JPH0198445A - 経口摂食組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、糖尿病、高脂血症、肥満等の予防のための健
康食品等として用いる有用な経口摂食物に関するもので
ある。

〔従来の技術〕

今日、現代の生活様式がもたらしているとも言える疾病
に糖尿病、高脂血症、肥満等が挙げられ、これらの治療
あるいは予防は重要かつ緊急な！ｌＩ！Ｊｌとなってい
る。

これらの疾患に対する治療法として、薬物投与や食事療
法が行われているが、その方法は一般的ではなく、実施
上問題も多い。

天然物由来の生理活性ペプチドのうち、食品あるいは、
食品原料から得られるものは、低毒性で安全性の高い薬
理活性物質となることが期待でき、その実用化が検討さ
れている。

しかして、生理活性ペプチド類は、一般に親水性で比較
的高分子量であるため、消化管からの吸収が悪く、消化
管中で分解酵素の作用を受け、その活性を失うことがあ
るため、投与経路は多くの場合、注射による静脈内投与
に限られている。

〔発明の解決課題〕

本発明者らは、予てより、糖尿病、高脂血症。

肥満等に対して日常的な病状の改善（例えば、薬理作用
を有する機能性食品の摂取等）とそれに基づく発症予防
、あるいは発症傾向の緩和の重要性に着目し、かかる目
的に適用可能な低毒性でしかも経口投与（摂取）により
有効性を発揮する活性物質について探索を進めて来たが
、前述の魚肉由来のペプチドのすぐれた特性、特にその
低毒性からして、これを上記の目的に使用することの可
能性について検討を行ったところ、意外なことに該物質
がペプチドでありながら経口投与によっても作用を示し
、更にまた卵黄と併用投与することにより、−層その作
用が高くなり、その低毒性、高い安全性と相俟って、こ
こに、糖尿病、高脂血症。

肥満の予防、及びその傾向緩和のための健康食品等とし
て有用な経口摂食物の提供が可能となることを見いだし
、本発明を完成するに至った。

〔発明の構成〕

即ち、本発明は、魚肉を蛋白分解酵素により分解して得
られる、分子ｆｆ１５００〜５，０００の塩基性ペプチ
ドを含有することを特徴とする経口摂食組成物に関する
ものである。

又、本発明は、上記組成物において更に、卵黄を含有す
ることを特徴とする経口摂食組成物に関するものである
。

魚肉を蛋白分解酵素により分解して得られる上記のペプ
チドの調製は、Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　　ｏｆ　　ｔｈｅＪ
ａｐａｎｅｓｅ　　５ｏｃｉｅｔｙ　　ｏｆ　　５ｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ　　Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ５２　　（１１
）、　　１９８１−１９８４　　（１９８６）等の方法
に準じて例えば以下のようにして行われる。

イワシやタチウォ等の魚類の筋肉を、水でホモジナイズ
した後、ＰＨを６．０に調整し、蛋白質分解酵素を作用
させ加水分解を行う０分解反応液を煮沸処理して酵素を
失活させた後、冷却濾過を行う。濾液に活性炭を加え、
再度濾過し、清澄な粗ペプチド溶液を得る。このペプチ
ド溶液を減圧濃縮した後、メタノールを加え終夜冷所放
置後生じた沈澱物を得る。この白色沈澱を水に再溶Ｍ後
、陽イオン交換樹脂カラム及びゲル口過を用いて精製し
、分子量が５００〜５，０００のリジン含量が高い塩基
性ペプチドを得る。

以上の如き本発明の魚肉由来の塩基性ペプチド類は、通
常粉末の形で単離・取得した上、これをそのまま、もし
くはより好適には適当な無毒性の経口投与（ｔＮ取）用
担体と共に適宜の形状、形態からなる組成物として経口
摂食用に供する。

組成分の例としては、塩基性ペプチドと卵黄を薬学的に
許容される担体（賦形剤、滑沢剤、結合剤、着色剤、矯
味剤、賦香剤等）と共に、経口投与用の％！薬調製剤形
態、例えば錠剤（糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、
咀噌錠等）、カプセル剤、トローチ剤、粉末剤、細粒剤
、顆粒剤等としたものが挙げられる。

また、固形あるいは液状の食品ないしは嗜好品、例えば
菓子類、粉末茶、アイスクリーム、ヨーグルト、アルコ
ール飲料、スボー゛ン飲料等の形態としてもよい。

経口摂食物中に於けるＡＣＥ阻害ペプチドの含有量は剤
型により適宜選択が可能であるが、一般には１〜１００
重量％の範囲である。

以上の如き構成からなる本発明の経口摂食物は、後に試
験例で示す通り、その有効成分たる活性ペプチドが、経
口投与によってもかなりの前記疾病に対する改善、予防
作用を示し、しかも著しく低毒性であることから、それ
を糖尿病、高脂血症。

肥満の予防及びその傾向緩和を目的として、継続的に経
口投与（摂取）することが可能であり、健康食品等とし
て用いてその有効性が期待できる。

かかる目的に本発明の経口摂食物を用いる場合、その摂
取量は、該ペプチドの重量に換算して成人男子１日当た
り１〜５００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲が適当である。

本発明者らは、更に該活性ペプチドと卵黄を併用して経
口摂食すると、−ｉその効果を向上させる事を見い出し
た。

即ち、卵黄は市販の鶏あるいはウズラやダチョウ等の卵
の黄身を用いればよい。又卵黄は液状でも粉末化したも
のでも使用できる。

この場合、本発明の経口摂食組成物中の、上記ペプチド
と卵黄との含有比率は１　：　０．３〜１：１０の範囲
が好ましい。

本発明組成物の例としては、既に前述したものと同様で
あり、即ち活性成分を薬学的に許容される担体と共に経
口投与用の製薬製剤の形態（例えば錠剤等）にしたり、
また、食品ないしは嗜好品の形態にしてもよい。

本発明経口摂食組成物中に於ける活性ペプチドと卵黄と
の含有量は剤型により適宜選択が可能であるが、一般に
は合計して５〜１００重量％の範囲である。

又、この場合、その摂取量は該ペプチドの重量に換算し
て成人男子１日当たり１ｍｇ〜５００ｍｇ／Ｋｇ体重の
範囲、卵黄は５　ｍ　ｇ〜２ｇ／Ｋｇ体重の範囲が好ま
しい。

以下に、本発明経口摂食物の活性成分たる前記魚肉由来
の塩基性ペプチドの製造例とそれらペプチド単独及び該
ペプチドと卵黄との併用投与がを効であることを示す動
物実験の結果を挙げる。

製造例１　イワシ由来の塩基性ペプチドの！Ｉｌ製イワ
シ５ａｒｄｉｎｏｐｓ　ｍｅｌａｎｏｓｔｉｃｔａ普通
肉５００ｇに脱イオン水５１を加え、ホモジナイズした
後、ＰＨを６．０に調整し、タンパク質分解酵素（ナガ
セ生化学工業■製デナチームＡＰ）１０ｇを添加し、４
０℃で５時間攪拌しながら加水分解を行った。分解反応
液を１５分間煮沸処理して酵素を失活させた後、冷却、
吸引濾過した。濾液に粉末活性炭（成田薬品ｆｉｌｌ製
カルポラフィン）５０ｇを加え撹拌後、再度吸引濾過し
て清澄濾液を得た。上記酵素分解清澄濾液をＩＩｌまで
減圧濃縮したのち、メタノール１０１を加え、冷所に一
夜放置し、生じた沈澱物を吸引濾過した。白色沈澱物を
脱イオン水３００ｍｊ＋に溶解し、強酸性陽イオン交換
樹脂カラム（Ｄｏｗｅｘ　　５０　ＷＸ　４　　（Ｈ”
　）　、　　５０〜１００ｍｅｓｈ、　　φ４．５Ｘ２
０ｃｍ）に加えた。カラムを脱イオン水で充分洗浄した
後、２Ｎ−ＮＨ，ＯＨ５００ｍｊ＋で溶出した。減圧濃
縮によりアンモニアを除去した後、それをアミコンの限
外濾過膜ＹＣ−０５（分画分子量５００）及びＹＭ−０
５（分画分子量５，０００）を用いて分画分子１５００
〜５，０００のペプチド溶液を得、更に凍結乾燥してペ
プチド粉末２１．５　ｇを得た。

製造例２　タチウォ由来のＡＣＥ阻害ペプチドの調製 製造例１と同様な方法で、タチウォ（Ｔｒｊｃｈｉｕｒ
ｕｓＩｅｐＬｕｒｕｓ）　を通肉５００ｇを用いて行っ
た。但し、限外濾過の代わりに、５ｅｐｈａｄｅｘ　　
Ｇ　−２５カラムを使用した。即ち、陽イオン交換樹脂
カラム処理後の２Ｎ−ＮＨ，ＯＨ溶出液を減圧濃縮によ
りアンモニアを除去し、濃縮液４９ｍｊ！を得た。ｔ７
：４縮？＆４ｍｌを、予め０．１　Ｍ　Ｕン酸緩衝液で
緩衝化した５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２５カラム（Ｍ
ｅｄｉｕｍ、　　φ２．３×１４０ｃｍ）に負荷し、流
速３０　ｍ　１　／　ｈ　、各分画ｉ　１３．５　ｍ　
ｌでゲル濾過した。５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２５カ
ラムクロマトグラフイーを繰返して大量分取したペプチ
ド画分を、再度上記と同条件でイオン交換樹脂処理した
後、凍結乾燥してペプチド粉試験例１　ペプチドの液体
クロマトグラフィー測定 ゛　高速液体クロマトグラフ：東洋曹達■製ＨＬ　Ｃ−
８０３Ｄ型、カラム：ＴＳＫ　　ｇｅｔ　Ｇ−３００ｏ
ｐｗ、、、　　φ７．８　ｍ　Ｘ　３０　ｃｍ　２本連
結。溶離液：０．１％　トリフルオロ酢酸−４５％　ア
セトニトリル（５５：４５）、流速：　０．５　ｍ　ｌ
　／　ｍ　ｉ　ｎ　。

検出器：　ＵＶ−８型、測定波長２１０ｎｍ。検量線の
作成８表１に示した各標準ペプチドを用いた。

試料溶液：各塩基性ペプチド粉末１ｇを脱イオン水１０
０ｍ１に溶解した液を、更に溶離液にて５表１　内部標
準に使用したペプチド １　　　チトクロームＣ１２３８４ ２インシュリン　　　　５７５０ ３　　　インシュリンＢ鎖　　３０４０４　　　ソマト
スタチン　　　１６３Ｂ５　　　ブラジキニン　　　　
１０５２６　　　エンケファリン　　　　５５６イワシ
およびタチウォ塩基性ペプチド粉末についてのＨＰ　Ｌ
　Ｃを第１図、第２図に示した。この結果、各塩基性ペ
プチドの分子量は約１０００〜２０００の範囲であるこ
とが、また、少なくとも４成分のペプチドよりなること
がわかる。

試験例２　得られたペプチドのアミノ酸分析常法より、
各塩基性ペプチド粉末の塩酸加水分解を行い試＃４とし
た。トリプトファンについては、水酸化バリウムによる
アルカリ分解後試料とした。

高速アミノ酸分析計：日立製８３５型、祷ラム：日立カ
スタムイオン交換樹脂＃２６１９Ｆ、　　φ２゜６＋１
１＋１Ｘ１５ＣＩｍ、カラム温度：５０°Ｃ１溶離液：
０゜２Ｍ　クエン酸ナトリウム溶液。流速：　０．２５
　ｍＮ／ｍｉｎ、検出：ニンヒドリン発色法および０−
フタルアルデヒド（ｏ　ＰＡ）蛍光法によった。

各塩基性ペプチド粉末のアミノ酸分析値を表２に示した
。遊離アミノ酸を若干含んでいると考えられるが、リジ
ン含量が著しく高く、イワシ塩基性ペプチドで４７．６
８　ｇ　／　１００　ｇ　、タチウォ塩アスパラギン酸
　　　４．６０　　　２．２４スレオニン　　　　　２
．７９　　　１．２５セリン　　　　　　３．５５　　
　１．４３グルタミン酸　　　　　４．９１　　　　１
．８５プロリン　　　　　　　１．１４　　　　３．０
７グリシン　　　　　　２．３９　　　５．１７アラニ
ン　　　　　　３．９６　　　２．２１バリン　　　　
　　２．９６　　　２．０９メチオニン　　　　　０．
０１１　　０．０１４イソロイシン　　　　２．２２　
　　１．７２０イシン　　　　　　１．７０　　　１．
０３チロシン　　　　　　０．０１７　　０．２６２フ
エニルアラニン　　０．３７６　　０．２７４トリプト
フアン　　　０．１３６　　０．１０６リジン　　　　
　　４７．６８　　５９．６１１ヒスチジン　　　　　
３．５４　　　０．７３２＊　　ｇ／１００ｇ塩基性ペ
プタイド 次に、製造例で得たペプチドの存効性について試験した
。

実験例１ 製造例１で得たペプチドを経口投与させ、糖尿病ラット
（ストロブトシトシン誘発糖尿病ラット）に及ぼした作
用。

（１）　　試験方法 体重的１８０ｇのウィスター系ラットを固型飼料ＣＡ−
１（日本タレア製）で予備飼育し、２４時間開食後実験
に供した。ストロブトシトシン（ＳＴＺ、ＵＳＡ　　Ｕ
Ｐ−Ｊｏｈｎ製）は０．５　ｔｕｆｔのクエン酸緩衝液
（ｐ　Ｈ４，５）に溶解後４５■／ｋｇの割合で尾静脈
に投与した。投与後１週間ＣＡ−１で飼育した。

試料は、製造例−１で得たペプチドの投与量が１６０■
／ｋｇになるように被検試料を生理食塩水に溶解したも
の６ａｅ／ａｎｉｍａｌをゾンデにて強制経口投与した
（ペプチド溶液群）、３０％鶏卵黄液（卵黄を生理食塩
水中に懸濁させる）６ｄ／　ａ　ｎ　ｉ　ｍ　ａ　Ｉを
経口投与した（卵黄群）、製造例−１で得たペプチドの
投与量が１６０ｍｇ／ｋｇになるように被検試料を３０
％鶏卵黄液に溶解したもの６ＩＲｆ／ａｎｉｍａ＋をゾ
ンデにて強制経口投与した（ペプチド卵黄群）をもうけ
１週間予備飼育と同じ条件で飼育した後、血清中の成分
を調べた。なお、ＳＴＺ等を投与しないコントロール群
についても同様に調べた。

下表に血清中の測定値を示す。

ｃｏｎｔｒｏｌ　　　　　　１６８．６　　８２．４　
　７１．９ペプチド溶液　　５３５．８　　７Ｂ、９　
　６５．２ペプチド卵黄　　５１５．１　　　Ｂｏ、５
　　６４．２卵黄　　　　　　６０２．５　１４０．３
　　９６．４ＳＴＺ　　　　　　６０４．８　１４５．
９　　９８．１以上の様にＳＴＺによる血糖値上昇をペ
プチド投与によって約１０％改善され、ペプチド卵黄で
は、さらに改善がみられた。

実験例２ 正常食ラット及び高脂血症ラット（高コレステロール食
誘発高脂血症ラット）に及ぼす効果（１）　　試験方法 ａ）正常食ラットに対する効果 体重的２３０ｇのウィスター系ラットを市販固型飼料Ｃ
Ａ−１及び水を自由摂食として一週間馴化飼育した。

試料は、製造例−１で得たペプチドの投与量が１５０ｍ
ｇ／ｋｇになるように被検試料を生理食塩水に溶解した
もの６ＩＩ１１／ａｎｉｍａｌをゾンデにて強制経口投
与した（ペプチド溶液群）。３０％鶏卵黄液（卵黄を生
理食塩水中に懸濁させる）６ｍｆ／ａｎｉｍａｌを経口
投与した（卵黄群）。

製造例−１で得たペプチドの投与量が１５０■／ｋｇに
なるように被検試料を３０％鶏卵黄液に溶解したもの６
Ｉｄ／ａｎｉｍａｌをゾンデにて強制経口投与した（′
ペプチド卵黄群）をもうけ、２週間馴化飼育と同じ条件
で飼育した後、血中の脂質成分を調べた。ペプチドの活
性を比較する為に対照薬としてクロフィブレート２００
■／ｋｇ経口投与した群（クロフィブレート群）も同時
に行った。

ｂ）高コレステロール食誘発高脂血症ラットに対する効
果 体重薬２２０ｇのウィスター系ラットを１週間馴化飼育
した。

粉末飼料ＣＡ−１を基礎食とし、これにコレステロール
１％、コール酸０．５％添加混入した実験食を作成し、
更に、実験例２、（＋）−ａ）に記した様に各群をもう
け、２週間飼育した。その後血中（２）　　　結　　果 ａ）正常食ラットに対する効果 下表に血清中の測定値を示す。

群トリグルセリＦ　　　　コレステロール■／ａ 基礎食　　　　　　　１４７．５　　８３．３ペプチド
溶液　　　　１３０．２　　７４．５ペプチド卵黄　　
　　１２０．７　　６９．２卵黄　　　　　　　　１４
６．０　　８４．２クロフイブレート　　　４０．９　
　５０．０以上の様にクロフィブレート投与群に比較し
て緩和ではあるが、ペプチド投与群で減少傾向がみられ
、ペプチド、卵黄併用投与群ではそれが一層強くなった
。

ｂ）高コレステロール食誘発高脂質血症ラットに対する
効果、下表に血清中の測定値を示す。

群　　　　　　　　　　　　ｉ離脂肪酸　コレステロー
ル　　リ　ボ蛋白質実験食　　　　　０．５４１　　２
００．７５　　３０３．２８ペプチド？容／夜　　　０
．４１０　　１７０．０５　　２５５．２１ペプチド卵
黄　　０．２９０　　１５９．２４　　２３２．９４卵
黄　　　　　　０．５２２　　１９７．７２　　３０１
．３６クロフイブレー）　０．２８４　　１５４．７３
　　２５７．３０以上の様に正常食ラットの場合と同様
に、ペプチド投与により脂質成分に減少が見られ、ペプ
チド、卵黄の併用投与によって更に減少した。

実験例３ 肥満動物（遺伝性肥満ラッ）：Ｚｕｃｋｅｒ「ａＬ）に
対するペプチドの効果 （１）　　試験方法 体重的３００ｇのＺｕｃｋｅｒ　　ｒａ、ｔを使用し、
市販固型飼料ＣＡ−１を自由摂食させた。試ギ４は、製
造例−１で得たペプチドの投与量が１３０　ｍｇ　／　
ｋｇになるように被検試料を生理食塩水に溶解したもの
Ｅｚ＋＋ｊｉ／ａｎｉｍａｌをゾンデにて強制経口投与
した（ペプチド卵黄群）、３０％鶏卵黄液（卵黄を生理
食塩水中に１ｇ濁させる）６ｍｆｆｉ／ａｎ　ｉｍａ　
ｌを経口投与した（卵黄群）、製造例−１で得たペプチ
ドの投与量が１３０■／ｋｇになるように被検試料を３
０％鶏卵黄液に溶解したもの６ｄ／ａｎｉｍａｌをゾン
デにて強制経口投与した（ペプチド卵黄群）をもうけ、
１２週間飼育し、体重及び血中成分を調べた。

（２）　　　結　　果 下表に測定結果を示す。

群体重　　　　　リ　ン脂質　　　コレステロールＩｎ
１ｔｉａｌ　　　Ｆｉｎａｌ　　　　ｍｇ／　　ｄｉ　
　　ｍｇ／　　ｄｉペフ“チド？容液　３０８．７　３
５２．１　２４１．３　１１７．５ペプチド卵黄　３０
２．６　３３８．７　２２０．２　１１４．６卵黄　　
　　　２９７．２　４５８．１　２９８．１　１３４．
２以上の様にペプチド投与により肥満症状の改善および
血中成分ん改善がみられ、ペプチド、卵黄併用投与によ
り一層の優れた作用がみられた。

（発明の効果） 本により、安全性が高く、有効性の高い経口摂食組成物
の堤供が可能となった。

以下実施例を示す。

なお、実施例中の部とは、すべて重量部を意味する。

実施例１　トローチ剤 〔組成〕 製造例１で得たペプチド　　　　２０部乳糖　　　　　
　　　　　　　　　４２蔗糖　　　　　　　　　　　　
　３２．８トラガカント末　　　　　　　　　　５，０
ペパーミント油　　　　　　　　　　０．２乳＄１！７
４２．０部、蔗糖３２．８部、トラガカント末′５．０
部およびペパーミント０．２部を混合し、これに、ペプ
チド２０．０部を蒸留水２０．０部に溶解した溶液を加
え、よく練合した。

次に、デンプンを散布したガラス板上に、上記の練合物
をめん棒で展延して厚さ約５１１ＩＩＩのシート状をし
て後、型で打ち抜き、乾燥してトローチ剤（１，０ｇ／
個）とした。

実施例２　粉末剤 〔組成〕 製造例１で得たペプチド　　　　１０．０部鶏卵黄（粉
末化したもの）　　　　２０．０乳糖　　　　　　　　
　　　　　５９．４ステアリン酸マグネシウム　　　　
０．５トウモロコシデンプン　　　　　１０．０酸化マ
グネシウム　　　　　　　　０．１ペプチド１０．０部
、鶏卵黄２０．０部、トウモロコシデンプンｌ０１０部
、および酸化マグネシウム０．１分を充分混合し、これ
に乳＃Ｍ５９．４部およびステアリン酸マグネシウム０
．５部を添加、混合した。この混合物を１ｇずつ分包し
て粉末剤を得た。

実施例３　アイスクリーム 脱脂粉乳　　　　　　　　　　８．０％植物脂肪　　　
　　　　　　ｌ０００ 砂糖　　　　　　　　　　　１３．０ 安定剤　　　　　　　　　　　０・３ 乳化剤　　　　　　　　　　　０・３ バニラフレーバー　　　　　　０．１ 該ペプチド　　　　　　　　　５・０ 卵黄　　　　　　　　　　　ｌＯ・０ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５３．
３通常の製造法にて作成した。（１０，０ｇ　／力・ツ
ブ）実施例４　アイスクリーム 牛乳　　　　　　　　　　　６４．０％全乳　　　　　
　　　　　　　４・０ 脱脂粉乳　　　　　　　　　　５・０ グラニユーＬ！　　　　　　　　　　７．０水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０該ペプチド
　　　　　　　　　３．０ 卵黄　　　　　　　　　　　　７・０ 第１図 第２図 手続補正書 昭和６３年２月１０日 昭和６２年特許願第２５６８０７号 ２、発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　東京都墨田区墨田五丁目１７番４号〒５３４　　
大阪市部島区友淵町−丁目５番９０号鐘紡株式会社　特
許部 電話（０６）９２１−１２５１ ６、補正の対象 明細書の図面の簡単な説明の欄 ７、補正の内容 別紙のとおり

【図面の簡単な説明】

第１図はイワシより得られた塩基性ペプチドの高速液体
クロマトグラフィー測定図、第２図はタチウォより得ら
れた塩基性ペプチドの高速液体クロマトグラフィー測定
図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）魚肉を蛋白分解酵素により分解して得られる、分
   子量５００〜５，０００の塩基性ペプチドを含有するこ
   とを特徴とする経口摂食組成物。
2. （２）更に、卵黄を含有する特許請求の範囲第（１）項
   記載の経口摂食組成物。