JPH02134564A - 血液からの単核細胞の分離装置及び方法 - Google Patents
血液からの単核細胞の分離装置及び方法Info
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- JPH02134564A JPH02134564A JP1180111A JP18011189A JPH02134564A JP H02134564 A JPH02134564 A JP H02134564A JP 1180111 A JP1180111 A JP 1180111A JP 18011189 A JP18011189 A JP 18011189A JP H02134564 A JPH02134564 A JP H02134564A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
「産業上の利用分野」
本発明は、生の或は希釈した血液から単核細胞の分離に
関し、特に血液分離装置及びこの装置を用いた血液成分
の分離方法に関する。
関し、特に血液分離装置及びこの装置を用いた血液成分
の分離方法に関する。
「従来の技術」
今日市場にある公知の血液分離装置は、ニュートンゲル
の一定部分及び液体密度媒質の一定部分を含有するフィ
コール板のような血液採取管を備えている。このニュー
トンゲルは、ゲル上で採取管に入れられた血液サンプル
及び液体密度媒質間の障壁として採用している。この採
取管が遠心分離された時には、液体密度媒質が他の血液
成分から単核細胞を分離するように作用する。
の一定部分及び液体密度媒質の一定部分を含有するフィ
コール板のような血液採取管を備えている。このニュー
トンゲルは、ゲル上で採取管に入れられた血液サンプル
及び液体密度媒質間の障壁として採用している。この採
取管が遠心分離された時には、液体密度媒質が他の血液
成分から単核細胞を分離するように作用する。
前述の従来の血液分離装置は、血液サンプルがチューブ
に入れられて、直ちに遠心分離されて、目的の血液成分
を取り出す限り、診療所での応用に有効である。この装
置は、医者が血液サンプルを採取管に採取して、遠心分
離或は別の検査のために研究所に送るような、血液採取
管が輸送できる(耐震)血液分離装置としての機能も有
せず、また輸送血液の試験に不向きである。
に入れられて、直ちに遠心分離されて、目的の血液成分
を取り出す限り、診療所での応用に有効である。この装
置は、医者が血液サンプルを採取管に採取して、遠心分
離或は別の検査のために研究所に送るような、血液採取
管が輸送できる(耐震)血液分離装置としての機能も有
せず、また輸送血液の試験に不向きである。
「発明が解決しようとする課題」
このような装置が積み込めない理由は、ゲル及び密度媒
質が液体であり、採取管における予め処置された位置が
保持できないからである。これらゲル及び密度媒質は、
各々が相互に混ざらないが、採取管が横向きになった時
に、採取管内を右往左往してしま−う。従って、分離装
置が横向きになり、或はもし分離装置が揺れたならば、
ニュートンゲルは、もは・や、採取管に含まれる血液サ
ンプル及び液体密度媒質間に位置せず、これら二液間の
障壁として作用しない。血液サンプルが液体密度媒質と
混合して、比重或は密度等の血液分離特性に悪影響を及
ぼし、この結果血液サンプルの他の成分から単核細胞を
好ましく分離する能力が劣化する。
質が液体であり、採取管における予め処置された位置が
保持できないからである。これらゲル及び密度媒質は、
各々が相互に混ざらないが、採取管が横向きになった時
に、採取管内を右往左往してしま−う。従って、分離装
置が横向きになり、或はもし分離装置が揺れたならば、
ニュートンゲルは、もは・や、採取管に含まれる血液サ
ンプル及び液体密度媒質間に位置せず、これら二液間の
障壁として作用しない。血液サンプルが液体密度媒質と
混合して、比重或は密度等の血液分離特性に悪影響を及
ぼし、この結果血液サンプルの他の成分から単核細胞を
好ましく分離する能力が劣化する。
「課題を解決するための手段」
本発明の目的は、耐震血液分離装置を提供することであ
る。
る。
本発明の他の目的は、血液サンプルの他の成分から単核
細胞を好ましく分離する方法を提供することである。
細胞を好ましく分離する方法を提供することである。
本発明の更なる目的は、前述の公知の分離装置の固有の
欠点を克服した血液分離装置及びこれを使用した方法を
提供することである。
欠点を克服した血液分離装置及びこれを使用した方法を
提供することである。
本発明の一態様によれば、特に、生成は希釈血液から単
核細胞を分離する血液分離装置は、閉塞された底端と、
血液サンプルを採取する開口である上口とを持つ採取管
を備えている。この採取管が遠心分離されるようになっ
ている。
核細胞を分離する血液分離装置は、閉塞された底端と、
血液サンプルを採取する開口である上口とを持つ採取管
を備えている。この採取管が遠心分離されるようになっ
ている。
この分離装置は、更に、この採取管に含まれる疑液性ゲ
ル(物質)層と、この警戒汁ゲル層の下部に位置して、
採取管に含まれるニュートンゲル(物質)層とを備えて
いる。
ル(物質)層と、この警戒汁ゲル層の下部に位置して、
採取管に含まれるニュートンゲル(物質)層とを備えて
いる。
この採取管は、疑液性ゲル層上に血液サンプルを採取す
るに十分な自由空間を形成するような寸法である。
るに十分な自由空間を形成するような寸法である。
疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に採取
された血液サンプルと、ニュートンゲル層との間に位置
して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相互混合を
防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層間の障壁
として作用している。
された血液サンプルと、ニュートンゲル層との間に位置
して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相互混合を
防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層間の障壁
として作用している。
従って、疑液性ゲルは、右往左往せず、医者から研究所
に送り出す途中で、採取管が横倒しになっても血液サン
プル及びニュートンゲルの隔離を維持している。
に送り出す途中で、採取管が横倒しになっても血液サン
プル及びニュートンゲルの隔離を維持している。
この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル物質の比重より大
きい比重を持っている。採取管の遠心分離時には、疑液
性ゲル層がニュートンゲル物質の下部の位置に移動して
いる。
きい比重を持っている。採取管の遠心分離時には、疑液
性ゲル層がニュートンゲル物質の下部の位置に移動して
いる。
ニュートンゲル層は密度媒質として作用する。
このニュートンゲル物質は、ニュートンゲル層が遠心分
離時に、採取管に採取された血液サンプルの単核細胞及
びより重い成分間の位置に入り込むような比重を持って
いる。
離時に、採取管に採取された血液サンプルの単核細胞及
びより重い成分間の位置に入り込むような比重を持って
いる。
本発明の他の態様によれば、血液分離装置は、閉塞底端
から順に液体密度勾配媒質、ニュートンゲル、疑液性ゲ
ル及び採取管内の血液サンプルのガラス器具内貯蔵用の
安定剤をもつ前述の形態の採取管を備えている。
から順に液体密度勾配媒質、ニュートンゲル、疑液性ゲ
ル及び採取管内の血液サンプルのガラス器具内貯蔵用の
安定剤をもつ前述の形態の採取管を備えている。
本発明のその他の利点は、図面を参照して以下に説明さ
れる。
れる。
「実施例」
第1図の図面をまず参照すると、本発明の第一形態によ
って構成された血液分離装置は、閉塞されI;底端4及
び対抗の頂上端の上口6を持つ試験管の形態でよい採取
管2を備えている。この上口6には、取り外せる栓或は
他の蓋8が取り付けられて、血液サンプルが採取管2に
吸引できるように、蓋8に注射針が突き刺せることがで
きる。更に、採取管2は、患者から血液を直接採取でさ
るように真空引きされる。
って構成された血液分離装置は、閉塞されI;底端4及
び対抗の頂上端の上口6を持つ試験管の形態でよい採取
管2を備えている。この上口6には、取り外せる栓或は
他の蓋8が取り付けられて、血液サンプルが採取管2に
吸引できるように、蓋8に注射針が突き刺せることがで
きる。更に、採取管2は、患者から血液を直接採取でさ
るように真空引きされる。
本発明の血液分離装置は、第1図に示す形態において、
採取管に含まれた第1層即ち疑液性ゲル層10と、この
疑液性ゲル層10の下部に位置して、勿論、採取管に含
まれる第2層即ちニュートンゲル層12とを用いている
。
採取管に含まれた第1層即ち疑液性ゲル層10と、この
疑液性ゲル層10の下部に位置して、勿論、採取管に含
まれる第2層即ちニュートンゲル層12とを用いている
。
この採取管2は、疑液性ゲル層lO上に自由空間14を
形成するに十分な寸法を持っている。勿論、この自由空
間には、生成は希釈した血液サンプルが収容される。
形成するに十分な寸法を持っている。勿論、この自由空
間には、生成は希釈した血液サンプルが収容される。
この疑液性ゲル層10は、採取管の遠心分離前に、採取
管に採取された血液サンプル(図示時)と、ニュートン
ゲル層12との間に位置している。
管に採取された血液サンプル(図示時)と、ニュートン
ゲル層12との間に位置している。
この疑液性ゲル層lOは、ニュートンゲル層12が血液
サンプルと相互混合するのを防止するために、血液サン
プル及びニュートンゲル層12間の障壁として作用して
いる。
サンプルと相互混合するのを防止するために、血液サン
プル及びニュートンゲル層12間の障壁として作用して
いる。
既に記載したように、ニュートンゲルを含有した従来の
血液分離装置は、横倒しになった時に、採取管の長手方
向に右往左往する質の低下をニュートンゲルに誘発する
。第1図に示す本発明においては、ニュートンゲル層1
2が疑液性ゲル層lOと採取管の閉塞端4によってその
場に保持され、血液サンプルを未混合状態に維持してい
る。
血液分離装置は、横倒しになった時に、採取管の長手方
向に右往左往する質の低下をニュートンゲルに誘発する
。第1図に示す本発明においては、ニュートンゲル層1
2が疑液性ゲル層lOと採取管の閉塞端4によってその
場に保持され、血液サンプルを未混合状態に維持してい
る。
第1図に記載した血液分離装置において、疑液性ゲル層
10は、ニュートンゲル層12の比重より大きい比重を
持ち、採取管の遠心分離時にニュートンゲル層12下の
位置に移動している。これは第2図に示している。
10は、ニュートンゲル層12の比重より大きい比重を
持ち、採取管の遠心分離時にニュートンゲル層12下の
位置に移動している。これは第2図に示している。
ニュートンゲル層12は、密度媒質として作用する。こ
のニュートンゲルは、遠心分離時に、採取管に位置した
血液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の採取管2
の位置に入り込むような比重で形成される。
のニュートンゲルは、遠心分離時に、採取管に位置した
血液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の採取管2
の位置に入り込むような比重で形成される。
第1図に示すように、勿論、血液分離装置は、凝固防止
剤、安定剤或はこれら混合液のような溶液16を含んで
よく、この溶液が血液サンプルに混合されて、サンプル
が医者によって採取された後、遠心分離或は更なる処置
用に検査研究所に輸送中に血液細胞の生活力を維持して
いる。
剤、安定剤或はこれら混合液のような溶液16を含んで
よく、この溶液が血液サンプルに混合されて、サンプル
が医者によって採取された後、遠心分離或は更なる処置
用に検査研究所に輸送中に血液細胞の生活力を維持して
いる。
遠心分離時には、血液成分、疑液性ゲル層及びニュート
ンゲル層が各々第2図に示す位置にあると仮定できる。
ンゲル層が各々第2図に示す位置にあると仮定できる。
通常より重い血液成分である赤血細胞即ち赤血球18は
、採取管の底の閉塞端4方向に重力降下する。ニュート
ンゲル層12の比重より大きい(重い)比重を持つ疑液
性ゲルの疑液性ゲル層10は、ニュートンゲル112の
下の位置に移動する。血液サンプルの顆粒細胞20は、
通常、疑液性ゲル層10及び赤血球18間に位置してい
る。
、採取管の底の閉塞端4方向に重力降下する。ニュート
ンゲル層12の比重より大きい(重い)比重を持つ疑液
性ゲルの疑液性ゲル層10は、ニュートンゲル112の
下の位置に移動する。血液サンプルの顆粒細胞20は、
通常、疑液性ゲル層10及び赤血球18間に位置してい
る。
ニュートンゲル層12は、通常、液面上に単核細胞22
を配置させて、採取管2の上部隔壁を形成する。密度媒
質として使用されるニュートンゲル層は、分離され得る
血液相の比重の中間の特定の比重で形成される。第2図
は、顆粒細胞即ち白血球20及び赤血球18のような血
液のより重い成分、及び血小板、リンパ球及び単核細胞
を含有した単核細胞溜升22間の障壁を形成するニュー
トンゲル層12を示している。
を配置させて、採取管2の上部隔壁を形成する。密度媒
質として使用されるニュートンゲル層は、分離され得る
血液相の比重の中間の特定の比重で形成される。第2図
は、顆粒細胞即ち白血球20及び赤血球18のような血
液のより重い成分、及び血小板、リンパ球及び単核細胞
を含有した単核細胞溜升22間の障壁を形成するニュー
トンゲル層12を示している。
血液のプラズマは除去してもよいが、血小板、リンパ球
及び単核細胞を含有した単核細胞油分22を乱さないよ
うに注意深く作業すべきである。
及び単核細胞を含有した単核細胞油分22を乱さないよ
うに注意深く作業すべきである。
この操作は、隔壁層としてのニュートンゲル1it2上
の血小板、リンパ球及び単核細胞を吸い出す図示時のピ
ペットの手段によって実施されてもよい。その後、等優
性Ca”、Mg”除去食塩緩衝液のような希釈剤が徐々
にニュートンゲル層12上の採取管2に注がれる。その
後、採取管は、ゆっくりと閉められ或は撹拌して、ニュ
ートンゲル層12上に置かれた血小板、リンパ球及び単
核細胞を緩衝液に分散させ、この緩衝液が図示時のピペ
ットを使用して採取管2から取り出されて、標準及び公
知の手順に従って処理される。
の血小板、リンパ球及び単核細胞を吸い出す図示時のピ
ペットの手段によって実施されてもよい。その後、等優
性Ca”、Mg”除去食塩緩衝液のような希釈剤が徐々
にニュートンゲル層12上の採取管2に注がれる。その
後、採取管は、ゆっくりと閉められ或は撹拌して、ニュ
ートンゲル層12上に置かれた血小板、リンパ球及び単
核細胞を緩衝液に分散させ、この緩衝液が図示時のピペ
ットを使用して採取管2から取り出されて、標準及び公
知の手順に従って処理される。
第1図に示した前述の血液分離装置の1つの利点は、ニ
ュートンゲル層12が分離後の採取管内の単核細胞22
を支持し、ルブラ−氏等の米国特許第4,190,53
5号に記載されているような分離媒質として疑液性ゲル
を使用した血液分離装置で起こる赤血球の汚染を最小化
する手助けをすることである。ニュートンゲルが低粘度
であるので、ニュートンゲル層12は、分離された単核
細胞に対してより粘着性のある表面を提供する。
ュートンゲル層12が分離後の採取管内の単核細胞22
を支持し、ルブラ−氏等の米国特許第4,190,53
5号に記載されているような分離媒質として疑液性ゲル
を使用した血液分離装置で起こる赤血球の汚染を最小化
する手助けをすることである。ニュートンゲルが低粘度
であるので、ニュートンゲル層12は、分離された単核
細胞に対してより粘着性のある表面を提供する。
遠心分離の完了時には、採取管の閉塞端4に移動しない
ゆっくりとしI;赤血球細胞は、ニュートンゲル層12
に吸着或は吸収される。従って、本発明においては、単
核細胞の取り出し時に、赤血球が殆ど単核細胞22に含
まれない。
ゆっくりとしI;赤血球細胞は、ニュートンゲル層12
に吸着或は吸収される。従って、本発明においては、単
核細胞の取り出し時に、赤血球が殆ど単核細胞22に含
まれない。
第3図は、本発明の血液分離装置のより好ましい形態を
示している。第3図に示した血液分離装置は、第1図の
血液分離装置と同様に、閉塞端部の底4と、開口端部の
上口6とを持ち、血液サンプルを収容する自由空間14
が形成された採取管2を備え、更に、凝固防止剤、安定
剤或はこれらの合同液の溶液16と、疑液性ゲル層lO
と、この疑液性ゲル層の下部に位置したニュートンゲル
層12と、ニュートンゲル層下の、好ましくは採取管の
閉塞端部4に位置する液体密度媒質層26とを備えてい
る。
示している。第3図に示した血液分離装置は、第1図の
血液分離装置と同様に、閉塞端部の底4と、開口端部の
上口6とを持ち、血液サンプルを収容する自由空間14
が形成された採取管2を備え、更に、凝固防止剤、安定
剤或はこれらの合同液の溶液16と、疑液性ゲル層lO
と、この疑液性ゲル層の下部に位置したニュートンゲル
層12と、ニュートンゲル層下の、好ましくは採取管の
閉塞端部4に位置する液体密度媒質層26とを備えてい
る。
疑液性ゲル層10は、第1図の実施例で既に述べたよう
に、ニュートンゲル層12及び液体密度(分離)媒質層
26を採取管の下部に維持して、血液サンプル或は溶液
16を隔離した障壁として作用している。この疑液性ゲ
ル層10は、採取管2の遠心分離時にニュートンゲル層
12下の中立位置に移動するような、ニュートンゲル層
12の比重より大きい比重を持っている。しかし、後述
するように、この層lOは、液体密度媒質層26のそれ
より小さい比重を持つことが好ましい。
に、ニュートンゲル層12及び液体密度(分離)媒質層
26を採取管の下部に維持して、血液サンプル或は溶液
16を隔離した障壁として作用している。この疑液性ゲ
ル層10は、採取管2の遠心分離時にニュートンゲル層
12下の中立位置に移動するような、ニュートンゲル層
12の比重より大きい比重を持っている。しかし、後述
するように、この層lOは、液体密度媒質層26のそれ
より小さい比重を持つことが好ましい。
第4図は、遠心分離後の血液サンプルを含んだ第3図の
採取管を示している。より重い成分の赤血球18は、通
常閉塞端4に近い採取管の最下部を占有している。この
赤血球層18上には顆粒細胞層20が形成され、顆粒細
胞層20上には、単核細胞及び他の血液成分間の実分離
外の位置に対する障壁として作用する位置から取り出さ
れる疑液性ゲル層10が形成される。
採取管を示している。より重い成分の赤血球18は、通
常閉塞端4に近い採取管の最下部を占有している。この
赤血球層18上には顆粒細胞層20が形成され、顆粒細
胞層20上には、単核細胞及び他の血液成分間の実分離
外の位置に対する障壁として作用する位置から取り出さ
れる疑液性ゲル層10が形成される。
この疑液性ゲル層10上には、採取管の底に移動しない
幾つかの残余の赤血球を含む液体密度媒質の重い液相部
28が配置される。この液体密度媒質の重い液相部28
は、血液プラズマによって殆ど希釈されない部分である
。
幾つかの残余の赤血球を含む液体密度媒質の重い液相部
28が配置される。この液体密度媒質の重い液相部28
は、血液プラズマによって殆ど希釈されない部分である
。
ニュートンゲル層12は、遠心分離時に疑液性ゲル層1
0の上部に移動する。このニュートンゲル層12は、こ
の層において吸着或は吸収する残余の赤血球細胞を捕捉
するハエ取り紙効果を持っている。従って、ニュートン
ゲル層12は、抽出される血液用の赤血球細胞汚染を最
小化させている。
0の上部に移動する。このニュートンゲル層12は、こ
の層において吸着或は吸収する残余の赤血球細胞を捕捉
するハエ取り紙効果を持っている。従って、ニュートン
ゲル層12は、抽出される血液用の赤血球細胞汚染を最
小化させている。
ニュートンゲル層12の直上には、液体密度媒質の軽液
相30が配置される。この液体密度媒質の軽液相30は
、通常、ニュートンゲルの比重より軽い比重を持つ液体
密度媒質部を希釈する効果を持つ、遠心分離中に液体密
度媒質層26に血液の水成分を運ぶ赤血球細胞によって
起因されるものと信じられる。赤血球18及び疑液性ゲ
ル層10は、軽液相30より重く、軽液相をニュートン
ゲル層12上の位置に移動させる手助けをする。
相30が配置される。この液体密度媒質の軽液相30は
、通常、ニュートンゲルの比重より軽い比重を持つ液体
密度媒質部を希釈する効果を持つ、遠心分離中に液体密
度媒質層26に血液の水成分を運ぶ赤血球細胞によって
起因されるものと信じられる。赤血球18及び疑液性ゲ
ル層10は、軽液相30より重く、軽液相をニュートン
ゲル層12上の位置に移動させる手助けをする。
単核細胞22は、直接液体密度媒質の軽液相上に存在し
、単核細胞上には、既に述べたように、単核細胞の抽出
前にピペットで取り出される血液プラズマがある。
、単核細胞上には、既に述べたように、単核細胞の抽出
前にピペットで取り出される血液プラズマがある。
勿論、既に述べたように、液体密度媒質層26の軽液相
30は、ニュートンゲル層12に粘着或は吸収すること
によって単核細胞の損失を最小化させがちであり、単核
細胞22を浮かすように作用するので好ましい。この結
果、単核細胞が僅かな損失を伴って分離された後採取管
から容易に取り出される。
30は、ニュートンゲル層12に粘着或は吸収すること
によって単核細胞の損失を最小化させがちであり、単核
細胞22を浮かすように作用するので好ましい。この結
果、単核細胞が僅かな損失を伴って分離された後採取管
から容易に取り出される。
遠心分離前或は輸送中に、第3図に示す血液分離装置の
成分(即ち凝固防止剤及び安定剤の溶液16、疑液性ゲ
ル層10.ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層2
6)の相対位置を維持することが要望されたならば、第
5図及び第6図に示す実施例が使用できる。
成分(即ち凝固防止剤及び安定剤の溶液16、疑液性ゲ
ル層10.ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層2
6)の相対位置を維持することが要望されたならば、第
5図及び第6図に示す実施例が使用できる。
第5図に示す分離装置は、採取管2に挿入されて、閉塞
端4に位置する多孔性フオーム部材32を更に含む点景
外は第3図に示す実施例と同様である。この多孔性フオ
ーム部材32は、液体密度媒質層26の全体或は殆どの
部分を保持し吸着するために使用される。このフオーム
部材32は、ニュートンゲル層12に機械的に安定な障
壁を提供し、実際、採取管内の血液収容能力を殆ど減少
させないで、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層
26を疑液性ゲル層10下の位置に保持している。
端4に位置する多孔性フオーム部材32を更に含む点景
外は第3図に示す実施例と同様である。この多孔性フオ
ーム部材32は、液体密度媒質層26の全体或は殆どの
部分を保持し吸着するために使用される。このフオーム
部材32は、ニュートンゲル層12に機械的に安定な障
壁を提供し、実際、採取管内の血液収容能力を殆ど減少
させないで、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層
26を疑液性ゲル層10下の位置に保持している。
血液サンプルを含む採取管の遠心分離中には、赤血球細
胞がフオーム部材に入って液体密度媒質と置換する。も
し、フォーム部材32の量が液体密度媒質の密度に殆ど
同じならば、採取管の血液収容能力の減少が無視できる
。赤血球細胞は、前の実施例がそうであったように液体
密度媒質と置換して、採取管2のより下部を占有する。
胞がフオーム部材に入って液体密度媒質と置換する。も
し、フォーム部材32の量が液体密度媒質の密度に殆ど
同じならば、採取管の血液収容能力の減少が無視できる
。赤血球細胞は、前の実施例がそうであったように液体
密度媒質と置換して、採取管2のより下部を占有する。
フォーム部材32は、架橋ウレタンフォームのような種
々の材料から形成される。
々の材料から形成される。
これの代りに、第2の疑液性ゲル層34は、第6図に示
すように、多孔性フオーム部材を使用する代りに、第3
図の装置において液体密度勾配媒質層26及びニュート
ンゲル層12間に位置してもよい。この第2の疑液性ゲ
ル層34は、採取管における液体密度媒質層26及びニ
ュートンゲル層12の相対位置を維持し、採取管の横倒
し時にこれら成分が混合するのを防止している。
すように、多孔性フオーム部材を使用する代りに、第3
図の装置において液体密度勾配媒質層26及びニュート
ンゲル層12間に位置してもよい。この第2の疑液性ゲ
ル層34は、採取管における液体密度媒質層26及びニ
ュートンゲル層12の相対位置を維持し、採取管の横倒
し時にこれら成分が混合するのを防止している。
第3図に示した実施例においては、ニュートンゲル層1
2は、既に記載した従来の装置に使用した障壁として使
用せず、むしろ分離後の単核細胞22を汚染し得る残余
の赤血球を捕捉する粘着面を形成するために使用してい
るので、即ち疑液性ゲル層10が障壁として機能してい
るので、標準の15m1の採取管毎に0.5mlのよう
なかなり少量でよい。
2は、既に記載した従来の装置に使用した障壁として使
用せず、むしろ分離後の単核細胞22を汚染し得る残余
の赤血球を捕捉する粘着面を形成するために使用してい
るので、即ち疑液性ゲル層10が障壁として機能してい
るので、標準の15m1の採取管毎に0.5mlのよう
なかなり少量でよい。
血液サンプル或は凝固防止剤及び安定剤溶液16、及び
ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26間の障壁
として機能する疑液性ゲル層1゜は、採取管2の断面領
域を完全に覆うに十分な量採取管内に封入されて、採取
管が上向きに長時間保存されても好適な障壁を形成して
いる。10〜15m!標準遠心分離用採取管毎に2.5
mn量の疑液性ゲル層が劣化しない障壁を形成するに十
分である。
ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26間の障壁
として機能する疑液性ゲル層1゜は、採取管2の断面領
域を完全に覆うに十分な量採取管内に封入されて、採取
管が上向きに長時間保存されても好適な障壁を形成して
いる。10〜15m!標準遠心分離用採取管毎に2.5
mn量の疑液性ゲル層が劣化しない障壁を形成するに十
分である。
本発明の1つの利点は、血液分離装置が遠心分離前に血
液サンプル用の積み出し容器として使用を許容する採取
管2において、液体密度媒質層26及び安定剤或は凝固
防止剤溶液16を含有する全成分を製造してもよいこと
である。前述の従来の血液分離装置は、ニュートンゲル
が障壁として使用された時に、凝固防止剤或は安定剤を
液体密度媒質と混合することを許容し、媒質の密度及び
その細胞分離特性に悪影響するように質を低下させるの
で、上記能力を持っていない。
液サンプル用の積み出し容器として使用を許容する採取
管2において、液体密度媒質層26及び安定剤或は凝固
防止剤溶液16を含有する全成分を製造してもよいこと
である。前述の従来の血液分離装置は、ニュートンゲル
が障壁として使用された時に、凝固防止剤或は安定剤を
液体密度媒質と混合することを許容し、媒質の密度及び
その細胞分離特性に悪影響するように質を低下させるの
で、上記能力を持っていない。
血液分離装置の採取管が血液を採取後、検査用に上向き
にして医者から診断研究所に積み出される理由の1つは
、血液サンプルを可能な限り採取管内の安定剤或は凝固
防止剤に露出させることである。このような事は、障壁
として作用する疑液性ゲル層10が採取管2内で劣化せ
ず、液体密度媒質を採取管内の血液サンプル或は凝固防
止剤/安定剤から隔離するので、本発明によって達成で
きる。
にして医者から診断研究所に積み出される理由の1つは
、血液サンプルを可能な限り採取管内の安定剤或は凝固
防止剤に露出させることである。このような事は、障壁
として作用する疑液性ゲル層10が採取管2内で劣化せ
ず、液体密度媒質を採取管内の血液サンプル或は凝固防
止剤/安定剤から隔離するので、本発明によって達成で
きる。
本発明の他の利点は、疑液性ゲル層10が親水性或は疎
水性特性で形成されてもよい点である。
水性特性で形成されてもよい点である。
これは、疑液性ゲル層lOが分離媒質としてでなく、障
壁としてのみ使用でき、遠心分離時に所望の血液成分分
離を妨害しない中立位置に移動するからである。従って
、多くの型の疑液性ゲルは、細胞分離媒質として使用さ
れた時に水を吸収し、性能及び特性を変化させがちの無
機充填物を含んで使用されてもよい。
壁としてのみ使用でき、遠心分離時に所望の血液成分分
離を妨害しない中立位置に移動するからである。従って
、多くの型の疑液性ゲルは、細胞分離媒質として使用さ
れた時に水を吸収し、性能及び特性を変化させがちの無
機充填物を含んで使用されてもよい。
勿論、疑液性ゲル層10は、唯一の要求特性が障壁区分
としてのみ使用されるので、遠心分離下で所望の中立位
置に移動する。従って、疑液性ゲルの粘度は、遠心分離
下で疑液性ゲル層10の移動を許容する範囲内に留とま
るように単に選択される。
としてのみ使用されるので、遠心分離下で所望の中立位
置に移動する。従って、疑液性ゲルの粘度は、遠心分離
下で疑液性ゲル層10の移動を許容する範囲内に留とま
るように単に選択される。
水を吸収しがちの無機充填物を含有した疑液性ゲルの使
用の唯一の欠点は、長期間の貯蔵中に疑液性ゲルが水を
吸収して、疑液性ゲルが白っぽく褪色することである。
用の唯一の欠点は、長期間の貯蔵中に疑液性ゲルが水を
吸収して、疑液性ゲルが白っぽく褪色することである。
この褪色は、疑液性ゲル層10の障壁特性に影響しない
が、血液分離装置がもはや有用でない外観を呈してしま
う。この問題を克服するためには、二酸化チタンのよう
な着色剤がゲルに添加されて、疑液性ゲルが水を吸収し
た時の外観の変化を最小にさせてもよい。
が、血液分離装置がもはや有用でない外観を呈してしま
う。この問題を克服するためには、二酸化チタンのよう
な着色剤がゲルに添加されて、疑液性ゲルが水を吸収し
た時の外観の変化を最小にさせてもよい。
本発明の疑液性ゲル層10は、血液分離装置内の成分の
相対位置を維持し、血液サンプル或は凝固防止剤及び安
定剤溶液16、ニュートンゲル層12及び液体密度勾配
媒質層26間の分離状態を維持するのみならず、既に述
べたように、液体密度媒質層26の軽液相30をニュー
トンゲル層12の上部の所望位置に移動させる変位媒体
として作用する。
相対位置を維持し、血液サンプル或は凝固防止剤及び安
定剤溶液16、ニュートンゲル層12及び液体密度勾配
媒質層26間の分離状態を維持するのみならず、既に述
べたように、液体密度媒質層26の軽液相30をニュー
トンゲル層12の上部の所望位置に移動させる変位媒体
として作用する。
勿論、製造中の採取管内の疑液性ゲル層10が本発明の
構造によって容易に位置される。1984年9月240
に出願された米国出願第653゜178号に記載したよ
うに、液体密度媒質と、この液体密度媒質上の疑液性ゲ
ル障壁層を使用した血液分離装置においては、疑液性ゲ
ル層が液体密度媒質上に注意しながら配置して、液体密
度媒質の表面がかなり堅い(ゼリー状の)疑液性ゲルを
破らないことを保証しなければならない。本発明におい
ては、液体密度媒質層26上のニュートンゲル層12が
液体密度媒質を破りそうでなく、液体密度媒質より大き
い流動抵抗を持つニュートンゲル層12が疑液性ゲル層
10の配置を容易にさせるより堅い面を形成している。
構造によって容易に位置される。1984年9月240
に出願された米国出願第653゜178号に記載したよ
うに、液体密度媒質と、この液体密度媒質上の疑液性ゲ
ル障壁層を使用した血液分離装置においては、疑液性ゲ
ル層が液体密度媒質上に注意しながら配置して、液体密
度媒質の表面がかなり堅い(ゼリー状の)疑液性ゲルを
破らないことを保証しなければならない。本発明におい
ては、液体密度媒質層26上のニュートンゲル層12が
液体密度媒質を破りそうでなく、液体密度媒質より大き
い流動抵抗を持つニュートンゲル層12が疑液性ゲル層
10の配置を容易にさせるより堅い面を形成している。
疑液性ゲル層10は、障壁としてのみ使用され、水溶液
との接触で影響されないので、安定剤或は凝固防止剤溶
液16及び液体密度媒質層26の両者が混合されないで
陣壁疑液性ゲル層10と接触して貯蔵されてもよい。1
対1に希釈された安定剤の使用は、同じ採取管を使用し
た分離前に、サンプルの劣化なしに、基準研究所への細
胞分離装置内の血液サンプルの一晩の積み込みを許容し
ている。安定剤は、もし、長期間の貯蔵或は長期の積み
込み(輸送時間)が要求されたならば、その生活力を維
持する培養培地を含んでもよい。
との接触で影響されないので、安定剤或は凝固防止剤溶
液16及び液体密度媒質層26の両者が混合されないで
陣壁疑液性ゲル層10と接触して貯蔵されてもよい。1
対1に希釈された安定剤の使用は、同じ採取管を使用し
た分離前に、サンプルの劣化なしに、基準研究所への細
胞分離装置内の血液サンプルの一晩の積み込みを許容し
ている。安定剤は、もし、長期間の貯蔵或は長期の積み
込み(輸送時間)が要求されたならば、その生活力を維
持する培養培地を含んでもよい。
使用可能な安定剤は、代表的に、等張或は高張の溶液、
高分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、RPMI
のような細胞培養培地及びマツコイ培地である。この安
定剤は、血液との希釈比が0.25対1〜3対1になる
ような量である。
高分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、RPMI
のような細胞培養培地及びマツコイ培地である。この安
定剤は、血液との希釈比が0.25対1〜3対1になる
ような量である。
既に述べたように、本発明の血液分離装置は、真空引き
され、凝固防止剤が安定剤に添加されて、直接吸引採取
管として機能してもよい。
され、凝固防止剤が安定剤に添加されて、直接吸引採取
管として機能してもよい。
勿論、既に述べたように、本発明の各実施例は、採取管
2の上口に、密封と注入口とを兼用した蓋8をかぶせて
もよい。この蓋8は、標準の血液吸引針の侵入が好適な
隔膜を持つブチルゴムの形態でよい。
2の上口に、密封と注入口とを兼用した蓋8をかぶせて
もよい。この蓋8は、標準の血液吸引針の侵入が好適な
隔膜を持つブチルゴムの形態でよい。
疑液性ゲル層10は、水溶液による貯蔵中に水吸収を制
限するために、予め水で飽和させてもよい。疑液性ゲル
層は、シリコンゲル、共ポリエステル樹脂基剤ゲル、ポ
リブタジェン基剤ゲル、ポリブテン基剤ゲル、或は例え
ばα−オレフィンジアルキルマレイン酸共ポリマ基剤ゲ
ルを含む種々のゲルの1つでよい。
限するために、予め水で飽和させてもよい。疑液性ゲル
層は、シリコンゲル、共ポリエステル樹脂基剤ゲル、ポ
リブタジェン基剤ゲル、ポリブテン基剤ゲル、或は例え
ばα−オレフィンジアルキルマレイン酸共ポリマ基剤ゲ
ルを含む種々のゲルの1つでよい。
勿論、ニュートンゲル層12は、疎水性、特に無機充填
物を含まない樹脂である種々の有機樹脂から選択される
。これの代りに、ニュートンゲルは必須的に疎水性のポ
リエステル樹脂から形成されてもよい。
物を含まない樹脂である種々の有機樹脂から選択される
。これの代りに、ニュートンゲルは必須的に疎水性のポ
リエステル樹脂から形成されてもよい。
本発明においては、分離媒質、第3図に示す液体密度媒
質層26或は第1図に示すニュートンゲル層12が約1
.07〜1.09の比重を持つように選択されるが、1
.09以上の比重を持ってもよい。
質層26或は第1図に示すニュートンゲル層12が約1
.07〜1.09の比重を持つように選択されるが、1
.09以上の比重を持ってもよい。
「発明の効果」
本発明は、最初に述べた従来の血液分離装置と異なる、
医者から基準研究所に積み出し即ち輸送できる血液分離
装置を提供するが、従来の血液分離装置の全利点も持っ
ている。その上部に疑液性ゲル層10が配置されるニュ
ートンゲル層12の使用によって、試料形成が容易であ
り、ニュートンゲル層12がもはや障壁として機能せず
、赤血球汚染を最小化するように機能するので、より少
量のニュートンゲルが使用できる。
医者から基準研究所に積み出し即ち輸送できる血液分離
装置を提供するが、従来の血液分離装置の全利点も持っ
ている。その上部に疑液性ゲル層10が配置されるニュ
ートンゲル層12の使用によって、試料形成が容易であ
り、ニュートンゲル層12がもはや障壁として機能せず
、赤血球汚染を最小化するように機能するので、より少
量のニュートンゲルが使用できる。
血液サンプルを含有した血液分離装置は、遠心分離器に
直接置かれて、約1,000〜2,000Gの加速度で
約10〜30分間回転させられて、単核細胞を分離して
いる。好ましくは、約1.500Gで15分間である。
直接置かれて、約1,000〜2,000Gの加速度で
約10〜30分間回転させられて、単核細胞を分離して
いる。好ましくは、約1.500Gで15分間である。
第1図は本発明の一形態によって形成された血液分離装
置の側面図、第2図は血液サンプルが含まれた分離装置
が遠心分離された後に、第1図に示した血液分離装置の
血液成分及び他の要素の状態図、第3図は本発明の第二
実施例の血液分離装置を示し、遠心分離前に安定剤或は
他の溶液が含まれた分離装置の側面図、第4図は血液サ
ンプルの含有の分離装置が遠心分離された後の第2図に
示した血液分離装置の血液成分及び他の要素の状態図、
第5図は本発明の第三形態によって形成された血液分離
装置の側面図、第6図は本発明の第四形態によって形成
された血液分離装置の側面図である。 10・°・疑液性ゲル層、12・・・ニュートンゲル層
、14・・・自由空贋、16・・・凝固防止剤、安定剤
或はこれら混合液、22・・・単核細胞。 出願人 ベクトン ディキインソン アンドカンパニ
置の側面図、第2図は血液サンプルが含まれた分離装置
が遠心分離された後に、第1図に示した血液分離装置の
血液成分及び他の要素の状態図、第3図は本発明の第二
実施例の血液分離装置を示し、遠心分離前に安定剤或は
他の溶液が含まれた分離装置の側面図、第4図は血液サ
ンプルの含有の分離装置が遠心分離された後の第2図に
示した血液分離装置の血液成分及び他の要素の状態図、
第5図は本発明の第三形態によって形成された血液分離
装置の側面図、第6図は本発明の第四形態によって形成
された血液分離装置の側面図である。 10・°・疑液性ゲル層、12・・・ニュートンゲル層
、14・・・自由空贋、16・・・凝固防止剤、安定剤
或はこれら混合液、22・・・単核細胞。 出願人 ベクトン ディキインソン アンドカンパニ
Claims (30)
- (1)閉塞端部の底と、開口端部の上口とを有し、血液
サンプルが採取されて遠心分離される採取管と、 この採取管に含まれる疑液性ゲル層と、 この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採取管に含ま
れるニュートンゲル層とを備え、 前記採取管は、疑液性ゲル層の上部に前記血液サンプル
を採取するに十分な自由空間を形成する寸法を持ち、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取された血液サンプルと、前記ニュートンゲル層との
間に位置して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相
互混合を防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層
間の障壁として作用し、 この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル層の比重より大き
い比重を持ち、採取管の遠心分離時に、ニュートンゲル
物質の下部の位置に移動し、前記ニュートンゲル層は、
密度媒質として作用して、ニュートンゲル層が遠心分離
時に、採取管に採取された血液サンプルの単核細胞及び
より重い成分間の位置に入り込むような比重を持つ血液
からの単核細胞の分離装置。 - (2)閉塞端部の底と、開口端部の上口とを有し、血液
サンプルが採取されて遠心分離される採取管と、 この採取管に含まれる疑液性ゲル層と、 この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採取管に含ま
れるニュートンゲル層と、 前記採取管に含まれ、ニュートンゲル層の下部の、ニュ
ートンゲル層及び閉塞端部間に位置する液体密度媒質層
とを備え、 前記採取管は、疑液性ゲル層の上部に前記血液サンプル
を採取するに十分な自由空間を形成する寸法を持ち、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取された血液サンプル及び前記ニュートンゲル層間に
位置して、血液サンプルがニュートンゲル層及び液体密
度媒質層と相互混合することを防止する、血液サンプル
とニュートンゲル層及び液体密度媒質層との間の障壁と
して作用し、この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル層の
比重より大きく、前記液体密度媒質層のそれより小さい
比重を持ち、採取管の遠心分離時に、ニュートンゲル層
の下部の位置に移動し、 前記ニュートンゲル層は、採取管の遠心分離時に、疑液
性ゲル層の上部の採取管に位置するような比重を持ち、 前記液体密度媒質は、分離媒体として作用して、採取管
の遠心分離時に、採取管に採取された血液サンプルの単
核細胞及びより重い成分間の位置に入り込むような比重
を持つ血液からの単核細胞の分離装置。 - (3)前記ニュートンゲル層は、約1.07〜1.09
の比重を持つ特許請求の範囲第1項記載の装置。 - (4)前記液体密度媒質層の比重は、約1.07〜1.
09である特許請求の範囲第2項記載の装置。 - (5)前記ニュートンゲル層は、必須的に疎水性の有機
樹脂から形成される特許請求の範囲第1項記載の装置。 - (6)前記ニュートンゲル層は、必須的に疎水性の有機
樹脂から形成される特許請求の範囲第2項記載の装置。 - (7)前記ニュートンゲル層は、ポリエステル樹脂から
形成される特許請求の範囲第1項記載の装置。 - (8)前記ニュートンゲル層は、ポリエステル樹脂から
形成される特許請求の範囲第2項記載の装置。 - (9)前記疑液性ゲル層は、シリコンゲル、共ポリエス
テル樹脂基剤ゲル、ポリブタジエン基剤ゲル、ポリブテ
ン基剤ゲル及びα−オレフィンジアルキルマレイン酸共
ポリマ基剤ゲルからなる群から選択される特許請求の範
囲第1項記載の装置。 - (10)前記疑液性ゲル層は、シリコンゲル、共ポリエ
ステル樹脂基剤ゲル、ポリブタジエン基剤ゲル、ポリブ
テン基剤ゲル及びα−オレフィンジアルキルマレイン酸
共ポリマ基剤ゲルからなる群から選択される特許請求の
範囲第2項記載の装置。 - (11)前記疑液性ゲル層は、水との吸着を制限するた
めに、予め水で飽和させられる特許請求の範囲第1項記
載の装置。 - (12)前記疑液性ゲル層は、水との吸着を制限するた
めに、予め水で飽和させられる特許請求の範囲第2項記
載の装置。 - (13)前記疑液性ゲル層は、水との吸着に起因する外
観の変化を最小にするために、着色剤を含む特許請求の
範囲第1項記載の装置。 - (14)前記疑液性ゲル層は、水との吸着に起因する外
観の変化を最小にするために、着色剤を含む特許請求の
範囲第2項記載の装置。 - (15)前記採取管には、血液サンプルの血液細胞の老
化を最小にし、従って採取管における血液サンプルのガ
ラス器具内貯蔵を許容するために、採取管に位置した血
液サンプルと混合される安定剤が含まれる特許請求の範
囲第1項記載の装置。 - (16)前記採取管には、血液サンプルの血液細胞の老
化を最小にし、従って採取管における血液サンプルのガ
ラス器具内貯蔵を許容するために、採取管に位置した血
液サンプルと混合される安定剤が含まれる特許請求の範
囲第2項記載の装置。 - (17)前記安定剤は、等張溶液、高張溶液、高分子量
の有機分子を添加したイオン性溶液、細胞培養培地及び
マッコイ培地からなる安定剤の群から選択される特許請
求の範囲第15項記載の装置。 - (18)前記安定剤は、等張溶液、高張溶液、高分子量
の有機分子を添加したイオン性溶液、細胞培養培地及び
マッコイ培地からなる安定剤の群から選択される特許請
求の範囲第16項記載の装置。 - (19)前記採取管の上口には、蓋が取り付けられる特
許請求の範囲第1項記載の装置。 - (20)前記採取管の上口には、蓋が取り付けられる特
許請求の範囲第2項記載の装置。 - (21)前記採取管に、形成される自由空間が真空引き
されて、血液サンプルの直接吸引を許容する特許請求の
範囲第1項記載の装置。 - (22)前記採取管に形成される自由空間が真空引きさ
れて、血液サンプルの直接吸引を許容する特許請求の範
囲第2項記載の装置。 - (23)前記採取管には、閉塞端部近傍に位置する多孔
性フォーム部材が含まれ、この多孔性フォーム部材が採
取管内の液体密度媒質層を吸着する特許請求の範囲第2
項記載の装置。 - (24)前記多孔性フォーム部材は、架橋ウレタンフォ
ームから形成される特許請求の範囲第23項記載の装置
。 - (25)採取管と、この採取管に含まれる疑液性ゲル層
と、この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採取管に
含まれるニュートンゲル層とを備え、前記疑液性ゲル層
は、採取管の遠心分離前に、採取管に採取され得る血液
サンプルと前記ニュートンゲル層との間に位置して、血
液サンプル及びニュートンゲル層の相互混合を防止する
血液サンプル及びニュートンゲル層間の障壁として作用
し、ニュートンゲル物質の比重より大きい比重を持って
、採取管の遠心分離時に、ニュートンゲル物質の下部の
位置に移動し、 前記ニュートンゲル層は、密度媒質として作用して、ニ
ュートンゲル層が遠心分離時に、採取管に採取された血
液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の位置に入り
込むような比重を持つ血液分離装置に、血液サンプルを
導入し、 この採取管を約1,000〜2,000Gの速度で遠心
分離して、疑液性ゲル層がニュートンゲル層の下の位置
に移動し、ニュートンゲル層が単核細胞及びこれより重
い血液サンプル成分間に位置させた段階を備えた血液か
らの単核細胞の分離方法。 - (26)前記血液サンプルから分離されたプラズマを除
去し、プラズマの分離後に単核細胞に対する希釈剤を添
加して、ニュートンゲル層上に配置された懸濁液を形成
する段階を備えた特許請求の範囲第25項記載の方法。 - (27)前記ニュートンゲル層の上に配置された懸濁液
を除去する段階を備えた特許請求の範囲第26項記載の
方法。 - (28)採取管と、この採取管に含まれる疑液性ゲル層
と、この疑液性ゲル層下に位置して、前記採取管に含ま
れるニュートンゲル層と、このニュートンゲル層下に位
置して、該採取管に含まれる液体密度媒質層とを備えて
、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取され得る血液サンプルと前記ニュートンゲル層及び
液体密度媒質層との間に位置して、血液サンプルとニュ
ートンゲル層及び液体密度媒質層との相互混合を防止す
る血液サンプル及びニュートンゲル層及び液体密度媒質
層間の障壁として作用し、ニュートンゲル物質の比重よ
り大きい比重を持って、採取管の遠心分離時に、ニュー
トンゲル物質下の位置に移動し、 前記液体密度媒質は、遠心分離時に、採取管に採取され
た血液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の位置に
入り込むような比重を持つ血液分離装置に、血液サンプ
ルを導入し、 この採取管を約1,000〜2,000Gの速度で遠心
分離して、疑液性ゲル層がニュートンゲル層の下の位置
に移動し、少なくとも液体密度媒質が単核細胞及びこれ
より重い血液サンプル成分間に位置させられた段階を備
えた血液からの単核細胞の分離方法。 - (29)前記血液サンプルから分離されたプラズマを除
去し、プラズマの分離後に単核細胞に対する希釈剤を添
加して、ニュートンゲル層の上に配置された懸濁液を形
成する段階を備えた特許請求の範囲第28項記載の方法
。 - (30)前記ニュートンゲル層の上に配置された懸濁液
を除去する段階を備えた特許請求の範囲第29項記載の
方法。
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