JPH0159868B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、広義には、新規な交雑細胞ライン
（hybrid cell line）さらに詳しくはすべての正常
なヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞に見い出
されるある抗原に対する補体固定性モノクローナ
ル（complement−fixing monoclonal）抗体の
生成のための交雑細胞ラインに関する。 1975年におけるKohlerおよびMilsteinによる
免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨髄
腫の融合（fusion）［Nature 256、495−497
（1975）］は、均質な（いわゆる「モノクローナ
ル」）抗体をつくる連続な細胞ラインを得ること
ができることを初めて証明した。この基本の研究
以来、種々の交雑細胞［いわゆる「ハイブリドマ
類（hybridomas）］の生成およびこれらのハイブ
リドマ類によりつくられた抗体の種々の科学的研
究への使用について多くの努力が向けられてき
た。たとえば、次の文献を参照：Current
Topics in Microbiorogy and Immunology、
Volume 81−“Lymphocyte Hybridomas”、F.
Melchers、M.Potter、およびN.Warner、
Editors、Springer−Verlag、1978、およびそこ
に含まれる参考文献；C.J.Barnstable、et al．、
Cell、14、９−20（May、1978）；P.Parhamおよ
びW.F.Bodmer、Nature 276、397−399
（November、1978）；Handbook of
Experimental Immunology、Third Edition
Volume ２、D.M.Wier、Editor、Blachwell、
1978、Chapter 25；およびChemical and
Engineering News、January １、1979、15−
17。これらの文献は同時にハイブリドマ類からモ
ノクローナル抗体を生成する試みによつて得られ
る利益および複雑さを示している。一般的技術は
概念的によく理解されているが、各特定の場合に
多くの困難に出合い、そして変更が要求される。
事実、一定のハイブリドマを生成しようと試みる
前には、所望のハイブリドマが得られるか、得ら
れた場合抗体を生成するか、あるいはそのように
生成された抗体が所望の特異性をもつか、を確め
ることができない。成功の程度は、主として、使
用する抗原のタイプおよび所望のハイブリドマを
単離するために使用する選択技術によつて影響を
受ける。 人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノク
ローナル抗体を生成する試みは、数例報告されて
いるだけである。たとえば、Current Topics in
Microbiology and Immunology、ibid、66−69
および164−169参照。これらの報告された実験に
おいて使用されている抗原は、培養したリンパ芽
様性白血病およびヒトの慢性リンパ球性白血病の
細胞ラインであつた。得られた多くのハイブリド
マ類は、すべてのヒト細胞の種々の抗原に対して
抗体を生成するように思われた。ハイブリドマ類
はいずれも、ヒトのリンパ球の前もつて定めた群
に対して抗体を生成しなかつた。 人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に
２つの主な群が存在することを理解すべきであ
る。これらのうちの第１群（胸腺誘導細胞、すな
わち、Ｔ細胞）は、ヘモポイエチン幹細胞から胸
腺において分化されている。胸腺内にある間、分
化する細胞は「胸腺細胞」と名づけられる。成熟
したＴ細胞は胸腺から出、そして組織、リンパ
管、および血流の間を循環する。これらのＴ細胞
は、再循環する小さいリンパ球の貯留（pool）の
大きい比率を形成する。それらは免疫学的特異性
を有し、そして細胞介在免疫応答（組織移植注入
のような）においてエフエクター（effector）細
胞として直接関与する。Ｔ細胞は液性抗体を分泌
しないが、後述するリンパ球の第２群によるこれ
らの抗体の分泌に時々要求される。Ｔ細胞のいく
つかの型は免疫系の他の面において調節機能をは
たす。この細胞共働の過程の機構はまだ完全には
理解されていない。 リンパ球の第２群（骨髄誘導細胞、すなわち、
Ｂ細胞）は、抗体を分泌するものである。それら
もまたヘモポイエチン幹細胞から発生するが、そ
れらの分化は胸腺によつて決定されない。鳥類に
おいて、それらはフアブリキウス嚢（Bursa of
Fabricius）と呼ばれる胸腺に類似する器管にお
いて分化されている。しかし、哺乳動物において
は、同等の器管は発見されておらず、そしてこれ
らのＢ細胞は骨髄内で分化すると考えられる。 ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（helper）」、「抑
制体（Auppressor）」および「キラー（killer）」
Ｔ細胞と呼ばれる、少なくともいくつかのサブタ
イプに分けられ、それらは（それぞれ）反応を促
進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す
（分離する）機能を有することが認められた。こ
れらのサブクラスはネズミの系統についてよく理
解されているが、それらは人間の系についてわず
かに最近記載されただけである。たとえば、次の
文献を参照：R.L.Evans、et al.、Journal of
Experimental Medicine、Volume145、221−
232、1977；およびL.ChessおよびS.F.
Schlossman−“Functional Analysis of
Distinct Human Ｔ−Cell Subsets Bearing
Unique Differentiation Antigens”
“Contemporary Topics in Immunobiology”、
O.Stutman、Editor、Plenum Press、1977、
Volume ７、363−379。 Ｔ細胞のクラスまたはサブクラスを同定または
抑制することができることは、種々の免疫調節の
不調または状態の診断または処置にとつて重要で
ある。 たとえば、ある種の白血病およびリンパ腫は、
それらがＢ細胞またはＴ細胞のいずれを源とする
かによつて、異なる予後を有する。こうして、病
気の予後の評価はこれらのリンパ球の２つのクラ
スを区別することに依存する。たとえば、次の文
献を参照：A.C.AisenberyおよびJ.C.Long、The
American Journal of Medicine、58：300
（March、1975）；D.Belpomme、et al.、
Immunological Diagnosis of Leukemias and
Lymphomas、S.Thierfelder、et al．、Editors、
Springer、Heidelberg、1977、33−45；および
D.Belpomme、et al．、British Journal of
Haematology、1978、38、85。ある種の病気の
状態（たとえば、若年性リウマトイド関節炎およ
びある種の白血病）は、Ｔ細胞のサブクラスの不
釣合いに関係する。自己免疫の病気は一般に「ヘ
ルパー」Ｔ細胞の過剰またはある種の「抑制体」
Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪性の病気は一般に
「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連することが示唆さ
れた。ある種の白血病において、過剰のＴ細胞は
発育の停止した状態において生成される。診断は
こうしてこの不釣合い、すなわち、過剰を検知す
ることができることに依存しえるであろう。たと
えば、次の文献を参照毛J.Kersey、et al.、
“Surface Markers Define Human Lymphoid
Malignancies with Differing Prognoses”、
Haematology and Blood Transfution、
Volume20、Spriner−Verlag、1977、17−24、
およびその中に含まれる参考文献。 治療サイドにおいて、まだ明確に証明されてい
なが、Ｔ細胞のサブタイプに対する抗体を過剰量
で投与することは自己免疫の病気または悪性の病
気において治療上有益であるという、いくらかの
示唆がある。ヒトＴ細胞の全クラス（いわゆる抗
ヒト胸腺細胞のグロブリン、すなわち、ATG）
に対する抗血清は、移植組織を受ける患者におい
て治療上有用であると報告されている。細胞介在
免疫応答（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に
依存するので、Ｔ細胞に対する抗体を投与する
と、この拒否の過程を防止または遅延する。たと
えば、次の文献を参照：Cosimi、et al．、
“Randomized Clinical Trial of ATG in
Cadaver Renal Allgraft Recipients：
Importance of Ｔ Cell Monitoring”、
Surgery 40：155−163（1976）およびその中に
含まれる参考文献。 ヒトＴ細胞クラスおよびサブクラスの同定およ
び抑制は、従来、動物をヒトＴ細胞で免疫し、そ
の動物を出血させて血清を取り、そしてこの抗血
清を（たとえば）地元（autololgous）であるが、
異種ではないＢ細胞で吸着して望まない反応性を
もつ抗体を除去することによつて得た、ヒトＴ細
胞のための自発性自己抗体または選択的抗血清を
使用することによつて達成された。これらの抗血
清の製造は、とくに吸着および精製の工程におい
て、きわめて困難である。吸着され且つ精製され
た抗血清でさえ、所望の抗体に加えて、いくつか
の理由で、多くの不純物を含有する。第１に、血
清はＴ細胞で免疫する前に数百万の抗体分子を含
有する。第２に、この免疫法は注入したすべての
ヒトＴ細胞について見い出される種々の抗原に対
する抗体を生成させる。単一の抗原に対する抗体
は選択的に形成されない。第３に、このような方
法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて低く
（たとえば、１：100より大きい希釈度において不
活性）そして非特異性抗体に対する比は１／106
より小である。 たとえば、前述のChessおよびSchlossmanの
文献（365ページ以降参照）および前述の
Chemcal and Engineering Newsを参照。ここ
には先行技術の抗血清の欠点および単分枝系抗体
の利点が記載されている。 今回、本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞
および皮膚Ｔリンパ腫細胞にについて見い出され
る抗原に対する新規なモノクローナル抗体を生成
できる新規な補体固定性ハイブリドマ（OKT3と
標示する）が見出された。そのように生成された
抗体は正常なヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細
胞腫についての単一の決定因子に対して単一特異
性（monospecific）であり、そして他の抗ヒト
免疫グロブリンを本質的に含有しないが、これと
対照的に先行技術の抗血清は多数のヒト抗原に対
して反応性の抗体で本来汚染されており、そして
先行技術のモノクローナル抗体はヒトＴ細胞の抗
原について単一特異性ではない。その上、このハ
イブリドマは培養して抗体を生成することができ
る。この場合動物を免疫し、殺し、次いで先行技
術の不純の抗血清を得るときにさえ、必要な長た
らしい吸着および精製の工程を実施することを要
しない。 したがつて、本発明の１つの目的は、本質的に
すべての正常なヒトＴ細胞および皮膚リンパ腫細
胞腫について見い出される抗原に対する抗体を生
成するハイブリドマ類を提供することにある。 本発明のさらに別の面において、これらのハイ
ブリドマ類を製造する方法を提供する。 本発明の他の目的は、本質的にすべての正常な
ヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞について見
い出される抗原に対する本質的に均質な抗体を提
供することである。 さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気
の処置または診断の方法を提供することである。 本発明のその他の目的および利益は、本発明の
開示を検討すると明らかになるであろう。 前述の目的および利益を達成するために、本発
明によれば、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞
および皮膚リンパ腫細胞について見い出される抗
原に対する新規な抗体を生成する新規なハイブリ
ドマ、この抗体それ自体、およびこの抗体を用い
る診断および治療の方法が提供される。該ハイブ
リドマはMilsteinおよびKohlerの方法に一般に
従つて製造される。正常のＥロゼツト（rosette）
陽性のヒトＴ細胞でマウスを免疫した後、免疫し
たマウスの脾細胞をマウスの骨髄腫ラインからの
細胞と融合し、そして得られたハイブリドマ類を
正常のＥロゼツト陽性のヒトＴ細胞に選択的に結
合する抗体を含有する上澄液を用いてそれらにつ
いて選別した。所望のハイブリドマ類を引き続い
てクローニングし、特徴づけた。その結果、本質
的にすべての正常なヒトＴ細胞についての抗原に
対する抗体（OKT3と表示する）を生成するハイ
ブリドマが得られる。この抗体は本質的にすべて
の正常なヒト末梢Ｔ細胞と反応するが、他の正常
な末梢の血液のリンパ球細胞と反応しない。更
に、この抗体により認識される細胞表面の抗原は
成熟した胸腺細胞についてのみ検出され、そして
正常なヒト胸腺細胞の90％より多くはこの抗原を
完全に欠いている。 先行技術において示された困難および抗原とし
て悪性の細胞ラインを用いて報告された成功の不
足を見ると、本発明の方法が所望のハイブリドマ
を提供したことは驚くべきことであつた。交雑細
胞のこの予測されえない性質は１つの抗原または
細胞ラインから他のものへの補外（extrapolate）
を許さないことに注意すべきである。事実、本発
明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性細胞ラインを
用いると、所望の抗体を生成しないハイブリドマ
類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終
つた。 主題のハイブリドマおよびそれによつて製造さ
れた抗体の両方はここでは標示「OKT3」で識別
し、該特定の物質は本明細書より明らかである。 このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造およ
び特性は、以下の説明および実施例から一層理解
できるであろう。 ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程
からなる： Ａ Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ
細胞でマウスを免疫する。メスのCAF1マウス
（Balb／ｃマウスとＡ／Ｊマウスとの間の第１
代の交雑）が好ましいことがわかつたが、他の
マウスの系統を使用できると考えられる。免疫
スケジユールおよびＴ細胞の濃度は、有効量の
適当に準備した脾細胞を生成するようなもので
あるべきである。0.2mlのリン酸緩衝食塩溶液
中の２×107細胞／マウス／注射を用いて、14
日の間隔で、３回免疫を行うことは有効である
ことがわかつた。 Ｂ 免疫したマウスから脾臓を除去し、適当な媒
体中の脾懸濁液を調製する。約１ml／脾臓の媒
体で十分である。これらの実験の技術はよく知
られている。 Ｃ 懸濁した脾細胞を適当な細胞ラインからのマ
ウスの骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用
により融合する。脾細胞対骨髄腫細胞の好まし
い比は約５：１である。約108個の脾細胞につ
いて合計約0.5〜1.0mlの融合媒体は適当であ
る。多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られてお
り、そして一般に学問的共同体のメンバーまた
は種々の寄託機関、たとえば、ザ・ソーク・イ
ンスチチユート・セル・デイストリビユーシヨ
ン・センター（the Salk institute Cell
Distribution Center La Jollia、CA）から入
手できる。使用する細胞ラインは好ましくはい
わゆる「薬物抵抗性」型であつて、未融合の骨
髄腫細胞が選択した媒体中で生存せず、一方交
雑細胞が生存するようにすべきである。最も普
通のクラスは８−アザグアニン抵抗性の細胞ラ
インであり、これは酵素ヒポキサンチン・グア
ニン・ホホリボシル・トランスフエラーゼ
（phophoribosyl transferase）を欠き、それゆ
えHAT（ヒポキサンチン、アミノプリテン、
およびチミジン）媒体により支持されない。ま
た、使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる「非
分泌」型である、すなわち、それはそれ自体抗
体を生成しないことが一般に好ましいが、分泌
型を使用できる。しかしながら、ある場合にお
いて、分泌する骨髄腫ラインは好ましいことが
ある。好ましい融合促進剤は平均分子量が約
1000〜約4000であるポリエチレングリコール
（商業的にPEG1000などとして入手できる）が
好ましいが、この分野において知られている他
の融合促進剤を使用できる。 Ｄ 別の容器内において、未融合の脾細胞、未融
合の骨髄腫細胞、および融合した細胞の混合物
を、未融合の骨髄腫細胞を支持しない選択的媒
体中で希釈し、未融合の細胞を死亡させるのに
十分な時間（約１時間）培養する。この希釈は
限定されたものの型であることができ、この希
釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各
別々の容器［たとえば、マイクロタイタープレ
ートの各ウエル］中である数の細胞（たとえ
ば、１〜４）を単離する。媒体は薬物抵抗性
（たとえば、８−アザグアニン抵抗性）で未融
合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（たと
えば、HAT媒体）である。それゆえ、これら
のこれらの骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の脾細胞
は非悪性であるので、有限の数の世代をもつだ
けである。こうして、ある期間（約１週間）
後、これらの未融合の脾細胞は再生しない。融
合した細胞は、これに対して、骨髄腫の親の悪
性をもち、そして脾細胞の親の選択的媒体中で
生存できるので、再生し続ける。 Ｅ ハイブリドマを含有する各容器（ウエル）中
の上澄液を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ
細胞に対する抗体について評価する。 Ｆ 所望の抗体を生成するハイブリドマを選択し
（たとえば、限定希釈により）そしてクローニ
ングする。 いつたん所望のハイブリドマを選択し、クロー
ニングすると、終結の抗体は２つの方法の１つで
生成させることができる。最も純粋なモノクロー
ナル抗体は、所望のハイブリドマを適当な媒体中
で適当な長さの時間試験内で培養し、次いで所望
の抗体を上澄液から回収することによつて生成さ
れるる。適当な媒体および適当な培養時間の長さ
は、既知であるか、あるいは決定内容である。こ
の試験管内技術は、他の特異性の抗ヒト免疫グロ
ブリンを本質的に含まない、単一特異性モノクロ
ーナル抗体を本質的に生成する。媒体は外因性血
清（たとえば、胎児の子牛の血清）を含有するの
で、少量の他の免疫グロブリンが存在する。しか
しながら、この試験管内の方法は、モノクローナ
ル抗体の濃度がわずかに約50μｇ／mlであるの
で、十分な量または濃度を生成できない。 非常に大きい濃度のわずかに純度に劣るモノク
ローナル抗体を生成させるため、所望のハイブリ
ドマをマウス、好ましくは先天性または先天性の
マウスに注射できる。ハイブリドマは適当な潜伏
時間後抗体生成の腫瘍を形成させ、その結果宿主
マウス血流および腹膜滲出液（腹水）中に高濃度
の所望とする抗体（約５〜20mg／ml）が生ずる。
これらの宿主マウスも正常の抗体を血流および腹
水の中に有するが、これらの正常な抗体の濃度は
モノクローナル抗体濃度のわずかに約５％である
にすぎない。その上、これらの正常の抗体は特異
性が抗ヒトでないので、収穫した腹水または血清
から得たモノクローナル抗体は汚染する抗ヒト免
疫グロブリンを本質的に含有しない。このモノク
ローナル抗体は力価が高く（１：30000以上の希
釈で活性である）そして特異性免疫グロブリン対
非特異性免疫グロブリンの比が高い（約１／20）。
Ｋ軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免疫グロブ
リンは非特異性の「無意味な」ペプチド類であ
り、これらはモノクローナル抗体をその特異性を
減じないで単に希釈するだけである。 実施例 １ モノクローナル抗体の生成 Ａ 免疫および体細胞の交雑 メスのCAF1マウス（Jackson研究所；生ま
れてから６週間）を、0.2mlのリン酸緩衝食塩
溶液中の２×107のＥロゼツト精製したＴ細胞
で腹膜内的に14日の間隔で免疫した。第３回目
の免疫後、脾をマウスから取り出し、そしてス
テンレス鋼の網に組織を通すことによつて単一
細胞の懸濁液をつくつた。 細胞の融合をKohlerおよびMilsteinの方法
に従つて実施した。１×108の脾細胞を、
RPMI1640媒体（Gibco、Grand Island、NY）
中の35％のポリエチレングリコール
（PEG1000）と５％のジメチルスルホキシドと
からなる融合媒体の0.5ml中において、２×107
のP3×63Ag8U1骨髄腫細胞（Br.M.Scharff、
Albert Einstein College of Medicine、
Bronx、NYにより供給）と融合した。これら
の骨髄腫細胞はIgG1κL鎖（light chains）を分
泌する。 Ｂ ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をHAT媒体（ハイポキ
サンチン、アミノプリチン、およびチミジン）
中で37℃において５％のCO2を使用して湿つた
雰囲気中で培養した。数週間後、ハイブリドマ
類を含有する培養液から40〜100μの上澄液
を、Mendes（J.Immunol．111：860、1973）が
記載するように健康なヒトの供与者の血液から
調製した、Ｅロゼツト陽性（E+）個体群とＥ
ロゼツト陰性（E-）個体群とに分けた106の末
梢リンパ球のペレツトに加えた。これらの細胞
へ結合するマウスのハイブリドマ抗体の検出
は、ラジオイムノアセイおよび／または間接免
疫蛍光法により決定した。第１の方法におい
て、細胞は初め100μの親和性精製した 125I
山羊の抗マウスIgG（106cpm／μｇ；500μ）
の100μと反応させた（山羊の抗マウスのヨ
ウ素化の詳細はKung、et al．、J.Biol.Chem．
251(8)：2399、1976に記載されている）。別法と
して、培養液の上澄液で培養した細胞を蛍光を
付与した山羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ FITC）
（Meloy研究所、Springfield、VA；Ｆ／Ｐ＝
2.5）で染色し、この蛍光性抗体被覆細胞を引
き続いてシトフルオログラフ
（Cytofluorograf）FC200／4800A（Ortho
Instruments、Westwood、MA）について実
施例に記載するように分析した。E+リンパ
球（Ｔ細胞）と特異的に反応する抗体を含有す
るハイブリドマ培養液を選択し、クローニング
した。引き続いて、分枝系を２，６，10，14−
テトラメチルペンタデカン（Aldrich
Chemical Companyから商品名Pristineで市販
されている）で準備したCAF1マウスに一定の
分枝系の１×107細胞（0.2mlの体積）を注射す
ることによつて、腹膜内に移植した。次いでこ
れらのマウスからの悪性腹水を使用して、実施
例において後述するように、リンパ球を特徴
づけた。主題の交雑抗体OKT3は、標準の技術
によりサブクラスIgG2であり、補体を固定す
ると証明された。 実施例 OKT3の反応性の特性づけ Ａ リンパ球個体群の単離 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者
の提供者（15〜40才）から、Boyum、Scand.
J.Clin.Lab.Invest．21（Suppl.97）：77、1968
の技術に従い、フイコール−ハイパツク
（Ficoll−Hypaque）密度勾配遠心分離
（Pharmacia Fine Chemicals、Piscataway、
NJ）により単離した。分別しない単核細胞を、
Chess、et al.、J.Immunol．113：1113（1974）
にすでに記載されているように、Sephadex Ｇ
−200抗−Ｆ（ab′）2カラムクロマトグラフイー
により、表面Ig+(B)およびIg-（ＴプラスNull）
の個体群に分離した。Ｔ細胞はIg-個体群を５
％の羊の赤血球（Microbiological
Associates、Bethesda、MD）でＥロゼツト化
することによつて回収した。ロゼツト化した混
合物をフイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）上で層状にし、回収したE+ペレツ
トを0.155モルのNH4Cl（10ml／108細胞）で処
理した。このよういして得られたＴ細胞の個体
群は、標準法により決定して、＜２％EACロゼ
ツト陽性および＞95％Ｅロゼツト陽性であつ
た。さらに、非ロゼツトIg-（Null細胞）個体
群をフイコール表面から収穫した。この後者の
個体群は＜５％E+および２％sIg+であつた。
表面Ig+(B)個体群は、前述のようにSephadex
Ｇ−200カラムクロマトグラフイーおよび引き
続く正常なヒト・ガンマグロブリンによる溶離
から得られた。この個体群は＞95％表面Ig+お
よび＜５％E+であつた。 正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付
着により、単核個体群から得た。こうして、単
核細胞を最終培地（RPMI 1640、2.5ミリモル
のHEPES［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジンプロパンスルホン酸］緩衝剤、
0.5％の重炭酸ナトリウム、200ミリモルのＬ−
グルタミン、および１％ペニシリン−ストレプ
トマイシンからなり、20％の熱失活したヒト
AB血清を補足した）中に２×106細胞濃度で再
懸濁し、プラスチツクのペトリ皿（100×20mm）
（Falcon Tissue Culture Dish；Falcon、
Oxnard、CA）中で37℃において一夜培養し
た。よく洗つて非付着性細胞を除去した後、
2.5ミリモルのEDTAを含有する冷たい血清不
含媒体で強く洗い、時々使い捨て注射器のプラ
ンジヤーのゴムの先端で引つかいて、付着した
個体群を脱着した。85％より多い細胞個体群
は、ラテツクス粒子を摂取することができ、そ
してライト−ギエムサ（Wright−Giemsa）染
色により単球の形態学的特性を有した。 Ｂ 正常な胸腺 正常人の胸腺を２ケ月〜14才の年令の患者か
ら、心臓の矯正手術のもとに得た。胸腺の新し
く得た部分を媒体199（Gibco）中の５％胎児の
子牛の血清中に直ちに入れ、鉗子とはさみで小
さく切り、引き続いて金網を通してプレスする
ことによつて単細胞の懸濁液にした。細胞を次
に前節Ａで説明したように、フイコール−ハイ
パツクで層状にし、回し、洗浄した。このよう
にして得られた胸腺細胞は＞95％生活力があ
り、そして90ロゼツト陽性であつた。 Ｃ 細胞ライン（Cell lines） 正常な４個体（Laz007、Laz156、Laz256お
よびSB）からエプスタイン−バールウイルス
（Epstein−Barr Virus）（EBV）変形した細胞
ラインを前述のように調製した。白血病から確
立したＴ細胞ラインCEM、HJD−１、
Laz191、およびHMIは、Dr.H.Lazarus
（Sidney Farber Cancer Institute、Boston、
MA）により提供された。 上記細胞を調製するに当つて、確立したリン
パ芽球細胞ラインへのヒトリンパ球の形質転換
は、エプスタイン−バールウイルスの生物学的
性質としてよく知られている。このような細胞
の形質転換は、度々文献に記載され、例えばジ
エイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよ
びダブリユ・スエツトがインタナシヨナル・ジ
ヤーナル・オブ・カンサー３号857−867頁
［Pope、J.H.、M.K.Horne and W.Scott in
Int.J.Cancer、３；857−867、（1968）］におけ
る“ヘルペス様ウイルスを含有するヒト白血病
細胞ラインから口別したものによる試験管内に
おいてヒト胎児リンパ球の形質転換”
［“Transformation of Fetal Human
Lympocytes In−Vitro By Filtrates of ａ
Human Leukemiic Cell Line Containing
Herpers−Like Virus”］という表題の論文に
詳細に説明されている。 Ｄ Ｔ急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ALL）細
胞およびＴ慢性リンパ球性白血病（Ｔ−CLL）
細胞 白血病細胞は12人のＴ−ALLの患者から得
られた。これらの個体の細胞は、Schlossman、
et al、Proc.Nat.Acad.Sci．73：1288（1976）
によりすでに記載されているように、羊の赤血
球との自発ロゼツト形成（＞20％E+）、および
Ｔ細胞特異性異質抗血清、抗HTL（抗−BK.）
およびA99との反応性によりりＴ細胞結合をも
つとすでに決定された。３個体からの腫瘍細胞
はウサギおよび／または馬の抗TH2と反応性
（TH2 +）であつたが、残る９個体からの細胞
は非反応性であつた（TH2 -）。TH2 -T−CLL
の２人の患者からの白血病細胞も使用した。 ウサギおよび／または馬抗TH2は、特有の
機能特性“TH2 +”を有する、Ｔ細胞個体群の
特殊なサブセツトと結合するウサギまたは馬か
ら誘導された異種抗血清のことである。このこ
とは下記の文献に述べられている。イー・エ
ル・エヌ・ラインヘルツとエス・エフ・シユロ
スマン［Reinheltz、E.L.N.、Schlossmann、
S.F.］のJournal of Immunology 122、1335
−1341（1979）。両方の急性および慢性の白血病
細胞を10％のジメチルスルホキシドおよび20％
のABヒト血清中の−196℃の蒸気相液体窒素
中で、表面特性づけの時間まで、凍結保存し
た。分析した腫瘍個体群は、すべての場合にお
いてライト−ギユムサ（Wright−Giemsa）形
態学により＞90％芽細胞であつた。 実施例 シトフルオログラフ（cytofluorographic）分
析 すべての細胞個体群のシトフルオログラフ分析
を、シトフルオログラフ（Cytofluorograf）
FC200／4800A（Ortho Instruments）で蛍光共役
したヤギの抗マウスigG（Ｇ／Ｍ FITC）
（Meloy Laboratories）を用いて間接免疫蛍光法
により実施した。要約すると、１〜２×106細胞
を0.15mlのOKT3で１：1000希釈において処理
し、４℃で30分間培養し、２回洗浄した。次いで
細胞を0.15mlの１：40希釈のＧ／Ｍ FITCで４
℃において30分間反応させ、遠心分離し、３回洗
浄した。次いでこれらの細胞をシトフルオログラ
フで分析し、蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析
器に記録した。同様な反応性のパターンは１：
10000の希釈で観察されたが、これよりさらに希
釈すると反応性は失なわれた。バツクグラウンド
の染色歯、非生成性交雑クローンで腹膜的に免疫
したBalb／cJマウスからの１：1000腹水の0.15ml
部分を代わりに使用することによつて得た。 第１〜５図中のデータとOKT3（ならびに
OKT1およびOKT4）についての追加のデータと
は表に要約されている。 ハイブリドマの生成、および生ずるモノクロー
ナル抗体の生成および特性づけは、上の実施例に
おけるように実施した。大量の主題の抗体を、主
題のハイブリドマのマウスへの腹膜内注射および
悪性腹水の収穫により調製したが、ハイブリドマ
は試験管内でこの分野においてよく知られた技術
により培養し、抗体を上澄液から取り出すことが
できることは、明らかに考えられる。 主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・タ
イプ・カルチヤー・コレクシヨン（12301
Parklawn Drive、Rockville、MD、20852）に
1979年４月26にちに寄託され、ATCC番号
CRL8001が付された。 第１図に示すように、一定の正常な個体の全ヒ
ト末梢血液Ｔ細胞の個体群はOKT3と反応性であ
るが、これに対して同じ個体から単離された全Ｂ
細胞、無特徴細胞および大食細胞の個体群は
OKT3と非反応性である。他の正常な15個体から
のリンパ球の個体群について同様な結果が得られ
た。こうしてモノクローナル抗体は、本質的にす
べての正常なヒト末梢Ｔ細胞の表面上に含有され
る抗原と反応性であるが、前述の他の３つの細胞
の型の表面上の抗原と非反応性であると、特性づ
けられ。この特異の反応性は、主題の抗体OKT3
を検出でき、そして他の抗体と区別できる１つの
試験である。 第２図に示すように、６カ月の乳児からの正常
なヒト胸腺細胞のほとんど大部分はOKT3と完全
に非反応性であるが、胸腺細胞の約５〜10％は反
応性である。この発見の意味は、幹細胞が成熟し
たＴ細胞に変わる分化過程の間、胸腺細胞がある
段階で、OKT3と反応性である、Ｔ細胞上に見い
出される同じ表面の抗原を獲得するということに
ある。これらの胸腺細胞は、胸腺から血流中へ出
る直前の分化の後の段階にあると信じられる。２
カ月〜19才の年令の正常な個体からの６つの追加
の胸腺の試料を用いて、同様な結果（５〜10％の
反応性）が得られた。第２図における反応性のパ
ターンは、主題の抗体OKT3を検出し、それを他
の抗体と区別する第２の方法を提供する。 主題の抗体はＴ細胞である循環リンパ球の比率
の決定にも有用である。表に示すように、すべ
てのＴ細胞の95％はOKT3抗体と反応する。こ
うして本発明はOKT3抗体を個体からのリンパ球
細胞と混合し、そしてOKT3+、こうしてＴ細胞
であるリンパ球の比率を決定することからなる、
個体においてＴ細胞である循環リンパ球の比率を
決定する方法を含有する。 主題の抗体OKT3のほかの特徴づけは、第４お
よび５図に図解される種々のヒトＴ細胞ラインに
対する反応によつて示される。この図からわかる
ように、主題の抗原のヒトＴ細胞ラインに対する
反応性は不均質であり、ラインHJD−１につい
て弱く、ライン、Laz191、およびHM1について
不存在である。このOKT3の種々の入手容易なヒ
トＴ細胞ラインに対する特異の反応性は、主題の
抗体を特徴づけかつ説明する。なお他の方法を提
供する。 OKT3とヒトのＢ細胞ラインLaz007、Laz156、
Laz256およびSBとの反応の不存在は表に示さ
れている。これは、さらに、OKT3と、正常のヒ
トの個体群の末梢血液からえられたＢ細胞との反
応の不存在を裏書きし、そしてしかも主題の抗体
OKT3を特性づけかつ区別する他の方法を提供す
る。 OKT3抗体と皮膚Ｔ細胞リンパ腫上の抗原との
特異反応は表に示されており、ここでOKT1
（ハイブリドマ ATCC No. CRL8000）および
OKT4（ハイブリドマ ATCC No. CRL80002）
からの区別が示される。本発明の抗体は、従つ
て、病気の患者における皮膚Ｔ細胞リンパ腫の診
断を確認するための試薬を提供する。治療学的に
有効量のOKT3抗体を投与することによる皮膚Ｔ
細胞リンパ腫の処置は、また本発明の一部として
考えられる。 本発明によれば、本質的にすべての正常なヒト
Ｔ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞上に見い出され
る抗原に対する抗体を生成できるハイブリドマ、
このハイブリドマを生成する方法。本質的にすべ
てのヒトＴ細胞上に見い出される抗原に対するモ
ノクローナル抗体、この抗体を生成する方法、お
よびこの抗体を用いる病気の処置または診断の方
法が提供される。 ヒトＴ細胞の抗原に対する単一のモノクローナ
ル抗体を生成する単一のハイブリドマだけを説明
してきたが、本発明はここに説明する特性を示す
すべてのモノクローナル抗体を包含すると考えら
れる。主題の抗体OKT3はねずみのIgGの４つの
サブクラスの１つであるサブクラスIgG2に属す
ることが決定された。免疫グロブリンＧのこれら
のサブクラスは互いにいわゆる「固定された」領
域において異なるが、特定の抗原に対する抗体は
いわゆる「可変の」領域をもち、この領域は免疫
グロブリンＧのどのサブクラスがそれに属するか
ら無関係に機能的に同一である。すなわち、ここ
に説明した特性を示す単分枝系抗体はサブクラス
IgG1、IgG2a、IgG2b、またはIgG3、あるいはク
ラスIgM、IgA、あるいは他の既知のクラスIgで
あることができる。これらのクラスまたはサブク
ラスの間の差異は抗体の反応パターンの選択性に
影響を及ぼさないが、抗体と他の物質、たとえ
ば、相補的抗体または抗マウス抗体とのほかの反
応に影響を及ぼすことがあるであろう。主題の抗
体はIgG2に特定したが、ここに例示した反応性
のパターンを有する抗体類はそれらが属する免疫
グロブリンのクラスまたはサブクラスに無関係に
本発明の範囲内に包含されると考えられる。 さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したハ
イブリドマの技術を用いて前述のモノクローナル
抗体を生成する方法が包含される。ハイブリドマ
のただ１つの例をここに記載したが、当業者はこ
こに提供した免疫法、融合法および選択法に従
い、ここに説明した反応性の特性を有する抗体類
を生成しうる他のハイブリドマ類を得ることがで
きると考えられる。マウスの既知の種からの既知
の骨髄腫細胞系統から生成した個々のハイブリド
マはこのハイブリドマにより生成された抗体を参
照する以外それ以上同定できないので、前述の反
応性の特性を有する抗体を生成するすべてのハイ
ブリドマ類は本発明の範囲内に包含され、これら
のハイブリドマを用いるこの抗体をつくる方法も
同様に包含されると、考えられる。 本発明のほかの面は、モノクローナル抗体
OKT3またはここに明らかにした反応性のパター
ンを示す他のモノクローナル抗体を用いて病気を
処置または診断する方法である。前述のように、
主題の抗原は、ある種のＴ細胞の慢性リンパ芽性
白血病をもつ患者を、治療上有効量のそれを投与
することにより、処置することを可能とする。器
官移植を行なう個体の患者に治療上有効量の
OKT3を投与すると、この移植物の拒否は減少ま
たは排除されるであろう。また、主題の抗体は、
個体からのリンパ腫下細胞組成物を診断的に有効
量のOKT3抗体と混合することにより、皮膚Ｔ細
胞リンパ腫の検知を可能とする。反応の存在は、
病気の同定を保証する。皮膚Ｔ細胞リンパ腫は、
処置を必要とする個体に治療上有効量のOKT3抗
体を投与することによつて処置できる。この抗体
はＴリンパ腫細胞と反応し、その量を減少し、こ
うして病気を軽減する。これらの診断法および治
療法の観点において、本発明はさらに（それぞ
れ）診断学的または治療学的に有効量のOKT3抗
体を診断学的または製薬学的に許容できる担体と
の混合物として含有する診断学的組成物および治
療組成物を包含する。 【表】 【表】
（hybrid cell line）さらに詳しくはすべての正常
なヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞に見い出
されるある抗原に対する補体固定性モノクローナ
ル（complement−fixing monoclonal）抗体の
生成のための交雑細胞ラインに関する。 1975年におけるKohlerおよびMilsteinによる
免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨髄
腫の融合（fusion）［Nature 256、495−497
（1975）］は、均質な（いわゆる「モノクローナ
ル」）抗体をつくる連続な細胞ラインを得ること
ができることを初めて証明した。この基本の研究
以来、種々の交雑細胞［いわゆる「ハイブリドマ
類（hybridomas）］の生成およびこれらのハイブ
リドマ類によりつくられた抗体の種々の科学的研
究への使用について多くの努力が向けられてき
た。たとえば、次の文献を参照：Current
Topics in Microbiorogy and Immunology、
Volume 81−“Lymphocyte Hybridomas”、F.
Melchers、M.Potter、およびN.Warner、
Editors、Springer−Verlag、1978、およびそこ
に含まれる参考文献；C.J.Barnstable、et al．、
Cell、14、９−20（May、1978）；P.Parhamおよ
びW.F.Bodmer、Nature 276、397−399
（November、1978）；Handbook of
Experimental Immunology、Third Edition
Volume ２、D.M.Wier、Editor、Blachwell、
1978、Chapter 25；およびChemical and
Engineering News、January １、1979、15−
17。これらの文献は同時にハイブリドマ類からモ
ノクローナル抗体を生成する試みによつて得られ
る利益および複雑さを示している。一般的技術は
概念的によく理解されているが、各特定の場合に
多くの困難に出合い、そして変更が要求される。
事実、一定のハイブリドマを生成しようと試みる
前には、所望のハイブリドマが得られるか、得ら
れた場合抗体を生成するか、あるいはそのように
生成された抗体が所望の特異性をもつか、を確め
ることができない。成功の程度は、主として、使
用する抗原のタイプおよび所望のハイブリドマを
単離するために使用する選択技術によつて影響を
受ける。 人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノク
ローナル抗体を生成する試みは、数例報告されて
いるだけである。たとえば、Current Topics in
Microbiology and Immunology、ibid、66−69
および164−169参照。これらの報告された実験に
おいて使用されている抗原は、培養したリンパ芽
様性白血病およびヒトの慢性リンパ球性白血病の
細胞ラインであつた。得られた多くのハイブリド
マ類は、すべてのヒト細胞の種々の抗原に対して
抗体を生成するように思われた。ハイブリドマ類
はいずれも、ヒトのリンパ球の前もつて定めた群
に対して抗体を生成しなかつた。 人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に
２つの主な群が存在することを理解すべきであ
る。これらのうちの第１群（胸腺誘導細胞、すな
わち、Ｔ細胞）は、ヘモポイエチン幹細胞から胸
腺において分化されている。胸腺内にある間、分
化する細胞は「胸腺細胞」と名づけられる。成熟
したＴ細胞は胸腺から出、そして組織、リンパ
管、および血流の間を循環する。これらのＴ細胞
は、再循環する小さいリンパ球の貯留（pool）の
大きい比率を形成する。それらは免疫学的特異性
を有し、そして細胞介在免疫応答（組織移植注入
のような）においてエフエクター（effector）細
胞として直接関与する。Ｔ細胞は液性抗体を分泌
しないが、後述するリンパ球の第２群によるこれ
らの抗体の分泌に時々要求される。Ｔ細胞のいく
つかの型は免疫系の他の面において調節機能をは
たす。この細胞共働の過程の機構はまだ完全には
理解されていない。 リンパ球の第２群（骨髄誘導細胞、すなわち、
Ｂ細胞）は、抗体を分泌するものである。それら
もまたヘモポイエチン幹細胞から発生するが、そ
れらの分化は胸腺によつて決定されない。鳥類に
おいて、それらはフアブリキウス嚢（Bursa of
Fabricius）と呼ばれる胸腺に類似する器管にお
いて分化されている。しかし、哺乳動物において
は、同等の器管は発見されておらず、そしてこれ
らのＢ細胞は骨髄内で分化すると考えられる。 ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（helper）」、「抑
制体（Auppressor）」および「キラー（killer）」
Ｔ細胞と呼ばれる、少なくともいくつかのサブタ
イプに分けられ、それらは（それぞれ）反応を促
進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す
（分離する）機能を有することが認められた。こ
れらのサブクラスはネズミの系統についてよく理
解されているが、それらは人間の系についてわず
かに最近記載されただけである。たとえば、次の
文献を参照：R.L.Evans、et al.、Journal of
Experimental Medicine、Volume145、221−
232、1977；およびL.ChessおよびS.F.
Schlossman−“Functional Analysis of
Distinct Human Ｔ−Cell Subsets Bearing
Unique Differentiation Antigens”
“Contemporary Topics in Immunobiology”、
O.Stutman、Editor、Plenum Press、1977、
Volume ７、363−379。 Ｔ細胞のクラスまたはサブクラスを同定または
抑制することができることは、種々の免疫調節の
不調または状態の診断または処置にとつて重要で
ある。 たとえば、ある種の白血病およびリンパ腫は、
それらがＢ細胞またはＴ細胞のいずれを源とする
かによつて、異なる予後を有する。こうして、病
気の予後の評価はこれらのリンパ球の２つのクラ
スを区別することに依存する。たとえば、次の文
献を参照：A.C.AisenberyおよびJ.C.Long、The
American Journal of Medicine、58：300
（March、1975）；D.Belpomme、et al.、
Immunological Diagnosis of Leukemias and
Lymphomas、S.Thierfelder、et al．、Editors、
Springer、Heidelberg、1977、33−45；および
D.Belpomme、et al．、British Journal of
Haematology、1978、38、85。ある種の病気の
状態（たとえば、若年性リウマトイド関節炎およ
びある種の白血病）は、Ｔ細胞のサブクラスの不
釣合いに関係する。自己免疫の病気は一般に「ヘ
ルパー」Ｔ細胞の過剰またはある種の「抑制体」
Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪性の病気は一般に
「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連することが示唆さ
れた。ある種の白血病において、過剰のＴ細胞は
発育の停止した状態において生成される。診断は
こうしてこの不釣合い、すなわち、過剰を検知す
ることができることに依存しえるであろう。たと
えば、次の文献を参照毛J.Kersey、et al.、
“Surface Markers Define Human Lymphoid
Malignancies with Differing Prognoses”、
Haematology and Blood Transfution、
Volume20、Spriner−Verlag、1977、17−24、
およびその中に含まれる参考文献。 治療サイドにおいて、まだ明確に証明されてい
なが、Ｔ細胞のサブタイプに対する抗体を過剰量
で投与することは自己免疫の病気または悪性の病
気において治療上有益であるという、いくらかの
示唆がある。ヒトＴ細胞の全クラス（いわゆる抗
ヒト胸腺細胞のグロブリン、すなわち、ATG）
に対する抗血清は、移植組織を受ける患者におい
て治療上有用であると報告されている。細胞介在
免疫応答（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に
依存するので、Ｔ細胞に対する抗体を投与する
と、この拒否の過程を防止または遅延する。たと
えば、次の文献を参照：Cosimi、et al．、
“Randomized Clinical Trial of ATG in
Cadaver Renal Allgraft Recipients：
Importance of Ｔ Cell Monitoring”、
Surgery 40：155−163（1976）およびその中に
含まれる参考文献。 ヒトＴ細胞クラスおよびサブクラスの同定およ
び抑制は、従来、動物をヒトＴ細胞で免疫し、そ
の動物を出血させて血清を取り、そしてこの抗血
清を（たとえば）地元（autololgous）であるが、
異種ではないＢ細胞で吸着して望まない反応性を
もつ抗体を除去することによつて得た、ヒトＴ細
胞のための自発性自己抗体または選択的抗血清を
使用することによつて達成された。これらの抗血
清の製造は、とくに吸着および精製の工程におい
て、きわめて困難である。吸着され且つ精製され
た抗血清でさえ、所望の抗体に加えて、いくつか
の理由で、多くの不純物を含有する。第１に、血
清はＴ細胞で免疫する前に数百万の抗体分子を含
有する。第２に、この免疫法は注入したすべての
ヒトＴ細胞について見い出される種々の抗原に対
する抗体を生成させる。単一の抗原に対する抗体
は選択的に形成されない。第３に、このような方
法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて低く
（たとえば、１：100より大きい希釈度において不
活性）そして非特異性抗体に対する比は１／106
より小である。 たとえば、前述のChessおよびSchlossmanの
文献（365ページ以降参照）および前述の
Chemcal and Engineering Newsを参照。ここ
には先行技術の抗血清の欠点および単分枝系抗体
の利点が記載されている。 今回、本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞
および皮膚Ｔリンパ腫細胞にについて見い出され
る抗原に対する新規なモノクローナル抗体を生成
できる新規な補体固定性ハイブリドマ（OKT3と
標示する）が見出された。そのように生成された
抗体は正常なヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細
胞腫についての単一の決定因子に対して単一特異
性（monospecific）であり、そして他の抗ヒト
免疫グロブリンを本質的に含有しないが、これと
対照的に先行技術の抗血清は多数のヒト抗原に対
して反応性の抗体で本来汚染されており、そして
先行技術のモノクローナル抗体はヒトＴ細胞の抗
原について単一特異性ではない。その上、このハ
イブリドマは培養して抗体を生成することができ
る。この場合動物を免疫し、殺し、次いで先行技
術の不純の抗血清を得るときにさえ、必要な長た
らしい吸着および精製の工程を実施することを要
しない。 したがつて、本発明の１つの目的は、本質的に
すべての正常なヒトＴ細胞および皮膚リンパ腫細
胞腫について見い出される抗原に対する抗体を生
成するハイブリドマ類を提供することにある。 本発明のさらに別の面において、これらのハイ
ブリドマ類を製造する方法を提供する。 本発明の他の目的は、本質的にすべての正常な
ヒトＴ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞について見
い出される抗原に対する本質的に均質な抗体を提
供することである。 さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気
の処置または診断の方法を提供することである。 本発明のその他の目的および利益は、本発明の
開示を検討すると明らかになるであろう。 前述の目的および利益を達成するために、本発
明によれば、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞
および皮膚リンパ腫細胞について見い出される抗
原に対する新規な抗体を生成する新規なハイブリ
ドマ、この抗体それ自体、およびこの抗体を用い
る診断および治療の方法が提供される。該ハイブ
リドマはMilsteinおよびKohlerの方法に一般に
従つて製造される。正常のＥロゼツト（rosette）
陽性のヒトＴ細胞でマウスを免疫した後、免疫し
たマウスの脾細胞をマウスの骨髄腫ラインからの
細胞と融合し、そして得られたハイブリドマ類を
正常のＥロゼツト陽性のヒトＴ細胞に選択的に結
合する抗体を含有する上澄液を用いてそれらにつ
いて選別した。所望のハイブリドマ類を引き続い
てクローニングし、特徴づけた。その結果、本質
的にすべての正常なヒトＴ細胞についての抗原に
対する抗体（OKT3と表示する）を生成するハイ
ブリドマが得られる。この抗体は本質的にすべて
の正常なヒト末梢Ｔ細胞と反応するが、他の正常
な末梢の血液のリンパ球細胞と反応しない。更
に、この抗体により認識される細胞表面の抗原は
成熟した胸腺細胞についてのみ検出され、そして
正常なヒト胸腺細胞の90％より多くはこの抗原を
完全に欠いている。 先行技術において示された困難および抗原とし
て悪性の細胞ラインを用いて報告された成功の不
足を見ると、本発明の方法が所望のハイブリドマ
を提供したことは驚くべきことであつた。交雑細
胞のこの予測されえない性質は１つの抗原または
細胞ラインから他のものへの補外（extrapolate）
を許さないことに注意すべきである。事実、本発
明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性細胞ラインを
用いると、所望の抗体を生成しないハイブリドマ
類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終
つた。 主題のハイブリドマおよびそれによつて製造さ
れた抗体の両方はここでは標示「OKT3」で識別
し、該特定の物質は本明細書より明らかである。 このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造およ
び特性は、以下の説明および実施例から一層理解
できるであろう。 ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程
からなる： Ａ Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ
細胞でマウスを免疫する。メスのCAF1マウス
（Balb／ｃマウスとＡ／Ｊマウスとの間の第１
代の交雑）が好ましいことがわかつたが、他の
マウスの系統を使用できると考えられる。免疫
スケジユールおよびＴ細胞の濃度は、有効量の
適当に準備した脾細胞を生成するようなもので
あるべきである。0.2mlのリン酸緩衝食塩溶液
中の２×107細胞／マウス／注射を用いて、14
日の間隔で、３回免疫を行うことは有効である
ことがわかつた。 Ｂ 免疫したマウスから脾臓を除去し、適当な媒
体中の脾懸濁液を調製する。約１ml／脾臓の媒
体で十分である。これらの実験の技術はよく知
られている。 Ｃ 懸濁した脾細胞を適当な細胞ラインからのマ
ウスの骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用
により融合する。脾細胞対骨髄腫細胞の好まし
い比は約５：１である。約108個の脾細胞につ
いて合計約0.5〜1.0mlの融合媒体は適当であ
る。多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られてお
り、そして一般に学問的共同体のメンバーまた
は種々の寄託機関、たとえば、ザ・ソーク・イ
ンスチチユート・セル・デイストリビユーシヨ
ン・センター（the Salk institute Cell
Distribution Center La Jollia、CA）から入
手できる。使用する細胞ラインは好ましくはい
わゆる「薬物抵抗性」型であつて、未融合の骨
髄腫細胞が選択した媒体中で生存せず、一方交
雑細胞が生存するようにすべきである。最も普
通のクラスは８−アザグアニン抵抗性の細胞ラ
インであり、これは酵素ヒポキサンチン・グア
ニン・ホホリボシル・トランスフエラーゼ
（phophoribosyl transferase）を欠き、それゆ
えHAT（ヒポキサンチン、アミノプリテン、
およびチミジン）媒体により支持されない。ま
た、使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる「非
分泌」型である、すなわち、それはそれ自体抗
体を生成しないことが一般に好ましいが、分泌
型を使用できる。しかしながら、ある場合にお
いて、分泌する骨髄腫ラインは好ましいことが
ある。好ましい融合促進剤は平均分子量が約
1000〜約4000であるポリエチレングリコール
（商業的にPEG1000などとして入手できる）が
好ましいが、この分野において知られている他
の融合促進剤を使用できる。 Ｄ 別の容器内において、未融合の脾細胞、未融
合の骨髄腫細胞、および融合した細胞の混合物
を、未融合の骨髄腫細胞を支持しない選択的媒
体中で希釈し、未融合の細胞を死亡させるのに
十分な時間（約１時間）培養する。この希釈は
限定されたものの型であることができ、この希
釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各
別々の容器［たとえば、マイクロタイタープレ
ートの各ウエル］中である数の細胞（たとえ
ば、１〜４）を単離する。媒体は薬物抵抗性
（たとえば、８−アザグアニン抵抗性）で未融
合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（たと
えば、HAT媒体）である。それゆえ、これら
のこれらの骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の脾細胞
は非悪性であるので、有限の数の世代をもつだ
けである。こうして、ある期間（約１週間）
後、これらの未融合の脾細胞は再生しない。融
合した細胞は、これに対して、骨髄腫の親の悪
性をもち、そして脾細胞の親の選択的媒体中で
生存できるので、再生し続ける。 Ｅ ハイブリドマを含有する各容器（ウエル）中
の上澄液を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ
細胞に対する抗体について評価する。 Ｆ 所望の抗体を生成するハイブリドマを選択し
（たとえば、限定希釈により）そしてクローニ
ングする。 いつたん所望のハイブリドマを選択し、クロー
ニングすると、終結の抗体は２つの方法の１つで
生成させることができる。最も純粋なモノクロー
ナル抗体は、所望のハイブリドマを適当な媒体中
で適当な長さの時間試験内で培養し、次いで所望
の抗体を上澄液から回収することによつて生成さ
れるる。適当な媒体および適当な培養時間の長さ
は、既知であるか、あるいは決定内容である。こ
の試験管内技術は、他の特異性の抗ヒト免疫グロ
ブリンを本質的に含まない、単一特異性モノクロ
ーナル抗体を本質的に生成する。媒体は外因性血
清（たとえば、胎児の子牛の血清）を含有するの
で、少量の他の免疫グロブリンが存在する。しか
しながら、この試験管内の方法は、モノクローナ
ル抗体の濃度がわずかに約50μｇ／mlであるの
で、十分な量または濃度を生成できない。 非常に大きい濃度のわずかに純度に劣るモノク
ローナル抗体を生成させるため、所望のハイブリ
ドマをマウス、好ましくは先天性または先天性の
マウスに注射できる。ハイブリドマは適当な潜伏
時間後抗体生成の腫瘍を形成させ、その結果宿主
マウス血流および腹膜滲出液（腹水）中に高濃度
の所望とする抗体（約５〜20mg／ml）が生ずる。
これらの宿主マウスも正常の抗体を血流および腹
水の中に有するが、これらの正常な抗体の濃度は
モノクローナル抗体濃度のわずかに約５％である
にすぎない。その上、これらの正常の抗体は特異
性が抗ヒトでないので、収穫した腹水または血清
から得たモノクローナル抗体は汚染する抗ヒト免
疫グロブリンを本質的に含有しない。このモノク
ローナル抗体は力価が高く（１：30000以上の希
釈で活性である）そして特異性免疫グロブリン対
非特異性免疫グロブリンの比が高い（約１／20）。
Ｋ軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免疫グロブ
リンは非特異性の「無意味な」ペプチド類であ
り、これらはモノクローナル抗体をその特異性を
減じないで単に希釈するだけである。 実施例 １ モノクローナル抗体の生成 Ａ 免疫および体細胞の交雑 メスのCAF1マウス（Jackson研究所；生ま
れてから６週間）を、0.2mlのリン酸緩衝食塩
溶液中の２×107のＥロゼツト精製したＴ細胞
で腹膜内的に14日の間隔で免疫した。第３回目
の免疫後、脾をマウスから取り出し、そしてス
テンレス鋼の網に組織を通すことによつて単一
細胞の懸濁液をつくつた。 細胞の融合をKohlerおよびMilsteinの方法
に従つて実施した。１×108の脾細胞を、
RPMI1640媒体（Gibco、Grand Island、NY）
中の35％のポリエチレングリコール
（PEG1000）と５％のジメチルスルホキシドと
からなる融合媒体の0.5ml中において、２×107
のP3×63Ag8U1骨髄腫細胞（Br.M.Scharff、
Albert Einstein College of Medicine、
Bronx、NYにより供給）と融合した。これら
の骨髄腫細胞はIgG1κL鎖（light chains）を分
泌する。 Ｂ ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をHAT媒体（ハイポキ
サンチン、アミノプリチン、およびチミジン）
中で37℃において５％のCO2を使用して湿つた
雰囲気中で培養した。数週間後、ハイブリドマ
類を含有する培養液から40〜100μの上澄液
を、Mendes（J.Immunol．111：860、1973）が
記載するように健康なヒトの供与者の血液から
調製した、Ｅロゼツト陽性（E+）個体群とＥ
ロゼツト陰性（E-）個体群とに分けた106の末
梢リンパ球のペレツトに加えた。これらの細胞
へ結合するマウスのハイブリドマ抗体の検出
は、ラジオイムノアセイおよび／または間接免
疫蛍光法により決定した。第１の方法におい
て、細胞は初め100μの親和性精製した 125I
山羊の抗マウスIgG（106cpm／μｇ；500μ）
の100μと反応させた（山羊の抗マウスのヨ
ウ素化の詳細はKung、et al．、J.Biol.Chem．
251(8)：2399、1976に記載されている）。別法と
して、培養液の上澄液で培養した細胞を蛍光を
付与した山羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ FITC）
（Meloy研究所、Springfield、VA；Ｆ／Ｐ＝
2.5）で染色し、この蛍光性抗体被覆細胞を引
き続いてシトフルオログラフ
（Cytofluorograf）FC200／4800A（Ortho
Instruments、Westwood、MA）について実
施例に記載するように分析した。E+リンパ
球（Ｔ細胞）と特異的に反応する抗体を含有す
るハイブリドマ培養液を選択し、クローニング
した。引き続いて、分枝系を２，６，10，14−
テトラメチルペンタデカン（Aldrich
Chemical Companyから商品名Pristineで市販
されている）で準備したCAF1マウスに一定の
分枝系の１×107細胞（0.2mlの体積）を注射す
ることによつて、腹膜内に移植した。次いでこ
れらのマウスからの悪性腹水を使用して、実施
例において後述するように、リンパ球を特徴
づけた。主題の交雑抗体OKT3は、標準の技術
によりサブクラスIgG2であり、補体を固定す
ると証明された。 実施例 OKT3の反応性の特性づけ Ａ リンパ球個体群の単離 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者
の提供者（15〜40才）から、Boyum、Scand.
J.Clin.Lab.Invest．21（Suppl.97）：77、1968
の技術に従い、フイコール−ハイパツク
（Ficoll−Hypaque）密度勾配遠心分離
（Pharmacia Fine Chemicals、Piscataway、
NJ）により単離した。分別しない単核細胞を、
Chess、et al.、J.Immunol．113：1113（1974）
にすでに記載されているように、Sephadex Ｇ
−200抗−Ｆ（ab′）2カラムクロマトグラフイー
により、表面Ig+(B)およびIg-（ＴプラスNull）
の個体群に分離した。Ｔ細胞はIg-個体群を５
％の羊の赤血球（Microbiological
Associates、Bethesda、MD）でＥロゼツト化
することによつて回収した。ロゼツト化した混
合物をフイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）上で層状にし、回収したE+ペレツ
トを0.155モルのNH4Cl（10ml／108細胞）で処
理した。このよういして得られたＴ細胞の個体
群は、標準法により決定して、＜２％EACロゼ
ツト陽性および＞95％Ｅロゼツト陽性であつ
た。さらに、非ロゼツトIg-（Null細胞）個体
群をフイコール表面から収穫した。この後者の
個体群は＜５％E+および２％sIg+であつた。
表面Ig+(B)個体群は、前述のようにSephadex
Ｇ−200カラムクロマトグラフイーおよび引き
続く正常なヒト・ガンマグロブリンによる溶離
から得られた。この個体群は＞95％表面Ig+お
よび＜５％E+であつた。 正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付
着により、単核個体群から得た。こうして、単
核細胞を最終培地（RPMI 1640、2.5ミリモル
のHEPES［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジンプロパンスルホン酸］緩衝剤、
0.5％の重炭酸ナトリウム、200ミリモルのＬ−
グルタミン、および１％ペニシリン−ストレプ
トマイシンからなり、20％の熱失活したヒト
AB血清を補足した）中に２×106細胞濃度で再
懸濁し、プラスチツクのペトリ皿（100×20mm）
（Falcon Tissue Culture Dish；Falcon、
Oxnard、CA）中で37℃において一夜培養し
た。よく洗つて非付着性細胞を除去した後、
2.5ミリモルのEDTAを含有する冷たい血清不
含媒体で強く洗い、時々使い捨て注射器のプラ
ンジヤーのゴムの先端で引つかいて、付着した
個体群を脱着した。85％より多い細胞個体群
は、ラテツクス粒子を摂取することができ、そ
してライト−ギエムサ（Wright−Giemsa）染
色により単球の形態学的特性を有した。 Ｂ 正常な胸腺 正常人の胸腺を２ケ月〜14才の年令の患者か
ら、心臓の矯正手術のもとに得た。胸腺の新し
く得た部分を媒体199（Gibco）中の５％胎児の
子牛の血清中に直ちに入れ、鉗子とはさみで小
さく切り、引き続いて金網を通してプレスする
ことによつて単細胞の懸濁液にした。細胞を次
に前節Ａで説明したように、フイコール−ハイ
パツクで層状にし、回し、洗浄した。このよう
にして得られた胸腺細胞は＞95％生活力があ
り、そして90ロゼツト陽性であつた。 Ｃ 細胞ライン（Cell lines） 正常な４個体（Laz007、Laz156、Laz256お
よびSB）からエプスタイン−バールウイルス
（Epstein−Barr Virus）（EBV）変形した細胞
ラインを前述のように調製した。白血病から確
立したＴ細胞ラインCEM、HJD−１、
Laz191、およびHMIは、Dr.H.Lazarus
（Sidney Farber Cancer Institute、Boston、
MA）により提供された。 上記細胞を調製するに当つて、確立したリン
パ芽球細胞ラインへのヒトリンパ球の形質転換
は、エプスタイン−バールウイルスの生物学的
性質としてよく知られている。このような細胞
の形質転換は、度々文献に記載され、例えばジ
エイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよ
びダブリユ・スエツトがインタナシヨナル・ジ
ヤーナル・オブ・カンサー３号857−867頁
［Pope、J.H.、M.K.Horne and W.Scott in
Int.J.Cancer、３；857−867、（1968）］におけ
る“ヘルペス様ウイルスを含有するヒト白血病
細胞ラインから口別したものによる試験管内に
おいてヒト胎児リンパ球の形質転換”
［“Transformation of Fetal Human
Lympocytes In−Vitro By Filtrates of ａ
Human Leukemiic Cell Line Containing
Herpers−Like Virus”］という表題の論文に
詳細に説明されている。 Ｄ Ｔ急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ALL）細
胞およびＴ慢性リンパ球性白血病（Ｔ−CLL）
細胞 白血病細胞は12人のＴ−ALLの患者から得
られた。これらの個体の細胞は、Schlossman、
et al、Proc.Nat.Acad.Sci．73：1288（1976）
によりすでに記載されているように、羊の赤血
球との自発ロゼツト形成（＞20％E+）、および
Ｔ細胞特異性異質抗血清、抗HTL（抗−BK.）
およびA99との反応性によりりＴ細胞結合をも
つとすでに決定された。３個体からの腫瘍細胞
はウサギおよび／または馬の抗TH2と反応性
（TH2 +）であつたが、残る９個体からの細胞
は非反応性であつた（TH2 -）。TH2 -T−CLL
の２人の患者からの白血病細胞も使用した。 ウサギおよび／または馬抗TH2は、特有の
機能特性“TH2 +”を有する、Ｔ細胞個体群の
特殊なサブセツトと結合するウサギまたは馬か
ら誘導された異種抗血清のことである。このこ
とは下記の文献に述べられている。イー・エ
ル・エヌ・ラインヘルツとエス・エフ・シユロ
スマン［Reinheltz、E.L.N.、Schlossmann、
S.F.］のJournal of Immunology 122、1335
−1341（1979）。両方の急性および慢性の白血病
細胞を10％のジメチルスルホキシドおよび20％
のABヒト血清中の−196℃の蒸気相液体窒素
中で、表面特性づけの時間まで、凍結保存し
た。分析した腫瘍個体群は、すべての場合にお
いてライト−ギユムサ（Wright−Giemsa）形
態学により＞90％芽細胞であつた。 実施例 シトフルオログラフ（cytofluorographic）分
析 すべての細胞個体群のシトフルオログラフ分析
を、シトフルオログラフ（Cytofluorograf）
FC200／4800A（Ortho Instruments）で蛍光共役
したヤギの抗マウスigG（Ｇ／Ｍ FITC）
（Meloy Laboratories）を用いて間接免疫蛍光法
により実施した。要約すると、１〜２×106細胞
を0.15mlのOKT3で１：1000希釈において処理
し、４℃で30分間培養し、２回洗浄した。次いで
細胞を0.15mlの１：40希釈のＧ／Ｍ FITCで４
℃において30分間反応させ、遠心分離し、３回洗
浄した。次いでこれらの細胞をシトフルオログラ
フで分析し、蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析
器に記録した。同様な反応性のパターンは１：
10000の希釈で観察されたが、これよりさらに希
釈すると反応性は失なわれた。バツクグラウンド
の染色歯、非生成性交雑クローンで腹膜的に免疫
したBalb／cJマウスからの１：1000腹水の0.15ml
部分を代わりに使用することによつて得た。 第１〜５図中のデータとOKT3（ならびに
OKT1およびOKT4）についての追加のデータと
は表に要約されている。 ハイブリドマの生成、および生ずるモノクロー
ナル抗体の生成および特性づけは、上の実施例に
おけるように実施した。大量の主題の抗体を、主
題のハイブリドマのマウスへの腹膜内注射および
悪性腹水の収穫により調製したが、ハイブリドマ
は試験管内でこの分野においてよく知られた技術
により培養し、抗体を上澄液から取り出すことが
できることは、明らかに考えられる。 主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・タ
イプ・カルチヤー・コレクシヨン（12301
Parklawn Drive、Rockville、MD、20852）に
1979年４月26にちに寄託され、ATCC番号
CRL8001が付された。 第１図に示すように、一定の正常な個体の全ヒ
ト末梢血液Ｔ細胞の個体群はOKT3と反応性であ
るが、これに対して同じ個体から単離された全Ｂ
細胞、無特徴細胞および大食細胞の個体群は
OKT3と非反応性である。他の正常な15個体から
のリンパ球の個体群について同様な結果が得られ
た。こうしてモノクローナル抗体は、本質的にす
べての正常なヒト末梢Ｔ細胞の表面上に含有され
る抗原と反応性であるが、前述の他の３つの細胞
の型の表面上の抗原と非反応性であると、特性づ
けられ。この特異の反応性は、主題の抗体OKT3
を検出でき、そして他の抗体と区別できる１つの
試験である。 第２図に示すように、６カ月の乳児からの正常
なヒト胸腺細胞のほとんど大部分はOKT3と完全
に非反応性であるが、胸腺細胞の約５〜10％は反
応性である。この発見の意味は、幹細胞が成熟し
たＴ細胞に変わる分化過程の間、胸腺細胞がある
段階で、OKT3と反応性である、Ｔ細胞上に見い
出される同じ表面の抗原を獲得するということに
ある。これらの胸腺細胞は、胸腺から血流中へ出
る直前の分化の後の段階にあると信じられる。２
カ月〜19才の年令の正常な個体からの６つの追加
の胸腺の試料を用いて、同様な結果（５〜10％の
反応性）が得られた。第２図における反応性のパ
ターンは、主題の抗体OKT3を検出し、それを他
の抗体と区別する第２の方法を提供する。 主題の抗体はＴ細胞である循環リンパ球の比率
の決定にも有用である。表に示すように、すべ
てのＴ細胞の95％はOKT3抗体と反応する。こ
うして本発明はOKT3抗体を個体からのリンパ球
細胞と混合し、そしてOKT3+、こうしてＴ細胞
であるリンパ球の比率を決定することからなる、
個体においてＴ細胞である循環リンパ球の比率を
決定する方法を含有する。 主題の抗体OKT3のほかの特徴づけは、第４お
よび５図に図解される種々のヒトＴ細胞ラインに
対する反応によつて示される。この図からわかる
ように、主題の抗原のヒトＴ細胞ラインに対する
反応性は不均質であり、ラインHJD−１につい
て弱く、ライン、Laz191、およびHM1について
不存在である。このOKT3の種々の入手容易なヒ
トＴ細胞ラインに対する特異の反応性は、主題の
抗体を特徴づけかつ説明する。なお他の方法を提
供する。 OKT3とヒトのＢ細胞ラインLaz007、Laz156、
Laz256およびSBとの反応の不存在は表に示さ
れている。これは、さらに、OKT3と、正常のヒ
トの個体群の末梢血液からえられたＢ細胞との反
応の不存在を裏書きし、そしてしかも主題の抗体
OKT3を特性づけかつ区別する他の方法を提供す
る。 OKT3抗体と皮膚Ｔ細胞リンパ腫上の抗原との
特異反応は表に示されており、ここでOKT1
（ハイブリドマ ATCC No. CRL8000）および
OKT4（ハイブリドマ ATCC No. CRL80002）
からの区別が示される。本発明の抗体は、従つ
て、病気の患者における皮膚Ｔ細胞リンパ腫の診
断を確認するための試薬を提供する。治療学的に
有効量のOKT3抗体を投与することによる皮膚Ｔ
細胞リンパ腫の処置は、また本発明の一部として
考えられる。 本発明によれば、本質的にすべての正常なヒト
Ｔ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞上に見い出され
る抗原に対する抗体を生成できるハイブリドマ、
このハイブリドマを生成する方法。本質的にすべ
てのヒトＴ細胞上に見い出される抗原に対するモ
ノクローナル抗体、この抗体を生成する方法、お
よびこの抗体を用いる病気の処置または診断の方
法が提供される。 ヒトＴ細胞の抗原に対する単一のモノクローナ
ル抗体を生成する単一のハイブリドマだけを説明
してきたが、本発明はここに説明する特性を示す
すべてのモノクローナル抗体を包含すると考えら
れる。主題の抗体OKT3はねずみのIgGの４つの
サブクラスの１つであるサブクラスIgG2に属す
ることが決定された。免疫グロブリンＧのこれら
のサブクラスは互いにいわゆる「固定された」領
域において異なるが、特定の抗原に対する抗体は
いわゆる「可変の」領域をもち、この領域は免疫
グロブリンＧのどのサブクラスがそれに属するか
ら無関係に機能的に同一である。すなわち、ここ
に説明した特性を示す単分枝系抗体はサブクラス
IgG1、IgG2a、IgG2b、またはIgG3、あるいはク
ラスIgM、IgA、あるいは他の既知のクラスIgで
あることができる。これらのクラスまたはサブク
ラスの間の差異は抗体の反応パターンの選択性に
影響を及ぼさないが、抗体と他の物質、たとえ
ば、相補的抗体または抗マウス抗体とのほかの反
応に影響を及ぼすことがあるであろう。主題の抗
体はIgG2に特定したが、ここに例示した反応性
のパターンを有する抗体類はそれらが属する免疫
グロブリンのクラスまたはサブクラスに無関係に
本発明の範囲内に包含されると考えられる。 さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したハ
イブリドマの技術を用いて前述のモノクローナル
抗体を生成する方法が包含される。ハイブリドマ
のただ１つの例をここに記載したが、当業者はこ
こに提供した免疫法、融合法および選択法に従
い、ここに説明した反応性の特性を有する抗体類
を生成しうる他のハイブリドマ類を得ることがで
きると考えられる。マウスの既知の種からの既知
の骨髄腫細胞系統から生成した個々のハイブリド
マはこのハイブリドマにより生成された抗体を参
照する以外それ以上同定できないので、前述の反
応性の特性を有する抗体を生成するすべてのハイ
ブリドマ類は本発明の範囲内に包含され、これら
のハイブリドマを用いるこの抗体をつくる方法も
同様に包含されると、考えられる。 本発明のほかの面は、モノクローナル抗体
OKT3またはここに明らかにした反応性のパター
ンを示す他のモノクローナル抗体を用いて病気を
処置または診断する方法である。前述のように、
主題の抗原は、ある種のＴ細胞の慢性リンパ芽性
白血病をもつ患者を、治療上有効量のそれを投与
することにより、処置することを可能とする。器
官移植を行なう個体の患者に治療上有効量の
OKT3を投与すると、この移植物の拒否は減少ま
たは排除されるであろう。また、主題の抗体は、
個体からのリンパ腫下細胞組成物を診断的に有効
量のOKT3抗体と混合することにより、皮膚Ｔ細
胞リンパ腫の検知を可能とする。反応の存在は、
病気の同定を保証する。皮膚Ｔ細胞リンパ腫は、
処置を必要とする個体に治療上有効量のOKT3抗
体を投与することによつて処置できる。この抗体
はＴリンパ腫細胞と反応し、その量を減少し、こ
うして病気を軽減する。これらの診断法および治
療法の観点において、本発明はさらに（それぞ
れ）診断学的または治療学的に有効量のOKT3抗
体を診断学的または製薬学的に許容できる担体と
の混合物として含有する診断学的組成物および治
療組成物を包含する。 【表】 【表】
第１図は、正常のヒト末梢Ｔ細胞を１：1000の
希釈でOKT3、およびＧ／Ｍ FITCと反応させ
た後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンを
示す。比較のため、モノクローナル抗体OKT1お
よびOKT4を用いて得られた結果を同じ条件下で
第１〜５図に示す。第２図は、ヒト胸腺細胞を
OKT3およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、シ
トフルオログラフで得られた蛍光パターンを示
す。第３図は、Ｂ細胞慢性リンパ芽球性白血病患
者からの白血病細胞をOKT3およびＧ／Ｍ
FITCと反応させた後、シトフルオログラフで得
た蛍光パターンである。第４図は、ヒトＴ細胞ラ
インHJD−１をOKT3およびＧ／Ｍ FITCと反
応させた後、シトフルオログラフで得た蛍光パタ
ーンを示す。第５図は、ヒトＴ細胞ラインCEM
をOKT3およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得た蛍光パターンを示す。
希釈でOKT3、およびＧ／Ｍ FITCと反応させ
た後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンを
示す。比較のため、モノクローナル抗体OKT1お
よびOKT4を用いて得られた結果を同じ条件下で
第１〜５図に示す。第２図は、ヒト胸腺細胞を
OKT3およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、シ
トフルオログラフで得られた蛍光パターンを示
す。第３図は、Ｂ細胞慢性リンパ芽球性白血病患
者からの白血病細胞をOKT3およびＧ／Ｍ
FITCと反応させた後、シトフルオログラフで得
た蛍光パターンである。第４図は、ヒトＴ細胞ラ
インHJD−１をOKT3およびＧ／Ｍ FITCと反
応させた後、シトフルオログラフで得た蛍光パタ
ーンを示す。第５図は、ヒトＴ細胞ラインCEM
をOKT3およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得た蛍光パターンを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒトＴ細胞で前もつて免疫されたマウスから
脾細胞とマウスの骨髄腫ラインからの細胞との融
合により形成されたIgGモノクローナル抗体−生
産性ハイブリドマであつて、該抗体が (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞およ
び皮膚Ｔリンパ腫細胞と反応するが、正常なヒ
ト末梢Ｂ細胞、無特徴細胞または大食細胞とは
反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約５％〜約10％と反応
し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病をもつヒトか
らの白血病細胞と反応するが、Ｔ細胞急性リン
パ芽球性白血病、無特徴細胞急性リンパ芽球性
白血病、またはＢ細胞慢性リンパ芽球性白血病
をもつヒトからの白血病細胞とは反応せず、そ
して (d) 補体を固定する、 ことを特徴とする前記IgGモノクローナル抗体−
生産性ハイブリドマ。 ２ 生成する抗体がサブクラスIgG2である特許
請求の範囲第１項記載のハイブリドマ。 ３ P3X63Ag8U1骨髄腫細胞とＥロゼツト精製
したヒトＴ細胞で前もつて免疫したCAF1マウス
からの脾細胞との融合により形成された特許請求
の範囲第１項記載のハイブリドマ。 ４ OKT3の同定特性をもつ特許請求の範囲第１
項記載のハイブリドマ。
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