JPH01500367A - 可溶性ｔ細胞表面分子を使用した治療および診断 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 可溶性Ｔ細胞表面分子を使用した治療および診断１、イントロダクション 本発明は、可溶性Ｔ細胞生長因子レセプターおよびＴ細胞分化抗原またはそのフ ラグメントのような可溶性Ｔ細胞表面分子の測定および疾病および障害の診断お よび治療におけるこのような測定の適用に関する。このような分子の測定は、治 療処置の効果を検査し、疾病または生理学的状態の鑑別診断を検出しかつ／また は段階づけるのに使用され得る。

主−凡盟凶宣屡 ２．１．Ｔ細　およびレセプター Ｔ細胞は、造血細胞の免疫調整に影響を与える種々のポリペプチドを分泌し、ま たそれ自身ホルモンペプチドがこれらの細胞表面上の特定のレセプターと相互作 用することによって調整される。最初に命名されたＴ細胞生長因子、インターロ イキン２は、マクロファージ誘導インターロイキン１の存在下、抗原またはレク チン活性化Ｔリンパ球によって合成されかつ分泌され、またその生物学的作用を 及ぼすために特定の高親和膜レセプターと相互作用しなければならない。［スミ ス、ケイ、エイ、　１９８０年、イムロル。

シブ。５１：第３３７〜３５７頁；レオナード、ダブり二一、ジェイ等１９８３ 年、ブロス、ナトル、アカド、サイ、ニー、ニス、エイ　８０；第６９５７〜６ ９６１頁（Ｓｍｉｔｈ、　Ｋ、＾、、　１９８０．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｒｅｖ、 ５１：３３７−３５７；　Ｌｅｏｎａｒｄ、Ｗ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、１９８ ３．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８０：６ ９５７−６９６１月。インターロイキン２レセプター（ＩＬ２Ｒ，Ｔａｃ抗原） は、休止ＴまなはＢリンパ球の表面上には存在しない、特定の抗原またはマイト ジェンによる活性化において、Ｔ細胞増殖は、オートウリンメカニズム（ａｌＪ ｔＯｃｒｉｎｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）によって伝えられそれによって活性細胞 は、インターロイキン２（ＩＬ−２）を分泌しまたさらにＩＬ−２（ＩＬ２Ｒ） に対する細胞表面レセプターを発現する［ミューラ、ジエイ。

ダブり二一、およびガロ、アール、シー、　１９８０年、ブロス。

ナ）〜ル、アカド、サイ、ニー、ニス、エイ、７７：第６１３４頁；ロブ、アー ル、ジェイ等、　１９８１年、ジエイ、エキスボ。

メト、　１５４：第１４５５頁；レオナード、ダブリュー、ジエイ等。

１９８２年、ネイチャー　３００　：第２６７頁；ミューラ、ニス。

シー等、　１９８４年、ブロス、ナトル、アカド、サイ、ニー。

ニス、エイ、８１：第１５０９頁；ツドー、エム、等、　１９８４年。

ジェイ、エキスプ、メト、　１６０：第６１２〜６１７頁；ウオルドマン、ティ ー、エイ、等、１９８４年、ジエイ、エキスプ、メト、　１６０　：第１４５０ 〜１４６６頁（Ｍｅｔｒ、　Ｊ、Ｗ、、　ａｎｄ　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ、、１ ９８０，ｐｒｏＣ，Ｎａｔｌ、　ＡＣａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔｌ、ｓ、Ａ、　７７ ：６１３４；　Ｒｏｂｂ、　Ｒ，Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８１．　Ｊ、　Ｅ Ｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５４：１４５５；　Ｌｅｏｒｉａｒｄ。

Ｗ、Ｊ、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８２．　Ｎａｔｕｒｅ　３００；２６７；　Ｈ ｅｕｅｒ、　Ｓ、Ｃ，、ｅｔａｌ、、　１９８４．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８１：１５０９；　Ｔｓｕｄｏ、　Ｍ、 　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４．　Ｊ、　Ｅｘｐ、　）ｌｅｄ　１６０：６１２− ６１７；　Ｗａｌｄｍａｎｎ　、Ｔ、Ａ、、ｅｔ　ａｔ、、１９８４．　Ｊ、Ｅ ｘｐ、　Ｍｅｄ、１６０：　１４５０−１４６６）１　。

ＩＬ−２とその細胞表面レセプターとの相互作用は、連続的Ｔ細胞増殖を引き起 こすしグリーン、ダブリュー、シイ−およびレオナード、ダブリュー、ジェイ、 　１９８６年、アン、シブ。イムツル、４：第６９〜９５頁；スミス、ケイ、エ イ、　１９８４年、アン、シブ。イムツル、２：第３１９〜３３３頁（Ｇｒｅｅ ｎ、　Ｗ、Ｃ，ａｎｄ　Ｌｅｏｎａｒｄ、　Ｗ、Ｊ、、１９８６．　Ａｎｎ、　 Ｒｅｖ、、　Ｉｍｍｕｎｏｆ、　４：６９−９５；Ｓｍ１ｔｈ、に、Ａ、、１９ ８４．　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｔ、　２：３１９−３３３）ｌ。Ｉ Ｌ−２Ｒの測定は、リンパ様集団の免疫活性の状態の情報を提供する。これは、 流出血球計算（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）または螢光顕微鏡を使用して細胞 表面上のＩＬ２Ｒを測定することによって達成される。ＩＬ−２レセプターを限 定するモノクローナル抗体を使用して、変更ＩＬ−２レセプター発現（ｅｘｐｒ ｅｓｓｉｏｎ＞がいくつかの免疫異常性において報告されている［前記グリーン およびレオナード；デバー、ジエイ、エム等、　１９８４年、ジェイ、イムツル 。

１３３：第１６９１〜１６９５頁（Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｌｅｏｎａｒｄ、　 ５ｕｐｒａ；　ｏｅｐｐｅｒ、　Ｊ、Ｍ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４．　Ｊ 、　ｒｍｍｕｎｏｌ、　１３３：１６９１−１６９５）ｌ。

膜ＩＬ２Ｒは、バーキットリンパ腫［ウアルドマン、ティー、エイ等、　１９８ ４年、ジェイ、エキスプ、メト、　１６０：第１４５０〜１４６６頁　（Ｗａｌ ｄｍａｎｎ、丁、Ａ、、ａｔ　ａｌ、、１９８４．　Ｊ、Ｅｘｐ、）ｌｅｄ。

１６０：１４５０−１４６６）］　、ヘアリー細胞リすパＩｌ！［ウォルドマン 、ティー、エイ等、前記：コースメイヤー、ニス、ジエイ。

等、　１９８３年、ブロス、ナトル、アカド、サイ、ニー、ニス。

エイ、８０二第４５２２〜４５２Ｂ頁（Ｗａｌｄｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ、、　」 逗稈１；　Ｋ。

ｒｓｍｅｙｅｒ、　Ｓ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８３．　Ｐｒｏｃ、　Ｗ ａｔｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

Ｕ、Ｓ、Ａ、　８０：４５２２−４５２６）３およびヒトＴ細胞白血病ウィルス （ＨＴＬＶ）−Ｉ関連成人Ｔ細胞白血病［デバー、ジェイ。

エム等、１９８４年、ジエイ、イムイル、　１３３：第１６９１〜１６９５頁（ Ｄｅｐｐｅｒ、　Ｊ、ｔｌ、、ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ ｏｌ、　１３３：１６９１−１６９５）１を含む一定のＢまたはＴ細胞悪性腫に おいて見い出されている。リンパ様悪性腫の中の細胞性ＩＬ２Ｈの機能は、まだ 十分に解明されていない。数多くの場合共通に、プレーＢまたはＴ細胞急性リン パ芽球性白血病（ＡＬＬ）がインビトロ活性化ｆ＆ＩＬ２Ｒを発現することが示 されており［トウ、アイ等、１９８５年。ブラッド　６６；第５５６〜５６１頁 ；トウ、アイ等、１９８６年、ブラッド　６８二第１０８８〜１０９４頁：マツ オカ、エム等、　、　１９８６年、レウク、レス、１０：第５９７〜６０３　頁 　（丁ｏｕｒ、１．、ｅｔ　ａｌ、、１９Ｂ５．　１３１ｏｏｄ　６６：５５６ −５６７；Ｔｏｕｗ、　１．、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　Ｂｌｏｏｄ　６ ８：１０８８−１０９４；　）ｌａｔｓｕｏｋａ、　）１．、　ｅｔ　ａｌ、、 　１９８６．　Ｌｅｕｋ、　Ｒｅｓ、　１０：５９７−６０３）ｌ　、また、い くつかの場合、インターロイキン２は、インビトロにおける新生先駆細胞（ｎｅ ｏｐｌａｓｔｉｃ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ）の連続コロニー形成を 刺激した「前記トウ、　１９８５年；前記トウ、１９８６年　（丁ＯＵＷ、１９ ８５．　ｊ１旦り旦工　丁ｏｕｗ、１９８６．−≦」Ｌｐ」＝？、）］。

慢性リンパ球球性白痢を有する患者からの白血病細胞は、レセプターを有し外因 性インターロイキン２への良好な増殖性応答を示すことが示された「ウチャマ、 ティー等、１９８５年、ジェイ、タリン、インヴエスト、７６：第４４６〜４５ ３頁；ブドウ。エム、　１９８６年、ブラッド　６７：第３１６〜３２１頁（Ｕ ｃｈｉｙａｍａ、　Ｔ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８５．　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　 Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：４４６−４５３；　Ｔｓｕｄｏ、　Ｍ、、　ｔ９８６． Ｂｌｏｏｄ　６７：３６１−３２１）　Ｉｉ　、しかしながら、ＨＴＬＶ−１関 連成人Ｔ細胞白血病は、本質的に高いレベルの細胞表面ＩＬ２Ｒを発現するがイ ンターロイキン２への増殖性応答を全く示さないかまたはごくわずかにしか示さ ない１前記ウチヤマ、１９８５年；アリア、ニス、ケイ等、　１９８４年、サイ エンス　２２３：第１０８６〜１０８７頁（Ｕｃｈｉｙａｍａ、１９８５．５ｕ ｐｒａ；　Ａｒｙａ、　Ｓ、に、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４．５ｃｉｅｎｃ ｅ　２２３：　１０８Ｂ−１０８７）］。エバー１〜等（Ｅｂｅｒｔ　ｅｔ　ａ ｌ、）は、エイズ（ＡＩＤＳ）ウィルスを有する患者からのＴ細胞が細胞が活性 化された際にもこれらの表面上にＩＬ２Ｒを発現する能力に欠けることを報告し ている［１９８５年、タリノ。

イムツル、イムツバソール、３７：第２８３〜２９７頁（１９８５、Ｃｌ１ｎ、 　Ｉｍｎｕｎｏｌ、　Ｉｎ！Ｔｌｕｎｏｐａｔｈｏ１．３７：２８３−２９７） ］。

］インターロイキンー１ＩＬ−１＞のようなＴ細胞活性化における二次信号は、 単球または他の補助細胞によって提供され、またＩＬ−２分泌物が必要とされる ［シエミデク、ジェイ、アールおよびハツトフィールド、ニス、　１９７６年、 ジエイ、イムイル、　１１６：第３５７頁：マイツエル、エイ。

エル等、　１９８１年、ジエイ、エキスプ　メト、　１５３：第４７０頁；ウィ リアムス、ジエイ、エム等、　１９８５年、ジエイ、イムツル、　１３５：第２ ２４９頁（Ｓｃｈｍｉｄｔｋｅ、　Ｊ、Ｒ，、ａｎｄ　１ｉａｔｆｉｅｌｄ、　 Ｓ、。

１９７６、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１１６：３５７；Ｍａｉｚｅｌ、　Ａ、Ｌ 、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８４、　Ｊ、　Ｅｘｔ）　Ｍｅｄ、　１５３：４７ ０；　ＷｉｌｌｉａｍＳ、　Ｊ、Ｈ，ｅｔ　ａｌ、、　１９８５゜Ｊ、Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、１３５：２２４９）］。

２、２．　Ｔ絹表 ヒト白血球分化抗原を限定する分化の菌株群（ＣＤ）が分化抗原に対して誘導さ れるモノクローナル抗体の反応性の比較によって設定されているしパーナートお よびボウムスウエル、１９８４年、ヒユーム、イムツル、１１．第１〜１０頁（ Ｂｅｒｎａｒｄ　ａｎｄ　Ｂｏｕｍｓｅｌｌ、　１９８４．　ｌｌｕｍ、　Ｔｍ ｍｕｎｏｌ、　１１：１−１０）１゜Ｔ細胞表面抗原、エピトープ限定亜群中の それらの分類およびＴ細胞上のその分布は、ヒ１−Ｔ細胞に対して誘導されるモ ノクローナル抗体の使用によって研究されている［クラーク等、１９８３年、イ ムノジェネティクス　１８：第５５９〜６１５頁；ハンセン等、　１９８４年、 イン　レウコセイト　タイピング、パーナート９エイ等編、スブリンガーーベル ラグ、ニューヨーク、第１９５〜２１２頁（Ｃ１ａｒｋ　ｅｔ　ａｔ、、　１９ ８３．　ＩｍｍＬｌｎｏ（ｌｅｎｅｔｉｃｓ　１８：５５９−６１５；　Ｈａｎ ｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８４．　ｉｎ　Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ　丁ｙｐｉｎｇ 、Ｂｅｒｎａｒｄ、Ａ、、ｅｔ　ａｔ、、ｅｄｓ、、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒ ｌａｇ、　ＮｅＷ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、　１９５−２１２）］、　イ＜）かの分 化のＴ細胞菌株群および他のＴ細胞表面分子を第１表に示す。

これらのＴ細胞表面マーカーは、細胞直径（ｌ　ｉ　ｎｅａｇｅ）のマーカー、 Ｔ細胞が属す機能的Ｔ細胞サブセットの同一性およびＴ、１Ｂ胞の活性化状態と して勤める。いくつかの：ＦＢｉ表面分子は、非常に詳細に研究されており、免 疫機能を開始しまた規制するのに重要であり、また免疫細胞間の伝達プロセスに 重要であることが見い出されている。Ｔ細胞抗原レセプター、すなわち９０キロ ドルトン（ｋｄ）程度のジスルフィド結合ダイマーから成る表面分子は、特定の 抗原を認識しかつＴ細胞活性化プロセスを構成する生化学的エベント（ｅｖｅｎ ｔ）の複合体系列を開始するのに応答可能である「ミューシー、ニス、シー等、 　１９８４年、アン、レブ。

イムイル、２第２３〜５０頁、アキュート１オー等、　１９８３年。

セル　３４；１第７１７９〜７２６８頁（）ｌｅｕｅｒ、　Ｓ、　Ｃ，ｅｔ　ａ ｌ、、１９８４゜Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２：２３−５０；　 Ａｃｕｔｏ、　Ｏ，、ｅｔ　ａｔ、、　１９８３．。

Ｃｅ１ｌ　３４ニア１７−７２８）］　ＣＤ３ｔｆｌ造は、Ｔ！ｆＪ胞レセプタ ーに会合しな３鎖複合体である［カンネロボウラス、ジエイ、エム等、　１９８ ３年、イーエムビーオー　ジェイ、２：第１８０７頁；プロスト、ジェイ等、　 １９８３年、ヨーロ、ジェイ、イノ、ノル１３；第５７６頁；ファン　アン　エ ルセン、ぺ一等、１９８４年、ネーチャー　３１２．第４１３頁；ミューラー、 ニス、シー等、　１９８３年、ジェイ、エキスプ、メト、　１５７：第７０５頁 （Ｋａｎｎｅｌｌｏｐｏｕｌｏｓ、　Ｊ、Ｍ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９Ｂ３．　 ＥＭＢＯＪ、　２：１８０７；　Ｂｏｒｓｔ、　Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９ ８３．　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ　１３：５７Ｂ、　Ｖａｎ　Ｄａｎ　 ＥＩＳｅｎ、　Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　ｔｖａｔｕｒｅ　３１２： ４１３；　Ｈｅｕｅｒ、　Ｓ、Ｃ、、ｅｔ　ａｌ、、　１９８３．　Ｊ、　ＥＸ Ｉ）、　）ｌｅｄ、　１５７：７０５）］　、例えばインターロイキン２（ＩＬ −２）レセプターおよびインターロイキン１（ＩＬ−１＞レセプターのようなリ ンフ才力インレセプターは、Ｔ細胞の活性化および増殖に必須である［スミス、 ケイ、エイ、　１９８４年、アン、　シブ。イムツル。

２：第３１９〜３３３頁；ドウワアー、ニス、ケイ等、　１９８５年、ジエイ、 　エキスプ、メト、　１６２：第５０１〜５１５頁（Ｓｍｉｔｈ、　Ｋ、Ａ、、 　１９８４．　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２：３１９−３３３； 　ＤｏＷｅｒ、　Ｓ、に、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．　Ｊ、　ＥＸｐ、　 Ｍｅｄ、１６２：５０１−５１５）］、　ＣＤ８は、３０％程度のＴリンパ球の 表面上に発現されるＴ細胞特異表面分子であり、抑制（５ｕｐｒｅｓｓｉｏｎ） および細胞毒官能基と会合される。ＣＤ４　（ＯＫＴ４抗原）は、全Ｔリンパ球 の約６０％の表面上に発現され、ヘルパー官能基と会合される「レインハーツ等 、　１９７９年、プロス、ナトル、アカド、サイ、ニー、ニス、エイ、７６：第 ４０６１〜４０６５頁（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７９．　ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ。

Ａ、　７６：４０６１−４０６５）コ。ＣＤ４はまた、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ ウィルス関連後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に対するレセプターとして同定 されている「マクドウギャル、ジェイ、ニス等、　１９８６年、サイエンス　２ ３１；第３８２〜３８５頁（）ｌｃＤｏｕｇａｌ、　Ｊ、Ｓ、、　ｅｔ　ａｔ、 、　１９８６．５ｃｉｅｎｃｅ　２３１：３８２−３８５）］　、これらのウィ ルス組細胞表面マーカは、リンパ球集団およびそれらの機能的状態の同定に対し て莫大な医療的適用の可能性を示す［クレンスキー、エイ、エムおよびクレイバ ーガー、シー、　１９８５年、トランスプラント、　３９（４）　：第３３９〜 ３４８頁；カング、ビー、シー等、　１９８４年、モノクローナルアンチボディ ズ　イン　クリニカル　インベスティゲーションズ、クリニカル　バイオケミス トリー−コンテンポラリイ　セオリーズ　アンド　テクニクス、第３巻、アカデ ミツクプレス、第８９〜１１５頁；カンタ、ビー、シー等。

１９８３年、インド、ジエイ、ダーマトール、　２２（２）　：第６７〜７３頁 （Ｋｒｅｎｓｋｙ、　Ａ、）１．　ａｎｄ　Ｃｌａｙｂｅｒｇｅｒ、　Ｃ，、１ ９８５，ＴｒａｎｓｐＩａｎｔ、　３９（４）　：　３３９−３４８；Ｋｕｎｇ 、　Ｐ、Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　）Ｉｏｎ。

ｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　ＩｎＶｅＳｔ ｉｇａｔｉＯｎＳ、　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ｃｏｎｔ ｅｍｐｏｒａｒｙ　丁ｈｅｏｒｉｅｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、　ｖｏ ｌ、３．　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　ｐｐ、　８９−１１５；　Ｋｕｎ ｇ、　Ｐ、Ｃ，、ｅｔａｌ、、　１９８３．　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｄｅｒｍａｔｏ ｌ、２２（２）　：６７−７３）　：。

Ｔ細胞の型を決定すること（ｔｙｐｉｎｇ）の現在の医療的方法は、Ｔ細胞表面 上の特異細胞表面マーカーの存在を検出するためにＴ細胞表面マーカーを限定す るモノクローナル抗体の使用を含む。表面マーカーによってＴ、［胞の総数を測 定することは、リンパ系悪性度の特性決定および分類に有益である［グリーブス 、エム等、　１９８１年、インド、ジェイ、イムノファーマック、３（３）：第 ２８３〜３００頁（ＧｒｅａＶｅｓ、　Ｈ，、ｅｔ　ａｔ、、　１９８１．　Ｉ ｎｔ　−Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃ、　３（３）　：２６３−３００） ｌ。ＴヘルパーとＴサプレッサー／細胞毒細胞との相対百分率の変化は、ウィル ス性感染による肝、臓移植における免疫エベント（ｅｖｅｎｔ）　［コルビン、 アール、ビー等。

１９８１年、プロス、エイス、インド、コングレ、ネフロル、。

アテネ、第９９０〜９９Ｂ頁（Ｃｏｌｖｉｎ、　Ｒ，Ｂ、　ｅｔ　ａｌ、、　１ ９１３１．　Ｐｒｏｃ、　８ｔｈ　Ｉｎｔ、　Ｃｏｎｇｒ、　Ｎｅｐｈｒｏｌ、 　Ａｔｈｅｎｓ、　ｐｉ）、　９９０−９９６）ｌ、自動免疫疾患「ベイズ、イ ー、エム等、１９８１年、インド。

ジェイ、イムノファーマック、３（３）：第３１３〜３１９頁（ｖｅＶｓ、Ｅ、 Ｍ、、ｅｔ　ａｌ、、１９８１．　Ｉｒ１ｔ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａ ｃ、　３（３）　：３１３−３１９）］およびＡＩＤＳ［ガプタ、ニス、　１９ ８６年、タリフ。イムツル、イムノノアソール。３８：第９３〜１００頁；エバ ート、イー、シー等、、　１９８５年、タリフ。イムツル、イムノノアソール。

３７：第２８３〜２９７頁（Ｇｕｐｔａ、　Ｓ、、　１９８Ｂ、　Ｃｌ１ｎ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　ＩｍｍＵｎＯｐａｔｈＯ＋、　３８：９３−１００；　Ｅｂ ｅｒｔ、　Ｅ、Ｃ，ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ 、　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、　３７：２８３−２９７月が関連することを見 い出した。

Ｔ細胞表面マーカーの発現はまた、患者の免疫状態の評価にも使用されている。

末梢血または組織中の認識の相対数、機能的Ｔ細胞サブセット、および／または 活性細胞の相対数を測定することによって患者の免疫学的状態の評価が可能であ ることが立証されている。活性化抗原（例えばＩＬ−２レセプターのような）は 、Ｔ細胞生長および分化プロセスに含まれるらしい。

２．３．ＩＩＩ゛・　細表 い（つかの免疫細胞表面マーカーが血清中に検出されている。ヒト主組織適合性 複合系の分子（ＨＬＡ分子）は、免疫認識に含まれる一連の細胞表面糖タン白で ある。これらの高分子性抗原は、血清のような体液に存在することも見い出され ている［ペレグリノ、エム、エイ等、　１９８４年。

、ｐ＜ス、ｘンザイモル、　１０８：第６１４〜６２４頁（Ｐｅｌ　Ｉｅｇｒｉ ｎｏ。

Ｍ、Ａ、、ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　Ｈｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１０ ８：６１４−６２４）ｌ。

第１類ＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂの血清レベルは、血清中のＨＬＡの型を定め ることを実現するに十分な量存在することが見い出されている。［う、ノソー、 シイ−等、１９８３年、トランスプラント、プロス、　１５（１）　：第６６〜 ６８頁；ペレグリノ、エム、エイ等、　１９８１年、トランスプラント、プロス 、　１３（４）　：第１９３５〜１９３８頁（Ｒｕｓｓｏ、　Ｃ，、ｅｔ　ａｌ 、、　１９８３、　丁ｒａｎｓｐｌａｎｔ、Ｐｒｏｃ、１５（１）：　６６−６ ８　：　Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏ、Ｈ，Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８１．　Ｔ ｒａｎｓｐｌａｎｔ、　Ｐｒｏｃ：　１３（４）　：　１９３５−１９３８）］ 。血清中の第１ＩＵＨＬＡ−ＤＲの存在もまた検出されている［サンドリン、エ ム、ニス等、　１９８１年、ジエイ、ナトル。

キャンサー　インスト、　６６（２）：２７９−２８３　：う・ノソー、シイ− 等、　１９８３年、トランスプラント、プロス、　１５　（１）：５７−５９） 】。血清ＨＬＡ−ＤＲ（Ｉａ）は、腫瘍患者において著しく弱められることが見 い出された。しかしながら、ＨＡＬ分子は、多数の細胞タイプに存在するため、 疾病診断に対する有効性が制限される。

ヒトＩＬ２Ｈの異なるニブトープに対するモノクローナル抗体を使用して、ルー ピン等（Ｒｕｂｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、　）　［１９８５年、ジェイ、イムツル、 　１３５：第３１７２〜３１７７頁、　１９８５年、フェト、プロス、４４：第 ９４６頁（１９８５，Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３５：　３１７２−３１７７ ：　１９８５．　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、４４：９４Ｂ）］は、正常末梢血分子細 胞を活性化することにより遊離されまたＨＴＬＶ−Ｉ感染白血病細胞系によって インビトロで多量に合成されるＩＬ２Ｒの可溶性形態を検出した。サンドウィッ チ酵素免疫検定は、可溶性ＩＬ２Ｒを定量化するのに使用された。

可溶性免疫活性分子は、５５〜６５キロドルトンのＩＬ２Ｒの細胞表面形態より いくぶん小さく、またタン自分解性遊離形態またはできる限り膜内性部位をかく 分泌種のいずれかであるだろう［トレイガー、ビー、エフ等、　１９８６年。

ジェイ、イムツル、　１３６：第４０９９頁（Ｔｒｅｉｇｅｎ、　Ｂ、Ｆ、、　 ｅｔ　ａｔ、、　１９８６．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３６：４０９９）］ 　、可溶性ＩＬ２Ｈの機能的有意（５１ｇｎ１　ｔ　１ｃａｎｃｅ）についてほ とんど知られいない。

可溶性ＩＬ２Ｒがインターロイキン２を結合することができるなめ［前記ルーピ ン、エル、エイ等、１９８５年（Ｒｕｂｉｎ。

Ｌ、Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．５ｕｐｒａ）１．それは、リガンドに 対して細胞性ＩＬ２Ｒと競合することによって、免疫調節の役割を示し、従って 、免疫応答を下方調節（ｄｏｗｒｉ−ｒｅｇｕｔａｔｉｎｃ＋）する。これに関 し、可溶性ＩＬ２Ｒが腫瘍への宿主の免疫応答を抑制する悪性細胞によって産生 される「遮断因子」であることが提案されている［ルーピン、エル、エイ等、　 １９８５年、前記、グリーン、ダブリュー、シイ−等、１９８６年、アン、イン ターン、メト、　１０５　：第５６０〜５７２頁（Ｒｕｂｉｎ、Ｌ、＾、、ｅｔ 　ａｌ、、１９８５．　５ｕｐｒａ；　Ｇｒｅｅｒｉｅ、Ｗ、Ｃ，、ｅｔａ！、 、　１９８Ｂ、　Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｒ＋、　Ｍｅｄ、　１０５：５６０−５ ７２）、また、中耳炎を有する小児は、健康成人に関して報告されたものと比較 して、可溶性ＩＬ２Ｒレベルが上昇していることが見い出されている［前記グリ ーン、ダブリュー、シー等、１９８６年（Ｇｒｅｅｎｅ、　Ｗ、Ｃ，ｅｔ　ａｌ 、、　１９８Ｂ、　５ｕｐｒａ）ｌ、引続きの研究は、健康成人からの　相分ま たは末梢血における可溶性Ｉ　Ｌ２Ｈの匹敵するレベルを開示している［グリー ン、ダブりニー、シイー等、１９８６年、アン、インターン、メト。

１０５：第５６０〜５７２頁：ネルソン、ディー、エル等、　１９８６年、ペデ イエートリ、リス、２０；第１３６〜１３９頁（Ｇｒｅｅｎｅ、　Ｗ、Ｃ，、ｅ ｔ　ａｌ、、　ｔ９８Ｂ、　Ａｎｒｉ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　）！ｅｄ、　１０５ ：５６０−７２０；Ｎｅ１ｓｏｎ、　Ｄ、Ｌ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　 ｅｄｉａｔｒ、　Ｒｅｓ、　２０：１３６−１３９）］。

ＩＬ２Ｈの増加血清レベルは、ＨＴＬＶ−Ｉ関連成人Ｔ細胞白血病、セザリー症 候群、ホジキン病、慢性リンパ球白血病、毛髪状細胞白血病（ｈａｉｒｙ　ｃｅ ｌｌ　ｌｅｕｋｅｍｉａ）およびＴ細胞リンパ腫を含む一定のＢまたはＴ細胞悪 性を有する患者に見い出されている［前記グリーン、ダブり二一、シイ＋、　１ ９８６年；ネルソン、ディー、シイ−、１９８６年、フェト。

プロス、４５；第３７７頁；サーチ。シイー等、　１９８６年、フェト、プロス 、４５：第３７８頁、マツキーン、エル等、　１９８６年。

フェト、プロス、４５；第４５４頁；ルーピン、エル、エイ等。

１９８６年、イン　レウコサイツ　アンド　ホスト　ディフェンス、　オッペン ハイム、ジエイ、　ジエイおよびディー。

エム、　ヤコブ編、アラン　アール、リス、インコーボレーテッド、ニューヨー ク、第９５〜１０２頁（Ｇｒｅｅｎｅ、　Ｗ、Ｃ。

、　１９８６．　並肛り、Ｎｅ１ｓｏｒｉ、　Ｄ、Ｃ，、１９８６，Ｆｅｄ、　 Ｐｒｏｃ、　４５：３７７；５ａａｄｅｈ、　Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、、　１９８６ ．　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、４５；３３ｆ３；ＭａｃＫｅｅｎ。

Ｌ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８６．　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、　４５：４５４； 　Ｒｕｂｉｎ、　Ｌ、Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　ｉｎ　Ｌｅｕｋｏ ｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｈｏ５ｔ　Ｄｅｆｅｎｓｅ、　０ｐｐｅｒ＋ｈｅｉｍ、　 Ｊ、、Ｊ、、　ａｎｄ　Ｄ、Ｈ，Ｊａｃｏｂｓ、　ｅｄｓ８．　Ａｌａｎ　Ｒ， Ｌｉ５Ｓ、　Ｉｎｃ、。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、　９５−１０２　］　、また可溶性ＩＬ２Ｒ上昇レ ベルは、ＡＩＤＳ患者［前記サーチ。シイー１等、　１９８６年（Ｓａａｄｅｈ 、　Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．５ｕｐｒａ）’］の血清中の存在（同前 ）またリウマチ性関節炎および紅斑性狼癒のようなインビボにおいてＴ細胞活性 化を増加されることを特徴とする他の治療学的状態の血清中に存在［ネルリン、 ディー。

エル、　１９８６年、フェト、プロス、４５：第３１１頁：マツキーン、エル等 、　１９８６年、フェト、プロス、４５：第４５４頁（ＮｅＩｓｏｎ、　Ｄ、Ｌ 、、　１９８６．　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、　４５：３７７；Ｍａｃｋｅｅｒｉ、 　Ｌ、、　ｅｔａｌ、、　１９８６．Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、　４５：４５４月が 報告されている。本願発明者らはまた、デビット　ネルリン等（Ｄａｖｉｄ　Ｎ ｅ１ｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、）の名において１９８５年４月１９日に出願され米国 政府に譲渡されまた「インディケータとしての可溶性　インターロイキン−２レ セプターおよびその検定方法じ５ｏｌｕｂｌｅ　Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｒ−２Ｒ ｅｃｅｐｔｏｒ　Ａｓ　Ａｎ　Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｏｆ 　Ａｓｓａｙｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｓａｍｅ）　Ｊと称する米国特許出願番号第７２ ４、８９７号の係属中の米国特許出願を承知している。ルーピン等（Ｒｕｂｉｎ 　ｅｔ　ａｌ、、　）［１９８５年、ジェイ、イムツル、　１３５（５）、：第 ３１７２〜３１７７頁（１９８５，Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３５（５）ｌ： ３１７２−３１７７）］のものと全く同一のデータを含むこの特許出願は、可溶 性ＩＬ−２レセプター検定法に関し１、また疾病を診断および検査する方法を記 載することを趣旨としている。

しかしながら、ルーピン等（同上）は、治療処置の効果を検査する方法、認定さ れた分類に従って、疾患の過酷さの程度を評価する方法または２以上の暗示され た疾患ないし状態の中から１つの疾患ないし状態を特異的に診断する方法を教示 または提案していない。さらに、米国特許出願第７２４，９８７号は、当業者に 治療処置の効果を検査し、疾病の過酷さを評価し、または２以上の疾病または状 態の中から１つの疾病または状態を特異的に診断することを可能にしない。

Ｔ細胞上に主に存在するいくつかの他の細胞表面マーカーもまた、可溶性形態に 見い出されている。ＣＤ２、すなわち全正常Ｔ細胞およびヒツジ赤血球に対する レセプターに存在するＴ細胞表面分子は、正常の比較患者に見い出されるよりも 一定のがん患者の血清中に高いレベルで検出されている［ファルカオ、アール、 ビー等、　１９８４年、タリノ。

ラブ、イムツル、１３；第１４１〜１４３頁；オー、ニス、−ケイ等、　１９８ ５年、スキヤント、ジエイ。イムツル、　２２：５ｌ−６０（ＦａｌＣａＯ，Ｒ ，Ｐｌ、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４．　Ｃｌ１ｎ、　Ｌａｂ、　Ｉｍｍｕｎｏ ｌ、　１３：１４１−１４３；　Ｏｈ、　Ｓ、−に、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９ ８５．５ｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｉｍｍｎｏｌ。

２２：　５ｌ−６０）］。サプレッサー／細胞毒Ｔ細胞の表面上に見い出された 表面マーカーそしてそれは細胞性認定に含まれるＣＤ８　（Ｌｅｕ２，０ＫＴ８ ＞は、Ｔ細胞白血病患者の血清中に高い上昇レベルで報告されている［フジモト 、ジェイ等、　１９８３年、ジェイ、エキスボ、メト、　１５９：第７５２］〜 １６６頁（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ、　Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８３．　Ｊ、　Ｅ ｘｐ、　Ｈｅｄ、　１５９ニア５２−７６６）１．　Ｌ　ｅ　ｕ　−１、すなわ ち、他のＴ細胞表面マーカーは、抗Ｌｅｕ−１モノクローナル抗体処置に従って 血清中に測定される［ミラー、アール、エイ等、　１９８２年、二ニーイングル 、ジエイ、メト、３０６第５１７〜５２０頁（Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｆ＜、　Ａ、、 　ｅｔ　ａｌ、、　ｔ９８２．　Ｎｅｖ　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　）ｌｅｄ、　３０ ６：５１７−５２０）］。オー等（Ｏｈ　ｅｔ　ａｌ、）　（１９８５年、前記 ）は、彼らの研究において、悪性の患者の半分未満が彼らの血清中に可溶性○Ｋ ＴＩＩレセプターの上昇レベルの存在することを報告した。

しかしながら、すべてのＴ細胞分子が血清に遊離されるわけではない［ブシモト 、ジェイ１等、　１９８３年、ジェイ。

エキスプ、メト、　１５９：第７５２〜７６６頁（ＦｕｊｉｍＯｔＯ，Ｊｌ、　 ｅｔａｔ、、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｒｅｄ、　１５９ニア５２−７６６＞１．　Ｌ ｅ　ｕ　１抗体は、抗体治療を受けていない正常または白血病患者の血清中にお いて検出可能でない。Ｌｅｖ３もまた、Ｔ細胞触溶上澄み液中に可溶性形態で検 出可能でない（同前）。

加えて、「細胞フリーのＴ細胞抗体レセプター関連分子検出用検出システムおよ び該検出の臨床的利用（”ＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍｓ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉ ｎｇ　Ｃｅ１ｌ　Ｆｒｅｅ　Ｔ　Ｃｅ１ｌ　Ａｎｔｉｇｅｒ＋　Ｒｅｃｅｐｔｏ ｒ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　）Ｉｏｌｅｃｕ！ｅｓ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａ！　ｔｌ ｔｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅＡｓｓａｙｓ”）」と称し共譲渡（ｃｏａｓｓ ｉｇｒｉｅｄ）された１９８５年１２月３日に提出された米国出願番号第８０４ ．２８９号の係属中米国特許出願は、疾病を診断する方法および被験者の体液中 の可溶性Ｔ細胞抗体レセプターの量を測定することによって疾病状態を検査する 方法に関する。

要するに、治療処置への応答における患者の免疫状態を検査し、疾病の過酷さを 階段すけまたは種々の疾患または状態のなかから１つの疾患または状態を特異的 に診断する他の試験とともに疾患特異性でない可溶性マーカーの測定レベルを利 用する公知の方法は存在しない。

１−几皿凶皿示 本発明は、可溶性Ｔ細胞生長因子レセプター、可溶性Ｔ細胞分化抗原または関連 可溶性分子またはそれらのフラグメントの測定、および疾病および障害の診断お よび治療において該測定の使用を導く。該分子の測定は、被験者に対する治療処 置の効果を検査し、被験者の疾病を検出しかつ／または段階づけ、および被験者 における生理学的状態の特異な診断に有効である。これらの測定はまた、治療の 成果を予知しまた患者の免疫状態を評価しかつ検査することの補助をし得る。

特定の実施態様において、血清または血漿インターロイキン−２レセプターレベ ルの測定は、白組＠またはリンパ腫を検出しまたは段階づけることをなし得る。

他の実施態様において、ＩＬ２ＲレベルまたははＣＤ８レベルは、サイサクロス ポリンＡ腎臓中毒から区別されるように腎臓同種異系拒絶反応を特異的に診断す るのに使用し得る。別の実施態様において、ＣＤ８レベルは他の併合の疾病から 区別されるような慢性リウマチ関節炎を特異的に診断するために測定され得る。

特別の実施態様において、可溶性Ｔ細胞表面分子の測定は、サンドウィッチ酵素 免疫検定法によって達成し得る。

ｌ工よ一定一一玉 本明細書中使用されるような、次の略号は以下の意味を示す： 疾病の段階づけること＝標準分類による過酷さの程度を評価すること。

ＩＬ−２＝インターロイキン−２゜ ＩＬ−１＝インターロイキン−１゜ ＩＬ２Ｒ＝インターロイキン−２レセプター。

ｍＡｂ＝モノクローナル抗体。

ＮＨＬ＝非ホジキンリンパ腫。

Ｂ細胞ＡＬＬ＝Ｂ！ｔＩ！Ｊ胞急性リンパ芽球白血病。

ＨＴＬＶＩＩＩ／ＬＡＶ　／ＨＩＶ　＝　ヒトＴ細胞白組病つイルスタイプエ／ リンパ関節疾忌関連つィ ルス／免疫不全性ウィルス。

ＰＨＡ＝フィトヘムアゲルチン。

ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞。

生−区皿Ω訊朋 第１図二Ｔ細胞活性化におけるインビトロ実験。

第１Ａ図：媒養液における媒養上澄液、細胞溶解物またはＰＨＡ刺激ヒト末梢血 の細胞表面において検定された可溶性ＩＬ２Ｈの濃度のプロット。

第１Ｂ図：媒養液における可溶性１．２Ｒの濃度対活性Ｔ細胞の百分率のプロッ ト。

第２図：インビボにおける可溶性（血清）ＩＬ−２レセプター対細胞表面ＩＬ− ２レセプター。

第３図：がん患者における治療処置の観察。可溶性ＩＬ２Ｒの患者血清濃度を時 間に対してプロットする。活性疾病の期間、処置および回復を示す。

第４図：中耳炎（ＯＭ）；段ＩＩＩまたはＩＩの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ） ：段階ＩＩＩまたは■ｖのリンパ芽球性（ＬＢ）ＮＨＬ；拡散性の小さい非分割 細胞（ｄｉｆｆｕｓｅ　ｓｍａｌｌｒ＋ｏｎｃｌｅａｖｅｄ−ｃｅｌｌ　）　（ ＳＮＣ）　ＮＨＬ　；およびＢｆｆｌ胞急性リンパ芽球白血病を有する小児の間 の血清インターロイキン−２レセプター（ｉＬ２Ｒ）レベルの分布。破線は、１ ００ｕ／ｍｌ超過または未満のＩＬ２Ｒ値を別ける。

第５図：血清インターロイキン−２レセプター（ＩＲ２Ｒ）をレベルの対数と血 清乳酸デヒドロゲナーゼレベルの対数との比較。直線は、データに適合する最小 平方回帰（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を表わす。

第６図二　（Ａ）非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞急性リンパ芽球白血病の全患 者に対する：および（Ｂ）段階ＩＩＩまたは１ｖの非ホジキリンパ腫またはＢｍ 胞急性リンパ芽球白血病の患者に対する血清インターロイキン−２レセプターレ ベル（ＩＬ２Ｒ）による時間と減衰との比較。両者比較において著しく悪い処置 結果は、より高レベル（１，０００Ｕ／ｍｌ超過）の患者に明らかである。

第７図：ＩＬ−２で治療処置を受けた患者から得られる試料中の可溶性（血清） ＩＬ−２レセプターのレベル。

第８図：ＩＬ−２治療を受けた肺がんの患者におる血清レベル。全患者は、組換 えＩＬ−２を０〜１４日の間、連続して注入された。患者１および２は、３　Ｘ 　ｉ　Ｏ’　Ｕ／ｍｌを受けたのに対して患者３．４および５は、２Ｘ１０６　 Ｕ／　ｍｌを受けた。

第９図：移植検査およびサイクロスポリンＡ中毒からの免疫拒絶反応の特異的診 断（Δ・・・Δ＝拒絶の患者：○・・・○＝Ｃ５Ａ中毒の患者；・・・・・＝安 定肝臓移植患者）。

第１０Ｎ：非線回帰プロット（破線曲線）を重ね合せた血清ＩＬ２Ｒ測定（内抜 き三角）対組織学級の相対する心内膜心筋の生検との散布図。回帰に関する方程 式を一次相関係数（Ｒ＞の下のプロットの左上方に示す。

第１１図：患者Ａに関するグラフは、異常のない部位移植を示した患者Ａに関す る時間に対する血清ＩＬ２Ｒレベル（白抜きを三角）および生検級（白抜き四角 ）を示す。

該患者を早期拒絶反応の医療的徴候のため付加的ステトイドで処置した。患者Ｂ に関するプロットは、ＩＬ２Ｒレベルと生検級との相関を示す。この患者は、他 分子ｆＬ２Ｈの最初の高い値を引き起こした再発心筋炎というエピソード（ｅｐ ｉｓｏｄｅ）の間移植された。付加的ステロイドでの拒絶反応治療の間、生検級 は、２．０のままであったが（拒絶反応となる）、ＩＬ２Ｒは、正常すなわち５ ４５単位／ＭＬまで落ちた。部位移植６０日において、生検級は、１．０まで落 ちたが、Ｉ　Ｌ２Ｒレベルは、患者がＡＴＧを受けていた間上昇した。１１日後 の生検は、２．５であり、ＩＬ２Ｒは、再発拒絶反応を示す２．２９８単位／ｍ ｌであった。

Ｓ−Ｍ＝ソルメドロール（ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ）　、　ＡＴＧ＝抗胞線細胞グ ロブリン。０ＫＴ−３＝オルトクローン０ＫＴ３゜第１２図：ウィルス性感染の 段階づけ。示されたとおりに医学的に診断されたＡＩＤＳ患者の可溶性ＩＬ２Ｈ の血清のレベルのプロット。

第１３図：セルフリー（商標ＣＥＬＬＦＲＥＥ）検定を使用した可溶性ＩＬ２Ｈ の測定に対する代表的標準曲線。

第１４Ｎ；セルフリー（商標）検定の一連の実施に対する組換えＩＬ−２の付加 の効果。

第１５図：正常健康宿主およびＩ　Ｌ２Ｒセルフリー（商標）検定を使用して測 定された疾病を有する患者における血清ＩＬ２Ｈのレベル。

第１６図：リウマチ性関節炎（ＲＡ）、退行性の併合疾病（ＤＪ）および未分類 の併合疾病（ＵＪ）を有する患者の間の血清および滑液中のＣＤ８レベルの分布 。

第１７図：血清ＣＤ８および血清ＩＬ２Ｒに対する腎臓移植患者の検査。可溶性 ｒＬ２Ｒまたは可溶性ＣＤ８のいずれかの血清レベルを時間に対してプロットす る。ＣｓＡ中毒および拒絶反応というエピソードを示す。

第１８図：非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ ）の小児における血清ＣＤ８の分布。

第１９図：感染性疾病を有する患者における血清ＣＤ８レベルの分布。

ｉ工北哩丑詳坦なｌ朋 本発明は、可溶性Ｔｆｆｉ胞生長因子レセプター、可溶性Ｔ細胞分化抗原、また は関連可溶性分子またはそれらのフラグメントの測定および疾病および障害の診 断および治療における該測定の使用を導くものである。該分子の測定は、被験者 に対する治療処置の効果の検査、被験者における疾病の検出および／または段階 づけおよび被験者における生理学的状態の特異的診断に有効である。これらの測 定はまた、治療の成果を予知し、患者の免疫状態を評価し検査する補助をし得る 。可溶性分子は、これに限定されないが、血清、血漿、尿および唾液を含む被験 者のいずれかの体液において測定され得る。

Ｔ細胞の表面から誘導されたタン白様の高分子類、またはそのフラグメント、お よびＴ細胞または活性化Ｔ細胞の表面上に存在し、体液中に存在しＴ細胞の表面 に結合されない免疫学的に同様の複製部分を有するタン白様高分子は、ここで可 溶性Ｔ細胞表面分子とよぶ。こｈ５らの高分子類は、グリコジル化または非グリ コジル化のいずれかであり得、またそれ自体に可溶であるかまたは他の可溶性高 分子と会合したそれらの効能によって可溶性であるとみなし得る。

さらにまた、体液中に存在しかつ細胞の表面に会合または結合されていない高分 子を可溶性高分子と呼ぶ。

５．１．Ｓｌ−療几１の　５の朋 本発明は、治療処置を受けた被験者に対する治療処置の効果を検査する方法を提 供する。この方法は、Ｔ細胞生長因子レセプターまたはＴ細胞分化抗原から成る かまたは免疫学的に関連のある可溶性分子またはその可溶性フラグメントの量を 好適な時間間隔で測定することから成る。可溶性分子の１におけるいずれかの変 化または未変化は、被験者に対する治療処置の効果と同一視および相関し得る１ 本発明の特定の実施例において、インターロイキン−２レセプター（ＩＬ２Ｒ） と免疫学的に関連ある可溶性分子は、例えばアルファーインターフェロン、サイ クロスポリンＡおよびモノクローナル抗体０ＫＴ３のような免疫モジュレータ− の投与のような有効性を評価するために、サンドウィッチ酵素免疫検定（例えば 第１５節参照、後述）によって患者の血清において測定し得る。他の実施態様に おいて、インターロイキン−ルセプターに関連する可溶性分子を測定し得る。

本発明に従って評価され得る治療処置は、これに限定されないが放射線治療、薬 物投与、免疫抑制または免疫促進摂生等を含む。免疫抑制摂生は、これに限定さ れないがサイクロスポリンＡ、クロラムブシル、シクロフォスフアミドまたはア ザチオプリンのような薬物、および抗Ｔ３モノクローナル抗体および抗胸線細胞 グリプリンのような抗Ｔ細胞抗体等の投与を含む。免疫促進摂生は、これに限定 されないが、インターロイキン−１、インターロイキン−２および他のＴ細胞生 長因子の投与を含む。

５．２．被験者における疾病の検出およびまｔ・は　づけ 本発明の他の実施態様において、Ｔ細胞生長因子レセプターまたはＴ細胞分化抗 体から成るかあるいは免疫学的に関連ある可溶性分子の測定は、被験者における 疾病または障害を検出および／または段階づけするのに使用され得る。

可溶性分子の測定量は、種々の程度の疾病または障害の患者に正常に存在するこ とかに認定された標準１と比較される。疾病または障害の特定の段階の間に被験 者の体液中に正常に存在することが設定された標準量と同様である被験者の体液 に存在する量は、被験者における疾病の段階の表示である。本発明による被験者 において検出および／または段階づけされ得る疾病または障害は、これに限定さ れないが以下の第１Ｎ表に挙げられたものを含む。

第１Ｉ表 本発明による被験者において検出および／−ｍ−した追　ｂづけされ′、る　ブ ーお　び１、ウィルスによって誘導される感染性疾患〜レペ、スウィルス サイトメガロウィルス エプスタイン−バーウィルス ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ／ＨＩＶ　（ＡＩＤＳ）ＨＴＬＶ−Ｉ関連成人Ｔ細胞 白組病 ′ｒＢ鵠リンパ腫 バーキットリンパ腫 毛状細胞リンパ腫 セザリー症候群 Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病 固形腫瘍 ＩＩＩ　、　自己免疫疾邑 すウマナ性関節炎 糖尿病 多発課化症 全身性紅斑性狼癒 ｌｖ、　器官同種異系移植片拒絶反応 本発明のこの態様の特定の実施態様において、Ｉ　Ｌ２Ｒまたは関連分子の血漿 または血清レベルの測定は、疾病の検出、または疾病段階を決定しかつ危険を特 定するのに使用され得る。例えば、非〜ホジキンリンパ腫またはＢ細胞急性リン パ芽球性白血病または成人Ｔ細胞白血病のようなリンパ球性疾患のようながんは 、可溶性ＩＬ２Ｒ血清レベルを測定することによって検査し得る；すなわち、上 昇血清ＩＬ２Ｒは、疾病状態の過酷さに一次的に相関し、また治療に対するわず かな応答並びに不十分な予後を示す。他の例において、非リンパ球性がん患者の ＩＬ−２への治療に対する応答を検査できる：この場合、可溶性ＩＬ２Ｈの上昇 血清レベルは、ＩＬ−２治療への陽性応答を示す。ウィルス性悪染への応答もま た、患者の可溶性ＩＬ２Ｒレベルを測定することによって検査され得る。例えば 、ヘルペスウィルスまたはＡＩＤＳウィルスに感染された患者は、可溶性ＩＬ２ Ｈの上昇血清レベルを与える。他の実施態様において、血漿または血清レベルを 移植患者において測定できる；すなわち可溶性ＩＬ２Ｈの上昇血清レベルは、同 種異系移植片拒絶反応の診断的表示である。別の特定の実施態様において、Ｔ細 胞ＣＤＳ様分子を測定できる：すなわち、可溶性ＣＤ８の増加レベルの検出は、 リウマチ性関節炎のような種々の疾病または障害と関連する。ＣＤＳ様抗原の上 昇レベルの検出は、細胞遊離の上昇で測定されたとおりの免疫活性化から区別さ れ、特定の病理学上のエピソードと著しい上昇数のサプレッサー／紺胞毒Ｔ細胞 の関り合いを示すことができる。

５．３．　埋″４白・　１０、の轡　白・誇本発明の他の実施態様において、可 溶性Ｔ細胞生長因子レセプター、Ｔ細胞表面抗原または免疫学的関連分子の測定 は、被験者において２以上の生理学的状態の中からの区別されるような特定の生 理学的状態を特異的に診断することに使用され得る。この目的のために、可溶性 分子の測定量は、推定生理学状態の１つを有する患者に正常に存在する可溶性分 子の量と比較される。生理学的状態の１つを有する被験者に正常に存在しまた１ 以上の生理学的状態を有する被験者に異常に存在する量と同様の可溶性分子の測 定量は、被験者の生理学的状態を表わす。

本発明のこの態様の特定の実施態様において、可溶性分子の測定は、腎臓同種異 系移植片拒絶反応の特異的診断、特にサイクロスポリンＡ腎臓中毒の区別に使用 し得る。本発明のこの態様の特別な実施態様において、可溶性分子は、ＩＬ２Ｒ またはその関連分子であり得る。本発明の方法を使用する同種異系移植片拒絶反 応の同様な特異的診断は、これに限定されないが、肝臓、心臓およびすい臓を含 む他の器官同種異系移植片に適用され得る。

他の特定の実施態様において、血清ＣＤ８レベルの測定は、他の合併疾病から区 別されるようなりウマチ性関節炎の特異診断に使用し得る。

本発明のさらに別の特定の実施態様において、リンパ球性白血病がＩＬ２Ｈの測 定および検出によって、他の白血病から区別されるような特異的に診断され得る 。

５．４．可溶性Ｔ、ｌ胞生長因子レセプター、Ｔ細　（および　゛　に一 疾病状態または障害またはその段階と相関するレベルで体液中に可溶性形態に存 在するいづれかのＴ細胞表面分子または免疫学的に関連ある分子は、本発明の実 施に使用し得る。潜在的に使用し得るＴ細胞表面マーカーは、これに限定されな いが前記第工表に挙げたものを含む。

前記第１表に挙げたマーカーのいくつかは、可溶性形態で存在することが既に知 られている。ヒツジ赤血球に対するレセプターであるＣＤ２は、正常対照患者中 よりも一定のかん患者中の血清中に高いレベルで見い出されている［ファルカオ 、アール、ピー等、　１９８４年、タリフ。ラブ。

イムツル　１３：第１４１〜１４３頁、オー、ニス、−ケイ等。

１９８５年、スキロンド、ジェイ、イムツル、２２：第５１〜６０頁（Ｆａｌｃ ａｏ、Ｒ，Ｐ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４．　Ｃｌ１ｎ、　Ｌａｂ、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ　１３：１４１−１４３．　Ｏｈ、　Ｓ、−に、、　ｅｔ　ａｌ、、 　１９８５．５ｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ　２２：５ｌ−６０）ｌ。細 胞性認識に含まれ得るサプレッサー／細胞毒Ｔ細胞上で見い出される表面マーカ ーであるＬｅｕ２（ＯＫＴ８）は、Ｔ細胞白血病の患者の血清中に高上昇レベル で報告されている［フジモト、ジエイ等、　１９８３年、ジエイ、エクスプ、メ ト、　１５９：第７５２〜７６６頁（Ｆｕｊ　ｉｍｏｔｏ。

Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８３．　Ｊ、　ＥＸＤ、　Ｈｅｄ、　１５９ニア ５２−７８６）］。ミラー等（Ｍｉｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、）　［１９８２年、 エフ。イングル、ジエイ。

メト、　３０６．第５１７〜５２０頁（１９８２，Ｎ、　Ｅｎｐｔ、　Ｊ、　Ｈ ｅｄ、　３．０６：５１７−５２０）］は、モノクローナル抗抗体室による血清 中からのＬｅｕｌの遊離を報告した。しかしながら、Ｌｅｕｌ抗原は、正常また は抗体処置を受けていない白血病性患者の血清中から検出できない。

可溶性形態が本発明に従って測定され得る他のＴ細胞表面分子は、これに限定さ れないが、例えばインターロイキン−２レセプターおよびインターロイキン−ル セプターのようなＴ細胞生長因子レセプターを含む。特定の実施態様において、 血清ＩＬ２Ｒ測定は治療の成果を予測しまたがん、免疫不全、自己免疫疾患また は同種異系移植片拒絶反応の患者の免疫状態を検査するのに使用し得る。

５．４．１．’　に　・　る　ゞ 可溶性分子の測定に関する公知のいずれかの方法が本発明の実施に使用し得る。

このような方法は、これに限定されないが少ないが名を挙げると放射線免疫検定 、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定）、「サンドウィッチ」免疫検定、沈降反 応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散検定、凝集検定、補体結合検定、免疫放射線測 定検定（ｉｍｍ［Ｊｎｏｒａｄｉｏｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ）螢光免疫検定、 プロティンＡ検定法および免疫電気泳動法のような技術を使用した競合または非 競合的検定システムを含む。

好適な実施態様において、サンドウィッチ酵素免疫検定を使用できる。このよう な実施態様の１つの記載は、次のとおりである。可溶性抗原に対して誘導された モノクローナル抗体（捕獲抗体、ｍＡｂｌ＞を固体底質上に吸着する。

試料中に存在する可溶性抗原は、抗体と結合しまた未反応試料組成物を洗浄によ って除去する。抗体の第２のエピトープに対して誘導された酸素結合モノクロー ナル抗体（検出抗体ｍＡｂ２＞は、ｍＡｂｌによって捕獲された抗体に結合し、 サンドウィッチを完成する。洗浄による未結合ｍＡｂ２の除去後、基質溶液をウ ェルに加える。有色産生物を試料中に存在する抗原の量に比例して形成する。反 応を停止溶液の添加により停止させ吸光度を分光光度分析的に測定する。標準曲 線を未知試料値を決定し得る■知濃度の可溶性抗体より作製する。特別の実施態 様において、このような検定法は、可溶性ＩＬ２Ｒレベルまたは可溶性Ｔ細胞抗 原レベルを決定するのに使用し得る。ＩＬ２Ｈの測定に関する好適な実施態様に おいて、抗ＩＬ２ＲｍＡｂ２Ｒ１２および７Ｇ７は、サンドウィッチ免疫検定（ 後述の第１５節に記載されるＣＥＬＬＦＲＥＥ　（商標）検定のような）におい て各々、捕獲および検出抗体として使用し得る。抗ＣＤ８抗原レベルの測定に関 する好適な実施態様において、抗ＣＤ８　ｍＡｂ　４Ｃ９および５Ｆ４は、サン ドウィッチ酸素免疫検定（後述の第１７節に記載されるような）において各々捕 獲および検出抗体として使用し得る。

６、患　における１六　ＩＬ２Ｒｆ７）検出後述の第７〜１５節に記載された実 施例は、患者における可溶性または細胞遊離ＩＬ２Ｒの検出および種々の疾病お よび状態を段階づけるこのような検出の利用を例証する。

結果は、次のことを示す。（ａ）血清ＩＬ２Ｒレベルは、白血病およびリンパ腫 のような活性リンパ球性疾病を有する患者において上昇される。該患者において 、血清ＩＬ２Ｒレベルは、疾病の過酷さと不十分な予後との一次的関係を生み出 す。（ｂ）血清Ｉ　Ｌ２Ｒレベルは、非リンパ球性がん患者において通常上昇さ れないが、しかし治療に応答する該治療を受けるＩＬ−２患者は、血清ＩＬ２Ｈ の上昇レベルを示す。（Ｃ）血清Ｉｔ、２Ｒレベルは、同種異系移植片を拒絶す る移植患者において上昇されるが、血清ＩＩ、２Ｒは、移植患者に使用された免 疫抑制薬物によって引き起こされた中毒を経験する患者においては上昇されない が真の同種異系移植片拒絶反応を示さない。

これらの実施例において使用される方法を以下の小節記載する。

６．１モノクローナル ＩＬ２Ｈに対して誘導されたモノクローナル抗体を予め記載されたとおりに産生 じた［ウチャマ、ティー等、　１９８１年、ジエイ、イムツル、　１２Ｂ（４） ：第１３９３〜１３９７頁ニル−ビン、エル、エイ等、１９８５年、ハイブリド ーマ　４：第９１〜１０２頁；ジャン、エル、ケイ、エル等、１９８４年、ジエ イ。

エキスブ、メト、　１６０：第１９５１頁（Ｕｃｈｉｙａｍａ　丁、　、　ｅｔ 　ａｔ　。

、　１９８４．Ｊ、ＩｍｍＵｎｏｌ、１２８（４）Ｊ３９３−１３９７；ＲＵｂ ｉｎ、Ｌ、Ａ、、ｅｔ　ａｌ、。

１９８５、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　４：９１−１０２；Ｊｕｎｇ、　Ｌ、に、Ｌ、 、　ｅｔ　ａｌ、、１９８４．Ｊ。

ＥＸＤ、　）ｌｅｄ、　１６０：１９５７）コ。加えて、ＩＬ２Ｈに対して誘導 されるモノクローナル抗体を商業的に購入し得る［ベクトンーディッケンソン、 カリフォルニア州コカウンター　ダイアゴノステック、フロリダ州（Ｂｅｃｔｏ ｎ−Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、　Ｃａ１ｉｆ。

ｒｒｉｉａ；　Ｃｏｕｎｔｅｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ、Ｆｌｏｒｉｄａ）］、 発表されたモノクローナル抗体［前記ウチャマ；前記ルーピン、前記ジャン）は 、各々Ｉｔ、２Ｒを認識するが、各これらのモノクローナル抗体は、異なるエピ トープを認識する。モノクローナル抗体を確立された標準方法に従って精製した 。［コーセイヤー、ジー等、　１９８４年、ジェイ、　イムノ、　メソッド６６ コ第７５〜７９頁（Ｃｏｒｔｈｅｉｒ、　Ｇ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８４． 　Ｊ、　Ｉｍｎ＋ｕｎｏ、　Ｍｅｔｈｏｄ　６６：７５−７９）ｌ。ワサビダイ コンへルオキシダーゼ接合を発表された方法により処理した［ウィルソン、エム 。

ビーおよびナカネ、ビー、ケイ、　１９８７年「リセント　デベロツブメンツ　 イン　ザ　バーアイオデート　メソッドオブ　コンジャンクティング　ホースラ ディツシュ　パーオキシド（ＨＲＰＯ）　トウ　アンチボディズ」、イン　イム ノフローレッセンス　アンド　リレーテッド　スタイニングテクニークス、クナ ップ、ダブり二一、ケイ、ホウルバーおよびジー、ウィック編、エルセビイア／ ノースーホランド　バイオケミカル　プレス　第２１５〜２２４頁（ＷｉｌＳＯ ＩＩＩＭ、Ｂ、　ａｎｄ　Ｎａｋａｎｅ、Ｐ、に、１９７８．”ＲｅＣｅｎｔ　 ＤＥ！ＶｅｌＯｐｍｅｒ）ｔＳ　ｉｎ抽ｅ　Ｐｅｒｉｏｄａｔｅ　）ｔｅｔｈｏ ｄ　ｏｆ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ　Ｈｏｒｅｓｒａｄｉｓｈ　Ｐｅｒｏｘｉｄ ｅ　（ＨＲＰＯ）　ｔｏ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ″、ｔｎ　Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕ ｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｓｔａｉｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｓ、　ＫｎａｌＸ）、　Ｗ、、　Ｋ、　Ｎｏ！ｕｂａｒ、　ａｎｄＧ、　Ｗｉｃ ｋ、ｅｄｓ、、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄ ｉｃａｔ　Ｐｒｅｓｓ、ＰＰ、２１５−２２４）コ　。

６．２０口ゝ　Ｉ　Ｌ２Ｒ２Ｒ 第７〜１４節において記載される実施例において、以下に記載される方法または 後述の第１５節に記載されるセルフリー（商標）インターロイキン−２レセプタ ーテストキツト［ティーセル　サイエンシス、インコーホレーテッド。

ケンブリッジ、マサチューセ・ン・ソ州（丁−Ｃｅｌｌ　５ｃｅｎｃｉｓ、Ｉｎ ｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＨＡ）のいずれかを医療的試料中の可溶性ＩＬ２Ｒの 量を測定するのに使用した。各これらの検定方法において、各々標的抗体上の異 なるエピトープを認識する２つのモノクローナル抗体を使用した。

６．２．１．　” 可溶性ＩＬ２Ｒを要点を以下に示す方法を使用して試料中に検出した。

（ａ）ポリスチレン微小力価ウェル［フロラ　ラボラトリイ（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｙ）］をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中１００ｕＪ！の抗ＩＬ２Ｒ マウスモノクローナル抗体で室温にて一昼夜コートした。

（ｂ）コート溶液を廃棄し、ウェルを０．０５％ツイーン２０および０．１５Ｍ 塩化ナトリウム中２５ｍＭ）リスｐＨ７，４を含むトリス緩衝食塩水（トリスル ツイーン緩衝液）中３００ｕ、ｌ！の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で室温 にて１〜２時間遮断した。

（Ｃ）ウェルをトリス−ツイーン緩衝液で３度洗浄しな。

（ｄ）ウェルごとに５０ｕｆＩ試料を加え、続いてトリス−ツイーン緩衝液中に 胎児ウシ血清（Ｆｅ２）を含む１００１１希釈液を添加した。ウェルを３７℃で ２時間インキュベートした。

（ｅ）ウェルをトリス−ツイーン緩衝液で３回洗浄した。

（ｆ）ウェルごとに１００ｕＪ！ワサビダイコンペルオキシダーゼ［シグマ　ケ ミカル　コーポレーション製（ｓｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏ、）１接合抗 ＩＬ２Ｒモノクローナル抗体の５０％ＦＣ３含有ＰＢＳ溶液を加えた。ウェルを ３７℃で２時間インキュベートした。

（ｇ）ウェルをトリス−ツイーンＭ衝液で４度洗浄した。

（ｈ）ウェルごとに１７ｒｒｉＭクエン酸および０．０１５％のＨ２Ｃ，リン酸 二水素ナトリウム（クエン酸−リン酸緩衝液）中１００　ｕｊｃｒ）０．２％０ −フ二二レンジアミン（ＯＰＤ）を加えた。プレートを室温にて３０分間インキ ュベートした。

（ｉ）５ＯＬＩＪ２の２規定Ｈ２ＳＯ４を各ウェルに加え各ウェルの吸光度を微 小力価プレートリーダー［グイナテックＨＲ６００，ダイナチック　コーポレー ション製　アレキサンドリア　バージニア川（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　）ｌＲ６００ ，Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｃｏｒｐ。

、　ＡＩｅＸａｎｄｒｉａ、νＡ）］中４００ｍｍで測定した。

６．２，２　ＩＬ２Ｒ・昭−゛ 免疫検定の結果を１，０００単位／　ｍｌとして定義された上澄媒養液に基いた 単位で表わした。上澄媒養液を次の方法によって生成した。

（ａ）単核白血球をパッケージ挿入を生産することに要約されるフィコール−ハ イバーク法［シグマ　ケミカル　カンパニー　（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　Ｃｏ、）］を使用して５００ｍ１の全血から単離した。

（ｂ）１ｘｌＯ６紺胞／　ｍｌ程度の白血球を１０％ＦＣ３および１００単位の ペニシリン−ストレプトマイシン［フロラ　ラボラトリ−（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｙ）］を含むＰＤＭ　Ｉ　−１６４０媒地に＠濁させた。

（ｃ）２ｕｇ／ｍｌのフィトヘムアゲルチン［ＰＨＡ−ウェルカム　ダイアゴノ スティックス製（ＰＨＡ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）］を媒 養液に加えた。

（ｄ）３〜６日の媒養後、上澄液を２００Ｘｇでの遠心分離で除いた後採取した 。

（ｅ）上澄液を、貯え１，０００単位／　ｍｌの関連値を定めた。

６．２．６’ｌ　動糸日ＩＩＩ　舌十渭２末梢血リンパ球および組織媒養細胞の 流動細胞計測検定を以前に記載されたとおりに実施したＥホフマン、アール。

アイ等、　１９８０年、１０ス、ナトル、アカド、サイ、ニー。

ニス、エイ、７１．第４９１４〜４９１７頁団Ｏｆｆｍａｎ、　Ｒ，Ａ、、ｅｔ 　ａｌ、。

１９８０、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｌＪ、ｓ、Ａ、 　７７：４９１４−４９１７）Ｊ。

７、インビトロにおいて可溶性ＩＬ２Ｒレベルトと一ンパト・　、　ＩＬ２Ｒの 　はｔい 第１Ａ図および第１Ｂ図に示したように、血清（可溶性）ＩＬ２Ｒのレベルと、 細胞表面ＩＬ２Ｒを保持するＴリンパ球の数とは、インビトロにおけるフィトヘ ムアゲルチン（ＰＨＡ）刺激ヒト末梢血Ｔ１１胞媒溶液においてよく相関される 。しかしながら、インビボにおいて、循環中にＴＭＡ胞を保持するＩＬ２Ｒの数 は、血清ＩＬ２Ｒのレベルとはほとんど相関しなかった。従って、可溶性Ｔ細胞 マーカーがインビボ観察で相関するかどうかをインビトロ実験から決定すること ができない。血清Ｔ細胞マーカーの臨床的使用は、直接患者研究からのみ決定さ れ得る。

可溶性ＩＬ２Ｒのレベルは、疾病の広いスペクトル中にて増加されることが見い 出されている。上昇可溶性ＩＬ２Ｒレベルの非特異性を第１ＩＩ表に示す。

第１ＩＩ表 爪　の口゛Ｉ［−２レセプターの　゛レベル平均値　試験試料 Ｉし−２し七７！＝（ｌｆｆｌ／ｊ）−ヱλスＬ−健康対照　２５０　５０÷ ＡＩＤＳ関連　９６０　４１ ヘルペスウイルス感染　１５００＋　９他のウィルス感染　１０００　５ 全身性紅斑性狼癒　６２０　５０ リウマチ性関節炎　５００　’　２０ ＋は「超過　を六 該測定の特定の医療適用を広部に記載される実施例において要約する。

８、可溶性ＩＬ２Ｈの血清測定は、白血病の段階づけまたは″、置　、査　るの に　し′与るヒトＴＭ胞白組病／リンパ腫のサブグループであるヒトＴ細胞白血 病ウィルス（ヒトＴリンパ球性ウィルス）タイプＩ　（ＨＴＬＶ−Ｉ）は、ヒト 成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）に密接に関連している。可能なＡＴＬの病因因子と してのＨＴＬＶ−Ｉの同定は、患者の血清中のウィルスに対して誘導される抗体 の検出用検定システムの発展を可能にしている［サキシンジャー、シーおよびガ ロ、アール６シー。

１９８３年、ラブ、インベスト、４９；第３７１〜３７７頁（Ｓａｘ　ｉ　ｎｇ ｅｒ、　Ｃ，ａｎｄ　Ｇａ１ｉｏ、　Ｒ，Ｃ，、１９８３，Ｌａｂ、　Ｉｎｖｅ ｓｔ、　４９：３７ｆｆ−３７７）Ｊ　、ＨＴＬＶ−Ｉへの抗体は、実質的にす べてのＡＴＬ患者に見い出されている。しかしながら、ＡＴＬの確証のないＨＴ ＬＶ−Ｉ血清陽性健康個体は、日本のＡＴＬ流布地域によくある。無症候個体か らの活性白血病患者の識別は、重大な診断および予後価値を有する。現在のとこ ろ信頼できる試験は、活性白血病患者の段階ずけに利用できない。

宿主免疫監視機構の障害は、ヒトおよび動物における種々のがんの発達に影響す ることが知られている。Ｉ　Ｌ２Ｒ関連高分子の血清レベルは、患者における種 々の疾病の段階の重要な識別を与える。ＩＬ２Ｒの血清レベルを第６゜２、節に 記載された検定を利用して白血病の異なる段階を示す患者において測定した。以 下の第１Ｖ表に示すとおり、活性Ｔ細胞悪を有する患者は、健康正常およびＨＴ ＬＶ−■血清陽性健康個体と比較して可溶性ＩＬ２Ｒの上昇レベルにある。同様 に、回復状態にあるＴ細胞悪患者は、可溶性ＩＬ２Ｒの下降レベルを示す。

第１Ｖ表 白血病患者における可溶性 Ｊ［−２レセプターの　２レベル 可溶性ＩＬ−２レセプター 血　の　ＬＰ！′（ｉ江−虚１を敗 活性ＡＴＬ（日本）　１７６５　３ 活性Ｔ細胞白血病（米国＞　１０５０　７血清陽性健康患者　２３０　１７ 回復白白組患者　２３０４ 第３図は、血清中のＩＬ２Ｒの１がリンパ球性がん患者の医療的状態に一致する ことを示す。血清中のＩ　Ｌ２Ｒの上昇レベルは、治療処置の失敗を示す。効果 的治療の後、ＩＬ２Ｒの血清レベルは、正常の範囲へもどる。

９、高血清ＩＬ２Ｒレベルは、進行した疾病および幼児期非ホジキンリンパ腫瘍 の不十分な成果と　連が　る　□　− 以下の小節に表わされた結果は、セルフリー（商標）検定（第１５節）で測定さ れたような血清ＩＬ２Ｈの上昇レベルが幼児期（ｃｈｉ　Ｉｄｈｏｏｄ）非ホジ キンリンパ腫の進行段階と一次的に相関することを示しまた選択された化学的治 療摂生へのわずかな応答並びに不十分な予後を示す。

９．１．患　および゛ム療 主−よユ１患考 １９７９〜１９８６年まで、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはＢ細胞急性リ ンパ芽球白血病（ＡＬＬ）を有する９９名の一連の幼児は、組織学的特徴および 彼らの疾病の段階により、セント、シュデース　リサーチ　ホスピタル（Ｓｔ。

Ｊｕｄｅ’ｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ）にて三ツノ医療学的試験 〔リンク、二１１等、　１９８４年　プロス、アム、ソス、クリン、オンコル、 ３：第２５１頁１マアーフィ、ニス、ビー等、　１９８６年、ジエイ、タリン、 オンコル、４：第１７３２〜１７３９頁；ダール、ジー、ブイ等、　１９８５年 　ブラッド　６６：第１１１０〜１１１４頁はｉｎｋ、　Ｈ，、ｅｔ　ａｌ、、 　１９８４．　Ｐｒｏｃ、　Ａｌ１１．　ＳＯＣ，Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏｆ、　 ３：２５１：　）ｌｕｒｐｈｙ、　Ｓ、Ｂ、、ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　Ｊ 、　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１、４：１７３２−１７３９；　Ｄａｈｌ、　Ｇ、Ｖ 、、　ｅｔ　ａｔ、、　ｔ９８５．　Ｂｌｏｏｄ　６６：　１１１０−１１１４ ）］を与えられた。化学療法の開始前に取り出された血清試料は、６５名のこれ らの患者に有効であった。ＮＨＬを有する４１名の男子および１８名の女子は、 １．８〜１７．９歳（メジアン、１０．７歳）までの範囲であった。ＢＩＢ胞Ａ ＬＬを有する３名の男子および３名の女子は、２．３．〜１０．２歳（メジアン 、５．８歳）であった。

各々の場合、予後は、医療学的、細胎解培学的、組織学的、細胞学的判定基準に 加えて、数例の免疫学的および細胞遺伝学的研究の組合せに基づいた。操作公式 化（丁ｈｅ　Ｗｏｒｋｉｎｇ　Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）　［ナショナル　キャ ンサー　インスティテユート　スポンサード　スタディ　オン　クラスフイゲイ ションズ　オン　ノンーホジキンズ　リンフオーマ：サーマリー　アンド　ディ スクリプジョン　オン　ア　ウオーキング　フオーミュレーション　フォー　ク リニカル　ニーセージ、　ザ　ノンーホジキンズ　リンフオーマ　ファトロジッ ク　クラスフイケーション　プロジェクト、　１９８２年、キャンプ−４９，第 ２１１２〜３５頁（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　５ ｐｏｎｓｏｒｅｄ　５ｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｃ１ａｓｓｆｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　 Ｎｏｎ−）１ｏｄｇｋｉｎ’ｓ　Ｌｙｍｐｈｏｍａ：Ｓｕｍｍａｒｙ　ａｎｄ　 Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｗｏｒｋｉｎｇ　Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ 　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｌｃａ＋　ＵＳａＱｅ、Ｔｈｅ　Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ ｓ　Ｌｙｍｐｈｏｍａ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ　Ｃ１ａｓｓｆｉｃａｔｉｏｎ　 Ｐｒｏｊｅｃｔ、１９８２．　Ｃａｎｃｅｒ４９：２１１２−３５）］を拡散微 小未分裂細胞、リンパ芽球性または巨大細胞（未分裂、分裂およびリンパ芽球性 ）タイプの場合に分類した。第１のカテゴリーは、パーキット腫だけでなく、識 別されない非−バーキットタイプとして指摘されているリンパ腫瘍をも含む。Ｂ 細胞Ａ　Ｌ、　Ｌの於断は、フランス−アメリカ−イギリス（ＦＡＢ）の判断基 準によるＬ３形態率でを髄芽細胞の表面免疫グロブリンの存在からなされた［ペ ンネット、ジェイ、エム等、　１９７６年、ブリ。

ジェイ。ハエマトル、３３；第４５１〜４５８頁（Ｂｅｎｎｅｔ、　Ｊ、Ｈ。

、　ｅｔ　ａｔ、　１９７６、　Ｂｒ、　Ｊ、　Ｈａｅｎａｔｏｌ、　３３；４ ５１−４５８）］。

段階を先に記載されたシステムの使用を伴うＮ　ＨＬの各場合に与えた「マーフ ィー、ニス、ビー、　１９８０．セミン。

オンコル、７：第３３２〜３３９頁（）ｌｕｒｐｈｙ、Ｓ、Ｂ、、１９８０．Ｓ ｅｍ１ｎ、　０ｎｃｏ！、　７：３３２−３３９）］。適切な位置に局部的にと どめられなＮＨＬを有する小児は、段階工または１１の疾病を示す。

！１階ＩＩＩは、隔膜の両側に流布された疾病、高価な切除できない腹腔内の疾 病、および骨髄または中枢神経（ＣＮＳ）関連を伴わないすべての主要な硬膜外 または腹側の縦隔の腫瘍を含む。段階ｉｖは、他の腫瘍部位に加えて初期のＣＮ Ｓおよび（または）骨髄関連（２５％芽細胞以下）によって特定される。骨髄に おいて２５％超過の悪性Ｂ細胞腫を伴う場合は、白血病進行の層において進行し たＢ細胞ＮＨＬを表わすＢ細胞ＡＬＬとして分類される。この研究において、３ ０名の患者は、拡散微小未分裂細胞ＮＨＬ（段階１８名、１１１０名、Ｉｒｌｌ ｌ名および冑　１名）を示し、２２名がリンパ芽球性ＮＨＬ（段階１１名、ＩＩ 　２名、ｌｌ１１４名およびＩＶ　５名）を示し７名が巨大細胞ＮＨＬ（段Ｎ１ ３名および１１　４名〉を示し、また６名がＢ細胞ＡＬＬを示した。

また、可溶性ＩＬ２Ｒを他に正常であり、１〜６歳（メジアン、３歳）の年齢範 囲にある中耳炎の幼児において測定した。

９．１．２．　置 回復誘導用シクロフォスフアミド、ドキソルビシン（ｄ。

Ｘ０ｒＵｂｉＣｉｎ）、ビンクリスチン（ＶｉｎＣｒｉＳｔｉｌｌｅ）およびプ レドニゾンおよび併合治療および連続治療のための６ケ月の６−メルカプトプリ ンおよびメトトレキセートの３サイクルを使用する小児腫瘍学グループ［Ｐｅｄ ｉａｔｒｉｃ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　Ｇｒ。

ｕｐ（、ＰＯＧ）］作成書（ｐｒｏｔｏｃｏ　Ｉ　）により段階■またはＩＩの ＮＨＬを有する小児を処置した「リンク、エム等、　１９８４年、プレス、アム 、シス、クリン、オンコル、３：第２５１頁（Ｌｉｎｋ、　）１．、ｅｔ　ａｌ 、、１９８４．　Ｐｒｏｃ、　Ａｍ、Ｓｏｃ、Ｃｌ１ｎ、０ｎｃｏ１．　３：２ ５１）Ｊ、段階ＩＩＩまたは■の微小末分裂紹胞ＮＨＬ泣なはＢ細胞ＡＬＬを有 する小児は、高服用量の分離されたシクロフォスフォミドに続けてビンクリスチ ンおよびドキソルビシンまたは同等の高服用量のメトトレキセートおよびシタラ ビンのいずれかの変更方法で６ケ月の集中処置を受けた［マーフィー、ニス、ビ ー等、　１９８６年、ジエイ、タリン。

オンコル、４：第１７３２〜１７３９頁（Ｍｕｒｐｈｙ、　Ｓ、Ｂ、、　ｅｔ　 ａｌ、、　１９８Ｂ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１．４　：　１７３２−１ ７３９）］　、段階ＩＩＩまたはｉｖのリンパ芽球性ＮＨＬを有する小児は、テ ニボサイド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）プラスシタラビンを治療の別の従来の摂生 ［ダール、ジー、ブイ等、　１９８５年、ブラッド　６６：第１１１０〜１１１ ４頁（Ｄａｈｌ　Ｇ、Ｖ、、　ｅｔ　ａｌ、、　ｔ９８５．　Ｂｌｏｏｄ　６６ ：１１１０−１１１４）］に加える危険性の高いＡＬＬに企てられた作成書に基 づいて処置されｆＳｅ通知された同意（ｉｎｆｏｒｍｅｄ　ｃｏｎｓｅｎｔ）が すべての患者に対して得られ、研究が協会の医療試験委員会で是認された。

９．１．３　０汁性Ｉ　Ｌ２Ｒレベルの２（商採）インターロイキン２レセプタ ーテストキット（ティーセルサイエンシス、インコーホレーテッド、ケンブリッ ジ、マサチュセッツ州）を使用して測定した。Ｉ　Ｌ２Ｈの血清レベルは、単位 （Ｕ）　／ｍｌで表示される。フィトヘムアゲルチン刺激末梢血リンパ球からの １０００ｔＪ／ｍｌの上澄液の対照標本を標準として使用した。健康成人宿主中 の正常血清ＩＬ２Ｒ値は、５０〜５００Ｕ／ｍＩ　（メジアン、２６０　Ｕ／ｎ ＋Ｉ　）の範囲にある。

９．１．４　血清￥酸デヒドロゲナーゼの２血清乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ ）の総括性をＫＤＡアナライザー上のモニターキネティックＡＭＢ−６１０検定 ［アメリカン　モニター　コーポレーション１．インディアナポリス、インディ アナ州（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｍｏｎ１ｔｏｒ　Ｃｏｒｐ。

、　Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、　ＩＮ）ｌで測定した。

７００　Ｕ／Ｌ超過の酵素活性を有する試料を希釈し再検定した；すなわち得ら れた値をついで希釈因子で掛けた。本発明者の実験室に関する通常値は、３０〜 ３００　ｔｌ／Ｌの範囲である。

９．１゜５　″、舌　・　７ クリスカリルーウアリイス（にｒｕｓｋａｌ　−Ｗａｌｌｉｓ）試験をＮＨＬ患 者の異なるサブグループの間の可溶性ＩＬ２Ｒまたは血清ＬＤＨレベルを比較す るために使用しな。ヒト産生−モーメント相関（丁ｈｅ　Ｐｅｒｓｏｎ　ｐｒｏ ｄｕｃｔ−Ｉｌｌｏｍｅｎｔ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）　（ｒ　＞およびｔ　 −試験分析を可溶性ＩＬ２Ｒと血清ＬＤＨレベルとの関連を決定するなめに使用 しな。時間対衰退（ｆａｉ　１ｕｒｅ）曲線をログランク試験（！ｏｇｒａｎｋ 　ｔｅｓｔ）［ベト、アール、およびベト、ジエイ、　、　１９７２年、ジエイ 。

アール、スタト、シス、　１３５Ａ：第１８５〜２１６頁（ｐｅｔｏ、　ｆ？。

ａｎｄ　Ｐｅｔｏ、　Ｊ、、　１９７２．　Ｊ、Ｒ，５ｔａｔ、　Ｓｏｃ、　１ ３５Ａ：１８５−２１６）］にて分析された相異でカブラン−タイヤ−法（Ｋａ ｐｌａｎ　−Ｍｅｉｅｒ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）　［カブラン、イー、エル、お よびメイヤー。

ビー、　、　１９５８年、ジエイ、アム、スタト、アシス、５３：第４５７〜４ ８１頁）］によって作図した。時間対衰退を回復の達成と再発または何かの原因 による死亡との間隔として特定した。回復に至らなかった患者は、減衰時間のゼ ロを定められた。時間対衰退に対する潜在的に著しい予後因子の影響は、患者の ２以上のサブセットに関する処置成果の比較を認める一方、モデルにおいて他の 因子「共変数（ｃｏｖａｒｉａｔｅｓ）　］の効果に関して同時に調節するコッ クス比例−偶然（Ｃｏｘ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ　−ｈａｚａｒｄ）モデル ［コックス、ディー、アール、　１９７２年、ジエイ、アール、スタット、シス 。

ビー、３４：第１８７〜２２０頁（Ｃｏｘ、　Ｄ、　Ｒ，、１９７２，Ｊ、　Ｒ ，５ｔａｔ、　ｓＯｃ、　Ｂ、　３４：１８７−２２０）］で概算した。Ｐ値で あるかいなかに左右されるモデルに対する因子の最終選択は、前進暫時法（ｆｏ ｒｗａｒｄ　５ｔｅｐＷｉＳｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を使用してモデル中にす でにある他の変数に対する調整の後０．１０未満である。１００ＯＬＪ／ｍｌの ＩＬ２Ｒ値は、これが疾病および処置成果の医療的区別グループに十分に一到達 するため高および低レセプターレベルの間の分割点として選択される。

主−スーー殖−−逮 幼児期ＮＨＬにおける最も信頼できる予後因子は、診断および血清Ｌ　Ｄ　Ｈレ ベルにおける疾病の段階である［マーフィー、ニス、ビー等　１９８６年、ジエ イ、タリン、オンコル、４：第１７３２〜１７３９頁；マーフィー、ニス、ビー 、　１９８０年、セミン、オンコル、７：第３２２〜３３９頁；アレセニュー。

ジエイ、シー等、　１９７５年、アム、ジエイ、メト、５８；第３１４〜３２１ 頁；マグラス、アイ、ティー等　１９８４年、ブラッド６３；第１１０２〜１１ １１頁（Ｈｕｒｐｈｙ、Ｓ、Ｂ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　Ｊ。

Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１．４：１７３２−１７３９；）Ｉｕｒｐｈｙ、　Ｓ、Ｂ 、、　１９８０．　Ｓｅｍ１．０ｎｃｏ１．７：３３２−３３９；Ａｒ５ｅｎｅ ａｕ、　Ｊ、Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、、　１９７５．八ｍ、　Ｊ。

Ｍｅｄ、　５８−３１４−３２１；　Ｈａｇｒａｔｈ、　１．Ｔ、、　ｅｔ　ａ ｌ、、　１９８４．　Ｂｌｏｏｄ６３：１１０２−１１１１）］。本発明者は、 高野溶性ＩＬ２Ｒレベルがこれらの２つの因子に対する調整後でさえ不十分な処 置成果を予想することをここに報告する。

９．２．１　可溶性ＩＬ２Ｒレベルは、疾病段階への８確を関係を六 全患者は、中耳炎を有する１２名の小児（４０４〜９４２１／ｍ１；メジアン８ ｔ５１Ｊ／　ｍ！　＞を含む検出可能な可溶性Ｉ　Ｌ２Ｒレベルを示した（第４ 図）。最高値は、Ｂ細胞ＡＬＬを有する患者１０３０〜ｌ　７７２５１／＋ｍｌ （メジアン、３２８３υ／ｍ１）の血清から見い出された。段階用またはＩＶの 微小末分裂細胞ＮＨＬを有する小児は、段階ＩＩＩまたはＩＶのリンパ芽球ＮＨ Ｌ　（ｐ・０．０２）に関する３７６〜３３９０υ／ｍｌ（メジアン１８０８Ｉ Ｊ／　ｒｎｌ　＞より著しく高い３２９〜５３３５０／ｍｌ　（メジアン、　１ ８３２υ／ｍｌ）の可溶性ＩＬ２Ｒレベルを示した。後者濃度は、段ＦＲＩまた はＩＩのＮＨＬ、１０００〜１１４３１／ｍｌ（メジアン、　４７７１／　ｍｌ ＞　ｃｐ＝ｏ、ｏｏｉ）に見い出されたものより順に高い。低位段階疾病を有す る２８名の被験者のただ１名が１０００υ／＋ｎｌを越える可溶性ＩＬ２Ｒレベ ルを示した。

９．２．２　可溶性ＩＬ２Ｒレベルは血清ＬＤＨレベルと線的閃係を示す 血清Ｌ　Ｄ　Ｈレベルは、ＡＬＬ　［ピュイ、シー、エイチ等。

１９８５年、ブラッド　６６：第７７８〜７８２頁（Ｐｕｉ、Ｃ，−Ｈ，、ｅｔ ａｌ、、　１９８５．　Ｂｌｏｏｄ　６６：７７８−７８２）］およびＮＨＬ　 ［？−フィー、ニス、ビー等、　１９８６年、ジエイ、タリン、オンコル。

４：第１７３２〜１７３９　；アルセーニュ、ジェイ、シイー等　１９７５年、 アム、ジェイ、メト、５８．第３１４〜３２１頁；マグラス。

アイ、ティー等、　、　１９８４年、ブラッド６３；第１１０２〜１１１１頁（ Ｈｕｒｐｈｙ、Ｓ、Ｂ、ｅｔ　ａｌ、、　１９８Ｂ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　０ｎ ｃｏ１゜４：１７３２−１７３９；Ａｒ５ｅｎｅａｕ、　Ｊ、Ｃ，、ｅｔ　ａｌ 、、　１９７５．　Ａｍ、　Ｊ、　Ｈｅｄ、　５８：３１４−３２１；Ｈａｇｒ ａｔｈ、　１．Ｔ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　Ｂｌｏｏｄ　６３：　１１ ０２−１１１１）Ｊの療法において悪性細胞の総肉体荷重の信頼性のある表示で ある。患者の種々のサブグループの間の血清ＬＤＨレベルの分布は、ＩＬ２Ｈに 関して観察されたパターンと同じように示された：すなわちＢ細胞ＡＬＬは、段 階Ｉ〜ＩＩのＮＨＬより大きい段階ＩＩＩ〜ＩＶのリンパ芽球性ＮＨＬより太い 段階１１Ｉ〜ＩＶの拡散微小未分裂細胞ＮＨＬより太い。この研究において血清 ＩＬ２ＲとＬ　Ｄ　Ｈレベルとの間の強い正の相関がある（第５図）。

９．２．３　高野溶性ＩＬ２Ｒレベルは、１　ｔ　几！　・ 高野溶性ＩＬ２Ｒレベルは、不十分な処置成果と関連した。低レベルでの４７名 の患者のほんの６名に比較して、１００００／ｍｌを越えるレベルを有する１８ 名の患者の９名が治療を失敗した（第６Ａ図、ｐ＝０．００１　）。段階Ｉまた はＩＩの疾病を有する患者を排除した時でさえ、可溶性１１．．２Ｒの高レベル は、なおも不十分な成果と関連したく第６Ｂ図。

１）＝０．０２）本患者における医療的および生理学的危険因子の間の可能な相 互関係のため、コックス回帰分析を使用して他の共変数（ＣＯＶａｒｉａｔｅ） の効果に対する調整後、比較的重要な他の因子を評価した。第７表に示すとおり 、可溶性ＩＬ２Ｒレベルと血清ＬＤＨレベルの両者は、独立した予後値を示すこ とが見い出された。

第７表 ＮＨＬまなはＢ＠胞ＡＬＬを有する６５名の小児における時間対衰退に対する血 清ＩＬ２Ｒと、の　る、′　の　只 カ　テ　ゴ　リ　− 一一一」寺−ｍ−′　良　悪　イ　Ｐイ　。

−元変化分析ゝ ＩＬ２Ｒレベル（Ｕ／ｍｌ）　１０００−　、１０００−　０．００４し叶レベ ル（Ｕ／Ｌ）　３００−　３００＋　０．００７段　階　Ｉ　、ＩＳ　ＩＩＩ、 　ＩＶ　Ｏ，０１７またはＢ全部 組織学的タイプ　リンパ芽球性　鉱！微小未分子ｆｌＩ　Ｏ，６５多元変化モデ ル９ ＩＬ２Ｒレベル（Ｌｌ／ｍｌ）　１０００−　１０００＋　０．００４ＬＤＨレ ベル（Ｕ／Ｌ）　３００−　３００４　０．０６５段　階　Ｉ　、ＩＩ　ＩＩＩ 、　ＩＶ　Ｏ，６２またはＢ全部 組織学的タイプ　リンパ１球性　鉱■小未分裂ａｌｌ　０．４８８　可能性割合 試験（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉｏ　ｔｅｓｔ）からｂ　コックスプロポ ーショナル−ハザードモデルにて、他の変数の効果に関する調整なしで表示カテ ゴリーにおける再発に関する良好対悪化危険特徴を有する患者の間の時間対減衰 の関係。

Ｃコックスモデルに加わった金具変数の効果が競合することを考慮して、治療成 果の最良の予言を同定するたため斬時回婦分析（ｓｔｅｐ＊ｉｓｅ　ｒｅｇｒｅ ｓｓｉｏｒｉ　ａｎａｌｙｓｉｓ）を使用した以外同上。

本患者における上昇血清ＩＬ２Ｒレベルは、悪性細胞または活性化正常リンパ球 のいずれかからレセプターのより大きい遊離を招き得る。本発明者らは、可溶性 ＩＬ２Ｒレベルが疾病の段階と相関するだけでなく悪性細胞負荷の信頼できる表 示である血清ＬＤＨレベルと線的関係を示すため最初の説明を支持する。

本発明は、ＮＨＬを有する小児における可溶性Ｉ　Ｌ２Ｒのレベルが独立した予 後の重要性、より進行した疾病と関連する高いレベル、より大きい腫瘍の負荷お よびより不十分な成果を示すことを結論ずける。

１０、ＩＬ−２での治療処置の下でのかん患者の血゛中の上　ｃｌ溶性ＩＬ２Ｒ レベル一般に、非リンパ球性がんになやむ患者は、血清ＩＬ２Ｒの上昇レベルを 示さない。しかしながら、下記の小節は、ＩＬ−２治療に有利に応答するＩＬ− ２治療を受けるような患者が血清ＩＬ２Ｈの上昇レベルを示すことを示す。

１０．１　１Ｌ−２で処置されながん患者における　ゞ　Ｉ　Ｌ２Ｒレベル 第７図に示すとおり、可溶性ＩＬ２Ｒの血清レベルは、ＩＬ−２の接種で処置さ れた種々の患者において高く上昇される。血清中の測定可能なＩＬ２Ｒの血清レ ベルは、治療処置の間上昇したままである。ＩＬ２Ｈの血清値は、患者の治療へ の応答を検査するために使用され得る。

１０．２　ＩＬ−２治療に応答するがん患者における　血゛　ＩＬ２Ｒレベル セルフリー（商桓）ＩＬ２Ｒ検定（第１５節、後述〉を使用してＩＬ−２治療を 受けていた肺がんを有する患者における血清ＩＬ２Ｒレベルを測定した。患者１ および２は、３　Ｘ　１０６１Ｊ／ｍｌの組換えＩＬ−２を０〜１４日まで連続 して注入され治療への良好な応答を示した。これらの患者は、血清ＩＬ２Ｈの上 昇レベルを示しな（第８図参照）。

患者３．４および５は、２　Ｘ　１０６Ｕ／ｍｌの組換えＩＬ−２を０〜１４日 まで連続して注入され治療への応答をほとんどまたは全く示さなかった。これら の患者は、血清ＩＬ２Ｒの増加を示さなかった（第８図参照）。

１１、可溶性ＩＬ２Ｈの血清レベルは、移植拒絶反応と治療前との間を特異的に 診断し また゛ム７、を、るなめに　し′臀る 免疫システムは、組織移植で重要な役割りを果す。移植片拒絶反応は、主として 細胞媒体現象であり、また下リンパ球は、主として移植片の拒絶に対して応答可 能である。

従って、ＩＬ２Ｈのような可溶性Ｔ細胞表面分子は、免疫状態および移植片拒絶 反応を検査するのに有益である。以下の研究は、この有用性を示す。血清ＩＬ２ Ｒを第６．２゜節に記載の検定を使用して腎臓移植患者において測定した。

今日、移植器官の存在を延長することへのより効果的アプローチは、ヒトＴ細胞 、抗リンパ球抗血清および免疫制御薬剤に対するモノクローナル抗体を含む数多 くの治療試薬を使用して細胞性免疫応答を制御することである。多くの器官移植 受領者に現在処方されている免疫抑制薬剤の１つは、真苫誘導環状ペプチドであ るサイクロスポリンＡ（ＣｓＡ）である。ＣｓＡは、リンパ系細胞に特異性を示 すらしくまたＴ細胞活性化の早い時点におけるＩＬ−２の産生を抑制する。しか しながら、移植患者におけるＣｓＡの医療的使用は、著しい毒性の存在による困 難な問題を有する。

現在、移植患者における機能障害を検査することの最も効果的な診断は、クレア チニンの血清レベルを測定することである。しかしながら、この検査方法は、Ｃ ｓＡのような免疫抑制薬剤で引き起こされた中毒と真の腎臓拒絶反応とを識別で きない（第９図）。第Ｖ１表に示したとおり、患者の血清中におけるＩＬ２Ｒ様 高分子の測定は、ＣｓＡ中毒と肝臓拒絶反応とを識別するのに有利である。

第ＶＩ表 単位／ＨＬにおいて測定された腎臓移植患者における口☆性Ｉｔ−２の血Ｓラベ ル −１」１」Ｌｌ−モー均　振星■羞　恵考見移植前（透析＞　７２１　４３４　 １８正常　１５０　１０５　２０ 安定移植　２７０　２０６　８９ Ｃ３Ａ中毒　４９３　２４１　１２ 拒絶反応（処置前＞　１０３２　５８４　１３ウイルス性惑染　１４２０　５５ ５　４抗体０ＫＴ３またはＡＴＧ　１７５８　７２４　２３で免疫治療中 この実験においてＩＬ２Ｒの血清レベルは、ＣｓＡ中毒への応答において低いま まであるかまたはわずかに上昇したのに対してＩ　Ｌ２Ｒレベルは、腎臓拒絶反 応への応答において上昇した。従って、血清クレアチニン測定と組合わせて、Ｉ Ｌ２Ｒの血清レベルで示されたような免疫応答の測定は、治療処置の効果を検査 するのに有効である。さらに、ＪＬ２Ｒレベルの測定は、ＣｓＡ中毒と腎臓拒絶 反応との間の特異的診断の方法として有効である。この非侵襲性の反応は、移植 腎臓からの生検検体の実験を含むＣｓＡ中毒と腎臓拒絶反応との現存する特異的 診断方法を越えて好ましい。

同様の観察が肝臓移植患者においてなされている。第Ｖｌ１表に示すように、肝 臓移植拒絶反応を有する患者は、その血清中可溶性ＩＬ２Ｒの上昇レベルを示す 。Ｉ　Ｌ　２　Ｒの減少血清レベルは、移植後何ら拒絶の徴候を示さなかった患 者に見い出された。

第Ｖｌ１表 単位／）Ｉ［において測定された肝臓移植患者における口２六性Ｉ［−２レセプ ターの血゛レベルＩ−匹−基一旦　ヱー」　Ｌｌり 移植前　６４７４ 安定移植　６００　１ 拒絶反応　１５００＋　３ ＋は、「超過」を示す。

１２、肝臓移植片受領者における血漿ＩＬ２Ｒレベル以下の小節に記載される実 施例において、セルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターキツトを使 用して腎臓同種異系移植片患者におけるＩ　Ｌ　２　Ｈの血清レベルを測定した 。真の同種異系移植片拒絶反応を経験したこれらの患者は、可溶性ＩＬ２Ｈの上 昇血清レベルを表わした。

上λ−上−虚考丘孟ｙ方抹 死亡または生存関連宿主からＨＬＡ非同−腎臓同種巽系移植片を受けた３２名の 患者を研究した。患者をステロイドおよびサイクロスポリン（ＣｓＡ）ｉたはア ザチオプリンで保った。拒絶反応エピソードを、（次に挙げる：すなわち尿量減 少、熱または体重増の１以上によってなされる血清クレアチンの進行した上昇を 含む）標準医学または病理学的分野に基いて診断した。ＣｓＡレベルを、放射線 免疫検定で血漿中において測定した。ＣｓＡ中毒をＣｓＡの減少投薬量へ応答さ れた７　００　ｎｇ／　ｍ、１以上の血漿レベルと関連する血清クレアチニンレ ベルの前進性の上昇とて特定した。拒絶反応エピソードをプラスステロイド、抗 Ｔ３モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＯＫＴ３　［オルソ　ファーマセイテイカル ズ製（叶ｔｈｏ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはＡＴＧＡＭ（商標） ［ウマ抗胸線細胞グロブリン、アブジョン製（ｔＪｐｊｏｈｎ）　］で処置した 。

ＩＬ２Ｒ検定用血漿（クエン酸塩）を移植前および最初の数週間、週に１〜２度 の間隔でまたその後、１週間〜１ケ月の間隔で取り出し一７０℃で保存した。Ｘ Ｌ２Ｒ検定をセルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターキツト（ティ ーセル　サイエンシス、インコーホレーテッド、ケンブリッジ、マサチューセッ ツ州）を使用して行った（後述の第１５節参照）。試験は、最初の抗体（ｍＡｂ ２Ｒ）をプラスチック微小ウェルにコートし、洗浄し１、遮断し、または５０ｕ ｊＪ試料を１００ｕ、Ｑの希釈液で適用したヒトＪＬ２Ｒへの２つの非競合モノ クローナル抗体を使用する。２時間インキュベーション後、ウェルを洗浄し、ワ サビダイコンペルオキシターゼに接合した表示抗体を加えた。もう２時間後、ウ ェルを洗浄し、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）を加えた。反応を１規定硫 酸添加後３０分急冷し、４９０ｎｍで吸光度を測定した。１０００単位／ｍｌの 値とて定義されたフィトヘムアゲルチン（ＰＨＡ）刺激末梢血却核細胞からの上 澄液逐時希釈剤を使用し、標準曲線を導いた。要約データ（第■Ｉｌｉ表）は、 値をＰＨＡ単位に変換する前に研究された最初の４名の患者を除外する。

１２．２　血漿は、腎臓同種異系移植片拒絶反応のエピソードの間の可溶性ＩＬ ２Ｈの上昇レベルを　む　− 試験患者における血漿ＩＬ２Ｒレベルに関するデータを第Ｖｌｌ１表に要約する 。

第Ｖｌｌ１表 良遭ユニ≦ロリこヘル 試　料　歇　単位／　ｍｌ　旦スコＤ」求馳正　常　２０　１５０±１０５ 移植前（透析）１４８００±４５０　０．００１〜対正常安定移植　６３　２６ ６出２０５　０．０２一対正常拒絶反応　１５　ｔ０５０±６３７　０．００１ −戚定ＯＫ丁３／Ａ丁Ｇ治療中　２０　１７８８±７２６　０．００４一対拒絶 反応ウィルス性感染　６　１０７６±６５４　０．００１一対安定サイクロスボ リン−１３４３０±２１８　０．００３−Ｍ拒絶反応腎臓中毒 ’１，０００υ／ｍｌとして定義されたＰ　ＨＡ上澄液標準に基づく任意の値； ２８名の患者および２０名の正常の実験室職員に関するデータ、平均上標準偏差 。

−は、「未満」を示す。

長期間の透析の患者（移植前試料）は、正常の対照を越えて著しく上昇したレベ ルを示した（ｐｏ、００１未満）。

これらの値は、移植後の第１週に正常のレベルまで落ちた。

安定した腎臓機能を有する患者は５正當よりわずかに太きい値を示した（ｐｏ、 ０２未満）。これに対し、急性拒絶反応エピソードを有する患者は、安定患者よ り著しく高く平均した値を示した。血清クレアチニンレベルが上昇したが抗拒絶 反応治療を開始する前の時点で取り出されたこれらの試料は、１３名の拒絶反応 エピソードの１０名において上昇Ｉ　Ｌ２Ｒレベルを示した。抗Ｔ細胞モノクロ ーナル抗体（ＯＫＴ３またはＡＴＧ）で処置後すぐに、Ｉ　Ｌ２Ｒレベルは、さ らに上昇した。この上昇は、ｍＡｂ　０ＫＴ３の第１の服用後１時間程度に収り 出された試料において明らかであった（５組の試料において３６％の平均上昇、 ｐｏ、０５未満）。おそらく活性化Ｔ細胞が予め存在しなかったであろうｍＡｂ 　ＡＴＧを予防的に与えられた患者に例外が見られた。ＣｓＡ腎臓中毒を有する 患者は、拒絶反応の患者より著しく低いレベルを示した（ｐｏ、００３未満）。

窒素過剰症の３のエピソード（生検なし）を、分類できず（ＣｓＡの減少および 他の免疫抑制の増加に従って改善）、データ分析に使用しなかった。２名の患者 は、困難なウィルス性惑染にかかり（サイトメガロウィルス、単純ヘルペスウィ ルス）、また他の者は、下痢を伴うウィルス性症候群にかかった；すべでは、Ｉ Ｌ２Ｈの著しい上昇レベルを示した。腎静脈狭窄による腎不全を有する１名の患 者（Ｃｒ３〜４■％）および溶血性尿毒症候群を有する１名の患者（Ｃｒ５〜６ ■％〉は、拒絶反応を有する患者に見られるＩＬ２Ｒレベルの上昇を示さなかっ た。

同種異系移植片拒絶反応において、活性化Ｔ細胞は、血液中および移植片中に見 い出される［ファン　イーニス。

エイ、等、　１９８４年、トランスプラント、３７．第６５頁；パンコック。ダ ブリュー、ダブリュー等、　１９８５年、トランスプラント、３９；第４３０頁 （Ｖａｎ　ＥＳ、Ａ。、ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．　ＴｒａｒｌＳｐｌａｎｔ 、　３７：６５；Ｈａｎｃｏｃｋ、　Ｗ、Ｗ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８５． 　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ。

３９：　４３０）］　、　Ｌがしながら、これらの実験から観察される可溶性／ 遊１４ＪＬ２Ｈの量における上昇は、ＰＨＡ刺激の媒養液中のインビトロにおい て生じたものと等しい観察レベルとともに予期されなかった。本発明者らはまた 、一定の感染におけるＩＬ２Ｈの上昇レベルを見い出した。

０ＫＴ３またはＡＴＧ抗Ｔ細胞ｍＡｂの投与は、おそらく抗体による細胞損傷の 結果生ずる細胞性ＩＬ２Ｈの遊離によると思われるＩＬ２Ｒレベルの上昇を引き 起こした。

この観察の例外は、ＡＴＧが予防的に与えられた時に起った。従ってＩＬ２Ｒレ ベルの進行性の上昇は、抗Ｔ細胞抗体治療中の有効な確証試験であり得る。

長期の透析患者は、血清中の上昇濃度のＩＬ２Ｒを示した。これらの患者は、上 昇Ｔ［胞活性化を示すことを知られておらず、また事実損傷Ｔ細胞機能を示すこ とが全く見い出されていない。慢性腎不全における損傷の本質は、証拠が尿毒性 の血清または血漿における免疫抑制因子を示すが、不可解さを残す［ファーメン 等、１９８０年、ジェイ、クリン、ネ７ｙｒ７−ル、　１４：第１８３頁（Ｆｅ ｈｒｍａｎ　ｅｔ　ａｔ、、　１９８０　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｎｅｐｈｒｏｌ、 　１１：１８３）］　、　Ｉ　Ｌ２ＲがＩＬ−２を結合することができるため、 可溶性ＩＬ２Ｒ自身が免疫抑制剤であることが可能であり「ルーピン、エル、エ イ等。

１９８６Ｌ　シエイ、　４　ム／ル、　１３７：第３８４１〜３８４４３１ｒ　 （Ｒｕｂｉｒｉ。

Ｌ、Ａ、、ｅｔ　ａｔ、、１９８Ｂ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｔ、１３７：　３８４１ −３８４４）コ　、また従ってＴ細胞表面上のＩＬ２Ｒと競合できる。慢性尿毒 症おけるＩＬ２Ｈの上昇の理由は、知られてない。最も簡単な説明は、可溶性Ｉ Ｌ２Ｒが腎臓で正常に分泌されることである。さらなる研究がこの層間に取り組 むのに必要とされるけれども、一定の他の原因（腎静脈狭窄、溶血性尿毒症候群 およびＣｓＡ肝臓中毒）による急性窒素過剰血症が原則としてＩＬ２Ｒレベルの 著しい上昇を示していないため、本発明者らのデータは、腎臓機能とＩＬ２Ｒレ ベルとの簡単な関係に反対の結論を示す。これが急性腎不全かまたは別の因子（ 例えば透析または免疫抑制）のいずれかに関するのかは、知られてない。それに もががわらず、急性尿毒症における上昇レベルは、レベルが正常に落ちる前、と くに移植後の早い期間において、解釈をむずかしくする。

本発明者らのデータは、血漿が著しい腎臓同種異系移植片拒絶反応というエピソ ードの間に増加量の免疫活性ＩＬ２Ｒを含むことを示しまた血漿／血清Ｔ　Ｌ２ Ｒに対する検定が腎臓同種異系移植片の特異的診断、特にＣｓＡ腎臓中毒を特異 的に識別するのに医薬的に有効であり得ることを提案する。

１３、心臓同種異系移植片拒絶反応の検査における゛　ＩＬ２Ｒレベルとノ＼　 ノ＼　との　Ｖ心臓移植の現在の臨床的成功は、より効果的なサイクロスポリン Ａの使用に基づく免疫抑制および逐次心内心膜生検を使用する同種異系移植片の 検査に関連する［オウスティン、ダブリュー、ジーおよびコシミ、エイ、ビー等 、１９８４年、エヌ、イングル、ジェイ、メト、］３１１：第１４３６〜１４３ ８頁（Ａｕｓｔｅｎ、　Ｗ、Ｇ、、　ａｎｄ　Ｃｏ５１ｍ１．　Ａ、Ｂ、、　１ ９８４．　Ｎ、Ｅｎｇｌ。

Ｊ、　Ｍｅｄ、　３１１：１４３６−１４３８）］　、心内心膜生検は、成人同 種異系移植片受領者において比較的安定でありかつ信顆できるが、小児または幼 児において容易に実施できないいくつかの病的状態に関連する侵略的技術である 。さらにまた、生検の解明は、主観的でありまたこれは、高価な検出技術である 。しかしながら、心内心膜生検は、目下のところ潜在的に不可逆の拒絶反応の開 始に先立って心臓同種異系移植片拒絶反応を診断する唯一の容認された手段であ る。

心臓移植片拒絶反応は、主にＴリンパ球の活性化を含む細胞性免疫反応である。

Ｔ細胞活性化のプロセスは、インターロイキン２レセプター（ＩＬ２Ｒ）の発現 によって達成される。以下に記載する実験は、心内心膜生体と比較した心臓同種 異系移植片拒絶反応を検査する血清ＩＬ２Ｈの診断の値を試験することを意図す る。心内心膜生検時において得られた６名の心臓移植患者からの５６の血清にお けるＩＬ２Ｒレベルは、拒絶反応の組織学的等級と相関しな（ｒ＝０．５６）。

２゜０未満の生検級に関して、平均血清レベルは、３８７土４１単位／　ｍＩで あるのに対して、拒絶反応として診断された生検（２，０以上）に関して、平均 ＩＬ２Ｒレベルは、１０１７±１７８単位／ｍｌであった（ｐ　０．０００１未 満）。拒絶反応に関する出発血清レベルは、５４６単位／　ｍｌあることが計算 された。５４５単位／　ｍ１未満のＩＬ２Ｒレベルを有する患者血清において、 相当する生検は、４２試料の４０まで拒絶反応の証拠を示さなかった（特異性＝ ９５％）。５４５単位／ｍｌを越えるＩＬ２Ｈのレベルは、相当する生検が著し い拒絶反応を示した１４例のうち８に存在した（感応性＝５７％）。これらのデ ータは、正常ＩＬ２Ｒレベルが心臓同種異系移植片拒絶反応の不存在を示すのに 対して、上昇ＩＬ２Ｒレベルが強力な拒絶反応の表示であることを暗示する。

１３．１　”− ４８の右心室の心内心膜生検は、標準技術を使用して６名の成人正常位の移植受 領者からの移植後の３〜７５２日（平均上ＳＥＭ、１５９±２２）までの間に得 られた［デック、ジー、ダブリュー等、　１９８５年、エフ。イングル、ジエイ 、メト、　３１３　：第８８５〜８９０頁（ＤｅＣ，Ｇ、　Ｗ、、　ｅｔ　ａｔ 。

、　１９８５．　Ｎ、　Ｅｎｇｔ、　、〕、　Ｒｅｄ、　３１２：８８５−８９ ０）］、少なくとも５つの心内心膜の７ラグメントを心臓同種異系移植片拒絶反 応の証拠のために、光学顕微鏡、免疫ペルオキシダーゼおよび免疫螢光法で試験 した。生検をスタンフォード（５ｔａｎｆｏｒｄ）判定規準［マージン、ジェイ 、ダブリューおよびビリンガム、エム、イー、　１９８０年２．プログレス　イ ン　カーブ４ｏシイ　９；第１１３〜１４６頁（ＭａＳＯｎ、　Ｊ、Ｗ、　ａｎ ｄ　ＢｉｌｌＢｌｌｌｉｎ、　）ｆ、Ｅ、、　１９８０．　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　 ｉｒｉ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ　９：１１３−１！６）Ｊを使用してＩ　Ｌ２Ｒ レベルの知識なしに見込み的に等級分０．０　正常 ０．５　腸管周囲のリンパ球性浸潤のわずかな病巣１゜０　腸管周囲および／ま たは間隙のリンパ球性浸潤の時折の病巣 １．５　筋細胞壊死を伴わない腸管周囲および間隙のリンパ球性浸潤の多数の病 巣 ２．０１以上の筋細胞壊死の病巣関連リンパ球浸潤の多数の病巣 ２．５　時折の好酸球含有および多数の筋細胞壊死の病巣関連散在リンパ球性浸 潤 ３．０　好酸球および好中球、腸管周囲出血、水腫、および多数の筋細胞壊死の 病巣を含む散在リンパ球性浸潤全生検をその最も過酷な成分に関して等級づけし た。２゜０以上の組織学的等級を、付加的処置を必要とする拒絶反応表示とみな した。

免疫螢光研究に対する各生検で得られた血清を一２０℃で冷凍しな。各試料のア リコートをヒトＩＬ２Ｒへの非競争モノクローナル抗体を使用した二重モノクロ ーナル抗体サンドウィッチ技術で分析しな（セルフリー（商標）、ティーセル　 サイエンシス、インコーホレーテッド、ケンブリッジ、マサチュセッツ州、後述 の第１５節参照）。１５７の血液宿主試料から決定されたとおりの正常ＩＬ２Ｒ レベルは、２６７土１１９（±標準偏差）単位／ｍｌであった。

全患者をプレドニゾンおよびサイクロスポリンＡから成る維持免疫抑制剤で処置 した。５名の患者はまた、アザチオプリンも受けた。拒絶反応エピソードを最初 に上昇服用量のステロイドで処置したた。ＡＴＧ　（抗胸線細胞グロブリン）ま たは０ＫＴ−３［オルトクローン　０ＫＴ３　モノクローナル抗体、オルト　フ ァーマシュティカル　コーポレーション、ラリタン　ニューシャーシー州（Ｏｒ ｔｈＯＣＩＯｎｅ　ｏに丁３　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ、０ｒ ｔｈｏ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃ。

ｒｐ、　、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）］での抗リンパ球治療を付加的ステロイドへ の非応答性である拒絶反応を有する患者に与えた。統計的分析分析を適するよう な非パラメーター的（ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ）、線型回帰および非線型回 帰分析に関してＲ８／１ソフトウエア［ボルト、パーラネックおよびニューマン 。

ケンブリッジ、マサチューセッツ州（Ｂｏｌｔ、Ｂｅｒａｎｅｋ　ａｎｄ　Ｎｅ ｗｍａｎ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　ＨＡ）手順を使用して実施しな。平均値をそ れらの標準誤差で示した。

１３．２．正常ＩＬ２Ｒは、心臓同種異系移植片拒絶反応の不存在を示すのに対 して上昇Ｉｔ、２Ｒレベルは　む　に六 全ての結果を第１０図にグラフ的に示し、また２名の患者の完結データを第１１ 図に示す。２．０未満の拒絶反応の病理学級に関して、平均ＩＬ２Ｒレベルは、 ３８７±４１単位／ｍ１（ｎ＝４６、範囲１５６〜１３８６）であったのに対し て２．０以上の級に関する平均レベルは、１０１７±１７８単位／ｍ１（ｎ＝１ ０．範囲３２８〜２２９８）であった。相異は、０゜０００１未満のｐで非常に 顕著であった。血清Ｉｔ、２Ｒレベルを相当する生検に基く拒絶反応の組織学級 との０．５６　（ｐ＝０．０００１）の全ての線的相関を示した。しかしながら データは、第１０図に示す非線型回帰を使用して最良適合度（ｒ＝ｏ。４４．ｆ ＝２１．ｐ＝ｏ、、ｏｏｏｌ）であった。この分析から計算された拒絶反応に対 するＩＬ’２Ｒの出発レベルは、５４５単位／　ｍｌであった。

５４５単位／ｍ１未満のＩＬ２Ｈのレベルは、４２の測定のうち４０の２．０未 満の拒絶反応級と関連したく特異性＝９５％）。このグループに対する平均生検 スコアは、０〜２．０の範囲で０．５±０．１であった。２．０の生検級と関連 する２つの正常ＩＬ２Ｒ測定は、付加的ステロイドの処置の下で拒絶反応という エピソードの間、患者Ｂにおいて連続して生じた（第１１図）。両者の付随する 生検は、拒絶反応の解消、すなわち筋細胞壊死がいまだに存在したがリンパ球性 浸潤が、２．０の拒絶反応級として診断された初期生検におけるよりも極度に少 なかったということを示した。

５４５単位／　ｒｒ＋ｉ超過血清ＴＬ２Ｒレベルは、５７％の特異性を与える１ ４の測定のうち８において２，０以上の相当する生検スコアを示した。平均生検 スコアは、０〜２゜５までの範囲で１．６±０．２であった。これは、正常■Ｌ ２Ｒグループ（ｐ＝０．０００１）の平均生検スコアと著しく異なる。２．０未 満の生検スコアが５４５単位／ｍｌ超過のＩＬ２Ｒの血清レベルと関連する６例 のうち５において、上昇レベルは、処置拒絶反応というエピソードに先行（ｒ＋ ＝２：２ｄおよび１１ｄ）または引き続（（ｎ＝３　：　９ｄ、　１２ｄおよび ３５ｄ）かのいずれがあった。上昇レベルの第６例は、相当する生検の組織学的 徴候が第０級であるが移植心臓が活性リンパ球性浸潤を示した患者Ｂの初期の移 植後血清試料からのものである。

血清レベルと、サイクロスポリンＡまたは移植後の日数とは、著しい相関がなか った。

データは、循環ＩＬ２Ｒの正常レベルが心内心膜生検に基いて診断された同種異 系移植片拒絶反応を排除することを示すのに対して上昇血清ＩＬ２Ｒレベルが心 臓同種異系移植片拒絶反応の強力な指標であることを示す。明らかな低怒応性（ ５７％）は、本分析におけるＩ　Ｌ２Ｒ測定というよりも心内心膜およびその解 釈の誤認の影響であろう。

心内心膜生検は、拒絶反応の病巣をのがし得る。加えて擬陽性は、測定された減 少におけるタイミングの相異、すなわち自涜ＩＬ２Ｈにおける増加は、実際の拒 絶反応が生検によって診断し得る前に生ずる前に起こりうる（２．０超過の組織 学級によって特定）ためであろう。事実、ＩＬ２Ｒの上昇レベルは、６の立証エ ピソードのうちの６においておよび上昇ＩＬ２Ｒ，レベルが拒絶の組織学的証拠 に先立つ２つの例において拒絶反応と関連する。ＩＬ２Ｒレベルは、処置された 拒絶反応が継続されているか解消されているかどうかを、決定するのに有益であ ることを立証できるかもしれない。Ａ　Ｔ　Ｇまたは○Ｋ　Ｔ　−３抗体での腎 臓移植の処置は、Ｉ　Ｌ２Ｈの著しい上昇を引き起こす。同様に、患者Ｂにおけ るＡＴＧ治療に続いて、ＩＬ２Ｒレベルは、劇的に上昇したが、相当する生検級 は、わずか１．０であった（第１１図）。しかしながら、１１日後の患者のこの 生検は、第２．５級の拒絶反応を示しまた相当するＩＬ２Ｒレベルは、２２９８ 年位／ｍｌであった。

また、ＩＬ２Ｒレベルの上昇は、過酷なウィルス性感染、一定の自動免疫疾患、 ［ネルジン。ディー、エル、　１９８６年、フェト、ブロス、４５：第３１７頁 （アブストラクト）（Ｎｅｌｓｏｎ、　Ｄ、Ｌ、、　１９８６．Ｆｅｄ、Ｐｒｏ ｃ、　４５：３７７（ａｂｓｔｒａｃｔ）］、　Ｔ細胞白血病（マッキーン、エ ル等、　１９８６年、フェト、ブロス、４５；第４５４頁（アブストラクト）　 （Ｈａｃｋｅｅｎ、　Ｌ、、　ｅｔ　ａｔ、、　’１９８６、　Ｆｅｄ、　Ｐｒ ｏｃ、　４５：４５４）（ａｂｓｔｒａｃｔ）］および慢性腎不全の間に生じる 。再発リンパ球性心膜炎というエピソードの間移植された患者Ｂは、生検に基く 拒絶反応の証拠なしで移植後すぐに上昇した血清ＩＬ２Ｒレベルを示した。従っ て、上記状態のひとつの存在および可能的な他の条件は、拒絶反応に関連しない 心臓移植患者におけるＩＬ、２Ｈの上昇を引き起こし得る。

データは、心臓同種異系移植片受領者における血清中のＩＬ２Ｒの逐次測定が拒 絶反応を検出し７検査するのに有効であることを確証することを示す。上昇細潰 ＩＬ２Ｒレベルは、１．Ｌ２Ｒレベルを上昇する他の疾病の存在においても、拒 絶反応を確証または除外するために心内心膜の必要を示す。正常Ｉ　Ｌ２Ｒレベ ルの発見は、拒絶反応の排除を表わし、従って心内心膜生検の実施を未然に防ぐ のに使用し得る。１．　Ｌ　２　Ｒレベルの測定は、心内心膜生検がより高い危 険性および技術的困難性に関連する心臓同種異系移植を伴う幼児および小児に有 効であることを立証する。このアプローチは、死亡率および高価な心臓同種異系 移植片患者を取り扱うことの両方に有効であることを立証する。

１４、可溶性ＩＬ２Ｒの血清測定は、ウィルス性−一一躬遣玉１し１づけ　のに −−′」る　−−後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、細胞性免疫の困難な不 全、上昇された日和見性の感染および一定の悪性腫瘍を特徴とする。ヒトＴ細胞 白組病ＥＴリンパ球親和性（Ｔ−１ｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）　］ウィルスタイ プＩＩＩ　（ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ　）は、疾病と密接に関連し、活性疾病を 伴う患者は、困難なＴ、ｌ胞障害を表わす。臨床的に、ＡＩＤＳは、根強いリン パ球減少症およびＴ細胞機能の著しい低下で示される。しかしながら、ＨＴ　Ｌ 　Ｖ　−ＩＩＩウィルス（ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ　血清陽性）感染患者は、必 ずしも医学的異常を示さない。従ってウィルスをＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｈｒにさらさ れている患者の臨床的サブグループと例えばＡＩＤＳ関連複合体（ＡＲＣ＞のよ うなＡＩＤＳ関連疾病を示すものと区別することが必須である。

第１２図に示すように、血清ＩＬ２Ｒのレベルは、疾病の活性体と相関した。そ れ故、他の医療的試験と共同して血清中の可溶性ＩＬ２Ｈの測定値は、被験者に おける疾病の困難性の指標を提供する。

１５、可溶性、遊離Ｉ　Ｌ　２　Ｈの検知に対する２Ｒの検査に対するＩＬ２Ｈ の異なるエピトープに対して誘導される２つの異なるマウスモノクローナル抗体 を使用する血清免疫検定テストキットを記載する。セルフリー（商標）インター ロイキン２レセプターテストキット（ティー　セル　サイエンシス、インコーホ レーテッド、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）は、ヒト血清中の遊離、可溶 性ＩＬ２Ｈの定量的検出に対する直接酵素免疫検定である［ルーピン等、１９８ ５年、ジェイ、イムツル、　１３５　：第３１７２〜３１７７頁（Ｒｕｂｉｎ　 ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３５：３１７２−３ １７７）も参照］。ＩＬ２Ｈの血清の正確な定量は、免疫障害を特徴づけ、疾病 活性を検査しまたこのような障害の免疫治療処置の有効性を評価するのに重要で ある。

セルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターテストキツトを種々の患者 および対照血清中の細胞遊ＩＪＬ２Ｒを検出するのに使用した。Ｉ　Ｌ２Ｈの可 溶性または遊離形態は、白血病および一定の免疫学的疾病を伴う患者の血清中で 増加されることが見い出された。活性成人Ｔ細胞白血病患者における血清Ｉ　Ｌ ２Ｈのレベルは、高く上昇されたが、ＨＴＬＶ−Ｉ血清陽性無症候性患者グルー プにおいては低いままであった。

１５．１．’り　ゞの５、 セルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターテストキツトは、ヒト血清 または血漿中のＩＬ２Ｒのレベルの決定に対するサンドウィッチ酵素免疫検定で ある。抗体コート抗ＩＬ２Ｒは、最初にポリスチレン微小力価ウエルーヒに吸着 される。試料または標準に存在するＩＬ２Ｒは、抗体コートウェルに結合し、未 反応試料成分を洗浄除去する。ＩＬ２Ｒ分子上の第２のエピトープに対して誘導 された酵素複合抗Ｉ　Ｌ２Ｒモノクローナル抗体は、第１の抗体で捕獲されたＩ 　Ｌ２Ｒに結合しサンドウィッチを完結する。

洗浄により未結合酵素複合抗ＩＬ２Ｒの除去後、基質溶液をウェルに加える。有 色産生物が試料中に存在するＩＬ２Ｒの量に比例して形成される。反応を停止溶 液により停止し４９０ｎｍにおける吸光度を測定する。標準曲線を４つの１Ｌ２ Ｒ標準から作製する。未知の値を標準曲線より決定する。

１５．２　セルフリー（商標）テストキット構成要素および提案 各セルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターテストキツトは、９６ウ エルに十分な試薬を有する。完成キットの満了日は、外測の箱のレベルに定めら れ、推奨保存温度は、２〜８℃である。

１５．２．１　供給試薬 （ａ）抗体コート抗ＩＬ２Ｒ−１ビン 各ビンはヒトインターロイキン−２レセプターへのマウスモノクローナル抗体を 含む。２〜８℃で保存。

（ｂ）ＨＲＲ複合抗ＩＬ２Ｒ抗体−１ビン各ビンは、ヒトインターロイキン−２ レセプターへのワサビダイコンへルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合マウスモノクロ ーナル抗体を含む。２〜８℃で保存。

（Ｃ）試料希釈液−１ビン 各ビンは、血清タン白質の緩衝溶液を含む。２〜８℃でン 各ビンは、遊離または可溶性ヒトインターロイキン−２レセプター（ＩＬ２Ｒ） 緩衝溶液を含む。２〜８℃で保存。

（ｅ）ＯＰＤ錠剤−１ビン 各ビンは、不活性結合材中のＯ−フェニレンジアミンからなる１４錠のＯＰＤ錠 剤を含む。２〜８℃で保存。

次のものもまた供給される： （ｆ＞ホルダーを有する９６ウ工ル微小力価プレート各プレートは、１２のホル ダーを有する８ウエルの小片から成る。２〜２６℃で未コートブーレートを保存 。

（ｇ＞使用法 １５．２．２　必−とされるが　供されｔい　゛銭遠二次の試薬は、後述の第１ ５．２．５節の指示に従って調整されるべきである。次に挙げる試薬の名前は、 その試薬を調製するのに必要な成分のリストである。名試薬は、蒸留脱イオン水 で製造すべきである。

（ａ）緩衝液コートＰＢＳ：商業的に利用できる等張リン酸緩衝液（ＰＢＳ）［ カルシウムまたはマグネシウムなしのデュルベツコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）のＰＢ Ｓを推める）またはＮａＣΩ、ＫＣΩ、ＫＨ２ＰＯ４、Ｎ’ａ２　ＨＰＯ４−７ Ｈ２０；チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ商標名）。

（ｂ）洗浄緩衝液：緩衝液コー１−ＰＢＳ（試薬ａ）プラスポリエチレンソルビ タンモノウラレート（ツイーン２０）。

（ｃ）遮断緩衝液；洗浄緩衝液（試薬ｂ）プラスウシ血清アルブミン（中性ｐＨ １脂肪酸遊離調剤を推ぬる）。

（ｄ）基質緩衝液：クエン酸−水和物、ＮａＨＰＯ４・７Ｈ２０，チメロサール 、３０％過酸化水素。

（ｅ）停止溶液コ濃硫酸。

扛且土 使い捨てチップを有する精密ピペット：５０および１００ｕｌマイクロピペツト 。

５０〜２００ｍ！ｉｌｌ整可能マルチウェル（ｍｕ！ｔｉｗｅｌｌ）ピペッタ− 。

マルチウェルピペッタ−に対する使い捨て試薬通気材料（ｔｈｒｏｕｇｈｓ、） 試薬の調製に必要など一カ、フラスコおよびシリンダ。

微小力価プレート洗浄／吸引器具。

低温空気インキュベーター、３７±２℃。

ＯＰＰ　（ｏ−フェニレンジアミン）基質溶液の調製用使い捨てピペット。

４９０ｎｍにおける測定用微小力価プレートリーダー。

１５．２．３、　試薬予備対策 次の予備対策を提案する： 異なるキットロットからの試薬を混合しないこと。

ラベルの使用期限の過ぎた試薬を使用しないこと。

試薬汚染を防ぐため使い捨てとペットチップおよび／またはピペッタ−を使用す ること。

アジ化ナトリウムは、ＨＲＰを不活性化する。アジ化ナトリウム含有溶液は、本 検定に使用すべきでない。

保存またはインキュベーションの間ＯＰＤ試薬を強い光線にさらさないこと。

皮膚および粘膜へのＯＰＤおよび停止溶液の接触をさけること。

もしこれらの試薬が皮膚に触れた場合、水でよく洗うこと。

いずれれかの金属へのＯＰＤ錠剤、ＯＰＤ基質溶液および停止溶液の接触をさけ ること。ＯＰＤ基質溶液に対して使い捨てガラス器具または試験管を推ぬる。使 い捨てできないガラス器具を使用する場合、酸洗し、また蒸留脱イオン水でよく すすぐべきである。

１５．２．４　口１姪よ〃禄韮 静脈血を無菌状態で回収する。血清またはＥＤＴＡ血漿は、本検定における使用 に適する。凝塊または分離後、できるだけ早く各々血清まなは赤血球から血清ま たは血漿を分離する。

可視沈降物含有試料は、検定に使用する前に清澄すべきである。＆じて溶血また は脂血性（ＩｉｐｅｎｉＣ）検体を使用すべきでない。

試料は、２〜８℃で７日まで保存し得る。試料回収と分析の間の時間が７日を越 える場合、試料を冷凍保存することが好ましい、インターロイキン−２レセプタ 一分子の性質を変えるので冷凍−解凍サイクルをさけるべきである。

検定に先立って、冷凍血清または血漿を徐々に室温までもどし、ついでゆっくり と手で混合すべきである。３７℃の洛中で試料を解凍すること、試料の渦動また は急な攪拌は、さけるべきである。

アジ化ナトリウムは、Ｊ（ＲＰを不活性化する。従って、アジ化ナトリウム含有 検体を本検定に使用すべきでない。

１５．２．５　ｉ。Ｉ ○ＰＤ基質溶液を除いて、次の検体をプレートコーティング、第１５．２．６節 後述、に先立って調製すべきである： 区坦液ユニ上ＰＢ下； 商業的に利用できる等張リン酸緩衝液［デュルベツコ（Ｄｕ　ｌ　ｂｅｃｃｏ） のＰＢＳ、カルシウムまたマグネシウムなし］を推ぬる。場合により、次の方法 を表し実験室のＰＢＳを調製し得る： 約８００　ｍｌ程度の蒸留、脱イオン水中に、８．ＯＯｇのＮａＣＱ、０．２０ ｇのＫＨ２ＰＯ４、０、２０ｇのＫＣΩおよび２．１６ｇのＮａ２　ＨＰＯ４・ ７Ｈ２０を溶解する。１．００リツトルの最終容量まで蒸留、脱イオン水を加え る。緩衝液がｐＨ７，４±０．２であることを確認する。よく混合する。

商業的に利用できるまたは実験室調製ＰＢＳのいずれかに対して、Ｏ，Ｌｏｇチ ロメサールを保存剤としてて加える。よく混合する。６ケ月までの間２〜２６℃ で保存する。

洗汁里歪箪： ８００　ｍｌの緩衝液コートＰＢＳに０．４０ｍ１のポリオキシエチレンソルビ タンモノラウレート（ツイーン８０）を加える。よく混合する。３０日までの間 ２４±２℃で保存する。洗浄Ｍ街は、３０日間安定である。洗浄Ｍ衝液を、第１ Ｘ表に従って必要とされるとおりに調製し得る。

第１Ｘ表 Ｍ清液含有ＰＢＳ　ツイーン２０ ′（ｍｌ＞−ｂ士とｍ− 〇〜３２試験を検定　４００　０．２ ３３〜６４試験を検定　６００　０．３６５〜９６試験を検定　８００　０．４ １００ｍ１の洗浄緩衝液に１．０ｇウシ血清アルブミンを加える。よく混合する 。使用前３０日まで２〜８℃で保存８０ｍｔ程度の蒸留脱イオン水の中に０．３ ６ｇのクエン酸モノヒトレート、１．７４ｇのＮ　ａ２　ＨＰ　０４　・７　Ｈ ２ＯおよびＯ，Ｏｌｇのチメロサールを溶解する。１００ｍ１の最終容量まで蒸 留脱イオン水を加える。よく混合する。

緩衝液がｐＨ６，３土０．２であることを確認する。６０日までの間２〜８℃で 保存する。

止′が　２Ｈ８Ｏ ８００ｍｌ程度の蒸留脱イオン水に注意深＜５．８ｍｌ濃硫酸を加える（酸を水 に加えなければならない〉。１００ｍ１の最終審ｉまで蒸留脱イオン水を加える 。よく混合する。

６ケ月までの間２〜２６℃で保存する。

次の検体は、複合を伴うインキュベーションの終結に先立つ３０分程度に調製さ れるべきである（第１５．２．７節、後記）。

ＯＰＤ基質溶液： （ａ＞使用される８の各小片に対して、きれいなガラス試験管の中に１ｍｌの基 質緩衝液をピペットする；（ｂ）試験管中の１ｍｌの基質緩衝液ごとにＯＰＤ錠 剤１錠を加える。

ＯＰＤ錠剤は、非金属製ピンセットまたは同等のものを使用して移されるべきで ある。試験管をかたくカバーし全ＯＰＤ錠剤が溶けるまで頻繁に渦動する。３０ 分以内に使用する。

１５．２．６　提案プレートコート作成書次の作成書を推ぬる（エフ。ビー、完 全な９６ウ工ル微小力価プレートを同時にコートすべきである）：（ａ）きれい な試験管またはフラスコの中の１１．９ｍｌの緩衝液コートＰＢＳを測定する。

０．１ｍｌの抗体コート抗Ｉ　Ｌ２Ｒを加える。よく混合する。

（ｂ）完全な微小力価プレートに対する各ウェルの中に１００ｕＩの溶液を分与 する。

（Ｃ）プラスチック封止物でプレートを覆い１６〜７２時間湿気の環境において 、室ｍ（２４±２℃）にてインキュベートする。

（ｄ）全ウェルからコート溶液を捨てる。

（ｅ）完全な微小力価プレートに対して３００ｕ、Ｑの遮断緩衝液を加える。

（ｆ＞プラスチック封止物を取り換え、３７±２℃にて２時間プレートをインキ ュベートする。

（ｇ＞試料がすぐに操作されるべきである場合は、検定作成書を続ける。試料を 後に操作されるべきである場合は、使用まで２〜８℃で覆われた遮断緩衝液含有 抗体コートウェルを保存する。ウェルは、コー・ト後４５日まで安定である。

１−５．２．７　案　プロトコニ四 この検定は、プレートコート、第１５’、２．６節前記、を完結した後のみ実施 され得る。

（ａ＞使用前に、あわ立てず全試薬をよく混合する。

（ｂ）所望の数の患者試料プラスブランクを実施するのに必要な１０ウエルおよ び標準（１小片ごとに８ウエル）を試験するのに必要な小片の数を決定する。ホ ルダーから不要の小片を除きプラスック封止物で覆い２〜８℃で保存する。

（ｃ）コートウェルから遮断緩衝液を捨てる。

（ｄ＞洗浄緩衝液で３度ウェルを洗浄する。各洗浄後洗浄緩衝液を捨てる。

（ｅ）きれいな吸収紙上に反転したプレートの液を出すことにより残りの洗浄緩 衝液を除去する。

（ｆ＞ブランクウェルを空のままにし、抗体コートウェル中の正副両方に５０Ｌ １．Ｑの標準または試料をピペットする。

（ｇ＞ブランクウェルを空のままにし、全ての他のウェルに１００１Ｊ、Ｑの試 料希釈剤を加える。試料の混合汚染をさけるため注意を払うべきである。

（ｈ）プラスチック封止物で覆い定温空気インキュベーター中２時間３７±２℃ でインキュベートする。

（ｉ）封止物を除去し廃棄する。全ウェルから溶液を吸引する。洗浄と洗浄の間 よく吸引して３５０ｕｊの洗浄緩衝液で３度ウェルを洗浄する。

（ｊ）ブランクウェルを空のままにし、他の全てのウェルに１００＋ｌのＨＲＰ −複合抗ＩＬ２Ｒを加える。

（ｋ＞新しいプラスチック封止物で覆い定温空気インキュベーター中３７±２℃ でインキュベートする。複合を伴うインキュベーションの前３０分程度に、前記 １５．２．５で導かれたＯＰＤ基質溶液を調製する。

（Ω）封止物を除去し廃棄する。全ウェルから溶液を吸引する。洗浄と洗浄の間 よく吸引して３５０１Ｊ、Ｑの洗浄緩衝液で３度洗浄する。

（ｍ＞ブランクウェルを含む全ウェル中に１００ＩＪＪ）のＯＰＤＭ街液を加え る。室温（２４±２℃）にて３０分間覆わないでインキュベートする。

（ｎ）ブランクウェルを含む全てのウェル中に５０ｍ１の停止溶液をピペットす る。

（０）基質ブランクに対する４９０ｎｍでのウェルの吸光度を読む。吸光度は、 検定の完了後できるだけ早く読むべきであるが、ウェルが室温にて光線から保護 された状態を保つならば停止溶液の添加後２時間まで読むことができる。

前記第１５．２．１０節参照。

１５．２．８　標準曲線の作図 （ａ）各標準ウェルに対する４　９０　ｎｍにおける吸光度を読む。

（ｂ）２つの値を平均し平均を記録する。

（ｃ）等分目盛を使用して標準に対して単位／　ｍｌにおけるＩＬ２Ｒ温度（水 平軸）に対する吸光度（垂直軸）をプロットする。

（ｄ）最も適切な曲線を描く。

１５．２．９　患者試料 （ａ＞各患者試料ウェルに対する４９０ｎｍにおける吸光度を読む。

（ｂ）２つの値を平均し平均を記録する。

（ｅ）垂直軸上に各試料に一致する平均吸光度を設置し標準曲線を交差する水平 線を設置する。交差点において、垂直軸からのＩＬ２Ｒ濃度（単位／ｍ１）を読 む。

１５．２．１０ 検定条件は、検定から検定まで変更するかもしれないので、標準曲線は、実施毎 に確定すべきである。試薬間の混合汚染が試験を無効にするので、使い捨てピペ ットチップを使用すべきである。再使用できるガラス器具は、使用前に洗浄しす べての洗浄剤をすすぐべきである。使い捨てフラスコまたはガラス器具が好まし い。インキュベーション間の徹底的洗浄は、以下を必要とされる：（ａ）新しい 洗浄液を施す前にウェル含有物を完全に吸引する。

（ｂ）各洗浄サイクルに対してウェルの上部まで洗浄液を満す（３５０ｕＪｌ程 度）。

（Ｃ）ウェルにインキュベーション間の延長期間を受けせてはならない。

標準曲線の範囲内にある吸光度値を有する試料のみが曲線からのＩＬ２Ｒ濃度を 定められるべきである。最も高い標準を超過する吸光度を有する試料を試ｆｌ希 釈材で希釈し再試験すべきである。椎められる希釈は、１／１０である（５０Ｌ ＩＮ試料プラス４５０１Ｊｊ試料希釈剤）。試料の少ない百分率は、より多きい 希釈度を必要とし得る。ＩＬ２Ｒの正確な希釈度は、希釈試料の単位／ｍ１（標 準曲線から）におけるＩＬ２Ｒレベルを試験するのに使用された希釈度で掛ける ことによって得られる。

セルフリー（商標）インターロイキン−２レセプターテストキツトを使用して、 可溶性または遊離ＩＬ２Ｒの値は、試験試料への２υｇ　／　ｍｌまでの組換え ＩＬ−２の添加によって影響されることはない。

１５．３　セルフリー（標〉試１ １５．３．１　モノクローナル抗体 マウスモノクローナル抗体を記載された方法［ルーピン。

エル、エイ等、、　１９８５年、ハイブリドーマ　４：第９１〜１０２頁；コー ラ−、ジーおよびミルスティン、シー、　、　１９７５年。

ネイチャー　２５６　：第４９５〜４９７頁（Ｒｕｂｉｎ、　Ｌ、Ａ、、　ｅｔ 　ａｔ、、　１９８５．　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　４：９ｔ−１０２；Ｋｏｈｌｅ ｒ、　Ｇ、　ａｎｄ　）ｌｉｌｓｔｅｉｎ。

Ｃ，、１９７５，Ｎａｔｕｒｅ　２５６　：　４９５−４９７　）　］　ニより 発生させた。

選択された２つのモノクローナル抗体（２Ｒ１２，７Ｇ７＞は、ＩＬ２Ｒの異な るエピトープに対して誘導される。両方の抗体は、抗Ｔａｃ　ｍＡｂで同定され た５５キロドルトン（ｋｄ）の細胞表面タン白質を沈降することが示された。

ＩｇＧ抗体を製造者の指示［アフィーゲル　プロティンＡ　マッブス　ＩＩ　キ ット（Ａｆｆｉ−ｇｅｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＨＡＰＳ　ＩＩｋｉｔ）指示マ ニュアル、バイオラット　ラボラトリーズ。

カルフォルニア州（ＢｉｏＲａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｃａ１ｉｆｏ ｒｎｉａ）］に従って固定化プロティンＡ（バイオラット製）上のりロマトグラ フィーで９５％超過の均質性にまで精製した。酵素−抗体複合体を本貫的に記載 された［ウィルソン、エム、ビーおよびナカネ、ビー、ゲイ、　１９７８年、イ ムノフルオレセンス　アンド　リレーテッド　スタイニング　テクニークス、カ ナツブ、ダブり二一、ケイ、ホルバーおよびジー。

ウツィヒジス編、エレザビッヒ／ノートンーホランド　バイオメディカル　プレ ス、第２１５頁（Ｗｉｌｓｏｎ、　）１．Ｂ、　ａｎｄ　Ｎａｋａｎｅ、Ｐ、に 、、１９７８．　Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｒｅ１ａｔ ｅｄ　５ｔａｅｄｓ、　ｅｄｓ、、　Ｅｌｓｅｖｉｃｈ／Ｎｏｒｔｏｎ−Ｈｏｌ ｌａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｐ、　２１５）］ワサビダイコンペルオキシダーゼでＩｇＧを標識することによ って調製する。

１５．３．２．　′ Ｉ　Ｌ２Ｒ，標準をフィトヘムアゲルチン（ＰＨＡ）刺激末梢血単核細胞（ＰＢ ＭＣ）培養液の上澄液から調製した。

白血球を製造者の指示に従ってフィコールパーク［ファーマシア（Ｐｈａｒｍａ ｃ　ｉａ）　］を通じて心遣後採取した。１０Ｂ細胞／　ｍｌを１０００／ｌｎ ｌペニシリン、１００日ｇ／　ｍｌストレプトマイシンおよび１５％コウジ血清 で補足されたＲＰＭＩＩ６４０中に懸濁した。ＰＨＡ　［ウェルカム　ダイアグ ノステイクス製（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）　］を２．　Ｑ ｕＣｌ／　ｍｌの濃度にまで加えた。培養液を３〜６日３７℃で保持した。

上澄液を８分２００Ｘｇで心遣することにより採取し１０分１０．ＯＯＯＸｇで 高速回転することにより精製した。

ＩＬ２Ｒレベルは、１０００単位／　ｍｌの値を任意に与えられた上澄液の関連 組織標本に比例して酵素免疫検定における活性に基いて単位パーｍ１（ＩＪ／ｍ ｌ）値を与えられた［ルーピン、エル、エイ等、　１９８５年、ジエイ、イムツ ル、　１３５　：第３１７２〜３１７７頁（Ｒｕｂｉｎ、　Ｌ、Ａ、、　ｅｔ　 ａｌ、、　ｔ９８５．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ。

１、１３５：第３１７２−３１７７）］。

１５．３．３　患　゛ 正常血清を健康血液宿主から回収し、７日まで４℃で、またそれを越える期間は 一７０℃で保存した。

成人Ｔ細胞白血病患者血清は、エヌ、ヤスドウ博士（ｏｒ、　Ｎ、　Ｙａｓｕｄ ｏ）　（京都大学、日本）によって提供された。異常な臨床血清は、地方病院お よび診療所から得られた。

１５．３．４　精製Ｉ　Ｌ２Ｒ 精製ＩＬ２Ｒを抗ＩＬ２Ｒ免疫吸収剤（ｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｂａｎｌ）上へ のＰＨＡ刺激Ｐ　Ｂ　Ｍ　Ｃ培養液からの上澄液のアフィーニティークロマトグ ラフィーによって調製した。アフイーニティ力ラムを製造者の指示に従って１ｍ ｌリアクチゲル（Ｒｅａｃｔｉｇｅｌ）　［ピアス製（Ｐｉｅｒｃｅ）］に１■ 抗ＩＬ２Ｒ抗体（２Ｒ１２＞を連結することによって調製した。１００ｄのＰＨ Ａ上澄培養液を１＋ｎｌカラムに適用した。１００ｍ１のリン酸緩衝食塩水（Ｐ ＢＳ）でゲルから未結合材料を洗浄した後、ＩＬ２Ｒを５ｍｌの０．２Ｍグリシ ンｍｉ液、ｐＨ２，８：中に溶離；水中に透析；凍結乾燥および０．５ｍ１ＰＢ Ｓ中に再懸濁した。

１５、　３．　５　イ≦イじ乙：１二し１コ！エン二＝二？−商業的に利用でき る組換えＩＬ−２は、ジェームス　カーニック博士く叶、　Ｊａｍｅｓ　Ｋｕｎ ｉｃｋ）　［マサチューセッツジェネラル　ホスピタル、ボストン、マサチュー セッツ州（Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ、 　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＨＡ）　］の寛大なる贈与物であった。

１５．４　セルｙ！Ｊ−（＊ｌｉ！　＞セルフリー（商標）インターロイキン− ２レセプターキツトを次のとおり全血清検定に使用した；ポリスタレン微小片の ウェルを室温で一昼夜１ウェルにつき１００ｕ、ＱのＰＢＳ中の抗ＩＬ２Ｒマウ スｍＡｂの１　、５Ｕｊ７／　ｍｌ溶液でインキュベーションによって抗体をコ ートした。コート溶液を捨て、ウェルを３００ＵＪｌの１．０％ウシ血清アルブ ミンおよび０．０５％ツイーン２０のＰＢＳ溶液で３７°Ｃにて２時間遮断した 。ウェルをついで洗浄緩衝液（０，０５％ツイーン２０ＰＢＳ溶液）で３度洗浄 した。予備コートされた微小片は、２段階検定または改良されたより短い１段階 方法のいずれかに使用された。２段階検定のために、５０ｕ１の試料、標準また は対照を各ウェルに配置した。

動物血清タン白質および上澄液からなる１００ｕＪ）の試料希釈剤を各ウェルに 加えた。ウェルを３７℃で２時間インキュベートし、ついで洗浄緩衝液で３度洗 浄した。１００ｕＪのＩＬ２Ｒレセプタ・−上の第２のエピトープに対して誘導 されたＨＲＰ複合抗ＩＬ、２Ｒ抗体を各ウェルに加え３７℃にて２時間インキュ ベートした。洗浄緩衝液で３度洗浄後、１００ｕＪの基質溶液（０，２％　０− フェニレンジアミン［０ＰＤ３．０．０２２５％Ｈ２Ｏ２，６３ｎ＋Ｈリン酸二 水素ナトリウム、１７ｍ）ｌクエン酸）を各ウェルに加えた。ウェルを室温にて ３０分間インキュベートした。反応を各ウェルに５０Ｕ、ｌ！の２規定Ｈ２ＳＯ ４の添加により停止し、４９０ｎｍにおけるウェルの吸光度をグイナテック（Ｄ ｙｎａｔｅｃｈ）　ＭＲ６０００微小力価プレートリーダーを使用して読んだ。

全ての検定緩衝液および希釈剤は、保存剤として０．１％チメロサールを含有し た。未知試料は、０゜１００．４００および１６００単位／ｍｌのＩＬ２Ｒを含 有した標準を使用して作図された標準に基き値を定められた。

必要により、より早い１段階方法を次のとおり使用しな：５０ＵＮの標準、試料 または対照を各ウェルに加え、続いて１００ｕｆｌのＨＲＰ複合抗体を加えた。

ウェルを１５０〜１８０　ｒｐｍに°Ｃ振盪台上で室温にて２時間インキュベー トした。洗浄緩衝液で３度ウェルを洗浄した後、１１００ｕの基質溶液を加えた 。ウェルを室温にて２０分間インキュベートした。反応を各ウェルに１００ｕＪ の２規定硫酸を加えることにより停止した。吸光度を読みまた前述のとおり分析 した。

よ互−Ａニーシー、捩−′！Ｌ−進 代表的桓準曲線を第１３図に示す。検定の感受性は、ゼロ規準の吸光度を越える ２つの標準偏差を与えるＩ　Ｌ２Ｈの量として計算され、５０単位／　ｍｌ程度 である。１６００単位／　ｍｌまでのＩ　Ｌ２Ｒ活性を有する試料を、このキッ トにおいて測定できる；超過レベルは、試料を検定に先立ち希釈する場合に定量 され得る。

！５．４．２　庁 内部（１ｎｔｒａ）および中間（（ｉｎｔｅｒ）検定精度を第Ｘ表に示す。内部 検定変化は、１つの検定実施における各プールの２０対の試料を試験することに よってＩＬ２Ｒレベルを異にする３つの血清プールに対して決定された。変化の 割合（ＣＤ）は、３．２〜３．９％までの範囲にあった。相互検定変化は、２０ の個々の実施に対する対の試料の平均から決定された。相互検定ＣＶは、３つの 試験血清プールに対して１０〜１２％の範囲にあった。

第Ｘ表 Ｉ　Ｌ２Ｒ−の　ＰＰ情 内部検定精度ａ： 平　均　標準偏差　変化の割合 ＜　ｎ　（Ｌｌ／ｍｌ＞　（Ｌｌ／ｍｌ）　（％）血清プールＡ　３８６　１４ 　３．７ 血清プールＢ　６３６　２５　３．９ 血清プールＣ１，０２９３３３，２ 相互検定精度ｂ： 平　均　標準偏差　変化の割合 −試一一上−（Ｕ／ｌｎり　工匠虱と　（％）血清プールＡ　４１４　５０　１ ２ 血清プールＢ　６８８　７３　１１ 血清プールＣ１，１０９１０７１０ ａ　内部検定精度は、１試料につき２０の検定の平均から決定された。

ｂ　相互検定精度は、２０の異なる実施に対する平均対の試料の平均から決定さ れた。

１５．４．　３　ＰＰ 親和−精製ＩＬ２Ｒは抗ＩＬ２Ｒ親和ゲル上の通過によって内因性のＩＬ２Ｒを 取り出した。添加ＩＬ２の異なるレベルで固定された（ｓｐｉｋｅｄ）試料をＩ Ｌ２Ｒに対する検定において試験した。ＴＬ２Ｒの回収率は、予想結果の９５〜 １０３％であった（第ＸＩ表）。

第ＸＩ表 上県λ且檎定み正亘崖ａ 期待値　回収値　回収率 −Ｉｈ幻−（Ｕ／ｍ１）−智０− ０　固定試料は、変化量の精製Ｉ　Ｌ２Ｒを内因性のＩＬ２Ｒを取り出された血 清プールに加えることにより調製−一上九人一一一一一一−−−−−−−−−− −−ｍ−−−１５，４，４検定の特異性およびインターロイ　ン−２の　曵 免疫検定に使用される両方の抗体は、ヒトＩＬ２Ｒに特異であることがあらかじ め示された抗体、抗〜Ｔａｃと同様な分子を認識することが示されている［ウチ ャマ、ティー等、　１９８１年、ジェイ、イムツル、　１２６：第１３９３〜１ ３９７頁（Ｕｃｈｉｙａｍａ、Ｔ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８１．　Ｊ、Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、　１２６：１３９３−１３９７）１゜これら抗体を使用して、フィ トヘムアゲルチン刺激リンパ球からの１２５１標識表面タン白質の免疫沈降は、 拡散した５５ｋｄバンドを明らかにし、また逐次的免疫沈降は、この分子が抗Ｔ ａｃにより沈降されるものと全く同一であることを示す［ルーピン、エル、エイ 等、　１９８５年、ハイブリドーマ４：第９１〜１０２頁（Ｒｕｂｉｎ、　Ｌ、 Ａ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８５゜Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　４：９ｌ−１０２） ］　、従って抗体の１つ（２Ｒ１２＞は、活性化リンパ球の細胞螢光的分析にお いて抗Ｔａｃと競争的に結合することを示す。これらの抗体を使用する酵素免疫 検定は、ＴＬ２Ｒ表面陽性細胞の媒養上澄液中［ルーピン、エル、エイ、等、　 １９８５年、ジェイ、イムツル、１３５；第３１７２〜３１７７頁（Ｒｕｂｉｎ 、　Ｌ、Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．　Ｊ、　１ｍｍｕ口ｏｆ、　１３ ５：３１７２−３１７７）］およびその正常の複製ではなくＩＬ２Ｒ遺伝子の平 頭形態で形質転換されたマウスし細胞の媒養上澄液中［トライガ−、ビー、エフ 等、　１９８６年、ジエイ。

イムツル、　１３６：第４０９９〜４１０５頁（Ｔｒｅｉｇｅｒ、　Ｂ、Ｆ、、 　ｅｔ　ａｌ、。

１９８６、　Ｊ、　Ｔｍｍｕｎｏｌ、　１３６：４０９９−４１０５）ｌのＩ　 Ｌ２Ｒ，の遊離形態を検出する。

添加ＩＬ−２の存在下のＩＬ２Ｒ検定キットの実施を決定した。５１（１／ｍｌ までの添加組換えＩ　Ｌ−２（ｒ　Ｉ　Ｌ−２＞の血清濃度は、ＩＬ２Ｒ検知に おいて無視できる程度の妨害を引き起こした（第１４図）。５０００（１／ｍｌ の添加ｒＩＬ−２において、ＩＬ２Ｒレベルは、期待値のほんの４０％であった 。治療試験に提案されたＩＬ−２の濃度は、１０００／ｍｌ範囲にあり、また最 初の注入後の血清において１０分未満の半減期を示した［ロソシェ、エム、ティ ー等。

１９８５年、ジエイ、イムツル、１３５；第１８６５〜２８７５頁（ＬＯｔＺｅ 。

Ｈ，Ｔ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８５．　Ｊ、　Ｉｔｎｍｕｎｏｌ　１３５： ２８６５−２８５７　）　］。

従ってＩＬ−２の治療レベルは、本検定によるＩ　Ｌ２Ｈの測定において著しい 妨害を引き起こすことは予想されない。

８０％超過のＩＬ２Ｒ期待値は、ｒＩＬ−２のこれらの濃度にて得られた。加え て、正常血清中のＩＬ−２の検出可能レベルは、観察されなかった。

１５゜４．５　ヒト血清中のＩ＝Ｌ２Ｒレベｌｔ、−正常ヒト血清におけるＩＬ ２Ｒレベルの分布を第１４図に示す。１７４の健康血液宿主の平均Ｉ　Ｌ２Ｒレ ベルは、２７３　Ｕ／ｍｌであった。このグループに対する正常の上限は、４７ ７０／ｍ！（平均＋２標準偏差）。

成人Ｔ、［胞白組病を有する２３名の患者の２２に対する血清レベルは、正常レ ベルを越えて上昇し７′：（第１５図）。

これらの患者の大部分は、Ｉ　Ｌ２Ｒレベルの著しい上昇を示した（１６００年 位／　ｍ！超過）。

現在の試験は、正常ヒト血清に存在する遊離ｒＬ２Ｈの検出可能レベルおよび成 人下細胞白血病患者の上昇血清レベルを提示する［ルーピン、エル、エイ等、１ ９８６Ｌ　ｒフイデンテイフイケーション　アンド　キャラクタリゼーション　 オン　ア　リリースド　フオーム　オン　ジ　インターロイキン−２レセプター 」、歪之　ロイコサイツアンド　ホスト　ディフェンス、オッペンハイム、ジェ イジェイ、およびディー、エム、ヤコブス編、アラン　アール、リス、　インコ ーホレーテッド、　ニューヨーク州。

第９５〜１０２頁（Ｒｕｂｉｎ、　Ｌ、Ａ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８６．　 ”Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 　ｏｆ　ａ　Ｒｅ１ｅａｓｅｄ　Ｆｏｒｍ　ｏｆ　ｔｈｅＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉ ｎ−２Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｉｎ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｈｏ５ｔ　Ｄ ｅｆｅｎｓｅ、　Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ、　Ｊ、Ｊ、　ａｎｄ　Ｄ、Ｈ，Ｊａｃｏ ｂｓ、　ｅｄｓ、、＾ｔａｎ　Ｒ，ｌ。

ｉｓｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｄｐ、９５−１０２）ｌ。

細胞表面測定にに対する代わりとして、遊離または可溶性ＩＬ２Ｈの検出に対す る商業的酵素免疫検定の有用性は、新規方法における変更した免疫状態を評価す ることを可能にする。従って、分類細胞を得る侵略的サンプリング方法をさける 。さらに、血清ＩＬ２Ｒ検定は、免疫調節への洞察を提供する。

上立ニー恵五図扛江ゑ五蓄二立旦旦艙淀次の節は、患者中の可溶性ＣＤ８を検出 するのに使用し得る抗体および検定を記載する。

１６．１　モノクロー力止就茸 抗ＣＤ８モノクローナル抗体５Ｆ４をレインハーツ（Ｐｅｉｎｈｅｒｚ）等［１ ９７９年、ブロス、ナトル、アカド、サイ、ニー、ニス、エイ、７６；第４０６ １〜４０６５頁（１９７９，Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　 Ｕ、Ｓ、Ａ、　７６：４０６１−４０６５）　］に従ってヒトＴ細胞系［ジャー カット（Ｊｕｒｋａｔ）　′１″′Ｃ′ＢＡＬＢ／Ｃマウスを免疫化することに よって発生させた。モノクローナル抗体５Ｆ４は、ｍＡｂ　０ＫＴ８で認識され るＣＤＳ上のエピトープと異なるＣＤＳ上のエピトープを認識する。

よ立ニスー五蓄且皇旦ｌ遺淀 可溶性ＣＤ８を以下に要約する方法を使用した試料中において検出した： （ａ）ポリスチレン微小力価ウェル［フロラ　ラボラトリ−（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｙ）１を１００ｕＪ）のｍＡｂ　ＯＫＴ［オルソ　ダイアグメステ ィシス。ラリタン、ニューシャーシー州（Ｏｒｔｈｏ　Ｏｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ 、　Ｒａｒｉｔａｎ、　Ｎ１．月の抗ＣＤ８マウスモノクローナル抗体（２，５ ０（１／　ｍｌ）ＰＢＳ溶液で４℃にて一昼夜コートした。

（ｂ）コート溶液を捨て、ウェルを３００ｕｊ！の０．０５％ツイーン２０およ び塩化ナトリウム（Ｎ　ａＣＱ　＞中２５１ＩＩＨトリスｐＨ７，４含有トリス 緩衝食塩水中１％ＢＳＡで室温にて１〜２時間遮断した。

（ｃ）ウェルを１０１１ＩＨトリス０．０５％ツイーン２０．ｐＨ８，０（トリ ス洗浄溶液）で３度洗浄した。

（ｄ）１ウエルにつき１０ｕＪ試料を加え、続いてトリス緩衝食塩水および０． ４％ＮＰ−４０［シダ？　（ｓｉｎｍａ）］中５０％ＦＣ８含有９０ｕｊ）希釈 剤を加えた。ウェルを３７℃で２時間インキュベートした。

（ｅ）ウェルをトリス洗浄溶液で３度洗浄しな。

（ｆ）１００ｕＪ）の５０％ＦＣ３，２４ｍＨｌトリスｐＨ７゜４．０．１５Ｍ 　ＮａＣＣおよびＮｐ−４０中のワサビダイコンペルオキシダーゼ接合抗ＣＤ８ マウスモノクローナル抗体（０，２１ｇ／　ｍｌ　ｍ、Ａｂ　５Ｆ４）を各ウェ ルに加え３７℃で２時間インキュベートした。

（ｇ）ウェルをトリス洗浄溶液で４度洗浄しな。

（ｈ）１００ｕＪ）のクエン酸塩−リン酸塩緩衝溶液中の０゜２％０−フェニレ ンジアミン（ＯＰＤ）および０．０１５％Ｈ２Ｏ２をウェルごとに加えた。プレ ートを室温にて３０分間インキュベートした。

（ｉ）５０ｕ１の２規定Ｈ２ｓｏ、、を各ウェルに加え各ウェルの吸光度を微小 力価プレートリーダーの中で４９０ｎｍにて測定した。

１６．３　ＣＤ８対照標準 組織培養系［ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔｔ）］の上澄液を標準として使用した 。測定値は、２０００年位／　ｍｌの関連数を定められた。培養上澄液は、１０ ％ＦＣ３および１００単位のペニシリン−ストレプトマイシン含有ＲＰＭ−１６ ４０から構成される装 １６．４　細胞遊離しトＴＭ３胞ＣＤＳ様分子の量に　・　る　、 ＣＤ８抗原上の別個のエピトープに対して誘導されるモノクローナル抗体、ヒト サプレッサー／相胞毒Ｔ細胞マーカーを使用して、本発明者らは、ヒトＴ細胞Ｃ Ｄ８様抗原た。この抗原の上昇レベルは、一定の白血病、同種異系移植片移植お よびリウマチ性関節炎および狼噴のような自動免疫疾思を含む若干の疾病または 状態において観察される。

縦の患者の研究において、細胞遊ｉＩ　ＣＤ　８の血清レベルの増加は、可溶性 インターロイキン−２レセプター（ＩＬ２Ｒ）の発現と比較される異なる時間枠 において見い出される。一定の例において、細胞遊％ｆＣＤＳ様分子の上昇は、 血清ＩＬ２Ｒレベルの上昇を伴う数日の後である。この細胞遊ＮＣＤ５様分子の 増加レベルは、細胞遊離ＩＬ２Ｒの上昇で測定されるような免疫活性化から認識 される特定の臨床病理学出来事と著しい数のサプレッサー／細胞毒の関わりあい を示し得る。細胞結合ＣＤ８およびＩＬ２Ｒ分子の存在は、細胞表面染色法で代 表的に測定される。これらの細胞遊離検定は、一定の免疫学的障害のより完璧な 理解を提供し得る。

ＣＤ８に対して使用される検定は、前述の第１６．２節に記載されたサンドウィ ッチ酵素免疫種である。抗ＣＤ８ｍＡｂ　（ｍＡｂ　１＞を例えば微小力価ウェ ルのような固体底質上にコートした。試料中のＣＤ８は、抗体コートウェルに結 合する；未反応試料成分を洗い出す。ｍＡｂ　１のものと異なるエピトープを認 識する酵素複合第２の抗ＣＤ８　ｍＡｂ　（ｍＡｂ２＞は、第１の抗体で補獲さ れたＣＤ８抗原に結合し、サンドウィッチを完結する。未結合ｍＡｂ２を洗浄除 去しな。基質溶液をウェルに加え有色産生物を試料に存在するＣＤ８の１に比例 して形成した。反応を停止溶液により停止させ吸光度を測定した。標準曲線をＣ Ｄ８標準から作製する（後述の第１７．３節参照）。未知の値を標準曲線より決 定した。

１６．４．１　捕獲抗体としての抗ＣＤ８モノクローナル九体の評価 ＣＤ８抗原に対して誘導される種々のモノクローナル抗体（ｍＡｂ＞を検出抗体 （ｒｎＡｂ　２）として抗ＣＤ８ｍＡｂ　５Ｆ４を使用する酵素免疫検定におけ る捕獲抗体としてのそれらの妥当性に対して試験した。

プレート［フロラ　ミクロストリップス、７０ウ　ラボラトリイ、マツクリーン 、バージニア州（Ｆｌｏｗ　ｍ１ｃｒｏｓｔｒｉｐｓ、　Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｙ、　ＭｃＣｌｅａｎ、　ＶＡ）］を２．　５ｕｇ／　ｍｌの捕獲抗体 で一昼夜コートした。非反応性部位を０．１５ＭＮ　ａ　ＣΩ、０．０２５Ｍト リス−ＣＱ　（ｐＨ７，４＞。

０．０１％メチロサール、０．１５％およびツイーン２０中の１％ＢＳＡ含有溶 液で翌日遮断した。ＣＤ８含有ジヤーカツト（Ｊｕｒｋａｔ）細胞から成り、ト リス緩衝食塩水中の２５％コウシ血清、０．２５％ノニデットＰ−４０［Ｎｏｎ １ｄｅｔ　Ｐ−４０（ＮＰ−４０）］中に１：４に希釈された１０ｕｆＪの試料 を加えた。３７℃で９０分間インキュベーション後、プレートを１１０ｆｆ１ト リス、０６０５％ツイー７２０、ｐＨ８゜０で洗浄した。１００ｕ、Ｑのトリス 緩衝食塩水中２５％コウシ血清、ＮＰ−４０中の（１ｍ１ｘｌ　ｍ１株の１：５ ．ＯＯＯ希釈度での〉ワサビダイコンペルオキシダーゼ接合ｍＡｂ５Ｆ４を加え た。プレートを３７℃で９０分間インキュベートし上記のごとく洗浄した。１０ ０ｕｊの０，２％０−）１二レンジアミンを０．０１５％Ｈ２０２中に加え、室 温にて３０分間インキュベートし、その後吸光度を４５ｏｎｍにおいて読んだ。

結果を第ＸＩＩ表に示す。

第ＸＩＩ表 補獲　しての　ＣＤ８モノクローナル　のｉＦｊｍＡｂ　５Ｆ４のＣＤ８　ヘの 補−ｊｌ−］し一体　仕入を　９旦４５０２Ｂ９８．１．１　部分的　０．０２ ８ Ｂ１１６．１．１　あり　０．０２７ Ｂ９９．１．１　なし　０．０３９ ０ＫＴ８　なし　０．４１３ ４Ｃ９なし　１．１０６ ５Ｆ４　あり　０．０４２ ６２ＥＣ３（対照）　あり　０．０４２１　検出抗体としてＨＲＰ複合ｍＡｂで の３　キーホール　リムペット　へモサイアニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ　１ｉｍｐｅ ｔ　ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）［パシフィック　バイオラブズ、カリフォルニア州 （Ｐａｃｉｆｉｃ　Ｂｉｏｔａｂｓ、ＣＡ）に対して誘導された陰性対昭ｍＡｂ −隻 ｍＡｂ　５Ｆ４への結合競争検定の結果も第ＸＩＩ表に示す。これらの検定は、 捕獲抗体が０ＫＴ８および検出抗体でありか”）５０ｕＪｌ競争抗体（ｌｏｇ／ ｍりプラス５０ｕ１ＨＰＲ−接合ｍＡｂ　５Ｆ４（１ｍｇ／ｍ１株の１：２５０ ０希釈で）の混合物であることを除いて前記と同様な作成書を使用して実施され た。

第ＸＩＩ表に示すように、捕獲抗体として試験された７のｍＡｂをＣＤ８抗原へ のｍＡｂ　５Ｆ４の結合を競争的に阻害するこれらの能力に基づいて３つのグル ープに分類できる。予想どおり捕獲および検出の両方の抗体としての５Ｆ４　ｍ Ａｂの使用は、作動しない（捕獲抗体５Ｆ４は、検出抗体５Ｆ４結合を競い負か す（ｃｏｍｐｅｔｅ　ｏｕｔ）故）。驚くべきことに、ＣＤ８への５Ｆ４の結合 を競争的に阻害しないｍＡｂのグループの中で、最高の検定結果を与える４Ｃ９ が最良に働き、０ＫＴ８が続きそれに対してＢ９９゜１．１は陰性であった。従 って、競争能力に基づいてでさえも、抗ＣＤ８モノクローナル抗体がサンドウィ ッチ検定において働くものであることを予想することは明白でない。

また、捕獲抗体としてｍＡｂ　４Ｃ９に対するｍＡｂＯＫＴ８の使用にて測定さ れた血清ＣＤ８レベルの比較もなされた。ｍＡｂ　５Ｆ４を検出抗体として使用 した。第ＸＩＩ表に示す結果は、はとんど大部分の場合において捕獲抗体として ４Ｃ９を使用した大きい検出レベルを示す。

第ＸＩＩＩ表 ２つの異なる抗ＣＤ８補獲抗体を 用　るＣＤ８レベの　１ 患者グループ正常 ３Ｂ　２７０ 第　ＸＩＩＩ　表（続き） ２つの異なる抗ＣＤ８補獲抗体を 用　るＣＤ８レベの 腎移植患者 １　検出抗体として抗ＣＤ８　ｍＡｂ　５Ｆ４でよヱーｊｌＪり名丸囚陸郭−旺 僅笠）沈Ｕα１１工１８レベ少い（つかの疾病および障害は、患者の血清ＣＤ８ レベルを測定することによって段階づけまたは診断され得る。実施例を以下の小 節に記載する。

１７．１　リウマチ性関節永９困１旬り画前述のＣＤ８サンドウイツチ酵素免疫 検定を使用して、他の併合疾病からりウマチ性関節炎を識別できる（第１６図） 。第１６図に示す結果は、捕獲抗体としてｍＡｂ　４Ｃ９および検出抗体として ｍＡｂ　５Ｆ４を使用して測定された血清または滑液ＣＤ８濃度のレベルに基づ く。

１７．２　腎　６種　系下植　の血Ｉｔベル患者Ａは、死者からの非同−腎臓同 種異系移植片の受領であった。この患者を５月２３日に移植し、またサイクロス ポリンＡ　（ＣｓＡ）て゛維持した。５月２３日〜５月３１日まで、この患者は 、ＣｓＡ毒およびいくつかの早期拒絶反応を経験した。６月２８日、拒絶反応エ ピソードをクレチニンレベルの上昇に基づいて診断し、患者は、７月７日まで１ 日に４度静脈内に５■服用藍で０ＫＴ３　ｒｎＡｂを投与された。７月８日、ク レアチニンレベルが減少し、患者は、回復の段階に入った。７月１８日、プレド ニゾンの投与で処置されたクレアチニンレベルの別の上昇があったが、別の服用 量のプレドニゾンを投与した時には、８月２６日までクレアチニンレベルの減少 を引き起こした。

患者血清中のＩＬ２ＲおよびＣＤ８を、５月２３日（移植日）から好適な間隔で 測定し続け、そして拒絶反応エピソードの後のくしかしＣｓＡ中毒のエピソード の後ではない〉血清ＣＤ８レベルにおけるピークを示す第１７図に示す。これは 、腎臓移植の検査および特異的診断における血清ＣＤ８レベルの測定の役割を示 唆する。

１７．３　非ホジキンリンパ腫を有する小児の２ＣＤ８レベル　− ＣＤ８レベルを、前述の第９節に記載されたＩＬ２Ｒ血清レベルの研究に使用さ れた非ホジキンリンパ＠　（ＮＨＬ）またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ａ ＬＬ）を有する小児の血清において測定した。

前記の酵素免疫検定を捕獲および検出抗体として各々、抗ＣＤ８　ｍＡｂ　４Ｃ ９および５Ｆ４とともに使用した。

第１８図に示す結果は、患者の血清ＣＤ８抗原のレベルの検出可能な上昇が進行 した疾病および不十分な成果と関連するらしいことを提示する。

１７．４　感染性疾病のＣＤ８レベル 第１６．２節に記載された酵素サンドウィッチ免疫検定を感染性疾病を有する患 者の血清中のＣＤ８レベルを測定するのに使用した。抗ＣＤ８　ｍＡｂ　４Ｃ９ および５Ｆ４を各々、捕獲および検出抗体として使用した。第１９図に示す結果 は、ＣＤ８抗原の上昇レベル、特にＢ型肝炎、エプスタインバーウィルス、ＡＩ ＤＳ関連複合体およびＡＩＤＳ障害を有する患者におけるＣＤ８抗原の上昇レベ ルを示す。

上８．−匪混作ｑ旦抗爪立分ヱ竺ユ迭淀ジャーカット細胞上澄液および細胞溶解 産物を抗体で認識されるその可溶性または細胞関連分子中のＣＤ８の分子特性を 研究するため抗ＣＤ８　ｍＡｂで免疫沈降しな。

１８．１　２ ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）　Ｔ　２５７ラスコ中の５Ｘ１０６ジヤーカツト細 胞をｍｅｔ−ＲＰＭ１６４０培地中の２ｍＣ１３５Ｓ−メチオニンでパルス捏識 （ｐｕｌｓｅ−１ａｈｅｌｅｄ）した。

６時間後、培地を除き、細胞を完全ＲＰＭ１１６４０培地で洗浄し、また細胞を 採取前１６時間、完全ＲＰＭ１１６４０培地中インキュベートした。細胞を遠心 によりペレット状にした。上澄み試料を３０分間２０．ＯＯＯＸｇで細胞培養上 澄液を遠心し、また０、２２ｕｍのミリポア（商淳）（ＨｉｌｌｉｐｏｒｅＴＨ ）フィルターで上澄液を瀘過することにより調製した。細胞溶解産物を１ｍｌ溶 解緩衝液中に５×１０Ｇ細胞を再懸濁することにより調製した：すなわち溶解緩 衝液は、０．１５ＭのＮａＣＤ　、　２５ｍｌのトリス−ＣΩ（ｐＨ８，０＞　 、１ｍＭのＭｇＣＮ２．１％のノニデットＰ−４０（ＮＰ−４０，ポリオキシエ チレン（９＞ｐ　−１ｅｒｔ−オクチルフェノール）、１ｍＭのフェニルメチル スルフォニルフロリド（ＰＭＳＦ＞　、０．２■／ｍｌのアルファー−２−マク ログルプリン、１０ｍＭのヨードアセトアミド、０．１■／　ｍｌのオボムコイ ドトリプシン阻害剤である。

細胞プラス溶解Ｍ街液を４℃で０．５時間放置し、３０分間２０．ＯＯＯＸｇで 遠心しまた上澄液＜ｍ胞溶解産物試料）を免疫沈降物のために除去した。

培養上澄液および細胞溶解産物を抗ＣＤ８　ｍＡｂ　５Ｆ４．４Ｃ９および０Ｋ Ｔ８で免疫沈降することにより精製した。免疫沈降は、次の２段階において達成 される：すなわち、非特異的吸着段階および特異的結合段階である。

結合材料を非特異的に除去するために溶解産物または細胞上澄試料を室温にてロ ッカー上で３時間５％容量のマウス免疫グロブリンＧに連結されたパックセファ ロース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ）　［アノイーゲル。バイオラット、リッチモンド 、カリフォルニア州（Ａｆｆｉｇｅｌ、　Ｂｉｏｒａｄ、　Ｒｉｃｂｍｏｎｄ、 ＣＡ）］でインキュベートした。セファロースを回転除去後、上澄液（１ｍ１培 養上澄試料または０．．２ｍｌ溶解産物試料のいずれか）を１０ｕ１のｍＡｂ　 ０ＫＴ８または４Ｃ９または５Ｆ４まなは対照ｍＡｂ　０ＫＴ３のいずれかへ連 結・されたバックセファロースでインキュベートした。試料を２時間室温にて撹 拌し、次いで１．５ｍｌリン酸塩緩衝食塩水で１０度洗浄した。試料を２００１ ）の５０ｍＭジメチルアミン。

０．１５Ｍ　ＮａＣＮ、ｐＨ１１，０中に溶離した。溶出液を等容量の電気泳動 試料緩衝液で希釈しな。各溶出液の半分を１．０ｍＭの濃度へのジチオトレイト ール（ＤＴＴ）の添加によって還元し、各溶出液の半分を還元せずそのままにし た。試料を煮沸し、１０〜２０％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミド ゲル上に載せた。ゲル乾燥しオートラジオグラフィーのためにさらした。

１８．２　抗ＣＤ８　ｍＡｂは、５２〜５５キロドルト２ゴｌ可Ａμｍｇエソミ 抗１Ｕ辷認１し１灸未還元細胞溶解産物免疫沈降物は、支配的に５２〜５５ｋｄ の形態を含有する。これは、予め報告された［フジモト。

ジェイ等、　１９８３年、ジェイ、エキスプ、メト、　１５９：第７５２〜７６ ６頁（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｔ、、　１９８３．　Ｊ、　Ｅｘｐ 、　Ｈｅｄ、　１５９ニア５２−７６６）］　６６　ｋｄのＣＤ８抗原の細胞表 面形態よりいく分か小さい。驚くべきことに、未還元細胞培養上澄免疫沈降物は 、５２〜５５ｋｄのＣＤ８抗原のダイマーの形態のみを含む。これは、サンドウ ィッチ免疫検定における可溶性抗原の還元または未還元条件のいずれがの下で２ ７ｋｄのモノマー形態のみを検出したフジモト等の結果と対比している（フジモ ト等、前記）。ここで記載される還元上澄免疫沈降物において、２７ｋｄ　ＣＤ ８モノマーが観察され、ホモダイマーとしての５２〜５５ｋｄの可溶性形態の同 一性を確認しな。従って抗ＣＤ８　ｍＡｂは、可溶性および細胞関連分子の両者 としてのＣＤ８抗原のダイマー性の５２〜５５ｋｄの形態を認識した。

還元剤、ＤＴＴが上澄試料中のＣＤ８抗体に対するサンドウィッチ酵素免疫検定 に含まれる時、結合は、観察されなかった。従って、モノマーへの可溶性ダイマ ー性形態の還元は、可溶性抗原を結合する抗−ＣＤ８　ｍＡｂの能力をだめにし 、これらの抗ＣＤ８　ｍＡｂが可溶性ＣＤダイマーにのみ結合し得ることを確認 した。

１９、　ハイブリドーマの　１ 表示モノクローナル抗体を産生ずる次のハイブリドーマ細胞系はアメリカン　タ イプ　カルチャー　コレクション。

ロックビレ、メリーランド州（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　 Ｃ。

１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　ＨＤ、）で寄託され寄託番号を定 められている： ハイブリドーマ　天ノイづ１ニゴＪｄ光体　寄止紺胞系　Ａ）１９２／２Ｒ１２ 八Ｈ９２／２Ｒ１２（抗ＩＬ２Ｒ）細胞系　７Ｇ７　７Ｇ７（抗ＩＬ２Ｒ）　Ｈ ８８７８４細胞系　４Ｃ９４Ｃ９（抗ＣＤ８） 細胞系　５Ｆ４／７８１２　５Ｆ４／７Ｂ１２　（抗ＣＤ８）寄託実施態様を本 発明の１態様の簡単な説明として意図しまた機能的に等しいいずれかの細胞系が 本発明の範囲内にあるため、本発明は、細胞系寄託による範囲に限定されるべき ではない。事実ここに示され記載されたものに加え本発明の種々の変更は、前述 の記載および添附図面より当業者に明らかになるであろう。このような変更は、 添附された請求の範囲の範囲内にあることが意図される。

邦性イｉｓＴ＃１１１４已（％） Ｌｏｇ＠Ｉ　Ｌ２Ｒ ＬｏｇｅｌＬ２Ｒ ’Ｊ＃、ｉｔ　ＩＬ２Ｒ（単菰／ｍ１）ｆＪ２ｆ＋、ｌ７ｉＩ　Ｌ−２１／乞フ ゛クーレヘ゛ル　（ｌイｉｔ／ｍｌ）ＦＩＧ、１２ ＦＩＧ、１５ ＦＩＧ、１６ ユＬ２Ｒ７ＢｔＪ７８４ｇ　／ｍｆ　（＜１ｏｏ０　）ＦＩＧ、１８ ＦＩＧ、１９ 国際調査報告 １″１″１ｌＪｌｘｌｌｌ″””””””−’　ＰＣＴ／［ＪＳ８７１００４３ ０

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. １．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルが疾病の進行段階を示 すものである悪性リンパ腫を有する患者から得られる体液中の可溶性インターロ イキン−２レセプターの濃度を測定することからなる悪性リンパ腫を段階づけす る方法。
2. ２．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルが治療へのわずかな応 答を示すものである患者から得られる体液の可溶性インターロイキン−２レセプ ターの濃度を測定することからなる悪性リンパ腫を有する患者に対する治療処置 の効果を検査する方法。
3. ３．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルがインターロイキン− ２治療への正の応答を示すものであるインターロイキン−２治療を受ける患者か ら得られる体液の可溶性インターロイキン−２レセプターの濃度を測定すること からなる非リンパ性悪性態を有する患者に対するインターロイキン−２治療の効 果を検査する方法。
4. ４．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルが同種異系移植片の拒 絶反応を示すものである移植患者から得られる体液の可溶性インターロイキン− ２レセプターの濃度を測定することからなる移植患者の同種異系異種片拒絶反応 を検出する方法。
5. ５．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルが活性ウィルス性感染 を示すものである患者から得られる体液の可溶性インターロイキン−２レセプタ ーの量を測定することからなる患者のウィルス性感染を検査する方法。
6. ６．体液が血清よりなる請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４項または第５ 項に記載の方法。
7. ７．可溶性インターロイキン２レセプターが（ａ）免疫特異性結合を認める条件 下、モノクローナル抗体２Ｒ１２および７Ｇ７と体液とを接触させ、また（ｂ） 免疫特異性結合が体液中の可溶性インターロイキン−２レセプターの存在を示す ものである該免疫特異性結合がモノクローナル抗体２Ｒ１２および７Ｇ７の両方 を有する体液の成分を引き起こすかどうか検出することによって検出される請求 の範囲第１項、第２項、第３項、第４項または第５項に記載の方法。
8. ８．体液が血清から成る請求の範囲第７項に記載の方法。
9. ９．悪性リンパ腫が非ホジキンリンパ腫を含む請求の範囲第１項または第２項に 記載の方法。
10. １０．悪性リンパ腫が白血病から成る請求の範囲第１項または第２項に記載の方 法。
11. １１．非リンパ性悪性態が肺がんから成る請求の範囲第３項に記載の方法。
12. １２．同種異系移植片が肝臓移植から成る請求の範囲第４項に記載の方法。
13. １３．同種異系移植片が心臓移植から成る請求の範囲第４項に記載の方法。
14. １４．ウィルスがＨＴＬＶＩＩＩから成る請求の範囲第５項に記載の方法。
15. １５．ウィルスが単純ヘルペスウィルスから成る請求の範囲第５項に記載の方法 。
16. １６．（ａ）試料を第１の抗ＣＤ８抗体と、免疫特異結合を認める条件下、第１ の抗ＣＤ８抗体と同じ結合部位に対して競争しない第２の抗ＣＤ８抗体とを接触 させ、また（ｂ）第１のおよび第２の抗レセプター抗体の両方の試料の成分の免 疫特異結合が試料において細胞遊離可溶性ＣＤ８またはフラグメント、誘導体ま たは複合体の存在を示すものである免疫特異結合が第１および第２の抗ＣＤ８抗 体の両方を有する試料中の成分を引き起こすかどうかを検出すること から成る試料中の細胞遊離性ＣＤ８Ｔ細胞抗原を検出する方法。
17. １７．第１の抗体が４Ｃ９より成る請求の範囲第１６項に記載の方法。
18. １８．第２の抗体が５Ｆ４／７Ｂ１２より成る請求の範囲第１６項に記載の方法 。
19. １９．第１の抗体が４Ｃ９より成りかつ第２の抗体が５Ｆ４／７Ｂ１２より成る 請求の範囲第１６項に記載の方法。
20. ２０．第１の抗ＣＤ８抗体を固定化しかつ免疫特異結合を固定標識の検出で示す ために第２の抗ＣＤ８抗体を標識する請求の範囲第１９項に記載の方法。
21. ２１．固定抗体が４Ｃ９から成る請求の範囲第２０項に記載の方法。
22. ２２．標識抗体が５Ｆ４／７Ｂ１２から成る請求の範囲第２０項に記載の方法。
23. ２３．固定抗体が４Ｃ９かち成りかつ標識抗体が５Ｆ４／７Ｂ１２から成る請求 の範囲第２０項に記載の方法。
24. ２４．試料が体液から成る請求の範囲第１６項、第１９項、第２０項または第２ ３項に記載の方法。
25. ２５．体液が血清から成る請求の範囲第２４項に記載の方法。
26. ２６．可溶性ＣＤ８の上昇レベルが疾病の進行段階を示すものである悪性リンパ 腫を有する患者から得られる体液の可溶性ＣＤ８の濃度を測定することからなる 悪性リンパ腫を段階づけする方法。
27. ２７．可溶性ＣＤ８の上昇レベルが治療へのわずかな応答を示すものである患者 から得られる体液の可溶性ＣＤ８の濃度を測定することからなる悪性リンパ腫を 有する患者に対する治療処置の効果を検査する方法。
28. ２８．可溶性インターロイキン−２レセプターの上昇レベルが非特異合併疾病と 対照的にリウマチ性関節炎の経験を示すものである患者から得られる体液中の可 溶性ＣＤ８の濃度を測定することからなる患者のリウマチ性関節炎を診断する方 法。
29. ２９．可溶性ＣＤ８の上昇レベルが同種異系移植片の拒絶反応を示すものである 移植患者から得られる体液の可溶性ＣＤ８の量を測定することからなる移植患者 の同種異系拒絶反応を検出する方法。
30. ３０．可溶性ＣＤ８の上昇レベルが活性ウィルス性感染を示すものである患者か ら得られる体液の可溶性ＣＤ８の量を測定することからなる患者のウィルス性感 染を検査する方法。
31. ３１．悪性リンパ腫が非ホジキンリンパ腫を含む請求の範囲第２６項または第２ ７項に記載の方法。
32. ３２．体液が滑液から成る請求の範囲第２８項に記載の方法。
33. ３３．同種異系移植片が肝臓移植を含む請求の範囲第２９項に記載の方法。
34. ３４．ウィルスがＨＴＬＶＩＩＩから成る請求の範囲第３０項に記載の方法。
35. ３５．ウィルスがエプスタインバーウィルスから成る請求の範囲第３０項に記載 の方法。
36. ３６．ウィルスがＢ型肝炎ウィルスから成る請求の範囲第３０項に記載の方法。
37. ３７．実質的に純粋な細胞遊離可溶性Ｔ細胞ＣＤ８抗原。
38. ３８．５２〜５５キロドルトンの分子量を有するホモダイマーから成る請求の範 囲第３７項に記載の可溶性ＣＤ８抗体。
39. ３９．モノクローナル抗体４Ｃ９および５Ｆ４で特定される細胞遊離ＣＤ８抗原 、フラグメント、誘導体または複合体。
40. ４０．（ａ）免疫特異性結合を認める条件下固定化モノクローナル抗体４Ｃ９に 細胞遊離試料を加え、（ｂ）未結合物質を除去し、 （ｃ）免疫特異性結合を認める条件下段階（ａ）の反応混合物に標識抗体５Ｆ４ 加え、 （ｄ）未結合物質を除去し、かつ （ｅ）免疫特異性結合が段階（ｃ）の反応混合物中に引き起こされるかどうか検 出する 段階から成るサンドウィッチ免疫検定に陽性に反応する請求の範囲第３７項に記 載の細胞遊離ＣＤ８、フラグメント誘導体または複合体。