JPH0159536B2 - - Google Patents

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JPH0159536B2
JPH0159536B2 JP55003606A JP360680A JPH0159536B2 JP H0159536 B2 JPH0159536 B2 JP H0159536B2 JP 55003606 A JP55003606 A JP 55003606A JP 360680 A JP360680 A JP 360680A JP H0159536 B2 JPH0159536 B2 JP H0159536B2
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は水性液体試料中の特定成分の比色定量
を目的とした化学分析スライドの使用方法に関す
る。 水性液体試料中の特定成分の比色定量分析を目
的としたシート状化学分析材料については、これ
まで多数報告されている。例えば、分析試薬を
紙状物に含浸させた云わゆるステイツク型または
チツプ型のものについては特公昭44−14673号等
で公知である。また、特に血液、尿などの生体液
中のある成分を簡易迅速に定量分析する新しい型
の多層一体型分析シートは特開昭49−53888号、
同50−137192号、同51−40191号、同52−3488号、
同52−131786号、同52−142584号及び米国特許
3992158号、同3526480号などの各公報によつて公
知である。後者の分析シートは、透明シートの上
に一層又は複層の試薬層と、更にその上に多孔性
展開層とを重ね合わせ、お互いに離脱しないよう
一体化した構造か又は前記両層だけからなる構造
のものである。通常これ等のシート状化学分析材
料は、使用時「CHEMICAL WEEK」誌1978年
8月23日号第55ページ、米国特許4142863号等に
示されるようなスライド枠に収納されて用いられ
る。以下、本明細書に於ては、かかるスライド枠
とシート状化学分析材料との組合せからなる分析
要素を化学分析スライドと称する。 これ等の分析要素を用いての定量に於ては、水
性液体試料中の特定成分と分析シート中に含まれ
る試薬とが反応して着色又は変色する度合いを透
過測光、反射測光等によつて定量する。この反応
は水中での有機試薬による発色反応を利用するも
のが多く、このため反応が完結するまでには、速
いものでも1分以上を要し、遅いもの、例えば酵
素を試薬として利用するものなどは35℃の加温
(インキユベーシヨン)下で5〜10分を要する場
合が多い。この際反応が完結するまで、その場に
充分水分が存在することが必要である。かかる場
合、通常用いられるシート状化学分析材料の試薬
層の厚みは数十μmに過ず、従つて保水能力が十
分とは言えない。かくして、化学分析材料の表面
からの水分の蒸発は進行し、インキユベーシヨン
の過程で反応系中の水分量の変化、減少が著しい
場合には結果として反応の進行を抑えてしまい正
確な定量分析を困難としてしまうことにもなる。
また、水分の蒸発とともに反応系で生成された反
応生成物が反応層、検出層以外の光遮蔽層、展開
層などへ水分の移動とともに移動してしまい正確
な定量分析を損つてしまうことも起る。 かかる欠点を改善すべく、実開昭54−162293号
および実開昭54−162294号明細書には多層化学分
析材料に水分蒸発防止カバーを設けることが記載
されている。この等の考案により、試料点着部分
からの水分の蒸発が防止でき、試料中の特定成分
と分析材料中の試薬との反応の完結がうながされ
分析精度の向上に役立つことが確認された。しか
しながら、これ等の考案に於ては、点着後の試料
が水分蒸発防止カバーと直接触れることになり試
料が汚染される可能性があること、また、試料中
の特定成分と分析材料中の試薬の反応が空気(酸
素)を必要とする時などには、好ましくない結果
もたらす場合もある。例えば、体液中のグルコー
ス、コレステロール、尿酸、中性脂肪等の検出に
当つてオキシダーゼ系の試薬を利用する場合には
オキシダーゼの作用によりH2O2が生成する過程
が共存する酸素量に大きく依存するので、反応系
への空気の供給が必要である。従つて上記考案は
明らかにこのような反応系では不適である。 本発明者等は水性液体試料中の特定成分を比色
定量するに当り、スライド枠およびシート状化学
分析材料よりなる公知の化学分析スライドの使用
方法について鋭意研究を行なつた結果、意外にも
水性液体試料をシート状化学分析材料上に点着
後、試料を点着した側のスライド枠の上面をカバ
ーで被うことによつて、分析精度が著しく高めら
れることを見い出し、本発明を完成した。即ち、
本発明は、水性液体試料中の特定成分を比色定量
するに当りスライド枠中に収容保持されたシート
状化学分析材料よりなる化学分析スライドを使用
する方法に於て、水性液体試料をシート状化学分
析材料上に点着後該試料を点着した側のスライド
枠の上面をシート状、板状またはブロツク状のカ
バーで該シート状化学分析材料と該カバーとの間
に空間を保つようにして被うことを特徴とする化
学分析スライドの使用方法である。 本発明の方法に従えば、化学分析スライド上に
カバーを設けることにより、試料中の水分の蒸発
が防止または蒸発速度が制御され、また試料と化
学分析材料中に含まれる試薬との反応によつて生
じる反応生成物がアンモニアや炭酸ガス等の揮発
性成分であれば、その蒸発が制御される。更に
は、空気、即ち酸素の供給量の制御もできる。ま
た、化学分析スライドの取り扱い時の汚染も防止
できるし、カバーとして筆記可能なものを用いれ
ば、被検体の識別、記録等も容易にする。 本発明の方法に於ては、スライド枠を被うカバ
ーとして、シート状、板状、ブロツク状等の種々
の形状のものが使用でき、反応系や使用目的によ
つて適宜選択して用いることができる。シート状
物としては、紙、プラスチツクフイルム、布等が
用いることができる。例えば、反応系が多量の酸
素の供給を必要とする場合には、紙、布等の多孔
質材料をフツ素やシリコーンで処理することによ
りカバーを空気は通すが水分を通さないように予
め加工しておくこともできる。また、板状物とし
ては、プラスチツク板や金属板が使用できる。更
に、機械による自動分析を目的としている場合に
は、機械の設置した板状やブロツク状の物で、試
料の点着後にスライド枠の上面をこれで被い、分
析完了後これを取り除く方法で行なうことが有効
である。 カバーは、試料の点着直後に設けることが望ま
しく、少なくとも測光に致る迄の間はカバーが設
けられた状態にしておくことが必要である。 カバーは、スライド枠の一部に予め接着した云
わゆる開閉タイプにして設けてもよいし、また試
料を付着後、スライド枠の上面に単に置いたり貼
着させて設けてもよい。 本発明の方法によれば、均一で再現性の良い発
色が得られるとともに試料中の特定成分と分析材
料中の試薬との反応の反応速度の上昇、即ち反応
種の層中拡散の均一化、促進ができる。 本発明の方法は水性液体試料(被検体)として
は水性液体状のもので、特に体液、例えば血液、
尿、だ液、ずい液等に対して特に有効である。 比色定量は、測光によつて行なわれるが、カバ
ーのしたままの状態であれば、カバーの設けてあ
る側と反対側からの反射測光が用いられ、一方、
カバーをはずした場合には、反射測光によつても
透過測光によつても定量できる。 本発明の方法を第1図の概念図をもつて説明す
る。化学分析スライドはスライド枠2とシート状
化学分析材料1より構成される。水性液体試料5
をシート状化学分析材料1上に点着した後、カバ
ー3によつてスライド枠2を被い、化学分析材料
1とカバー3の間に空間4が設けられる。試料5
中の特定成分は化学分析材料1中に含まれる試薬
と反応し、着色又は変色する。この度合をAまた
はBの方向から透過測光または反射測光によつて
定量する。 次に、本発明の方法を以下の実施例をもつて詳
しく説明する。しかしながら、本発明はこれ等の
実施例に限定されるものではない。 実施例 1 A シート状化学分析材料の調製 下塗り処理を施した厚さ185μmの透明ポリ
エチレンテレフタレート(PET)フイルムの
上にグルコースオキシダーゼ(東洋紡製GOD
)50mg、ペルオキシダーゼ(東洋紡製POD
)20mg、1,7−ジヒドロキシナフタレン
135mg、4−アミノアンチピリン180mg、ポリオ
キシエチレンノニルフエニルエーテル(日本油
脂製ノニオンHS210)20mg、ゼラチン8.5g、
水100mlよりなる溶液を調製し、乾燥膜厚が
15μmとなるように塗布した。 次に、酸化チタン6.8g、ゼラチン2.7g、ポ
リオキシエチレンノニルフエニルエーテル100
mg、水50gよりなる均一分散液を乾燥膜厚が
8μmになるように塗布した。 更にこの上に、木綿製ブロード(東洋紡製
100ソウ)を0.2%ポリオキシエチレンノニルフ
エニルエーテル水溶液で処理した後に圧着ラミ
ネートし多孔性展開層を設けてシート状化学分
析材料を完成した。 B 化学分析スライドの調製 厚さ0.5mmのポリ塩化ビニル製平版を用い、
中央に直径10mm円形の孔を有する24mm×28mmの
大きさ角板を底板及び上板とし、中央に16mm×
16mmの四角形の孔を有する24mm×28mmの角板を
中板として、スライド枠を構成し、その中に、
16mm×16mmのAにて作製したシート状化学分析
材料片を挿入し、第1図に示す構成の化学分析
スライド(但し図中3のカバーは装着されてい
ない)を作製した。 C グルコース濃度の測定 Bで作製した化学分析スライドのシート状化
学分析材料の多孔性展開層の上に、含有するグ
ルコース濃度の異なる血清試料の10μを付着
し、35℃で10分間インキユベートした後の反射
光学濃度(OD)を波長500nmで測定した。 同じ実験操作に於いて、厚さ100μmの含浸
用紙に、アクリル系粘着剤を片面塗布してなる
20mm×24mmの大きさのシート状カバーを用い、
血清試料付着直後にスライド枠の上面の円孔を
ふさぐように貼着して、インキユベーシヨンを
行つた。結果は第1表に示す通りであつた。
【表】 第1表に見られる通りカバーシートの貼着に
より発色濃度が上昇したことは明らかである。
この効果は、反応の完結に時間がかかる高濃度
のグルコースを含む血清試料の測定の場合特に
顕著である。 実施例 2 実施例1Cと同様の実験において、カバーシー
トの貼着操作にかえて、20mm×24mmの大きさ、厚
さが1mmのポリ塩化ビニルの平板を用いた。血清
試料の付着後ただちに上記平板をスライド枠の穴
をふさぐ形で装着し、35℃、10分間のインキユベ
ーシヨンの間そのまま静置した。インキユベーシ
ヨン時間の経過後上記平板を取り除き、試料を付
着した面とは逆の透明支持体側から500nmの波
長の光を用い反射光学濃度を測定した。比較の為
に同じ測定操作において、平板を用いないでイン
キユベーシヨンを行い反射光学濃度を測定した。 平板を装着し、水分の蒸散を抑制すると、しな
い場合に比べて、およそ10%〜20%の発色濃度の
上昇が認められた。 実施例 3 実施例1Cと同様の実験において、シート状化
学分析材料とカバーシートの間の空間容積を変え
て発色濃度に及ぼす影響を調べた。比較としてカ
バーシートをシート状化学分析材料の多孔性展開
層の上面に直接貼着した場合についても実験し
た。試料としては血清に代えて、ヘパリン採血し
た新鮮血を用いた。結果は第2表のとおりであつ
た。
【表】 第2表から、空間容積が0の場合(カバーシー
トをシート状化学分析材料の多孔性展開層の上面
に直接貼着した場合)には酸素の供給が不十分の
ためか発色が不安定で血中グルコース濃度と反射
光学濃度の相関係数が小さい。他方、一定の空間
容積を保つた場合には血中グルコース濃度と反射
光学濃度の相関係数が1に近く(ほぼ直線にの
る)、しかも反射光学濃度値が約30%から約100%
増大することが明らかである。
【図面の簡単な説明】
第1図は、本願発明の方法を示した概念図であ
る。 1……シー状化学分析材料、2……スライド
枠、3……カバー、4……空間、5……水性液体
試料、A,B……測光方向。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1 水性液体試料中の特定成分を比色定量するに
    当りスライド枠中に収容保持されたシート状化学
    分析材料よりなる化学分析スライドを使用する方
    法に於て、水性液体試料をシート状化学分析材料
    上に点着後該試料を点着した側のスライド枠の上
    面をシート状、板状またはブロツク状のカバーで
    該シート状化学分析材料と該カバーとの間に空間
    を保つようにして被うことを特徴とする化学分析
    スライドの使用方法。
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