JPH0146109B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、微生物培養器具に関する。 従来、嫌気性菌の培養においては培養器具に対
し、ゴム栓等の弾性の栓体、例えばスクリユーキ
ヤツプ、シーマー等が使用され、完全に密封する
ようにしていた。 しかしながら、この嫌気性菌の培養では培養
後、移植する際、栓体に採取針を刺通した時、発
生したガスの内圧により培地が吹き出したり、ス
クリユーキヤツプ、シーマー等を取りはずした
際、それらのキヤツプや栓が飛んだりして使用者
が危険にさらされることが多かつた。しかも、そ
の時開いた培養器具の口が外気と接触することに
よつて、外気中の細菌が培養器具内に入り培地が
汚染されたりした。 また、簡単な締め付け部材を用いた栓は嫌気性
菌の産生するガスにより、培養器具内圧が高まり
培養中にその栓が飛び、外気中の細菌により培地
が汚染され、さらには栓とともに飛び散つた嫌気
性菌により、周辺の環境が汚染されるという問題
があつた。 他方、好気性菌の培養には培養器具に対し、例
えばモルトン栓、綿栓、アルミキヤツプ、紙栓等
の通気性のある栓が使用されている。しかし、こ
れらの栓では通気性があるために培地の保存がで
きないこと、試料採取時に栓をあけることによ
り、外気中の細菌に培地が汚染されやすいこと、
運搬中に培地が漏れて簡単に輸送できないこと、
かつ、それによつて使用者が危険にさらされると
いうことなどの欠点があつた。 また、試料採取時には上記栓を取る必要があ
り、その際、外気が浸入して外気中の細菌をも培
養することになり、すでに培養している菌との区
別がつかないこともあつた。 さらに、好気性菌と嫌気性菌を同一の培養器具
を用いて培養しようとした場合、上記密栓を用い
た培養器具では好気性菌が増殖しにくく、通気性
のある栓を用いた培養器具では嫌気性菌が増殖し
にくいという問題点があつた。 このことから、好気性菌及び嫌気性菌の各々の
培養に対して２個の培養器具を使つて培養するこ
とが必要となり、培養手法上、甚だ複雑なものと
なり、合理的、かつ安全で確実な培養法は不可能
であつた。従つて、嫌気性菌及び好気性菌の培養
可能な培地を充填した培養器具を用い、嫌気培養
を可能にさせるためのガス抜きの孔部を形成さ
せ、かつ好気性菌を可能にさせるような孔部を形
成せしめた密閉形の栓体を備えた微生物培養器具
が要求されることとなる。 本発明は、上記事情に関する欠点を改良する為
になされたもので、その目的とするところは嫌気
性菌及び好気性菌の両方が培養可能で、かつより
多くの種類の菌を培養可能であり、またより短時
間で菌を培養可能な微生物培養器具を提供するこ
とにある。また、本発明の他の目的は、使用前の
微生物培養器具を完全に密封しておくことができ
るとともに、嫌気培養の際、特別な装置や付属品
を用いずに、培養器具内に発生するガスを抜き、
同一の栓体及び培地を用いた培養器具で合理的、
かつ安全、確実に好気性菌及び嫌気性菌を培養
し、かつ取り扱うことのできる微生物培養器具を
提供することにある。 培地を充填した容器と、該容器の開口部と嵌合
する栓体とを備えた微生物培養器具において、培
地はトリプトン、大豆ペプトン、肉エキス、イー
ストエキス、肝水解物、グルコース、リン酸水素
カリウム、Ｌ−システイン塩酸塩、ｐ−アミノ安
息香酸、ポリアネトールサルフオネイトナトリウ
ム、ヘミン、ゼラチン及び炭酸水素ナトリウムを
含んでなることを特徴とする微生物培養器具を提
供するものである。 本発明の他の目的は、栓体の胴部に容器内雰囲
気と連通する孔部が貫通して設けられている前記
微生物培養器具を提供することにある。 本発明の他の目的は、栓体が容器内方胴部端面
に凹部を有し、容器内雰囲気は減圧状態である前
記微生物培養器具を提供することにある。 本発明のさらに他の目的は、栓体が容器外方頭
部端面に凹部と胴部容器側の側端部に環状の溝を
有した前記微生物培養器具を提供することにあ
る。 本発明のさらに他の目的は、栓体がゴム弾性物
質からなる前記微生物培養器具を提供することに
ある。 本発明のさらに他の目的は、培地が嫌気性菌培
養培地である前記微生物培養器具を提供すること
にある。 本発明のさらに他の目的は、培地が好気性菌培
養培地である前記微生物培養器具を提供すること
にある。 本発明のさらに他の目的は、培地が嫌気性及び
好気性菌培養培地である前記微生物培養器具を提
供することにある。 次に、本発明の一実施例を図面をもつて、その
具体的構成を説明する第１図で、ブチルゴム、ス
チレンブタジエンゴム等のゴム製栓体４を嵌合せ
しめた微生物培養器具１の組み立てた状態を示
す。ガラス製培養器具１の内部には、好気性菌及
び嫌気性菌を培養するための培地２が充填されて
いる。培養器具１の口部３には栓体４が装着され
ていて、培養器具１を密閉するようになつてい
る。 栓体４は一体に形成された頭部５と、頭部５よ
りやや小径の胴部６からなり、胴部６の容器内方
胴部端面に凹部７を有している。 また、培養器具１の口部３に装着させた栓体４
には、カバー８が被嵌されている。このカバー８
はプラスチツク製またはモルトン栓、アルミキヤ
ツプ、アルミホイルでも良く、栓体４の頭部５の
下部突端９から、わずかなすき間を保つて被嵌さ
れるようになつている。第２図には、栓体の構造
の一実施例を示し、栓体４の胴部６には凹部７に
連通する孔部１０が形成されている。また、胴部
６の容器側の側端部に環状の溝１１が形成されて
いる。この環状の溝１１は培養器具１の内部圧力
が一定以上に達し、栓体４を押し上げ栓体４が上
昇してガス抜きができるが、仮りに栓体４がさら
に押し上げられ、この0.7〜1.0mm巾の溝１１が培
養器具１の口部３の先端にきた際、ゴム弾性によ
つて口部３から栓体４がはずれるのを防止する役
目を果たしている。 一方、嫌気培養によつて発生したガスによつて
内部圧が一定以上になり、栓体４が押し上げら
れ、孔部１０が培養器具１の口部３の先端にきた
際、孔部１０は、このガスを脱気させるととも
に、好気培養における通気孔としての役割も有し
ている。孔部１０の形状は、直径0.3mmないし３
mm程度の円形あるいは、巾0.3mmないし２mm、長
さ２mmないし３mmの長円形を有している。栓体４
に孔部１０が設けられているが、直径0.7mmない
し1.5mmの円形状孔２個の対称的に胴部６の上端
部から３mmないし５mmの位置につけた時が最も良
好である。 なお、栓体４の頭部５の容器外方端面には凹部
１２が形成されていて、試料注入用針及び菌の移
植時の菌採取用針を刺通しやすくするようになつ
ている。 一方、試料を採取する際、培養器具１の内部を
減圧状態にしておけば、試料注入用針を刺通すれ
ば、自動的に注入を行なうことができる。このよ
うにして、嫌気培養及び好気培養においても、気
密状態を維持しながら試料を採取することができ
る。 しかし、嫌気培養ではガスが発生し培養器具１
の内部圧が一定以上になると栓体４を押し上げ、
その結果、孔部１０が培養器具１の口部３の先端
もしくは、それより上の所まできて栓体４は止ま
る。この時、発生したガスは孔部１０を介して外
部に流出し、培養器具１の口部３とカバー８の間
を通つてカバー８の外部へ脱気させる。 なお、発生したガスによつて栓体４がさらに押
し上げられることがあつても、胴部６の容器側の
側端部に設けられた環状の溝１１が培養器具１の
口部３の先端と接触し、ゴム弾性によつて栓体４
が止まるようにできている。そして、脱気後、孔
部１０が培養器具１の口部３の内壁に接するよう
に手で押し下げてやれば、再び培養器具１内を気
密状態に維持することができる。従つて、培養器
具１内の気密状態を維持しながら、内部に発生す
るガスを抜くことができ、しかも培養中、培養
後、栓体４が内圧によつて飛んだり、また培養液
が溢れたりすることはなく、極めて安全である。 一方、好気培養の場合には試料採取後、栓体４
を持ち上げ、孔部１０が培養器具１の口部３の先
端より上に出るようにした後、カバー８をつけて
培養する。つまり、栓体４を培養器具１の口部３
に装置した状態で通気が行なえることができ、し
かも外気中の細菌による汚染も生じない。 なお、上記実施例において培養器具は、試験管
状のものを用いたが、本発明はこれに限定され
ず、口部のみを比較的長い筒状のものとしたフラ
スコ状やボトル状のものであつてもよい。 次に、使用する培地について説明する。 以下の第１表に従来の培地を比較の為に示し、
第２表に本発明で使用する培地を示す。

【表】

【表】

【表】 培地は第１又は第２表の組成に従い次の方法に
より調製する。第１又は第２表に示した培地成分
の内、ゼラチンを除いた他の各成分を秤量し、こ
れらを500mlの蒸留水に溶解する。但し、Ｌ−シ
ステイン塩酸塩及びヘミンは、あらかじめ溶解さ
せて加える。また、これとは別にゼラチンを秤量
し、500mlの蒸留水で加温しながら完全に溶解さ
せる。両者をよく混合した後、室温まで冷却し、
アルカリ溶液でもつてPHを第１表の組成で7.3±
0.1、第２表の組成で7.3±0.2に合わせた後、脱脂
綿を用いて予備過をする。これより得た液を
更にガラスフイルターで減圧過し、得られた
液が培地である。 栓体は、次の方法により製造する。加温溶解し
たゴム状の材料を型に押し入れ、固化成型させて
孔部未有の栓体を得、所定の形状、大きさを有す
る針を熱して、これで栓体に穴をあけるか、もし
くはパンチ等のようなもので穴をあける。上記で
得た培養器具用栓体を洗浄後、自然乾燥又は加温
乾燥させる。これにシリコン油を加えてコーテイ
ング処理する。次に、培養器具と栓体を組み合わ
せる。その方法は20ml用チユーブ（15.5mmφ×
165mm）又は適当なフラスコ状もしくはボトル
状容器等に規定量の培地（20ml用チユーブでは18
ml、フラスコ状もしくはボトル状容器では45ml）
を分注する。器具内を減圧して脱気を行なつた
後、常圧近くまで静かに混合ガス（窒素：二酸化
炭素＝９：１）を送り込む。次いで、規定の吸水
量となるように減圧し、減圧下で栓体を押し込ん
で封栓する。その後、高温高圧蒸気滅菌器でもつ
て115℃、15分間の条件で培養器具を滅菌する。 次に、本発明の作用を真空採血管用ホルダー
（テルモ株式会社製）を使用した場合について説
明する。培養器具の栓体部分をアルコール、ヨー
ドチンキ等で消毒した後、試料用注入針を有した
ホルダーに培養器具を差し込む。次いで、患者の
静脈に試料用注入針を穿刺した後、培養器具をホ
ルダー内に充分深く差し込むと培養器具内部は減
圧となつている為に、所定量の試料が培養器具内
部に注入される。また、これとは別に注射器を使
用した場合に於ても本発明を実施することができ
る。注射器で試料採取後、アルコール、ヨードチ
ンキ等で栓体部分を消毒した培養器具の栓体中心
部に注射針を差し込む。この時、培養器具内は減
圧になつている為、自動的に所定量の試料が注射
筒より吸引され、注入される。 このあと、培養は次のように行なわれる。嫌気
培養の場合、試料採取方法によつて所定量の試料
を吸引した後、27゜〜37℃で１日から14日間培養
を行なう。必要に応じてさらに培養を続けること
もできる。なお、培養開始直前に栓体を一回転さ
せると、ガス抜きが良好に行なわれる。また、好
気培養の場合、嫌気培養と同様に試料採取し、混
合後、孔部の一部又は全部が培養器具の口部の外
部に出るように栓体を持ち上げてから培養を行な
う。 試験 １ まず、嫌気培養において各種ガス産生菌を適当
量の滅菌蒸留水に懸濁し、10¹〜10²個／mlの菌濃
度となるように調製して採取した後、37℃で培養
した。これを毎日観察し培養器具内の菌の生育状
態とガス圧による栓体の移動を調べると、下記第
３表ないし第４表のとおりである。栓体の移動提
示方法は培養開始後、栓体の孔部の一部もしくは
全てが培養器具の口部先端まで移動するに要した
日数で示したものである。そして、ここまで移動
した日から、さらに培養を継続しても、それ以上
の栓体の移動は認められなかつた。

【表】

【表】

【表】 試験 ２ 一方、好気培養においては各種菌株を適当量の
滅菌蒸留水に懸濁し、ほぼ１×10¹〜５×10¹個／
mlとなるように菌濃度を調製してから採取し、栓
体の孔部が培養器具口部の上までくるように、栓
体を持ち上げてから37℃で培養を開始し、２日後
に培養液中の生菌数を常法にしたがつて測定した
ところ、下記第５表および第６表のとおり10⁷〜
10⁹個／mlと良く増殖していた。また、菌を採取
しない対照の培養器具で同様に通気状態にして37
℃で21日間培養した場合でもカバーを装備したと
き、装備しなかつたときのいずれにおいても外気
中の細菌の混入は認められなかつた。

【表】

【表】

【表】 ＊ 滅菌蒸留水の代わりに、ヒト血液を用い
て菌液を作成。
試験 ３ 各種菌株を適当量の滅菌蒸留水に懸濁し、ほぼ
１×10¹〜５×10²個／mlとなるように菌濃度を調
製してから実験に使用した。 好気培養の場合には、栓体の孔部が培養器具口
部の上までくるように栓体を持ち上げてから、ま
た嫌気培養の場合にはそのまま37℃で培養を開始
し、毎日生菌数を常法にしたがつて測定し、生菌
数がほぼ５×10⁷個／ml以上になるのに要する日
数を調べたが、第７表（嫌気培養の場合）と第８
表（好気培養の場合）に示すように幾つかの菌株
について第２表の培地組成の方がすぐれている結
果が得られた。

【表】

【表】

【表】 いて菌液を作成。
＊2) 7日間観察
なお、上記で使用したチユーブ状の培養器具を
使わずに、口部のみを比較的長い筒状のものとし
たフラスコ状や、ボトル状の容器を使つて培養を
行なつても、上記で得られた結果と同じであつ
た。 叙上のように、本発明によれば嫌気性菌及び好
気性菌の両方が培養可能で、かつ従来の培地を使
用した場合に比して多くの種類の菌が培養可能で
ある。また、より短時間で菌を培養可能であり効
率的に微生物の培養を行うことができる。また、
栓体の胴部に該容器雰囲気と連通する孔部を貫通
して設けることにより、嫌気培養によつて発生し
たガスを栓体の孔部より簡単に抜くことができ、
しかも栓体の孔部が培養器具の口部より上になる
ように、栓体を持ち上げておけば好気培養もでき
る。つまり、同一の栓体および培地を有した培養
器具でもつて、嫌気性及び好気性菌もを培養する
ことができ、培養中、培養後、栓体や培地が飛散
することがない為、極めて安全かつ確実に培養を
行なうことができる。また、ガス抜きや通気の為
には他の付属品を必要としない為、製作が容易で
あり、コストも安い等の種々の効果を奏するもの
である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の微生物培養器具の使用前の状
態を示す一部切欠断面図、第２図は栓体の一部断
面図である。 １……培養器具、２……培地、３……培養器具
の口部、４……栓体、５……栓体頭部、６……栓
体胴部、７……胴部の凹部、１０……孔部、１１
……環状の溝。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 培地を充填した容器と、該容器の開口部と嵌
   合する栓体とを備えた微生物培養器具において、
   培地はトリプトン、大豆ペプトン、肉エキス、イ
   ーストエキス、肝水解物、グルコース、リン酸水
   素カリウム、Ｌ−システイン塩酸塩、ｐ−アミノ
   安息香酸、ポリアネトールサルフオネイトナトリ
   ウム、ヘミン、ゼラチン及び炭酸水素ナトリウム
   を含んでなることを特徴とする微生物培養器具。 ２ 栓体は、その胴部に該容器内雰囲気と連通す
   る孔部が貫通して設けられている特許請求の範囲
   第１項記載の微生物培養器具。 ３ 栓体は、容器内方胴部端面に凹部を有し、容
   器内雰囲気は減圧状態である特許請求の範囲第１
   項記載の微生物培養器具。 ４ 栓体は、容器外方頭部端面に凹部と胴部容器
   側の側端部に環状の溝を有した特許請求の範囲第
   ２項記載の微生物培養器具。 ５ 栓体は、ゴム弾性物質からなる特許請求の範
   囲第１項又は第４項のいずれかに記載の微生物培
   養器具。 ６ 培地は、嫌気性及び好気性菌培養培地である
   特許請求の範囲第１項記載の微生物培養器具。