JPH0136588B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、所要の成分を水溶液中で混合し、こ
の溶液を凍結乾燥しかつ凍結乾燥物を水性媒体で
還元することにより、低混濁性の標準−またはコ
ントロール血漿を製造する方法に関する。 コントロール−または標準血漿として、種々の
関連する血漿成分の含量が正確に調節された、人
または動物に由来する天然の血漿および血漿類似
の合成組成物が挙げられ、これら血漿成分は、血
漿成分の測定法の検定またはコントロールに特定
されている。 人−および動物血漿ないしは、血漿またはプラ
ズマから誘導された類似種類の組成物を、コント
ロール−および標準血漿の製造に使用することは
公知である。同じく、臨床的に重要なパラメータ
（基質、電解質、酵素、ホルモン）の濃度ないし
は活性度を所望の価へ調節することは公知である
（Proc.Royal Soc.Med.第68巻（1975年）624〜
629頁）。 酵素、ビリルビン、リポプロテイン、ホルモン
等のような鋭敏な物質を含有するコントロール−
ないしは標準血漿は、保存上の理由から急速冷凍
するかまたは、凍結乾燥後に冷蔵庫温度で貯蔵さ
れなければならない。 凍結乾燥の工程により、若干の成分の溶解度が
低減せしめられ、その結果還元せるサンプル中に
混濁が生じる、とりわけこの混濁は、コントロー
ル−または標準血漿が大きい脂質濃度を有する場
合に生じる。 コントロール−ないしは標準血漿中の混濁が極
めて不利であることは当業者に公知である。従つ
て、大ていの分光測光法で難点の生じることのあ
るのは、サンプルの混濁が、相応するサンプル空
値により配慮されなかつた場合である。 特別な難点が、とりわけ、NADH／NAD⁺測
定に基づきかつ例えば340nｍで実施される酵素
活性の測定に際しコントロール−または標準血漿
の混濁を惹起する。 340nｍで測定した場合、サンプル（コントロ
ール−または標準血漿）の混濁が、NADHのい
ずれにせよすでに大きい吸光度を反応混合物中で
付加的に極めて増大させ、従つて結果的に吸光度
測定が光度計のもはや不正確な吸光度範囲内で実
施されなければならない。このことは、測定が不
正確になることを表わす（すなわち、測定の変動
係数（Variationskoeffizient：VK）が増大す
る）。さらに、得られた結果が、使用せる光度計
の特性に大きく依存する。 すでに、混濁の難点を多数の方法で解決するこ
とが試みられた。 (1) コントロール−ないしは標準血漿をペレツト
状に適当な冷凍浴中で急速冷凍し、凍結せるペ
レツトを膨張状態に凍結乾燥し、かつ得られた
凍結乾燥ペレツトを秤量後に適当な瓶中に乾燥
充填することによる（西ドイツ国特許公開明細
書第2243014号）。 この方法は、コントロール−／標準血漿の原
料を操作せずに相対的にわずかな濁度を得るこ
とができるという利点を有する。欠点は、この
技術が大きい設備費を必要とし、かつ凍結乾燥
ペレツトを充填する難点が現在まだ十分に解決
されず、すなわち工業的に大規模にはまだ実施
不可能であることである。 (2) 混濁をもつぱら惹起するβ−リポプロテイン
を血漿から分離し、かつ場合により不利な増分
のコレステリンを適当なリポプロテインフラク
シヨン（α−リポプロテイン）とともに、また
は不利な増分のトリグリセリドをトリオクタノ
インとともにトライトン（Triton）X114の存
在において分離する（Clin.Chem.第22巻
（1976年）456〜460頁、1299〜1305頁）。 この方法の著るしい欠点は、β−リポプロテ
インのCa²⁺／デキストランサルフエートによ
る沈殿およびその分離が血漿原料を著るしく高
価ならしめることに認められる。 マトリクスに適当なリポプロテインフラクシ
ヨンを引続き増大させコレステリン濃度を増大
させることが可能であり、かつわずかな濁度増
大（コレステリン300mg／dlでＥ0.7）を前提
とするのではあるが、但しそれとともにトリグ
リセリド濃度の同時の増大が不可能である。 同じく制限されるのが、洗浄剤（トライトン
X114）の添加である。これにより、試験障害
および／または酵素の不活性化を見込むべきで
ある。 (3) コントロール−ないしは標準血漿に、凍結乾
燥中のリポプロテインの変質を低減または回避
する糖類、糖アルコールおよびアミノ糖を添加
することによる（西ドイツ国特許公開明細書第
2825391号）。 この方法は、方法(1)および(2)と比べ、従来の
技術が使用されることができかつ原料の改質が
回避されるという利点を有する。 この方法の欠点は、部分的に多量の“安定
剤”が添加される必要があり、それにより還元
されたコントロール／標準血漿の特性（例えば
粘度）が変動し、かつ、安定剤には“生理学
的”物質が挙げられ、これが特定の試験を阻止
（例えば、グルコース、グルコースアミン、フ
ラクトースによるHK／G6P−DH法によるグ
ルコース定量の阻止）することがあるか、また
はこれが場合により血漿中で変質することがあ
る（例えば、α−グルコシダーゼ、インベルタ
ーゼまたはβ−ガラクトシダーゼによるサツカ
ロースまたはラクトースの加水分解、それとい
うのもこれら酵素は、酵素凝固せる際にいわゆ
る酵素不純物としてコントロール／標準血漿中
へ入ることがあるからである）。 方法(1)（急速冷凍）により製造したサンプルの
濁度（＝水または希釈剤で還元した未希釈のサン
プルをHg546nｍで水に対し測定せる吸光度）は
約0.5である。 常法により標準の人血漿から製造されたコント
ロール−／標準血漿（−30℃〜−50℃で冷凍した
サンプルを凍結乾燥）の濁度は0.8〜1.3である。 方法(2)により製造されたコントロール−／標準
血漿は約0.3の濁度を有する。しかしながら、ト
リグリセリドないしはコレステリンの含有は、β
−リポプロテインが分離されたことにより極めて
わずかである。 従つて、本発明の根底をなす課題は、混濁形成
の低減傾向を示すが、但しこの難点の公知解決法
の欠点を有しない標準血漿ないしはコントロール
血漿をつくり出すことである。 ところで、人−または動物血漿をベースとする
かまたは、血漿またはプラズマから誘導された組
成のバツチに、凍結乾燥前に、糖類に属せざる特
定の有機化合物を添加した場合、混濁がわずかで
均質なコントロール−／標準血漿が従来の技術で
製造されることができると判明し、かつ本発明は
これに基づく。 本発明よにれば、低混濁性の標準−またはコン
トロール血漿の前記製造法において、凍結乾燥す
る前に、メタノール、ナトリウムアセテート、テ
トラメチルジエチレン−アンモニウムジアセテー
ト、ナトリウムプロピオネート、ナトリウムラク
テート、アラニン、ナトリウム−２，２−ビス
（ヒドロキシメチル）−プロピオネート、Ｎ−メチ
ルジエタノールアンモニウム−２，２−ビス（ヒ
ドロキシメチル）−プロピオネート、２，２−（ビ
ス−ヒドロキシメチル）−プロピオン酸アミド、
ナトリウム−２−ヒドロキシ−２−メチルブチレ
ート、バリン、２−メトキシエタノール、トリエ
チレングリコール、テトラエチレングリコール、
トリエタノールアンモニウムアセテート、テトラ
メチルエチレンジアンモニウムジアセテート、テ
トラメチルエチレンジアンモニウム−ジ−（２−
ヒドロキイソブチレート）およびテトラメチルア
ンモニウムアセテートより成る群から選択された
少くとも１種の化合物を還元溶液に対し0.5〜10
重量％の量で添加することを特徴とする方法が得
られる。 所望の混濁改善が得られる量は、使用される化
合物に大きく依存する。本発明によれば、標準血
漿に対する有効濃度0.5〜10ｇ／dlが適用される。
装入物質の所要量は、それ自体に依存するだけで
なく、またマトリクスおよびその組成により決定
され（例えばそのリピドーおよびプロテイン含
分）、場合場合に応じて変更することができる。 また、前記せる種類の多数の物質を血漿ないし
は、血漿から誘導されたマトリクスに一緒に添加
することが可能である。この場合、相互に強化ま
たは弱化する効果の生じることがある。 殊に本発明は、一般的なコントロール−ないし
は標準血漿、すなわち、臨床的に重要なできるだ
け全ての血漿パラメータ、例えば酵素、基質、代
謝基質、ホルモン、電解質等につき品質管理ない
しは自動装置の較正（補正）に使用されることが
できる生成物に適当である。しかしまた同じく本
発明は、酵素またはホルモンが添加されなくとも
よい特殊目的のコントロール−ないしは標準血漿
に適当である。これらの例が、リピドコントロー
ル血漿またはリピド標準血漿／リピド検定剤であ
る。 本発明によれば、血漿が全体として均質になる
だけでなく、コントロール−／標準血漿中に含有
されたパラメータの濃度−および活性度測定の精
度をも改善される。このことは、それぞれのパラ
メータの目標値が安定化され、かつ表示目標値の
確認が品質管理用血漿の使用者にとつて容易とな
るか、ないしは装置の較正がこれら検量体を使用
し改善されることを表わす。 以下に、本発明を実施例につき詳説する。 濁度の低減は以下のように測定する：水で還元
した未希釈のサンプルのλ＝546nｍにおける吸
光度を１cmキユベツト中で測定し、かつ添加物／
複数の添加物を有するサンプルの吸光度と添加物
なしのサンプル（＝コントロール）の吸光度とを
比較する。 もつぱら、この波長における吸光度は、光吸収
が相対的にわずかであるサンプルの濃度／不均質
度により決められる。従つて光度は、もつぱら光
散乱効果により低減せしめられる。測定装置の構
造（光路、光源および受光装置、絞りの配列、キ
ユベツト形状等）が、光散乱を前提とする光度低
減を同じく左右する。 吸光度を、線スペクトル光度計（エツペンドル
フ（Eppendorf）6115型）で測定する。 この場合、サンプルの還元ないしは再還元と
は、凍結乾燥前に存在した量の水または水溶液
（希釈剤）を、凍結乾燥せるサンプルに添加する
ことを表わす。 例 １〜15 この試験列の場合、血漿マトリクスとして、健
康な供血者からの貯蔵人血漿を使用する。添加物
質の混濁澄明化効果をさらに良好に示すため、貯
蔵血漿に卵黄抽出物を混合し、血漿マトリクスの
トリグリセロール濃度を160〜270mg／dlの値に増
大させる。血漿マトリクスのコレステリン含分は
変更しなかつた。 酵素、基質、電解質またはホルモンを血漿マト
リクスに添加した後、第１表に記載せる物質を記
載の濃度で血漿マトリクスに添加した。その後
に、添加物を有するかまたは有せざるこれらバツ
チを病原菌不含に濾別し（薄膜フイルタ層0.2μ）、
フラスコに充填しかつ凍結乾燥した。水で還元し
た後、サンプルの濁度を測定した。

【表】

【表】 第１表の結果は、使用せる人血漿の濁度を明白
に低減させるのに最大３％の添加量で十分である
ことを示す。殊に有効なのが、メタノール、アセ
テート、ラクテートおよび２−ヒドロキシイソブ
チレートである。 さらに、還元されたサンプルの均質性が添加物
により改善されたことが明白である。最低11のそ
れぞれのサンプル瓶の濁度の範囲（Ｅ 最大−Ｅ 最
小）が明白に小さくなり、すなわち全体として生
成物が単一もしくは均質になる。 例 16〜19 この試験例に、貯蔵の人−または牛血漿を使用
した。人−ないしは動物血漿マトリクスのリピド
含有量は、コレステリン350〜150mg／dlおよびト
リグリセリド300〜150mg／dlに増量せしめられて
いる。この結果を第２表にまとめた。

【表】 ート

【表】 COO−基を適当な陽イオンと一緒に有する本
発明による化合物により、リポイド血の血漿の濁
度をも極めて低減させうることが明白である。例
19の濃度は、凍結乾燥せざる出発物質とさえ一致
する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 所要の成分を水溶液中で混合し、この溶液を
   凍結乾燥しかつ凍結乾燥物を水性媒体で還元する
   ことにより標準−またはコントロール血漿を製造
   するに当り、凍結乾燥する前に、メタノール、ナ
   トリウムアセテート、テトラメチルジエチレン−
   アンモニウムジアセテート、ナトリウムプロピオ
   ネート、ナトリウムラクテート、アラニン、ナト
   リウム−２，２−ビス（ヒドロキシメチル）−プ
   ロピオネート、Ｎ−メチルジエタノールアンモニ
   ウム−２，２−ビス（ヒドロキシメチル）−プロ
   ピオネート、２，２−（ビス−ヒドロキシメチル）
   −プロピオン酸アミド、ナトリウム−２−ヒドロ
   キシ−２−メチルブチレート、バリン、２−メト
   キシエタノール、トリエチレングリコール、テト
   ラエチレングリコール、トリエタノールアンモニ
   ウムアセテート、テトラメチルエチレンジアンモ
   ニウムジアセテート、テトラメチルエチレンジア
   ンモニウム−ジ−（２−ヒドロキイソブチレート）
   およびテトラメチルアンモニウムアセテートより
   成る群から選択された少くとも１種の化合物を還
   元溶液に対し0.5〜10重量％の量で添加すること
   を特徴とする低混濁性の標準−またはコントロー
   ル血漿の製造法。