JPH02103470A - 人工担体およびその製造方法 - Google Patents
人工担体およびその製造方法Info
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- JPH02103470A JPH02103470A JP63258004A JP25800488A JPH02103470A JP H02103470 A JPH02103470 A JP H02103470A JP 63258004 A JP63258004 A JP 63258004A JP 25800488 A JP25800488 A JP 25800488A JP H02103470 A JPH02103470 A JP H02103470A
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- C08G69/36—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino acids, polyamines and polycarboxylic acids
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ｉｌ上立ｆｌＪＬｌ！
本発明は免疫学的検査、特に、粒子免疫測定法における
担体として有用な新規の人工粒子またはその製造法、並
びにそのような粒子を用いた免疫学的検査試薬に関する
。
担体として有用な新規の人工粒子またはその製造法、並
びにそのような粒子を用いた免疫学的検査試薬に関する
。
１来１遣
−ｉに、粒子免疫測定法においては、適当な大きさの粒
子を担体としこれに抗原または抗体を感作（吸着または
結合）させ、それぞれに対応する抗体または抗原の存在
によってこの感作された担体が凝集を生ずることを原理
としている。
子を担体としこれに抗原または抗体を感作（吸着または
結合）させ、それぞれに対応する抗体または抗原の存在
によってこの感作された担体が凝集を生ずることを原理
としている。
従来、上記粒子免疫測定法において最も一般的に使用さ
れている担体粒子としては、隠えば、ヒツジまたはニワ
トリのような各種動物の赤血球またはポリスチレンラテ
ックス粒子のような人工的に合成された高分子粒子とが
ある。前者の動物血球を担体として用いる方法はいわゆ
る血球凝集反応として古くから行われ、この方法は、対
１とされ得る抗原及び抗体の範囲が広く、例えばマイク
ロタイター法を利用して１〜２時間という短時間のうち
に判定を行うことができる点では優れたらのである。し
かしながら、動物の血球はそれ自体が固有の抗原性を有
するのでそのために非特異凝集を生じ易い欠点があり、
しかも、血球は生きている動物等から採取されるもので
あるため、個体間、季節間、その他による特性のバラツ
キが大きく、一定品質の血球を得ることが難しい、さら
にまた、血球の大きさは動物の種類によりそれぞれ一定
しているという利点はあるが、反面それが目的に応じた
任意の大きさの粒子を得ることができない欠点となって
いる。
れている担体粒子としては、隠えば、ヒツジまたはニワ
トリのような各種動物の赤血球またはポリスチレンラテ
ックス粒子のような人工的に合成された高分子粒子とが
ある。前者の動物血球を担体として用いる方法はいわゆ
る血球凝集反応として古くから行われ、この方法は、対
１とされ得る抗原及び抗体の範囲が広く、例えばマイク
ロタイター法を利用して１〜２時間という短時間のうち
に判定を行うことができる点では優れたらのである。し
かしながら、動物の血球はそれ自体が固有の抗原性を有
するのでそのために非特異凝集を生じ易い欠点があり、
しかも、血球は生きている動物等から採取されるもので
あるため、個体間、季節間、その他による特性のバラツ
キが大きく、一定品質の血球を得ることが難しい、さら
にまた、血球の大きさは動物の種類によりそれぞれ一定
しているという利点はあるが、反面それが目的に応じた
任意の大きさの粒子を得ることができない欠点となって
いる。
一方、ポリスチレンラテックス等の合成高分子粒子は一
般に０．１〜１μ閃程度の粒径を有し特にラテックス凝
集反応用の担体として有用であり、それ自体が抗原性を
有しない点及び均質のものを人里に安定して入手し得る
点で潰れている。１１．がしながら、従来の合成高分子
物質の粒子より成る担体は、高い感度を得ると共に定量
的な判定を行うためにマイクロタイター法を利用すると
、血球を担体として用いる場合に比して、沈降に長時間
を必要とし、迅速な判定を行うことができない問題があ
る。しかも、免疫反応の媒質として望ましい中性域では
自然凝集即ち非特異ｌｉ集を生ずる恐れがある。
般に０．１〜１μ閃程度の粒径を有し特にラテックス凝
集反応用の担体として有用であり、それ自体が抗原性を
有しない点及び均質のものを人里に安定して入手し得る
点で潰れている。１１．がしながら、従来の合成高分子
物質の粒子より成る担体は、高い感度を得ると共に定量
的な判定を行うためにマイクロタイター法を利用すると
、血球を担体として用いる場合に比して、沈降に長時間
を必要とし、迅速な判定を行うことができない問題があ
る。しかも、免疫反応の媒質として望ましい中性域では
自然凝集即ち非特異ｌｉ集を生ずる恐れがある。
また、カオリン、炭末などの天然無機粒子も上記の担体
として有用であるとされているが、抗原または抗体が密
に感作されにくいことおよび一定の大きさの粒子を選出
することが困難であること等の欠点を有し極めて限られ
た範囲でしか使用されていない。
として有用であるとされているが、抗原または抗体が密
に感作されにくいことおよび一定の大きさの粒子を選出
することが困難であること等の欠点を有し極めて限られ
た範囲でしか使用されていない。
さらに、最近、ゼラチン、水溶性多糖類、およびポリメ
タリン酸ナトリウムを含み、アルデヒド系架橋剤により
架橋された不溶化粒状人工担体が開発され（特開昭５７
−１５３６５８号、特開昭５７−１６０４６５号等）、
いわゆるゼラチン担体粒子として動物血球に代るものと
して実用化され使用されている。
タリン酸ナトリウムを含み、アルデヒド系架橋剤により
架橋された不溶化粒状人工担体が開発され（特開昭５７
−１５３６５８号、特開昭５７−１６０４６５号等）、
いわゆるゼラチン担体粒子として動物血球に代るものと
して実用化され使用されている。
この人工担体は、上記の特許公報の記載によれば、免疫
凝集反応用の担体としては従来品も優れているとされて
いた動物赤血球と同等な性能を有し、さらに化学的、物
理的に均質かつ安定であり、抗原活性がなく任意の粒径
のものを容易に大量生産できるとしている。
凝集反応用の担体としては従来品も優れているとされて
いた動物赤血球と同等な性能を有し、さらに化学的、物
理的に均質かつ安定であり、抗原活性がなく任意の粒径
のものを容易に大量生産できるとしている。
しかしながら、ゼラチンは天然蛋白質物質でありその原
料由来によっては性状も異なり、必ずしも均質な粒子が
得られるとは限らない、しかも、最近の臨床検査の分野
における迅速化、自動化傾向に伴い、′ａ集反応検査に
おいても、動物赤血球またはゼラチン粒子以上の迅速な
判定時間が望まれている。
料由来によっては性状も異なり、必ずしも均質な粒子が
得られるとは限らない、しかも、最近の臨床検査の分野
における迅速化、自動化傾向に伴い、′ａ集反応検査に
おいても、動物赤血球またはゼラチン粒子以上の迅速な
判定時間が望まれている。
本発明は、造粒方法としては上記ゼラチン粒子と同じコ
アセルベーション法を用いるが、天然物質ではなく合成
物であるポリアミノ酸から出発し、より均質で安定であ
りさらにより速い判定時間が得られる担体粒子を提供せ
んとするものである。
アセルベーション法を用いるが、天然物質ではなく合成
物であるポリアミノ酸から出発し、より均質で安定であ
りさらにより速い判定時間が得られる担体粒子を提供せ
んとするものである。
合成ポリアミノ酸を抗原〜抗体反応用担体粒子として使
用することは従来技術において示唆されている０例えば
、特開昭５５−９４６３６号公報はコアセルベージシン
マイクロカプセル化技術を用いた抗原−抗体反応用マイ
クロカプセルに関するもので、そのカプセル壁材の１つ
としてポリアミノミＷ脂を使用できるとしている（同公
報第５項下から２行目）。
用することは従来技術において示唆されている０例えば
、特開昭５５−９４６３６号公報はコアセルベージシン
マイクロカプセル化技術を用いた抗原−抗体反応用マイ
クロカプセルに関するもので、そのカプセル壁材の１つ
としてポリアミノミＷ脂を使用できるとしている（同公
報第５項下から２行目）。
しかしながら、この従来技術は、実質上、油状物質を芯
材としたゼラチン−アラビアゴム系カプセル粒子を開示
しているのであり、ポリアミノ酸に関してどのようなポ
リアミノ酸をどのような条件でどのようにしてカプセル
粒子を調製するのか全く具体的に開示していない、１Ｊ
実、本発明者等の実験によれば、単なる市販のポリアミ
ノ酸（例えば、ポリ−Ｌ−グルタミン酸）を−成分とし
て用いて通常のコアセルベーション条件により粒状物を
得ることは娩めて難しいことを見い出している。
材としたゼラチン−アラビアゴム系カプセル粒子を開示
しているのであり、ポリアミノ酸に関してどのようなポ
リアミノ酸をどのような条件でどのようにしてカプセル
粒子を調製するのか全く具体的に開示していない、１Ｊ
実、本発明者等の実験によれば、単なる市販のポリアミ
ノ酸（例えば、ポリ−Ｌ−グルタミン酸）を−成分とし
て用いて通常のコアセルベーション条件により粒状物を
得ることは娩めて難しいことを見い出している。
さらに、特開昭６２−１７２８号公報はポリアミノ酸球
状粒子とその製造方法を開示しており、その用途の１つ
として生体反応用ラテックスがあることを示唆している
。しかしながら、この公報記載の球状体は疎水性ポリア
ミノ酸を有機溶媒中に溶解し、得られた溶液を非溶媒で
ある水溶媒体中に分散させて得ているものであり、本質
的に疎水性の粒子であり、前述のポリスチレンラテック
ス同様の欠点分有する。しかも、この従来の方法で得ら
れる球状体は、各実施例でも明らかなように、−ｍに、
４０〜７５μｍあるいは７５〜２０Ｑ７．ｚｚ程度の大
きめの粒子であり、ふるい分けして１０μｍ以下の粒子
を得たとしても、この小粒子は形状がくずれ真球状でな
く、また抗原または抗体の感作も十分でないことを確認
している。
状粒子とその製造方法を開示しており、その用途の１つ
として生体反応用ラテックスがあることを示唆している
。しかしながら、この公報記載の球状体は疎水性ポリア
ミノ酸を有機溶媒中に溶解し、得られた溶液を非溶媒で
ある水溶媒体中に分散させて得ているものであり、本質
的に疎水性の粒子であり、前述のポリスチレンラテック
ス同様の欠点分有する。しかも、この従来の方法で得ら
れる球状体は、各実施例でも明らかなように、−ｍに、
４０〜７５μｍあるいは７５〜２０Ｑ７．ｚｚ程度の大
きめの粒子であり、ふるい分けして１０μｍ以下の粒子
を得たとしても、この小粒子は形状がくずれ真球状でな
く、また抗原または抗体の感作も十分でないことを確認
している。
１且ム且１
本発明は前述した如き従来の粒子免疫測定法用担体粒子
の欠点を克服した改良された人工担体、特に、化学的、
物理的に均質でありかつマイクロプレート凝集反応法の
如き測定法においてより短時間で判定できるような担体
を提供することを目的とする。
の欠点を克服した改良された人工担体、特に、化学的、
物理的に均質でありかつマイクロプレート凝集反応法の
如き測定法においてより短時間で判定できるような担体
を提供することを目的とする。
１１立ＡＪ
本発明の上記および他の目的は、遊離のカルボキシル基
とアミノ基を有する合成ポリアミノ酸と水溶性多１ｍと
を含む粒状物を相分術法即ちコアセルベーションによっ
て形成し、これをアルデヒド系架橋剤によって不溶化し
て得た人工粒子によって達成される。さらに詳細には、
本発明の人工担体粒子は、後述するような適当な割合で
遊離のカルボキシル基と遊離のアミノ基を有する合成ポ
リアミノ酸を調製し、これと水溶性多糖類との水溶液か
ら通常のコンプレックスコアセルベーション法によって
微細液滴（コアセルベート）を生成しこれを不溶化する
ことによって取得できる。その際、原料ポリアミノ酸中
のカルボキシル基とアミノ基の割合、ポリアミノ酸と水
溶性多糖類の混合比、およびコアセルベーションプロセ
スパラメーター特にｐ）１条件等と適宜調整することに
よって、所望に応じた粒度および感作性等を有する担体
粒子が得られる。
とアミノ基を有する合成ポリアミノ酸と水溶性多１ｍと
を含む粒状物を相分術法即ちコアセルベーションによっ
て形成し、これをアルデヒド系架橋剤によって不溶化し
て得た人工粒子によって達成される。さらに詳細には、
本発明の人工担体粒子は、後述するような適当な割合で
遊離のカルボキシル基と遊離のアミノ基を有する合成ポ
リアミノ酸を調製し、これと水溶性多糖類との水溶液か
ら通常のコンプレックスコアセルベーション法によって
微細液滴（コアセルベート）を生成しこれを不溶化する
ことによって取得できる。その際、原料ポリアミノ酸中
のカルボキシル基とアミノ基の割合、ポリアミノ酸と水
溶性多糖類の混合比、およびコアセルベーションプロセ
スパラメーター特にｐ）１条件等と適宜調整することに
よって、所望に応じた粒度および感作性等を有する担体
粒子が得られる。
本発明で使用する遊離のカルボキシル基およびアミノ基
を有する合成ポリアミノ酸は、当該技術において公知の
種々の方法によって得ることができるが、一般的には、
次の３つの方法によるのが有利である。原料として使用
するポリアミノ酸およびその調製法は周知であり、目的
に応じた種々のポリマーおよび調製法が利用されている
。
を有する合成ポリアミノ酸は、当該技術において公知の
種々の方法によって得ることができるが、一般的には、
次の３つの方法によるのが有利である。原料として使用
するポリアミノ酸およびその調製法は周知であり、目的
に応じた種々のポリマーおよび調製法が利用されている
。
（１）次式：
で示される酸性ポリアミノ酸へのアミノ基の導入：第１
図の反応式で示すように、２価以上のポリアミノまたは
アミノアルコールを用いてのＣ００Ｘ基へのアミノ基の
導入である０図中の反応式中の注■〜■は次の意味を有
する。
図の反応式で示すように、２価以上のポリアミノまたは
アミノアルコールを用いてのＣ００Ｘ基へのアミノ基の
導入である０図中の反応式中の注■〜■は次の意味を有
する。
■Ｘは一最に保護基を示し、通常はメチル、エチル、ベ
ンジル基を示す。
ンジル基を示す。
■便宜上、２価の脂肪族アミノ（ｌ＋＋＝２．３，４．
６、・・）で示したが、本発明のアミノ基を導入すると
いう目的を達成し得るものであれば、フェニレンジアミ
ノ等の芳香族ジアミノ、３価以上のポリアミノ等も使用
できる。
６、・・）で示したが、本発明のアミノ基を導入すると
いう目的を達成し得るものであれば、フェニレンジアミ
ノ等の芳香族ジアミノ、３価以上のポリアミノ等も使用
できる。
■保護基除去のための加水分解、通常Ｎ ａ ０１１、
ＫＯ）（等のアルカリを用いる。
ＫＯ）（等のアルカリを用いる。
■上記■同様、脂肪族アミノアルコール（ト２．３．４
．６・・・）を示しているが、■同様に芳香族アミノア
ルコール等も使用できる。
．６・・・）を示しているが、■同様に芳香族アミノア
ルコール等も使用できる。
■Ｐ−１−ルエンスルホン酸、）ＩＣ１等（２）次式：
で示される塩基性ポリアミノ酸へのＣ００Ｉ＋基の導入
。
。
第２図に示すような反応式により酸無水物を用いてＮＬ
基にＣ００Ｉ＋基を尋人する０図中の注■〜■は次のと
おりである。
基にＣ００Ｉ＋基を尋人する０図中の注■〜■は次のと
おりである。
■脱保護基り後ひ示す０通常塩基性ポリアミノ酸中のＮ
ｔｈ′ｆ：は、合成中、カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）、
Ｐ−クロルカルボキシベンゾキシ（ＣＩ２）等で保護さ
れている。脱係３５基は常法により行い得る。
ｔｈ′ｆ：は、合成中、カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）、
Ｐ−クロルカルボキシベンゾキシ（ＣＩ２）等で保護さ
れている。脱係３５基は常法により行い得る。
■前記（１）の注■に同じ
（３）酸性アミノ酸と塩基性アミノ酸の共重合″第３図
に示すような反応式による。１例としてグルタミン酸と
リジンの共重合を示しているが、他の場合も全く同様な
手順によって行い得る。
に示すような反応式による。１例としてグルタミン酸と
リジンの共重合を示しているが、他の場合も全く同様な
手順によって行い得る。
上記方法（１）、（２）および（３）における各工程の
諸プロセスパラメーターは当該技術において周知であり
各種の底置に記載されている０例えば、方法（１）にお
けるアミノ基の導入はアミノ化剤としてエチレンジアミ
ノ、ヘキサメチレンジアミノ等を用いた場合、ポリマー
（市販のものを使用できる）に対し所望割合のジアミノ
を加え、これを水中好ましくは蒸留水中で２０分〜２時
間、昇温下、例えば、還流温度下で反応させることを含
み、各加水分解はＮａＯＨ等のアルカリの存在下に好ま
しくは昇温下に２〜２０時間好ましくは５〜１５時間で
行う、要するに、これらの方法を用いる利点は、目的物
Ａ、Ａ’、ＢおよびＣの式中に示されるポリマー羊位ユ
およびｂの割合、即ち、ポリマー中に含まれるＣ ００
Ｈ基とＮ１１２基の割合を、出発ポリマーとアミノ化
剤との量比（方法ｌ）、出発ポリマーと部分カルボキシ
ル化剤の量比（方法２）または共重合割合（方法３）を
適宜変えることによって、任意の所望割合とし、それに
よって最終担体粒子を調製するための後述する水溶性多
糖類とのコアセルベーション過程における良好なコアセ
ルベート形成性を得ると共に、最終担体の抗原または抗
体の種類によって異なる怒作性等を調整できることであ
る。かくして、本発明の出発物質の１つである合成ポリ
アミノ酸の遊離のカルボン酸とアミノ酸の比は、即ち、
前述の各式におけるａｂの比は一般に１０：９０〜９０
： １０好ましくは２０＋８０〜６０：４０である。
諸プロセスパラメーターは当該技術において周知であり
各種の底置に記載されている０例えば、方法（１）にお
けるアミノ基の導入はアミノ化剤としてエチレンジアミ
ノ、ヘキサメチレンジアミノ等を用いた場合、ポリマー
（市販のものを使用できる）に対し所望割合のジアミノ
を加え、これを水中好ましくは蒸留水中で２０分〜２時
間、昇温下、例えば、還流温度下で反応させることを含
み、各加水分解はＮａＯＨ等のアルカリの存在下に好ま
しくは昇温下に２〜２０時間好ましくは５〜１５時間で
行う、要するに、これらの方法を用いる利点は、目的物
Ａ、Ａ’、ＢおよびＣの式中に示されるポリマー羊位ユ
およびｂの割合、即ち、ポリマー中に含まれるＣ ００
Ｈ基とＮ１１２基の割合を、出発ポリマーとアミノ化
剤との量比（方法ｌ）、出発ポリマーと部分カルボキシ
ル化剤の量比（方法２）または共重合割合（方法３）を
適宜変えることによって、任意の所望割合とし、それに
よって最終担体粒子を調製するための後述する水溶性多
糖類とのコアセルベーション過程における良好なコアセ
ルベート形成性を得ると共に、最終担体の抗原または抗
体の種類によって異なる怒作性等を調整できることであ
る。かくして、本発明の出発物質の１つである合成ポリ
アミノ酸の遊離のカルボン酸とアミノ酸の比は、即ち、
前述の各式におけるａｂの比は一般に１０：９０〜９０
： １０好ましくは２０＋８０〜６０：４０である。
また、これらポリアミノ酸は種々の重合度（ｎ）を有し
得るが、一般的には、ｎ・５０〜１５００好ましいのは
２００〜７００の範囲である。
得るが、一般的には、ｎ・５０〜１５００好ましいのは
２００〜７００の範囲である。
本発明の担体粒子用のもう１つの出発物質である水溶性
多糖類は、通常のコアセルベーション造粒法においてポ
リアニオンとして使用され得るもの、例えば、アラビア
ゴム、カルボキシメチルセルシロ−人 アルギン酸ナト
リウム、寒天、カラゲーナン等があり、好ましいのはア
ラビアゴムである。
多糖類は、通常のコアセルベーション造粒法においてポ
リアニオンとして使用され得るもの、例えば、アラビア
ゴム、カルボキシメチルセルシロ−人 アルギン酸ナト
リウム、寒天、カラゲーナン等があり、好ましいのはア
ラビアゴムである。
これらの水溶性多糖類はいずれも市販のものを使用でき
る。
る。
本発明において、上記の遊離カルボキシル基およびアミ
ノ基を有する合成ポリアミノ酸と水溶性多糖類とから目
的の担体粒子を得るには、いわゆるコンプレックスコア
セルベーションの原理を用いる。即ち、上記のポリアミ
ノ酸をポリカチオンとし上記多糖票をポリアニオンとす
る両者のコアセルベート出現濃度範囲の均質水溶液を調
製し、得られた水溶液を攪拌しながらｐＨを調整してポ
リアミノ酸の等電点以下にすることによってコアセルベ
ートを生成し、これを不溶化することによって担体粒子
を得る。さらに詳細には、上記ポリアミノ酸と水溶性多
糖類とを約５：１〜約１：５好ましくは約２：ｌ〜約１
：２の混合比（重量比）で濃度約０．０５〜５重量Ｘ好
ましくは約０．１〜３．０重量Ｘに水好ましくは蒸留水
または脱イオン水中に溶解して約ｐ）１９〜１２の溶液
を得る。必要ならば、不溶物をろ過または遠心により除
去する０次いで、溶液を室温または昇温下（２０℃〜４
０℃）にて攪拌しながら塩酸、硫酸、酢酸のような酸で
もってｐＨを３０〜９０の範囲に調整してコアセルベー
トを生成させ、これをアルデヒド系化合物によって架橋
し不溶化する。コアセルベートを生成させるｐｕ範囲は
使用するポリアミノ酸のｃｏｏｔ（基／ＮｌＩ２基比、
ポリアミノ酸と多糖類の混合比、および目的とする粒子
の大きさによって定まるものである。従って、本発明に
よれば、得られる粒子の物性および大きさを任意に制御
でき、例えば、大きい粒子を得るにはｐ＋＋を低くし小
さい粒子を得るにはｐｕを高くし、それによってマイク
ロタイタープレート凝集反応用に好適な２〜１（ｌｕ
ｍの粒子あるいはラテックス凝集反応用に好適な担体の
０．１〜１．０μｍの粒子というように任意の大きさの
ものとすることができる。また、得られた粒子は動物血
球と同等な電気二重層を形成しており、これにより粒子
の安定な分散並びに測定時の粒子の良好な凝集が達成さ
れる。
ノ基を有する合成ポリアミノ酸と水溶性多糖類とから目
的の担体粒子を得るには、いわゆるコンプレックスコア
セルベーションの原理を用いる。即ち、上記のポリアミ
ノ酸をポリカチオンとし上記多糖票をポリアニオンとす
る両者のコアセルベート出現濃度範囲の均質水溶液を調
製し、得られた水溶液を攪拌しながらｐＨを調整してポ
リアミノ酸の等電点以下にすることによってコアセルベ
ートを生成し、これを不溶化することによって担体粒子
を得る。さらに詳細には、上記ポリアミノ酸と水溶性多
糖類とを約５：１〜約１：５好ましくは約２：ｌ〜約１
：２の混合比（重量比）で濃度約０．０５〜５重量Ｘ好
ましくは約０．１〜３．０重量Ｘに水好ましくは蒸留水
または脱イオン水中に溶解して約ｐ）１９〜１２の溶液
を得る。必要ならば、不溶物をろ過または遠心により除
去する０次いで、溶液を室温または昇温下（２０℃〜４
０℃）にて攪拌しながら塩酸、硫酸、酢酸のような酸で
もってｐＨを３０〜９０の範囲に調整してコアセルベー
トを生成させ、これをアルデヒド系化合物によって架橋
し不溶化する。コアセルベートを生成させるｐｕ範囲は
使用するポリアミノ酸のｃｏｏｔ（基／ＮｌＩ２基比、
ポリアミノ酸と多糖類の混合比、および目的とする粒子
の大きさによって定まるものである。従って、本発明に
よれば、得られる粒子の物性および大きさを任意に制御
でき、例えば、大きい粒子を得るにはｐ＋＋を低くし小
さい粒子を得るにはｐｕを高くし、それによってマイク
ロタイタープレート凝集反応用に好適な２〜１（ｌｕ
ｍの粒子あるいはラテックス凝集反応用に好適な担体の
０．１〜１．０μｍの粒子というように任意の大きさの
ものとすることができる。また、得られた粒子は動物血
球と同等な電気二重層を形成しており、これにより粒子
の安定な分散並びに測定時の粒子の良好な凝集が達成さ
れる。
本発明において粒子を不溶化するために用いるアルデヒ
ド系架橋剤はこの種のコアセルベートの架橋に用いる通
常のものであり、例えば、グルタルアルデヒド、ホルマ
リン、グリオキサール、クロトンアルデヒド、アクロレ
イン、アセトアルデヒド等があり、好ましいのはグルタ
ルアルデヒドである。これらの架橋剤はコアセルベート
形成後の原料水溶液中に約０．０１〜５．０重量Ｘ好ま
しくは０．１〜２．０重量％で用いる。
ド系架橋剤はこの種のコアセルベートの架橋に用いる通
常のものであり、例えば、グルタルアルデヒド、ホルマ
リン、グリオキサール、クロトンアルデヒド、アクロレ
イン、アセトアルデヒド等があり、好ましいのはグルタ
ルアルデヒドである。これらの架橋剤はコアセルベート
形成後の原料水溶液中に約０．０１〜５．０重量Ｘ好ま
しくは０．１〜２．０重量％で用いる。
さらに、本発明においては、任意成分として。
前記合成ポリアミノ酸の一部をゼラチンのような任意の
ポリカチオン成分で置き換えることができ、また水溶性
多糖類の一部をポリリン酸ナトリウムのような任意のポ
リアニオンで置き換えることらできる。さらにまた、動
物血球その他の適当なコア物質をコアセルベート生成時
に存在させてカプセル粒子とすることもできる。この場
合、カプセル化粒子の表面ＮＩ（カプセルＪｌｌ！！＞
が、本発明の合成ポリアミノ酸と多糖類からなるので、
実質的に同等の担体物雪が得られる。
ポリカチオン成分で置き換えることができ、また水溶性
多糖類の一部をポリリン酸ナトリウムのような任意のポ
リアニオンで置き換えることらできる。さらにまた、動
物血球その他の適当なコア物質をコアセルベート生成時
に存在させてカプセル粒子とすることもできる。この場
合、カプセル化粒子の表面ＮＩ（カプセルＪｌｌ！！＞
が、本発明の合成ポリアミノ酸と多糖類からなるので、
実質的に同等の担体物雪が得られる。
さらにまた、本発明のコアセルベーション造粒時におい
ては、必要に応じて、粒子生成即ちコアセルベート生成
促進のための貧溶媒としてのメタノール、エタノール、
アセトン等の通常の極性１１機溶媒を存在させてもよく
、また、生成粒子の分散性を促進するための界面活性剤
特に陰イオンおよびノニオン界面活性剤を存在させても
よい、これらの極性溶媒および／または界面活性剤は、
それぞれ、目的に応じた有効量で存在させるが、最的に
は、前者がコアセルベート生成用溶液中で５〜６０重量
％、 １１者が０．００５〜０．５重量％も存在させ
れば十分である。
ては、必要に応じて、粒子生成即ちコアセルベート生成
促進のための貧溶媒としてのメタノール、エタノール、
アセトン等の通常の極性１１機溶媒を存在させてもよく
、また、生成粒子の分散性を促進するための界面活性剤
特に陰イオンおよびノニオン界面活性剤を存在させても
よい、これらの極性溶媒および／または界面活性剤は、
それぞれ、目的に応じた有効量で存在させるが、最的に
は、前者がコアセルベート生成用溶液中で５〜６０重量
％、 １１者が０．００５〜０．５重量％も存在させ
れば十分である。
かくして得られた本発明の担体粒子は実質的に無色であ
るので、着色することが好ましい場合には、通常の任意
の染料、例えば、リアクティブレッド４、リアクティブ
レッド１２０、リアクティブブルー４、リアクティブレ
ッド５等の反応性染料、ダイレクトオレンジ３１、ダイ
レクトレッド３１、ダイレクトブルー等の直接染料を用
いて常法により着色する。即ち、生成後のポリアミノ酸
不溶化粒子を染料濃度例えば０．０１〜３．Ｏｘ濃度の
染料水溶液に一夜浸漬するか、あるいは粒子生成用原液
中に染料をあらかじめ添加しておいてもよい。
るので、着色することが好ましい場合には、通常の任意
の染料、例えば、リアクティブレッド４、リアクティブ
レッド１２０、リアクティブブルー４、リアクティブレ
ッド５等の反応性染料、ダイレクトオレンジ３１、ダイ
レクトレッド３１、ダイレクトブルー等の直接染料を用
いて常法により着色する。即ち、生成後のポリアミノ酸
不溶化粒子を染料濃度例えば０．０１〜３．Ｏｘ濃度の
染料水溶液に一夜浸漬するか、あるいは粒子生成用原液
中に染料をあらかじめ添加しておいてもよい。
本発明によって調製した粒子に対して抗原または抗体を
感作するには、従来の動物赤血球に対する感牛法を用い
て容易に行い得る０例えば、得られた担体粒子を常法に
よりタンニン酸処理したのち、目的の抗原または抗体を
吸着させる。感作させる抗原または抗体としては測定す
べき抗原または抗体に対応する天然由来または遺伝子組
換え、細胞融合、化学合成等の人為的手段に由来する任
意のものであり得る。
感作するには、従来の動物赤血球に対する感牛法を用い
て容易に行い得る０例えば、得られた担体粒子を常法に
よりタンニン酸処理したのち、目的の抗原または抗体を
吸着させる。感作させる抗原または抗体としては測定す
べき抗原または抗体に対応する天然由来または遺伝子組
換え、細胞融合、化学合成等の人為的手段に由来する任
意のものであり得る。
得られた感作担体は、以下の実施例で示すとおり、従来
の動物血球あるいはゼラチン担体と同等以上の性能を有
すると共に、新規な特徴として凝集後の沈降速度が速い
こと、従って、判定時間の短縮が可能であるという大き
な利点をも有している。その理由は明確に説明すること
はできないけれども、本発明の担体粒子は一般に動物血
球またはぜラチ′ン粒子よりも比重が大きく、このこと
も−因であるものと思われる。
の動物血球あるいはゼラチン担体と同等以上の性能を有
すると共に、新規な特徴として凝集後の沈降速度が速い
こと、従って、判定時間の短縮が可能であるという大き
な利点をも有している。その理由は明確に説明すること
はできないけれども、本発明の担体粒子は一般に動物血
球またはぜラチ′ン粒子よりも比重が大きく、このこと
も−因であるものと思われる。
見見」
以下、本発明およびその特徴を実施例により具体的に説
明する。
明する。
実」Ｌ剖ヨー
アジコートＡ −２０００（味の素に、により入手、ジ
クロルエタン中１０ｆｆｉ量Ｘポリ−γ−メチルーＬ−
グルタメート溶液、ポリマー重合成約５８０）がら常法
によりメタノール再沈させ十分に乾燥させて得られたポ
リーγ−メチル−し一グルタメート粉末７０ｇを、コン
デンサー、温度計および攪拌器を備えがつエチレンジア
ミノと蒸留水を表１の割合で含む２Ｑフラスコに加え、
還流温度で約１時間加熱した０次いで１反応液に２重量
％ＮａＯＨ水溶液３５０ａ＋１を加え、反応液がほぼ透
明になるまで反応させ１４ｇの固形ＮａＯＨを添加した
０反応液を直ちに綿布を用いて吸引ろ過して不溶解物を
除去し、さらに、減圧エバポレーターによりａ縮して水
分および残余のエチレンジアミノを除去し各々約２００
ｍ１の粘ｆＩ物を得た。この粘稠物と約０．７〜１Ωの
エタノールに溶解し、これを２〜３ｇのエーテル中に落
としてフレーク状析出物を生成させ、吸引ろ過した析出
物を適当量のエタノール−ニーテルト３混合物、適当量
のエーテルの順で十分に洗浄し、減圧乾燥させて、各々
、約５０〜７０ｇの収量でサンプル１〜６を得た。
クロルエタン中１０ｆｆｉ量Ｘポリ−γ−メチルーＬ−
グルタメート溶液、ポリマー重合成約５８０）がら常法
によりメタノール再沈させ十分に乾燥させて得られたポ
リーγ−メチル−し一グルタメート粉末７０ｇを、コン
デンサー、温度計および攪拌器を備えがつエチレンジア
ミノと蒸留水を表１の割合で含む２Ｑフラスコに加え、
還流温度で約１時間加熱した０次いで１反応液に２重量
％ＮａＯＨ水溶液３５０ａ＋１を加え、反応液がほぼ透
明になるまで反応させ１４ｇの固形ＮａＯＨを添加した
０反応液を直ちに綿布を用いて吸引ろ過して不溶解物を
除去し、さらに、減圧エバポレーターによりａ縮して水
分および残余のエチレンジアミノを除去し各々約２００
ｍ１の粘ｆＩ物を得た。この粘稠物と約０．７〜１Ωの
エタノールに溶解し、これを２〜３ｇのエーテル中に落
としてフレーク状析出物を生成させ、吸引ろ過した析出
物を適当量のエタノール−ニーテルト３混合物、適当量
のエーテルの順で十分に洗浄し、減圧乾燥させて、各々
、約５０〜７０ｇの収量でサンプル１〜６を得た。
また、エチレンジアミノの添加なしで、即ち、透明にな
るまで加水分解のみを行ったものをサンプル７とした。
るまで加水分解のみを行ったものをサンプル７とした。
これらサンプル１〜７について、各サンプルの０．０１
ｇ／ １ｍｌ ＩＭ−酢酸水溶液の２５°Ｃでの粘度お
よびＮＭＲスペクトル分析を用いて測定したＣ０ＯＨ基
対ＮＨ２基比、即ち、前記−最大で示されるａ：ｂ比は
次表２のとおりであった。
ｇ／ １ｍｌ ＩＭ−酢酸水溶液の２５°Ｃでの粘度お
よびＮＭＲスペクトル分析を用いて測定したＣ０ＯＨ基
対ＮＨ２基比、即ち、前記−最大で示されるａ：ｂ比は
次表２のとおりであった。
衣−一２
丈」二１」ヨ伽−柾−度１ＬＯＬＪｌ
ｌ １．３３０
５１：４９２ １．３０５
３９：６１３ １．
３０６ ３１：６９４
１．３０８ １２：８８５
１．３０８ ７３ ：２
７６ １．２９６
６０：４０７ １．２５６
１００： ０ポリ（Ｌ−リジン）臭素酸塩
（生化学工業に、により入手、重合成約３００ ＞ １
０ｇおよびトリエチルアミノ１４ｍ１をジメチルホルム
アミド１００ｍ中に加え、室温で１時間かきまぜた後、
無水コハク酸２．７ｇを加えた。室温で６時間、さらに
６０℃で１時間かきまぜた後、エバポレーターによって
２０ｍ１にまで減圧濃縮した。残渣に３．８ｇの水酸化
ナトリウムをとかしたメタノールｌｏｏｍｌを加え、よ
く振り混ぜたのち、冷蔵庫に一夜放置した。固体をろ過
によって集め、エーテルで充分に洗浄し、乾燥させた。
５１：４９２ １．３０５
３９：６１３ １．
３０６ ３１：６９４
１．３０８ １２：８８５
１．３０８ ７３ ：２
７６ １．２９６
６０：４０７ １．２５６
１００： ０ポリ（Ｌ−リジン）臭素酸塩
（生化学工業に、により入手、重合成約３００ ＞ １
０ｇおよびトリエチルアミノ１４ｍ１をジメチルホルム
アミド１００ｍ中に加え、室温で１時間かきまぜた後、
無水コハク酸２．７ｇを加えた。室温で６時間、さらに
６０℃で１時間かきまぜた後、エバポレーターによって
２０ｍ１にまで減圧濃縮した。残渣に３．８ｇの水酸化
ナトリウムをとかしたメタノールｌｏｏｍｌを加え、よ
く振り混ぜたのち、冷蔵庫に一夜放置した。固体をろ過
によって集め、エーテルで充分に洗浄し、乾燥させた。
収量７．６ｇ、収率はナトリウム塩として９０χ、アミ
ノ基とカルボキシル基の割合は、ＮＭＲスペクトルによ
り約６０：４０となった。これをサンプル８とする。
ノ基とカルボキシル基の割合は、ＮＭＲスペクトルによ
り約６０：４０となった。これをサンプル８とする。
常法（ホスゲン法）によって調製したＮε−カルボベン
ゾキシ−し−リジン、ＮＱ−力ルボキシ無水物３０、６
ｇとγ−ベンジルーし一グルタミン酸Ｎ−カルボキシ無
水物２６．３ｇを水素化ナトリウムによって脱水したテ
トラヒドロフラン６００＋ｓｌに溶かした。
ゾキシ−し−リジン、ＮＱ−力ルボキシ無水物３０、６
ｇとγ−ベンジルーし一グルタミン酸Ｎ−カルボキシ無
水物２６．３ｇを水素化ナトリウムによって脱水したテ
トラヒドロフラン６００＋ｓｌに溶かした。
室温でかきまぜながら重合開始剤としてトリエチルアミ
ノ０．１５ｍ１を加えた。２日間かきまぜたのち、エバ
ポレーターによって１００ｎｌまで減圧濃縮し、水１０
００＋＊ｌを加えて白色沈澱物を得た。水、メタノール
で洗浄したのち乾燥させた。収量４３．３ｇ、収率は１
．１共重合物として９０χであった。このものをトリフ
ルオロ酢酸／臭化水素酸の混合溶液２００１に溶かし、
室温で１時間かきまぜたのち、エーテル５００ａｌを加
えて黄褐色の沈澱物を得た。ろ過によって集め、エタノ
ール、エーテルで十分に洗浄したのち、乾燥させて目的
物を得た。収量２７ 、５ｇ、 収率は出発原料を基
準とすると８５％であった。なお得られた共重合物のり
ジン残渣は臭化水素酸塩を形成しており、リジンとグル
タミン酸の割合はＮＭＲスペクトルにより、５０：５０
であることが確認された。これを、さらに水に溶かして
Ｎ ａ ＯＩＩで処理することによりＨａ塩とし、エー
テル再沈させて後のコアセルベージランに供した（サン
プル９）。
ノ０．１５ｍ１を加えた。２日間かきまぜたのち、エバ
ポレーターによって１００ｎｌまで減圧濃縮し、水１０
００＋＊ｌを加えて白色沈澱物を得た。水、メタノール
で洗浄したのち乾燥させた。収量４３．３ｇ、収率は１
．１共重合物として９０χであった。このものをトリフ
ルオロ酢酸／臭化水素酸の混合溶液２００１に溶かし、
室温で１時間かきまぜたのち、エーテル５００ａｌを加
えて黄褐色の沈澱物を得た。ろ過によって集め、エタノ
ール、エーテルで十分に洗浄したのち、乾燥させて目的
物を得た。収量２７ 、５ｇ、 収率は出発原料を基
準とすると８５％であった。なお得られた共重合物のり
ジン残渣は臭化水素酸塩を形成しており、リジンとグル
タミン酸の割合はＮＭＲスペクトルにより、５０：５０
であることが確認された。これを、さらに水に溶かして
Ｎ ａ ＯＩＩで処理することによりＨａ塩とし、エー
テル再沈させて後のコアセルベージランに供した（サン
プル９）。
実施例１．２および３で得なサンプル１〜９を用いて、
次の手順で造粒を行った。
次の手順で造粒を行った。
（１）サンプル１〜３．６．８および９：各サンプル１
．０ｇ、５χアラビアゴム水溶１２０ｍ１および１８０
ｍ１の蒸留水とをビーカー中で良く混合し、２ｆｆｉｉ
％リアクティブレッド１２０水溶液１．５＋ｓ ｌを加
えて原液とし、これを室温にて十分に攪拌しながらｌＯ
χ重量酢酸を用いてｐＨ１ｌｌ整を行い、光学Ｊ微鏡で
液滴（コアセルベート）の生成およびその大きさを確認
したのち２５％重量グルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液
２５１を加えさらに室温にて約１時間、約４０℃にて約
１時間攪拌を続けた。得られた粒子を遠心（２０００ｒ
ｐｍ、５分間）により脱イオン水で十分（３〜５回）に
洗浄し、残渣を回収した。各サンプルについての原液Ｐ
Ｈおよび液滴所望粒度形成時ｐｉ（は次の表３のとおり
であった。
．０ｇ、５χアラビアゴム水溶１２０ｍ１および１８０
ｍ１の蒸留水とをビーカー中で良く混合し、２ｆｆｉｉ
％リアクティブレッド１２０水溶液１．５＋ｓ ｌを加
えて原液とし、これを室温にて十分に攪拌しながらｌＯ
χ重量酢酸を用いてｐＨ１ｌｌ整を行い、光学Ｊ微鏡で
液滴（コアセルベート）の生成およびその大きさを確認
したのち２５％重量グルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液
２５１を加えさらに室温にて約１時間、約４０℃にて約
１時間攪拌を続けた。得られた粒子を遠心（２０００ｒ
ｐｍ、５分間）により脱イオン水で十分（３〜５回）に
洗浄し、残渣を回収した。各サンプルについての原液Ｐ
Ｈおよび液滴所望粒度形成時ｐｉ（は次の表３のとおり
であった。
友−ユ
丈ルニ１」仁Ｎｏ 匡〕Ｌ」」 ＰＢＪＬ
Ｕ ン１ １０．９２
５．６３２ １１．
０２ ７．５６３
１１．５８ ８．１８６
１０．９７ ４．５７
８ １１．０５
７．５０９ １０．９５
６．０１得られた各サンプルからの粒子の
２〜７μｍ粒度範囲の割合は、ガライ（Ｇａｌａｉ）社
製、Ｃｌ５−１粒度分布アナライザーを用いて測定した
ところ、いずれ６９３〜９４ｘ（容積分布）に達してい
た。サンプル２から得られた粒子の粒度分布のヒストグ
ラムおよび電型写真を、それぞれ、第４図および第５図
に示す。
Ｕ ン１ １０．９２
５．６３２ １１．
０２ ７．５６３
１１．５８ ８．１８６
１０．９７ ４．５７
８ １１．０５
７．５０９ １０．９５
６．０１得られた各サンプルからの粒子の
２〜７μｍ粒度範囲の割合は、ガライ（Ｇａｌａｉ）社
製、Ｃｌ５−１粒度分布アナライザーを用いて測定した
ところ、いずれ６９３〜９４ｘ（容積分布）に達してい
た。サンプル２から得られた粒子の粒度分布のヒストグ
ラムおよび電型写真を、それぞれ、第４図および第５図
に示す。
また、ベンケム社製、レーザー・ジー システム３００
０を用い、０．１５Ｍ ＰＢＳ、ｐＨ７，２中に懸濁さ
せて２５℃で１ｍｍｅ Ｘ ２０ｍｍの円筒状電気泳動
セルに入れ１０４８Ｖ／ｍの電圧勾配により測定したと
きの上記で得られた各担体粒子の電気泳動度は−０，８
７〜−１，２０ａ ｗ＋７ｓｅｃ／Ｖ７ｃｍの範囲にあ
り、文献（臨床検査、Ｖｏ１３０、Ｎｏ、１３．１７０
９−１７１０． 特開昭５７−１５３６５８号等）に
報告されている同条件でのヒツジ固定血球の−１，１５
ａ １１７ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍおよびゼラチン粒子の−０
，７５〜−１，８５μｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ａｍと同等であ
る。
０を用い、０．１５Ｍ ＰＢＳ、ｐＨ７，２中に懸濁さ
せて２５℃で１ｍｍｅ Ｘ ２０ｍｍの円筒状電気泳動
セルに入れ１０４８Ｖ／ｍの電圧勾配により測定したと
きの上記で得られた各担体粒子の電気泳動度は−０，８
７〜−１，２０ａ ｗ＋７ｓｅｃ／Ｖ７ｃｍの範囲にあ
り、文献（臨床検査、Ｖｏ１３０、Ｎｏ、１３．１７０
９−１７１０． 特開昭５７−１５３６５８号等）に
報告されている同条件でのヒツジ固定血球の−１，１５
ａ １１７ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍおよびゼラチン粒子の−０
，７５〜−１，８５μｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ａｍと同等であ
る。
さらに、各粒子の比重を次の如くして測定した。
先ず、 ２Ｑｗ／＋ｖ％、 ３０ｗ／ｗ％、 ４０ｗ／
ｗ％、 ５０Ｗ／鱈、 ６０ｗ／ｆｌ、および６５ｗ／
ｗ４の各ショ糖濃度液を調製し、各２＋ｎｌを重い順に
ゆっくりと試験管に入れ、最上層の２０Ｗ／ｗ％液上に
Ｂ担体粒子浮遊液０．５ｍｌを入れた。続いて、この試
験管を３０００ｒｐ＋＊、２０分間遠心した結果、いず
れの担体粒子も６Ｑｗ／ｗ％液と６５ｗ／ｗ％液の間に
位置した。全く同様にしてヒツジ固定血球について行っ
た試験結果は６０ｗ／ｗ％液と５０ｗ／ｗ％の間に位置
し、これは本発明のポリアミノ酸担体粒子がヒツジ血球
等（ゼラチン粒子はほぼヒツジ血球と同等）よりも大き
い比重を有することを示している。
ｗ％、 ５０Ｗ／鱈、 ６０ｗ／ｆｌ、および６５ｗ／
ｗ４の各ショ糖濃度液を調製し、各２＋ｎｌを重い順に
ゆっくりと試験管に入れ、最上層の２０Ｗ／ｗ％液上に
Ｂ担体粒子浮遊液０．５ｍｌを入れた。続いて、この試
験管を３０００ｒｐ＋＊、２０分間遠心した結果、いず
れの担体粒子も６Ｑｗ／ｗ％液と６５ｗ／ｗ％液の間に
位置した。全く同様にしてヒツジ固定血球について行っ
た試験結果は６０ｗ／ｗ％液と５０ｗ／ｗ％の間に位置
し、これは本発明のポリアミノ酸担体粒子がヒツジ血球
等（ゼラチン粒子はほぼヒツジ血球と同等）よりも大き
い比重を有することを示している。
（２）サンプル４：
ポリアミノ酸サンプル量を０．５ｇにした以外は前記（
１）の造粒手順を繰り返すことによって、実質的に同様
の粒度分布を示す粒子を得た。
１）の造粒手順を繰り返すことによって、実質的に同様
の粒度分布を示す粒子を得た。
原 液 ＰＨ１１，３６
所望粒度形成時ｐＨ９，２３
（３）サンプル５：
水１８０Ｉｌｌノ代わりに水１００＋ａｌとエタノール
８ｏＩＩｌノ混合物を用いた以外は前記（１）と同じ造
粒手順を繰り返すことによって、実質的に同様の粒度分
布を示す粒子を得た。
８ｏＩＩｌノ混合物を用いた以外は前記（１）と同じ造
粒手順を繰り返すことによって、実質的に同様の粒度分
布を示す粒子を得た。
原 液 Ｐｌ＋ １０
．９７所望粒度形成時ｐｌ＋ ５．８６（４
）サンプル７： ｐＨ条件、貧溶媒添加量等種々の条件を変えて見たが所
望する粒子の形成は得られなかった。
．９７所望粒度形成時ｐｌ＋ ５．８６（４
）サンプル７： ｐＨ条件、貧溶媒添加量等種々の条件を変えて見たが所
望する粒子の形成は得られなかった。
サンプル２を用いて、実施例４−（１）の造粒手順にお
いて染料を添加せずｐＨが７９１となったところでグル
タルアルデヒド添加を行い、２．５００ｒｐ■、１０分
間の遠心後上清を集め、さらに１μｍメンブランフィル
タ−でろ過し、ろ液を４．０００ｒｐｍ、１０分間で遠
心させた後の残渣を集めた。得られた粒子の粒度分布は
前述のガライ社製、Ｃｌ５−１粒度分布アナライザーで
測定したとき、０．５〜１．０μ璽粒度範囲の粒子が約
８０χ（容積分布）に達していた。これらの粒子は免疫
比濁法等のラッテクス凝集用として使用可能である。
いて染料を添加せずｐＨが７９１となったところでグル
タルアルデヒド添加を行い、２．５００ｒｐ■、１０分
間の遠心後上清を集め、さらに１μｍメンブランフィル
タ−でろ過し、ろ液を４．０００ｒｐｍ、１０分間で遠
心させた後の残渣を集めた。得られた粒子の粒度分布は
前述のガライ社製、Ｃｌ５−１粒度分布アナライザーで
測定したとき、０．５〜１．０μ璽粒度範囲の粒子が約
８０χ（容積分布）に達していた。これらの粒子は免疫
比濁法等のラッテクス凝集用として使用可能である。
え見億玉
下記の表で示す各々の感作材料（抗原または抗体）を実
施例３で調製した本発明の担体および参照としてのヒツ
ジ固定血球に常法によりタンニン酸感作して得られた感
作担体を用いて、担体ｉ！２集反応試験を通常のマイク
ロタイター法により実施した。検体としては、各々の感
作抗原、抗体に対応したヒト陽性血清およびヒト陰性血
清を用いた。
施例３で調製した本発明の担体および参照としてのヒツ
ジ固定血球に常法によりタンニン酸感作して得られた感
作担体を用いて、担体ｉ！２集反応試験を通常のマイク
ロタイター法により実施した。検体としては、各々の感
作抗原、抗体に対応したヒト陽性血清およびヒト陰性血
清を用いた。
例えば、ＨＢｓ抗原感作担体についての試験の場合は、
陽性検体としてＨＢ９抗体陽性ヒト血清を用い、陰性検
体としてはＨＢｓ抗体陰性ヒト血清を用いた如きである
。但し、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）感作担体について
は、抗ＢＳ＾ウサギ免疫血清を陽性検体とした。
陽性検体としてＨＢ９抗体陽性ヒト血清を用い、陰性検
体としてはＨＢｓ抗体陰性ヒト血清を用いた如きである
。但し、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）感作担体について
は、抗ＢＳ＾ウサギ免疫血清を陽性検体とした。
試験方法としては、先ず、マイクロタイタープレートに
所定の希釈液２５ｄずつ適下し、次いで第一ウェルに検
体２５Ａをとり、２倍段階希釈を行う。
所定の希釈液２５ｄずつ適下し、次いで第一ウェルに検
体２５Ａをとり、２倍段階希釈を行う。
次に、各々の８作担体浮遊液（ＩＶ／Ｖ％＞を２５ Ｊ
Ａずつ滴下し、良く混和させたのち室温に静置させ、凝
集を示した最高の検体希釈倍数をもって凝集価（力価）
とした。
Ａずつ滴下し、良く混和させたのち室温に静置させ、凝
集を示した最高の検体希釈倍数をもって凝集価（力価）
とした。
なお、感作条件は次のようであった。先ず、ｐｎｓｐｌ
（７，２中２．５Ｖ／Ｖ％担体と、 同じ＜ ＰＢＳ中
８万倍希釈タンニン酸を各々ｌ容づつ混合し、３７゛Ｃ
で約３０分間処理して遠心分離し、ＰＢＳで洗浄した０
次いで、得られたタンニンＵ処理担体２．５ＸＶ／Ｖ
ｐ１３Ｓ浮遊液１容上液１容材料の１０μ９／鱈液１容
とを混合し３７°Ｃ１３０分間処理して遠心分離を行い
ＰＢＳで洗浄し、ＩＶ／Ｖｘの濃度となるように保存用
メジウム中に浮遊させた。
（７，２中２．５Ｖ／Ｖ％担体と、 同じ＜ ＰＢＳ中
８万倍希釈タンニン酸を各々ｌ容づつ混合し、３７゛Ｃ
で約３０分間処理して遠心分離し、ＰＢＳで洗浄した０
次いで、得られたタンニンＵ処理担体２．５ＸＶ／Ｖ
ｐ１３Ｓ浮遊液１容上液１容材料の１０μ９／鱈液１容
とを混合し３７°Ｃ１３０分間処理して遠心分離を行い
ＰＢＳで洗浄し、ＩＶ／Ｖｘの濃度となるように保存用
メジウム中に浮遊させた。
結果は下記の表４のとおりであり、本発明の担体はヒツ
ジ固定血球と同等ないしはそれ以上の力価を示した。さ
らにまた、十分な判定を行うのにヒツジ固定血球は約９
０〜１２０分を要したのに対し、本発明の担体は約６０
〜８０分で判定可能であった。
ジ固定血球と同等ないしはそれ以上の力価を示した。さ
らにまた、十分な判定を行うのにヒツジ固定血球は約９
０〜１２０分を要したのに対し、本発明の担体は約６０
〜８０分で判定可能であった。
表−且
注１：常法により界面活性剤で可溶化したもの
第１図は本発明で使用するカルボキシル基およびアミノ
基含有合成アミノ酸を調製するための１つの方法を示す
一最反応式である。 第２図は本発明で使用するカルボキシル基およびアミノ
基含有合成ポリアミノ酸を調製するための別の方法を示
す−ｉＫ応式である。 第３図は本発明で使用するカルボキシル基およびアミノ
基含有合成ポリアミノ酸を調製するためのさらに別の方
法を示す一最反応式である。 第４図は第１図で示す担体粒子の粒度分布状態（容積分
布）を示すヒストグラムである。 第５図は本発明の担体粒子（サンプル２からの粒子）の
構造を示す写真である。 し＝し 第５図
基含有合成アミノ酸を調製するための１つの方法を示す
一最反応式である。 第２図は本発明で使用するカルボキシル基およびアミノ
基含有合成ポリアミノ酸を調製するための別の方法を示
す−ｉＫ応式である。 第３図は本発明で使用するカルボキシル基およびアミノ
基含有合成ポリアミノ酸を調製するためのさらに別の方
法を示す一最反応式である。 第４図は第１図で示す担体粒子の粒度分布状態（容積分
布）を示すヒストグラムである。 第５図は本発明の担体粒子（サンプル２からの粒子）の
構造を示す写真である。 し＝し 第５図
Claims (10)
- （１）遊離のカルボキシル基とアミノ基を有する合成ポ
リアミノ酸と水溶性多糖類との混合物からなり、アルデ
ヒド系架橋剤によって不溶化した人工担体粒子。 - （２）合成ポリアミノ酸中のカルボキシル基とアミノ基
の比が約１０：９０〜約９０：１０である請求項（１）
記載の人工担体粒子。 - （３）合成ポリアミノ酸中のカルボキシル基とアミノ基
の比が約２０：８０〜約６０：４０である請求項（２）
記載の人工担体粒子。 - （４）合成ポリアミノ酸が酸性ポリアミノ酸であつてそ
の遊離カルボキシル基の１部を介してアミノ基を導入し
たものである請求項（１）記載の人工担体粒子。 - （５）合成ポリアミノ酸が塩基性ポリアミノ酸であって
その遊離アミノ基の１部を介してカルボキシル基を導入
したものである請求項（１）記載の人工担体粒子。 - （６）合成ポリアミノ酸が酸性アミノ酸と塩基性アミノ
酸の共重合体である請求項１記載の人工担体粒子。 - （７）水溶性多糖類がアラビアゴムである請求項（１）
記載の人工担体粒子。 - （８）合成ポリアミノ酸と水溶性多糖類の混合比が重量
で約５：１〜約１：５である請求項（１）記載の人工担
体粒子。 - （９）合成ポリアミノ酸と水溶性多糖類の混合比が重量
で約２：１〜約１：２である請求項（７）記載の人工担
体粒子。 - （１０）遊離のカルボキシル基およびアミノ基を含む合
成ポリアミノ酸と水溶性多糖類の水溶液を調製し、この
水溶液を室温または昇温下に攪拌しながらｐＨを３．５
〜９．５に調整することによって所望の大きさを有する
液滴粒子を生成させ、次いでこの粒子をアルデヒド系架
橋剤で不溶化することを特徴とする人工担体粒子の調製
方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63258004A JPH079429B2 (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 人工担体およびその製造方法 |
| AT89118879T ATE143388T1 (de) | 1988-10-12 | 1989-10-11 | Künstliche trägerteilchen und verfahren zu deren herstellung |
| ES89118879T ES2091758T3 (es) | 1988-10-12 | 1989-10-11 | Particulas de soporte artificiales y metodo para su preparacion. |
| EP89118879A EP0363921B1 (en) | 1988-10-12 | 1989-10-11 | Artificial carrier particles and method for preparation thereof |
| DE68927247T DE68927247T2 (de) | 1988-10-12 | 1989-10-11 | Künstliche Trägerteilchen und Verfahren zu deren Herstellung |
| CA002000547A CA2000547C (en) | 1988-10-12 | 1989-10-12 | Artificial carrier particles and method for preparation thereof |
| US07/420,531 US5059542A (en) | 1988-10-12 | 1989-10-12 | Artificial carrier particles and method for preparation thereof |
| GR960403206T GR3021815T3 (en) | 1988-10-12 | 1996-11-28 | Artificial carrier particles and method for preparation thereof |
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|---|---|---|---|
| JP63258004A JPH079429B2 (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 人工担体およびその製造方法 |
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| JPH02103470A true JPH02103470A (ja) | 1990-04-16 |
| JPH079429B2 JPH079429B2 (ja) | 1995-02-01 |
Family
ID=17314200
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| DE (1) | DE68927247T2 (ja) |
| ES (1) | ES2091758T3 (ja) |
| GR (1) | GR3021815T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07318561A (ja) * | 1994-05-24 | 1995-12-08 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | 生化学用微粒子およびその製法ならびにそれを使用する免疫学的測定法 |
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| US5484584A (en) * | 1990-10-02 | 1996-01-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Therapeutic and diagnostic use of modified polymeric microcapsules |
| WO1998058258A1 (de) * | 1997-06-18 | 1998-12-23 | Elvira Schecklies | Formulierung für immunologische reaktionssysteme |
| DE19725766B4 (de) * | 1997-06-18 | 2005-06-30 | Elvira Schecklies | Formulierung zur Herstellung von Testsystemen und Herstellung der Formulierung |
| US6251409B1 (en) | 1997-11-11 | 2001-06-26 | Clarigen, Inc. | Use of particles in the composition of cosmetic products |
| FR2774311B1 (fr) * | 1998-02-02 | 2000-03-17 | Rhodia Chimie Sa | Granules dispersables dans l'eau comprenant une matiere active hydrophobe |
| FR2849043B1 (fr) * | 2002-12-24 | 2005-07-08 | Gemac | Procede de fabrication d'un vecteur de molecules actives applicable dans le domaine de la diffusion de principes actifs et vecteur obtenu |
| CN104774329B (zh) * | 2015-01-30 | 2017-01-25 | 华东师范大学 | 用于抗肿瘤药物递送的酸敏感高分子载体及制备方法和应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3000483A1 (de) * | 1979-01-09 | 1980-07-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Mikrokapseln fuer immunologische bestimmungen |
| US4276206A (en) * | 1979-01-18 | 1981-06-30 | Scripps Clinic & Research Foundation | Immunochemical conjugates: method and composition |
| DE3267499D1 (en) * | 1981-03-18 | 1986-01-02 | Fujirebio Kk | Support material for use in serological testing and process for the production thereof |
| EP0062968B2 (en) * | 1981-03-18 | 1991-07-10 | FUJIREBIO KABUSHIKI KAISHA also trading as FUJIREBIO INC. | Support material for use in serological testing and process for the production thereof |
| US4452886A (en) * | 1981-09-21 | 1984-06-05 | Henry Robert P | Novel photon absorbing or emitting polymers and their use as reagents in immunoassay systems |
| JPS5951355A (ja) * | 1982-09-17 | 1984-03-24 | Fujirebio Inc | 抗ウイルス抗体検出用試薬 |
| GB8430252D0 (en) * | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
| JPS621728A (ja) * | 1985-06-27 | 1987-01-07 | Chuichi Hirayama | ポリアミノ酸の球状粒子とその製造方法 |
-
1988
- 1988-10-12 JP JP63258004A patent/JPH079429B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-10-11 AT AT89118879T patent/ATE143388T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-10-11 EP EP89118879A patent/EP0363921B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 ES ES89118879T patent/ES2091758T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 DE DE68927247T patent/DE68927247T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-10-12 US US07/420,531 patent/US5059542A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-12 CA CA002000547A patent/CA2000547C/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-11-28 GR GR960403206T patent/GR3021815T3/el unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07318561A (ja) * | 1994-05-24 | 1995-12-08 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | 生化学用微粒子およびその製法ならびにそれを使用する免疫学的測定法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| JPH079429B2 (ja) | 1995-02-01 |
| ES2091758T3 (es) | 1996-11-16 |
| DE68927247D1 (de) | 1996-10-31 |
| DE68927247T2 (de) | 1997-03-06 |
| US5059542A (en) | 1991-10-22 |
| EP0363921B1 (en) | 1996-09-25 |
| CA2000547C (en) | 1996-11-05 |
| EP0363921A3 (en) | 1991-11-27 |
| GR3021815T3 (en) | 1997-02-28 |
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|---|---|---|---|
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