JPH0135640B2

JPH0135640B2 -

Info

Publication number: JPH0135640B2
Application number: JP25460784A
Authority: JP
Inventors: Naoya Kasai; Hisaharu Shima
Original assignee: Daisoo Kk
Current assignee: Daisoo Kk
Priority date: 1984-11-30
Filing date: 1984-11-30
Publication date: 1989-07-26
Also published as: JPS61132196A

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野）本発明はラセミ体より微生物による光学活性な
Ｓ−（−）−２，３−ジクロロ−１−プロパノール
の分取法に関する。（従来技術）２，３−ジクロロ−１−プロパノール（以下、
本化合物をβ−DCHと略称する）は下記構造式
（）にて表される物質であり、その構造異性体
である１，３−ジクロロ−２−プロパノール（下
記構造式（））と共にエピクロルヒドリン（下
記構造式（））の原料として知られている。ま
たエピクロルヒドリンと共に各種の医薬、農薬等
のの中間原料として重要なものである。

【式】

【式】しかしながら、このβ−DCHは合成法によつ
てつくられるために光学的に不活性なラセミ体で
ある。さて、そのβ−DCHより、光学活性体を分離
する方法の１つとしては、β−DCHの水酸基を
無水酢酸によりアセチル化せしめ、１−アセトキ
シ−２，３−ジクロロプロパンとした後、リパー
ゼを作用させる方法が知られている。しかしこの
ような他の誘導体を経ずにラセミ体β−DCHよ
り直接光学活性なβ−DCHを製造する方法は知
られていない。（発明の目的）本発明はラセミ体β−DCHを他の誘導体を経
ずに直接微生物に資化させて、光学活性なβ−
DCHを分取することを目的とする。（発明の構成）本発明はすなわちＲ−（＋）−２，３−ジクロロ
−１−プロパノール資化能を有するシユードモナ
ス属に属する細菌、又はその培養細菌体を、培地
でラセミ体２，３−ジクロロプロパノールと作用
せしめてＳ−（−）−２，３−ジクロロ−１−プロ
パノールを分取することを特徴とする微生物処理
による光学活性なジクロロプロパノールの製法で
ある。本発明者らが土壌中より分離採取して本発明に
おいて用いた微生物の菌学的性質は表１に示すと
おりである。

【表】

【表】 (5) デンプン − −
以上の結果をもとにバージエイズ・マニユア
ル・オブ・デターミネイテイブ・バクテリオロジ
イ（Bargey′s Manual of Determinative
Bacteriology）第８版の記載に基づき帰層同定
を行うと本菌はシユードモナス属の特徴を有す
る。以下、本発明者らは本菌をシユードモナス
Psedomonas OS−Ｋ−29（微工研菌寄第7846
号；FERM Ｐ−7846）と命名した。本発明ではラセミ体β−DCHに、この微生物
を接触させてＳ−（−）−β−DCHを分取するが、
体的にはラセミ体β−DCHを炭素源とし、無機
態窒素（各種のアンモニア塩、硝酸塩）を窒素と
しその無機塩類を含む合成培地中で上記細菌を培
養するか、又は上記細菌をブイヨン培地あるいは
加糖ブイヨン培地等、炭素源、窒素源、有機栄養
源、無機栄養源を含む通常よく用いられる栄養培
地中で培養せしめ、よく生育させておき、これか
ら得る菌体をラセミ体β−DCHを含有する培地
中で作用させた後、Ｓ−（−）−β−DCHを分取
すればよい。炭素源としてはグルコース、シユクロース、グ
リセリン等の炭水化物、あるいはクエン酸、マレ
イン酸、リンゴ酸等の有機酸及びその塩類を、窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の
無機態窒素、及び尿素、ペプトン、カゼイン、酵
母エキス、肉エキス等の有機態窒素を用いること
ができる。その他の無機塩類としてはリン酸塩、
マグネシウム塩、カリ塩、マンガン塩、鉄塩、亜
鉛塩、銅塩等が用いられる。本菌の培養は、慣用の方法で行うことができ
る。通常、温度約20〜40℃、好ましくは25〜37
℃、PH約６〜９、好ましくはPH6.5〜7.5で振盪あ
るいは通気撹拌等の手段により好気的に行われ
る。本発明で用いる微生物とラセミ体β−DCHを
触させるときのラセミ体β−DCHの濃度は培地
中約0.2容量％以下であればよく、その接触時間
は通常２日〜10日である。培養了後、培養液をとり出し遠心分離して微生
物菌体と上清液とに分離し、上清液中のβ−
DCHを活性炭カラム処理、エーテル抽出、減圧
蒸留等の操作によつて分収する。以下実施例により説明する。実施例中％は特に
記さない限り重量％を表わす。実施例１ラセミ体β−DCHを唯一の炭素源とした培地、
すなわちラセミ体β−DCH 0.2容量％硫安 0.05％硝安 0.05％りん酸水素第２カリウム 0.1％りん酸水素第２ナトリウム 0.1％りん酸水素第１ナトリウム 0.2％硫酸マグネシウム 0.05％硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン微量 PH 6.5 を含む培地100mlを有する10個の坂口フラスコ
（500ml容）に本菌OS−Ｋ−29株の傾斜寒天培地
から１白金耳づつ植菌を行い、30℃で振盪培養を
３〜５日間実施する。次に上記組成の培地20を
入れた25容培養器（ジヤーフアメンター）に上
記前培養分を加え、以下の条件下で３〜５日間通
気撹拌培養した。温度30℃ PH 初発6.5 通気量 20／min 回転数 300rpm 培養終了後、培養液を取り出し、遠心分離機を用
いて微生物菌体とその上清液とに分離し、この中
に残存するβ−DCHを活性炭カラム処理、エー
テル抽出、減圧蒸留によつて油状物質として6.6
ｇ採取した。本物質の同定は次の方式で行つた。 (1) ガスクロマトグラフイーによる同定。カラム
担体PEG−20MP、５％、60〜80メツシユを用
いて市販β−DCHと比較した結果、その保持
時間は全く同じであつた。純度98.2％以上。 (2) IR（赤外吸収スペクトル）による同定。第１
図に示したチヤートのように、その吸収パター
ンは市販β−DCHと全く同一であつた。以上から本物質は明らかにβ−DCHである事
が判明した。又本物質がＳ−（−）−β−DCHで
ある事の確認は以下の方法によつた。 (1) 旋光度の測定。市販β−DCH及び本物質の旋光度は次の如
くである。市販β−DCH 〔α〕²⁰ _D＝0.0 Ｃ＝１、アセト
ン〔α〕²⁰ _D＝0.0 Ｃ＝１、ジクロロメタン本物質〔α〕²⁰ _D＝＋3.5 Ｃ＝１、アセトン〔α〕²⁰ _D＝−12.0 Ｃ＝１、ジクロロメタン (2) Ｒ−（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロ
メチルフエニルアセテートエステルの調整なら
びに高速液体クロマトグラフイーによる分析。Ｒ−（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロ
メチルフエニルアセテートクロライドを市販β
−DCHならびに本物質に反応せしめ、そのエ
ステル誘導体を調整した後、液体クロマトグラ
フイーでの分析結果は次のようであつた。分析条件カラム担体 ZORBAXODS 4.6mm×25Cｍ
（Du Pont社製）溶出液メタノール：水＝65：35（Ｖ／Ｖ）溶出量１ml／min 検出法 260nｍにおける吸光度分析結果市販β−DCH 保持時間50.5分及び52.0分に同
一面積をもつ２つのピークを与えた。本物質保持時間50.5分にのみピークを与え
52.0分にはピークを与えなかつた。 (3) ジジクロロプロピル−Ｎ−フエニルカルバメ
ートの調整及びその旋光度。市販β−DCH、及び本物質１ｇとフエニル
イソシアネート0.9ｇを乾燥アセトン30ml、ト
リエチルアミン0.3mlに加え、約３時間加熱還
流し、そのジクロロプロピル−Ｎ−フエニルカ
ルバメートを調整した後、その比旋光度を測定
した。市販β−DCH 〔α〕²⁵ _D＝0.0 Ｃ＝１、メタノ
ール本物質〔α〕²⁵ _D＝−16.4 Ｃ＝１、メタノール以上の結果から本物質は、Ｓ−（−）−β−
DCHであり、その光学純度は99％以上である
ことが判つた。実施例２肉エキス1.0％、ポリペプトン1.0％、グルコー
ス0.5％、PH７なる培地100mlを有する５個の坂口
フラスコ（500ml容）を常法どおり、加熱蒸気減
菌後、本菌OS−Ｋ−29株の傾斜寒天培地から菌
株を１白金耳ずつ接種する。各々のフラスコは30
℃下で48時間往復振盪培養（200rpm）を行う。次に上記組成の培地20を30容ジヤーフアメ
ンターに入れ、常法どおり加圧蒸気減菌後、各々
のフラスコで生育せしめた微生物菌体を無菌的に
接種せしめ、次の条件下で48時間培養する。温度30℃ PH 初発PH7.0 通気量 20／min 回転数 300rpm 培養の終了した培養液は遠心分離機にて微生物
菌体と上清液とに分離し、上清液は廃棄する。残
つた微生物菌体は50ｍＭりん酸緩衝液PH6.5にて
３回〜４回洗浄し洗浄菌体を得る。次にこの洗浄
菌体を実施例１で示したラセミ体β−DCHを含
有する培地20に懸濁させ、次の条件下に持す
る。温度30℃ 通気量 20／min 回転数 300rpm PH 5.5（炭酸カルシウムを20ｇ加えて保持する）洗浄菌体を培地に加えてから48時間、上記の様
に通気撹拌培養し、再び遠心分離機にて微生物菌
体と上清液とに分離した。上清液からのβ−
DCHの分離は実施例１と同様にし、β−DCH7.0
ｇを得た。このβ−DCHは、実施例１に示した
ように各種の分析を行なつた結果、光学純度99％
以上のＳ−（−）−β−DCHであつた。（発明の効果）本発明にによれば土壌中より分離した新菌種を
利用して直接２，３−ジクロロ−１−プロパノー
ルの光学活性化を行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１により得られたＳ−（−）−
２，３−ジクロロ−１−プロパノールおよび市販
品の同物質の赤外線吸収スペクトルである。 −・−市販β−DCH、−実施例１。

Claims

【特許請求の範囲】

１Ｒ−（＋）−２，３−ジクロロ−１−プロパノ
ール資化能を有するシユードモナス属に属する細
菌、又はその培養菌体を、培地でラセミ体２，３
−ジクロル−１−プロパノールと作用せしめてＳ
−（−）−２，３−ジクロロ−１−プロパノールを
分取することを特徴とする微生物処理による光学
活性なジクロロプロパノールの製法。