るところ、これらにはエタノールアミン、プトレッシン
、カダベリン、ジアミノエタンおよびアミノエタン、好
ましくはグリシンエチルエステルまたはグリシンメチル
エステル、などの物質が包含される。これらのアミンは
好ましくは基質と共に検出試薬の調整済溶液中に取り込
まれるが、使用アミン濃度は５ｍＭ〜７５ｍＭ ｚ好ま
しくは２５ｍＭである。
検出試薬溶液のｐＨは塩酸で１２〜８．５、好ましくは
８．０に調整される。
８．０に調整される。
その時に生じる６４０±１５ｎｍにおける光学密度の単
位時間あたりの変化はＦＸＩＩＩ活性の直接的測定値と
して役立つ。
位時間あたりの変化はＦＸＩＩＩ活性の直接的測定値と
して役立つ。
本発明は更に、フイプリノゲン凝集阻害剤およびＦＸ［
ＩＩの基質としてのグルタミン含有ペプチド、および必
要な場合には、ＦｘＩＩＩ測定方法に必要な他の試薬、
を含有する該方法に用いられる成分を含むキットにも関
する。
ＩＩの基質としてのグルタミン含有ペプチド、および必
要な場合には、ＦｘＩＩＩ測定方法に必要な他の試薬、
を含有する該方法に用いられる成分を含むキットにも関
する。
以下の実施例はこれを更に詳述するものである：
実施例 １
溶液人の調製：
次の物質を１００−の水に溶解したニア９３ηの Ｉ
ＨＥＰＢＢ、 ５８４岬の塩化ナトリウム、８８２岬の
ＣａＣｌ２．６７’ＦのＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ 、 ２５７１Ｗのジチオトレイトール、および６６
６ ＩＵのトロンビン。そのｐＨを水酸化ナトリウムで
７．６に調節したＯ 溶液Ｎの調製： 次の物質を１００−の水に溶解した： １０ｑのＮＡＤ
Ｈｓ １５５岬のニナトリウムα−ケトグルタレート
、２１６単位のＧＬＤＨ１３７５■の塩酸グリシンエチ
ルエステル、１２５ＷｆのＬ＊ｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｎ−８ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌ
ｙアミド、および２．３９の塩酸トリエタノールアミン
。そのｐＨを水酸化ナトリウムで８．０に調整した。
ＨＥＰＢＢ、 ５８４岬の塩化ナトリウム、８８２岬の
ＣａＣｌ２．６７’ＦのＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ 、 ２５７１Ｗのジチオトレイトール、および６６
６ ＩＵのトロンビン。そのｐＨを水酸化ナトリウムで
７．６に調節したＯ 溶液Ｎの調製： 次の物質を１００−の水に溶解した： １０ｑのＮＡＤ
Ｈｓ １５５岬のニナトリウムα−ケトグルタレート
、２１６単位のＧＬＤＨ１３７５■の塩酸グリシンエチ
ルエステル、１２５ＷｆのＬ＊ｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｎ−８ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｇｌ
ｙアミド、および２．３９の塩酸トリエタノールアミン
。そのｐＨを水酸化ナトリウムで８．０に調整した。
アッセイ手順：
５０ ｐｔの標準ヒト血漿（Ｆ ＸＩＩＩ １ 単位／
ｍｔ）ヲピペットで１ｇ１ｔ容測定キユベツト（光路１
ｃＭ）（入れそして３７℃で１５０μｔの溶液Ａとイ
ンキュベートした。５分間経過後、８００μｔの浴液Ｎ
を添加し、そして３３４ ｎｍでの吸光度変化を測定し
そしてペンレコーダーに記絶した。測定は５分間続けた
。光学密度は０．０１５／分の変化を示した。
ｍｔ）ヲピペットで１ｇ１ｔ容測定キユベツト（光路１
ｃＭ）（入れそして３７℃で１５０μｔの溶液Ａとイ
ンキュベートした。５分間経過後、８００μｔの浴液Ｎ
を添加し、そして３３４ ｎｍでの吸光度変化を測定し
そしてペンレコーダーに記絶した。測定は５分間続けた
。光学密度は０．０１５／分の変化を示した。
実施例 ２
溶液人およびＮの調製については実施例１参照。
１００／Ｊｔ（７）ＦＸＩＩＩ欠乏血漿を３７℃で５分
間１５０μｔの溶液人と共にインキュベートした。７５
０μｔの溶液Ｎを添加し、次いでその活性を３３４ ｎ
ｍで測定した。次いで８０μｔのＦＸ［［Ｉ欠乏血漿を
２０μｔの標準ヒト血漿と共に同じ方法で測定した。６
０μｔの欠乏血漿７４０μｔの標準血漿、４０ｐＬの欠
乏血漿／６０μｔの標準血漿、８０μｔの標準血漿７２
０μｔの欠乏血漿、および１００μｔの標準血漿という
組合せについても同様とした。
間１５０μｔの溶液人と共にインキュベートした。７５
０μｔの溶液Ｎを添加し、次いでその活性を３３４ ｎ
ｍで測定した。次いで８０μｔのＦＸ［［Ｉ欠乏血漿を
２０μｔの標準ヒト血漿と共に同じ方法で測定した。６
０μｔの欠乏血漿７４０μｔの標準血漿、４０ｐＬの欠
乏血漿／６０μｔの標準血漿、８０μｔの標準血漿７２
０μｔの欠乏血漿、および１００μｔの標準血漿という
組合せについても同様とした。
測定値は図面から明らかとなる。
省略形
ＮＡＤＨニコケンアミドアデニンジヌクレオチド（還元
型） ＧＬＤＨグルタミンデヒドロゲナーゼ ｎｍ ナノメーター Ｇｌｙ グリシン Ｐｒｏ Ｌ−プロリン Ａｒｇ Ｌ−アルギニン Ｌ・ｎＬ−ロイシン Ｇｌｎ Ｌ−グルタミン ８ｅｒ Ｌ−セリン ＬｙｓＬ−リジン Ｖａｌ Ｌ−バリン エ１・ Ｌ−イソロイシン Ｈｇｐｇｓ ２− （４−（２−ヒドロキシエチル）−
１−ピはラジノ）エタンスルホン酸 Ｃａ カルシウム 鮨 ミリモル／Ｌ
型） ＧＬＤＨグルタミンデヒドロゲナーゼ ｎｍ ナノメーター Ｇｌｙ グリシン Ｐｒｏ Ｌ−プロリン Ａｒｇ Ｌ−アルギニン Ｌ・ｎＬ−ロイシン Ｇｌｎ Ｌ−グルタミン ８ｅｒ Ｌ−セリン ＬｙｓＬ−リジン Ｖａｌ Ｌ−バリン エ１・ Ｌ−イソロイシン Ｈｇｐｇｓ ２− （４−（２−ヒドロキシエチル）−
１−ピはラジノ）エタンスルホン酸 Ｃａ カルシウム 鮨 ミリモル／Ｌ
添付図面は、本発明方法の一測定例における光学密度の
変化率（ＯＤ／時間）を検体中の第Ｘ■因子の含量の関
数として示したものである。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
変化率（ＯＤ／時間）を検体中の第Ｘ■因子の含量の関
数として示したものである。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）検体をフィブリン凝集阻害剤、例えばＧｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、の存在下にトロンビンで活性化し
、そして第ＸIII因子の基質、第１級アミン、そして必
要な場合には緩衝物質の溶液とインキュベートし、そし
て形成されるアンモニアをＮＡＤＨ、ＧＬＤＨおよびケ
トグルタレートを用いて測定し、そして前記ＦＸIIIの
基質をグルタミン含有ペプチドとすることより成るＦＸ
III含有検体、例えば血漿、中の第ＸIII因子の測定方法
。 ２）２５００ＩＵ／ｌ〜２００００ＩＵ／ｌ）好ましく
は好ましくは３０ｍＭ、のＨＥＰＥＳおよび７５ｍＭ〜
２００ｍＭ、好ましくは１００ｍＭ、のＮａＣｌを含有
するＨＥＰＥＳ／塩化ナトリウム緩衝剤に溶解して用い
る請求項１記載の方法。 ３）Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏがフィブリン凝集
阻害剤として用いられる請求項１記載の方法。 ４）低分子量グルタミン含有ペプチド、好ましくはＸ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖ
ａｌ−Ｉｌｅ−ＧｌｙアミドまたはＸ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｎ−
Ｇｌｙアミド（式中Ｘはプロトン、天然アミノ酸または
相当するＤ−アミノ酸、またはこれらのアミノ酸により
形成されるジペプチドである）、好ましくはＬｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙアミド、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖ
ａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙアミド、またはＧｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇ
ｌｙアミド、より好ましくはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇ
ｌｙアミドがＦＸIIIの基質として用いられる請求項１
記載の方法。 ５）１ｍＭ〜２０ｍＭα−ケトグルタレート、０．０５
ｍＭ〜０．５ｍＭＮＡＤＨおよび５００ＩＵ／ｌ〜６０
００ＩＵ／ｌＧＬＤＨが用いられる請求項１記載の方法
。 ６）好ましいものとして用いられるアミンがエタノール
アミン、プトレツシン、カダベリン、ジアミノエタンま
たはアミノエタン、好ましくはグリシンエチルまたはメ
チルエステルである請求項１記載の方法。 ７）同じ条件下に、ＦＸIIIがＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−
Ｇｌｙアミドと同様のまたはそれよりも高い速度でアン
モニアを脱離するグルタミン含有ペプチドの第ＸIII測
定方法への使用。 ８）フィブリン凝集阻害剤と、同じ条件下にＦＸIIIに
よりＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ
−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙアミドと同様のまた
はそれよりも高い速度で転化されるグルタミン含有ペプ
チドを含有する第ＸIII因子検出用手段を含むキット。
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