JPH02188526A - 腫瘍治療用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 童呈上■科里分団 本発明は一般に腫瘍の治療、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ
）を用いる腫瘍の治療に関する。さらに詳細には、本発
明はＴＮＦの抗腫瘍作用を増強するためのジピリダモー
ル（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）の使用、腫瘍を患った
患者のジピリダモールとＴＮＦの組合せ治療による治療
方法、腫瘍を治療するためのそのような医薬組成物調製
用のジピリダモールとＴＮＦの使用、およびそのように
して調製した医薬組成物に関する。

従来狡古 ＴＮＦは、最初、網状内皮刺激剤を注射（塗抹）し次い
でリボ多糖を投与した動物の血清中で見い出された腫瘍
細胞分解因子として開示された（Ｃａｒｓｗｅｌｌ等、
Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　Ｕ
ＳＡ　。

７２：３６６６−３６７０　（１９７５））。

トリバノゾーマブルース（ＴｒｙｐｏｎｏｓｏＩＷａ　
ｂｒｕｃｅｉ）を注射したウサギの悪液質の生化学的メ
カニズムを研究している他の研究者達はリボたん白質リ
パーゼ活性の抑制により生じた血漿中の超低密度リポた
ん白質の濃度増大を観察した（ＲｏｕｚｅｒおよびＣｅ
ｒａｍｉ　＋Ｍｏ１．　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐａｒａ
ｓｉｔｏｌ＋　　２　：　３１−３８（１９８０）、続
いて、マクロファージおよびマクロファージ細胞系が脂
肪分野細胞系中のリポたん白質リパーゼの活性を抑制し
得るＣＰＳに応答して産生じたモノ力インを同化するこ
とを示唆した。このグループは、その後、カケクチンで
経るモノ力インの遺伝子を単離し、精製し、クローン化
し、カケクチンとＴＮＦが同一のたん白質であることを
示唆した。このＴＮＦは名称ＴＮＦαが与えられた。

リンホトキシン（腫瘍壊死因子−βと表示）は活性化Ｔ
細胞の産生物であり、腫瘍およびウィルス怒染細胞に対
する防御に関与し、最初は、“Ｒｕｄｄｌｅおよび−ａ
ｋｓｍａｎ　＋　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１２８　
：１２６７　（１９６８）　　、および“Ｇｒａｎｇｅ
ｒおよび−ｉ１１ｉａｍｓ、　Ｎａｔ、　（Ｌｏｎｄ、
　）２１８　：　１２５３（１９６Ｂ）　　”によって
開示された。

ヒトＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βは同じ生物学的活性を
有することが見い出されているが、両者はわずかに２８
％のアミノ酸配列相同性しか有していない（Ｐｅｎｎ　
ｉｃａ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ
ｉ、。

ＵＳＡ、８２：６０６０　（１９８５））。

組換え法による各ＴＮＦの産生は先ずＧｒａｙ等および
Ｐｅｎｎ１ｃａ等によって、それぞれ、Ｎａ　ｔｕｒｅ
（Ｌｏｎｄ、）　３１２ニア２１　７２４　（１９８４
）および３１７：７２４−７２９　（１９８４）に記載
されている。

種々の研究は各ＴＮＦがインビボでの潜在的抗腫瘍活性
を有し直接的および間接的な両方の効果により腫瘍退行
を生じていることを示唆している。

しかしながら、その毒性は重大な制約となっている。こ
れらの情勢は、例えば、’　Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓ
ｉｓＦａｃｔｏｒ　　ａｎｄ　　Ｒｅ１ａｔｅｄ　　Ｃ
ｙｔｏｔｏｘｉｎｇ　、　Ｃ１ｂａＦｏｕｎｄａｔｉｏ
ｎ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　（３Ｌ　Ｊｏｈｎ　Ｗｔｌｅ
ｙ　＆　５ｏｎｓ社刊、１９８７”において見い出され
る。

一般的には、腫瘍の壊死および退行を引き起すＴＮＦの
投与は毒性投与に近い。

発熱、悪寒、食欲不振および吐気を含むＴＮＦの全身的
毒性は殆んどの患者において見られ、投与に明確には関
与していない。しかしながら、他の毒性には、肝Ｒ機能
異常、低血圧症、−時的神経変化および血液学的異常が
ある。

ＴＮＦの最初の臨床試験は日本において開始され、キム
テ等はｒＨｕＴＮＦで治療した７５人の患者の結果を報
告した（Ｐｒｏｃ、　Ｉｎｔ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｏｎ
ｇｒ。

Ａｂｓｔｒ、１４９０．　　ｐ、３８９．１９８６）。

この試験においては、Ｉ　Ｘ　１０’〜１６Ｘ１０’単
位／ｄが静脈内ポーラスとして投与された。明確には投
与と関連しない全身的副作用と共に、早期血小板減少症
が１５％の患者でみられ、肝臓毒性投与限界となった。

タグチ等は、Ｐｒｏｃ、　Ｉｎｔ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｏｎｇｒ、　Ａｂｓｔｒ、　　４４５
５＋　　ｐ、　　１．１５１゜１９８６において、組換
えＴＮＦによるもう一つの早期臨床試験を記載している
。患者は３０分間注入として毎日または週に２回ＴＮＦ
の１〜２０Ｘ１０’単位投与量で治療された。全身毒性
の増大とは別に、血清トランスアミナーゼの活性増大が
治療患者の５６％に見られ、低血圧症は４６％の患者で
見られ、臨床ショックはＴＮＦ治療を受けた２人の患者
で見られた。

Ｃｒｅａｖｅｎ等、Ｐｒｏｄ、　Ｉｎｔ、　Ｃａｎｃｅ
ｒ−Ｃｏｎｇｒ、　Ａｄｓｔｒ。

１１０６、ｐ、２８９．１９８６によるｒＨｕ　ＴＮＦ
の臨床試験においては、ｌＸｌ０’〜４．８　ｘ　１０
５′単位／ｄの投与が１時間静脈内注入として報告され
、この注入は血圧の変化をしばしば伴い、症状的低血圧
がこの試験における投与限界毒性であった。

Ｋｈａｎ等、Ｐｒｏｃ＋＾ｍ、＾５ｓｏｃ、　Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ、、　２７　：３２０．１９８６による試
験においては、一般的な全身毒性が投与限界であった。

分子規模においてＴＮＦは化学療法で用いる最も毒性の
ある物質の１つであることが指摘されている。

ある研究においてはＴＮＦと他の物質との組合せ治療を
研究している。ＴＮＦとエンドトキシンまたはＩＦＮ−
γの組合せは抗腫瘍効果と毒性の両方を増大させた。Ｂ
ｌｏｋｓｍａ等は脱毒、エンドトキシンとポリ　（Ａ　
：　Ｕ）を使用した；こ０２つの薬剤はそれ自体で抗腫
瘍活性を殆んどあるいは全く有しないが、非存知的な投
与量のＴＮＦと組合せたとき腫瘍壊死および退行を誘起
するのに有効であった。

相乗効果はＴＮＦとα−ＩＦＮの組合せによる細胞毒性
試験においてインビトロで観察された。

発凱皇古昇 本発明の目的はＴＮＦの抗腫瘍活性を増進することので
きる新規な組合せ治療を提供することである。

化合物２，６−ビス（ジェタノールアミン）４．８−ジ
ピペリジノーピリミド（５，４−ｄ）ピリミジンは一船
名ジピリダモールであり、その調製法は、例えば、米国
特許第３，０３１，４５０号に記載されている。

ジピリダモールは周知の血管拡張剤でありまた血小板凝
集抑制特性をも有し；これらの性質により、多年に亘っ
て、慢性冠動脈不全の治療においておよび心臓梗塞の予
防および治療において並びに動脈血栓症の予防において
広汎な使用が見い出されている。

より最近になって、腫瘍治療におけるジピリダモールの
使用の可能性が研究されている。ここでの興味は、ジピ
リダモールがＤＮＡを劣下させないけれどもＤＮＡ合成
のサルベージ経路の有効なブロッカ−でありまたジピリ
ダモールが細胞膜を通してのヌクレオシド輸送を抑制し
内部細胞ヌクレオシド量の復原をブロックしかくして腫
瘍細胞合成の重要なステップを潜在的に抑制するという
観察に由来している（Ｂｔｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ、　Ａｃｔａ。

１５８　：　４３５−４４７．１９６８、およびＢｉｏ
ｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ＋　　２１１
　：　８　Ｂ　−９４，１９７０参照）。

この性質のために、ジピリダモール単独および種々の抗
ガン剤との組合せでの効果が研究されている。即ち、Ｃ
ｈａｎ等（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｔｒｅａｔ、　Ｒｅｐ。

６９　：　４２５−４３０．１９８５）はジピリダモー
ルがＮ−ホスホラセチル−し−アスパルテート（ＰＡＬ
Ａ）の活性をインビトロおよびインビボにおいて増強し
得ることを見い出した。ＰＡＬＡは新なピリミジン合成
の早期段階を抑制すると教示されているピリミジン抗代
謝生成物であり、細胞内ピリミジンヌクレオチドの欠乏
を引き起す。

他の研究において、Ｃｈａｎ等（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ４５．３５９８−３６０４．１９８５年８月
）はジピリダモールがヒトの卵巣がん腫細胞系に対して
ＰＡＬＡ活性を増大させるがそれ自体の細胞毒性を示さ
ないことを報告した。

Ｚｈｅｎ等は、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４３
　＋　　１６１６−１６１９．１９８３年４月において
、シチジン、デオキシシチジンおよびグアノシンの各々
８μＭの最適濃度での組合せでの添加がラットのへパト
ーマ３９２４Ａ細胞を抗グルタミン薬アジピン（Ａｃｉ
ｖｉｎ）の成長抑制作用から保護することおよびこの保
護はジピリダモールにより６μＭの濃度でブロックされ
たことを報告した。

Ｎｅ１ｓｏｎ等は、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　
４４　、　２４９３２４９６．１９８４年６月において
、ジピリダモールがメトトレキセート（ＭＴＸ）の毒性
をチャイニーズハムスターの卵巣細胞に対しインビトロ
およびインビボの両方で増強することを報告したが、Ｍ
ＴＸのある種の他のがん、即ち、リッジウェイ骨原性サ
ルカマおよびＬＩＺＩＯ白血病に対しての抗腫瘍活性は
劇的には改善されなかった。

種々の他の刊公物がジピリダモールと抗がん剤、例えば
、サイタラピン（Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔ、　Ｒｅｐ
、　６８　：３６１−３６６．１９８４）または２′−
デオキシアデノシン（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
　４５　：　６４１８６４２４．１９８５年１２月）と
の腫瘍細胞に対する試験を開示している。

さらに、幾つかの研究はジピリダモール単独の抗がん薬
としての使用について行なわれている。

即ち、ジピリダモール／アジピンの組合せ活性について
の研究において、Ｗｅｂｅｒ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈ７３．３４６６−３４９２．１９８３年８月）
はジピリダモールがヘパトーマ３９２４Ａ細胞を殺すの
に有効であることも報告した。Ｂａ５ｔｉｄａ（Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４５．　４０４８−４０５
２゜１９８５年９月）は恐らく腫瘍細胞代謝の抑制また
は腫瘍細胞の血小板を活性化する能力に含まれている１
つ以上のメカニズムの抑制に由来するジピリダモールの
潜在的抗転移効果を報告した。

文献において、抗腫瘍治療においてジピリダモールをＴ
ＮＦと組合せて使用することを教示または示唆している
ものはなく、また、何らかの価値ある結果がそのような
組合せ治療から予期できることを示唆しているものはな
い。

一般的には、本発明はＴＮＦの抗腫瘍活性を増進するた
めの医薬組成物の調製において使用するジピリダモール
またはその塩を含む。

本発明の別の態様は腫瘍を患った患者にジピリダモール
またはその塩をこれまた同じ患者に投与されるＴＮＦの
抗腫瘍活性を増強するのに十分な量で投与することを特
徴とする腫瘍患者の治療を含む。

本発明の別の態様はＴＮＦとジピリダモールまたはその
薬学上許容し得る塩とを腫瘍患者に投与することを含み
、ジピリダモールまたはその塩はＴＮＦの抗腫瘍作用を
増強するのに十分な量で投与することを特徴とする腫瘍
患者の治療方法を含む。

本発明の別の態様は腫瘍患者に投与したときＴＮＦの抗
腫瘍作用を増強するのに適する医薬組成物の製造のため
のジピリダモールまたはその薬学上許容し得る塩を含む
。

本発明のさらに別の態様は腫瘍の治療にジピリダモール
またはその薬学上許容し得る塩と一緒に使用するための
医薬組成物の製造に使用するＴＮＦを含む。

本発明の別の態様はＴＮＦとジピリダモールまたはその
薬学上許容し得る塩とを通常の製薬上の賦形剤と一緒に
含有する医薬組成物を含む。

本明細書で使用するＴＮＦなる用語はＴＮＦα、ＴＮＦ
−βまたはこれらの組合せを意味する。

各ＴＮＦのアミノ酸配列、その組換え技術による調製お
よびこれらＴＮＦを含有する医薬組成物の調製は、前述
したように、文献に記載されている。

実質的に不純物のないＴＮＦ−βの単離はヨーロッパ特
許公報筒０．１００．６４１号に記載されており、その
組換え技術による調製はヨーロッパ特許公報筒１６４，
９６５号に記載されている。ＴＮＦ−αの組換え技術に
よる調製はヨーロッパ特許筒１５５．５４９号および第
１６８．２１４号に記載されている。

ジピリダモールまたはその塩とＴＮＦは好ましくは両者
が腫瘍部位に同時に存在するよ・うに投与する。従って
、好ましいのは、両者を同時あるいは実質的に同時に投
与する。

現在のところ、抗腫瘍治療のための好ましい有効血漿中
ジピリダモール量は約０．１〜２００μＭであり、治療
のためのＴＮＦの有効型禁中の量は約１〜５０００Ｕ／
−とみなされている。

ジピリダモールまたはその塩と各ＴＮＦとの推奨される
投与量は上記の血漿レベルに基づく。実際の投与量は個
々の患者の状況と条件によって主治医が変え得るもので
あることは明らかであろう。

本発明の実施における使用において、ＴＮＦは非経口ル
ートで投与できる。その投与量および投与速度は筋肉ま
たは皮下注射として日に１回好ましくは約５Ｘ１０６〜
５Ｘ１０’より好ましくは７Ｘ１０６〜３．５Ｘ１０’
Ｕ、である。

ヒトＴＮＦの適切な投与形の調製は周知である。

非経口投与に好都合な投与形を調製するには、適当量の
ＴＮＦを必要に応じ適当なバッファー液を含有する５％
ヒト血清アルブミン中に溶解する。

次に、この得られた溶液を微生物学的フィルターに通し
、濾過溶液を無菌条件下にバイアルに小分する、各バイ
アルは適当量のＴＮＦを含み、必要ならば、凍結乾燥さ
せる。各ガラスバイアルは使用前に冷条件（−２０℃）
で保存するのが好ましい。ＴＮＦは公知の方法で処方し
て薬学上使用可能な組成物を得ることができ、ＴＮＦは
薬学上許容し得る担体物質と混合される：通常の担体と
その調製はＥ、　Ｈ，ＭａｒｔｉｎによりＲｅｍｉｎｇ
ｔｏｎｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃ
ｅｓに記載されている。

ジピリダモールまたはその塩は任意の通常の投与ルート
で、例えば、経口または非経口的に投与できる。現時点
で、好ましい投与ルートは経口である。推奨できる投与
量は、日に２回、２５〜１２５■好ましくは３０〜６０
■である。

ジピリダモールは多くの形状で、例えば、１０■のジピ
リダモール含有注射液として商標“ペルサンチン（Ｐｅ
ｒｓａｎｔｉｎ　）　　”として市販されており、また
２５■および７５■のジピリダモールを含有する各ドラ
ジエ（＃Ｍ衣錠）は西ドイツ、フランクフルトａ、Ｍ、
Ｄ−６０００のｂｕｎｄｅｓｖｅｒｂａｎｄ　ｄｅｒＰ
ｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｈｅｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ　
ｅ、　Ｖ、によって発行されたＲｏｔｅ　Ｌｉ５ｔｅ　
１９８７に記載されている。さらに、多くの特別のガレ
スス形が文献に記載されており、これらはジピリダモー
ルの促進または遅延（持続）放出を与えるのがねらいで
あり、例えば、ヨーロッパ特許公報第０．０３２．５６
２号に記載された遅延カプセル形およびヨーロッパ特許
第０．０６８．１９１号に記載された即時放出形がある
。さらに、遅延放出ガレスス形は英国特許第２，０２５
，２２７号に記載されている。

本発明は、種々の確立されたヒト細胞系においてジピリ
ダモールがヒ）ＴＮＦの抗腫瘍作用を促進する驚くべき
性質を示したという観察に基づいている。即ち、幾つか
の試験を以下に述べるようにして行った： 各試験で用いたマウスＬ−Ｍ細胞（ＡＴＣＣ。

ＣＣＬｌ、２）は日本国、大阪のダイニンポン製薬社お
よびオーストリアのビエンヌの ＢＥＮＤＥＲ＋ＣＯＧｅｓ　ｍｂ）ｌにより提供を受け
た。

３種の確立されたヒト細胞系も用いた。これらは７０オ
老男の悪性メラノーマ（レベルＩＶｐＴ４ＮＯＭＯ）の
組成に由来するＭＭ　　Ｉ　Ｂ　Ｃ（Ｊｐｎ。

Ｊ、Ｄｅｒｍａｔｏｌ、、　　９６：９４７．　１９８
６）、ＨＥＣ−１（子宮内がん腫細胞系）およびＹ（扁
平細胞がん腫細胞系）であった。各細胞は、１０％の子
牛血清と抗生物（１００μｇストレプトマイシン／−と
１００単位ペニシリンＧ／Ｗｄ）を含有するイーグル最
小必須培地中で、５％ＣＯ□含有湿潤化雰囲気下に３７
℃で培養した。各細胞は継代培養後に各試験で用いた（
約ｌＸｌ０’細胞／　１００　ｍ＊プラスチック皿）。

組換えＴＮＦ−β製剤（２，９Ｘ１０’μ／■）および
組換えＴＮＦ−α製剤（６Ｘ１０’μ／■）は、それぞ
れ、ダイニラポン製薬社およびＢＥＮＤＥＲ＋ＣＯＧｅ
ｓ　ｍｂＨより提供を受けた。

Ｔ　Ｎ　Ｉ？活性はＬ−Ｍ細胞に対する丹毒活性を測定
することによって１単位のＴＮＦ−βが５０単位のＴＮ
Ｆ−αに相当することを確認した。ジピリダモールは西
ドイツ、Ｂｉｂｅｒａｃｈ　ａｎ　ｄｅｒ　Ｒ１５ｓの
Ｏｒ、　Ｋａｒｌ　Ｔｈｏｍａｅ　Ｇｍ　ｂＨより入手
した。

試験した細胞の増殖上のＴＮＦおよび／またはジピリダ
モールの効果は、５ｕｚｕｋｉ等、Ｊ、　ｇｅｎ。

ν１ｖｏ１．６７　：　６５１−６６１．１９８６に記
載された手順に従う連続暴露条件下での細胞増殖試験に
より評価した。細胞増殖に対しての抑制効果の結果は、
上記文献に記載されているように、各細胞系間の各対象
（コントロール）のパーセントとして示した。一般的な
規則として、すべての試験は暗光または黄色ランプの下
で行った。

第１Ａ図はＬ−Ｍ細胞をＴＮＦ−βとジピリダモールと
の種々の濃度に１１日間連続暴露したのちの細胞生存割
合を示す一連のグラフである。

第１Ｂ図は図中に示した各活性物質の濃度で１１日間培
養したのちの培養プレートの一連の写真である。

マウスＬ−Ｍ細胞は第１図に示すようにＴＮＦβの抗増
殖作用に高感受性であることは良く知られている。第１
ＡおよびＢ図はＬ−Ｍ細胞がジピリダモールに対しても
予想外に感受性があるを示している。しかしながら、Ｌ
−Ｍ細胞の細胞増殖は各薬剤単独よりも２つの薬剤の組
合せ処理によりもっと抑制された。この相乗効果は次ぎ
に述べるようにヒト腫瘍細胞系においても見い出された
。

第２Ａ図はＴＮＦ−β、ジピリダモールとＴＮＦ−の、
およびジピリダモールそれぞれの種々の濃度に１４日問
および１１日間連続暴露したのちのＹ細胞の細胞生存割
合を示す一連のグラフである。第２Ｂ図は図中に示す各
活性物質の濃度での１１日培養後培養プレートの一連の
写真である。第２ＡおよびＢ図に示すように、Ｙ細胞の
２Ａおよび２Ｂ増殖は各薬剤単独（１〜１００μ／■の
ＴＮＦ−βと０．１μＭ〜１０μＭのジピリダモール）
で抑制されているが２つの薬剤の組合せによる処理では
より著しく抑制された。ＴＮＦ製剤の種類にかかわらず
、Ｙ細胞に対する相乗効果は観察された。相乗効果は、
例えば、５０μ／−以上のＴＮＦ−αと０．１μＭ以上
のジピリダモールとで処理したＹ細胞において明白であ
る。

第３Ａ図はＴＮＦ−αとジピリダモールの種々の濃度に
８日間連続暴露したのちのＭＭ−Ｉ　ＣＢ細胞の細胞生
存割合を示す一連のグラフである。

第３Ｂ図は図中に示した各活性物質の濃度で８日間培養
したのちの培養プレートの一連の写真である。第３図に
示すように、ＭＭ−Ｉ　ＣＢ細胞もジピリダモール単独
およびＴＮＦ−α単独の抑制作用に対して感受性である
が、その組合せに対してはもっと感受性である。

第４Ａ図はＴＮＦ−βとジピリダモールの種々の濃度に
１１日間連続暴露したのちＨＥＣ−１細胞生存割合を示
す一連のグラフである。第４Ｂ図は図中に示した活性物
質の濃度で１１日間培養したのちの培養プレートの一連
の写真である。

第４図からは、ＨＥＣ−１細胞はＴＮＦ−βとジピリダ
モールとに感受性を示すがその組合せにはもっと著しく
感受性であることが理解できる。

ＴＮＦ感受性を５０％抑制効果に必要な投与量（ｒＤ、
。）に従って比較する場合、最大の感受性は３μ／−以
下のＩＤ、。を有するＬ−Ｍ細胞において観察された。

試験した３つのヒト細胞系のうちでは、ＭＭ−ＩＣＢが
最小のＩＤ、。（５０μ／−）を示した。種々の細胞系
間での異なる感受性度合にもかかわらず、ジピリダモー
ルとの組合せ処理は試験したすべての細胞系の増殖を急
激に抑制できた。

上記の試験で用いた各ヒト細胞系をそのＨｕ　ＩＦＨに
対する感受性に基づいて３つのグループに分けた。Ｈｕ
ｌＦＮ惑受性のレベルにもかかわらず、ＴＮＦとジピリ
ダモールの組合せは細胞増殖に対して著しい抑制効果を
もたらした。

茅−一」−一一表 使用したヒト細胞株およびその特性 ｆｌｕ　ＩＦＮの抗増殖 株　　　　組　　織　　　効果に対ｔル感受性Ｙ　　　
扁平細胞かん腫　　　そ賎ど感受性北ＭＭ−ＩＣＢ　　
　悪性メラノーマ　　　　感受性ありＤＥＣ−１子宮内
〃ん腫　　　　抵　抗　性さらに試・験して、ＴＮＦ−
αの抗増殖作用のジピリダモールによる促進を他の腫瘍
細胞系、即ち、黒皮症メラノーマ細胞系、ＨＭＶ　Ｉ　
　（Ｇａｎｎ　、　７３　：９５２．１９８２）、およ
び膠芽細胞系、Ｔ−９８（Ｊｐｎ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃ
ｈｅｍｏＬｈｅｒ、、　　９　；　１４００　、１９８
２）中で追加確認した。

これら両細胞系は共にＴＮＦ−α単独に感受性であった
が、ＴＮＦ−αとジピリダモール（１μＭ〜１０μＭ）
との組合せ処理に供したときには、両細胞系の増殖抑制
は実質的に増強されていた；ただし、ジピリダモールそ
れ自体は１０ＩＭにおいてさえもわずかな抑制効果しか
有しなかった。

正常な繊維芽細胞系（Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋　１０
４　：５７０．１９８８）もＴＮＦ−αおよびジピリダ
モールのそれぞれに感受性であったが、驚くべきことに
、ＴＮＦ−αのジピリダモールによる促進作用に対して
は感受性を示さなかった。

結果は第５図に示すが、第５図はメラノーマＨＭＶ　Ｉ
細胞（Ａ）、原著細胞（Ｂ）および繊維芽細胞（Ｃ）中
でのＴＮＦ−αおよびジピリダモールの種々の濃度に対
する連続暴露８日後の細胞生存割合を示す。

従って、ＴＮＦのジピリダモールによる活性増進は腫瘍
細胞系に対してのみ増大され正常繊維芽細胞に対しては
増強されていないようである。

完全動物でのＴＮＦ−αの抗増殖効果を促進するジピリ
ダモールの作用を次のようにして試験した： ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡ、ＪｃＬ−ｎｕ。

４週令）にＭＭ−１ｃＢ　（５Ｘ１０’細胞／マウス）
を注射し、次いでＴＮＦ−α（２Ｘ１０５μ／マウス）
をＳ、Ｃ，投与し、そしてジピリダモール（０，１■／
マウス）を合計６２日間の細胞植付後の３日で始まる各
第２日毎に経口投与した。

黒色腫瘍が処理したヌードマウスすべての注入部位に現
われた；腫瘍中のほんのわずかな壊死がＴＮＦ−α処理
マウスで見い出され、ジピリダモール処理マウスの腫瘍
に変化はなかったが、壊死および潰瘍形成の急激な減少
が組合せ処理マウスで検知された（第６図） 次−」Ｌ−但 実施例　１ １．０７Ｘ１０’　　ｌｔＪ　　ＴＮＦ−αを　　する
アンプル成分： Ｔ　Ｎ　Ｆ　−ｏｔ　　　　１，０７　Ｘ　１０’　Ｉ
ＩＩ（０，２１８ｍｇ）（１）　　ＨＳ　Ａ　　　　　
　　１０．００■（２）　Ｎａ１ｌｚＰＯ４Ｘ　２Ｈｚ
０　　　０．７８　Ｎｆ３）　ＮａＪＰＯ４Ｘ１２＋１
２０　　　１．７９　＃（４）　ＮａＣ１，１，１７ａ
ｉｒ （５）注射水　　　　　　　　１．０　　艷成分２．３
および４を緊密に混合し、水の最終容量の１／３に溶解
させた。

得られた溶液に、所望量のＴＮＦ−αを含有しＴＮＦ−
αバルク溶液から採取したＴＮＦ溶液の１容量を加えた
。次に、水を得られた溶液に加えて上記の所望の最終容
量とした。

溶液は滅菌濾過に供し、その１一部分をアンプルに詰め
凍結乾燥させた。

実施例　２ 実施例１を繰返して５．３５　Ｘ　１０６Ｉ　Ｕ（０，
１０８■）のＴＮＦ−αを含有するアンプルを得た。

実施例　３ ０．９６Ｘ１０’　Ｕ　　ＴＮＦ−βを４有するアンプ
ル成分： （１）ＴＮＦβ　　　　０．９６Ｘ１０’　Ｕ（０，５
５■）（２１Ｈ３Ａ　　　　　　　３３ｍｇ （３）注射水　　　　　　　　１．１ｄ（０，９％Ｎａ
Ｃ１２）ＴＮＦ−βバルク材料（ＮａＣｊ！溶液中ＴＲ
Ｉ　Ｓ）を２０％ＨＳＡ溶液および水で所定濃度に希釈
し、その１ｙｄ部分をアンプルに詰め次いで凍結乾燥さ
せた。バルク材料からの残りは１６．７ｍＭのＮａＣｊ
！と３．３ｍＭのＴＲｌ５とを含有している。

実施例　４ ３０■のジピリダモールを人　するドラジェ組成： （１）　　ジピリダモール　　　　　３０■（２）　　
乳　　酸　　　　　　　　　　　３０ｍｇ（３）ポテト
スターチ　　　　１７．５曙（４ン　エーロジル　　　
　　　　　１．５■（５）　　　ステアリン　酸マグネ
シウム　　　　　　　　　　１．　０　　ｍｇｌ、２お
よび３を混合し、得られた混合物に水を加えて湿潤塊を
調製した。

上記の湿潤塊を１．６　ｍのあきを有するふるいに通し
、乾燥室で４５℃で乾燥させた。乾燥粒子を１　＋ｕあ
きを有するふるいに通して４および５と混合した。

最終混合物をプレスしてドラジェを調製した。

コア重Ｎ：　８０■ 調製したドラジェコアを公知の方法で表面コーティング
により被覆した；コーティングは砂糖とタルクから木質
的になっていた。このコーティングはまた認可された着
色剤も含み得る。最終ドラジエはワックスでみがいた。

ドラジエ重量　　　　１２０■ 実施例　５ １０■のジピリダモール４　アンプル ジピリダモール　　　　　　１０■ 酒石酸　　　　４■ ポリエチレングリコ−）し　　　　　　　　　　　　　
　１００　Ｉ！１ｇｐＨ２，７に調整した塩酸（ＩＮ）
　　　　　　ｑ、ａ、（０，０１８ｍ）注射水　　　　
２ｍｌ ジピリダモールと他の各成分を水に溶解した。

滅菌濾過したのち、溶液をアンプルに詰め、加熱により
滅菌した。

実施例　６ 実施例１〜３からのアンプルを注射水または等張食塩水
を用いて注射用に処方し２−の注射液を得た。

【図面の簡単な説明】

第１Ａ図はＬ−Ｍ細胞をＴＮＦ−Ｄとジピリダモールと
の種々の濃度に１１日間連続暴露したのちの細胞生存割
合を示す一連のグラフである。第１Ｂ図は図中に示した
各活性物質の濃度で１１日間培養したのちの生物の形態
（Ｌ−Ｍ細胞の生存を示す培養プレート）の一連の写真
である。 第２Ａ図はＴＮＦ−Ｄ、ジピリダモールとＴＮＦ−α、
およびジピリダモールそれぞれの種々の濃度に１４日問
および１１日間連続暴露したのちのＹ細胞の細胞生存割
合を示す一連のグラフである。第２Ｂ図は図中に示す各
活性物質の濃度での１１日培養後の生物の形態（Ｙ細胞
の生存を示す培養プレート）の一連の写真である。 第３Ａ図はＴＮＦ−αとジピリダモールの種々の濃度に
８日間連続暴露したのちのＭＭ−１ｃＢ細胞の細胞生存
割合を示す一連のグラフである。 ’Ｊ３Ｂ図は図中に示した各活性物質の濃度で８日間培
養したのちの生物の形態（ＭＭ−１ｃＢ細胞の生存を示
す培養プレート）の一連の写真である。 第４Ａ図はＴＮＦ−Ｄとジピリダモールの種々の濃度に
１１日間連続暴露したのちのＨＥＣ−１細胞の細胞生存
割合を示す一連のグラフである。 第４Ｂ図は図中に示した活性物質の濃度で１１日間培養
したのちの生物の形態（ＨＥＣ−１細胞の生存を示す培
養プレート）の一連の写真である。 第５図はメラノーマＨＭＶ　Ｉ細胞（Ａ）、原著細胞（
Ｂ）および繊維芽細胞（Ｃ）でのＴＮＦ−αおよびジピ
リダモールの種々の濃度に対する連続暴露８日後の細胞
生存割合を示す。 ＴＮＦ β（Ｕ／ｍＩり Ｆｌｇ　、　ＴＢ−１ Ｆｌｇ、ＩＢ−３ ５Ｕ／ｍｌ　ＴＮＦ−β 図面の浄書 ノビ″リグモ ル（μＭ） ＦＩｇ、１８−２ ＋ｏｐＭジピリダモール Ｆｉｇ　、　１Ｂ−４ ５ＬＪ／ｍｌ　ＴＮＦ βと１０μＭジピリダモール 対ＩＫ４にｉｊシての割合 （壬） ロ ロ Ｆｌｏ　、　２８−１ Ｆｌ（１、２Ｂ−３ ５００Ｕ／ｍ［ＴＮＦ　　ａ 対照に対しての゛）、り合 （係） Ｆｌｇ、２Ｂ−２ ＦＩｇ、２Ｂ−４ ５００Ｕ／ｍｔ　ＴＮＦ−ａと＋ＰＭジピリダモールＴ
ＮＦ−α（Ｕ／都） Ｆｌｇ、３Ｂ−１ Ｆ１９．３８−３ ５００　Ｕ／ｍｌ　ＴＮＦ　　ａ ノビリグモ ル（μＭ） Ｆｉｇ　、　３Ｂ−２ １μＭジピリダモール Ｆ１９．３Ｂ−４ ５００Ｕ／ｍｌ　ＴＮＦ−ａとＩμＭジピリダモール’
Ｉ”　Ｎ　Ｆ−β （Ｕ／１ｒＬ１．） ｉ ｇ・ Ａ− Ｆｌｑ　、　４Ｂ−１ ＦＩｇ、４Ｂ−３ １０Ｌｌ／ｍｌ　ＴＮＦ−β ジピリダモール （μＭ） 　　ｉ ｇ。 Ｆｌ（］　、　４Ｂ−２ １μＭジピリダモール Ｆｌｇ　、　４Ｂ−４ １０Ｕ／ｍｌ　ＴＮＦ−βとＩＰＭジピリダモール１、
事件の表示 ２９発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係 ４、代 （方式） ％式％ （１）願書に最初に添付した明細書及び図面の浄書別紙
のとおり （２）御指令に基づき明細書の図面の簡単な説明の欄を
次のとおり訂正いたしました。 （ａ）　　明細書第２９頁２行及び３行を次のとおり訂
正した。 「間培養したのちの生物の形態（Ｌ−Ｍ細胞の生存を示
す培養プレート）の一連の写真である。」 わ）同第２９頁９行及び１０行を次のとおり訂正した。 「での１１日培養後の生物の形態（Ｙ細胞の生存を示す
培養プレート）の一連の写真である。」 （Ｃ）　　同第２９頁１５行及び１６行を次のとおり訂
正した。 「間培養したのちの生物の形ＦＷ　（ＭＭ−１ｃＢ細胞
の生存を示す培養プレート）の一連の写真である。」 （ｄ）　　同第３０頁１行及び２行を次のとおり訂正（
ｅ） した。 「間培養したのちの生物の形態（ＨＥＣ−１細胞の生存
を示す培養プレート）の一連の写真である。」 同第３０頁７行以下の文を削除した。 （第６図は図面に描くことは不可能であり、参考写真と
して別途物件提出書で提出しますので削除いたしました
。）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、腫瘍壊死因子の抗腫瘍作用を増強するのに適する医
   療組成物の調製用のジピリダモールまたはその薬学上許
   容し得る塩。 ２、腫瘍の治療にジピリダモールまたはその薬学上許容
   し得る塩と一緒に使用するための医薬組成物の調製用の
   腫瘍壊死因子。 ３、腫瘍壊死因子とジピリダモールまたはその薬学上許
   容し得る塩を腫瘍患者に投与することを含み、ジピリダ
   ゾールを腫瘍壊死因子の抗腫瘍作用を増強するような量
   で投与することを特徴とする腫瘍患者の治療方法。 ４、患者に投与する腫瘍壊死因子の抗腫瘍作用を増強す
   るような量で、ジピリダモールまたはその薬学上許容し
   得る塩を患者に投与することを特徴とする腫瘍患者の治
   療方法。 ５、腫瘍を患い腫瘍壊死因子を投与された患者の治療用
   であってジピリダモールまたはその塩が腫瘍壊死因子の
   抗腫瘍作用を増強するように投与されるジピリダモール
   またはその薬学上許容し得る塩。 ６、腫瘍壊死因子とジピリダモールまたはその薬学上許
   容し得る塩とを含む医薬組成物。