JPH02128695A - オリゴ糖の製造法 - Google Patents
オリゴ糖の製造法Info
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- JPH02128695A JPH02128695A JP27945388A JP27945388A JPH02128695A JP H02128695 A JPH02128695 A JP H02128695A JP 27945388 A JP27945388 A JP 27945388A JP 27945388 A JP27945388 A JP 27945388A JP H02128695 A JPH02128695 A JP H02128695A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、グルコシル基の１位の炭素がシー！糖のグル
コース残基０６位の炭素にα−グルコシド結合した転移
生成物（以下、チアンブロースと云う）の製造法に関す
る。
コース残基０６位の炭素にα−グルコシド結合した転移
生成物（以下、チアンブロースと云う）の製造法に関す
る。
（従来の技術）
チアンブロースは抗う蝕性を有することが知られている
［Ｊ、Ｄｅｎｔ、Ｒｅｓ、 ６３ ： １２９３
１２９７ （１９８４）、 Ｃａｒｂｏｌ＋ｙｄｒａｔ
ｅ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ １４７： １３５ １４４
（１９８６） ］。この好ましい特性を有するチアンブ
ロースは、安全性が高度に要求される食品素材の分野に
おいてその利用が期待されている。現在までに、チアン
ブロースの製造法としては、アスベルギルスナニガー（
Ａｓｐｅｒｇ目１ｕｓ ｎｉｇｅｒ ）のα−グルコシ
ダーゼを用いる方法（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、 ＋ ２
０６４（１９５７） ）とムコール・ジャバニカス（Ｍ
ｕｃｏｒ ｊａνａｎｉｃｕｓ ）のα−グルコシダー
ゼを用いる方法（澱粉科学、第３５巻、第２号、 ｐ
９３−１０２ （１９８８））が知られている。
［Ｊ、Ｄｅｎｔ、Ｒｅｓ、 ６３ ： １２９３
１２９７ （１９８４）、 Ｃａｒｂｏｌ＋ｙｄｒａｔ
ｅ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ １４７： １３５ １４４
（１９８６） ］。この好ましい特性を有するチアンブ
ロースは、安全性が高度に要求される食品素材の分野に
おいてその利用が期待されている。現在までに、チアン
ブロースの製造法としては、アスベルギルスナニガー（
Ａｓｐｅｒｇ目１ｕｓ ｎｉｇｅｒ ）のα−グルコシ
ダーゼを用いる方法（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、 ＋ ２
０６４（１９５７） ）とムコール・ジャバニカス（Ｍ
ｕｃｏｒ ｊａνａｎｉｃｕｓ ）のα−グルコシダー
ゼを用いる方法（澱粉科学、第３５巻、第２号、 ｐ
９３−１０２ （１９８８））が知られている。
（発明が解決しようとする課題）
従来のチアンブロースの製造法は、収率が低く、工業的
プロセスとしては満足できるものではなかった。本発明
は、チアンブロースを効率よく製造しようとするもので
ある。
プロセスとしては満足できるものではなかった。本発明
は、チアンブロースを効率よく製造しようとするもので
ある。
（課題を解決するための手段）
本発明者らは、ムコール属に属しグルコシル基を転移さ
せる能力を有する微生物の菌体または菌体抽出物と、グ
ルコシル基供与体およびショ糖を反応媒体中で共存させ
、グルコシル基をグルコシル基供与体よりシ＝ＩｔＪ！
に転移させたチアンブロースを生成させ、反応媒体より
チアンブロースを採取する工程を改良するため鋭意検討
を重ねた結果、チアンブロースを採取する工程で膜を利
用することにより、菌体または菌体抽出物とチアンブロ
ースとを、また、チアンブロースと未反応のショ糖とを
効率よく分離できることを見出し、本発明を完成した。
せる能力を有する微生物の菌体または菌体抽出物と、グ
ルコシル基供与体およびショ糖を反応媒体中で共存させ
、グルコシル基をグルコシル基供与体よりシ＝ＩｔＪ！
に転移させたチアンブロースを生成させ、反応媒体より
チアンブロースを採取する工程を改良するため鋭意検討
を重ねた結果、チアンブロースを採取する工程で膜を利
用することにより、菌体または菌体抽出物とチアンブロ
ースとを、また、チアンブロースと未反応のショ糖とを
効率よく分離できることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、ムコール属に属しグルコシル基を
転移させる能力を有する微生物の菌体または菌体抽出物
と、グルコシル基供与体およびショ糖を反応媒体中で共
存させることにより、グルコシル基の１位の炭素をショ
糖のグルコース残基の６位の炭素にα−グルコシド結合
した転移生成物を生成させ、同反応媒体よりこの転移生
成物を採取する工程において、前記菌体または菌体抽出
物、前記転移生成物、未反応のショ糖または未反応のグ
ルコシル供与体のうち少なくとも一種を膜を用いて反応
媒体中から分離する工程を含むことを特徴とするオリゴ
糖の製造法である。
転移させる能力を有する微生物の菌体または菌体抽出物
と、グルコシル基供与体およびショ糖を反応媒体中で共
存させることにより、グルコシル基の１位の炭素をショ
糖のグルコース残基の６位の炭素にα−グルコシド結合
した転移生成物を生成させ、同反応媒体よりこの転移生
成物を採取する工程において、前記菌体または菌体抽出
物、前記転移生成物、未反応のショ糖または未反応のグ
ルコシル供与体のうち少なくとも一種を膜を用いて反応
媒体中から分離する工程を含むことを特徴とするオリゴ
糖の製造法である。
本発明において、グルコシル基供与体からショ糖にグル
コシル基を転移させることができる微生物として、ムコ
ール（Ｍｕｃｏｒ ）属に属する微生物を使用する。こ
の属に属し、グルコシル基供与体からショ糖にグルコシ
ル基を転移させることができる微生物であれば、すべて
の菌株を、本発明に使用することができる。これらの代
表例として、例えば、ムコール・ジャバニカス（Ｍｕｃ
ｏｒ ｊａｖａｎｊｃｕｓ）ＩＦＯ４５７０を挙げるこ
とができる。
コシル基を転移させることができる微生物として、ムコ
ール（Ｍｕｃｏｒ ）属に属する微生物を使用する。こ
の属に属し、グルコシル基供与体からショ糖にグルコシ
ル基を転移させることができる微生物であれば、すべて
の菌株を、本発明に使用することができる。これらの代
表例として、例えば、ムコール・ジャバニカス（Ｍｕｃ
ｏｒ ｊａｖａｎｊｃｕｓ）ＩＦＯ４５７０を挙げるこ
とができる。
この菌株は、財団法人 発酵研究所（Ｉｎｓｔｉ ｔｕ
ｔｅｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ、 ０ｓａｋａ）
から誰でも自由に入手することができる。
ｔｅｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ、 ０ｓａｋａ）
から誰でも自由に入手することができる。
本発明において、使用することのできる培地としては、
前述微生物が培養により増殖できるものであれば、任意
の天然培地または合成培地でよい。
前述微生物が培養により増殖できるものであれば、任意
の天然培地または合成培地でよい。
例えば、炭素源としては、ブドウ糖、糖蜜、ショ糖、デ
ンプン、デンプン糖化液、セルロース分解物等が用いら
れる。窒素源としては、アンモニア、硫安、硝安、燐安
等のアンモニア塩や尿素、硝酸塩類等が適宜用いられる
。無機塩としては、燐酸、カリウム、マグネシウム等の
塩類、例えば、燐酸アンモニウム、燐酸カリ、燐酸ソー
ダ、硫酸マグネシウム等の通常の工業用薬品でよく、他
に微量元素を加えてもよい。また、微量有機栄養素とし
て、ビタミン類、アミノ酸、核酸関連物質等は、菌の生
育上は特別に必要とするものではないが、これらを添加
したり、コーンスチーブリカー（Ｃ。
ンプン、デンプン糖化液、セルロース分解物等が用いら
れる。窒素源としては、アンモニア、硫安、硝安、燐安
等のアンモニア塩や尿素、硝酸塩類等が適宜用いられる
。無機塩としては、燐酸、カリウム、マグネシウム等の
塩類、例えば、燐酸アンモニウム、燐酸カリ、燐酸ソー
ダ、硫酸マグネシウム等の通常の工業用薬品でよく、他
に微量元素を加えてもよい。また、微量有機栄養素とし
て、ビタミン類、アミノ酸、核酸関連物質等は、菌の生
育上は特別に必要とするものではないが、これらを添加
したり、コーンスチーブリカー（Ｃ。
ｒｎ ５ｔｅｅｐ １ｉｑｕｏｒ ） 、肉エキス、酵
母エキス、ペプトン等の有機物を加えてもよい。これら
の培地は、液体培地、固体培地のいずれの形でも使用す
ることができる。代表的な培地組成としては、例えば、
可溶性デンプン４ｇ１コーンスチープリカ−（ｐＨ５，
３〜ｐＨ５，８）３ｇ、ＩＪａＮＯｚ ０．５ｇ１ Ｋ
ＨｚＰＯａ Ｏ，１ｇ、 ＭｇＳＯ４・７＋Ｉ□Ｏ０，
０５ｇ 、 ＫＣｌ０．０５ｇから成る天然培地（各成
分を蒸留水に溶解して１１とする）が挙げられる。
母エキス、ペプトン等の有機物を加えてもよい。これら
の培地は、液体培地、固体培地のいずれの形でも使用す
ることができる。代表的な培地組成としては、例えば、
可溶性デンプン４ｇ１コーンスチープリカ−（ｐＨ５，
３〜ｐＨ５，８）３ｇ、ＩＪａＮＯｚ ０．５ｇ１ Ｋ
ＨｚＰＯａ Ｏ，１ｇ、 ＭｇＳＯ４・７＋Ｉ□Ｏ０，
０５ｇ 、 ＫＣｌ０．０５ｇから成る天然培地（各成
分を蒸留水に溶解して１１とする）が挙げられる。
培養は、振盪、通気攪拌等による好気条件で行うのが好
ましいが、静置状態で行うこともできる。
ましいが、静置状態で行うこともできる。
培養温度は、２０°Ｃから３５°Ｃの範囲が可能で、３
０°Ｃ付近が好ましい。培養中のｐＨは、４から８とす
ることが可能で、好ましくはｐＨ５付近である。
０°Ｃ付近が好ましい。培養中のｐＨは、４から８とす
ることが可能で、好ましくはｐＨ５付近である。
グルコシル基供与体からショ糖へのグルコシル基の転移
反応は、菌体または菌体抽出物とグルコシル基供与体と
ショ糖とを、反応媒体中で共存せしめることにより行う
。ここで菌体とは、微生物を培養した培地中に存在する
菌体および培地から常法にしたがって、−旦分離された
菌体の両昔を意味する。また、菌体抽出物とは、菌体破
砕物および限外濾過法、硫安塩析法、溶媒性でん法、ゲ
ル濾過法、イオン交換クロマト法等の常法にしたがって
部分精製されたグルコシル基転移活性を有する酵素含有
物を意味する。反応媒体とは、微生物を培養した培地、
緩衝液例えば、燐酸緩衝液、酢酸緩衝液等を挙げること
ができる。グルコシル基供与体とは、グルコシル基がグ
ルコシド結合した三糖類以上のオリゴ糖および多糖類で
あり、例えば、可溶性デンプン、デンプン部分可水分解
物、アミロース、マルト−ス、マルトトリオース、マル
トテトラオース 本転移反応のｐＨは、３から９までが可能で、好ましく
はｐＨ５前後である。反応温度は、２０°Ｃから７０°
Ｃが可能で、好ましくは５０°Ｃ前後である。
反応は、菌体または菌体抽出物とグルコシル基供与体と
ショ糖とを、反応媒体中で共存せしめることにより行う
。ここで菌体とは、微生物を培養した培地中に存在する
菌体および培地から常法にしたがって、−旦分離された
菌体の両昔を意味する。また、菌体抽出物とは、菌体破
砕物および限外濾過法、硫安塩析法、溶媒性でん法、ゲ
ル濾過法、イオン交換クロマト法等の常法にしたがって
部分精製されたグルコシル基転移活性を有する酵素含有
物を意味する。反応媒体とは、微生物を培養した培地、
緩衝液例えば、燐酸緩衝液、酢酸緩衝液等を挙げること
ができる。グルコシル基供与体とは、グルコシル基がグ
ルコシド結合した三糖類以上のオリゴ糖および多糖類で
あり、例えば、可溶性デンプン、デンプン部分可水分解
物、アミロース、マルト−ス、マルトトリオース、マル
トテトラオース 本転移反応のｐＨは、３から９までが可能で、好ましく
はｐＨ５前後である。反応温度は、２０°Ｃから７０°
Ｃが可能で、好ましくは５０°Ｃ前後である。
本発明の工程で使用する膜は、反応系から菌体を分離す
る場合は、菌体の通過を防止できるものであればいずれ
の膜でもよい。例えば、濾布、ミクロフィルター、セラ
ミックフィルター、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる
。また、菌体抽出物を分離する場合は、菌体抽出物に含
まれるα〜グルコシダーゼの分子量が約１２，５万ダル
トンである〔八Ｂｉｃ，Ｒｉｏ１．Ｃｈｅｍ．， ４０
：１９０９ １９１５ （１９７６）〕ことより、
この酵素の通過を防１１−できる膜であればよい。例え
ば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる。未反応のグル
コシル基供与体を分離する際も同様である。また、未反
応のショ糖とチアンブロースを分離する場合は、分子分
画量が３４２より大きくて５０４より小さい膜であれば
よく、例えば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる。
る場合は、菌体の通過を防止できるものであればいずれ
の膜でもよい。例えば、濾布、ミクロフィルター、セラ
ミックフィルター、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる
。また、菌体抽出物を分離する場合は、菌体抽出物に含
まれるα〜グルコシダーゼの分子量が約１２，５万ダル
トンである〔八Ｂｉｃ，Ｒｉｏ１．Ｃｈｅｍ．， ４０
：１９０９ １９１５ （１９７６）〕ことより、
この酵素の通過を防１１−できる膜であればよい。例え
ば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる。未反応のグル
コシル基供与体を分離する際も同様である。また、未反
応のショ糖とチアンブロースを分離する場合は、分子分
画量が３４２より大きくて５０４より小さい膜であれば
よく、例えば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる。
この際、副生成物のグルコースも同時に除去できる。
本発明の工程は、」−記の膜による分離工程を少なくと
も一種用いるものであるが、組合せて行うことにより、
より反応効率を向上させることができる。
も一種用いるものであるが、組合せて行うことにより、
より反応効率を向上させることができる。
また、本発明の膜利用による前述のチアンブロースとシ
ョ糖との分離に関しては、分画分子量が３４２より大き
くて５０４より小さい膜ならば、いずれの膜でも利用可
能である。例えば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる
。
ョ糖との分離に関しては、分画分子量が３４２より大き
くて５０４より小さい膜ならば、いずれの膜でも利用可
能である。例えば、限外濾過膜、透析膜等が挙げられる
。
本発明のチアンブロースは、ショ零唐にα−グルコシダ
ーゼを作用させて得られる転移糖組成物から、例えば、
カーボンクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー等の手段で単離精製することは可能であるが、実
用的には、原料であるショ糖と反応の副生成物であるグ
ルコースが混入したものを、非う触性または低う触性の
甘味料として用いることが好ましい。さらに、チアンブ
ロース（上記混入物を含むチアンブロース）に、非う触
性または低う触性を失わない範囲で、グルコース、ガラ
クトース、フラク［・−ス、ラクトース等のｌＪ！１な
らびにソルビトール、マンニトール、マンニトール等の
糖アルコールならびにアスパルテーム、グリチルリチン
、レバウリオシド、デヒドロカルコン、ステビオシト等
の高度甘味料を添加して用いることもできる。
ーゼを作用させて得られる転移糖組成物から、例えば、
カーボンクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー等の手段で単離精製することは可能であるが、実
用的には、原料であるショ糖と反応の副生成物であるグ
ルコースが混入したものを、非う触性または低う触性の
甘味料として用いることが好ましい。さらに、チアンブ
ロース（上記混入物を含むチアンブロース）に、非う触
性または低う触性を失わない範囲で、グルコース、ガラ
クトース、フラク［・−ス、ラクトース等のｌＪ！１な
らびにソルビトール、マンニトール、マンニトール等の
糖アルコールならびにアスパルテーム、グリチルリチン
、レバウリオシド、デヒドロカルコン、ステビオシト等
の高度甘味料を添加して用いることもできる。
（発明の効果）
本発明によれば、可溶性デンプンとショ糖およびグルコ
シル基を転移させる能力を有する微生物を用いて、抗う
触性を有するチアンブロースを製造するに当たり、膜を
利用してチアンブロースを分離することにより、効率よ
く生産することができる。
シル基を転移させる能力を有する微生物を用いて、抗う
触性を有するチアンブロースを製造するに当たり、膜を
利用してチアンブロースを分離することにより、効率よ
く生産することができる。
（実施例）
以下、本発明を具体的に説明するために実施例を挙げて
説明するが、本発明は、これらの実施例により限定され
るものではない。
説明するが、本発明は、これらの実施例により限定され
るものではない。
実施例１
本実施例は、ムコール・ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒｊａ
ｖａｎｉｃｕｓ ） Ｉ Ｆ ０ ４ ５ ７ ０の
細胞抽出液を用いて、可溶性デンプンからショ糖にグル
コシルを転移させ、膜分離技術を利用してテアンデ［１
−スを含む甘味料を取得した例である。
ｖａｎｉｃｕｓ ） Ｉ Ｆ ０ ４ ５ ７ ０の
細胞抽出液を用いて、可溶性デンプンからショ糖にグル
コシルを転移させ、膜分離技術を利用してテアンデ［１
−スを含む甘味料を取得した例である。
（１） Ｍ．ｊａｖａｎｉｃｕｓ Ｉ Ｆ Ｏ ４
５ ７ ０からの細胞抽出液の調製 財団法人 発酵研究所より分譲を受けたＭ．ｊａｖａｎ
ｉｃｕｓ Ｉ Ｆ ０ ４ ５ ７ ０を、１００
ｄの天然培地〔可溶性デンプン４ｇ、コーンスチーブリ
力−（Ｐ Ｈ５． ５〜ｐ Ｈ５． ８） ３ ｇ
， ＮａＮＯ：＋ ０．５ ｇ。
５ ７ ０からの細胞抽出液の調製 財団法人 発酵研究所より分譲を受けたＭ．ｊａｖａｎ
ｉｃｕｓ Ｉ Ｆ ０ ４ ５ ７ ０を、１００
ｄの天然培地〔可溶性デンプン４ｇ、コーンスチーブリ
力−（Ｐ Ｈ５． ５〜ｐ Ｈ５． ８） ３ ｇ
， ＮａＮＯ：＋ ０．５ ｇ。
ＫＬＰＯ４０．１ ｇ 、 ＭｇＳＯａ・ＩＨｚＯ
Ｏ．０５ ｇ 、 ＫＣＩ Ｏ。
Ｏ．０５ ｇ 、 ＫＣＩ Ｏ。
０５ｇを蒸留水に溶解してＩｆとする〕の５００戚フラ
スコ中で、３０°Ｃで２日間振盪培養した。同培養液５
ｄを、１００ｄの前記天然培地を入れた５００ｄフラス
コに移植して、３０°Ｃで２日間振盪培養した。同方法
で培養したフラスコ３００本から濾過により集菌し、脱
イオン水で洗浄後、２０°Ｃで保存した。同菌体を尿素
４Ｍを含んだ１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，３）５．Ｉｊｌ
！に懸濁し、３０°Ｃで４８時間抽出した。同抽出液よ
り濾過により菌体残渣を除去した後、同濾過液をＯ′Ｃ
に冷却した。次に、同濾過液に、−２０°Ｃに冷却した
アセトンを５０％（Ｖ／Ｖ）になるまで撹拌しながら添
加した。同液から遠心分離により沈澱を除去した後、Ｉ
Ｍ ＣａＣ１ｇ水溶液を１．４５ｄ添加した。同抽出
液にポリエチレングリコール６０００を２０％（Ｖ／Ｗ
）まで添加した後、４°Ｃで１時間静置し、生じた沈澱
を遠心分離し、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，３）５
０戚に溶解し、同液を細胞抽出液として以後の操作に用
いた。
スコ中で、３０°Ｃで２日間振盪培養した。同培養液５
ｄを、１００ｄの前記天然培地を入れた５００ｄフラス
コに移植して、３０°Ｃで２日間振盪培養した。同方法
で培養したフラスコ３００本から濾過により集菌し、脱
イオン水で洗浄後、２０°Ｃで保存した。同菌体を尿素
４Ｍを含んだ１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，３）５．Ｉｊｌ
！に懸濁し、３０°Ｃで４８時間抽出した。同抽出液よ
り濾過により菌体残渣を除去した後、同濾過液をＯ′Ｃ
に冷却した。次に、同濾過液に、−２０°Ｃに冷却した
アセトンを５０％（Ｖ／Ｖ）になるまで撹拌しながら添
加した。同液から遠心分離により沈澱を除去した後、Ｉ
Ｍ ＣａＣ１ｇ水溶液を１．４５ｄ添加した。同抽出
液にポリエチレングリコール６０００を２０％（Ｖ／Ｗ
）まで添加した後、４°Ｃで１時間静置し、生じた沈澱
を遠心分離し、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，３）５
０戚に溶解し、同液を細胞抽出液として以後の操作に用
いた。
（２）チアンブロース含有甘味料の調製可溶性デンプン
３％（Ｗ／Ｖ）、シー！糖１７％を含む０．０５Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ５）３１に、Ｍ、ｊａｖａｎｉｃｕｓ
Ｔ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液０．３ｄＣ前記実
施例１−（１）で取得した細胞抽出液〕を加えて、５０
°Ｃで６時間反応させた。得られた反応液を、１００°
Ｃで１５分間加熱した後、３ｇの活性炭（武田薬品工業
株式会社より購入した白、％ｔＡ）を添加し、５０°Ｃ
で１時間攪拌して脱色を行った。活性炭を除去した後、
アンバーライトＩＲ・１２０およびアンバーライトＩＲ
Ａ・４００のイオン交換樹脂で処理した。次に、分子量
分画５００の限外濾過膜（アトバンチツク東洋株式会社
より購入したウルトラフィルター）により、濃縮と水に
より希釈を繰り返し、チアンブロース３６％、ショ糖３
６％、グルコース２％、可溶性デンプン２７％の糖組成
を有する非う練性または低う練性の甘味料を調製した後
、７０％（Ｗ／Ｗ）濃度に濃縮して非う練性または低う
練性の甘味料２１４ｇを取得した。
３％（Ｗ／Ｖ）、シー！糖１７％を含む０．０５Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ５）３１に、Ｍ、ｊａｖａｎｉｃｕｓ
Ｔ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液０．３ｄＣ前記実
施例１−（１）で取得した細胞抽出液〕を加えて、５０
°Ｃで６時間反応させた。得られた反応液を、１００°
Ｃで１５分間加熱した後、３ｇの活性炭（武田薬品工業
株式会社より購入した白、％ｔＡ）を添加し、５０°Ｃ
で１時間攪拌して脱色を行った。活性炭を除去した後、
アンバーライトＩＲ・１２０およびアンバーライトＩＲ
Ａ・４００のイオン交換樹脂で処理した。次に、分子量
分画５００の限外濾過膜（アトバンチツク東洋株式会社
より購入したウルトラフィルター）により、濃縮と水に
より希釈を繰り返し、チアンブロース３６％、ショ糖３
６％、グルコース２％、可溶性デンプン２７％の糖組成
を有する非う練性または低う練性の甘味料を調製した後
、７０％（Ｗ／Ｗ）濃度に濃縮して非う練性または低う
練性の甘味料２１４ｇを取得した。
さらに、限外濾過膜を通過した液を用いて、次のグルコ
ース転移反応液〔可溶性デンプン３％、ショ糖１７％を
含む酢酸緩衝液（ｐＨ５，０））を調製し、同様の操作
を繰り返すことにより、本甘味料製造におけるショ糖の
有効利用率を７０％以上にすることができた。
ース転移反応液〔可溶性デンプン３％、ショ糖１７％を
含む酢酸緩衝液（ｐＨ５，０））を調製し、同様の操作
を繰り返すことにより、本甘味料製造におけるショ糖の
有効利用率を７０％以上にすることができた。
一方、反応生成物の分析は、液体クロマトグラフィー装
置［ウォーターズＭ６００マルチ送液システム、ウォー
ターズＲ−４０３型偏向指差屈折計、ウォーターズマイ
クロボンダパックＣＨ（３゜９ｍｍＸ３０ｃｍ）、溶媒
ニアセトニトリル−水（８０：２０）、流速： １．
８ｍｊ！／ｌｌ１ｉｎ ）で行った。
置［ウォーターズＭ６００マルチ送液システム、ウォー
ターズＲ−４０３型偏向指差屈折計、ウォーターズマイ
クロボンダパックＣＨ（３゜９ｍｍＸ３０ｃｍ）、溶媒
ニアセトニトリル−水（８０：２０）、流速： １．
８ｍｊ！／ｌｌ１ｉｎ ）で行った。
実施例２
本実施例は、チアンブロースを含有した甘味料を調製す
る工程において、限外濾過工程により、酵素および未反
応可溶性デンプンを除去、再利用した例である。
る工程において、限外濾過工程により、酵素および未反
応可溶性デンプンを除去、再利用した例である。
可溶性デンプン３％（Ｗ／Ｖ）、シヨＩ！１７％を含む
０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５）：Ｍ！に、Ｍ、ｊａｖ
ａｎｉｃｕｓ Ｉ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液
０．３＋＋１（前記実施例１−（１）で取得した細胞抽
出液〕を加えて、５０°Ｃで６時間反応させた。得られ
た反応液を、分子量分画１０００の限外濾過膜（アトバ
ンチツク東洋株式会社より購入したウルトラフィルター
）により３倍濃縮を行った。得られた限外濾過液に、２
ｇの活性炭（武田薬品工業株式会社より購入した白鷺Ａ
）を添加し、５０’Ｃで１時間撹拌して脱色を行った。
０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５）：Ｍ！に、Ｍ、ｊａｖ
ａｎｉｃｕｓ Ｉ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液
０．３＋＋１（前記実施例１−（１）で取得した細胞抽
出液〕を加えて、５０°Ｃで６時間反応させた。得られ
た反応液を、分子量分画１０００の限外濾過膜（アトバ
ンチツク東洋株式会社より購入したウルトラフィルター
）により３倍濃縮を行った。得られた限外濾過液に、２
ｇの活性炭（武田薬品工業株式会社より購入した白鷺Ａ
）を添加し、５０’Ｃで１時間撹拌して脱色を行った。
活性炭を除去した後、アンバーライトＩＲ・１２０およ
びアンバーライトＩＲＡ・４００のイオン交換樹脂で処
理することにより、チアンブロース９％、ショ糖８５％
、マルトオリゴｖＭ３％、グルコース３％の糖組成を有
する甘味料を調製した後、７０％（Ｗ／Ｗ）濃度に濃縮
して、３８５ｇの甘味料を取得しさらに、本限外濾過膜
を通過しなかった液を用いて、次のグルコース転移反応
液〔可溶性デンプン３％、ショ糖１７％を含む酢酸緩衝
液（ｐＨ５゜０）〕を調製することにより、酵素と残存
可溶性デンプンを再利用して、同様の操作を繰り返した
。
びアンバーライトＩＲＡ・４００のイオン交換樹脂で処
理することにより、チアンブロース９％、ショ糖８５％
、マルトオリゴｖＭ３％、グルコース３％の糖組成を有
する甘味料を調製した後、７０％（Ｗ／Ｗ）濃度に濃縮
して、３８５ｇの甘味料を取得しさらに、本限外濾過膜
を通過しなかった液を用いて、次のグルコース転移反応
液〔可溶性デンプン３％、ショ糖１７％を含む酢酸緩衝
液（ｐＨ５゜０）〕を調製することにより、酵素と残存
可溶性デンプンを再利用して、同様の操作を繰り返した
。
一方、反応生成物の分析は、実施例１と同じ方法で行っ
た。
た。
実施例３
本実施例は、チアンブロースを含有した非う触性または
低う触性の往味料を調製する工程において、反応組成物
より、酵素、残存可溶性デンプン、残存ショ糖を再利用
した例である。
低う触性の往味料を調製する工程において、反応組成物
より、酵素、残存可溶性デンプン、残存ショ糖を再利用
した例である。
可溶性デンプン３％（Ｗ／Ｖ）、ショ糖１７％を含む０
．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５）３ｐに、Ｍ、ｊａｖａｎ
ｉｃｕｓ Ｋ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液０．
３ｄ（前記実施例１−（１）で取得した細胞抽出液〕を
加えて、５０°Ｃで６時間反応させた。得られた反応液
を、分子量分画１０００の限夕）濾過膜（アドハンテン
ク東洋株式会社より購入したウルトラフィルター）によ
り３倍濃縮を行った。次に、得られた濾過液を、分画分
子量５００の限外濾過膜（アドハンテソク東洋株式会社
より購入したウルトラフィルター）により、濃縮と水に
よる希釈を繰り返し、チアンブロース４３％、ショ糖４
３％、フル１−オリゴ糖１４％の糖組成を有するせ味糖
を調製し７た。得られた１」”味料溶液に、２ｇの活性
炭（武田薬品工業株式会社より購入した白鷺Ａ）を添加
し、５０°Ｃで１時間攪拌して脱色を行った。活性炭を
除去した後、アンパーラ、（ｌ−Ｉ Ｒ・１２０および
アンバーライトＩＲＡ・４００のイオン交換樹脂で処理
し、さらに、７０％ｗ ／ ｗ濃度に濃縮して、非・う
触性または低う触性の甘味料９７ｇを取得した。
．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５）３ｐに、Ｍ、ｊａｖａｎ
ｉｃｕｓ Ｋ Ｆ Ｏ４５７０由来の細胞抽出液０．
３ｄ（前記実施例１−（１）で取得した細胞抽出液〕を
加えて、５０°Ｃで６時間反応させた。得られた反応液
を、分子量分画１０００の限夕）濾過膜（アドハンテン
ク東洋株式会社より購入したウルトラフィルター）によ
り３倍濃縮を行った。次に、得られた濾過液を、分画分
子量５００の限外濾過膜（アドハンテソク東洋株式会社
より購入したウルトラフィルター）により、濃縮と水に
よる希釈を繰り返し、チアンブロース４３％、ショ糖４
３％、フル１−オリゴ糖１４％の糖組成を有するせ味糖
を調製し７た。得られた１」”味料溶液に、２ｇの活性
炭（武田薬品工業株式会社より購入した白鷺Ａ）を添加
し、５０°Ｃで１時間攪拌して脱色を行った。活性炭を
除去した後、アンパーラ、（ｌ−Ｉ Ｒ・１２０および
アンバーライトＩＲＡ・４００のイオン交換樹脂で処理
し、さらに、７０％ｗ ／ ｗ濃度に濃縮して、非・う
触性または低う触性の甘味料９７ｇを取得した。
次に、分画分子量１０００の限外濾過膜を通過しなかっ
た液と分画分子ｆｆ１５００の限外濾過膜を通過した液
とを用いて、次回のグルコース転移反応液を調製するこ
とにより、酵素、残存可溶性デンプン、ショ糖を再利用
して、同様の操作を繰り返した。
た液と分画分子ｆｆ１５００の限外濾過膜を通過した液
とを用いて、次回のグルコース転移反応液を調製するこ
とにより、酵素、残存可溶性デンプン、ショ糖を再利用
して、同様の操作を繰り返した。
一方、反応生成物の分析は、実施例１と同し７方法で行
った。
った。
Claims (1)
- ムコール属に属しグルコシル基を転移させる能力を有す
る微生物の菌体または菌体抽出物と、グルコシル基供与
体およびショ糖を反応媒体中で共存させることにより、
グルコシル基の１位の炭素をショ糖のグルコース残基の
６位の炭素にα−グルコシド結合した転移生成物を生成
させ、同反応媒体よりこの転移生成物を採取する工程に
おいて、前記菌体または菌体抽出物、前記転移生成物、
未反応のショ糖または未反応のグルコシル供与体のうち
少なくとも一種を膜を用いて反応媒体中から分離する工
程を含むことを特徴とするオリゴ糖の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27945388A JPH02128695A (ja) | 1988-11-07 | 1988-11-07 | オリゴ糖の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27945388A JPH02128695A (ja) | 1988-11-07 | 1988-11-07 | オリゴ糖の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02128695A true JPH02128695A (ja) | 1990-05-17 |
Family
ID=17611277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27945388A Pending JPH02128695A (ja) | 1988-11-07 | 1988-11-07 | オリゴ糖の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02128695A (ja) |
-
1988
- 1988-11-07 JP JP27945388A patent/JPH02128695A/ja active Pending
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