JPH0195785A - プラスミドpBY503 - Google Patents

プラスミドpBY503

Info

Publication number
JPH0195785A
JPH0195785A JP62252379A JP25237987A JPH0195785A JP H0195785 A JPH0195785 A JP H0195785A JP 62252379 A JP62252379 A JP 62252379A JP 25237987 A JP25237987 A JP 25237987A JP H0195785 A JPH0195785 A JP H0195785A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
plasmid
pby503
molecular weight
solution
ecori
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP62252379A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2634606B2 (ja
Inventor
Keiko Kohama
恵子 小浜
Yukie Sato
幸江 佐藤
Yasurou Kurusu
泰朗 久留主
Mitsunobu Shimazu
光伸 島津
Hideaki Yugawa
英明 湯川
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mitsubishi Chemical Corp
Original Assignee
Mitsubishi Petrochemical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mitsubishi Petrochemical Co Ltd filed Critical Mitsubishi Petrochemical Co Ltd
Priority to JP62252379A priority Critical patent/JP2634606B2/ja
Publication of JPH0195785A publication Critical patent/JPH0195785A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2634606B2 publication Critical patent/JP2634606B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium

Landscapes

  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮糺た」 本発明は、新規なプラスミドpBY503に関する。更
に詳しくは、本発明はブレビバクテリウムφスタチオニ
ス(B revibacterium  5tatio
nisIFO12144)に由来する新規な環状プラス
ミドに関する。
本発明のプラスミドは、遺伝子組換え用ベクターとして
、例えばホルモン等の生理活性物質の生産を目的とする
外米遺伝子のクローニングなどにおいて有用であると考
えられる。
1忙扼」 ブレビバクテリウム属を含むコリネ型細菌は、各種アミ
ノ酸生産菌として工業的に有用な微生物であり、その宿
主−ベクター系の開発は以前から期待され、DNA組み
換え技術による工業用微生物の育種、改良がコリネ型細
菌において試みられている。そのためにはまず、コリネ
型細菌に属する菌株を宿主とするに適したベクターの開
発が必須であり、プラスミドの検索が行なわれている。
現在までにコリ木型細菌から見い出されたベクターとな
りえるプラスミドとしては、pcGl(特開昭57−1
34500号公報)、pCG2(特開昭58−3519
7号公報)、pAM330(特開昭58−67699号
公報)、pBLloo(特開昭60−120992号公
報)、pBY501(特開昭60−248182号公報
)、pBY502(特開昭61−179751号公報)
などが知られているが、DNA組換え技術によりコリネ
型細菌をさらに工業的有用な微生物に育種、改良するた
めには、様々なisを有するプラスミドベクターの開発
が必要であり、そのために新たなプラスミドの発見及び
単離が望まれている。
木遣1し先仇戒− 本発明者らはコリ冬型細菌であり、ブレビバクテリウム
属に属する菌株を用いて工業的に有用な宿主−ベクター
系を開発すべく鋭意研究を行った結果、今回、ブレビバ
クテリウム・スタチオニスの成る種の菌株から工業的に
有用な宿主−ベクター系におけるベクターとして利用可
能な新規な環状プラスミドを見い出し、本発明を完成し
た。
しかして、本発明によれば、ブレビバクテリウム・スタ
チオニス(IFO12144、ATCC14403)に
由来する、分子量が約10メガグルトンであって、かつ
下記第1表に記載の制限酵素に対する分解特性を示すこ
とを特徴とする新規な環状プラスミドが提供される。
以下このプラスミドを[プラスミドpBY503Jと称
し、さらに詳しく説明する。
本発明のプラスミドはブレビバクテリウム・スタチオニ
ス(IFO12144)から単離される新規な環状プラ
スミドである。上記菌株からの該プラスミドの分離、精
製は、それ自体既知の手段を用いて行なうことができる
。例えば、■J ournalof  Bacteri
ology、  129.1488(1977)に記載
の方法;■J ournal  of  B acte
riology、135.227−228(1977)
に記載の方法及び■T、Maniatiss E、F、
Frltsch%J。
8amb3−8a:Mo1ecular  Cloni
ng  A   Laboratory  Manua
l”、Co1d  5prinFi Harbor  
LaboratorylICold  Spring 
 Harbor  N、Y、(1982)に記載の方法
が挙げられる。特に、方法■は、穏和な条件下で溶菌処
理を施すため、目的とするプラスミドに切断等の損害を
与えることなく、収率良くプラスミドを分離することが
可能であり、好適である。
すなわち、上記方法■においては、菌体なリゾチーム処
理より溶菌させ、溶菌液に7エノール・クロロホルム処
理を施す。同処理液からプラスミドをエタノール沈澱画
分に回収後、エチジウムブロマイドを含む塩化セシウム
平衡密度勾配遠心にかけて単離することがでbる。
このようにして分離したプラスミドの分子量並びに各制
限酵素により分解特性は、以下のようにして調べること
ができる。
制限酵素による切断部位数は、過剰の制限酵素存在下で
本発明のプラスミドを完全消化し、それらの消化物を0
.8%アガロースデル電気泳動にかけ、分離可能な断片
の数から決定することができる。
分子量は大腸菌のラムグ7アージのDNAをHindl
llで消化して得られる分子量既知の断片(分子量の大
きい順に15.0.6.1.4.2.2.8.1.5.
1.3.0.3.0.08メガダルトンの大きさを有す
る)の同一アガロ−スプル上での泳動距離で描かれる標
準線に基づき、消化プラスミドの各断片の分子量を算出
し、それらをそれぞれ加算して求める。
その結果、本発明の新規なプラスミドは分子量が約10
7がダルトンであり、更に各種制限酵素による分解特性
は次の通りである。本プラスミドはEcoRIで4箇所
、KpnIで3箇所、BamHIで1箇所、5aul及
びSa、IIで2箇所切11iされる。
本発明においては、このような特性を有する新規なプラ
スミドを「プラスミドpBY503Jと命名した。
本発明により提供されるプラスミドは、コリネ型細菌に
属する菌株から分離されたもので、同菌株及びその類縁
菌を宿主として自律増殖が可能である。従って当プフス
ミドから自律増殖の機能を損うことなく一部の領域を欠
失したり、別のDNAを挿入付加して加工した誘導体は
コリネ型細菌及びその類縁菌を宿主とするプラスミドベ
クターとして極めて有用である。
実−」1□省− 実施例 1 1)プラスミド BY−503の分離と (ブレビバク
テリウム・スタチオニス(B revibacteri
um  5tationis  I F O12144
)をグルコースを炭素源とする半合成培地(尿素2g、
(NH4)2SO47g、に2HPO4o、5g5KH
2PQ、  0.5g、Mg5O<・7H200,5g
、FeS 04 φ7 H2O6mg1Mn5 O−・
4−6 H2O6■、酵母エキス2.5g、カザミノ酸
5g、ビオチン200μg1チアミン塩酸塩200μg
、グルコース20g及び寒天20gを純水11に溶かし
てpH7,2に調整した寒天培地)に植菌し30℃で一
晩培養した後、菌体を集菌し、10 mg/ mj!の
濃度にリゾチームを含む緩衝液[25mM)リス(ヒド
ロキシメチル)アミノメタン、1101II EDTA
、50+oMグルコース]10mj!に懸濁し、37℃
で1時間反応させた。反応液にアルカリ・SDS液[0
,2N  NaOH,1%h/V)S D S 120
 mAを添加し、緩やかに混和して室温にて5分間静置
した。
次に、この反応液に酢酸カリウム溶液[5M酢酸カリウ
ム溶液 6011酢酸11.5mA、純水28.5a+
1の混合液]15dを添加し、充分混和してから氷水中
に5分間静置した。溶菌物全量を遠心管に移し、4℃で
10分間、15 *000 Xgの遠心分離にかけ、上
澄液を得た。
これに等量のフェノール−クロロホルム液(フェノール
−クロロホルム 1:1混和液)を加えて懸濁後、遠心
管に移し、室温下で5分間、15,000×8の遠心分
離にかけ、水層を回収した。水層に2倍量のエタノール
を加え、−20℃で1時間静置後、4℃で10分間、1
5.OOOXgの遠心分離にかけ、沈澱を回収した。
=7− 沈澱を減圧乾燥後、TE緩衝液[トリス10+nM、E
DTAlmM、HCjlにてpH=8に調製]2w!に
溶解した。溶解液に塩化セシウム溶液[5倍濃度のTE
vc衝液100m1に塩化セシウム170gを溶解させ
た液115−と10 aaB/ to1エチジウムブロ
マイド溶液1ta1を加えて、密度を1,392g/m
j+に合わせた。この溶液を12℃で42時間、116
.000Xgの遠心分離を行なった。
プラスミドpBY503は紫外線照射により遠心管内で
下方のバンドとして見い出される。このバンドを注射器
で遠心管の側面から抜きとることにより、プラスミドp
BY503を含む分画液を得た。
次いでこの分画液を等量のイソアミルアルコールで4回
処理してエチジウムブロマイドを抽出除去し、その後に
TE緩衝液に対して透析を行なった。このようにして得
られたプラスミドpBY503を含む透析液に3M酢酸
ナトリウム溶液を最終濃度30mMに添加した後、2倍
量のエタノール′を加え、−20℃に1時間静置した。
この溶液を15,000Xgの遠心分離にかけてDNA
を沈降させ、プラスミドpBY503を得た。
(2)制限酵素による分 及び分子 測定前記で調製し
たプラスミドpBY503をTEam液に溶解し、過剰
量の制限酵素(EcoRI。
BamHL Kpni及びSal■は宝酒造社製;5a
uIはベーリンジャー・マンハイム山之内社製)を各々
の制限酵素適正条件にて反応させた。
消化した試料は常法に従い、エチジウムブロマイド1μ
g7mlを含有する0、8%アガロースデル電気泳動に
かけた。泳動後、紫外線ランプをゲル平板上に照射する
ことで現われるDNA断片の数を測定した。また、各断
片の泳動距離から各々の分子量を算出し、それらを加算
してプラスミドpBY503の分子量を求めた。
なお、分子量は同一アガロ−スプル上で同時に泳動した
うにグ7ア一ジDNAのHindll消化で生成する分
子量既知の各断片の泳動距離で描かれる標準線に基づい
て算出した。結果を第2表に示す。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、分子量が約10メガダルトンであり、制限酵素切断
    部位数がEcoRI:4、BamHI:1、SauI:
    2、KpnI:3、SalI:2であることを特徴とす
    る環状プラスミドpBY503。 2、ブレビバクテリウム・スタチオニス(Brevib
    acteriumstationisIFO12144
    )に由来する特許請求の範囲第1項記載のプラスミドp
    BY503。
JP62252379A 1987-10-08 1987-10-08 プラスミドpBY503 Expired - Fee Related JP2634606B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP62252379A JP2634606B2 (ja) 1987-10-08 1987-10-08 プラスミドpBY503

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP62252379A JP2634606B2 (ja) 1987-10-08 1987-10-08 プラスミドpBY503

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0195785A true JPH0195785A (ja) 1989-04-13
JP2634606B2 JP2634606B2 (ja) 1997-07-30

Family

ID=17236492

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62252379A Expired - Fee Related JP2634606B2 (ja) 1987-10-08 1987-10-08 プラスミドpBY503

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2634606B2 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7365807B2 (en) 2003-10-22 2008-04-29 Funai Electric Co., Ltd. LCD television, flat panel television, and television cabinet
US11239608B2 (en) 2020-02-06 2022-02-01 Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. Information processing device

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5867699A (ja) * 1981-10-16 1983-04-22 Ajinomoto Co Inc プラスミド
JPS60120992A (ja) * 1983-12-05 1985-06-28 Ajinomoto Co Inc プラスミドpBL100
JPS60248182A (ja) * 1984-05-23 1985-12-07 Mitsubishi Petrochem Co Ltd プラスミド↓pBY501

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5867699A (ja) * 1981-10-16 1983-04-22 Ajinomoto Co Inc プラスミド
JPS60120992A (ja) * 1983-12-05 1985-06-28 Ajinomoto Co Inc プラスミドpBL100
JPS60248182A (ja) * 1984-05-23 1985-12-07 Mitsubishi Petrochem Co Ltd プラスミド↓pBY501

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7365807B2 (en) 2003-10-22 2008-04-29 Funai Electric Co., Ltd. LCD television, flat panel television, and television cabinet
US11239608B2 (en) 2020-02-06 2022-02-01 Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. Information processing device

Also Published As

Publication number Publication date
JP2634606B2 (ja) 1997-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4510245A (en) Adenovirus promoter system
JP2973446B2 (ja) 新規プラスミドベクター
JPH0838176A (ja) 改良組換dna分子
JPS58110600A (ja) ヒトβ型インタ−フエロン遺伝子を含む組みかえ体プラスミド
KR20160102024A (ko) 아데노바이러스 및 상응하는 플라스미드의 제조 방법
US4642333A (en) Immunologically reactive non-glycosylated amino acid chains of glycoprotein B of herpes virus types 1 and 2
EP0158940B1 (en) Transducible composite plasmid
Kurihara et al. Cloning of the nusA gene of Escherichia coli
Ogura et al. Identification and characterization of gyrB mutants of Escherichia coli that are defective in partitioning of mini-F plasmids
JPH0716434B2 (ja) 細菌からのヒトインターロイキン‐4の抽出
JP2792813B2 (ja) 新規な白血球インターフェロン
JP2634606B2 (ja) プラスミドpBY503
Eccles et al. Tetracycline resistance genes from Bacillus plasmid pAB124 confer decreased accumulation of the antibiotic in Bacillus subtilis but not in Escherichia coli
JPS59203495A (ja) 外来遺伝子の新規な発現方法
JPH06311884A (ja) プラスミド及びそれで形質転換されたエ シェリチア・コリ
US5705386A (en) Circular plasmids
JP2679711B2 (ja) ボックスウイルスのa型封入体(ati)遺伝子5′上流領域の改良及び当該遺伝子3′下流領域による外来遺伝子発現ベクターの改良
CN111378689A (zh) 一种用于对虾的假型昆虫杆状病毒基因转移系统、病毒及构建方法和应用
RU2081171C1 (ru) Рекомбинантная плазмидная днк pgdn, способ получения рекомбинантной плазмидной днк pgdn и штамм бактерий escherichia coli, содержащий рекомбинантную плазмидную днк pgdn, используемый для получения гибридного белка, состоящего из 579 а.к., обладающего антигенными свойствами вируса т-клеточного лейкоза человека первого типа
JPH0317475B2 (ja)
JPS6336787A (ja) プラスミド↓pBY−502
JPH03147792A (ja) 新規dna及び該dnaを含有するプラスミド
JPS60186291A (ja) コスミドクロ−ニングベクタ−
JPS6235757B2 (ja)
JP2946566B2 (ja) ハイブリッドプロモーター

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Cancellation because of no payment of annual fees