JPH06289015A

JPH06289015A - フェノチアジン系色源体安定化組成物

Info

Publication number: JPH06289015A
Application number: JP7164693A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Oda; 洋之小田; Junko Yoneda; 淳子米田; Kenji Hasegawa; 健二長谷川
Original assignee: Sunstar Inc
Current assignee: Sunstar Inc
Priority date: 1993-03-30
Filing date: 1993-03-30
Publication date: 1994-10-18

Abstract

(57)【要約】【目的】安定化されたフェノチアジン系色源体組成物
の提供。【構成】フェノチアジン環を有する色源体と、その安
定化剤として、酸性糖またはその塩とを配合してなるフ
ェノチアジン系色源体安定化組成物。【効果】色源体の変色を抑制でき、色源体を長期間安
定に保存できる。また、生産工程の簡素化、容器の簡素
化、生産コストの削減が可能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、臨床診断薬等の基質と
して用いられるフェノチアジン系色源体の変性を抑制
し、長期間着色を防止するフェノチアジン系色源体を安
定化した組成物に関する。また、本発明は、特に、該組
成物を用いる歯周疾患検査にも関する。

【０００２】

【従来の技術および課題】フェノチアジン環を有する色
源体は公知の化合物で、例えば、特開昭５７−２２９２
９７号にその合成法が開示されており、その分子吸光係
数が高いところから、臨床診断等における酵素反応を定
量するための色源体として使用されている（例えば、特
開平２−４９９号）。

【０００３】一般に、これら色源体は、水溶液中では非
常に不安定であり、また、固体であっても空気中の水分
や光により自動酸化を受けて着色を起こし長期の保存に
は適さず、定量の精度をおとす原因となっている。この
ため、これらの色源体を使用する臨床診断用等の酵素反
応定量キットのような商品の場合、安定化のためと、使
用に際しての再溶解性とを考慮して、これらの色源体を
凍結乾燥し、絶乾状態で提供されている。

【０００４】しかし、このような凍結乾燥処理や乾燥状
態を保持することは、製造コストを引き上げるため、こ
れら色源体を使用するうえで問題となっており、また、
使用に際しても簡単な、溶液状態で長期保存に適する技
術・製品の開発が望まれている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】発明者らは、フェノチア
ジン系色源体の溶液中での安定性を改善するため種々検
討した結果、特定の酸性糖が特異的にフェノチアジン系
色源体を安定化することを見いだし、本発明を完成する
に至った。

【０００６】すなわち、本発明は、フェノチアジン環を
有する色源体を含有する組成物と、その安定化剤として
酸性糖とを配合したフェノチアジン系色源体安定化組成
物を提供するものである。

【０００７】また、本発明は、このような組成物を、他
の必要な材料ないしは組成物と組み合わせてなる歯周疾
患検査用キットも提供するものである。

【０００８】酸性糖としては通常、アスコルビン酸、エ
リソルビン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、グルクロ
ン酸、マンヌロン酸、ケトグルコン酸、ケトグロン酸が
用いられるが、そのうち安定化効果としてはアスコルビ
ン酸、エリソルビン酸が特に効果がある。但しアスコル
ビン酸は酵素反応にアスコルビン酸オキシダーゼ等の酸
化酵素を使用する関係で、高濃度を配合するときには酵
素反応に影響が出る可能性がある。影響を少なくするた
めにはアスコルビン酸濃度を低くする必要があるので、
その分、安定化効果は低下する。そこで安定化剤として
はエリソルビン酸を使用するのが好ましい。

【０００９】用いるフェノチアジン系色源体は、フェノ
チアジン環を有する公知のものいずれでもよく、例え
ば、式：

【００１０】

【化２】

【００１１】［式中、Ｒ₁ はアルキル基または置換アミ
ノ基（置換基はアルキル基、カルボキシル基、ナフチル
基、置換フェニル基（置換基はハロゲン、アルキル基、
アシルカルボニルアミノ基またはアシルカルボニルアミ
ノアルキル基を示す）、アシルカルボニルアミノアルキ
ル基置換フェニルアルキル）、Ｒ₂ はヒドロキシル基ま
たはジアルキルアミノ基、Ｒ₃ は水素、ニトロ基または
スクシニルアミド基、およびＸはジアルキルアミノ基を
意味する。ただし、アルキル基の炭素数はいずれも１〜
３、アシル基の炭素数はいずれも１〜３である。］で示
されるフェノチアジン誘導体が挙げられる。

【００１２】これらの色源体の代表的なものには、例え
ば、１０Ｎ−メチルカルバモイル−３,７−ジメチルア
ミノ−１０Ｈ−フェノチアジン、１０Ｎ−カルボキシメ
チルカルバモイル−６−ニトロ−３,７−ジメチルアミ
ノ−１０Ｈ−フェノチアジン、１０Ｎ−カルボキシメチ
ルカルバモイル−６−スクシニルアミド−３,７−ジメ
チルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジンまたは１０Ｎ−メ
チルカルバモイル−３−メチルアミノ−７−ヒドロキシ
−１０Ｈ−フェノチアジンが包含される。

【００１３】特に限定するものではないが、これらの色
源体は単独で、あるいは２種以上を組み合わせて、使用
時の希釈倍率にもよるが、実用上から、通常、組成物全
量に基づいて０.０１〜１重量％程度配合される。

【００１４】本発明の組成物の形態は特に限定されず、
例えば溶液、粉末、顆粒、凍結乾燥品の固形製剤、水溶
性のゲル剤のいずれであってもよい。しかし、本組成物
は臨床検査等の酵素反応の定量に用いるものであり、こ
のような酵素反応は通常水溶液中で行なわれる。このた
め、水に混合溶解する溶液状態で色源体が提供されれば
定量操作において実験手法が簡便に行なえ、このように
微量を添加する試薬においても手軽に計量できる。した
がって本安定化組成物は溶液が好ましい。

【００１５】添加する安定化剤の量は、通常組成物に対
して０.００１〜５％であり、より好ましくは０.０１〜
０.５％であるが、色源体の量、最終の酵素反応液中の
濃度、必要とする保存期間等により適宜変えられ、特に
この範囲に限定されるものではない。しかし、目的とす
る酵素反応に対する影響を考慮すれば、添加量は少ない
方が好ましい。

【００１６】本発明の組成物は、色源体および安定化剤
を含む成分を常法により混合して調製することができ
る。該組成物が溶液の場合、安定化剤を添加する水溶液
の組成は、例えば精製水とt-ブタノールのようなアルコ
ールの混液が用いられるが、さらに有機酸を加えること
により安定性が向上する。有機酸としてはクエン酸、コ
ハク酸、酒石酸、フマル酸、グルコン酸、シュウ酸、乳
酸、酢酸およびその塩を用いることができる。そのとき
のｐＨは５以下が望ましく、５以上のｐＨ領域では安定
化効果は急激に低下する。更にｐＨ３以下にすればより
安定性は向上する。また必要に応じて、塩酸、リン酸な
どのｐＨ調整剤、安息香酸ナトリウム等の防腐剤、非イ
オン系の界面活性剤等の添加剤を加えてもよい。あるい
は固形製剤、半固形製剤にするためには、水溶性の賦形
剤、例えば、水溶性高分子、糖、マクロゴール等を添加
してもよい。

【００１７】本組成物は、臨床診断薬の分野で幅広く用
いることができ、生体中の各種の成分の測定や、特開平
１ー１２８７９７号に開示されているようにエンハンサ
ーを介在させることにより、生体内の微量酵素を測定す
ることができる。特に、歯周病原菌由来の酵素を測定す
ることによる歯周疾患検査キットとすることが可能であ
る。かかるキットとしては、本発明の組成物と、歯周病
原菌由来の酵素、例えば、ペプチダーゼの基質を含む組
成物を組み合わせたものが挙げられる。この基質は、歯
周病原菌由来の酵素に分解され、酸化酵素のエンハンサ
ーを遊離する。従って、使用時に、これらの組成物を合
して、例えば、採取した歯肉縁下プラークと酸化酵素を
添加すれば、本発明により安定化された色源体が酸化さ
れて、色素を生成し、歯周病原菌の存在の有無を判定で
きる。

【００１８】

【実施例】以下に本発明を試験例及び実施例によって説
明する。試験例１表１に示す各種安定化剤を添加した色源体１０Ｎ−カル
ボキシメチルカルバモイル―３,７―ジメチルアミノ―
１０Ｈ−フェノチアジンを試料とし、安定性試験を実施
した。即ち、濃度３μmol/mlとなるように色源体を溶解
し、最終濃度が０.１％になるように安定化剤を混合し
た溶液１０mlを容量１２mlのガラスびんに入れ、密閉し
４℃、３０℃で２週間、放置した。色源体の変化は、酸
化による着色をＯＤ６６６で測定した。なお溶解直後は
いずれも０.１以下であった。４℃では、いずれも０.１
以下で安定であった。３０℃でもコントロールに対し、
アスコルビン酸、エリソルビン酸、イズロン酸、ガラク
ツロン酸、グルクロン酸、グルロン酸、マンヌロン酸、
ケトグルコン酸、ケトグロン酸の酸性糖はいずれも安定
であった。また、還元性のある亜硫酸ナトリウム、チオ
グリコール酸ナトリウムも安定化効果が認められた。ク
エン酸、コハク酸の有機酸はいずれも単独では安定化効
果がなかった。

【００１９】

【表１】

【００２０】試験例２表２に示した濃度で各種安定化剤を添加した色源体１０
Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル―３,７―ジメチル
アミノ―１０Ｈ−フェノチアジンを試料とし安定性を検
討した。安定化剤の濃度は酵素反応試験にて酵素阻害の
ない濃度を決定した。試験例１での安定化剤濃度では、
安定化効果は高いものの、酵素反応に対して阻害を示す
ため、影響を与えない最大許容濃度を検討した。その方
法を次に示す。

【００２１】酵素反応試験：上記安定性試験に供した１
０Ｎ−メチルカルバモイル―３,７―ジメチルアミノ―
１０Ｈ―フェノチアジン（ＭＣＤＰ）溶液５０ulにアス
コルビン酸オキシダーゼ溶液を添加して一定時間加温
し、生成した色素を吸光度計にて測定した。安定化剤無
添加と比較して安定化剤を加えても９０％の活性が得ら
れる濃度を確認した。上記試験で確認した酵素阻害を示
さない安定化剤濃度の液に、１０Ｎ−メチルカルバモイ
ル―３,７―ジメチルアミノ―１０Ｈ―フェノチアジン
（ＭＣＤＰ）を溶解し、試験例１の通り安定性試験を行
った。結果を表２に示す。

【００２２】

【表２】

【００２３】エリソルビン酸、アスコルビン酸は単独で
も効果が認められ、エリソルビン酸が最も好ましかっ
た。また、有機酸との配合で安定性は向上した。その時
のｐＨは５以下の酸性で効果が高かった。還元性のある
亜硫酸ナトリウム、チオグリコール酸ナトリウムは、酵
素阻害の認められない濃度では安定化効果はなかった。

【００２４】実施例１これらの成分を常法により混合、溶解し、所望の溶液組
成物を調製した。

【００２５】実施例２これらの成分を常法により混合、溶解し、所望の溶液組
成物を調製した。

【００２６】実施例３歯周疾患検査用キットＮ−カルボベンゾキシ−グリシル−グリシル−アルギニ
ン−３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシアニリド３μｍ
ｏｌとＭＣＤＰ１５μｍｏｌをｔ−ブタノール１ｍｌと
エリソルビン酸濃度０.０６２５％、クエン酸濃度１.２
５％とした精製水からなる混液に溶解した溶液をＡｌ、
アスコルビン酸オキシダーゼ（１００ユニット／ｍｌ）
含有緩衝液をＡ２とし、これらで歯周疾患検査用キット
を構成する。歯周炎患者の歯周ポケットから、ペーパー
ポイントで歯肉縁下プラークを採取し、Ａ１を５０μ
ｌ、Ａ２を１ｍｌ加え、３７℃で１５分反応させたとこ
ろ、波長６６６ｎｍにおける吸光度は０.８２５とな
り、陽性と判定された。

【００２７】

【発明の効果】本発明により安定化された色源体は、溶
液状態での変色が抑制でき、長期間安定に保存すること
ができる。その結果，現在真空凍結乾燥による安定化の
代替として上記溶液組成物を用いれば、生産工程の簡素
化、容器の簡素化、生産コストの削減につながる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】フェノチアジン系色源体と、その安定化
剤として、酸性糖またはその塩とを配合してなるフェノ
チアジン系色源体安定化組成物。
【請求項２】酸性糖が、アスコルビン酸、エリソルビ
ン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、グルクロン酸、グ
ルロン酸、マンヌロン酸、ケトグルコン酸およびケトグ
ロン酸から選ばれる１種または２種以上である請求項１
記載の組成物。
【請求項３】酸性糖がエリソルビン酸である請求項１
記載の組成物。
【請求項４】組成物に対して、安定化剤を０.００１
〜５重量％配合した請求項１記載の組成物。
【請求項５】溶液である請求項１記載の組成物。
【請求項６】 pＨが５以下である請求項５記載の組成
物。
【請求項７】 pＨが３以下である請求項６記載の組成
物。
【請求項８】さらに、クエン酸、コハク酸、酒石酸、
フマル酸、グルコン酸、シュウ酸、乳酸および酢酸から
選ばれる有機酸またはその塩を配合する請求項１記載の
組成物。
【請求項９】色源体が、式：【化１】 [式中、Ｒ₁ はアルキル基または置換アミノ基（置換基
はアルキル基、カルボキシル基、ナフチル基、置換フェ
ニル基（置換基はハロゲン、アルキル基、アシルカルボ
ニルアミノ基またはアシルカルボニルアミノアルキル基
を示す）、アシルカルボニルアミノアルキル基置換フェ
ニルアルキル）、Ｒ₂ はヒドロキシル基またはジアルキ
ルアミノ基、Ｒ₃ は水素、ニトロ基またはスクシニルア
ミド基、およびＸはジアルキルアミノ基を意味する。た
だし、アルキル基の炭素数はいずれも１〜３、アシル基
の炭素数はいずれも１〜３である。]で示されるフェノ
チアジン誘導体である請求項１記載の組成物。
【請求項１０】色源体が、１０Ｎ−メチルカルバモイ
ル−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジ
ン、１０Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−６−ニト
ロ−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジ
ン、１０Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−６−スク
シニルアミド−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェ
ノチアジンまたは１０Ｎ−メチルカルバモイル−３−メ
チルアミノー７−ヒドロキシ−１０Ｈ−フェノチアジン
である請求項９記載の組成物。
【請求項１１】色源体を０.０１〜１重量％配合した
請求項１記載の組成物。
【請求項１２】請求項１記載の組成物を組み合わせて
なる歯周疾患検査用キット。