JPH0133776B2 - - Google Patents

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JPH0133776B2
JPH0133776B2 JP57149356A JP14935682A JPH0133776B2 JP H0133776 B2 JPH0133776 B2 JP H0133776B2 JP 57149356 A JP57149356 A JP 57149356A JP 14935682 A JP14935682 A JP 14935682A JP H0133776 B2 JPH0133776 B2 JP H0133776B2
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Kurooze Jiikumaaru
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Publication of JPH0133776B2 publication Critical patent/JPH0133776B2/ja
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は試料溶液を少なくとも１種の試薬と混
合し、かつ恒温保持し、かつ反応混合物中のパラ
メータを測定することにより分析測定を実施する
ための方法およびこの方法に好適な装置に関す
る。
好適な不活性キヤリヤ材料上の乾燥試薬を使用
することは分析すべき物質の定性または定量検出
に使用することのできる化学反応の実施で以前か
ら公知の手段である。例えば西ドイツ国特許出願
公開第2332760号、西ドイツ国特許出願公開第
2717817号、ヨーロツパ特許出願公開第0014797
号、西ドイツ国特許出願公開第2752352号、西ド
イツ国出願公開第2927345号明細書が挙げられる。
これらの方法は溶液で存在する試料を試薬キヤリ
ヤに加えることで共通している。試料は装入位置
から毛管力の作用下にキヤリヤ中に拡散する。
途中で試薬は完全にまたは部分的に溶け、こう
して形成された試薬／試料溶液は最終的に測定ゾ
ーンに達するまで更に移動し、測定ゾーンで色の
濃さの変化を光学的に測定する。測定ゾーンは試
薬キヤリヤの各成分の総和である。
ところで例えば西ドイツ国特許出願公開第
2927345号明細書から分るように拡散過程が制御
されずに経過し、かつ一般に不透明な層から成る
試薬キヤリヤ上で直接光線の反射率を測定する方
法は由々しき問題を提出する。繊維材料はマイク
ロ範囲内で液体の異なる拡散速度をもたらす不規
則性を有し、最適であるよりも高いか低い試薬濃
度を有するゾーンが生じる。例えばヨーロツパ特
許出願公開第0014797号明細書に、キヤリヤ材料
中の“エアポケツト”が付加的な困難をもたらす
こと、かつ毛管力によつて生じる液体流を“制
御”しなければならないとの結論が述べられてい
る。
２番目の主要な欠点は反射率の測定自体にあ
る：透過光測光とは異なりこの場合には吸光物質
の濃度と吸光度の間に直線的な関係がない。多少
著しくカーブした検量線が得られ、この曲線には
表面特性も著しく含まれる。この点に根本的な欠
点を見ることができ、この欠点は分析的評価方法
の再現性に著しくマイナスの影響を与える。その
上に形成される、または減少する濁りに関する
（濁り測定法）試験を基本的には実施することが
できない。しかしこれらの試験は免疫法およびま
た例えばリパーゼ測定のような酵素測定では広範
囲に使用されている信頼性の高い方法である。
この種の分析要素のもう１つの欠点は、多段階
反応で異なる反応相を分析要素の別個の層へ所定
通りには向けることができないことにある。すな
わち後続の反応の開始時点が溶液の一定ではない
拡散速度に左右される。
層状配置自体にも欠点がある、それというのも
安定性に対して不利な影響を与え得る、試薬の接
触面が比較的大きいからである。かかる試薬を互
いに厳密に離して試薬キヤリヤに配置するのが有
利であろう。
以上のことから最大の正確性および再現性を有
する分析結果を達成する意味で前記の欠点を回避
する必要があることは明らかである、それという
のもこれらの欠点は試薬キヤリヤから構成されて
いる“分析要素”の使用範囲に比較的狭い制限を
与えるからである。
しかし利用者の目からは、かかる試験実施方法
は試験溶液を作る必要がなく、試薬のピペツト装
入が省略され、溶液で常に不安定な試薬に伴なう
安定性の問題が生じない等のために取扱いがきわ
めて簡単である点では有利である。
本発明の課題はこれらの利点を維持し、同時に
前記の欠点を除くことである。
この課題は本発明により試料溶液を装入位置か
ら測定位置に搬送して試料溶液を少なくとも１種
の試薬と混合し、かつ恒温保持し、かつ反応混合
物中のパラメータを測定することにより分析測定
を実施するための方法により解決され、該方法は
試料溶液を先ず可溶性の乾燥試薬にこの試薬を少
なくとも一部溶解させながら搬送し、次いで更に
測定位置に搬送し、かつこの搬送を２種類の力に
よつて実施し、その際搬送を搬送区間の少なくと
も一部では第一の力としての溶液に作用する表面
張力によつて行ない、この第一の力に搬送速度ま
たは搬送方向の制御のために第二の力として遠心
力および／または圧縮力を重ね、この第二の力を
調節すべき液体の搬送状態に応じて第一の力より
も大きくするかまたは小さくすることより成る。
この新規方法は前記の試薬キヤリヤ技術の利点
と常用の湿式化学的方法の厳密性および誤りの無
さとを結合する。
これにより分析すべき試料溶液（一般に水で希
釈）を供給位置で装入し、ここから測定位置まで
の途中で試料溶液に乾燥試薬のキヤリヤ１個以上
を貫流させ、その際試薬を全部または部分的に溶
解させることが達成される。貫流は推進的な表面
張力に流れを促進し、抑制しまたは停止させるこ
とのできる第二の力を重ねることにより流動速
度、したがつて流動時間の厳密な制御下に行なわ
れる。流路の終点で液体は試薬キヤリヤとは同一
でない測定位置に達し、ここで反応シグナル、有
利に光学的透過が測定される。
その際試薬としては一方でキヤリヤ材料から全
部または部分的に溶け出るもの、例えば緩衝物
質、塩、酵素またはその基質、他方でキヤリヤ材
料に吸着的にまたは共有結合で結合され、次いで
ここで“固相反応”が生起し得るもの、例えばイ
オン交換体、キヤリヤに結合される、生物学的に
活性の物質、例えば酵素、抗体または抗原等が挙
げられる。
反応シグナルの測定には既述の光学的透過の他
に例えば測定位置の実施形に応じて電極電位、導
電性、螢光線も好適である。
以下添付図面につき本発明を詳説する。
重ねられる力（K2）によつて本発明には主と
して２つの構成形があり、その際推進力（K1）
はそれぞれ表面張力もしくは毛管力である。
第１の構成形ではK2は遠心力である。
この分析系では例えばポリスチレン、プレキシ
ガラス、ポリウレタン等製プラスチツク成形体並
びに試薬を含浸させた吸収性キヤリヤ材料または
他の小さな試薬を充填させた中空体（例えばプラ
スチツク成形体中の表面構造）から成り、プラス
チツク成形体中に挿入される試薬キヤリヤフイー
ルドおよび閉鎖シートから成る、遠心分析ロータ
用の交換可能な挿入要素が遠心装置のロータに液
体を移動させる毛管力を遠心力によつて制御し得
るようにして挿入されている。そのために種々の
回転数、したがつて遠心力を調節し得ることが必
要である。
本発明はこの実施形における分析経過を第１ａ
図および第１ｂ図について詳説する。第１ａ図は
本発明で好適な挿入要素の断面側面図であり、第
１ｂ図はその平面図である。
第２図は第１図の挿入要素が例えば西ドイツ国
特許出願公開第3044372号明細書に記載されたよ
うな好適なロータに図面には示されていない固定
部材によつて装着された所の略示図である。
第１ａ図に示されるようにプラスチツク成形体
中に試料装入室３１が設けられ、この室は種種の
試薬フイールド−３２と結合している。各試
薬フイールドは特定の試薬を含浸させた、吸収性
キヤリヤ片、例えば紙またはフリース片から成
る。３３および３３ａは混合弁およびであ
り、３４は測定位置（キユベツト）を示す。３５
はプラスチツク基体を示し、３６は閉鎖シートを
示し、これによつて試料装入室、試薬フイール
ド、混合弁および測定位置が覆われる。
本発明による方法の実施を第１図および第２図
につき詳説する。
試料を試料装入室３１に入れる。次いで一定の
回転数U1を調節する。この回転数は試料をＲ
（試薬フイールド）３２に送るのに好適である。
接触が形成されると直後に毛管力が溶液を吸引す
る、すなわち溶液は試薬フイールド３２にわたつ
て搬送される。遠心力Z1が毛管力K1よりも小さ
な場合には溶液はフイールドの収容容積が装入さ
れた試料の容量よりも大きい限りフイールド３２
内に滞留する。条件Z1＜K1で溶液のＲ内の滞
留時間を厳密に決めることができる。遠心力を
Z2に高め、Z2＞K1になると、Ｒに存在する試
薬に富んだ溶液はこのフイールドを去り、試薬フ
イールドＲと接触する。ここで前記の過程が繰
返される。溶液はＲにわたつて分配される、す
なわち更に搬送される。前記の条件が同様に該当
する。
この過程は任意の回数で繰返すことができる
が、ここに記載された場合では試薬フイールド
〜が貫流される。もちろん挿入要素は他の形状
であつてもよく、またより多い、またはより少な
い試薬フイールドを有していてもよい。Koおよ
びZoの力は実質的に任意に選択可能であるが、特
にZoについてはＺの無段階調節により技術的にき
わめて容易に実施することができる。これにより
分析方法の実施はそのために必要な時間を出きる
限り短く保つ利点を得る。毛管力による溶液が抑
制されるにすぎない、すなわち溶液が停止せず、
力（Zo−Ko）によつて得られる速度で相応する
試薬フイールドを移動するように遠心力Ｚを選択
することが可能である。この過程が数秒または数
分の１秒で行なわれると、溶液の前方でより高い
試薬濃度が調節される、すなわち遠心力の方向に
溶液の容量にわたつて濃度増加が形成されること
は容易に可能である。
しかし必要により統一的な濃度比を調節するこ
とは規定された反応条件の維持に含まれる。かか
る不均質を取除くために本発明によればいわゆる
混合弁３３が設けられる。混合弁３３は遠心力の
方向に閉鎖された仕切り壁を有する。底部に試料
装入室から測定位置への流動方向と反対の方向に
下方に傾斜して配置された表面活性室、例えば毛
管が配置され、この室はその下端部で曲がつてお
り、かつ更に試薬フイールドに通じている。遠
心力Z3が底部毛管内の毛管力K3よりも大きい限
りは液体は仕切り壁に固定される。Z3をK3の値
よりも下回らせると、毛管が液体を混合室３３か
ら付属の毛管中に吸引し、その際前記の濃度勾配
が除かれ、かつ毛管力は液体を試薬フイールド
に送る。したがつて一般的に言えば混合弁３３の
毛管内の毛管力はＺ＜Ｋである場合には常に搬送
力として働く。
混合弁３３中の滞留時間は条件ZM＞KMの調節
により任意に選択可能である。搬送の条件は前記
の条件と全く逆である。
試薬フイールド〜および混合弁３３ａを
経過するその後の工程は改めて記載する必要がな
い、前記の工程から類推される。記載の実施形で
は混合弁３３ａは均質な溶液をキユベツト３４に
送るのに有用である。公知の遠心分析の実施形で
は混合が経費のかかる過程であり、例えば遠心装
置の強力な加速および減速により、または溶液を
空気で貫流させることにより行なわれる。これは
本発明によれば技術的に簡単な手段によつて省略
される。
第２の構成形ではK2は圧縮力である。
第３図、第４図および第５図にこの構成形に好
適な部材を使い捨て可能な分析要素の形状で示
す。
第３図はかかる要素の略示平面図であり、かつ
第４図は略示側面図である。好適な材料、例えば
プラスチツクから成る成形体８は試薬キヤリヤフ
イールド５，６，７を有し、これらはプラスチツ
ク成形体中に挿入されている。これらの試薬キヤ
リヤフイールドは弾性閉鎖シート１１によつて覆
われる。試料装入室９は吸収性、不活性の圧縮可
能な材料を含み、これは例えば無負荷状態で液体
15μを収容し、かつ圧縮された状態では例えば
液体2μが残る。成形体８内の膨出部は測定位
置もしくはキユベツト２１として用いられる。成
形体８はその上にオーバーフロー室１０および排
気孔１２を有する。
弁スリツト１，２，３，４は押し棒１７，１
８，１９，２０を収容するために用いられ、これ
らによつて各試薬キヤリヤフイールドは互いに分
離される。その上に押圧部材１３，１４，１５，
１６が設けられており、その底面積はそれぞれ試
薬キヤリヤの面積に相当し、かつ充填された試薬
フイールドを圧縮するために使用される（第５
図）。
本発明のこの構成形における方法の経過は以下
の通りである： シート１１を針で突き通して試料を装入室９に
入れる。室９内の不活性、吸収性のフリースが完
全に充填され、しかし溶液を放出しない量を注入
する。引続き例えば好適な制御装置によつて押圧
部材１３をフイールド９に押圧する、その結果液
体はこのフイールドを出、かつ毛管力によつてフ
イールド５に送られる。液体の付着を介して液体
は実質的に完全にフイールド５に送られる。引続
き押し棒１７（例えば同様に好適な機構を介して
制御され）を押圧して装入室９からフイールド５
を分離する。シート１１はその都度輪郭に適合
し、かつシール膜として働く。試料溶液は任意に
選択可能な期間フイールド５内に放置させること
ができる。もちろん通常フイールド内に存在する
乾燥試薬は数秒内に溶解する。
次の工程で押圧部材１４をフイールド５に押圧
する、その結果液体はこのフイールドを去り、か
つフイールド６の毛管吸収作用を介してフイール
ド６に搬送される。次いで押し棒１８を押しつけ
る、そのためにフイールド５との接触が中断され
る。この場合にもフイールド６内の試薬を溶解分
離または溶解するための時間を任意に選択するこ
とができる（一般には数秒継続する過程である）。
毛管力による液体搬送の際および試薬フイール
ドに流入する際に濃度勾配が形成された場合、こ
れはフイールド７に搬送する前に混合過程を入れ
ることにより除くことができる。押し棒１９を押
圧し、押し棒１８および押圧部材１４を持ち上
げ、かつ押圧部材１５を押圧することにより液体
をフイールド５に戻す。押圧部材１５を上げ、か
つ押圧部材１４を押圧して液体を再度フイールド
６に送る。場合によりこの前進後退移動を数度繰
返してもよい。その場合には最後に押圧部材１４
を押圧し、押し棒１８を押圧する状態を再度作
る。
フイールド６からフイールド７への液体の搬送
は押し棒を場合により上げた後同様にして押し棒
１８を押圧し、かつ押圧部材１５を押圧すること
により行なう。場合によりフイールド６とフイー
ルド７の間で混合過程を前記と同様にして押し棒
２０の利用下に繰返してもよい。
フイールド７内の試薬が溶けた後生成した溶液
を、次いで押し棒１９を押圧し、かつ押圧部材１
５を押圧することによりキユベツト２１中に押出
される。
次いで好適な方法を常法で十分に長い時間内で
吸光度の変化を測定する。この信号変化から同様
に常法で分析すべき物質の濃度を計算することが
できる。
方法に必要な第一もしくは第二の力の変化を実
施するために使用し得る手段は遠心力については
第一に回転数の変化であり、圧縮力については押
圧部材の運動にある。表面張力は表面形状による
他の表面活性剤の使用によつても制御もしくは変
更することができる。表面活性剤としてはポリオ
キシエチレン誘導体が優れているが、他の非イオ
ン性清浄剤、並びにアニオン性清浄剤、例えば胆
汁酸誘導体またはカチオン性清浄剤またはこれら
の混合物も使用できる。
本発明により実施可能な分析の例は西ドイツ国
特許出願公開第3044385号明細書に記載されてい
るものである。特にこの方法はグルコース、ビリ
ルビン、クリアチニン、アルブミン、卵白、鉄、
ヘモグロビン、尿素、尿酸、トリグリセリド、コ
レステリン、クロリド、カルシウム、ホスフエー
ト、γ−GT、アルカリ性ホスフエート、コレス
テリン、GOT、GPT、ラクタートデヒドロゲナ
ーゼ、酸性ホスフアターゼ、薬剤、ガン指示剤お
よび血液凝固因子の測定に好適であり、その際そ
れぞれこれらの測定に自体公知の試薬を使用する
ことができる。
以下実施例につき本発明を詳説する。
例 １ 第１図および第２図による挿入要素を使用して
グルコース測定 寸法６×６mmおよび厚さ0.3mmの濾紙に次の試
薬を施し、かつ第１図から見られるように挿入装
置内に配置する： リン酸ナトリウム緩衝液 630μｇ ２，４−ジクロルフエノールスルホン酸
466μｇ トルエン20（ソルビンアクロゴルラウレート）
50n マンニツト １mg ４−アミノアンチピリン 24μｇ GOD（E.C.1.1.3.4） 2200mU POD（E.C.1.11.1.7） 400mU ヒト血清試料を２度蒸溜した水で１：200で希
釈した。この希釈溶液から60μを試料装入室１
に入れた。
25℃で次のプログラムにしたがつて遠心した： １ 10秒 180rpm 第１フリースの湿潤 ２ 10秒 1500rpm 第１混合弁３３中で遠心 ３ 15秒 0rpm へ搬送 ４ 10秒 1500rpm 第２混合弁３３ａ中で遠心 ５ 15秒 0rpm 第２混合弁３３ａを空に ６ 10秒 150rpm キユベツト３４へ搬送 ７ ５秒 1500rpm 空気吹込みにより排出 ８ 225秒 360prm 500nｍで測定 吸光度の変化を経時的に測定し、かつ常用の
“フイツクスド−タイム−キネテイシエン法
（Fixed−time−Kinetischen Verfahen）”の１
つにより評価した。試料中のグルコースの未知の
濃度を１標準を用いてこの方法の検量によつて測
定した。公知の手による技法の１つの基礎である
比較方法との一致は第６図から認められるように
きわめて良好である。第６図は比較方法の結果を
横座標に、本発明による方法の結果を縦座標に示
したものである。
以下の例においても縦座標には本発明による方
法で得られた値を掲げる（略号：ZF）。
例 ２ アルカリ性ホスフアターゼを第１図および第２
図による挿入要素で測定した。
寸法６mm×６mmおよび厚さ0.3mmの濾紙に次の
試薬を施し、かつ第１図に見られるようにして配
置した： 炭酸ナトリウム緩衝液 1200μｇ アスパラギン酸マグネシウム 16μｇ 炭酸ナトリウム緩衝液 1200μｇ アスパラギン酸マグネシウム 16μｇ トリス−ｐ−ニトロフエニルホスフエート
313μｇ トリス 31μｇ ヒト血清試料を２度蒸溜した水で１：10で希釈
した。この希釈溶液から60μを試料装入室１に
入れた。
37℃で次のプログラムにしたがつて遠心した： １ 10秒 180rpm 第１フリースの湿潤 ２ 10秒 1500rpm 第１混合弁３３中で遠心 ３ 15秒 0rpm へ搬送 ４ 10秒 1500rpm 第２混合弁３３ａ中で遠心 ５ 15秒 0rpm 第２混合弁３３ａを空に ６ 10秒 150rpm キユベツト３４へ搬送 ７ ５秒 1500rpm 空気吹込みにより排出 ８ 225秒 360rpm 410nｍで測定 直後の勾配が測定すべき酵素の活性の基準であ
る常法の１つによつて記録された吸光度と時間の
相関関係を評価した。試料中のアルカリ性ホスフ
アターゼの未知の活性を１標準を用いてこの方法
の検量によつて測定した。公知の手による技法の
１つを基礎とする比較方法との関係は第７図から
認められるように良好である。
例 ３ 第１図および第２図の挿入要素を用いてビリル
ビン測定 寸法６×６mmおよび厚さ0.3mmの濾紙に次の試
薬を施し、かつ第１図から分るように配置した： ２，５−ジクロルフエニルジアゾニウム−ナ
フトールスルホネート 68μｇ セチルピリジニウムクロリド 1600μｇ 酒石酸 2400μｇ 含浸しない濾紙 血清試料を２度蒸溜した水で１：10で希釈し
た。この希釈溶液から各60μを試料装入室１に
入れた。
25℃で次のプログラムにしたがつて遠心した： １ 10秒 180rpm 第１フリースの湿潤 ２ 10秒 1500rpm 第１混合弁３３中で遠心 ３ 15秒 0rpm へ搬送 ４ 10秒 1500rpm 第２混合弁３３ａ中で遠心 ５ 15秒 0rpm 第２混合弁３３ａを空に ６ 10秒 150rpm キユベツト４へ搬送 ７ ５秒 1500rpm 空気吹込みにより排出 ８ 225秒 360rpm 550nｍで測定 記録された吸光度の時間との相関関係を常用の
“終点方法”の１つによつて評価した。試料中の
ビリルビンの未知の濃度を標準１種を用いてこの
方法の検量につき測定した。公知の手による技術
の１つを基礎とする比較方法との一致は第８図が
示すようにきわめて良好である。
例 ４ 第１図および第２図の挿入要素を用いてクレア
チンキナーゼ測定 寸法６×６mmおよび厚さ0.3mmの濾紙に次の試
薬を施し、かつ第１図に見られるようにして配置
した。
イミダゾール 424μｇ グルコース 240μｇ 塩化マグネシウム・6H2O 128μｇ EDTA−ナトリウム塩 47μｇ Ｎ−アセチルシステイン 250μｇ アデノシンモノホスフエート−ナトリウム塩
157μｇ アデノシンジホスフエート 54μｇ ジアデノシンペンタホスフエート−リチウム塩
0.6μｇ NADP−ナトリウム塩 110μｇ ヘキソキナーゼ（E.C.2.7.1.1.） 218mU グルコース−６−ホスフエート−デヒドロゲナ
ーゼ（E.C.1.1.1.49） 123ｍＵ クレアチンホスフエート−ナトリウム塩
615μｇ ヒト血清試料を２度蒸溜した水で１：25で希釈
した。この希釈溶液から60μを試料装入室１に
入れた。
37℃で次のプログラムにしたがつて遠心した： １ 10秒 180rpm 第１フリースの湿潤 ２ 10秒 1500rpm 第１混合弁３３中で遠心 ３ 15秒 0rpm へ搬送 ４ 10秒 1500rpm 第２混合弁３３ａ中で遠心 ５ 15秒 0rpm 第２混合弁３３ａを空に ６ 10秒 150rpm キユベツト４へ搬送 ７ ５秒 1500rpm 空気吹込みにより排出 ８ 225秒 360rpm 340nｍで測定 記録された吸光度と時間との相関関係の動力学
的測定の常法の１つにより評価し、試料中のクレ
アチンキナーゼの未知の活性を標準１種を用いて
の方法の検量により測定した。公知手による技法
を基礎とする比較方法との一致は第９図が示すよ
うにきわめて良好である。
例 ５ 第１図および第２図の挿入要素を用いたIgＧ測
定 寸法６×６mmおよび厚さ0.3mmの濾紙に次の試
薬を施し、かつ第１図に見えるようにして配置し
た（この例では２種の試薬キヤリヤ紙を同じ室に
入れた）。
リン酸水素ナトリウム・2H2O 620μｇ リン酸二水素カリウム 107μｇ ポリエチレングリコール6000 1570μｇ IgＧに対する抗体 （タイター＝16mg／ml） 285μｇ ヒト血清試料を２度蒸溜した水で１：200で希
釈した。この希釈溶液から60μを試料装入室１
に入れた。
25℃で次のプログラムにしたがつて遠心した： １ 10秒 180rpm 第１フリースの湿潤 ２ 10秒 1500rpm 第１混合弁３３中で遠心 ３ 15秒 0rpm へ搬送 ４ 10秒 1500rpm 第２混合弁３３ａ中で遠心 ５ 15秒 0rpm 第２混合弁３３ａを空ける ６ 10秒 100rpm キユベツト３４へ搬送 ７ ５秒 1500rpm 空気吹込みによる排出 ８ 225秒 360rpm 340nｍで測定 記録された吸光度と時間との相関関係を動力学
的濁り試験の評価のための常法の１つにより評価
し、試料中のIgＧの未知濃度を異なる濃度の標準
３種を用いてこの方法の検量および検量線の作成
により測定した。第１０図が示すようにアボツト
社（Firma ABBOTT）の自動分析装置
“ABA100”への適合を基礎とする比較方法との
一致はきわめて良好である。
例 ６ 第３図による分析要素を用いてグルコース測定 寸法６×６×0.3mmの試薬のキヤリヤ紙を以下
のようにして製造する：例１の種々のキヤリヤ紙
と同様の物質量の1/4を含有する試薬溶液10μ
を前記寸法の紙に施す。溶液は完全に吸収され
る。引続き溶剤の水を凍結乾燥により紙から除
く。
３種の紙を例１と同じ順序で第３図の分析要素
の３つの位置に置く。
試料を２度蒸溜した水で１：200で希釈する。
希釈溶液15μを装入室９に装入する。次いでこ
の溶液を前記のようにして試薬キヤリヤ５に入れ
る。滞留時間：10秒。引続き溶液を５から６へ同
様に前記の方法で送る。滞留時間：10秒。同様に
して溶液を試薬キヤリヤ７に送る。滞留時間：５
秒。ここから溶液を押圧部材１６をゆつくりと押
圧することによりキユベツト２１に送る。この中
で公知方法で500nｍで吸光度を経時的に追求す
る。この曲線の経過から公知の“フイツクスド−
タイム−キネテイツシエン法”で標準１種で検量
により未知試料中のグルコース濃度を測定するこ
とができる。
濃度50、100、150、200、300および400mg／dl
（秤量により調節）の水溶液を調べた。再現精度
は98〜102％であつた。
例 ７ 第３図による要素を用いてアルカリ性ホスフア
ターゼ 寸法６×６×0.3mmの試薬キヤリヤ紙を以下の
ようにして製造する：例２の種々のキヤリヤ紙と
同じ物質量の厳密に1/4を含有する試薬溶液10μ
を前記寸法の紙に施す。溶液は完全に吸収され
る。引続き溶剤の水を凍結乾燥により紙から除
く。
２種の紙を例２と同じ順序で第３図による分析
要素の最初の２つの位置に置く。３番目の位置に
試薬を含まない紙を置く。
試料を再蒸溜水で１：10で希釈する。この希釈
溶液15μを装入室９に入れる。次いで溶液を前
記のようにして第１の試薬キヤリヤ５に送る。滞
留時間：10秒。引続き溶液を前記の方法で５から
６へ送る。滞留時間：10秒。同様にして溶液を空
のフリース７に送る。滞留時間：５秒。ここから
押圧部材１６をゆつくりと下げることにより溶液
をキユベツト２１に送る。この中で410nｍで吸
光度を経時的に追う。記録された直線の経過から
公知の動力学的測定方法を用いて１種の標準によ
る検量により未知試料中のアルカリ性ホスフアタ
ーゼの活性を測定することができる。
30〜600U／の活性を有する種々の対照血清
を調べた。再現精度は90〜110％であつた。
例 ８ 第３図による要素を用いてクレアチンキナーゼ
測定 寸法６×６×0.3mmの試薬キヤリヤ紙を以下の
ようにして製造する：例４の種々の紙と同様の物
質量の厳密に1/4を含む試薬溶液10μを前記寸
法の紙に施す。溶液は完全に吸収される。引続き
溶剤の水を凍結乾燥により紙から除去する。
２つの紙を例４と同じ順序で第３図の分析要素
の最初の２つの位置に置いた。３番目の位置に試
薬を含まない同じ種類の紙を置いた。
試料を再蒸溜水で１：25で希釈した。この希釈
溶液15μを装入室９に入れた。次いで溶液を前
記の方法で第１の試薬キヤリヤ５に送つた。滞留
時間：10秒。引続き同様に前記の方法で溶液を５
から６へ送つた。滞留時間：10秒。同様にして溶
液をフイールド７に移動させた。滞留時間：５
秒。ここから押圧部材１６をゆつくりと下げるこ
とにより溶液をキユベツト２１に送つた。この中
で公知方法で340nｍで吸光度を経時的に求めた。
曲線の初期相の後このフアクターの直線経過が得
られた。この部分から動力学的方法のための公知
の評価方法を用いて標準１種での検量により未知
試料中のクレアチンキナーゼの活性を測定した。
種々のヒト血清試料に活性５〜800U／が得
られるようにして精製した酵素を加えた。比較値
を手による測定によつて得た。この手により得ら
れた値に対する再現精度は92〜110％であつた。
【図面の簡単な説明】
第１ａ図は本発明による挿入要素の一実施形の
断面側面図であり、第１ｂ図はその平面図であ
り、第２図はロータ上の第１ａ図および第１ｂ図
による挿入要素の略示図であり、第３図は本発明
による分析要素の一実施形の略示平面図であり、
第４図および第５図はその略示側面図であり、か
つ第６図、第７図、第８図、第９図および第１０
図は本発明により得られた分析結果のグラフを示
した図である。 ９，３１……試料装入室、３２……試薬フイー
ルド、３３，３３ａ……混合弁、２１，３４……
測定室、８，３５……成形体、３６……閉鎖部
材、１，２，３，４……弁スリツト、５，６，７
……試薬キヤリヤフイールド、１０……オーバー
フロー室、１２……排気孔、１３，１４，１５，
１６……押圧部材、１７，１８，１９，２０……
押し棒。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 試料溶液を装入位置から測定位置に搬送して
    試料溶液を少なくとも１種の試薬と混合し、かつ
    恒温保持し、かつ反応混合物中のパラメータを測
    定することにより分析測定を実施するための方法
    において、試料溶液を先ず可溶性の乾燥試薬にこ
    の試薬を少なくとも一部溶解させながら搬送し、
    次いで更に測定位置に搬送し、かつこの搬送を２
    種類の力によつて実施し、その際搬送を搬送区間
    の少なくとも一部では第一の力としての溶液に作
    用する表面張力によつて行ない、この第一の力に
    搬送速度または搬送方向の制御のために第二の力
    として遠心力および／または圧縮力を重ね、この
    第二の力を調節すべき液体の搬送状態に応じて第
    一の力よりも大きくするかまたは小さくすること
    を特徴とする、分析測定を実施するための方法。 ２ 第一の物理的力を第二の物理的力の方向にお
    よび／またはその反対方向に作用させる、特許請
    求の範囲第１項記載の方法。 ３ 第一の物理的な力を表面形状および／または
    表面活性剤によつて制御する、特許請求の範囲第
    １項または第２項記載の方法。 ４ 第二の物理的な力の値を第一の物理的な力の
    値よりも数倍高くまたは数倍低く調節する、特許
    請求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記載
    の方法。 ５ 試薬／試料溶液混合物の恒温保持の間第一の
    物理的な力の値を上回る値に第二の物理的な力を
    調節する、特許請求の範囲第１項〜第４項のいず
    れか１項に記載の方法。 ６ 第二の物理的な力を遠心ロータの回転数の変
    化によつて増大させるかまたは低下させる、特許
    請求の範囲第２項〜第５項のいずれか１項に記載
    の方法。 ７ 試料溶液を先ず可溶性の乾燥試薬にこの試薬
    を少なくとも一部溶解させながら搬送し、次いで
    更に測定位置に搬送し、かつこの搬送を２種類の
    力によつて実施し、その際搬送を搬送区間の少な
    くとも一部では第一の力としての溶液に作用する
    表面張力によつて行ない、この第一の力に搬送速
    度または搬送方向の制御のために第二の力として
    遠心力を重ね、この第二の力を調節すべき液体の
    搬送状態に応じて第一の力よりも大きくするかま
    たは小さくすることにより試料溶液を装入位置か
    ら測定位置に搬送して試料溶液を少なくとも１種
    の試薬と混合し、かつ恒温保持し、かつ反応混合
    物中のパラメータを測定することにより分析測定
    を実施するためのロータ挿入要素において、それ
    ぞれ特定の試薬を含浸させた吸収性のキヤリヤ材
    料を包含する試薬フイールド３２多数と結合して
    いる試料装入室３１、少なくとも１個の混合弁室
    ３３，３３ａ、測定室３４および室およびフイー
    ルドを閉鎖するための部材３６を備えた成形体３
    ５から形成されることを特徴とする、分析測定を
    実施するためのロータ挿入要素。 ８ 試料溶液を先ず可溶性の乾燥試薬にこの試薬
    を少なくとも一部溶解させながら搬送し、次いで
    更に測定位置に搬送し、かつこの搬送を２種類の
    力によつて実施し、その際搬送を搬送区間の少な
    くとも一部では第一の力としての溶液に作用する
    表面張力によつて行ない、この第一の力に搬送速
    度または搬送方向の制御のために第二の力として
    圧縮力を重ね、この第二の力を調節すべき液体の
    搬送状態に応じて第一の力よりも大きくするかま
    たは小さくすることにより試料溶液を装入位置か
    ら測定位置に搬送して試料溶液を少なくとも１種
    の試薬と混合し、かつ恒温保持し、かつ反応混合
    物中のパラメータを測定することにより分析測定
    を実施するための分析要素において、吸収性、不
    活性の圧縮可能な材料が存在する試料装入室９、
    それぞれ特定の試薬を含浸させた、吸収性の圧縮
    可能なキヤリヤ材料を包含する多数の試薬キヤリ
    ヤフイールド５，６，７、測定室２１、オーバー
    フロー室１０および排気孔１２並びに各試薬キヤ
    リヤフイールド５，６，７間、並びに試料装入室
    ９との間に配置された弁スリツト１，２，３，４
    を備えた成形体８、並びに弁スリツト１，２，
    ３，４の中を移動可能に配置された押し棒１７，
    １８，１９，２０並びに互いに独立に試料装入室
    ９および試薬キヤリヤフイールド５，６，７に対
    して一定の圧縮力を及ぼし得るようにして配置さ
    れた多数の押圧部材１３，１４，１５，１６から
    成ることを特徴とする、分析測定を実施するため
    の分析要素。
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