JPH0137118B2 - - Google Patents
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- JPH0137118B2 JPH0137118B2 JP55064449A JP6444980A JPH0137118B2 JP H0137118 B2 JPH0137118 B2 JP H0137118B2 JP 55064449 A JP55064449 A JP 55064449A JP 6444980 A JP6444980 A JP 6444980A JP H0137118 B2 JPH0137118 B2 JP H0137118B2
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- albumin
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- freeze
- dihydrofluorate
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- Expired
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明は、凍結乾燥品として長期間安定に保存
し得るよう処理したジヒドロフオレートレダクタ
ーゼに関し、さらに詳細には、アルブミンを添加
したジヒドロフオレートレダクターゼの水溶液を
凍結乾燥して得られる、安定化されたジヒドロフ
オレートレダクターゼに関する。 ジヒドロフオレートレダクターゼは、癌患者に
投与された葉酸代謝拮抗剤メトトレキサートの血
液中濃度の測定に使用される試薬として有用な物
質である。 本物質は、密閉瓶入りの凍結乾燥粉末として市
販され、保存および運搬に際しても低温に保つこ
とが必要とされるなど、不安定な酵素物質であ
る。また、本酵素は単純に凍結乾燥するだけで
も、その操作の際に酵素活性の低下をきたす。 本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、本物質
にアルブミンを添加し、凍結乾燥することによ
り、安定性が極めて向上することを見出し、発明
を完成させた。 アルブミンの添加量は、特に限定されないが、
0.002〜0.5％が適当である。 実施例 １ 酵素ジヒドロフオレートレダクターゼを目的と
する酵素濃度になるように、氷冷した0.05Mトリ
スの0.1MKCl加緩衝液（PH7.5、6NHClで調整）
に溶解、調製し、酵素活性を調べる。 （氷冷撹拌下）上記溶液に用いた緩衝液容量の
0.1％（Ｗ／Ｖ）の割合にアルブミンを加え溶解
させる。 冷室にて目的とする用量を各バイアル瓶に分注
し、−70゜〜−80℃で約６時間予備凍結を行う。 24時間凍結乾燥し、真空下でバイアル瓶にゴム
栓をして、ジヒドロフオレートレダクターゼの凍
結乾燥品を得る。 実施例 ２ 酵素溶液の凍結乾燥による活性低下に対するア
ルブミン添加による防止効果を検討した。結果を
表に示す。 アルブミン無添加酵素は、−10℃に凍結するだ
けで約20％（平均活性は凍結前活性の80.3％）低
下し、さらに凍結乾燥すると約40％（平均活性は
凍結乾燥前活性の59.5％）の活性低下を起こし
た。これに対し、アルブミン、0.02％、0.1％、
0.5％添加し凍結乾燥した酵素の平均活性はそれ
ぞれ96.9％、106.4％、102.9％とアルブミンを添
加することにより凍結乾燥による低下はみられな
くなつた。 酵素活性は吸光度測定法により、４分間の吸光
度の減少と、凍結前酵素標品に対する処理標本の
活性率を示した。 表中の酵素活性値は、アルブミン無添加酵素
標品および各濃度のアルブミンを添加した後凍結
乾燥したものについて測定したものである。
し得るよう処理したジヒドロフオレートレダクタ
ーゼに関し、さらに詳細には、アルブミンを添加
したジヒドロフオレートレダクターゼの水溶液を
凍結乾燥して得られる、安定化されたジヒドロフ
オレートレダクターゼに関する。 ジヒドロフオレートレダクターゼは、癌患者に
投与された葉酸代謝拮抗剤メトトレキサートの血
液中濃度の測定に使用される試薬として有用な物
質である。 本物質は、密閉瓶入りの凍結乾燥粉末として市
販され、保存および運搬に際しても低温に保つこ
とが必要とされるなど、不安定な酵素物質であ
る。また、本酵素は単純に凍結乾燥するだけで
も、その操作の際に酵素活性の低下をきたす。 本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、本物質
にアルブミンを添加し、凍結乾燥することによ
り、安定性が極めて向上することを見出し、発明
を完成させた。 アルブミンの添加量は、特に限定されないが、
0.002〜0.5％が適当である。 実施例 １ 酵素ジヒドロフオレートレダクターゼを目的と
する酵素濃度になるように、氷冷した0.05Mトリ
スの0.1MKCl加緩衝液（PH7.5、6NHClで調整）
に溶解、調製し、酵素活性を調べる。 （氷冷撹拌下）上記溶液に用いた緩衝液容量の
0.1％（Ｗ／Ｖ）の割合にアルブミンを加え溶解
させる。 冷室にて目的とする用量を各バイアル瓶に分注
し、−70゜〜−80℃で約６時間予備凍結を行う。 24時間凍結乾燥し、真空下でバイアル瓶にゴム
栓をして、ジヒドロフオレートレダクターゼの凍
結乾燥品を得る。 実施例 ２ 酵素溶液の凍結乾燥による活性低下に対するア
ルブミン添加による防止効果を検討した。結果を
表に示す。 アルブミン無添加酵素は、−10℃に凍結するだ
けで約20％（平均活性は凍結前活性の80.3％）低
下し、さらに凍結乾燥すると約40％（平均活性は
凍結乾燥前活性の59.5％）の活性低下を起こし
た。これに対し、アルブミン、0.02％、0.1％、
0.5％添加し凍結乾燥した酵素の平均活性はそれ
ぞれ96.9％、106.4％、102.9％とアルブミンを添
加することにより凍結乾燥による低下はみられな
くなつた。 酵素活性は吸光度測定法により、４分間の吸光
度の減少と、凍結前酵素標品に対する処理標本の
活性率を示した。 表中の酵素活性値は、アルブミン無添加酵素
標品および各濃度のアルブミンを添加した後凍結
乾燥したものについて測定したものである。
【表】
アルブミンとしては牛血清アルブミンを使用し
た。
酵素標品試料３検体について検討した。
実施例 ３ アルブミンを0.1％添加した酵素の安定性を無
添加市販品と比較した。結果は表に示す通り、
酵素活性はアルブミン無添加のもので１ケ月後87
％、３カ月後79％と低下したのに対し、本発明に
係るアルブミン添加のものは３カ後でも98％以上
の活性を示した。 使用した試料は、いずれも密閉瓶入り凍結乾燥
品である。 酵素活性は、吸光度測定法により、２分間の吸
光度の減少として示した。 表中の酵素活性の値は、各試料３検体、繰り
返し３回測定したときの平均値を示した。
た。
酵素標品試料３検体について検討した。
実施例 ３ アルブミンを0.1％添加した酵素の安定性を無
添加市販品と比較した。結果は表に示す通り、
酵素活性はアルブミン無添加のもので１ケ月後87
％、３カ月後79％と低下したのに対し、本発明に
係るアルブミン添加のものは３カ後でも98％以上
の活性を示した。 使用した試料は、いずれも密閉瓶入り凍結乾燥
品である。 酵素活性は、吸光度測定法により、２分間の吸
光度の減少として示した。 表中の酵素活性の値は、各試料３検体、繰り
返し３回測定したときの平均値を示した。
【表】
【表】
試料番号１：アルブミン無添加市販品
試料番号２、３：アルブミン添加
アルブミンとしては、牛血清アルブ
ミンを0.1％使用した。
試料番号２、３：アルブミン添加
アルブミンとしては、牛血清アルブ
ミンを0.1％使用した。
Claims (1)
- １ アルブミンを添加したジヒドロフオレートレ
ダクターゼの水溶液を凍結乾燥して得られること
を特徴とする、安定化されたジヒドロフオレート
レダクターゼ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6444980A JPS56160991A (en) | 1980-05-15 | 1980-05-15 | Stabilized dihydrofolate reductase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6444980A JPS56160991A (en) | 1980-05-15 | 1980-05-15 | Stabilized dihydrofolate reductase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56160991A JPS56160991A (en) | 1981-12-11 |
| JPH0137118B2 true JPH0137118B2 (ja) | 1989-08-04 |
Family
ID=13258566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6444980A Granted JPS56160991A (en) | 1980-05-15 | 1980-05-15 | Stabilized dihydrofolate reductase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS56160991A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2575648B2 (ja) * | 1986-04-24 | 1997-01-29 | 国際試薬株式会社 | クレアチンキナ−ゼの安定化方法 |
| DE59306681D1 (de) * | 1992-03-13 | 1997-07-10 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Neue ketoester-reduktase, deren herstellung und verwendung für enzymatische redoxreaktionen |
| WO2019074886A1 (en) | 2017-10-09 | 2019-04-18 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | LYOPHILIZATION CONTAINER AND METHOD OF USE |
| US11609042B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-03-21 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Multi-part lyophilization container and method of use |
-
1980
- 1980-05-15 JP JP6444980A patent/JPS56160991A/ja active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CLIN CHEM=1980 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS56160991A (en) | 1981-12-11 |
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