JPH02132375A - 着色粒子イムノアッセイ用の試験装置および方法 - Google Patents
着色粒子イムノアッセイ用の試験装置および方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本願発明は体液のような液体試料中のリガンド、例えば
抗体のアッセイ（ａｓｓａｙｓ）に関する。更に詳しく
は、本願発明は着色粒子からなる抱合体（ｃｏｎｊ ｕ
ｇａｔｅ） と新規な流過試験セルを使用して尿のよ
うな体液中のリガンドを検出する方法および装置に関す
る。
抗体のアッセイ（ａｓｓａｙｓ）に関する。更に詳しく
は、本願発明は着色粒子からなる抱合体（ｃｏｎｊ ｕ
ｇａｔｅ） と新規な流過試験セルを使用して尿のよ
うな体液中のリガンドを検出する方法および装置に関す
る。
多くのタイプのリガンドレセプターアッセイが尿のよう
な体液中の種々の物質（しばしば一般的にリガンドと称
される）の存在を検出するために使用されている。これ
らのアソセイには抗原抗体反応，放射性．酵素的，蛍光
的または視覚的に観察可能な金属ゾル標識からなる合成
抱合体および特別に設計された反応室が必要である。こ
れらアッセイの全てには、選択されたリガンドまたは抗
原に特異的なレセプター、例えば抗体およびリガンドー
レセプター反応生成物の存在（そしてしばしばその量）
を検出する手段が存在する。現在の試験の大部分は定量
測定を行うように設計されているが、多くの場合に要求
されるのは全て陽性／陰性を示すことである。このよう
な定性アッセイの例には血液型決定および尿分析の殆ん
どのタイプが含まれる。これらの試験にとっては、視覚
的に観察可能な徴候、例えば凝集または色変化の存在が
好ましい。
な体液中の種々の物質（しばしば一般的にリガンドと称
される）の存在を検出するために使用されている。これ
らのアソセイには抗原抗体反応，放射性．酵素的，蛍光
的または視覚的に観察可能な金属ゾル標識からなる合成
抱合体および特別に設計された反応室が必要である。こ
れらアッセイの全てには、選択されたリガンドまたは抗
原に特異的なレセプター、例えば抗体およびリガンドー
レセプター反応生成物の存在（そしてしばしばその量）
を検出する手段が存在する。現在の試験の大部分は定量
測定を行うように設計されているが、多くの場合に要求
されるのは全て陽性／陰性を示すことである。このよう
な定性アッセイの例には血液型決定および尿分析の殆ん
どのタイプが含まれる。これらの試験にとっては、視覚
的に観察可能な徴候、例えば凝集または色変化の存在が
好ましい。
試験液体中の関心のあるリガンドの濃度がしばしば低い
ため、陽性／陰性アッセイであっても非常に感度が良く
なければならない。疑似陽性もまた、特に凝集および他
の迅速検出法、例えば浸漬スティックおよび色変化試験
では面倒なことである。これらの問題のため、サンドイ
ッチアッセイおよび金属ゾルまたは他のタイプの着色粒
子を使用する他の感度の良い検出法が開発されている。
ため、陽性／陰性アッセイであっても非常に感度が良く
なければならない。疑似陽性もまた、特に凝集および他
の迅速検出法、例えば浸漬スティックおよび色変化試験
では面倒なことである。これらの問題のため、サンドイ
ッチアッセイおよび金属ゾルまたは他のタイプの着色粒
子を使用する他の感度の良い検出法が開発されている。
これらの技術はこれらの迅速検出法で直面する問題の全
てを解決しているわけではない。
てを解決しているわけではない。
本願発明の１つの目的は体液中のリガンドを検出する迅
速で感度の良い方法を提供することである。もう１つの
目的は高感度を有し慣用のアッセイより疑似陽性の少な
いアッセイを提供することである。更にもう１つの目的
は体液中の低い値のリガンドを検出する試験セルを提供
することである。もう１つの目的は必要とされる方法段
階が最も少なくそして訓練を受けていない者が使用した
ときでさえ信頼できる結果をもたらすアッセイ系を提供
することである。
速で感度の良い方法を提供することである。もう１つの
目的は高感度を有し慣用のアッセイより疑似陽性の少な
いアッセイを提供することである。更にもう１つの目的
は体液中の低い値のリガンドを検出する試験セルを提供
することである。もう１つの目的は必要とされる方法段
階が最も少なくそして訓練を受けていない者が使用した
ときでさえ信頼できる結果をもたらすアッセイ系を提供
することである。
本願発明の上述の目的および他の目的並びに特徴は上記
の特許請求の範囲、以下の記載および図面から明白であ
る。
の特許請求の範囲、以下の記載および図面から明白であ
る。
本願発明は体液のような液体試料中の予め選択したリガ
ンドを検出する方法および試験セルを特徴とする。
ンドを検出する方法および試験セルを特徴とする。
本願発明の実施に有用な試験セルは、毛細管作用、燈心
作用または単純な湿潤化作用によって水性溶液を移送し
得る内部透過性材料、例えばグラスファイバーを収容す
る細長い外包を有する。この外包は試料入口並びに説明
を簡単にするために試験容量区域および貯蔵容量区域と
称される内部区域を区画して有している。貯蔵容量区域
は入口から離れて位置する試験セルの１区域に配置され
ており、好ましくは取着材料（ｓｏｒｂｅｎｔ ｍａｔ
ｅｒｉａｌ）で満ださ゛れている。貯蔵容量区域は、透
過性材料で区画され、入口から試験容量区域にまで延び
ている流路に沿って移送される液体を受け入れるように
働く。試験容量区域で、試験部位は、流路と流体的に連
絡して、例えば透過性材料または透過性材料内に閉じ込
められ若しくは連結しているラテックス粒子と連結して
固定されたリガンドの第１エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ
）に特異的な結合部位を有する第１蛋白質からなってい
る。外包の穴または透明部分のような窓によって外包壁
から試験部位を観察することができる。
作用または単純な湿潤化作用によって水性溶液を移送し
得る内部透過性材料、例えばグラスファイバーを収容す
る細長い外包を有する。この外包は試料入口並びに説明
を簡単にするために試験容量区域および貯蔵容量区域と
称される内部区域を区画して有している。貯蔵容量区域
は入口から離れて位置する試験セルの１区域に配置され
ており、好ましくは取着材料（ｓｏｒｂｅｎｔ ｍａｔ
ｅｒｉａｌ）で満ださ゛れている。貯蔵容量区域は、透
過性材料で区画され、入口から試験容量区域にまで延び
ている流路に沿って移送される液体を受け入れるように
働く。試験容量区域で、試験部位は、流路と流体的に連
絡して、例えば透過性材料または透過性材料内に閉じ込
められ若しくは連結しているラテックス粒子と連結して
固定されたリガンドの第１エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ
）に特異的な結合部位を有する第１蛋白質からなってい
る。外包の穴または透明部分のような窓によって外包壁
から試験部位を観察することができる。
好ましい実施態様では、流路は試験領域に制限されるか
またはしぼられており、これによって液体流を試験部位
と接触させて流して集めることができる。試験セルが試
料入口と試験部位との間の流路に置かれた溶液炉過手段
を有していることも好ましい。この炉過手段は、流路を
境界づける透過性材料と流体的に連絡した試験セルの外
包内に配置した別個の、慣用のフィルター要素からなる
ことができるが、好ましくは透過性材料自体の１部によ
って単に境界づけられる。試験セル内にこのような炉過
手段を備えると尿試料のような不純試料から時々疑似陽
性読み取りの原因となる微粒子および非特異的干渉因子
の１部を捕捉することによって除去する効果がある。
またはしぼられており、これによって液体流を試験部位
と接触させて流して集めることができる。試験セルが試
料入口と試験部位との間の流路に置かれた溶液炉過手段
を有していることも好ましい。この炉過手段は、流路を
境界づける透過性材料と流体的に連絡した試験セルの外
包内に配置した別個の、慣用のフィルター要素からなる
ことができるが、好ましくは透過性材料自体の１部によ
って単に境界づけられる。試験セル内にこのような炉過
手段を備えると尿試料のような不純試料から時々疑似陽
性読み取りの原因となる微粒子および非特異的干渉因子
の１部を捕捉することによって除去する効果がある。
本発明の方法には、金属ゾルまたはコロイド、好ましく
は金のような着色粒子に結合した第２蛋白質からなる抱
合体の使用が必要である。アッセイが「サンドイッチ」
また「競合」技術を利用するように設計されているかど
うかに依って、該抱合体は２つの異なる形態をとること
ができる。
は金のような着色粒子に結合した第２蛋白質からなる抱
合体の使用が必要である。アッセイが「サンドイッチ」
また「競合」技術を利用するように設計されているかど
うかに依って、該抱合体は２つの異なる形態をとること
ができる。
サンドイッチ技術の場合には、第２蛋白質はリガンド上
の第２エピトープに結合する部位からなっている。この
タイプの抱合体は液体試料中でリガンドと反応してコン
プレックスを形成する。このコンプレックスは試験セル
内の試験部位での発色を目で観察して検出される。試験
部位で、抱合体と結合したリガンドは固定された第１結
合蛋白質と反応して第１蛋白質．リガンド，第２蛋白質
および着色粒子の「サンドインチ」を形成する。
の第２エピトープに結合する部位からなっている。この
タイプの抱合体は液体試料中でリガンドと反応してコン
プレックスを形成する。このコンプレックスは試験セル
内の試験部位での発色を目で観察して検出される。試験
部位で、抱合体と結合したリガンドは固定された第１結
合蛋白質と反応して第１蛋白質．リガンド，第２蛋白質
および着色粒子の「サンドインチ」を形成する。
このサンドイッチコンプレックスは、試料が連続的に通
過するとき試験部位で漸次生成され、貯蔵容量区域を満
たす。ますます多くの抱合体が固定されるに伴って、着
色粒子は試験部位で凝集し、窓から見えるようになり、
液体試料中のリガンドの存在を示す。
過するとき試験部位で漸次生成され、貯蔵容量区域を満
たす。ますます多くの抱合体が固定されるに伴って、着
色粒子は試験部位で凝集し、窓から見えるようになり、
液体試料中のリガンドの存在を示す。
競合技術の場合には、第２蛋白質はリガンドと競合して
第１蛋白質と結合する。第２蛋白質は、例えば、第１蛋
白質と比肩し得る親和性を有するリガンドの既知真正試
料またはそのフラクションからなる。液体試料が移送さ
れて試験部位と接触すると、リガンド（もしあれば）と
抱合体は第１蛋白質との付着部位に対して競合する。リ
ガンドが存在しない場合、着色粒子は試験部位で凝集す
るので、色が存在すると試料中のリガンドが検出可能値
を有していないことを示す。リガンドが存在する場合、
試験部位で結合する抱合体量は減少するので、色がない
かまたは薄い色が現われる。
第１蛋白質と結合する。第２蛋白質は、例えば、第１蛋
白質と比肩し得る親和性を有するリガンドの既知真正試
料またはそのフラクションからなる。液体試料が移送さ
れて試験部位と接触すると、リガンド（もしあれば）と
抱合体は第１蛋白質との付着部位に対して競合する。リ
ガンドが存在しない場合、着色粒子は試験部位で凝集す
るので、色が存在すると試料中のリガンドが検出可能値
を有していないことを示す。リガンドが存在する場合、
試験部位で結合する抱合体量は減少するので、色がない
かまたは薄い色が現われる。
本発明の１つの実施態様では、試験液体は試験セルの外
部で抱合体と混合される。もう１つの実施態様では、抱
合体は凍結乾燥または他の保存形態で入口と試験部位と
の間の透過性材料上に置き、そして試料液体はそれが流
路に沿って通過するときに抱合体を再溶解する。
部で抱合体と混合される。もう１つの実施態様では、抱
合体は凍結乾燥または他の保存形態で入口と試験部位と
の間の透過性材料上に置き、そして試料液体はそれが流
路に沿って通過するときに抱合体を再溶解する。
試験部位での色の発現は、その色の発現がリガンドの存
在または不存在或いは非特異的吸着により生じた人工物
（ａｒｔｉｆａｃｔ）を真に示しているかどうかを決定
するために１つ若しくはそれ以上の標準または内部対照
と比較することができる。
在または不存在或いは非特異的吸着により生じた人工物
（ａｒｔｉｆａｃｔ）を真に示しているかどうかを決定
するために１つ若しくはそれ以上の標準または内部対照
と比較することができる。
サンドインチ技術を使用する１つの実施態様では、標準
は陰性の対照部位からなり、好ましくは試験部位に隣接
して置かれ、そして第１の窓に最も近い第２の窓から見
ることができる。陰性対照部位は好ましくは、第１結合
蛋白質の固定化が省略されることを除いて試験部位と同
じように調製される。それ故、抱合体は対照部位まで到
達するが、非特異的結合によってしか凝集しない。試験
部位が対照部位より顕著に色が強くない場合、アッセイ
は陰性であると考えられる。
は陰性の対照部位からなり、好ましくは試験部位に隣接
して置かれ、そして第１の窓に最も近い第２の窓から見
ることができる。陰性対照部位は好ましくは、第１結合
蛋白質の固定化が省略されることを除いて試験部位と同
じように調製される。それ故、抱合体は対照部位まで到
達するが、非特異的結合によってしか凝集しない。試験
部位が対照部位より顕著に色が強くない場合、アッセイ
は陰性であると考えられる。
もう１つの実施態様では、アッセイおよび試験セルは陽
性対照を含むことができる。かくして、サンドインチ技
術を使用するときには、セルは対照部位に固定したリガ
ンドの既知真正試料を有することができる。この対照部
位に色の発現がない場合には、アッセイは決定的でない
と考えられる。
性対照を含むことができる。かくして、サンドインチ技
術を使用するときには、セルは対照部位に固定したリガ
ンドの既知真正試料を有することができる。この対照部
位に色の発現がない場合には、アッセイは決定的でない
と考えられる。
競合技術を使用するときには、陽性対照部位での色の発
現は、アッセイの結果が決定的でないことを意味する。
現は、アッセイの結果が決定的でないことを意味する。
広範には、本発明の方法はヒト尿試料のような試験試料
中のリガンド、例えばヒト絨毛膜性ゴナドト口ビン（ｈ
ＣＧ）の存在を容易に読み取り、感度を高めそして再現
性のある徴候を達成するために上記タイプの試験セルを
使用することに関わっている。該方法は、金属ゾルまた
は他の着色粒子に結合した蛋白質からなる抱合体および
試料を流路に沿って移送し、リガンドのエピトープに特
異的な固定された結合蛋白質からなる試験部位に接触さ
せ、そして好ましくは対照部位にも接触させる段階に関
わっている。好ましくは、着色粒子は金ゾルからなり、
試験部位の領域内の流路は流路の他の部分に比較して断
面積が減少しており、試料は試料が試験セルに入った後
ではあるがしかし試験部位に接触する前に炉過手段を通
過し、そして試験部位は、表面に固定化された蛋白質を
有する流路内に閉じ込められたかまたはそうでなければ
固定されたラテックス粒子からなっている。
中のリガンド、例えばヒト絨毛膜性ゴナドト口ビン（ｈ
ＣＧ）の存在を容易に読み取り、感度を高めそして再現
性のある徴候を達成するために上記タイプの試験セルを
使用することに関わっている。該方法は、金属ゾルまた
は他の着色粒子に結合した蛋白質からなる抱合体および
試料を流路に沿って移送し、リガンドのエピトープに特
異的な固定された結合蛋白質からなる試験部位に接触さ
せ、そして好ましくは対照部位にも接触させる段階に関
わっている。好ましくは、着色粒子は金ゾルからなり、
試験部位の領域内の流路は流路の他の部分に比較して断
面積が減少しており、試料は試料が試験セルに入った後
ではあるがしかし試験部位に接触する前に炉過手段を通
過し、そして試験部位は、表面に固定化された蛋白質を
有する流路内に閉じ込められたかまたはそうでなければ
固定されたラテックス粒子からなっている。
本方法の実施においては、抱合体を試料と予め混合する
かまたは抱合体を保存した形態、例えば凍結乾燥して入
口と試験部位との間の流路に置くかのいずれかである。
かまたは抱合体を保存した形態、例えば凍結乾燥して入
口と試験部位との間の流路に置くかのいずれかである。
いずれの場合でも、試料内に試験セルを置くかまたは試
料を入口に適用することによって流れが開始され、その
結果は試験部位の発色を観察するかまたは試験部位と対
照部位の色を比較することによって読み取る。
料を入口に適用することによって流れが開始され、その
結果は試験部位の発色を観察するかまたは試験部位と対
照部位の色を比較することによって読み取る。
炉過手段と組合わせた着色粒子検出系の使用、試料の流
れの集中効果、並びに試験部位と対照部位の色を比較す
ることの容易さが一緒になって、疑似陽性を最少にしそ
して訓練を受けていない者が効果的に使用できる非常に
感度の良い一群のアッセイ系を構成することが可能にな
る。
れの集中効果、並びに試験部位と対照部位の色を比較す
ることの容易さが一緒になって、疑似陽性を最少にしそ
して訓練を受けていない者が効果的に使用できる非常に
感度の良い一群のアッセイ系を構成することが可能にな
る。
本発明は、サンドイッチまたは競合イムノアッセイを実
施するための試験セル並びに着色粒子からなる抱合体お
よび試験セルを使用する方法を提供する。以下に開示す
るように、本発明の方法および試験セルの種々の特徴が
働き合って、疑似陽性を避け且つ試験手順を単純化し乍
ら、訓練を受けていない者が液体試料の非常に少量の特
定のリガンドの存在について信頼のおけるアッセイがで
きるようになる。本発明は、例えば妊娠．性病および他
の疾病，感染、または体液中に抗原マーカー物質の存在
を生じさせる臨床的異常を、薬物若しくは毒物の代謝物
の存在を含めて自己診断できるようにする、店頭（ＯＴ
Ｃ）で売買できるアッセイ試験キットに使用するのに理
想的である。
施するための試験セル並びに着色粒子からなる抱合体お
よび試験セルを使用する方法を提供する。以下に開示す
るように、本発明の方法および試験セルの種々の特徴が
働き合って、疑似陽性を避け且つ試験手順を単純化し乍
ら、訓練を受けていない者が液体試料の非常に少量の特
定のリガンドの存在について信頼のおけるアッセイがで
きるようになる。本発明は、例えば妊娠．性病および他
の疾病，感染、または体液中に抗原マーカー物質の存在
を生じさせる臨床的異常を、薬物若しくは毒物の代謝物
の存在を含めて自己診断できるようにする、店頭（ＯＴ
Ｃ）で売買できるアッセイ試験キットに使用するのに理
想的である。
アッセイ方法およびセルは、体液または他の液体に存在
する予め選択した個々のリガンドの存在を特異的に検出
するために設計されている。
する予め選択した個々のリガンドの存在を特異的に検出
するために設計されている。
広範には、本発明の試験セルおよび方法は、既知の３イ
ムノアッセイ法を使用してこれまでにアッセイされたこ
とがあるかまたはリガンド用の結合部位からなるポリク
ローナル若しくはモノクローナル抗体或いは他の蛋白質
を使用して上記方法によって検出可能であることが知ら
れている任意のリガンドを検出ずるために使用すること
ができる。
ムノアッセイ法を使用してこれまでにアッセイされたこ
とがあるかまたはリガンド用の結合部位からなるポリク
ローナル若しくはモノクローナル抗体或いは他の蛋白質
を使用して上記方法によって検出可能であることが知ら
れている任意のリガンドを検出ずるために使用すること
ができる。
本発明の実施に有用な種々の特別のアッセイプロトコー
ル、試薬および分析物はそれ自体既知であり、例えば米
国特許４，３１３，７３４． ４〜１８欄および米国特
許４，３６６，２４１． ５〜４０＠参照。
ル、試薬および分析物はそれ自体既知であり、例えば米
国特許４，３１３，７３４． ４〜１８欄および米国特
許４，３６６，２４１． ５〜４０＠参照。
本発明に従って構成されるアッセイの優れた感受性およ
び再現性を招来すると思われる特徴の組合わせは、試験
試料からリガンドをセル内の試験部位に集中させるのに
役立つ新規な試験セルを使用することと色の発現を直接
目で観察できるマーカー系として金属ゾルまたは他の着
色粒子を使用することである。疑偵陽性は減少するが、
試験部位と色を比較する陰性対照または対照部位を試験
セル内に有しそして試料から夾雑物の試験部位への導入
を制限する炉過手段を含めることによって優れた感度が
維持される。
び再現性を招来すると思われる特徴の組合わせは、試験
試料からリガンドをセル内の試験部位に集中させるのに
役立つ新規な試験セルを使用することと色の発現を直接
目で観察できるマーカー系として金属ゾルまたは他の着
色粒子を使用することである。疑偵陽性は減少するが、
試験部位と色を比較する陰性対照または対照部位を試験
セル内に有しそして試料から夾雑物の試験部位への導入
を制限する炉過手段を含めることによって優れた感度が
維持される。
本アッセイは、試験セルの入口を液体試験試料と単に接
触させて行う。次いで、試験試料がセルを通過して、セ
ルの外包の１つの窓または複数の窓から見える試験部位
（および任意の１つまたはそれ以上の対照部位）と反応
するように接触するのを待つだけである。１つの実施態
様では、抱合体を試料と混合しそして試験セルを挿入す
る前に簡単にインキユベートする。もう１つの実施態様
では、抱合体はセル内の流路に保存形態で置かれる。リ
ガンドが試料中に存在する場合、リガンドは流路に沿っ
て試験部位および対照部位を通り過ぎて入口およびセル
の内部を通過し、当該部位で、サンドインチ態様ではリ
ガンドは試験部位で固定結合蛋白質、例えば抗体と反応
し、多分対照部位でも非特異的に反応する。「サンドイ
ンチ」は試験部位で形成され、固定化された結合蛋白質
−リガンド結合蛋白質一着色粒子からなっている。サン
ドイッチコンプレックスおよびそれ故リガンドの存在は
、試験部位の金属ゾル粒子の凝集によって生じる色の発
現により示される。陰性対照部位より試験部位の色の方
がより濃いとリガンドの存在を示す。
触させて行う。次いで、試験試料がセルを通過して、セ
ルの外包の１つの窓または複数の窓から見える試験部位
（および任意の１つまたはそれ以上の対照部位）と反応
するように接触するのを待つだけである。１つの実施態
様では、抱合体を試料と混合しそして試験セルを挿入す
る前に簡単にインキユベートする。もう１つの実施態様
では、抱合体はセル内の流路に保存形態で置かれる。リ
ガンドが試料中に存在する場合、リガンドは流路に沿っ
て試験部位および対照部位を通り過ぎて入口およびセル
の内部を通過し、当該部位で、サンドインチ態様ではリ
ガンドは試験部位で固定結合蛋白質、例えば抗体と反応
し、多分対照部位でも非特異的に反応する。「サンドイ
ンチ」は試験部位で形成され、固定化された結合蛋白質
−リガンド結合蛋白質一着色粒子からなっている。サン
ドイッチコンプレックスおよびそれ故リガンドの存在は
、試験部位の金属ゾル粒子の凝集によって生じる色の発
現により示される。陰性対照部位より試験部位の色の方
がより濃いとリガンドの存在を示す。
試験および対照部位の向こう側に取着材料の貯蔵容器を
配置することによって、比較的大量の試験液体およびそ
れに含まれる任意のリガンドを試験領域から取り出して
感度を上げることができる。試験および対照部位を区画
する試験セル内の流路の領域は、流路の他の領域に比べ
て横断面領域内に任意に制限される。この特徴は「ボ＋
ルネック」効果を生じさせ、そこでは取着した試料の全
容量中のリガンドは全て結合蛋白質と反応して固定され
る試験部位の極く近くの限られた流域を通過しなければ
ならない。
配置することによって、比較的大量の試験液体およびそ
れに含まれる任意のリガンドを試験領域から取り出して
感度を上げることができる。試験および対照部位を区画
する試験セル内の流路の領域は、流路の他の領域に比べ
て横断面領域内に任意に制限される。この特徴は「ボ＋
ルネック」効果を生じさせ、そこでは取着した試料の全
容量中のリガンドは全て結合蛋白質と反応して固定され
る試験部位の極く近くの限られた流域を通過しなければ
ならない。
前述のことから、本試験方法の成功は抱合体と反応する
試料中に存在するリガンドに依存するかまたは試験部位
での付着部位に対するリガンドと抱合体間の再現可能な
競合に依存する。上記したように、本発明に従って、ア
ッセイは細長い試験セルに導入する前に抱合体を液体試
料と予め混合することによって実施できる。或いは、抱
合体は、試験および対照部位の上流の試験セル内の流路
に保存形態で、例えば凍結乾燥して置くことができる。
試料中に存在するリガンドに依存するかまたは試験部位
での付着部位に対するリガンドと抱合体間の再現可能な
競合に依存する。上記したように、本発明に従って、ア
ッセイは細長い試験セルに導入する前に抱合体を液体試
料と予め混合することによって実施できる。或いは、抱
合体は、試験および対照部位の上流の試験セル内の流路
に保存形態で、例えば凍結乾燥して置くことができる。
この場合には、セルは予め混合していない液体試料溶液
内に直接置く。セルを通過し液体内に入ったリガンド（
若しあれば）は移動して抱合体と接触して免疫コンプレ
ックスを形成するかまたは流れが継続するときにはそこ
で競合を開始する。
内に直接置く。セルを通過し液体内に入ったリガンド（
若しあれば）は移動して抱合体と接触して免疫コンプレ
ックスを形成するかまたは流れが継続するときにはそこ
で競合を開始する。
この後者の技術はアッセイ手順での技巧的段階を排除し
、従って誤まりの原因をなくすという利点を有する。
、従って誤まりの原因をなくすという利点を有する。
図面を参照すると、第１図および第２図は本発明に従っ
て構成した試験セル５の実施態様を図式的に示すもので
あり、その構成原理を説明するのに有用である。この試
験セルは外側が成型された外包１０からなり、これは透
過可能な取着材料１２を充填した中空の細長い囲いを存
する。外包１ｏはまた、試験液体人口１４、および取着
材料１２を見ることができる窓からなる１対の円形開口
部１６．１８を区画して有する。
て構成した試験セル５の実施態様を図式的に示すもので
あり、その構成原理を説明するのに有用である。この試
験セルは外側が成型された外包１０からなり、これは透
過可能な取着材料１２を充填した中空の細長い囲いを存
する。外包１ｏはまた、試験液体人口１４、および取着
材料１２を見ることができる窓からなる１対の円形開口
部１６．１８を区画して有する。
取着材料１２と外包１０の内部は共に、一般的には第１
図および第２図の左から右へ通過する流路を有する。試
験セルを入口１４が液体試料内かそうでなければ液体試
料と接触した状態で配置するとき、液体は毛細管作用、
燈心作用または単なる湿潤によって流路に沿って上流の
流れ区画２０試験容量区域２２から、通常は矢印で示さ
れるように貯蔵容量区域２４に移送される。入口１４の
内側に置かれた流路の流れ区画２０は不純な試験試料か
ら粒子物および干渉因子を取り除くことのできるフィル
ターとして役立つ。人口１４の下流にこのような炉過手
段２０を備えることは、この系の成功および疑似陽性を
避ける能力に寄与するものと思われる。
図および第２図の左から右へ通過する流路を有する。試
験セルを入口１４が液体試料内かそうでなければ液体試
料と接触した状態で配置するとき、液体は毛細管作用、
燈心作用または単なる湿潤によって流路に沿って上流の
流れ区画２０試験容量区域２２から、通常は矢印で示さ
れるように貯蔵容量区域２４に移送される。入口１４の
内側に置かれた流路の流れ区画２０は不純な試験試料か
ら粒子物および干渉因子を取り除くことのできるフィル
ターとして役立つ。人口１４の下流にこのような炉過手
段２０を備えることは、この系の成功および疑似陽性を
避ける能力に寄与するものと思われる。
取着材料１２内に置かれるものは脱水抱合体、例えば抗
体一金属ゾルのバンド２６である。液体試料がバンド２
６を通って移動するとき、抱合体は液体内に入り、再構
成されそして液体試料に溶解したリガンド（存在する場
合）と反応するかまたは競合する。勿論、抱合体バンド
２６を除、き、そして抱合体を、前記したとおり、セル
５への導入前の試験液体に加えることができる。
体一金属ゾルのバンド２６である。液体試料がバンド２
６を通って移動するとき、抱合体は液体内に入り、再構
成されそして液体試料に溶解したリガンド（存在する場
合）と反応するかまたは競合する。勿論、抱合体バンド
２６を除、き、そして抱合体を、前記したとおり、セル
５への導入前の試験液体に加えることができる。
外包１０の円形開口部１６および１８の直下に置いた取
着材料１２の容量区域内に対照部位１６′および試験部
位１８′をそれぞれ配置する。図面中、対照および試験
部位は流路に沿って連続的に配置されているように示さ
れている。或いは、対照および試験部位は並べてまたは
他の特別の関係で配置することができる。
着材料１２の容量区域内に対照部位１６′および試験部
位１８′をそれぞれ配置する。図面中、対照および試験
部位は流路に沿って連続的に配置されているように示さ
れている。或いは、対照および試験部位は並べてまたは
他の特別の関係で配置することができる。
試験部位１８′は流路内の場所に固定された、検出すべ
きリガンドのエピ１・−プに対して予め選択した量の抗
体からなる。その詳細な化学構造は広範に変更すること
ができる。対照部位１６′は、試験部位１８′に存在す
る固定抗体が対照部位１６′では除かれている以外は好
ましくは試験部位１８′と大きさおよび化学的構成の点
で同一である。かくして、試験部位１８′で生起する、
例えばリガンド抱合体または遊離抱合体の任意の非特異
的凝集は対照部位１６′でも生起する。対照部位１６′
と比較して試験部位１８′の方が色が濃いとサンドイッ
チアッセイにおいては試料中にリガンドが存在すること
を示す。
きリガンドのエピ１・−プに対して予め選択した量の抗
体からなる。その詳細な化学構造は広範に変更すること
ができる。対照部位１６′は、試験部位１８′に存在す
る固定抗体が対照部位１６′では除かれている以外は好
ましくは試験部位１８′と大きさおよび化学的構成の点
で同一である。かくして、試験部位１８′で生起する、
例えばリガンド抱合体または遊離抱合体の任意の非特異
的凝集は対照部位１６′でも生起する。対照部位１６′
と比較して試験部位１８′の方が色が濃いとサンドイッ
チアッセイにおいては試料中にリガンドが存在すること
を示す。
本発明は試験部位１８′および対応する対照部位１６′
の厳密な性質によって制限されず、そして実際、感度の
低下が忍容される場合対照部位１６′を完全に省略する
ことができる。一般的には、抗体または他の結合蛋白質
は、自体既知の方法に従って、吸着．吸収またはイオン
若しくは共有カップリングを使用して試験部位１８′に
固定することができる。試験部位１８′の現在好ましい
形成はリガンドのエピトープに対するモノクローナル抗
体をラテックスビーズ上に固定し、次いでビーズを領域
１８′で閉じ込めるかまたはそうでなければ取着材料１
２に連結させることである。対照部位１６′は、ラテッ
クスビーズが非特異的免疫グロブリン、例えば免疫化さ
れたことのない動物からの採血による免疫グロブリンを
含んでいる点を除いて、同様に製造する。
の厳密な性質によって制限されず、そして実際、感度の
低下が忍容される場合対照部位１６′を完全に省略する
ことができる。一般的には、抗体または他の結合蛋白質
は、自体既知の方法に従って、吸着．吸収またはイオン
若しくは共有カップリングを使用して試験部位１８′に
固定することができる。試験部位１８′の現在好ましい
形成はリガンドのエピトープに対するモノクローナル抗
体をラテックスビーズ上に固定し、次いでビーズを領域
１８′で閉じ込めるかまたはそうでなければ取着材料１
２に連結させることである。対照部位１６′は、ラテッ
クスビーズが非特異的免疫グロブリン、例えば免疫化さ
れたことのない動物からの採血による免疫グロブリンを
含んでいる点を除いて、同様に製造する。
試験容量区域２２の向こうに比較的大量の取着または超
取着材料からなる貯蔵容量区域２４を置く。貯蔵容量区
域２４の目的は、相当大量の試験液体を試験容量区域２
２から確実に吸み出すことである。貯蔵容器２４の容量
を増やすと、試験領域２２を通過するリガンドの量が増
加するので、アッセイ方法の感度を上げる効果を有する
。適当な取着剤には、例えばミシガン州ミッドランドの
ダウケミカルカンパニ（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ）およびイリノイ州アーリントンハイツの
アメリカンコロイド（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｏｉ
ｄ）の化学品事業部から入手可能なタイプの市販の材料
がある。これらの材料はその何倍もの重量の水を吸収す
ることができ、そして通常は使い棄ておむつに使用され
ている。これら材料は僅かに交叉結合したポリアクリレ
ート塩、典型的にはアルカリ金属塩がらなる。
取着材料からなる貯蔵容量区域２４を置く。貯蔵容量区
域２４の目的は、相当大量の試験液体を試験容量区域２
２から確実に吸み出すことである。貯蔵容器２４の容量
を増やすと、試験領域２２を通過するリガンドの量が増
加するので、アッセイ方法の感度を上げる効果を有する
。適当な取着剤には、例えばミシガン州ミッドランドの
ダウケミカルカンパニ（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ）およびイリノイ州アーリントンハイツの
アメリカンコロイド（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｏｉ
ｄ）の化学品事業部から入手可能なタイプの市販の材料
がある。これらの材料はその何倍もの重量の水を吸収す
ることができ、そして通常は使い棄ておむつに使用され
ている。これら材料は僅かに交叉結合したポリアクリレ
ート塩、典型的にはアルカリ金属塩がらなる。
ほとんど全ての抗原物質に特異的な結合特性を有し且つ
高い親和性を有するポリクローナル抗血清、そして実際
にはモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラ
クションが知られており、そして市販で入手できるかま
たは周知の細胞融合およびスクリーニング技術を使用し
て安定な細胞系から製造することができる。文献は蛋白
質固定化プロトコールで充満している。例えば、ラボラ
トリーテクニックス イン ハイオ ケミストリーアン
ド モレキュラーバイオロジー（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ａｎｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、テ
ィーセン（Ｔｉｊｓｓｅｎ） １ ５巻、酵素イム
ノアッセイの実践と理論、１３章、イムノ反応体の固体
相への固定化、２９７〜３２８頁およびそこに引用され
た参照文献を参照。
高い親和性を有するポリクローナル抗血清、そして実際
にはモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラ
クションが知られており、そして市販で入手できるかま
たは周知の細胞融合およびスクリーニング技術を使用し
て安定な細胞系から製造することができる。文献は蛋白
質固定化プロトコールで充満している。例えば、ラボラ
トリーテクニックス イン ハイオ ケミストリーアン
ド モレキュラーバイオロジー（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ａｎｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、テ
ィーセン（Ｔｉｊｓｓｅｎ） １ ５巻、酵素イム
ノアッセイの実践と理論、１３章、イムノ反応体の固体
相への固定化、２９７〜３２８頁およびそこに引用され
た参照文献を参照。
イムノアッセイ方法のマーカー物質として有用な金属ゾ
ルおよび他のタイプの着色粒子もそれ自体既知である。
ルおよび他のタイプの着色粒子もそれ自体既知である。
例えば１９８２年２月２日付でリューベリング（Ｌｅｕ
ｖｅｒｉｎｇ）に付与された米国特許４，３１３，７３
４参照。この特許の開示は本願明細書に引用する。着色
粒子抱合体の合成に関わる詳細および工学的原理はホリ
スベルガ−（Ｈｏｒｉｓｂｅｒｇｅｒ）の伝送スキャニ
ング電子顕微鏡用のチトクロームマーカーとしてのコロ
イド性金の評価ＣＢｉｏｌ，Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅ，
３６， ２５３〜２５８（１９７９）） リュ
ーベリング等のゾル粒子イムノアッセイ（Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ１（１）、７ ７ 〜９ １ （１９
８０））並びにフレンズ（Ｆｒｅｎｓ）の単分散金懸濁
液中の粒子サイズを調整するための核化制御（Ｎａｔｕ
ｒｅ，Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＋ ２４１．
２ ０〜２２頁（１９７３） ）を参照。
ｖｅｒｉｎｇ）に付与された米国特許４，３１３，７３
４参照。この特許の開示は本願明細書に引用する。着色
粒子抱合体の合成に関わる詳細および工学的原理はホリ
スベルガ−（Ｈｏｒｉｓｂｅｒｇｅｒ）の伝送スキャニ
ング電子顕微鏡用のチトクロームマーカーとしてのコロ
イド性金の評価ＣＢｉｏｌ，Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅ，
３６， ２５３〜２５８（１９７９）） リュ
ーベリング等のゾル粒子イムノアッセイ（Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ１（１）、７ ７ 〜９ １ （１９
８０））並びにフレンズ（Ｆｒｅｎｓ）の単分散金懸濁
液中の粒子サイズを調整するための核化制御（Ｎａｔｕ
ｒｅ，Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＋ ２４１．
２ ０〜２２頁（１９７３） ）を参照。
セルは種々の形態をとることができる。セルは通常、塩
化ポリビニル，ポリプロピレンまたは他の熱可塑性樹脂
製の内部はめ込み部分からなる細長い外包からなる。セ
ル内部の流路は比較的不活性の材料または液体移送に適
した材料の組合わせを有している。或る状況下では、液
体の流れを促進する貯蔵容器として吸収性のより高い材
料を使用し、そして流路の残りの部分には別の材料を使
用することが好ましいことがある。
化ポリビニル，ポリプロピレンまたは他の熱可塑性樹脂
製の内部はめ込み部分からなる細長い外包からなる。セ
ル内部の流路は比較的不活性の材料または液体移送に適
した材料の組合わせを有している。或る状況下では、液
体の流れを促進する貯蔵容器として吸収性のより高い材
料を使用し、そして流路の残りの部分には別の材料を使
用することが好ましいことがある。
上記のことから、本発明に従って構成したアッセイ系の
再現性、感度および疑似陽性回避における利点が本発明
の特徴の組合わせに起因することは明らかであろう。使
用に際して、本発明の試験セルおよびマーカーとして使
用される金属ゾル粒子は一緒になって働き、抱合体とコ
ンプレックス化したリガンドが固定結合蛋白質によって
試験部位に捕捉されるにつれて徐々に色の強さを増大さ
せる。この試みは本質的に全ての抗原性材料のアッセイ
および試験セルを設計するために使用することができる
。
再現性、感度および疑似陽性回避における利点が本発明
の特徴の組合わせに起因することは明らかであろう。使
用に際して、本発明の試験セルおよびマーカーとして使
用される金属ゾル粒子は一緒になって働き、抱合体とコ
ンプレックス化したリガンドが固定結合蛋白質によって
試験部位に捕捉されるにつれて徐々に色の強さを増大さ
せる。この試みは本質的に全ての抗原性材料のアッセイ
および試験セルを設計するために使用することができる
。
本発明は次の非制限的実施例から更に理解されよう。
！ＪＩＪＬＬ
本発明を実施するのに現在好ましい試験装置は第３図．
第４Ａ図，第４Ｂ図および第５図に示す。
第４Ａ図，第４Ｂ図および第５図に示す。
第３図に示される装置の変更は第６図に示し、これは対
照部位１６′および試験部位１８′に加えて第２の対照
部位１９並びに貯蔵容器の下方に傾斜位で試験セルを維
持するのに有用なスタンド２１を有している。試験試料
を入口１４に適用すると、取着のみならず重力も試料が
流路に沿って移送されるのを促進する。
照部位１６′および試験部位１８′に加えて第２の対照
部位１９並びに貯蔵容器の下方に傾斜位で試験セルを維
持するのに有用なスタンド２１を有している。試験試料
を入口１４に適用すると、取着のみならず重力も試料が
流路に沿って移送されるのを促進する。
第３図，第４Ａ図，第４Ｂ図および第５図に示されると
おり、本発明の好ましい試験セルは上記に論議しそして
第１図および第２図で更に特異的な内部特徴の幾つかに
関して示した例示的装置とは相違している。特に、外包
は１対の内部設備集合部分からなり、該部分は装置を組
み立てるとき、より低位部１０′を備えているＵ型頂部
１０を有する。頂部および低部１０および１０′は蝶番
領域１１を介して連結していても良い。低部１０′は、
上部に１片のグラスファイバー紙１３（市販で入手でき
るイートンダイクマン（Ｅａｔｏｎ Ｄｉｋｅｍａｎ）
のグレード■またはホワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）
のグレードＧＦＡ）を配置している１対の経路２８を区
画する。入口１４から適用した試験液体は流路および炉
過手段領域２０、並びに上部かみ合わせ部１０の開口部
からなる窓１６および１８から見ることのできる陽性対
照部位１６′および試験部位１８′を区画する紙片１３
に沿って滲み出る。紙片１３は貯蔵容量区域２４に重な
り、該区域は内部設備の頂部と低部かみ合わせ部ＩＯお
よび１０′間の空洞によって区画される。この事例の空
洞は取着貯藏容器を構成する取着吸取紙１２で満たされ
ている。適当な紙はグレード１２Ａの吸収紙、即ちシュ
ライヒャーアンドシュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒａｎ
ｄ Ｓｃｈｕｅｌ１）から入手可能なセルロース製品と
して販売されている。１つの好ましい実施態様では、グ
ラスファイバー紙１３の寸法はおよそ１／４インチ×３
インチであり、吸収材料１２の寸法は各側面でおよそ２
インチＸ ５／３２インチである。多数のこれら装置を
製造しそして尿のアッセイによって妊娠を検出できるよ
うに装置を順応させるために更に処置した。
おり、本発明の好ましい試験セルは上記に論議しそして
第１図および第２図で更に特異的な内部特徴の幾つかに
関して示した例示的装置とは相違している。特に、外包
は１対の内部設備集合部分からなり、該部分は装置を組
み立てるとき、より低位部１０′を備えているＵ型頂部
１０を有する。頂部および低部１０および１０′は蝶番
領域１１を介して連結していても良い。低部１０′は、
上部に１片のグラスファイバー紙１３（市販で入手でき
るイートンダイクマン（Ｅａｔｏｎ Ｄｉｋｅｍａｎ）
のグレード■またはホワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）
のグレードＧＦＡ）を配置している１対の経路２８を区
画する。入口１４から適用した試験液体は流路および炉
過手段領域２０、並びに上部かみ合わせ部１０の開口部
からなる窓１６および１８から見ることのできる陽性対
照部位１６′および試験部位１８′を区画する紙片１３
に沿って滲み出る。紙片１３は貯蔵容量区域２４に重な
り、該区域は内部設備の頂部と低部かみ合わせ部ＩＯお
よび１０′間の空洞によって区画される。この事例の空
洞は取着貯藏容器を構成する取着吸取紙１２で満たされ
ている。適当な紙はグレード１２Ａの吸収紙、即ちシュ
ライヒャーアンドシュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒａｎ
ｄ Ｓｃｈｕｅｌ１）から入手可能なセルロース製品と
して販売されている。１つの好ましい実施態様では、グ
ラスファイバー紙１３の寸法はおよそ１／４インチ×３
インチであり、吸収材料１２の寸法は各側面でおよそ２
インチＸ ５／３２インチである。多数のこれら装置を
製造しそして尿のアッセイによって妊娠を検出できるよ
うに装置を順応させるために更に処置した。
各装置の試験部位１８′は以下の技術を使用してファイ
バー祇１３内のスポットとして組み立てた。
バー祇１３内のスポットとして組み立てた。
市販で入手でき直径が０．３ ミクロンのボリスチレン
粒子からなるラテックスビーズは精製したウサギ抗一ヒ
ト絨毛膜性ゴナドトロピンで非活性的に被覆した。ポリ
クローナル抗体は慣用の技術を使用して、それ自体既知
の方法でヒト絨毛膜性ゴナドトロピンで予め免疫化した
ウサギの採血物から精製した。グリシン緩衝液（ｐＨ
＝ ８．３）の連続相を有するラテックス（０．６重量
％）および同じ緩衝液１一中１■の抗体溶液の等量部を
混合し３７゜Ｃでインキユベートした。装置を組み立て
た後、約０．６χの固形物からなる該溶液１５マイクロ
リットルを一時に１滴グラスファイバー紙１３に加えて
スポット１８′を生しさせた。次いでこのスポットを３
７゜Ｃで乾燥させた。対照部位１ ６’は、ウサギボリ
クローナル非免疫ガンマグロプリンを抗−ｈＣＧガンマ
グロプリンの代わりに使用した以外は上記で開示した試
験部位と同じにして製造した。
粒子からなるラテックスビーズは精製したウサギ抗一ヒ
ト絨毛膜性ゴナドトロピンで非活性的に被覆した。ポリ
クローナル抗体は慣用の技術を使用して、それ自体既知
の方法でヒト絨毛膜性ゴナドトロピンで予め免疫化した
ウサギの採血物から精製した。グリシン緩衝液（ｐＨ
＝ ８．３）の連続相を有するラテックス（０．６重量
％）および同じ緩衝液１一中１■の抗体溶液の等量部を
混合し３７゜Ｃでインキユベートした。装置を組み立て
た後、約０．６χの固形物からなる該溶液１５マイクロ
リットルを一時に１滴グラスファイバー紙１３に加えて
スポット１８′を生しさせた。次いでこのスポットを３
７゜Ｃで乾燥させた。対照部位１ ６’は、ウサギボリ
クローナル非免疫ガンマグロプリンを抗−ｈＣＧガンマ
グロプリンの代わりに使用した以外は上記で開示した試
験部位と同じにして製造した。
金属ゾル粒子は上記のフレンズの方法、即ち単分散金懸
濁液中の粒子サイズを調整するための核化制御（１９７
３年）に従って調整した。簡単に言えば、塩化金の４％
溶液を１％のクエン酸ナトリウムで還元して金ゾルを製
造して直径約１８ｎｍの金粒子を製造した。この粒子は
、ヒト黄体形成ホルモンとの検出可能な交叉反応性を有
しないヒト絨毛膜性ゴナドトロピンに特異的なモノクロ
ーナル抗体と混合することによって免疫化学的に反応性
とした。
濁液中の粒子サイズを調整するための核化制御（１９７
３年）に従って調整した。簡単に言えば、塩化金の４％
溶液を１％のクエン酸ナトリウムで還元して金ゾルを製
造して直径約１８ｎｍの金粒子を製造した。この粒子は
、ヒト黄体形成ホルモンとの検出可能な交叉反応性を有
しないヒト絨毛膜性ゴナドトロピンに特異的なモノクロ
ーナル抗体と混合することによって免疫化学的に反応性
とした。
抗体はチャールズリバーラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅ
ｓＲｉｖｅｒ Ｌａｂｓ）から購入した。この抗体はＨ
ＰＬＣイオン交換クロマトグラフィーを使用して腹水か
ら、精製を含む標準的な技術を使用して製造される。
ｓＲｉｖｅｒ Ｌａｂｓ）から購入した。この抗体はＨ
ＰＬＣイオン交換クロマトグラフィーを使用して腹水か
ら、精製を含む標準的な技術を使用して製造される。
この抗体はホウ酸塩緩衝液（ｐＨ６）の溶液１ ｍｌ中
１０ｕｇとして金ゾルに加えた。結合した抗体フラクシ
ョンは密度遠心法かゲル炉過クロマトグラフィーかのい
ずれかによって遊離フラクションから分離する。抗体ゾ
ル抱合体を製造する現在好ましい方法の詳細は上述のリ
ューベリング等のジャーナルオプイムノアッセイ（Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ） （１９８０年）で更に開
示されている。ラテックスおよび抱合体の個々のバッチ
は、適当な量のラテックスが試験部位に適用され、適当
な量の抱合体が本試験の実施で使用されるように活性を
最適にするために滴定する。
１０ｕｇとして金ゾルに加えた。結合した抗体フラクシ
ョンは密度遠心法かゲル炉過クロマトグラフィーかのい
ずれかによって遊離フラクションから分離する。抗体ゾ
ル抱合体を製造する現在好ましい方法の詳細は上述のリ
ューベリング等のジャーナルオプイムノアッセイ（Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ） （１９８０年）で更に開
示されている。ラテックスおよび抱合体の個々のバッチ
は、適当な量のラテックスが試験部位に適用され、適当
な量の抱合体が本試験の実施で使用されるように活性を
最適にするために滴定する。
゛ プロトコール
凍結乾燥金ゾル抗体抱合体の１０Ｘ５０ｍの試験管に既
知量のｈＣＧを含有する尿試料０．５戚を加える。シグ
マケミカルカンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏｍｐａｎｙ）から購入したｈＣＧ標準からなる試料
は処理したｈＣＧ陰性尿で希釈した。試験管の中味は凍
結乾燥した抗体が溶解するまで水平方向に振とうして混
合する。次いで、第３乃至５図に示した装置を試験管に
挿入し、全液体容量が吸収された後にその結果を読み取
る。
知量のｈＣＧを含有する尿試料０．５戚を加える。シグ
マケミカルカンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏｍｐａｎｙ）から購入したｈＣＧ標準からなる試料
は処理したｈＣＧ陰性尿で希釈した。試験管の中味は凍
結乾燥した抗体が溶解するまで水平方向に振とうして混
合する。次いで、第３乃至５図に示した装置を試験管に
挿入し、全液体容量が吸収された後にその結果を読み取
る。
この定性法の結果は次のとおりである。
ｍｌＵ ｈＣＧ １７（？｝（７）Ｑ ”
’−Ｘｌｙ｝（７）亀Ｏ 灰 色
灰 色２５ 灰 色
ピンク調５０ 灰 色 ピンク１００
灰 色 ローズ１５０
灰 色 ローズ＞１５
０ 灰 色 グークローズヒト絨毛膜
性ゴナドトロピン５０ｍｌＵでピンク色がはっきり見え
るということは、本試験が１生理期間がなかった１日後
に妊娠を検知できるということである。試験の初期段階
で、種々の供給源から得た約５０の陰性試料に実施して
も、疑僚陽性またはボーダーラインの事例さえ有さなか
った。
’−Ｘｌｙ｝（７）亀Ｏ 灰 色
灰 色２５ 灰 色
ピンク調５０ 灰 色 ピンク１００
灰 色 ローズ１５０
灰 色 ローズ＞１５
０ 灰 色 グークローズヒト絨毛膜
性ゴナドトロピン５０ｍｌＵでピンク色がはっきり見え
るということは、本試験が１生理期間がなかった１日後
に妊娠を検知できるということである。試験の初期段階
で、種々の供給源から得た約５０の陰性試料に実施して
も、疑僚陽性またはボーダーラインの事例さえ有さなか
った。
市販の装置は１％より小さい疑似陽性を有するものと予
想される。
想される。
上記したヒト絨毛膜性ゴナドトロピンに加えて本発明で
アッセイされ得る材料の制限のない例には、ヒト黄体形
成ホルモン，プロゲステロン，エストロゲンおよびスト
レプトコッカスがある。
アッセイされ得る材料の制限のない例には、ヒト黄体形
成ホルモン，プロゲステロン，エストロゲンおよびスト
レプトコッカスがある。
他の実施態様は前述の特許請求の範囲内である。
第１図は本発明の試験セルおよび方法を説明するのに有
用な試験セルの実施態様の１部を切断した、図式的な上
面図、 第２図は第１図の試験セルの横断側面図、第３図は本発
明に従って構成した現在好ましい試験セルの透視図、 第４Ａ図は第３図の試験セルの横断上面図であり、 第４Ｂ図は第４Ａ図の４Ｂ − ４１１線の線で切断し
た第３図の試験セルの横断側面図、 第５図は第４Ｂ図の５−５線で切断した第３図のセルの
横断面図、 第６図は本発明に従って構成した試験セルのもう１つの
実施態様の透視図である。 〔符号の説明〕 ５・・・試験セル １０・・・外包２・・・取着
材料 １４・・・試験液体人口６，１８・・・円形
開口部 ０・・・区画 ２２・・・試験容量区域４・・
・貯蔵容量区域 ２６・・・バンド手続相ｊ正書（方式
） 平成 １年１１月
用な試験セルの実施態様の１部を切断した、図式的な上
面図、 第２図は第１図の試験セルの横断側面図、第３図は本発
明に従って構成した現在好ましい試験セルの透視図、 第４Ａ図は第３図の試験セルの横断上面図であり、 第４Ｂ図は第４Ａ図の４Ｂ − ４１１線の線で切断し
た第３図の試験セルの横断側面図、 第５図は第４Ｂ図の５−５線で切断した第３図のセルの
横断面図、 第６図は本発明に従って構成した試験セルのもう１つの
実施態様の透視図である。 〔符号の説明〕 ５・・・試験セル １０・・・外包２・・・取着
材料 １４・・・試験液体人口６，１８・・・円形
開口部 ０・・・区画 ２２・・・試験容量区域４・・
・貯蔵容量区域 ２６・・・バンド手続相ｊ正書（方式
） 平成 １年１１月
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、液体試料中のリガンドを検出する方法であって、 Ａ、リガンドおよび抱合体を含んでいると思われる液体
試料を含有する溶液を試験セル中の流路に沿って移送さ
せて上記試験セルの壁の窓から見える試験部位に接触さ
せる段階であって、上記試験部位はリガンドの第１エピ
トープに特異的な結合部位を有する第１蛋白質を固定し
ており、 上記抱合体は、リガンドの第２エピトープに特異的な結
合部位を有する蛋白質およびリガンドと競って上記第１
蛋白質と結合する蛋白質からなる群から選択される第２
蛋白質にカップリングした着色粒子からなっている該段
階、および Ｂ、上記試験部位で色が発現するかどうかを上記窓から
視覚的に確認するのに十分な時間上記リガンドからなる
コンプレックスを上記試験部位で漸次生成させるように
上記溶液の移送を継続させる段階とから成る方法。 ２、上記試験セルは上記液体試料をろ過するろ過手段を
含み、上記試料が上記試験部位に接触する前に上記ろ過
手段を通して試料を移送する付加的な段階を有している
請求項１に記載の方法。 ３、上記流路の横断面領域が概ね上記試験部位に制限さ
れ、それによってリガンドが溶液の流過中に上記試験部
位に限定される請求項１に記載の方法。 ４、上記溶液を移送させて上記試験セル壁の窓から見え
る対照部位と接触させて上記試験部位と対照部位の色を
比較する付加的な段階を有する請求項１に記載の方法。 ５、上記対照部位が上記第１蛋白質を有さない陰性対照
部位からなる請求項４に記載の方法。 ６、上記対照部位が上記リガンドの既知真正試料を固定
した陽性対照部位からなる請求項４に記載の方法。 ７、段階Ａに先だって上記抱合体を上記液体試料と混合
する段階を含む請求項１に記載の方法。 ８、上記抱合体は上記流路内に配置され、上記試験部位
と接触させる前に上記液体を移送させて上記抱合体と溶
解接触させる付加的な段階を有する請求項１に記載の方
法。 ９、上記第１および第２蛋白質が抗体からなり且つ上記
蛋白質の少なくとも１つがモノクローナル抗体である請
求項１に記載の方法。 １０、上記第１蛋白質がヒト絨毛膜性ゴナドトロピンの
エピトープに特異的な結合部位を有する請求項１に記載
の方法。 １１、上記第１蛋白質がヒトプロゲステロンのエピトー
プに特異的な結合部位を有する請求項１に記載の方法。 １２、上記第２蛋白質がリガンド上のエピトープに特異
的な結合部位を有し、そして上記試料が上記リガンドを
含有するとき、段階Ｂで生成したコンプレックスが上記
第１および第２蛋白質の両方に結合した上記リガンドか
らなっており、そして色が上記試験部位での上記着色粒
子の凝集によって生成する請求項１に記載の方法。 １３、上記第２蛋白質がリガンドと競って上記第１蛋白
質と結合し、そして 上記試料が上記リガンドを含有するとき、段階Ｂで生成
したコンプレックスが上記第１蛋白質に結合した上記リ
ガンドからなっており、且つ上記試料が上記リガンドを
含有していないとき、段階Ｂで生成したコンプレックス
が上記第１蛋白質と結合した抱合体からなっており、そ
して色が上記試験部位の上記着色粒子の凝集によって生
成される請求項１に記載の方法。 １４、液体試料中のリガンドを検出する試験セルであっ
て、 透過性材料を収容し、そして液体試料入口、貯蔵容量区
域、上記入口と貯蔵容量区域間に置いた試験容量区域、
および上記試験容量区域で上記外包を貫く窓を区画して
有している細長い外包、上記外包内に置いた水溶液を移
送でき且つ上記試料入口から上記試験容量区域を通って
上記貯蔵容量区域と連絡して延びている流路を区画し得
る透過性材料、 上記リガンドの第１エピトープに特異的な結合部位を有
する第１蛋白質であって、該第１蛋白質は試験部位に固
定されており、上記流路と流体的に連絡している上記試
験容量区域内に配されておりそして上記窓から見ること
ができる該第１蛋白質、および、 上記流路に沿って液体試料を引き込み上記試験部位と接
触させるための、上記貯蔵容量区域中の取着材料、 からなっている試験セル。 １５、上記入口と上記試験部位との間の上記流路内に置
かれた液体試料ろ過手段を設けてなる請求項１４に記載
のセル。 １６、上記ろ過手段が上記透過性材料の１部によって区
画される請求項１５に記載のセル。 １７、上記流路の横断面領域が、上記試験部位に沿って
通過する液体中のリガンドが上記試験部位に局在するよ
うに、概ね上記試験部位に制限される請求項１４に記載
のセル。 １８、上記外包が上記外包を貫く第２の窓を区画して有
し且つ上記セルが更に第２の窓から見える上記流路と流
体的に連絡した対照部位からなる請求項１４に記載のセ
ル。 １９、上記対照部位が上記第１蛋白質を含有していない
陰性対照部位からなる請求項１８に記載のセル。 ２０、上記対照部位が上記透過性材料と接触して置かれ
たラテックス粒子からなる請求項１９に記載のセル。 ２１、上記対照部位が上記リガンドの既知真正試料を固
定した陽性対照部位からなる請求項１８に記載のセル。 ２２、上記試験部位と上記入口との間の上記流路に置か
れた抱合体からなり、該抱合体はリガンド上の第２エピ
トープに特異的な結合部位を有する蛋白質および上記リ
ガンドと競って上記第１蛋白質と結合する蛋白質からな
る群から選択される第２蛋白質とカップリングした着色
粒子からなっている請求項１４に記載のセル。 ２３、上記試験部位が上記透過性材料と接触して置かれ
たラテックス粒子に固定した抗体からなる請求項１４に
記載のセル。 ２４、上記第１蛋白質がヒト絨毛膜性ゴナドトロピンの
エピトープと結合する請求項１４に記載のセル。 ２５、上記第１蛋白質がヒトプロゲステロンのエピトー
プと結合する請求項１４に記載のセル。 ２６、上記第１および第２蛋白質の少なくとも１つがモ
ノクローナル抗体である請求項２２に記載のセル。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US21158288A | 1988-06-27 | 1988-06-27 | |
| US211,582 | 1988-06-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02132375A true JPH02132375A (ja) | 1990-05-21 |
| JP3125788B2 JP3125788B2 (ja) | 2001-01-22 |
Family
ID=22787518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP01159819A Expired - Lifetime JP3125788B2 (ja) | 1988-06-27 | 1989-06-23 | 着色粒子イムノアッセイ用の試験装置および方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP0349215B1 (ja) |
| JP (1) | JP3125788B2 (ja) |
| AT (1) | ATE121196T1 (ja) |
| AU (3) | AU2684488A (ja) |
| CA (1) | CA1340920C (ja) |
| DE (1) | DE68922148T2 (ja) |
| ES (1) | ES2073439T3 (ja) |
| GR (1) | GR3015771T3 (ja) |
| MX (1) | MX170320B (ja) |
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