JPH02110349A - 微生物の計数法における異物の検出排除方法 - Google Patents
微生物の計数法における異物の検出排除方法Info
- Publication number
- JPH02110349A JPH02110349A JP26337288A JP26337288A JPH02110349A JP H02110349 A JPH02110349 A JP H02110349A JP 26337288 A JP26337288 A JP 26337288A JP 26337288 A JP26337288 A JP 26337288A JP H02110349 A JPH02110349 A JP H02110349A
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- JP
- Japan
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- fluorescent dye
- microorganisms
- fluorescence
- microbe
- membrane filter
- Prior art date
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- Pending
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Materials By The Use Of Optical Means Adapted For Particular Applications (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
この発明は、微生物の計数法において、微生物とともに
液体に含有されている異物を検出命俳除する方法に関す
るものである。
液体に含有されている異物を検出命俳除する方法に関す
るものである。
［従来の技術］
飲料水、ビールなどの飲み物に含まれる微生物は−・般
に無用であり、ときに有害であるので、その個数を計測
することが品質管理上必要である。
に無用であり、ときに有害であるので、その個数を計測
することが品質管理上必要である。
例えば、生ビールにおいては、製造後に酵母菌が残留す
ると、これが成長して品質を阻害するので、出荷時にお
ける酵母の個数が押さえられており、出荷の直前に微生
物計数装置によりこれが検査される。一般に、液体中の
微生物の検出、計数方法には各種があるが、生ビールの
場合は、適当に処理されて出荷状態ではコロニーの大き
さは数μｍの微小であり、また、その個数が非常に少な
いので、これを個々に検出して計数することが必要であ
る。
ると、これが成長して品質を阻害するので、出荷時にお
ける酵母の個数が押さえられており、出荷の直前に微生
物計数装置によりこれが検査される。一般に、液体中の
微生物の検出、計数方法には各種があるが、生ビールの
場合は、適当に処理されて出荷状態ではコロニーの大き
さは数μｍの微小であり、また、その個数が非常に少な
いので、これを個々に検出して計数することが必要であ
る。
上記に適する方法として、特開昭６３−５３４４７号「
微生物の計数法」がある。該特許出願の要旨は、メンブ
レンフィルタにより濾過された微生物を、適当な蛍光染
料で染色し、これにレーザ光を照射して微生物から放射
される蛍光を、この蛍光の波長を通過帯域とする光学フ
ィルタで検出して、微生物を計数するものである。第２
図はこれに使用される微生物計数装置の構成図を示し、
レーザ光Ｒ１よりのレーザ光２は、振動ミラー３により
掃引され、投光レンズ４により集光されて、Ｘ方向移動
台６に載置されているメンブレンフィルタ５の表面をＸ
方向に走査し、Ｘ方向の移動により全面が走査される。
微生物の計数法」がある。該特許出願の要旨は、メンブ
レンフィルタにより濾過された微生物を、適当な蛍光染
料で染色し、これにレーザ光を照射して微生物から放射
される蛍光を、この蛍光の波長を通過帯域とする光学フ
ィルタで検出して、微生物を計数するものである。第２
図はこれに使用される微生物計数装置の構成図を示し、
レーザ光Ｒ１よりのレーザ光２は、振動ミラー３により
掃引され、投光レンズ４により集光されて、Ｘ方向移動
台６に載置されているメンブレンフィルタ５の表面をＸ
方向に走査し、Ｘ方向の移動により全面が走査される。
微生物の放射する蛍光は光学フィルタフにより波長選択
され、集光レンズ８により集光されて光電子増倍管９に
より受光される。
され、集光レンズ８により集光されて光電子増倍管９に
より受光される。
制御処理部１０においては、各部の動作の制御と、受光
信号の処理を行い、検出された微生物データは記録Ｘｔ
ｔに記録されるものである。
信号の処理を行い、検出された微生物データは記録Ｘｔ
ｔに記録されるものである。
［解決しようとする課題］
１−記の計数法を出荷前の生ビールに適用した結果によ
ると、ビール中には酵母菌のほかに、かなり多数の異物
が混在し、異物もまた染色されて蛍光を放射するために
、これらが区別なくすべて計・数されて誤差が大きいこ
とが判明した。そこで、酵母と異物を区別する識別方法
が必要となった。
ると、ビール中には酵母菌のほかに、かなり多数の異物
が混在し、異物もまた染色されて蛍光を放射するために
、これらが区別なくすべて計・数されて誤差が大きいこ
とが判明した。そこで、酵母と異物を区別する識別方法
が必要となった。
これに対して、この発明の発明者により、いくつかの提
案がなされて、それぞれ特許出願されている。第１の提
案は、コロニーが成長することに着目し、一定時間成長
させて直径の大きいコロニーとし、これに対して異物は
成長せず比較的小さいので、直径を比較して区別する。
案がなされて、それぞれ特許出願されている。第１の提
案は、コロニーが成長することに着目し、一定時間成長
させて直径の大きいコロニーとし、これに対して異物は
成長せず比較的小さいので、直径を比較して区別する。
第２の提案は、コロニーの形１犬がほぼ円形であること
に着目し、レーザ光のスポットによりコロニーの形状を
調べて区別する。第３の提案は、コロニーの放射する蛍
光は、はぼ−・定波長であるに対して、異物のそれはあ
る程度広い帯域に分布することに着目し、波長比較によ
り区別を行うものである。
に着目し、レーザ光のスポットによりコロニーの形状を
調べて区別する。第３の提案は、コロニーの放射する蛍
光は、はぼ−・定波長であるに対して、異物のそれはあ
る程度広い帯域に分布することに着目し、波長比較によ
り区別を行うものである。
、上記の各種の区別方法に対して、この発明は、さらに
別法を提供するものである。
別法を提供するものである。
［課題を解決するための手段］
この発明は、微生物を含有する液体試料をメンブレンフ
ィルタで濾過して捕捉された微生物を蛍光染料で染色し
、メンブレンフィルタの表面をレーザ光で走査し、微生
物より放射される蛍光を、その波長を通過帯域とする光
学フィルタで検出する微生物の３１数法における、異物
の検出を排除する方法であって、上記の染色の後、メン
ブレンフィルタに一定時間、適当な強度の短波長領域の
可視光または紫外線を照射して、微生物に混在して染色
された異物の蛍光染料を脱色し、または異物の蛍光染料
が放射する蛍光館長を変移させて、光学フィルタにより
微生物のみの蛍光を検出するものである。
ィルタで濾過して捕捉された微生物を蛍光染料で染色し
、メンブレンフィルタの表面をレーザ光で走査し、微生
物より放射される蛍光を、その波長を通過帯域とする光
学フィルタで検出する微生物の３１数法における、異物
の検出を排除する方法であって、上記の染色の後、メン
ブレンフィルタに一定時間、適当な強度の短波長領域の
可視光または紫外線を照射して、微生物に混在して染色
された異物の蛍光染料を脱色し、または異物の蛍光染料
が放射する蛍光館長を変移させて、光学フィルタにより
微生物のみの蛍光を検出するものである。
」ユ記に対する実施態様として、蛍光染料をプロビデイ
ウム拳アイオダイド（ＰＩ）とし、これにより染色され
たメンブレンフィルタ上の微生物および異物に対して、
短波長領域の可視光を、１５分ないし２０分程度照射す
るものである。
ウム拳アイオダイド（ＰＩ）とし、これにより染色され
たメンブレンフィルタ上の微生物および異物に対して、
短波長領域の可視光を、１５分ないし２０分程度照射す
るものである。
［作用］
上記の可視光をメンブレンフィルタに照射した実験が行
われ、これについて説明する。
われ、これについて説明する。
第１図（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は実験方法とブータ
ラ示すもので、図（ａ）において、メンブレンフィルタ
５のＬにはビールを濾過した微生物と異物がともに捕捉
され、ＰＩ蛍光染料により染色されている。これに対し
て、水銀ランプ！２上りの波長が５５０ｎｍ付近の可視
光を、光学フィルタ１３により選択して照射し、第２図
の微生物計数装置により検出すると、図（ｂ）に示す検
出信号の波高値の曲線かえられた。微生物に対する曲線
は照射時間の経過に対してあまり変化しないが、異物に
対する曲線は時間とともに低下して、１５分で約５０％
となり、２５分で３０％となる。このように、微生物に
対する波高値の変化が小さ（、異物に対して大きい理由
は、微生物においては蛍光染料が細胞の内部に浸透して
細胞自身が染色されており、照射光が表面に作用するの
みであるために、蛍光染料の脱色または波長変化が小さ
い。これに対して、この場合の異物はビールの原材料か
ら出るセルローズ、およびビールの製造工程中のろ過器
からの珪藻土などの無機質で、蛍光染料の吸収が少なく
、表面に付着しているのみであるために、照射光により
比較的Ｌ’、Ｌ（脱色し、または蛍光波長が変化する。
ラ示すもので、図（ａ）において、メンブレンフィルタ
５のＬにはビールを濾過した微生物と異物がともに捕捉
され、ＰＩ蛍光染料により染色されている。これに対し
て、水銀ランプ！２上りの波長が５５０ｎｍ付近の可視
光を、光学フィルタ１３により選択して照射し、第２図
の微生物計数装置により検出すると、図（ｂ）に示す検
出信号の波高値の曲線かえられた。微生物に対する曲線
は照射時間の経過に対してあまり変化しないが、異物に
対する曲線は時間とともに低下して、１５分で約５０％
となり、２５分で３０％となる。このように、微生物に
対する波高値の変化が小さ（、異物に対して大きい理由
は、微生物においては蛍光染料が細胞の内部に浸透して
細胞自身が染色されており、照射光が表面に作用するの
みであるために、蛍光染料の脱色または波長変化が小さ
い。これに対して、この場合の異物はビールの原材料か
ら出るセルローズ、およびビールの製造工程中のろ過器
からの珪藻土などの無機質で、蛍光染料の吸収が少なく
、表面に付着しているのみであるために、照射光により
比較的Ｌ’、Ｌ（脱色し、または蛍光波長が変化する。
微生物計数装置では、蛍光の波長に合わせた光学フィル
タを使用しているので、脱色または波長が変化した異物
の反射光は排除されて、検出信号の波高値が低下するわ
けである。
タを使用しているので、脱色または波長が変化した異物
の反射光は排除されて、検出信号の波高値が低下するわ
けである。
次に、−り記の実験においては、時間間隔が５分ごとで
あるので、さらに短かく１分ごとに、上記の可視光の照
射による異物の検出個数の変化を測定した、試験対象と
して１０枚のメンブレンフィルタをとり、各検出数の平
均値を第１図（ｃ）の異物検出表に示す。照射時間が１
５分の時点で、１枚当たり０．６個の異物数が、１６分
でｂ減して０．３個となり、１８分で０となっている。
あるので、さらに短かく１分ごとに、上記の可視光の照
射による異物の検出個数の変化を測定した、試験対象と
して１０枚のメンブレンフィルタをとり、各検出数の平
均値を第１図（ｃ）の異物検出表に示す。照射時間が１
５分の時点で、１枚当たり０．６個の異物数が、１６分
でｂ減して０．３個となり、１８分で０となっている。
このように可視光の照射は有効である。上記においては
、照射光を特定の波長（５５０ｎｍ付近）としたが、必
ずしもこれに限定されるものではない。
、照射光を特定の波長（５５０ｎｍ付近）としたが、必
ずしもこれに限定されるものではない。
ただし、波長が長い場合には脱色作用が緩慢であるので
、良好な結果かえられない。また、紫外線が有効なこと
が知られており、いずれの場合も、実験により、微生物
の染色は変化せず、異物のそれが脱色するに適切な強度
と照射時間を定めるこ・とが必要である。
、良好な結果かえられない。また、紫外線が有効なこと
が知られており、いずれの場合も、実験により、微生物
の染色は変化せず、異物のそれが脱色するに適切な強度
と照射時間を定めるこ・とが必要である。
以ｔにより、異物の染料は脱色または波長が変化するが
、微生物のそれは変化しないか、または変化が少ないの
で、前記した従来の微生物計数装置により、異物の検出
が排除され、微生物のみが検出されるものである。
、微生物のそれは変化しないか、または変化が少ないの
で、前記した従来の微生物計数装置により、異物の検出
が排除され、微生物のみが検出されるものである。
［実施例］
以上に説明した方法により、メンブレンフィルタに捕捉
された液体中の微生物と、混在する無機質の異物に対し
て、短波長領域の可視光、または紫外線を実験データに
より、適当な強度で一定時間照射して異物の染料を脱色
した後、第２図に示した微生物計数装置により、微生物
のみの蛍光が検出して計数され、計数結果が記録器に出
力される。
された液体中の微生物と、混在する無機質の異物に対し
て、短波長領域の可視光、または紫外線を実験データに
より、適当な強度で一定時間照射して異物の染料を脱色
した後、第２図に示した微生物計数装置により、微生物
のみの蛍光が検出して計数され、計数結果が記録器に出
力される。
［発明の効果コ
以１−８の説明により明らかなように、この発明による
人物の検出排除方法においては、液体中に含有されメン
ブレンフィルタの濾過により捕捉された微生物と、混在
する異物が蛍光染料で染色された後、短波長領域の可視
光または紫外線の照射により、異物の染料が脱色または
波長が変化することに着目したもので、これにより、微
生物計数装置に設けられた蛍光の波長を通過帯域とする
光学フィルタにより、微生物のみが検出されるもので、
当初に述べたこの発明の発明者による、微生物と異物の
各種の区別方法に比較して簡易で有効なもので、微生物
の計数法に寄与するところには大きいものがある。
人物の検出排除方法においては、液体中に含有されメン
ブレンフィルタの濾過により捕捉された微生物と、混在
する異物が蛍光染料で染色された後、短波長領域の可視
光または紫外線の照射により、異物の染料が脱色または
波長が変化することに着目したもので、これにより、微
生物計数装置に設けられた蛍光の波長を通過帯域とする
光学フィルタにより、微生物のみが検出されるもので、
当初に述べたこの発明の発明者による、微生物と異物の
各種の区別方法に比較して簡易で有効なもので、微生物
の計数法に寄与するところには大きいものがある。
第１図（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）は、この発明による微
生物の計数法における異物の検出排除方法の基礎となる
実験と、その結果のデータの説明図、第２図は、特開昭
６３−５２４４７号「微生物計数法」に開示された微生
物計数装置の構成図である。 ｌ・・・レーザ光源、 ２・・・レーザビーム、
３・・・振動ミラー ４・・・投光レンズ、５・
・・メンブレンフィルタ、６・・・Ｙ方向移動台、７・
・・光学フィルタ、 ８・・・集光レンズ、９・・
・光電子増倍管、 ｌＯ・・・制御処理装置、１１・
・・記録器、 Ｉ２・・・水銀ランプ、Ｉ３
・・・光学フィルタ。
生物の計数法における異物の検出排除方法の基礎となる
実験と、その結果のデータの説明図、第２図は、特開昭
６３−５２４４７号「微生物計数法」に開示された微生
物計数装置の構成図である。 ｌ・・・レーザ光源、 ２・・・レーザビーム、
３・・・振動ミラー ４・・・投光レンズ、５・
・・メンブレンフィルタ、６・・・Ｙ方向移動台、７・
・・光学フィルタ、 ８・・・集光レンズ、９・・
・光電子増倍管、 ｌＯ・・・制御処理装置、１１・
・・記録器、 Ｉ２・・・水銀ランプ、Ｉ３
・・・光学フィルタ。
Claims (2)
- （１）、微生物を含有する液体試料をメンブレンフィル
タで濾過して捕捉された該メンブレンフィルタ上の該微
生物を蛍光染料で染色し、該メンブレンフィルタをレー
ザ光で走査し、該微生物より放射される蛍光を、該蛍光
の波長を通過帯域とする光学フィルタにより検出する微
生物の計数法において、上記染色の後、上記メンブレン
フィルタに一定時間、適当な強度の短波長領域の可視光
または紫外線を照射して、上記微生物に混在して上記染
色により染色された異物の蛍光染料を脱色し、または該
異物の蛍光染料が放射する蛍光波長を変移させて、上記
光学フィルタにより上記微生物のみの蛍光を検出するこ
とを特徴とする、微生物の計数法における異物の検出排
除方法。 - （２）、上記蛍光染料をプロビディウム・アイオダイド
（ＰＩ）とし、該蛍光染料により染色された上記メンブ
レンフィルタをの微生物および異物に対して、上記短波
長領域の可視光を、１５分ないし２０分程度照射する、
請求項１記載の微生物の計数法における異物の検出排除
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26337288A JPH02110349A (ja) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | 微生物の計数法における異物の検出排除方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26337288A JPH02110349A (ja) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | 微生物の計数法における異物の検出排除方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02110349A true JPH02110349A (ja) | 1990-04-23 |
Family
ID=17388576
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26337288A Pending JPH02110349A (ja) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | 微生物の計数法における異物の検出排除方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02110349A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009236513A (ja) * | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Ihi Corp | サンプリング装置およびこれを用いたサンプリング方法 |
| JP2011083214A (ja) * | 2009-10-14 | 2011-04-28 | Sharp Corp | 微生物検出装置および検出方法 |
-
1988
- 1988-10-19 JP JP26337288A patent/JPH02110349A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009236513A (ja) * | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Ihi Corp | サンプリング装置およびこれを用いたサンプリング方法 |
| JP2011083214A (ja) * | 2009-10-14 | 2011-04-28 | Sharp Corp | 微生物検出装置および検出方法 |
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