JPS60248182A - プラスミド↓ｐＢＹ５０１ - Google Patents
プラスミド↓ｐＢＹ５０１Info
- Publication number
- JPS60248182A JPS60248182A JP59102746A JP10274684A JPS60248182A JP S60248182 A JPS60248182 A JP S60248182A JP 59102746 A JP59102746 A JP 59102746A JP 10274684 A JP10274684 A JP 10274684A JP S60248182 A JPS60248182 A JP S60248182A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmid
- molecular weight
- brevibacterium
- pby501
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
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- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
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- General Engineering & Computer Science (AREA)
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- Organic Chemistry (AREA)
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- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は新規なプラスミドに関し、さらに詳しくは、ブ
レビバクテリウム・リネンス（Ｂｒｇｖｓ−ｂａｃｔｓ
ｒｉｕｍ、 １ｉｎｅｎｓ）に由来する新規な梁状プラ
スミドに関する。
レビバクテリウム・リネンス（Ｂｒｇｖｓ−ｂａｃｔｓ
ｒｉｕｍ、 １ｉｎｅｎｓ）に由来する新規な梁状プラ
スミドに関する。
従来技術
ブレビバクテリウム属に属する菌株は、各種アミノ酸生
産菌として工業的に有用な微生物であシ、その宿主−ベ
クター系の開発は以前から期待されていた。しかし、Ｄ
ＮＡ組み換え技術による工業用微生物の育種、改良がエ
シェリヒア・コリＣＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、 ｃｏｌ
ｉ）等の菌株において試みられているが、ブレビバクテ
リウム属に属する菌株については、これらの微生物を宿
主とするに適したベクターの開発は遅れておＦ）、ＤＮ
Ａ組み換えによるブレビバクテリウム属に属する。菌株
から単離されたプラスミドは、これまでわずかにブレビ
バクテリウム・ラクト７アーメンタムＣＡＴＣＣ１３８
６９）から２種見い出されているに過ぎない（特開昭５
４−４１３９２号公報、特開昭５８−２１６１９９号公
報）。そのため！レビバクテリウム属に鳩する菌株から
工業的に利用しうる微生物を育種、改良するための新し
いプラスミド・ベクターの開発が強く要望されている。
産菌として工業的に有用な微生物であシ、その宿主−ベ
クター系の開発は以前から期待されていた。しかし、Ｄ
ＮＡ組み換え技術による工業用微生物の育種、改良がエ
シェリヒア・コリＣＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、 ｃｏｌ
ｉ）等の菌株において試みられているが、ブレビバクテ
リウム属に属する菌株については、これらの微生物を宿
主とするに適したベクターの開発は遅れておＦ）、ＤＮ
Ａ組み換えによるブレビバクテリウム属に属する。菌株
から単離されたプラスミドは、これまでわずかにブレビ
バクテリウム・ラクト７アーメンタムＣＡＴＣＣ１３８
６９）から２種見い出されているに過ぎない（特開昭５
４−４１３９２号公報、特開昭５８−２１６１９９号公
報）。そのため！レビバクテリウム属に鳩する菌株から
工業的に利用しうる微生物を育種、改良するための新し
いプラスミド・ベクターの開発が強く要望されている。
本発明の構成
本発明者らはブレビパフチリウム属に属する菌株を用い
て工業的に有用な宿主−ベクター系を開発すべく鋭意研
究を行なった結果、今回、ブレビバクテリウム・リネン
スの成る種の菌株から工業的に有用な宿主−ベクター系
におけるベクターとして利用可能な新規な環状プラスミ
ドを見い出し、本発明を完成した。
て工業的に有用な宿主−ベクター系を開発すべく鋭意研
究を行なった結果、今回、ブレビバクテリウム・リネン
スの成る種の菌株から工業的に有用な宿主−ベクター系
におけるベクターとして利用可能な新規な環状プラスミ
ドを見い出し、本発明を完成した。
しかして、本発明によれば、ブレビバクテリウム・リネ
ンス（例えば、ｌｉ’０１２１７０、ＡＴＣＣ９１７４
）に由来する、分子量が７．６ Ｋ ｂ ｐ （キロペ
ースペア）で且つ下記の代表的な制限酵素に対して下記
第１表に記数の分解特性を示すことを特徴とする新規な
環状プラスミドが提供される。
ンス（例えば、ｌｉ’０１２１７０、ＡＴＣＣ９１７４
）に由来する、分子量が７．６ Ｋ ｂ ｐ （キロペ
ースペア）で且つ下記の代表的な制限酵素に対して下記
第１表に記数の分解特性を示すことを特徴とする新規な
環状プラスミドが提供される。
以下、このシラスミドを「プラスミドｐ Ｂ Ｙ ５０
１４と称する。
１４と称する。
第１表
Ｐｓｔ １ｏ −
Ｘｂａ Ｉ Ｏ−
ＥｃｏＲＩ １ ７．６
Ｂａ、ｍＨＩ １ ７．６
Ｂｉｎｄｍ １ ７．６
ＢＱＩＭ １ ７．６
ＸｈＯＩ ２４．・２．３．４
Ｈａｓ Ｉ ３ ４．２．１．８．１．６以下、本発明
の環状プラスミドｐ Ｂ Ｙ ５０１についてさらに詳
細に説明する。
の環状プラスミドｐ Ｂ Ｙ ５０１についてさらに詳
細に説明する。
本発明のプラスミドはブレビバクテリウム・リネンス（
例えばＩＦ０１２１’ｌ０１ＡＴＣＣ９１７４）から単
連される新規な環状プラスミドである。上記菌株からの
該プラスミドの分峙、精製はそれ自体既知の手段を用い
て行なうことができ、好適にはアガロースゲル電気泳動
法が用いられる。
例えばＩＦ０１２１’ｌ０１ＡＴＣＣ９１７４）から単
連される新規な環状プラスミドである。上記菌株からの
該プラスミドの分峙、精製はそれ自体既知の手段を用い
て行なうことができ、好適にはアガロースゲル電気泳動
法が用いられる。
例えば、ブレビバクテリウム・リネンスＩＦＯ１２１７
０（ＡＴ（、’Ｃ’９１？４）菌株を保存斜面培地より
液体完全培地（ポテト浸出液１６（１、肉エキス４ｇ、
グリセロール１５１！、ｙｔＦＩＪペア’）ン１０ｇ及
び蒸留水１１の組成の培地１ｐＨ７，ｏ）に接種し、振
盪培養後集菌する。集めた菌体をＥＤＴＡＣエチレンソ
アミン四酢酸）全酢酸ｐＨ７，０の緩衝液で充分洗浄後
、細胞壁溶解酵素（例えば、リゾチーム又はＮ−アセチ
ル・ムラミダーゼなど）ｆ用いてプロトプラスト化し、
５ＤＳ（ドデシル１庫酸ソーダ）を加えて溶菌し、該溶
菌液に４Ｖ終磯度ＩＭのＮａＣ１を加えたのち、−夜低
温（約４℃）で放置する。該処理物を遠心分離（３０，
０ＯＯＸ、９，３０分、４０°Ｃ）後、上清液に４倍ｕ
ｅｔｋの冷エタノールと確倍容量の２．０Ｍ酢淑ソーダ
を加えて核酸を洗直させる。沈澱を背信ＣＴｒｉｓ ５
０ｍＭ ；ＮａＣ，’ｌ ５０ｍＭ、ＥＤＴＡ５ｆ′ｒ
ＬＭを含有する水溶液）緩衝液（ｐＨ７，５’）でｋｍ
し、りがヌクレアーゼで処理体、アガロ−スケ゛ル′砒
気泳動にかけＷ ｄＪ鼓の差を利用してプラスミドを染
色体ＤＮＡから分離する。
０（ＡＴ（、’Ｃ’９１？４）菌株を保存斜面培地より
液体完全培地（ポテト浸出液１６（１、肉エキス４ｇ、
グリセロール１５１！、ｙｔＦＩＪペア’）ン１０ｇ及
び蒸留水１１の組成の培地１ｐＨ７，ｏ）に接種し、振
盪培養後集菌する。集めた菌体をＥＤＴＡＣエチレンソ
アミン四酢酸）全酢酸ｐＨ７，０の緩衝液で充分洗浄後
、細胞壁溶解酵素（例えば、リゾチーム又はＮ−アセチ
ル・ムラミダーゼなど）ｆ用いてプロトプラスト化し、
５ＤＳ（ドデシル１庫酸ソーダ）を加えて溶菌し、該溶
菌液に４Ｖ終磯度ＩＭのＮａＣ１を加えたのち、−夜低
温（約４℃）で放置する。該処理物を遠心分離（３０，
０ＯＯＸ、９，３０分、４０°Ｃ）後、上清液に４倍ｕ
ｅｔｋの冷エタノールと確倍容量の２．０Ｍ酢淑ソーダ
を加えて核酸を洗直させる。沈澱を背信ＣＴｒｉｓ ５
０ｍＭ ；ＮａＣ，’ｌ ５０ｍＭ、ＥＤＴＡ５ｆ′ｒ
ＬＭを含有する水溶液）緩衝液（ｐＨ７，５’）でｋｍ
し、りがヌクレアーゼで処理体、アガロ−スケ゛ル′砒
気泳動にかけＷ ｄＪ鼓の差を利用してプラスミドを染
色体ＤＮＡから分離する。
このようにして分能したプラスミドＤＮＡの分子量なら
びに各種制限屏素による分解特性を調べるにあたっては
、λＤＮＡを制限酵素（Ｂｉｎｄｕ）で分解して得られ
る分子量既知のＤＮＡ断片をインターナル・マーカーと
して、アガロースゲル電気泳動による移動度の比較から
める。
びに各種制限屏素による分解特性を調べるにあたっては
、λＤＮＡを制限酵素（Ｂｉｎｄｕ）で分解して得られ
る分子量既知のＤＮＡ断片をインターナル・マーカーと
して、アガロースゲル電気泳動による移動度の比較から
める。
その結果、本プラスミドの分子量は７．６ Ｋ ｂ ｐ
であり、さらに各＆ｉ制限酵素による分Ｗｌ特性は前記
弔１衣に産すとおりである。すなわち、本プラスミドは
ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、Ｈｉｎｄｍ及びＢａｌ■で１
箇所切断され、Ｘｈ、ｏｌで２筒所切断され、そして８
０ｇｍでは３箇所切断される。さらに、本プラスミドは
Ｓａ、ｌＩＸ ＰｖｕＭ及び５ａｃｌで４面断以上切断
され、Ａｖｌで６部所以上切断きれる。
であり、さらに各＆ｉ制限酵素による分Ｗｌ特性は前記
弔１衣に産すとおりである。すなわち、本プラスミドは
ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、Ｈｉｎｄｍ及びＢａｌ■で１
箇所切断され、Ｘｈ、ｏｌで２筒所切断され、そして８
０ｇｍでは３箇所切断される。さらに、本プラスミドは
Ｓａ、ｌＩＸ ＰｖｕＭ及び５ａｃｌで４面断以上切断
され、Ａｖｌで６部所以上切断きれる。
なお、Ｘｈｏｌによる２つの分解断片の分子ｌ］Ｆはそ
れぞれ４．２ Ｋ ｂ ｐ及び３．４Ｋｌ）Ｉ）Ｔあり
、ＨａｇＴｉによる３つの分解断片の分子ｊｆｃはそれ
ぞれ４．２Ｋｂｐ、１．８Ｋｂｐ及び１． ｓ Ｋ ｂ
ｐである。
れぞれ４．２ Ｋ ｂ ｐ及び３．４Ｋｌ）Ｉ）Ｔあり
、ＨａｇＴｉによる３つの分解断片の分子ｊｆｃはそれ
ぞれ４．２Ｋｂｐ、１．８Ｋｂｐ及び１． ｓ Ｋ ｂ
ｐである。
本発明によシ提供されるプラスミドは近伝子組み捩え用
ベクターとして、例えば、ホルモン等の生理活性物質の
生産を目的とした外来ハ（伝子のクローニング、および
生体内物質代謝における律速酵素対応遺伝子のクローニ
ングによる該酵素の大％７発現等において有用であると
考えられる。
ベクターとして、例えば、ホルモン等の生理活性物質の
生産を目的とした外来ハ（伝子のクローニング、および
生体内物質代謝における律速酵素対応遺伝子のクローニ
ングによる該酵素の大％７発現等において有用であると
考えられる。
本発明の好１１態様
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。
実施例１
（１） ７″ラスミドｐＢｙｓｏｔの分離と和製Ｐ培地
（ポテト浸出ｆｉ１６０，９．肉エキス４ｇ、グリセロ
ール１５．９．ｄＦリペプトンｌａｙ、Ｈ留水１ ｌ
ｌ ｐＨ７゜ｏ）ｉｏｏｍｌ−１，５０Ｇ−容三角フラ
スコに分注し、１２０℃で１５分間滅菌後、ブレビバク
テリウム・リネンスＩＦＯ１２１７゜（ＡＴｃｃ９１７
ａ）の保存寒天培地から１白金耳耐植菌する。約３０℃
にて一夜ゴ辰盪培養後、同様の培地１／に２０−接種し
、同じく約３０’Ｃにて２４時間振盪培養した。遠心分
離に上り菌体を回収し、緩衝液（８％ 烏ｃｒｏｓｅ、
０．５ ％ ＴｒｉｔｏｎＡ’−ｔｏｏ、５０ ｎｔＭ
ＥＤＴＡ、１０ｍＭＴｒｉｓ−１１Ｃ１＋ ｐＨ８，
０） Ｋて１度洗浄後、菌体を同じ緩衝液のＩＱｍｌＶ
Ｃ＠濁させたのち、リゾチーム（シグマ社＃）Ｌｌｌ−
ＡＮ−アセチルムラミダーゼ（生化学工業（株）製）を
敢終酢素娘度５ｍ２７−となるように加え、３７℃で３
０分１６１反応させた。その後、該反応液に２０％ＳＤ
Ｓ水溶液を最終濃度４チとなるよう添加した後、約７０
°Ｃにて２０分間加熱処理を行なった。
（ポテト浸出ｆｉ１６０，９．肉エキス４ｇ、グリセロ
ール１５．９．ｄＦリペプトンｌａｙ、Ｈ留水１ ｌ
ｌ ｐＨ７゜ｏ）ｉｏｏｍｌ−１，５０Ｇ−容三角フラ
スコに分注し、１２０℃で１５分間滅菌後、ブレビバク
テリウム・リネンスＩＦＯ１２１７゜（ＡＴｃｃ９１７
ａ）の保存寒天培地から１白金耳耐植菌する。約３０℃
にて一夜ゴ辰盪培養後、同様の培地１／に２０−接種し
、同じく約３０’Ｃにて２４時間振盪培養した。遠心分
離に上り菌体を回収し、緩衝液（８％ 烏ｃｒｏｓｅ、
０．５ ％ ＴｒｉｔｏｎＡ’−ｔｏｏ、５０ ｎｔＭ
ＥＤＴＡ、１０ｍＭＴｒｉｓ−１１Ｃ１＋ ｐＨ８，
０） Ｋて１度洗浄後、菌体を同じ緩衝液のＩＱｍｌＶ
Ｃ＠濁させたのち、リゾチーム（シグマ社＃）Ｌｌｌ−
ＡＮ−アセチルムラミダーゼ（生化学工業（株）製）を
敢終酢素娘度５ｍ２７−となるように加え、３７℃で３
０分１６１反応させた。その後、該反応液に２０％ＳＤ
Ｓ水溶液を最終濃度４チとなるよう添加した後、約７０
°Ｃにて２０分間加熱処理を行なった。
このようにして得られた溶菌液に、最終ｄ度ＩＭとなる
ようにＮａＣＬを加え、−夜低温（約４℃）で放置ｍ、
１９．００ Ｏｒ ｐｍで４０分間遠心分離した。上清
を捧倍容飯の水飽和フェノール及びＡ倍容量のクロロホ
ルム−イソアミルアルコール混液（２４１１）にて各１
回洗浄したのち、４倍容敞の冷エタノールとイ倍容址の
２Ｍ酢酸ソーダを加え、約−７０℃にて１５分＋ａ＋放
ｔｔ＝ｉ： （、、ｔ ２．００Ｏｒｐｍで３０分間遠
心分阻した。沈松をＴＨＥ緩価液１Ｎに浴悉したのち、
りがヌクレアーゼ（シグマ社製〕を最終濃度２０１号／
ｍｌとなるよう添加し、３７℃で３０分間処理１′る。
ようにＮａＣＬを加え、−夜低温（約４℃）で放置ｍ、
１９．００ Ｏｒ ｐｍで４０分間遠心分離した。上清
を捧倍容飯の水飽和フェノール及びＡ倍容量のクロロホ
ルム−イソアミルアルコール混液（２４１１）にて各１
回洗浄したのち、４倍容敞の冷エタノールとイ倍容址の
２Ｍ酢酸ソーダを加え、約−７０℃にて１５分＋ａ＋放
ｔｔ＝ｉ： （、、ｔ ２．００Ｏｒｐｍで３０分間遠
心分阻した。沈松をＴＨＥ緩価液１Ｎに浴悉したのち、
りがヌクレアーゼ（シグマ社製〕を最終濃度２０１号／
ｍｌとなるよう添加し、３７℃で３０分間処理１′る。
アガロースゲル電気泳動（ｄｌｌｌｌ性：０．６〜２０
％アガロースｒルを用いて、６０Ｖ、４〜５時間泳動さ
せた）にかけ、プラスミドＤＮＡを染色体ＤＮＡから分
離し、エチジウム・ブロマイドで染色した後、’ ２５
４ｎ ｍ Ｕ Ｖ光で検出した。アガロースグルからプ
ラスミドｐＢＹ−５０１のＤＮＡ区分を切り出し、約２
１の緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、４０ ｍＭ酢ｂり−
ダ、８ｒｎＭ ＥＤＴＡ ｌｐＨ８，３）を加え、同杼
の電気泳動装置を用い８０Ｖで４時間泳動を行ない、ア
ガロ−スケ゛ルから完全にプラスミドｐＢＹ−５０１を
取り出した。遠心分離（４，００Ｏｒｐｍ、１０分間、
室温）によ）アガロースから分離して得た上清液に、４
倍容量の冷エタノールと尿倍容量の２Ｍ酢酸ソーダを加
えて一７０℃にて１５分間放置したのち、１９．００Ｏ
ｒｐｍで４０分間遠心分離した。沈澱をＴＨＥ緩衝液に
溶解させ、プラスミドｐＢＹ５０１の精製物を得た。
％アガロースｒルを用いて、６０Ｖ、４〜５時間泳動さ
せた）にかけ、プラスミドＤＮＡを染色体ＤＮＡから分
離し、エチジウム・ブロマイドで染色した後、’ ２５
４ｎ ｍ Ｕ Ｖ光で検出した。アガロースグルからプ
ラスミドｐＢＹ−５０１のＤＮＡ区分を切り出し、約２
１の緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、４０ ｍＭ酢ｂり−
ダ、８ｒｎＭ ＥＤＴＡ ｌｐＨ８，３）を加え、同杼
の電気泳動装置を用い８０Ｖで４時間泳動を行ない、ア
ガロ−スケ゛ルから完全にプラスミドｐＢＹ−５０１を
取り出した。遠心分離（４，００Ｏｒｐｍ、１０分間、
室温）によ）アガロースから分離して得た上清液に、４
倍容量の冷エタノールと尿倍容量の２Ｍ酢酸ソーダを加
えて一７０℃にて１５分間放置したのち、１９．００Ｏ
ｒｐｍで４０分間遠心分離した。沈澱をＴＨＥ緩衝液に
溶解させ、プラスミドｐＢＹ５０１の精製物を得た。
精製したプラスミドｐＢＹｓＯ１について、以下の如く
して分子量及び各種制限酵素による分解特性を調べた。
して分子量及び各種制限酵素による分解特性を調べた。
（２） 分子量測定
上記（１）に記載の方法で分離、精製したプラスミドｐ
ＢＹ５０１の分子量をアガロースゲル電気泳動分析によ
シ測定した結果、７．６Ｋｂｐであることが判明した。
ＢＹ５０１の分子量をアガロースゲル電気泳動分析によ
シ測定した結果、７．６Ｋｂｐであることが判明した。
分子量測定のインターナル・マーカーには、λＤＮＡを
制限酵素Ｈｉｎｄ ｍで分解して得られた分子量既知の
ＤＮＡ断片を用いた。
制限酵素Ｈｉｎｄ ｍで分解して得られた分子量既知の
ＤＮＡ断片を用いた。
使用したアガロースゲル電気泳動およびＤＮＡの検出条
件は下記の通りでちる。
件は下記の通りでちる。
電気泳動装置；マリツル産業（株）フラットアガロース
グル電気泳動装置（標準型）を使用した。
グル電気泳動装置（標準型）を使用した。
電気泳動：緩衝液（４０ｒｎＭ ’ｌ’ｒｉｓ、４０
ｍＭ酢酸ソーダ、８ ｍＭ ＥＤＴＡ ｇ ｐＨ＆３
）中で、６０Ｖ１４〜５時間行なう。泳動後、グルを取
り出し、エチゾウム・ブロマイドで染色した後、２５４
ｎｍＵＴｌ光を照射してＤＮＡの移動位置を検出した
。
ｍＭ酢酸ソーダ、８ ｍＭ ＥＤＴＡ ｇ ｐＨ＆３
）中で、６０Ｖ１４〜５時間行なう。泳動後、グルを取
り出し、エチゾウム・ブロマイドで染色した後、２５４
ｎｍＵＴｌ光を照射してＤＮＡの移動位置を検出した
。
（３）制限酵素による分解
上記（１）に記載の方法で分離、精製したプラスオドｐ
ＢＹ５０１を下記第２表に示す各制限酵素とともに、常
法（例えば「Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ ＣｌｏｎｉｎｇＪ、
Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ （１９８２）、ｐ、 ］ ００〜ｐ、１０６
に記載の方法）に従い反応させた。反応後６５°Ｃで５
分間加熱して反応を停止させ、前記（２）におけると同
様にしてアガロースゲル電気泳動法によりＤＮＡ断片の
分子量を測定した。インターナル・マーカーとしてばλ
ＤＮＡを制限酵素Ｂｉｎｄｍで分解したＤＮＡ断片を使
用し／こ。グラスミドｐＢＹ５０１に制限酵素で分解し
て得られた断片の分子量を第２表に示す。さらにプラス
ミドＬｐＢＹ−５０１の制限酵素切断地図を添付の第１
図に示す。
ＢＹ５０１を下記第２表に示す各制限酵素とともに、常
法（例えば「Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ ＣｌｏｎｉｎｇＪ、
Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ （１９８２）、ｐ、 ］ ００〜ｐ、１０６
に記載の方法）に従い反応させた。反応後６５°Ｃで５
分間加熱して反応を停止させ、前記（２）におけると同
様にしてアガロースゲル電気泳動法によりＤＮＡ断片の
分子量を測定した。インターナル・マーカーとしてばλ
ＤＮＡを制限酵素Ｂｉｎｄｍで分解したＤＮＡ断片を使
用し／こ。グラスミドｐＢＹ５０１に制限酵素で分解し
て得られた断片の分子量を第２表に示す。さらにプラス
ミドＬｐＢＹ−５０１の制限酵素切断地図を添付の第１
図に示す。
第２表
第１図は本発明のプラスミドｐＢＹ５０１の制限酵素切
断地図である。 出願人 三菱油化株式会社 第１図
断地図である。 出願人 三菱油化株式会社 第１図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ブレビバクテリウム・リネンス（Ｂｒａｖｉｂａｃｔｅ
−ｒｉｓｙｎ １ｉｎｅｎｓ）に由来する、分子量が７
．６Ｋｂｐで且つ下記の制限酵素に対して下記の分解特
性、ｐａｔ ｔ ｏ − Ｘｂａ Ｉ Ｇ − Ｅｃｏ Ｒ１１７，６ Ｂａｒｒｂ Ｈｌ １ ７．６ ＢｉｎｄＭ １ ７．６ ＢＱＬ １ １ ７．６ Ｘｈｏ Ｉ ２ ４．２．３．４ Ｈａｇ ｌ ３ ４．２．１．８、Ｌ６を示すことを特
徴とする譲状プラスミド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59102746A JPS60248182A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | プラスミド↓ｐＢＹ５０１ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59102746A JPS60248182A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | プラスミド↓ｐＢＹ５０１ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60248182A true JPS60248182A (ja) | 1985-12-07 |
Family
ID=14335788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59102746A Pending JPS60248182A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | プラスミド↓ｐＢＹ５０１ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60248182A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0195785A (ja) * | 1987-10-08 | 1989-04-13 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | プラスミドｐＢＹ５０３ |
-
1984
- 1984-05-23 JP JP59102746A patent/JPS60248182A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0195785A (ja) * | 1987-10-08 | 1989-04-13 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | プラスミドｐＢＹ５０３ |
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