JPH0214661B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はアシル化剤で化学的に修飾した抗体
（以下アシル化抗体と記載する）を微粒子担体に
吸着した感作担体を主成分とする抗原検出用試薬
に関する。 〔従来の背景及び先行技術〕 現在、体液中又は尿中の各種ホルモン、蛋白
質、薬物及びこれらの代謝産物等の検出あるいは
これらの濃度の測定（いわゆる臨床分析）が疾患
の診断、予後の判定及び治療法の決定等に重要な
役割を演じている。そしてこれらの測定は、物理
化学的、生化学的あるいは免疫学的方法でなされ
ているが、免疫学的方法によるラジオイムノアツ
セイ（Radioimmunoassay）（RIA）、エンザイ
ムイムノアツセイ（Enzyme immunoassay）
（EIA）等は、体液中又は尿中の微量成分を特異
的かつ再現性よく測定出来るので臨床分析の分野
で広く使用され、免疫学的凝集あるいは凝集阻止
反応による体液中又は尿中の微量成分の検出法も
広く実用に供されている。 この凝集あるいは凝集阻止反応による検出法
は、例えば、抗原を哺乳動物に免疫して抗原に特
異的な抗体を産生させ、抗原及び／又は抗体を微
粒子担体（例えば、赤血球、ラテツクス等）に吸
着させ、抗体又は抗原と反応させ、凝集阻止又は
凝集の状態を肉眼又は機械で観察又は測定するこ
とによつて、抗原の有無又は抗原の濃度を知るこ
とが出来る。 このような担体を利用した凝集又は凝集阻止反
応により、体液中又は尿中の抗原を検出する測定
方法によつて最も影響を及ぼすのは体液中又は尿
中に存在する物質による非特異的凝集（免疫学的
は抗原抗体反応に基づく特異的な凝集以外の凝集
をいう）であり、一般的には「非特異的凝集反
応」と呼ばれている。非特異的凝集反応は、特に
担体に抗体を吸着させて、試料中の抗原との凝集
反応によつて感作担体の凝集の有無の判定又は抗
原の濃度の測定をする際に、非常に大きな問題と
なる。即ち非特異的凝集が生じた場合、体液中又
は尿中の抗原が本来存在していないのに存在する
と誤つて判断され、あるいは存在量が低いのを高
いと判断されることとなり、抗原の有無又は濃度
を測定する方法としての精度及び再現性等に信頼
性を欠く結果となる。従つて疾患の診断、予後の
判定及び治慮法の決定等に重大な影響を及ぼすの
である。 このような理由から非特異的凝集反応を排除す
ることは、免疫学的凝集又は凝集阻止反応によつ
て体液中又は尿中の抗原を検出する方法において
はきわめて重要なことであり、非特異的凝集反応
を排除するための方法が従来種々試みられてい
る。それらの方法には、使用する試薬の緩衝液の
種類及びPHを特定する方法（特開昭57−35754号
公報及び特開昭57−182168号公報）非特異的凝集
反応をおこす物質等を濾過して除去する方法（特
開昭47−31696号公報、特公昭52−43038号公報、
特公昭57−24509号公報、特開昭55−146022号公
報及び特開昭57−182170号公報）、使用する試薬
に特殊な添加物を加える方法（特公昭43−12741
号公報、特公昭49−11407号公報、特開昭50−
82230号公報、特開昭55−12419号公報、特開昭57
−1970号公報、特開昭57−9723号公報及び特開昭
57−59167号公報）及び抗体を加水分解酵素で分
解する方法（特開昭54−139595号公報）等があ
る。 これらの従来法からも明らかな如く、非特異的
凝集の出現に関する問題が臨床分析の分野におけ
る重大な関心事があり、非特異的凝集反応を排除
する試みが種々実施されてきたが、非特異的凝集
反応を選択的に完全に排除することが困難である
か、選択的な排除出来ても抗体の持つ特異的凝集
能が失われるか、抗体の蛋白質構造の一部に関連
した部分で認められる例えば、リユウマチ因子又
は補体等のような原因の明らかにされている非特
異的凝集の排除であるか、又は非特異的凝集を排
除するために非常に複雑な試薬の調製を必要とす
るかの難点があり、未だ十分に満足な方法は確立
されていない。 一方、アシル化剤により蛋白質を修飾すること
は従来から広く行なわれ、蛋白質の構造の研究又
は熱安定性の改善（特公昭57−29039号公報）の
ために利用されている。更に抗体を化学的に修飾
する方法としては２，４−ジニトロフエニル基の
導入（特開昭54−139595号公報）及びサクシニル
化、〔ネイチユア（Nature）、第210巻、第536頁、
1966年〕が知られている。前者は抗体を微粒子担
体により強固に吸着させることを目的としてお
り、後者はサクシニル化したγ−グロブリンの製
法及び性質に関する基礎的研究である。従つて、
従来アシル化抗体が免疫学的反応において非特異
的な凝集の排除に有効であることは知られていな
い。 本発明者らは、免疫学的凝集反応を利用した体
液中又は尿中の抗原を、非特異的凝集反応をおこ
さず、容易にかつ迅速に測定出来る試薬の開発を
鋭意進めた結果、驚くべきことにアシル化抗体で
感作した微粒子担体を使用することにより、体液
中又は尿中に存在する非特異的凝集反応をおこす
物質の影響を全く排除し、試料中の抗原を容易に
かつ迅速に精度高く測定出来ることを見い出し、
本発明を完成した。 〔発明の目的及び発明の要約〕 本発明の目的は、試料中に存在する非特異的凝
集反応をおこす物質の影響を全く受けない抗原検
出用試薬を提供することにある。 本発明の他の目的は、簡便、迅速かつ再現性良
好に体液中又は尿中の抗原を測定するための試薬
を提供することにある。 本発明は、免疫学的凝集又は凝集阻止反応によ
る体液中又は尿中の抗原の測定に使用するための
試薬であつて、抗体を微粒子担体に吸着した感作
担体を有効成分とする試薬において、抗体がアシ
ル化剤で化学的に修飾されたものであることを特
徴とする抗原検出用試薬である。 〔発明の具体的な説明〕 本発明に使用する抗体は、抗原と反応させた
降、抗原抗体反応沈降物を形成するいわゆる高分
子の抗原（蛋白質、ポリペプチド、多糖類、脂質
等）又は抗原と反応させた際抗原抗体反応はおこ
るが抗原抗体反応沈降物は形成しない、いわゆる
低分子の抗原（ステロイド、薬物等のハプテン）
を常法によりモルモツト、ウサギ、ヤギ、ヒツ
ジ、ウマ等（好ましくはウサギ、ヤギ、ヒツジ）
に免疫し、産生させたものであり、抗原の種類は
問わない。このようにして産生された抗体はそれ
ぞれの抗原に対する特異抗体を含有する抗血清と
して免疫動物から得られるが、この抗血清をその
ままでも本発明に使用することが出来る。又、動
物血清中には生物学的活性を有する各種の物質が
含まれているので、抗体が含まれている免疫グロ
ブリンを常法により分離するか、あるいは常法に
よつて更に精製した特異抗体そのものを利用する
ことも出来る。 免疫グロブリンの分離法にはすでに各種の方法
が確立されているが、硫安分画及びDEAEセルロ
ースカラムクロマトグラフイーあるいは両者のの
併用が一般的である。又、特異抗体を精製するに
は現在ではアフイニテイークロマトグラフイーが
利用されているが、この方法によつて精製した抗
体も使用可能である。 本発明では前記の如くして得られた抗体を次の
ように常法によりアシル化剤を使用して化学的に
修飾する。即ち抗体を水又は緩衝液に溶解し、PH
７〜10に調整し、抗体蛋白質重量の0.2〜200％
（重量。以下同じ）、好ましくは0.5％〜100％のア
シル化剤を撹拌しながら徐々に添加し、この間ア
ルカリ溶液の適当量を適宜添加することによりPH
を６〜10、好ましくは７〜９に維持し、アシル化
剤添加終了後この溶液を蒸留水、塩溶液又は緩衝
液に対して透析し、不要なアシル化剤を除去し、
アシル化抗体を得る。使用するアシル化剤はどの
ようなものでもよいが化学的修飾により抗体本来
の特異的活性が失われることなく、免疫学的凝集
反応における非特異的凝集反応の排除し、アシル
化剤による化学的修飾が定量的に進行し、化学的
修飾後アシル化の除去が簡単であり、アシル化剤
の取り扱いが容易であり、かつ安価であることが
望まれる。アシル化剤の具体例としてはモノカル
ボン酸無水物（例えば無水酢酸、無水エトキシギ
酸）、ジカルボン酸無水物（例えば無水コハク酸、
無水マレイン酸、無水シトラコン酸、無水テトラ
フルオロコハク酸、無水３，３−テトラメチレン
グルタル酸）その他のポリカルボン酸無水物、こ
れらカルボン酸のハライド、酸エステルがあり、
特に好ましいのは無水コハク酸、無水マレイン酸
及び無水酢酸である。 抗体をアシル化剤で処理することにより、抗体
の蛋白質としての荷電が変化する。例えば、無水
酢酸を使用して抗体をアシル化した場合、抗体蛋
白質分子中のリジン残基のε−アミノ基がアセチ
ル化され、アミノ基の正荷電が無荷電となる。そ
の結果、抗体蛋白質分子全体の荷電は未処理のそ
れと比較して若干負側に移行することとなる。
又、無水コハク酸を使用して抗体をアシル化した
場合、抗体蛋白質分子中のリジン残基のε−アミ
ノ基がサクシニル化され、アミノ基の正荷電がコ
ハク酸の１個のカルボキシルの負荷電に置換さ
れ、その結果抗体蛋白質分子全体の荷電は未処理
のそれと比較して著しく負側へ移行することとな
る。このようなアシル化抗体の荷電の移行は、使
用するアシル化剤の種類、濃度及び処理条件等に
より、それぞれ変動するが、アシル化抗体が非特
異的凝集をおこさない至適条件は使用するアシル
化剤の種類により、容易に選択することが出来
る。 本発明に使用する微粒子担体はラテツクス粒
子、赤血球、無機化合物等であり、中でもラテツ
クス粒子が望ましい。ラテツクス粒子にも種々の
種類があるが、反応基がなく、かつ化学的及び血
清学的に不活性なポリスチレン、ポリブタジエ
ン、スチレン・ブタジエン共重合体のラテツクス
粒子が望ましく、特にポリスチレン ラテツクス
粒子が望ましい。 使用するラテツクス粒子の直径は0.05〜5μ、特
に0.1〜2μが望ましい。 次に微粒子担体にアシル化抗体を常法により吸
着させる。微粒子担体をPH６から10の緩衝液に分
散し、アシル化抗体を溶解した緩衝液に前記微粒
子担体懸濁液を加えて混合し、抗体を微粒子担体
に感作する。感作するアシル化抗体の量は、その
種類及び目的とする感度等の種々の条件により適
宜選択決定すればよい。感作温度は４から70℃、
好ましくは25〜56℃であり、感作時間は数分ない
し数時間であるが好ましくは0.5〜３時間である。
このようにして得られたアシル化抗体を感作した
微粒子担体を遠心分離して沈殿物を分離し、沈殿
物そのもの又は沈殿物をPH６〜10の緩衝液に再分
散して乾燥し、試薬とすることもできる。この乾
燥して得た試薬に直接所定量の試料を添加するか
又は使用時に緩衝液に懸濁するかして試料中の抗
原を測定することもできる。 又遠心分離して得られた沈殿物をPH６〜10の緩
衝液に再分散し、液状の試薬とすることもでき
る。液状の試薬の保存及び反応時の安定性を維持
するために安定剤を添加してもよい。安定剤とし
ては例えば免疫反応に関与しない蛋白質、糖等が
用いられ、特に血清アルブミンが好適である。 アシル化抗体を感作した微粒子担体を緩衝液に
分散する濃度は通常0.01〜3.0％、好ましくは0.05
〜1.5％である。 以上のようにして本発明の試薬は製造される。
本発明の試薬（液状）は次のようにして使用され
る。体液（血液等）又は尿等の試料（必要に応じ
希釈等の前処理を常法により行なつてもよい）の
一定量をスライド板上又は試験管に採取し、本発
明の試薬の所定量を加え、均一に混合する。そし
て生じた凝集を肉眼で観察するか又は光学的に測
定する。肉眼で観察する場合には、スライド上又
は試験機中で抗原を含む体液又は尿の試料を本発
明の試薬と混合し、凝集の有無を観察する。又光
学的に測定する場合には、試験管中で抗原を含む
体液又は尿の試料を本発明の試薬と混合し、常法
により光学セル中で光の透過率、散乱光又は濁度
の変化を測定する。 乾燥した本発明の試薬は、使用時に緩衝液に懸
濁し、前記液状の本発明の試薬と同様に使用さ
れ、乾燥した本発明の試薬に直接試料を加える場
合には体液（血液等）又は尿等の試料の一定量を
乾燥した試薬に加え混合して均一に再分散させ、
前記液状の本発明の試薬と同様に凝集の有無を肉
眼で観察するか光学的に測定する。次に実施例を
記載して本発明を更に詳述する。 実施例 １ (1‐1) 抗体（抗HCG免疫グロブリン）の調製高度
に精製したヒト絨毛性ゴナドトロピン（以下
HCGと記載する）をヤギに免疫して得られた
抗HCG血清50mlに硫酸アンモニウムの飽和溶
液25mlを加え、氷冷下で20分間撹拌した後、
10000r.p.m.で20分間冷却遠心分離を行ない、
生じた沈殿を回収した。氷冷下で得られた沈殿
を水30mlに溶解し、さらに硫酸アンモニウムの
飽和溶液15mlを加え、20分間遠心分離を行な
い、生じた沈殿を回収した。同様な操作をさら
に２回反復し、最終的に得られた沈殿を0.01M
リン酸緩衝液（PH8.0）に溶解し、あらかじめ
同一の緩衝液で平衡化したセフアデツクスＧ−
25カラムを用いたゲル濾過により免疫グロブリ
ンを分別し、得られた免疫グロブリン分画を凍
結乾燥し、抗HCG免疫グロブリン約500mgを得
た。 (1‐2) 抗体（抗HCG免疫グロブリン）のアシル化 前記（１−１）で得られた抗HCG免疫グロ
ブリン200mgをNaOH添加0.1M NaCl溶液（PH
８）に１％の濃度で溶解し、氷水中で冷却し
た。この溶液を撹拌しながら無水コハク酸の粉
末40mgを徐々に添加し、溶液のPHの低下防止の
ために1N NaOHを添加しながらPHを７以上に
維持し、無水コハク酸を溶解した後さらに１時
間撹拌を継続した。反応終了後この混合液を
NaOH添加0.1M NaCl溶液（PH8.5）に対して
一晩透析して未反応のコハク酸を除去し、サク
シニル化抗HCG免疫グロブリン約202mgを得
た。 (1‐3) アシル化抗体（サクシニル化抗HCG免疫グ
ロブリン）感作微粒子担体の製造 前記（１−２）で得られたサクシニル化抗
HCG免疫グロブリンをグリシン緩衝液（PH
8.2）に１mg／mlの濃度に溶解し、この溶液１
容と、粒子径0.220μのポリスチレンラテツクス
粒子（ダウケミカル社製）を２％の濃度でグリ
シン緩衝液（PH8.2）に分散した液１容とを混
合し、37℃で１時間保持し、サクシニル化抗
HCG免疫グロブリンをポリスチレンラテツク
ス粒子に吸着させた。次いで感作ラテツクスを
10000r.p.m.で20分間遠心分離し、未吸着サク
シニル化抗HCG免疫グロブリンを除去し、沈
殿した感作ラテツクスを集め、サクシニル化抗
HCG免疫グロブリン感作微粒子担体約2.5ｇを
得た。 (1‐4) 抗原検出用試薬の製造 前記（１−３）で得られたサクシニル化抗
HCG免疫グロブリン感作ラテツクス１ｇを、
安定剤として0.1％のウサギ血清アルブミン
（以下RSAと記載する）を含むグリシン緩衝液
（PH8.2）100mlに再懸濁しサクシニル化抗HCG
免疫グロブリン感作ラテツクス試薬を得た。 (1‐5) 標準HCG溶液による感度測定 以上のようにして得られたサクシニル化抗
HCG免疫グロブリン感作ラテツクス試薬の感
度を次の方法により測定した。表１に示す濃度
で標準HCGを0.1％RSA含有グリシン緩衝液
（PH8.2）に溶解した液50μ、該緩衝液25μ及
びサクシニル化抗HCG免疫グロブリン感作ラ
テツクス試薬25μをそれぞれスライドグラス
上に滴下し、混合した。次いで３分間緩徐にス
ライドグラスを揺動させて凝集の有無を肉眼で
観察した。なお対照としての従来法はサクシニ
ル化抗HCG免疫グロブリンの代りに前記（１
−１）で得られ抗HCG免疫グロブリンを用い
て同様に製造した抗HCG免疫グロブリン感作
ラテツクス試薬を用いた。その結果は表１に示
すとおりであつた。

【表】 表１から明らかなように、本発明の試薬と従
来法のそれとは同一の検出感度（1IU／ml）を
有し、抗HCG免疫グロブリンのサクシニル化
による検出感度への影響は認められなかつた。 (1‐6) 非妊婦尿による非特異的凝集反応 出現の
有無の測定 非妊婦尿20試料を遠心分離して沈殿物を除い
た原尿50μをスライドグラス上に滴下し、以
下前記（１−５）と同一の操作に従つて凝集の
有無を肉眼で観察した。対照としての従来法に
よる試薬は前記（１−５）と同一の試薬を用い
た。その結果は表２に示すとおりであつた。

【表】

【表】 表２から明らかなように、非妊婦尿において
本発明の試薬は非特異的凝集が１例も認められ
なかたつたのに対し、従来法による試薬におい
てはすべての検体において凝集又は弱い凝集が
認められた。このことは従来法による試薬では
いずれの試料でも非特異的凝集が生じ、試料中
のHCGを正確に検出できないことを示してい
る。 (1‐7) 妊婦尿による尿中HCGの測定 初期妊婦尿20試料を前記（１−６）と同一の
操作で測定した。尚、比較のため尿中HCG濃
度をRatkyらのRIA（British Journal of
Haematology、30巻、145頁、1975年）によつ
て測定した。その結果は表３に示すとおりであ
つた。

【表】

【表】 本発明の試薬においてはHCGの検出限度が
1IU／mlに設定されているので初期妊婦尿中の
HCG濃度が本発明の試薬の検出感度以下であ
る５試料（No.４、６、13、17及び18）では凝集
が認められず、RIAによる測定結果と一致して
いたが、従来法による試薬では検出感度以下の
試料でもすべて凝集が認められ、RIAによる測
定結果と一致しなかつた。 実施例 ２ (2‐1) 抗体（抗エストリオール−16α−グルクロ
ナイド免疫グロブリン）の調製 エストリオール−16α−グルクロナイド（以
下E3−16αGと記載する）と牛血清アルブミン
（以下BSAと記載する）を常法により化学的に
結合させて得たE3−16αG−BSA複合物を家兎
に免疫し、得られた抗E3−16αG−BSA血清50
mlを0.01Mリン酸緩衝液（PH8.0）に10に１
晩透析した。BSAに抗BSA抗体を吸収させ、
この溶液をあらかじめ上記緩衝液で平衡化した
DEAEセルロースを用いたクロマトグラフイー
により免疫グロブリン分画を回収し、抗E3−
16αG免疫グロブリン約250mgを得た。 (2‐2) 抗体のアシル化 前記（２−１）で得られた抗E3−16αG免疫
グロブリン100mgを0.1M NaCl（PH９）に１％
濃度に溶解し、氷水中で冷却し、溶液を撹拌し
ながら無水マレイン酸の粉末５mgを徐々に添加
し、PHの低下を防止するために0.5N NaOHを
添加しなららPHを７以上に維持し、無水マレイ
ン酸を溶解後さらに１時間撹拌を継続した。反
応終了後混合物をPH0.5に調製した蒸留水に対
して透析し、未反応のマレイン酸を除去した後
凍結乾燥し、マレイル化抗E3−16αG免疫グロ
ブリン約98mgを得た。 (2‐3) マレイル化抗E3−16αG免疫グロブリン感
作ラテツクスの製造 前記（２−２）で得られたマレイル化抗E3
−16αG免疫グロブリンをバルビタール緩衝液
（PH7.8）に１mg／mlの濃度で溶解した溶液１容
と、粒子径0.198μのポリスチレンラテツクス粒
子（ダウケミカル社製）を２％の濃度でバルビ
タール緩衝液（PH7.8）に分散した液１容とを
混合し、45℃で１時間保持しマレイル化抗E3
−16αG免疫グロブリンをポリスチレンラテツ
クス粒子に吸着させた。次いで感作ラテツクス
を10000r.p.m.20分間遠心分離し、未吸着のマ
レイル化抗E3−16αG免疫グロブリンを除去
し、沈殿したマレイル化抗E3−16αG免疫グロ
ブリン感作ラテツクス約1.5ｇを得た。 (2‐4) 抗原検出用試薬の製造 前記（２−３）で得られたマレイル化抗E3
−16αG免疫グロブリン感作ラテツクス0.5ｇ
を、安定剤として0.1％のRSAを含むバルビタ
ール緩衝液（PH7.8）100mlに再懸濁し、マレイ
ル化抗E3−16αG免疫グロブリン感作ラテツク
ス試薬を得た。 (2‐5) E3−16αG−RSA感作ラテツクス試薬の製
造 E3−16αGとRSAを特開昭54−8715号公報記
載の実施例１の方法に基づいてE3−16αGが
RSA1分子当り２個結合しているE3−16αG−
RSAを合成した。このE3−16αG−RSAを前記
（２−４）と同一の方法により、E3−16αG−
RSA感作ラテツクス試薬を得た。得られた試
薬のE3−16αGの検出感度を0.2μｇ／mlに調整
した。 (2‐6) 標準E3−16αG溶液による感度設定 前記（２−４）及び（２−５）で得られた２
種類の試薬により凝集阻止感度を測定した。表
４に示す標準E3−16αGのバルビタール緩衝液
（PH7.8）50μと前記（２−５）で得られた感
作試薬20μとをスライドグラス上に滴下し、
混合した。前記（２−４）で得られた本発明の
試薬20μを混合液中に滴下し、３分間緩徐に
揺動させて凝集の有無を肉眼で観察した。なお
対照の従来法による試薬としては、マレイル化
抗E3−16αG免疫グロブリンの代りに前記（２
−１）で得られた抗E3−16αG免疫グロブリン
を用い、前記（２−３）及び（２−４）と同一
の方法により抗E3−16αG免疫グロブリン感作
ラテツクス試薬を製造し、上記と同様の操作で
凝集の有無を肉眼で観察した。その結果は表４
に示すとおりであつた。

【表】 (注) ＋：凝集 有、−：凝集 無
表４から明らかなように本発明の試薬と従来
のそれとは同一の検出感度（0.2μｇ／ml）を有
し、抗E3−16αG免疫グロブリンのマレイル化
による検出感度への影響は認められなかつた。 (2‐7) 尿中E3−16αGの測定 初期妊婦尿10試料を前記（２−６）と同様の
操作で測定した。尚比較のため尿中E3−16αG
濃度をStanczkらのRIA（Journal of steroid
Biochemistry、10巻、443頁、1979年）によつ
て測定した。その結果は表５に示すとおりであ
つた。

【表】

【表】 本発明の試薬においてはE3−16αGの検出限
度が0.2μｇ／mlに設定されているので初期妊婦
尿中のE3−16αG濃度が本発明の試薬の検出感
度以下である４試料（No.１、５、７及び10）で
は凝集が認められ、RIAによる測定結果と一致
していたが、従来法による試薬では検出感度以
上の試料でもすべて凝集が認められ、全試料と
も検出感度以下の濃度と判定され、RIAによる
測定結果と一致しなかつた。 実施例 ３ (3‐1) 抗体（抗ヒトフイプリノーゲン免疫グロブ
リン）の調製 高度に精製したヒトフイブリノーゲン（以下
Fgと記載する）を家兎に免疫して得られた抗
Fg血清10mlを、常法により調製したFg−セフ
アロース4Bを充填したカラムに通夜した。次
いで0.01Mリン酸緩衝液（PH8.0）を通夜して
カラムを洗浄し、抗Fg免疫グロブリン以外の
不要物を除去した。次いで0.2Mグリシン−塩
酸緩衝液（PH：2.3）で抗Fg免疫グロブリンを
溶出させ、溶出液のPHを７〜８に保持した。最
終的に溶出液のPHを7.5に調整した後、凍結乾
燥した。この調製法を反復して実施し、抗Fg
免疫グロブリン約50mgを得た。 (3‐2) 抗体のアシル化 前記（３−１）で得られた抗Fg免疫グロブ
リン50mgを0.5％の濃度で水に溶解し、氷水中
で冷却しながら６ｇの酢酸ナトリウムの粉末を
加え完全に溶解し、撹拌及び冷却を続けながら
無水酢酸25μを緩徐に添加し、添加終了後更
に１時間反応を継続した。反応終了後、溶液を
0.1MのNaClを含むグリシン緩衝液（PH8.2）に
対して一晩透析し、酢酸を除去し、アセチル化
抗Fg免疫グロブリン約45mgを得た。 (3‐3) アセチル化抗Fg免疫グロブリン感作ラテツ
クス試薬の製造 前記（３−２）で得られたアセチル化抗Fg
免疫グロブリンをグリシン緩衝液（PH8.6）に
0.3mg／mlの濃度で溶解した溶液１容と、粒子
径0.721μのポリスチレンラテツクス粒子（ダウ
ケミカル社製）を２％の濃度でグリシン緩衝液
（PH8.6）に懸濁した液１容とを混合し、以下実
施例１と同様の操作でアセチル化抗Fg免疫グ
ロブリン感作ラテツクス1.2％を含む本発明の
試薬的80mlを得た。 (3‐4) 標準Fg溶液よる感度測定 前記（３−３）で得られた本発明の試薬の感
度を測定した。本発明の試薬25μと表６に示
す標準Fg溶液〔0.2％ウサギ血清アルブミンを
含有するグリシン緩衝液（PH8.6に溶解〕75μ
をスライドグラス上に滴下し、以下実施例１
（１−５）と同様の操作で凝集の有無を肉眼で
観察した。なお対照の従来法による試薬として
はアセチル化抗Fg免疫グロブリンの代りに前
記（３−１）で得た抗Fg免疫グロブリンを用
いて、前記（３−３）と同様に抗Fg免疫グロ
ブリン感作ラテツクス試薬を調製し、上記と同
様の操作で、凝集の有無を肉眼で観察した。そ
の結果は表６に示すとおりであつた。

【表】 表６から明らかなように、本発明の試薬と従
来法によるそれとは同一の検出感度（0.5μｇ／
ml）を有し、抗Fg免疫グロブリンのアセチル
化による検出感度への影響は認められなかつ
た。 (3‐5) 健康男子尿による非特異的凝集反応出現の
有無の測定 健康男子尿10試料を原尿のまま75μスライ
ド上に滴下し、次いで前記（３−３）で得た本
発明の試薬25μを滴下して３分間緩徐にスラ
イドグラスを揺動させて凝集の有無を肉眼で観
察した。なお従来法による試薬には前記（３−
４）と同一のものを用い、同様に凝集の有無を
観察した。その結果は表７に示すとおりであつ
た。

【表】 本発明の試料では非特異的凝集が１例も認め
られなかつたのに対し、従来法による試薬にお
いては全試料に非特異的凝集が認められた。 (3‐6) 尿中フイブリン又はそれらの分解産物（以
下FDRと記載する）の測定 血管内凝固症候群を疑われる10名から採取し
た尿を試料として前記（３−５）と同一の操作
法に従つて尿中FDPを測定した。なお比較の
ため尿中FDP濃度を前記RatkyらのRIAによつ
て測定した。その結果は表８に示すとおりであ
つた。

【表】

〔発明の効果〕

本発明によつて奏せられる効果は次のとおりで
ある。 (1) 試料中の非特異的な凝集を惹起する物質によ
る影響を全く受けずに抗原を測定できる。 (2) 試料中の抗原測定結果の再現性が極めてすぐ
れている。 (3) 採取直後の新鮮な試料については、試料の一
切の前処理をすることなく、試料中の抗原を測
定できる。 (4) 試薬の調製が極めて簡便である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 免疫学的凝集又は凝集阻止反応による体液中
   又は尿中の抗原の測定に使用するための試薬であ
   つて、抗体を微粒子担体に吸着した感作担体を有
   効成分とする試薬において、抗体がアシル化剤で
   化学的に修飾されたものであることを特徴とする
   抗原検出用試薬。 ２ 感作担体が0.01〜3.0％（重量）の濃度で緩
   衝液に懸濁されていることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項に記載の試薬。 ３ 緩衝液のPHが６〜10であることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項または第２項に記載の試
   薬。 ４ 免疫反応に関与しない蛋白質又は糖類を安定
   剤として含有することを特徴とする特許請求の範
   囲第１項乃至第３項のいずれかに記載の試薬。