JPH01501360A

JPH01501360A - 立体特異的酵素的アシレート加水分解による７α―アシルオキシ―６β―ヒドロキシ―メチル―２―オキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン―３―オンのラセミ化合物分割方法

Info

Publication number: JPH01501360A
Application number: JP62506741A
Authority: JP
Inventors: ペツツオルト，カール; ダール，ヘルムート
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1986-11-13
Filing date: 1987-11-12
Publication date: 1989-05-18
Also published as: WO1988003570A1; DE3783885D1; HU202289B; DE3638762A1; ES2053577T3; DD279689A5; EP0271433A1; CS815087A2; CS268841B2; BG48098A3; GR3007127T3; EP0271433B1; ATE85084T1; HUT47155A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】立体特異的酵素的アシレート加水分解による７ａ−アシルオキシ−６β−ヒドロキシ−メチル−２−オキサビシクロ［３，３，０］オクタン−３−オンのラセミ化合物分割方法本発明は、酵素を用いて、ラセミ体の７ａ−アシルオキシ−６β −ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［３，３，０］オクタン−３−オンを立体特異的アシレート加水分解して相応する光学活性アルコールを得る方法に関する。

この方法は、特に式（−）−Ｉ：（ただしＲ１は水素、１〜７個のｃｙＫ子を有するアルキル基またはフェニル基を表わす）を表わすことができる］で示される光学活性（−）−オキサビシクロ［３，１０１オクタノロンの製造に適している。

この方法は式（±）−■：Ｅ式中Ｒ１は前記のものを表わす〕で示されるラセミ体のオキサビシクロ［３，３，０１オクタノａンーアシレートに、酵素による立体特異的アシレート加水分解を行い、けん化された（＋）−１（Ｒ−Ｈ）から（−）化された（−）　−Ｉ　（Ｒ−Ｈ）をけん化されていない（＋）　−ＴＩから分離することを特徴とする。

従って、Ｒ１が１〜７個のＣ原子を有するアルキル基を表わす場合、該アルギル基はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、インブチル基、Ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、Ｓ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、イソヘプチル基等を意味する。

式（−）−Ｉの化合物は、薬理学的に価値あるプロスタグランジン類縁物質およびグロスタサイクリン類縁物質の合成における価値ある中間生成物である〔たとえば、ビンドラ（Ｊ、Ｂｉｎｄｒａ）　、ビンドラ（Ｒ，Ｂｉｎｄｒａ）著、“ プロスタグランジン・シンセンス（Ｐｒｏｓｔａｇ−１βｍｄｉｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）”、アカデミツク出版（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）、ニューヨーク　１９７７年、およびザンテ４　（Ｃ，５ｚａｎｔａｙ）　、ノベク（Ｌ、Ｎｏｖａｋ）著“シンセンス・オン・グロスタグランジンス（Ｓｙｎｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｓｔａ−ｇｌａｍｄｉｎｓ）　”　ｓ　Ａｋａｄｅｍｉａｉ　Ｋｉａｄｏ、ブタベスト、　１９７８年参照】。天産物に類似の構造体を合成するために、この鏡像異性体系列のエステルが必要とされる。

不斉合成は公知であるにもかかわらず、工業的製造の場合、中間体（±）−３でのラセミ分割の途中で光学活性を導入することが有利である。この場合、次の工程が必要である：１、ラクトンのヒドロキシ酸へのけん化２、たとえばｄ−ａ−フェニルエチルアミンを用いる、ジアステレオマー塩の混合物への変換３、ジアステレオマーの純粋な塩を得るための結晶化４、塩の光学活性ラクトン（−）−３への変換５、引続〈光学活性中間体（−） −Ｉへの反応光学的精製を行う前に、ラクトンを再形成するヒドロキシ酸の傾向により、ならびに結晶化の際の収量損失により下記の方法は有利であることが立証されていなかった。

Ｃ０Ｒ本発明の場合、式（±）−■のラセミ体の７ａ−アシルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサ−ビシクロ［３，３，０］オクタン〜３−オンの段階で、酵素によろけん化によって分割を行い、生じる生成物混合物から式（−）−Ｉの所望の化合物を、抽出によるかまたは水相から得ることができる。

出発化合物は、英国特許第１５７９４６４号により製造できる。

薬理学的に価値あるグロスタグランジン類縁化合物およびプロスタサイクリン類縁化合物製造の中間生成物として本発明方法によって得られる式（−）−１：用することは、既述した概要論文から認められる。

同様に得られる式（−）−Ｉ　（Ｒ−Ｈ）の光学活性ジオールは、逐次合成においてさしあたり第１のヒドロキシル基を保護しなければならず、第２のヒドロキシル基は遊離のままであってもよいときに特に使用することができる。これは、たとえば欧州特許第４１６６１号明細書に記載されているようなカルバサイクリン中間生成物合成の場合である。

酵素として、本発明による方法にとくに適しているのは枯草菌からのズブチリシン［ペーリンガー社（Ｆａ＋　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）　ｓ　マンハイムコリパーゼ“スフレロチニア”　（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）ナガセ社（Ｆａ、　Ｎａｇａｓｅ）アルカリプロテイナーゼ（ナガセ社）枯草菌からのグロテアーゼアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ　Ｔ）　（ＮｏＶＯ社）酵素は溶解形、懸濁形または固定化形［たとえば、ＢｒＣＮ活性化セファロースまたはオキシランアクリルパージン（０ｘｉｒａｎａｃｒｙｌｐｅｒｌｅｎ）　または何らかの固定化形］で使用することができる。

本発明方法によって製造しうる式（−）−Ｉの光学活性オキサビシクロオクタノロン誘導体は、薬理作用のあるグロスタグランジンおよびグロスタサイクリン合成の価値ある中間生成物である。立体特異的加水分解を行う酵素の大部分は、式（±）−ＩＩめラセミ体化合物を式（＋）−Ｉ　（Ｒ−Ｈ）の光学活性ジオールにけん化し、その際その絶対配置が天然のプロスタサイクリンＰＧＪ２に相当する、使用されたラセミ化合物（±）−Ｈの成分はけん化されずにとどまり、［（ −）−Ｉ後、天然配置のプロスタサイクリン類縁化合物の合成に使用することができることが判明した。

他の酵素も、使用したラセミ化合物（±）−ＩＩの双方の成分のうち天然配置形をジオール（−）−Ｉ　（Ｒ−Ｈ）にけん化し、“為”非天然配置の鏡像異性体はけん化されずにとどまる。この場合、ジオールはＰＧＪ２類縁プロスタサイクリンの合成に使用される。他の点では、本発明による方法は、酵素反応につき知られている自体公知の条件下で作用する。酵素変換の経過は、連続に取り出した試料の分析によって追跡される。

分析方法として適しているのは、ＨＰＬＣまたは薄層クロマトグラフィーによる高速分析である［ダルムシュタット在メルク社（Ｍｅｒｃｋ／　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）のシリカゲル板、塩化メチレン／アセトン１：ｌにより展開および硫酸により着色）］使用したラセミ体基質の５０％が反応したら直ちに、反応を中断し、バッチを後も理する。

本発明による方法は、特に次のグロスタグランジン中間体：の立体特異的けん化に適している。

次の実施例は、本発明による方法の説明に使用される。

例　ｌ（±）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン３００■９をエタンノール９ｍ＋ｆｆ中に溶解し、０．１Ｍ１７）リン酸塩緩衝液（ｐＨ７）　１００ｍｆｆ中のアルカリプロテイナーゼ（ナガセ社）７５０ｍｇの溶液と一緒にする。溶液を２８℃で回転振盪機上で振動させ、その際反応の経過を連続的に取り出した試料の分析によって追跡する。１９時間の反応時間後、使用した基質の５０％が変換された。バッチをメチルイソブチルケトン５０■ａ宛で３回抽出し、その際未反応のベンゾエートはＭｉＢＫ相へ移行し、けん化した化合物は水相にとどまる。

ＭｉＢＫ抽出物を集め、真空中で濃縮乾個する。残留分をアセトンから再結晶する。融点１１６−１１７℃旋光度［ｆｆｌ　ｂＯ−８０，５＠ＣＨＣＣＱｓ中でｃ　−１，０５０）の（−）−７ｇ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン１３５ｍｇが得られる。

例　２（±）−７σ−ベンゾイルオキシ−〇β−ヒドロキシエチルー２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン３００＋ａｇをＯ，１Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）１００ｍｆｆ中に懸濁させ、枯草菌からのズブチリシン（ベーリンガー社、マンハイム）７５０ｍｇを添加し、混合物をウルトラーチュラックス（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）で均質にする。引き続き、懸濁液を回転振盪機上で２８℃で１６時間振動し、その後、使用したセラミ体基質の５０％かけん化された。バッチを水流真空で濃縮乾凋し、残留物をメタノールで３回溶出し、集めたメタノール溶出液を再び乾燥させ、ケイ酸ゲルカラム上でクロマトグラフィーにかける（溶離混合物塩化メチレン・アセトン６６＋３３）、最初に溶離された画分ｌは、融点１１４−１１６℃、旋光値［σ］　Ｄ−８２゜３°　（メタノール中でｃ＝１．０１５）の（−）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン１２２ｍｙを含有する。

例　３例２の条件下に、（±）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル− ２−オキサビシクロ［３ン酸塩緩衝液中で、リバーゼスクレロチニア（ナガセ社）７５０ｍｇで２８℃で６４時間処理する。けん化されｔ；非天然配置の鏡像異性体をカラムクロマトグラフィーにより分離した後、融点１１５−１１６℃、旋光値［ｇｌＤ　−７９，８”　（メタノール中でｃ　−１，０２）の（−）−７ｇ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［１３，０１オクタン−３−オンｌ１５ｍｙが得られる。

例　４例２の条件下に、（±）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル− ２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン３００ｍｇを、ｐＨ７のリン酸塩緩衝液中でアルカラーゼＴ　（ＮＯＶＯ社）７５〇−９により２８℃で４０時間加水分解する。反応混合物をカラムクロマトグラフィーにより分解した後、融点！１２−１１４℃旋光値［ｇ］　ｏ−７７−１＠　（メタノール中でｃ −１，００５）の（−）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル− ２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン１４２＋ｎが得られる。

例　５例２の条件下に、（±）−７σ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル− ２−オキサビシクロ［３，３，０１オクタン−３−オン３００ＩＩｇを、ｐＨ７のリン酸塩緩衝液中で、枯草菌からのプロテアーゼ７５０ｍｇで２８℃で１５時間処理する。反応混合物をカラムクロマトグラフィーにより分離した後に、融点１１３−１１５℃、旋光値［σ］Ｄ−７８．９”　（メタノール中でｃ＝１．０２５）　の（−）−７ａ−ベンゾイルオキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサビシクロ［３，３，０］オクタン−３−オン１１９１１９が得られる。

国際調査報告国際調査報告ＤＥ　Ｂ７ＣＯ５２０ＳＡ　１９４４０

Claims

【特許請求の範囲】

１．式（一）−Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼（一）−Ｉ〔式中Ｒは水素基−▲数式、化学式、表等があります▼（ただしＲ１は水素、１〜７個のＣ原子を有するアルキル基またはフェニル基を表わす）を表わすことができる］で示される光学活性（一）−オキサビシクロ［３，３，０〕オクタノロンの製造方法において、式（±） −ＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼（±）−ＩＩ［式中Ｒ１は上記のものを表わす］で示されるラセミ体のオキサビシクロ［３，３，０］オクタノロンーアシレートに、酵素により立体特異的アシレート加水分解を行い、（一）−Ｉ（Ｒ＝▲ 数式、化学式、表等があります▼）をけん化された（＋）−Ｉ（Ｒ＝Ｈ）から分離するか、またはけん化された（一）−（Ｒ＝Ｈ）を未けん化の（＋）−ＩＩから分離することを特徴とする光学活性（一）−オクタビシクロ〔３，３，０］オクタノロンの製造方法。
２．酵素として枯草菌からのズブチリシン、リバーゼスクレロチニア、アルカリプロティナーゼ、枯草菌からのプロテアーゼまたはアルカラーゼＴを使用する請求の範囲第１項記載の方法。