JPH02104533A - 高純度牛免疫グロブリンの製造法 - Google Patents
高純度牛免疫グロブリンの製造法Info
- Publication number
- JPH02104533A JPH02104533A JP25491488A JP25491488A JPH02104533A JP H02104533 A JPH02104533 A JP H02104533A JP 25491488 A JP25491488 A JP 25491488A JP 25491488 A JP25491488 A JP 25491488A JP H02104533 A JPH02104533 A JP H02104533A
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- JP
- Japan
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- immunoglobulin
- whey
- protein
- purity
- whey protein
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業の利用分野］
本発明は高純度免疫グロブリンの製造法に関する。
［技術の前日及び従来技術］
牛の乳中の免疫グロブリン、特に初乳中にへ含量で見出
される免疫グロブリンは子牛に免疫力を付与する非常に
重要な物質として、また一方杯特異性をも有するものと
して知らてれいた。しかし、最近のω］究によれば、ｌ
１ｌｌｌ管免疫力も有しており、′ この効果は子牛
のみならず、人間においても有効であることが見出され
て以来、この工業的回収法の確立が強く求められ、様々
な研究開発が行なわれている。
される免疫グロブリンは子牛に免疫力を付与する非常に
重要な物質として、また一方杯特異性をも有するものと
して知らてれいた。しかし、最近のω］究によれば、ｌ
１ｌｌｌ管免疫力も有しており、′ この効果は子牛
のみならず、人間においても有効であることが見出され
て以来、この工業的回収法の確立が強く求められ、様々
な研究開発が行なわれている。
乳または初乳から免疫グロブリンを得るための従来の方
法は、非常に煩雑である。ずなわら、最も一般的な方法
は、先ず遠心分離により脱離し、ｉ 続いてｐＨを低
下させて力ぜインを沈澱さ・せて分離“ 除去し、ｐ
Ｈを元に戻し、再度遠心分離して生じた；。 沈澱を除
去し、次いでｖＡ′Ｐａアンモニウムを添加して免疫グ
ロブリンを沈降させ、得られた沈澱を水に溶解し、透析
により硫酸アンモニウムを除去し゛ て免疫グロブリ
ンを得る方法である。
法は、非常に煩雑である。ずなわら、最も一般的な方法
は、先ず遠心分離により脱離し、ｉ 続いてｐＨを低
下させて力ぜインを沈澱さ・せて分離“ 除去し、ｐ
Ｈを元に戻し、再度遠心分離して生じた；。 沈澱を除
去し、次いでｖＡ′Ｐａアンモニウムを添加して免疫グ
ロブリンを沈降させ、得られた沈澱を水に溶解し、透析
により硫酸アンモニウムを除去し゛ て免疫グロブリ
ンを得る方法である。
ヨーロッパ特許出願公開第８５００５号公報には、初乳
から免疫グロブリンを得る方法が記載されている。この
方法では、初乳または乳清を先ず電気泳動を行い、免疫
グロブリンの濃縮された両分を回収し、次いでイオン交
換体上でクロマトグラフィにより分画化して免疫グロブ
リン画分を得ている。
から免疫グロブリンを得る方法が記載されている。この
方法では、初乳または乳清を先ず電気泳動を行い、免疫
グロブリンの濃縮された両分を回収し、次いでイオン交
換体上でクロマトグラフィにより分画化して免疫グロブ
リン画分を得ている。
また、特開昭６１−６８４２９号公報においては、乳ま
たは初乳を酸性化してカゼインを沈澱ン濾過し得られた
か液から低分子物質を限外か過により除去して免疫グロ
ブリンを［ｒ１１収する方法が開示されている。
たは初乳を酸性化してカゼインを沈澱ン濾過し得られた
か液から低分子物質を限外か過により除去して免疫グロ
ブリンを［ｒ１１収する方法が開示されている。
［発明が解決しようとする問題点］
前記従来の技術のうち第１Ｍ目の一般的な方法は工程が
複雑であるとともに、大間の硫酸アンモニウムを乳を添
加するため、免疫グロブリンを除去した乳両分の利用は
困難であり、工業的方法としては適切ではない。第２番
目の方法では、先ず電気泳動を行う必要があり、これは
特殊な装置であり、工業的に人聞に処理する方法として
は適当でない。第３番目の方法は、基礎的には乳清蛋白
質の回収法であり、免疫グロブリン含量の高い初乳を原
料として用いて初めて免疫グ［１プリン含岨の高い製品
が得られる特殊な方法であり、この原料入手の面から工
業的方法とは言えない。
複雑であるとともに、大間の硫酸アンモニウムを乳を添
加するため、免疫グロブリンを除去した乳両分の利用は
困難であり、工業的方法としては適切ではない。第２番
目の方法では、先ず電気泳動を行う必要があり、これは
特殊な装置であり、工業的に人聞に処理する方法として
は適当でない。第３番目の方法は、基礎的には乳清蛋白
質の回収法であり、免疫グロブリン含量の高い初乳を原
料として用いて初めて免疫グ［１プリン含岨の高い製品
が得られる特殊な方法であり、この原料入手の面から工
業的方法とは言えない。
［発明の目的及び発明の要約］
本発明の目的は、従って免疫グ〔１プリンの乳からの分
離精製に関する上記従来技術の欠点を改善した新規な高
純度牛免疫グ０プリンの工業的製造法を提供することに
ある。
離精製に関する上記従来技術の欠点を改善した新規な高
純度牛免疫グ０プリンの工業的製造法を提供することに
ある。
本発明は、工業的に大ｍに入手可能なホエーあるいはホ
エー蛋白濃縮物を用いて免疫グＵプリンを陽イオン交換
体に吸着させ、簡単な脱離操作により高純度の牛免疫グ
ロブリンを得ることによって上記Ｌ］的を達成したもの
である。
エー蛋白濃縮物を用いて免疫グＵプリンを陽イオン交換
体に吸着させ、簡単な脱離操作により高純度の牛免疫グ
ロブリンを得ることによって上記Ｌ］的を達成したもの
である。
即ら、本発明は、牛乳よりカゼイン及び脂肪を除去した
ホエーあるいはホエー蛋白濃縮物中より免疫グロブリン
を回収して高純度ｔｌ免疫グ［１プリンを製造する方法
において、ホエーを蛋白濃度０．５％ｗ／ｗ以上におい
て、電気伝導度２ｍＳ／ｃｔｎ以下となるよう脱塩し、
該脱塩液をｐＨ４，５〜５□５に調整して陽イオン交換
体に０〜４０℃の温度で接触させて免疫グロブリンを吸
着させ、次いで該イオン交換体を回収し、Ｉ）８４．５
〜５．５に調整した水で洗浄した後、塩溶液にて脱離さ
せことを特徴とする、蛋白質中５５％ ｗ／ｗ以上の免
疫グロブリンを含有する高純度牛免疫グ臼プリンの製造
法である。
ホエーあるいはホエー蛋白濃縮物中より免疫グロブリン
を回収して高純度ｔｌ免疫グ［１プリンを製造する方法
において、ホエーを蛋白濃度０．５％ｗ／ｗ以上におい
て、電気伝導度２ｍＳ／ｃｔｎ以下となるよう脱塩し、
該脱塩液をｐＨ４，５〜５□５に調整して陽イオン交換
体に０〜４０℃の温度で接触させて免疫グロブリンを吸
着させ、次いで該イオン交換体を回収し、Ｉ）８４．５
〜５．５に調整した水で洗浄した後、塩溶液にて脱離さ
せことを特徴とする、蛋白質中５５％ ｗ／ｗ以上の免
疫グロブリンを含有する高純度牛免疫グ臼プリンの製造
法である。
［本発明の詳細な説明１
以下、本発明の技術的構成について詳述する。
原料としては免疫グロブリンが失活していない牛乳より
カゼイン及び脂肪が除かれたせ性ホエーあるいは酸ホエ
ー、あるいはこれらを限外濾過して得られたホエー蛋白
濃縮物を用いる。通常牛乳中には１００ｄ中に６０℃程
度の免疫グロブリンが含有されており、ホエー蛋白質中
の約１０％ ｗ／ｗを占める。
カゼイン及び脂肪が除かれたせ性ホエーあるいは酸ホエ
ー、あるいはこれらを限外濾過して得られたホエー蛋白
濃縮物を用いる。通常牛乳中には１００ｄ中に６０℃程
度の免疫グロブリンが含有されており、ホエー蛋白質中
の約１０％ ｗ／ｗを占める。
これらホエー蛋白質を０．５％ ｗ／ｗ以上倉有するホ
エー蛋白含有液を用いて電気伝導度が２１８／ｃＩＲ以
下となるよう必要に応じて、イオン交換ｍ’ｉｇ気透析
方法、透析等により脱塩する。次いで該脱塩液をｐＨ４
，５〜５．５に調整する。ｐＨｍ整用には塩酸。
エー蛋白含有液を用いて電気伝導度が２１８／ｃＩＲ以
下となるよう必要に応じて、イオン交換ｍ’ｉｇ気透析
方法、透析等により脱塩する。次いで該脱塩液をｐＨ４
，５〜５．５に調整する。ｐＨｍ整用には塩酸。
乳酸、クエン酸等、いずれの酸剤をも用いることができ
る。電気伝導度が２ｍＳ／Ｃｌ１１を越える時、あるい
はＩ）Ｈが４．５より低い時、あるいは５．５より高い
時には得られる蛋白質中の免疫グロブリン＠度は低くな
る。
る。電気伝導度が２ｍＳ／Ｃｌ１１を越える時、あるい
はＩ）Ｈが４．５より低い時、あるいは５．５より高い
時には得られる蛋白質中の免疫グロブリン＠度は低くな
る。
該ＤＩ調整液は次に陽イオン交換体に接触させて免疫グ
ロブリンを吸着させる。陽イオン交換体の対イオンとし
てはいずれの形でも使用可能であるが、望ましくはアル
カリ金属形を用いる。Ｉ）Ｈ調整液とイオン交換体との
接触法については使用するイオン交換体の通液特性を考
慮した上で、バッチ撹拌法、カラム連続法等の適宜方法
を採用することができる。ｐｌ＋調整液とイオン交換体
の混合体積比率は、イオン交換体の吸着能力に応じ、十
分量のｐＨ調整液を混合接触させる。ｐＨ調整液とイオ
ン交換体の接触時の温度は、４０℃を越える温度では免
疫グロブリンが次第に変性する傾向を持つため、０〜４
０℃とすることが必要である。ｐＨ調整液とイオン交換
体の接触時間については、接触時の温度、採用する接触
方式（バッチ法またはカラム連続法）等を勘案して条件
を定める。
ロブリンを吸着させる。陽イオン交換体の対イオンとし
てはいずれの形でも使用可能であるが、望ましくはアル
カリ金属形を用いる。Ｉ）Ｈ調整液とイオン交換体との
接触法については使用するイオン交換体の通液特性を考
慮した上で、バッチ撹拌法、カラム連続法等の適宜方法
を採用することができる。ｐｌ＋調整液とイオン交換体
の混合体積比率は、イオン交換体の吸着能力に応じ、十
分量のｐＨ調整液を混合接触させる。ｐＨ調整液とイオ
ン交換体の接触時の温度は、４０℃を越える温度では免
疫グロブリンが次第に変性する傾向を持つため、０〜４
０℃とすることが必要である。ｐＨ調整液とイオン交換
体の接触時間については、接触時の温度、採用する接触
方式（バッチ法またはカラム連続法）等を勘案して条件
を定める。
次いでＤＩ＋調整液と接触させたイオン交換体を分取し
、ｐＨ４，５〜５．５に調整した水を用いて洗浄し、未
吸着のホエー蛋白買弁を十分洗い落した後、常法に従い
、イオン強度の高い食塩等の塩類溶液あるいはｐＨを高
めた塩類溶液を用いて、イオン交換体に吸着した免疫グ
ロブリンを脱離させる。洗浄水にはｐＨを４，５〜５．
５に調整して用いるが、これは吸着した免疫グロブリン
の洗浄時の脱離損失を防ぐためである。
、ｐＨ４，５〜５．５に調整した水を用いて洗浄し、未
吸着のホエー蛋白買弁を十分洗い落した後、常法に従い
、イオン強度の高い食塩等の塩類溶液あるいはｐＨを高
めた塩類溶液を用いて、イオン交換体に吸着した免疫グ
ロブリンを脱離させる。洗浄水にはｐＨを４，５〜５．
５に調整して用いるが、これは吸着した免疫グロブリン
の洗浄時の脱離損失を防ぐためである。
本発明の条件においてはホエー蛋白質中より免疫グロブ
リンが選択的に吸着するので、該脱離塩類溶液の蛋白質
中、５５％ ｗ／ｗ以上の免疫グロブリンを含有づるち
のとして得られる。
リンが選択的に吸着するので、該脱離塩類溶液の蛋白質
中、５５％ ｗ／ｗ以上の免疫グロブリンを含有づるち
のとして得られる。
以、Ｆのようにして得られた免疫グロブリンの回収液は
蛋白質と塩類と水とから成り、塩類と水の除去は常法に
従って行うことができる。即ち、限外ｉ濾過法、電気透
析法あるいは透析法により所望の程度まで塩類を除去し
た後、凍結乾燥あるいは噴霧乾燥等により水を除去する
ことにＪ：って容易粉末することが可能である。
蛋白質と塩類と水とから成り、塩類と水の除去は常法に
従って行うことができる。即ち、限外ｉ濾過法、電気透
析法あるいは透析法により所望の程度まで塩類を除去し
た後、凍結乾燥あるいは噴霧乾燥等により水を除去する
ことにＪ：って容易粉末することが可能である。
［実施例］
実施例１
スルホプロピル基のイオン交換基を有するインデイオン
３ （Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社！１１）
５００ｍｆｆ１をカラムに充填し、１０％食塩水２
Ｌを通じた後水洗してＮａ形のイオン交換体を調整した
。チーズホエーを限外濾過により濃縮した後、希釈して
、蛋白質濃度０．６％ｗ／ｗ ｔ−電気伝導後１．５ｎ
＋Ｓ／Ｃｍとし、後塩酸にてｐＨを５，０とした。次い
で該ｐＨ調整１５Ｑｌに先に調整したＨａ形イオン交換
体５００−を添加し、４℃の温度で３時間撹拌し、免疫
グロブリンを吸着させた。所定時間後、イオン交換体を
ン濾過により回収し、後、ｐＨ５，０に調整した０、０
１Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液にて洗浄し、カラムに
充填した。次いで５％ｗ／ｗの食塩水を通じて吸着成分
を脱離させ、回収液２．０に９を得た。
３ （Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社！１１）
５００ｍｆｆ１をカラムに充填し、１０％食塩水２
Ｌを通じた後水洗してＮａ形のイオン交換体を調整した
。チーズホエーを限外濾過により濃縮した後、希釈して
、蛋白質濃度０．６％ｗ／ｗ ｔ−電気伝導後１．５ｎ
＋Ｓ／Ｃｍとし、後塩酸にてｐＨを５，０とした。次い
で該ｐＨ調整１５Ｑｌに先に調整したＨａ形イオン交換
体５００−を添加し、４℃の温度で３時間撹拌し、免疫
グロブリンを吸着させた。所定時間後、イオン交換体を
ン濾過により回収し、後、ｐＨ５，０に調整した０、０
１Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液にて洗浄し、カラムに
充填した。次いで５％ｗ／ｗの食塩水を通じて吸着成分
を脱離させ、回収液２．０に９を得た。
回収液は蛋白質濃度０．９０％ｗ／ｗを為し、次の蛋白
質組成を有していた。
質組成を有していた。
アルブミン ２．０％
α−グロブリン １５ ％
β−グロブリン ２．５％
免疫グロブリン ７８ ％
（この内 １ｉ）Ｇ 約 ８５％）
Ｉｉ）Ｍ 約 １０ ％
その他 ２，５ｘ
実施例２
カルボキシメチル基のイオン交３１Ｉ！基を有するＣＨ
−ト」パール６５０Ｇ （東洋ソーダ製） ５００ｄ
を内径１０αのカラムに充填し、食塩水を通じ、後水洗
し、Ｎａ形とした。、塩酸カゼインホエーをイオン交換
ｇｌ電気透析法により脱塩し、蛋白ｍ度０．５５％ｗ／
ｗで電気伝導ｇ １．２１３／ｃａ＋、 ｆｉｌｌ ４
．７の液を得た。
−ト」パール６５０Ｇ （東洋ソーダ製） ５００ｄ
を内径１０αのカラムに充填し、食塩水を通じ、後水洗
し、Ｎａ形とした。、塩酸カゼインホエーをイオン交換
ｇｌ電気透析法により脱塩し、蛋白ｍ度０．５５％ｗ／
ｗで電気伝導ｇ １．２１３／ｃａ＋、 ｆｉｌｌ ４
．７の液を得た。
次いで該脱塩液を温度４℃、４１／ｈの流速で前記イオ
ン交換体カラムに１０時間通液した。通液後、ｐ１１４
．７１．：Ｅｌ整り、り０．０ＩＨ７’ｊｉ酸−酢酸ｔ
トｊＪ ”） ム緩衝液を通じて洗浄した侵、５％ｗ
／ｗの食塩水を通じて吸着成分を脱離させ、回収液２．
０Ｋｙを得た。
ン交換体カラムに１０時間通液した。通液後、ｐ１１４
．７１．：Ｅｌ整り、り０．０ＩＨ７’ｊｉ酸−酢酸ｔ
トｊＪ ”） ム緩衝液を通じて洗浄した侵、５％ｗ
／ｗの食塩水を通じて吸着成分を脱離させ、回収液２．
０Ｋｙを得た。
回収液は蛋白質濃度１．０５％ ｗ／ｗを有し、蛋白質
中の免疫グロブリン純度は６５％であった。
中の免疫グロブリン純度は６５％であった。
［発明の効果１
本発明によれば次の効果が得られ、産業上の効果に優れ
たものである。
たものである。
（１）工業的に大量に入手可能なホエーあるいはホエー
蛋白濃縮物を用いて、その中に含まれている免疫グロブ
リンを有効に分離回収できる。
蛋白濃縮物を用いて、その中に含まれている免疫グロブ
リンを有効に分離回収できる。
（２）単純な工程で高純度の免疫グロブリンを得ること
ができる。
ができる。
（３）免疫グロブリン回収後のホエーあるいはボＩ−蛋
白淵縮物はそのまま酸ホエーとして、あるいは酸ホエー
蛋白濃縮物として再利用可能である。
白淵縮物はそのまま酸ホエーとして、あるいは酸ホエー
蛋白濃縮物として再利用可能である。
Claims (1)
- （１）牛乳よりカゼイン及び脂肪を除去したホエーある
いはホエー蛋白濃縮物中より免疫グロブリンを回収して
高純度牛免疫グロブリンを製造する方法において、蛋白
濃度０．５％ｗ／ｗ以上を含有するホエーを電気伝導度
２ｍＳ／ｃｍ以下となるよう脱塩し、該脱塩液をｐＨ４
．５〜５．５に調整して陽イオン交換体に０〜４０℃の
温度で接触させて免疫グロブリンを吸着させ、次いで該
イオン交換体を回収し、ｐＨ４．５〜５．５に調整した
水にて洗浄した後、塩溶液にて脱離させることを特徴と
する、蛋白質中５５％ｗ／ｗ以上の免疫グロブリンを含
有するｎ純度免疫グロブリンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25491488A JPH02104533A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 高純度牛免疫グロブリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25491488A JPH02104533A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 高純度牛免疫グロブリンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02104533A true JPH02104533A (ja) | 1990-04-17 |
Family
ID=17271607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25491488A Pending JPH02104533A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 高純度牛免疫グロブリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02104533A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0876106A4 (en) * | 1996-01-26 | 1999-05-19 | John Stephen Ayers | PROCESS FOR SEPARATING AND RECOVERING PROTEINS CONTAINED IN A PROTEIN SOLUTION |
| JP2008540462A (ja) * | 2005-05-10 | 2008-11-20 | マレー ゴールバーン コーオペラティブ コー リミテッド | 免疫グロブリン分画およびそのためのプロセス |
-
1988
- 1988-10-12 JP JP25491488A patent/JPH02104533A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0876106A4 (en) * | 1996-01-26 | 1999-05-19 | John Stephen Ayers | PROCESS FOR SEPARATING AND RECOVERING PROTEINS CONTAINED IN A PROTEIN SOLUTION |
| US6528622B1 (en) | 1996-01-26 | 2003-03-04 | Massey University | Method of separating and recovering proteins from a protein solution |
| JP2008540462A (ja) * | 2005-05-10 | 2008-11-20 | マレー ゴールバーン コーオペラティブ コー リミテッド | 免疫グロブリン分画およびそのためのプロセス |
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