JPH0141604B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血栓症の予防及び治療剤に関する。

血栓症とは、生体の心臓又は血管内において血
小板が凝集し血液が凝固して生じる凝塊即ち血栓
が形成される病的現象であり、この血栓の形成
は、血管腔の狭窄、閉塞をきたし、心臓、脳、肺
等の主要臓器に虚血性病変や梗塞を生じ、之等臓
器の機能障害を招来して、臨床的に重大な疾患を
惹起する。従来より上記血栓の形成の原因は明確
に解明されてはいないが、基本的には血管壁の性
状の変化、血流の変化及び血液成分の変化が要因
とされ、また近時凝固因子、線溶系因子、プロス
タグランジン等の血小板の粘着凝集因子や網内系
機能等も上記血栓乃至血管内血液凝固に関与する
ものとして注目されつつある。しかして血栓症は
上記各種の要因が異常に密接に且つ複雑に絡み合
つて生じるものであるが、いずれも血管内におい
て血液の凝固（凝血）が認められる所から、その
予防及び治療剤としては、該血液凝固過程の反応
系に作用し、凝血機構を阻止したり、これに関与
する因子を除去して血液の凝固性を低下させる薬
物即ち血液凝固阻止薬（抗凝血薬）が用いられて
きた。その代表的なものとしてはクエン酸ナトリ
ウム、ヘパリン、クマリン誘導体、インダンジオ
ン誘導体等が知られている。之等抗凝血薬は、そ
の作用機序から見て、既に産生された血栓に対し
てはこれを溶解する効果はなく、従つて凝血亢進
状態の改善を計り、血栓症発生の予防乃至再発防
止に有効であるにすぎない。また近年血栓を積極
的に溶解して血流の改善を計る薬剤即ち血栓溶解
剤としてウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ等の
酵素製剤が開発され、殊に抗原性がなくまた非発
熱性のウロキナーゼは、臨床的に広く使用される
に至つている。更に上記血栓の形成には、血小板
機能亢進が密接に関係していることが指摘され
て、その予防乃至治療に、血小板機能抑制剤所謂
抗血小板剤例えば血小板膜安定剤、アデニルサイ
クレース活性化剤、ホスホジエステレース不活性
化剤、アスピリン、非ステロイド系消炎剤等の
LASS（Labile aggregation stimulating
substance）生成阻害乃至凝集阻害剤等が示唆さ
れているが、之等の有効性は末だ確認されてはい
ない。また最近血栓症の予防および治療にエイコ
サペンタエン酸（EPA）が有効であることが報
告された（特開昭54―154533号公報）が、その予
防および治療効果は、尚満足できるものではな
い。

本発明者らは上記公知の各種血栓症予防及び治
療剤の作用機序の解明、その前提となる血液凝固
機序、フイブリン溶解機序等につき鋭意研究を重
ねる過程において、従来より知られている各種の
薬剤とは異なるある種の高度不飽和脂肪酸及びそ
の誘導体が、アラキドン酸、アデノシンジホスフ
エート（ADP）及びコラーゲンの夫々によつて
誘発される血液凝固即ち血小板凝集に対して阻害
作用を示し、また血小板凝集物を溶解する作用を
示し、その作用効果は、EPAの２倍以上も高く、
従つて血栓症の予防及び治療に有効であることを
見い出した。本発明はこの新しい知見に基づいて
完成されたものである。

即ち本発明は、（all―Ｚ）―４，７，10，13，
16，19―ドコサヘキサエン酸並びに該酸の薬理的
に許容される塩、エステル、及びアミドから選ば
れた少なくとも１種を有効成分として含有するこ
とを特徴とする血栓症予防及び治療剤に係る。

本発明の血栓症予防及び治療剤は、上記特定の
高度不飽和脂肪酸及びその誘導体を有効成分とし
て用いることに基づいて、深部静脈血栓症、四肢
動脈血栓、塞栓症、肺塞栓症、網膜静脈血栓症、
冠動脈血栓症、脳血栓症等の各種血栓症及び之等
に起因する心筋梗塞、急性心不全、卒中発作等の
予防及び治療に優れた効果を奏し得る。殊に本発
明の上記有効成分化合物は、腸管からの吸収性が
よく、内服使用が可能であり、また血液中におい
て安定であり、従つてその効果の持続時間が長
く、かなり大量あるいは長時間の服用が可能でし
かもこれによつてもカロリー過多による肥満傾向
をあまり示さない。

本発明において有効成分のひとつとして用いる
（all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコサヘ
キサエン酸は、代表的には水産動物油中にかなり
含有されるものであり、之等水産動物より通常の
方法例えば分子蒸留法、向流分配法、クロマトグ
ラフ法等により単離可能であり、標準体として一
部市販されている。しかし実用的には之等水産動
物からの上記高度不飽和酸は特に単離精製された
純品である必要はなく、他の高度不飽和酸等を若
干含有する粗製品であつてもよい。また上記化合
物は適当な出発原料を用いて有機合成されたもの
であつてもよい。本発明においてはまた上記化合
物の薬理的に許容される塩、エステル及びアミド
類を、上記化合物と同様に有効成分として利用で
きる。該薬理的に許容される塩及びエステルとし
ては、代表的にはナトリウム塩、カリウム塩、カ
ルシウム塩、アルミニウム塩等のアルカリ金属、
アルカリ土類金属、その他の金属塩、アンモニウ
ム塩、モルホリン、ピペラジン、トリメチルアミ
ン、ジエチルアミン等のアミン塩、及びメチルエ
ステル、エチルエステル等の低級アルコールエス
テル等を例示できる。

本発明の血栓症予防及び治療剤は、有効成分化
合物を単独でも投与し得るが通常製剤的担体と共
に製剤組成物の形態で投与される。担体としては
使用形態に応じた薬剤を調製するのに通常使用さ
れる充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、
表面活性剤、滑沢剤等の稀釈剤あるいは賦形剤を
例示できる。製剤組成物の投与単位形態としては
各種の形態を目的に応じて選択でき、その代表的
なものとして錠剤、丸剤、散剤液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤、（液剤、
懸濁剤等）等を例示できる。錠剤の形態に成形す
るに際しては、担体として例えば乳糖、白糖、塩
化ナトリウム、ブドウ糖液、尿素、デンプン、炭
酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、
単シロツプ、ブドウ糖、グリコール、グリセリ
ン、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチ
ルセルロース、セラツク、メチルセルロース、リ
ン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合
剤、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン
末、ラミナリア末炭酸水素ナトリウム、炭酸カル
シウム、ツウイン、ラウリル硫酸ナトリウム、ス
テアリン酸モノグリセリド、乳糖等の崩壊剤、白
糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の
崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル
硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デ
ンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、
ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精
製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、マクロゴ
ール，固体ポリエチレングリコール等の滑沢剤等
を使用できる。丸剤の形態に成形するに際して
は、担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプ
ン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等
の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラ
チン、エタノール等の結合剤、ラミナリア、カン
テン等の崩壊剤等を使用できる。更に錠剤は必要
に応じ通常の剤皮を施した錠剤例えば糖衣錠、ゼ
ラチン被包錠腸溶被錠、フイルムコーテイング錠
あるいは二重錠、多層錠とすることができる。坐
剤の形態に成形するに際しては、担体として例え
ばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アル
コール、高級アルコールのエステル類、ゼラチ
ン、半合成グリセライド等を使用できる。注射剤
として調製される場合には液剤及び懸濁剤は殺菌
され且つ血液と等張であるのが好ましく、これら
液剤、乳剤及び懸濁剤の形態に成形するのに際し
ては、稀釈剤として例えば水、エチルアルコー
ル、プロピレングリコール、エトキシ化イソステ
アリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリル
アルコール、ポリオキシエチレンソルビツト、ソ
ルビタンエステル等を使用できる。なおこの場合
等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブド
ウ糖あるいはグリセリンを製剤中に含有せしめて
もよい。またペースト、クリーム及びゲルの形態
に成形するに際しては、稀釈剤として例えば白色
ワセリン、パラフイン、グリセリン、セルロース
誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベ
ントナイト等を使用できる。更に本発明の血栓症
予防及び治療剤中には、抗酸化剤として例えばブ
チレート化ヒドロキシトルエン、プロピルガレー
ト、キノン、α―トコフエロール等を、また通常
の溶解補助剤，緩衝剤、無痛化剤、保在剤、着色
剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有
させることができ、ある種の抗酸化剤は抗血栓効
果を助長し得る。

製剤組成物中に含有させるべき有効成分化合物
の量は特に限定されず広範囲に適宜選択される
が、通常全組成物中１重量％以上とされ、錠剤を
例にとれば遊離酸換算重量基準で１錠当りほぼ
0.2〜１ｇの有効成分化合物を含有される。

また本発明の血栓症予防及び治療剤は、その使
用に際し特に制限はなく各種形態に応じた方法で
投与される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、
乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与
され、注射剤の場合は単独であるいはブドウ糖、
アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与さ
れ、さらに必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮
下若しくは腹腔内投与され、坐剤の場合には直腸
内投与され、更に婦人の場合は腟内投与され得
る。製剤の投与量は、投与方法、患者の症状等に
応じて適宜に選択され、一般的には有効成分化合
物を遊離酸換算重量で10〜50mg／Kg・day程度好
ましくは20〜40mg／Kg・day程度とされ、これは
通常１日に３〜４回に分けて投与される。

更に本発明の上記有効成分化合物は、之をグリ
セライドの形態でマーガリン、バター、料理用油
または脂肪等として患者にその必要量を摂取させ
ることも可能であり、従つて本発明はかかる特異
な油脂を含む食品形態の血栓症予防及び治療剤を
も提供するものである。

かくして本発明によれば、従来例を見ない血栓
症予防及び治療剤が提供される。

以下本発明を実験例を挙げ説明する。

実験例 １ ＜試薬＞ 本発明有効成分化合物（供試化合物）である
（all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコサヘ
キサエン酸としては、ワコウ純薬工業(株)から入手
したものを夫々500μｇ／ml、250μｇ／ml及び
125μｇ／mlのエタノール溶液として用いる。ま
た比較のためにEPAを500μｇ／mlのエタノール
溶液として用いる。

血小板凝集誘発剤とするコラーゲンとしては、
ホルモン ケミー（Hormon Chemie、西独）社
製コラーゲン試薬「ホルム（Horm）」を、生理
食塩水溶液の形態で、ADP及びアラキドン酸と
しては、夫々シグマ（Sigma）社製のものをそれ
ぞれ生理食塩水溶液及びエタノール溶液として用
いる。

＜血小板浮遊血漿の調製＞ 無麻酔下の日本白色種家兎の頚動脈に挿入した
カテーテルから抗凝固剤として血液の0.1倍容量
の3.8％クエン酸ナトリウムを加え、血液を採取
し、該血液を遠心分離器（「クボタKN―70型」）
にて1100rpm、10分間遠心分離後、上清を分取
し、その沈査を更に同器にて3000rpm、15分間遠
心分離して上清を分取し、これをPPP（platelet
poor plasma）とする。上記1100rpm下での遠心
分離により得られる血漿中の血小板数をコールタ
ーカウンタ―ZB―ｌ型にて測定し、これを上記
PPPで血小板数が５×10⁸個／mlとなるように希
釈してPRP（platelet rich plasma）を調製する。

＜血小板凝集試験＞ ネーチヤー〔Nature，194，927〜929，
（1962）〕に記載のボーン（Born）らの比濁法に
準じて、二光機材社製のアグレゴメータ
（「aggregometer model PAT―6M型」）を用い
て、血小板凝集試験を行なう。即ちPRP200μ
を上記アグレゴメーターの測定キユベツトに入
れ、供試化合物又はEPAのエタノール溶液1μ
及び対照液（contorol）とするエタノール1μを
夫々添加し、37℃で１分間又は５分間予備培養
（preincubate）し、目的の終濃度（ADPでは
7.5μM、コラーゲンでは20μｇ／ml及びアラキド
ン酸では50μｇ／ml）が得られる濃度に生理食塩
水又はエタノールで調製したADP液20μ、コラ
ーゲン液20μ及びアラキドン酸液1μの夫々を
それぞれ添加して、血小板凝集を惹起させる。上
記アグレゴメータによるPRPの濁度変化（吸光
度変化）を連続記録することにより、各濃度にお
ける供試化合物又はEPAの血小板凝集抑制作用
を調べる。

＜結果＞ 結果を第１図乃至第６図に示す。第１〜３図は
予備培養時間を５分とした場合の、ADP（第１
図）、コラーゲン（第２図）及びアラキドン酸
（第３図）で夫々誘発される血小板凝集に対する
供試化合物又はEPAの阻止作用を示す図並びに
第４〜６図は、予備培養時間を１分間とした時の
同様の血小板凝集阻止作用を示す図である。各図
において横軸は時間を、縦軸は吸光度変化を示
す。また各図中曲線１は供試化合物濃度500μ
ｇ／mlの場合、曲線２は同250μｇ／ml、曲線３
は同125μｇ／ml、曲線４は対照液（供試化合物
及びEPA無添加、contorol）及び曲線５はEPA
濃度500μｇ／mlの場合の夫々のデータである。

上記第１〜６図、殊に第１〜３図より本発明有
効成分化合物は、ADP、コラーゲン及びアラキ
ドン酸によつて誘発されるいずれの血小板凝集に
対しても、その好ましい適用濃度は若千異なる
が、充分な阻止作用を有していることが明白であ
る。上記結果及びその他の各種実験結果より、本
発明の有効成分化合物は、いずれも血栓症の予防
及び治療剤として有効であることが判る。

実験例 ２ （all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコ
サヘキサエン酸のナトリウム塩を500μｇ／ml生
理食塩水溶液の形態で用いて、実験例１と同様に
して、ADP、コラーゲン及びアラキドン酸で誘
発される血小板凝集に対する上記ナトリウム塩の
抑制作用を調べた。

予備培養時間を５分とした時の結果は、夫々第
１〜３図と略々同様であり、また予備培養時間を
１分とした時の結果は夫々第４〜６図と同様であ
つた。

実験例 ３ （all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコ
サヘキサエン酸のエチルエステルを500μｇ／ml
エタノール溶液の形態で用いて実験例１と同様の
試験を行つた。

ADP誘発血小板凝集に対する抑制作用の結果
を第７図に、コラーゲン誘発血小板凝集に対する
抑制作用の結果を第８図に及びアラキドン酸誘発
血小板凝集に対する抑制作用の結果を第９図に
夫々示す。各図において曲線１は供試化合物を、
曲線４は対照液（コントロール）を夫々示す。

之等各図よりエチルエステルの形態の本発明化
合物も亦優れた血小板凝集阻止作用を有すること
が判る。

実験例 ４ （all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコ
サヘキサエン酸アミドを供試化合物とし、これを
500μｇ／mlエタノール溶液の形態で使用し実験
例１と同様にする。

結果を第１０〜１２図に示す。第１０〜１２図
は夫々上記第６〜９図に対応するものであり、各
図における曲線１及び４も亦同様のことを意味す
る。尚各図において予備培養時間は５分である。

上記第１０〜１２図から、酸アミドの形態の本
発明化合物も亦遊離酸（第１〜３図）及びメチル
エステル（第６〜９図）の形態のそれらと略々同
様に優れた血小板凝集阻止作用を有することが判
り、それ故血栓症予防及び治療剤として有効であ
る。

実施例 ５ この実験はホルンストラ（Hornstra）の方法
〔Brit.J.Haemotol.，19，321（1970）〕に準じて行
なつた。即ちウイスター系ラツト（雄、250〜350
ｇ）をペントバルビタールの50mg／Kg腹腔内投与
にて麻酔し開腹し、ポリエチレンチユーブで腹部
大動脈に循環路を作成し、その一部を体外に露出
させ閉腹する。上記手術の約24時間後供試動物を
固定台にしばりつけ、その体外循環路にフイルタ
ー（20μｍ、内径13mm）を取り付ける。体外循環
路はヘパリン（200〜400単位）を含む生理食塩水
で満たし、36±１℃に保温した恒温槽内に保持し
た。上記フイルター前部よりADP1μｇ／ml生理
食塩水溶液を約10秒を要して投与して、血小板凝
集を生じさせる。フイルター前後の圧力を測定
し、その差を算出して凝集度の示標とする。

ADPを30分毎に３回投与後上記圧差を算出し
コントロールの凝集度を求め、引き続き、供試化
合物として実験例１で用いたと同じ（all―Ｚ）
―４，７，10，13，16，19―ドコサヘキサエン酸
のアラビアゴム懸濁液を有効成分量100mg／Kgで
経口投与する。この経口投与の１時間後に再度フ
イルター前後の圧差を調べ凝集度を求め、これを
上記コントロールの凝集度と比較して、供試化合
物のADP誘発血小板凝集に対する抑制率を求め
る。その結果上記本発明化合物は、コントロール
に対し平均20％血小板凝集を抑制することが判つ
た。

製造例 １ 各１錠が下記組成を有する錠剤を作成する。

（all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ドコ
サヘキサエン酸 140 mg スターチ 31.4mg 乳 糖 125 mg ポリビニルピロリドン 1.8mg ステアリン酸マグネシウム 1.8mg 計 300 mg

【図面の簡単な説明】

第１図乃至第１２図は、ADP、コラーゲン及
びアラキドン酸の夫々で誘発させた血小板凝集に
対する、本発明化合物の阻止作用を示すための、
実験例に用いた血液試料の濁度（吸光度）の経時
変化を示すグラフであり、各図中１は供試化合物
濃度500μｇ／ml、２は同濃度250μｇ／ml、３は
同濃度125μ／ml、４は対照液（コントロール）
及び５は比較化合物とするEPA濃度500μｇ／ml
の場合を夫々示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ （all―Ｚ）―４，７，10，13，16，19―ド
   コサヘキサエン酸並びに該酸の薬理的に許容され
   る塩、エステル、及びアミドから選ばれた少なく
   とも１種を有効成分として含有することを特徴と
   する血栓症予防及び治療剤。