JPH02129127A - 改良された赤血球保存液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は赤血球の長期保存に有効な改良された赤血球保
存液に関する。

（従来の技術） （発明が解決しようとする問題点） 輸血又は輸血検査薬に用いられる赤血球は、−般的ｊこ
血液抗凝固剤とブドウ糖からなるＡＣＤ液や、ＡＣＤ液
にリン酸塩を加えたＣＰＤ液、またはアルセパ−氏液等
様々な保存液に保存されている。しかし、これら既存の
保存液を用いて赤血球を保存した場合、１ケ月も経過し
ないうちに溶血性の亢進や赤血球の褐色化を生じる。

そこで、アデニン及びイノシンを添加して保存中の赤血
球機能の劣化を防ぐ試み（日本医師会雑誌第７５巻第１
号１５〜２８頁、１９７６年）や、ソルビット又はキシ
リットを添加する方法（特開昭５９−２１６２１　’）
　、コレステロールを添加する方法（Ｕ　Ｓ　Ｐ　　４
４３２７５０　）　、アルブミンを添加する方法（特開
昭５７−７４１９）　、等が開示され、これらの方法に
よって保存に伴う溶血性の光道をかなり抑える事ができ
るようになった。さらに、赤血球の褐色化を防ぐ手段と
して、−酸化炭素処理を行う方法も研究されている。し
かし、これらの方法を用いた場合でも、赤血球を安定し
て保存できるのはせいぜい１〜３ケ月間で、それ以上の
長期になると、やはり溶血性の亢進や赤血球の褐色化等
を生じて来る。

本発明は赤血球の長期保存に伴う赤血球の劣化、すなわ
ち溶血性の亢進や褐色化を防ぎ、さらに赤血球膜抗原の
活性を長期間にわたり維持できる改良された赤血球保存
液を提供するものである。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは前記問題点を解決すべく鋭意研究した結果
、従来の保存液に特定の成分を加えることにより、保存
中に生ずる被凝集性の低下や溶血性の亢進、さらには赤
血球の褐色化等をも防ぐことができるということを見出
し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は、従
来の保存液にグルタチオン、グルタミン、カコジル酸、
バルビッール酸、Ｇｏｏｄ緩衝剤、Ｂｒ１ｔｔｏｎとＲ
ｏｂｉｎｓｏｎの緩衝剤よりなる群から選択される１種
又は２種以上の成分を１〜２００ｍＭ含むことを特徴と
する改良された赤血球保存液を提供するものである。こ
こでいうカゴシル酸、バルビッール酸とは各々のナトリ
ウム塩、カリウム塩等の塩をも含むものとする。

また、Ｇｏｏｄ緩衝剤とは Ｎ−Ｔｒ　ｉ　ｓ　（ｈ７ｄ　ｒｏｘ７ｍｅ　ｌｈ７１
）　ｍｅ　ｌｈ７　ｌ−２−ｈ７ｄ　ｒａ！！−３−ａ
ｍｉｎｏｐ＋ｏｐａｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　
（以下ＴＡＰＳＯと略す）Ｎ−Ｔｒｉｓ　（ｈ７ｄｒｏ
ｘｙ＋ｎｅｔｈ７１）ｍｅｌｈ７１−２−ａｍｉｎｏｅ
ｌｈａｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　　（以下ＴＥ
Ｓと略す）、３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｐｒｏ
ｐａｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　（以下ＭＯＰＳ
と略す）、 ３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）−２−ｂ７ｄｒｏｘ
７ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃａｃｉｄ　（以下Ｍ
ＯＰＳＯと略す）、Ｐｉｐｅｒａｔｉｎｅ−Ｎ、Ｎ’　
−ｂｉｔ（２−ｅｔｂａｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉ
ｄ）（以下ＰＩＰＥＳと略す）、 Ｐｉｐｅｒａｔｉｎｅ−Ｎ、Ｎ’　−ｂｉｓ（２−ｈ７
ｄｒｏｘ７ｐｒｏｐｔｎｅｓｕｌ−１ｏｎｉｃ　ａｃｉ
ｄ）　　（以下ｐｏｐｓｏと略す）、３−　（Ｎ、　Ｎ
−Ｂ１５　（２−ｈ７ｄｒｏｘ７ｅｔｈ７１）　＊ｍ１
ｎｏ）　−２−ｈ７ｄｒｏｘ−７ｐｔｏｐａｎｅｓｕｌ
ｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（以下Ｄ　Ｉ　ＰＳＯと略す）、
ＮＪ−１１７ｄｒｏｘ７ｅｔｈ７１ｐｉｐｅｔａｔｉｎ
ｅ−Ｎ’　−３−ｐｔｏｐ＊ｎｅｓｕｌ−ｆｏｎｉｃ　
ａｃｉｄ（以下ＥＰＰＳと略す）、Ｎ−２−Ｈ７ｄｒｏ
ｒ７ｅｌｈ７１ｐｉｐｅｒ＊ｘｉｎｅ−Ｎ’　−２−ｅ
ｔｈｓｎｅｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（以下ＨＥＰＥ
Ｓと略す）、Ｎ−２−ｔ１７ｄｔｏｒ７ｅｌｈ７１ｐｉ
ｐｅｔａｔｉｎｅ−Ｎ’　−２−ｂ７ｄｒｏｘｙｐｒｏ
−ｐａｎｅ−３−ｓｕｌｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　（以下
ＨＥＰＰＳＯと略す）Ｎ−（２−＾ｃｅｌａｍｉｄｏ）
−２−ａｍｉｎｏｅｌｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　　ｇ
ｃｉｄ（以下ＡＣＥＳと略す）、 Ｎ−（２−＾ｃｅｌａｍｉｄｏ）　１ｍ１ｎｏｄｉａｃ
ｅｌｉｃ　１ｃｉｄ　（以下ＡＤＡと略す）、 等を指し、これらは通常、単独または混合して水溶液で
用いられる。

また、Ｂｒ１ｔｔｏｎとＲｏｂｉｎｓｏｎの緩衝剤とは
、クエン酸及びリン酸二水素カリウム及びホウ酸及びバ
ルビッール酸の等モル混合物で、通常その合計濃度が１
６０ｍＭ以下の水溶液として用いられる。（Ｊ、　Ｃｈ
ｅｍ、Ｓｏｅ、、　　１９３１．　４５８．１４５６）
本発明の保存液は従来公知の保存液成分の所定量と前記
１種又は２種以上の添加物の所定量とを蒸留水に溶解し
、さらにＮａＣＡ’を所定量加えて所望の濃度、浸透圧
とする事により容易に調製できる。ここで従来公知の保
存液成分とは、アルセパ−氏液、ＡＣＤ液、ＣＰＤ液、
ＣＰＤＡ液、ＳＡＧ液、ＣＰＤ−８液、ＡＤＳＯＬ液。

ＦＲＥＳ液等を指す。

添加物の含有量は、グルタチオンの場合、１〜１００ｍ
Ｍ好ましくは１０〜８０ｍＭ１グルタミンの場合、１〜
２００ｍＭ好ましくは１０〜１００ｍＭ、カコジル酸の
場合、１〜１００ｍＭ好ましくは５〜８０ｍＭ、バルビ
ッール酸の場合、１〜１００ｍＭ好ましくは１０〜８０
ｍＭ。

Ｇｏｏｄ緩衝剤の場合、１〜１５０ｍＭ好ましくは５〜
１００ｍＭ、Ｂｒ　ｉ　ｔ　ｔｏｎとＲｏｂｉｎｓｏｎ
の緩衝剤の場合、１〜１６０ｍＭ好ましくは２０〜１６
０ｍＭである。

これらの添加物による赤血球の保存安定性の向上の作用
機序は詳らかではないが、添加物の濃度が１ｍＭ未満で
あると、その効果が発現せず、逆に添加物を多量添加す
ると保存液の浸透圧が上昇し赤血球に様々な障害を与え
る。

（実施例） 以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
が本発明はこれらに限定されるべきものではない。なお
、実験に用いた水は全て蒸留水である。また、保存安定
性は以下の試験方法により行なった。

試験方法 赤血球を各種保存液に３（容量／容量）％になるように
加え、４℃で保存した。

被凝集性の評価は赤血球抗原に対する抗血清について、
スライド法で凝集を示す抗血清の最大稀釈倍数で現わす
。

また、溶血性の評価は、被験赤血球を０．４（重量／容
量）％ＮａＣ１水溶液及び水に加えて各々、３７℃で３
０分間インキュベートし、各上清の吸光度を測定するこ
とにより行なった。すなわち、吸光度で以てヘモグロビ
ン量を表し、次式によって溶血率（％）を求めた。

溶血率　（％）　　＝０．４％ＮａＣｊ水溶液上涜中の
ヘモグロビン量　Ｘ１００水上清中のヘモグロビン量 実施例１ からなる抗生物質含有アルセパ−代演にＨＥＰＥ８　８
０ｍＭを含有させてｐＨ７，４に調節し、本発明の保存
液（３１０ｍＯｓ　ｍ７ｋｇ、以下Ａ液と略す。）を得
た。一方抗生物質含有アルセバー代演にＮａＣ１をその
濃度が０．３１（重量／容量）％となるように添加し、
さらにｐＨを７．４に調節して、浸透圧及びｐＨをＡ液
と一致させたものをコントロール液とした。

両液に同一赤血球を保存し、保存直後、３ケ月後、６ケ
月後にサンプリングした赤血球について前記方法に従っ
て、被凝集性、溶血性試験を行なった。得られた結果を
表１に示した。

表１から、Ａ液に保存した赤血球はコントロール液に保
存した場合と比べて被凝集性、抗溶血性ともに優れてお
り、特に抗溶血性については、保存中に赤血球膜の浸透
圧抵抗性が上昇している事が明らかである。

比較例１ 実施例１においてＨＥＰＥＳの代わりに、牛血清アルブ
ミン５ｇ／ｌ及びＮａＣ１をその濃度が０．３０（重量
／容量）％となるように加えた以外はすべて実施例１と
同一条件にし、３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、ｐＨ７，４の赤
血球保存液を得た。コントロール液は、実施例１で用い
たものと同−液を使用した。これらの液に実施例１で用
いたのと同一赤血球を保存し、被凝集性、溶血性試験を
行なった。得られた結果を表１に併わせで示した。

表１から、比較例１の保存液中の赤血球は、実施例１の
Ａ液中に保存された場合に比べて被凝集性の経時変化に
ついては、それ程の差は認められないものの、抗溶血性
にはかなりの劣化が見られ、コントロール液に近いこと
が明らかである。

実施例２ からなるＡＣＤ液を水で等倍に稀釈し、クロラムフェニ
コール０．５ｇ／／、ネオマイシン０．３ｇ／ｌ、ゲン
タマイシン０．２ｇ／ｌを含有させて稀釈ＡＣＤ液とし
た。この稀釈ＡＣＤ液にＨＥＰＥＳ３０ｍＭを含有させ
て、ｐＨ７，４に調節し本発明の保存液（２４０ｍＯｓ
　ｍ／ｋｇ、以下Ｂ液と略す。

）を得た。一方稀釈ＡＣＤ液にＮａＣ１をその濃度が０
．１２（重量／容量）％となるように添加し、さらにｐ
Ｈを７．４に調節して、浸透圧及びｐＨをＢ液と一致さ
せたものをコントロール液とした。

以後、実施例１と同様にして試験を行ない、表２に示す
結果が得られた。

表２からコントロール液に比べてＢ液の方が保存安定性
に優れている事が判る。

実施例３〜２２ 実施例１のＨＥＰＥＳの代わりに表３に示す成分、量を
用いる以外は実施例１と同様の成分、量及び方法により
本発明の保存液及びコントロール液を得、前記の試験方
法に従って、被凝集性、溶血性試験を行なった。

試験の結果、表１１表２とほぼ同様の効果が認められた
。このことによって本発明の赤血球保存液は、従来の保
存液に比べて優れた赤血球保存安定性を有していること
が明らかになった。

（発明の効果） 本発明の改良された赤血球保存液は優れた保存安定性を
有し、従来の通常の保存可能期間１〜２ケ月であったも
のを６〜８ケ月まで延長するものであり、血球試薬や、
さらには輸血用血球の保存液として有用性が期待できる
。

出願人　　製鉄化学工業株式会社 代表者 増 田 裕 治

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）グルタチオン、グルタミン、カコジル酸、バルビ
   ツール酸、Ｇｏｏｄ緩衝剤、ＢｒｉｔｔｏｎとＲｏｂｉ
   ｎｓｏｎの緩衝剤よりなる群から選択される１種又は２
   種以上の成分を１〜２００ｍＭ含むことを特徴とする改
   良された赤血球保存液。
2. （２）グルタチオン１〜１００ｍＭを含有する前記第（
   １）項の赤血球保存液。
3. （３）グルタミン１〜２００ｍＭを含有する前記第（１
   ）項の赤血球保存液。
4. （４）カコジル酸１〜１００ｍＭを含有する前記第（１
   ）頂の赤血球保存液。
5. （５）バルビツール酸１〜１００ｍＭを含有する前記第
   （１）頂の赤血球保存液。
6. （６）Ｇｏｏｄ緩衝剤１〜１５０ｍＭを含有する前記第
   （１）項の赤血球保存液。
7. （７）ＢｒｉｔｔｏｎとＲｏｂｉｎｓｏｎの緩衝剤１〜
   １６０ｍＭを含有する前記第（１）項の赤血球保存液。