JPH01500997A - ヒアルロニダーゼの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒアルロニダーゼの使用 原発性および続発性脳腫瘍の処置には特別な困難性が存在するが、この困難性は 他の腫瘍部位において近年達成され得た処置の改善を今まで阻害してきたもので ある。神経膠原では、一方では根本的外科療法は不可能であり、他方では放射線 療、化学療法およびそれらの組合わせは今まで予後の改善をなし得なかった。神 経膠原の処置における特別の困難性は、腫瘍の境界決定能の不足、腫瘍細胞に関 する化学感受性の変動と細胞学的および組織学的異質性、さらには静細胞剤が腫 瘍へ到達することを妨げる血液脳関門である。神経膠原の化学感受性の不足は、 これらの問題に関係があり得るが、代替手段が探索される理由でもあり、従来例 えばマンニトールで血液脳関門を開くことにより化学療法剤の通過と有効性を改 善することが試みられてき１こ。しかし、この方法を用いても、はとんどの場合 化学療法の有効性の向上がみられなかった。

その理由は、おそらく、腫瘍の場合、しばしば血液脳関門が既に傷害されている こと、また多病巣性大脳腫瘍発現の場合、特定の血管域で開いている血液脳関門 は腫瘍の一部しか含んでいないこと、ま１こ最後に、体液の静細胞剤水準上昇は 大脳実質残部および特に腫瘍における静細胞水準の充分な上昇に対応している必 要が全くないことである。

ヒアルロニダーゼは、ヒ・アルロン酸とコンドロイチン硫酸を開裂する分子量６ １０００の酵素で、結合組織の基礎物質の重要な成分であり、結合組織の代謝お よび例えば骨形成における胎芽組織の成熟と分化に役割を演する。ヒアルロニダ ーゼは、従来脳水腫、心筋梗塞の急性期の処置に治療目的で使用され、まｆコ皮 下投与用もしくは胸膜滲出の局所療法用の比較的大量の液体に溶かした医療に対 する添加剤として使用された。それ故、ヒアルロニダーゼは静脈注射した静細胞 剤の吸収促進達成、およびほとんどの場合の局所壊死の防止に用いることができ る。

ここに、驚くべきことには、ヒアルロニダーゼを好ましくは静細胞剤と組合わせ て投与すると、神経膠原の処置にかなりの改善が得られることが見出され几。

ヒアルロニダーゼは、種々の粗材料源から製造し得る酵素である。

本物質：ま、細胞間セメント質の主成分であるヒアルロン酸を分解し、それによ り細胞外体液および外部から導入され１ニ液体の拡散向上を行なう。うじの精巣 から得ｆこヒアルロニダーゼは、長年にわたって、高分子量＃ｉ液の皮下注入に 、関節および滑液包の粘稠滲出液の液化に、まには筋肉内もしくは皮下注射の吸 収促進に、治療目的で使用されてきた。これらの適用は例に過ぎない。ヒアルロ ニダーゼ製剤の有効性は、通常、国際標準と比較することにより国際単位（ＩＥ ）で測定される。用途に応じて、ヒアルロニダーゼ製剤は種々の強変のものとし て製造され、すなわち、有効成分のｕ当りに検出される活性の単位は大きく異な り得る。勿論、目的は糖蛋白である活性物質ヒアルロニダーゼを可能な限り最高 の純度、例えば５００００１Ｅおよびそわ以上で製造することにある。しかし、 低収量と不安定性も考慮しｔければならない。上記の適応には、＋０００−２０ ００ＩＥの特異活性て充分であることが判明しＬｏ例えば心筋梗塞後の場合のよ うな静脈適用については、かなり高い値、すなわち約５００００ＩＥ／ｘｇが目 標とされる。

動物の腺の抽出に続く精製工程は、有機質材料からの活性物質の製造に常用され る方法により行なわれる。これらの中には、無機塩による沈澱、種々の担体上で 行なうクロマトグラフィー精製および脱塩が含まれる。最終産物は、必要ならば 安定剤を加えて、凍結乾燥形態で最終的に単離される。

この目的に適当な１つの製剤は、例えばそれぞれ１アンプル当り７５０１Ｅの凍 結乾燥物質を含むアンプル入りヒアルロニダーゼ製剤であるパーｉアーゼである （サナボ）。製剤では、ヒアルロニダーゼを溶媒および／または安定剤、例えば マンニトールまたは氷解ゼラチン類と混合することができる。

他の適当な製剤は例えばアリダーゼ、デイフンン、エンドダーゼ、ヒアチーム、 ワイダーゼ、キナデン、アドース等である。

これらの製剤に含まれるヒアルロニダーゼは、例えば次のようにして得られる。

超低温化している間にうじの精巣を粉砕し、その後希酢酸を用いて一夜かけて抽 出した。固形部分を除去しｆ二後、硫酸アンモニウムを加えてからチャンバー遠 心機を用いて沈降を行い、沈澱物を分離した。これを水に溶かし、濾過によって 透明化した後、セファデックスＧ２５を用いて脱塩した。酢酸鉛を使用して溶液 から沈澱物を製造し、その沈澱物を分離してから穏やかな酸性条件下で溶解させ た。濾過物を透明化した後、以前と同様に脱塩を行ってからＤＥＡＥ−セファデ ックスを用いて処理し、硫酸アンモニウムで沈澱させた。遠心し几沈澱物を再び 溶かし、セファデックスＧ２５で脱塩して、活性を測定し、凍結乾燥形態られる 最終生成物の比活性を１０００〜２００　Ｄ　１．　Ｅ／ｍｇとするの？二十分 な希釈剤、例えばマンニトールまたは乳糖を加え１こ。

この発明による使用に際しては、ヒアルロニダーゼを非常に純粋で濃厚に、例え ば５，０００〜３５０，０００１．Ｅ、で含む製剤も適当である。上記ヒアルロ ニダーゼ製剤の製造は、例えば西独特許公開３１４８５１７号、薬学雑誌（Ｙ　 ａｋ、　ｚａｓｓｈｉ）　１００　（８）／　８３２−８３８頁（１９８０年） 等に記述されている。上記製剤は例えば以下のようにして得られる。

超低温化している間にうし９精巣を粉砕し、その後希酢酸を用いて一夜かけて抽 出した。固形部分をデカンタ−で除去した後、混合物を透明に濾過してか：）Ｃ Ｎｉ−セファデックス（ｐＨ＝４．８〜５゜０）に加え１こ。次の日、イオン交 換剤を分離し、ｐＨ＝５．０で十分に洗浄し、その後酢酸緩衝液（ｐＨ＝　５　 、５　）を用いて溶出させ、溶出物をセファデックスＧ２５で脱塩した。凍結乾 燥後、約２０００〜５０００１．Ｅ、７ｍｇの比活性を有する生成物を得た。こ の生成物を酢酸緩衝液（ｐＨ＝５）に溶かしてからＣＭ−セファロース６ＢＣＬ で濾過した。洗浄後、生成物を酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．５）を用いて溶出させ、 ｐＨ＝５．１からＩ）Ｈ＝５．５の間で流出画分を収集し、その後セファデック スＧ２５を用いて脱塩してから凍結乾燥させた。２０，０００〜４０，０００１ ．Ｅ、７１１１ｇを有する生成物を得た。この生成物は、ｐＨ＝７．５でリン酸 緩衝液に溶解し、ＤＥＡＥ−セファデックスを用いて４℃で撹拌し得る。イオン 交換剤を取り出し１こ後、酢酸を用いてｐＨを５０に調整し、生成物をセファデ ックスＧ２５て脱塩してから凍結乾燥しに。最終生成物の活性は、４０．０００ 〜６０，０００１．　Ｅ、　７ｍｇてあッに。

ヒアルロニダーゼのこの発明に従った用途については、５，０００から３００． ０００１．Ｅ、　、特に７，５００から２００．０００１、Ｅ　の含量の製造物 か好まれる。投与は筋肉内まには静脈内で行ない得、その際高用量については静 脈内投与（輸液）が好まれる。

ヒアルロニダーゼのこの発明による活性は例えば神経膠原の１７名の患者の研究 で示され几。１００，０００〜２００，０００　Ｔ、Ｅ。

のヒアルロニダーゼを１００ｍ１生理的食塩水にそれぞれ溶解させ、静脈投与し た。１日目に８０ｍｇ／’ＣＣＮＵを経口的に与え、その後１００，０００１． Ｅ、ヒアルロニダーゼを、さらにｌｏｏｍｇ生理的食塩水に同様に溶解させ１： １２０ｍｇメソトレキサート／ｍ′を与えた。４時間後、さらに１００ｍ１生理 的食塩水に溶解させた１００゜０００１、Ｅ　ヒアルロニダーゼを与え、さらに １００ｍ１生理的食塩水に溶解させに６０ｍｇ／ｍ’エトボサイド、２５０ｍ１ の５％デキストロースに溶解させた７５０７ｍ”フルオロウラシルを与え几。そ の日中３　Ｘ　２０ａＶａｌ炭酸水素ナトリウムを投与した。２日目および３日 目に、５００ｍ１のレブロース、５００ｍ１０）１０％マンニトール、１００＋ ｎｌ生理的食塩水に溶解させた２００，０００１．Ｅ、のヒアルロニダーゼ、２ ０ｍ１生理的食塩水に溶解させたシスプラチン、１００ｍｇ生理的食塩水に溶解 させた６０ｍｇ／ｍ”エトポサイドおよび３Ｘ２０Ｖａｌの炭酸水素ナトリウム をそれぞれに投与した。３日目に、２５０ｍｇ生理的食塩水に溶解させた１８０ ｍｇのカルシウムフオーリネートをメトトレキサートの解毒薬としてさらに投与 した。

この治療は、一般的にかなりよい耐性を示した。副作用が現れたが、投与された 細胞増殖抑制剤から予期されたものである。ヒアルロニダーゼ自体は如何なる副 作用も引き起こさなかつに。

コンピューター断層撮影法的に証明されｆ二部分緩解を１７例の内の９例につい て達成し、４例では腫瘍寸法は変化しないままで、１例では腫瘍は進行し続けた 。コンピューター断層撮影対照を３例で取り損なった。７例で神経学的状態が改 善され、８名の患者で変化しないままで、さらに２名のを者では悪化し１こ。１ から１２力月間患者１こちを観察した。３名の女性を者が死亡し、１名は脳出血 、１名は治療の休止の間に肺塞栓症、さらに１名は９力月の緩解の後再発した。

国際調査報告 ｈｖ場ｌｌｌ−１＾””””””　ＰＣＴ／Ｅ：Ｐ　８７１０ＯＳＳ９国際１３ ′告　ＥＰ　８７００５５９

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．脳腫瘍（神経膠腫）の処置におけるヒアルロニダーゼまたはヒアルロニダー ゼ含有製剤の使用。
2. ２．脳腫瘍（神経膠腫）の処置におけるヒアルロニダーゼまたはヒアルロニダー ゼ含有製剤と静細胞剤の組合わせの使用。
3. ３．脳腫瘍（神経膠腫）の処置用に用いる医薬の製造におけるヒアルロニダーゼ またはヒアルロニダーゼ含有製剤の使用。
4. ４．脳腫瘍（神経膠腫）の処置用に静細胞剤と組合わせて用いる医薬の製造にお けるヒアルロニダーゼまたはヒアルロニダーゼ含有製剤の使用。
5. ５．処置を必要とする患者の脳腫瘍の処置方法であって、この目的に有効な量の ヒアルロニダーゼまたはヒアルロニダーゼ含有製剤を投与することからなる方法 。