JPH0219392A - ガラクトサミノオリゴ糖及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、アミノオリゴ糖、更に詳細には新規なガラク
トサミノオリゴ糖、及びその製造方法に関するものであ
る。

（従来の技術） 近年、微生物、植物あるいは動物の生産する多糖あるい
はそれらのオリゴ糖が種々の生理活性を有することが知
られるようになり、多糖又はそれらのオリゴ糖に関心が
高まっている。

そして例えばポリグルコサミン（キトサン）においても
、キチン、キトサン及びそのオリゴ糖が抗腫瘍活性とい
ったすぐれた生理活性を有することが発見されている。

また、ポリガラクトサミンも上記したポリグルコサミン
と類似の多糖類であることから、ポリガラクトサミンに
もすぐれた生理活性が期待され、ポリガラクトサミンに
対する関心が高まっている。

（但し１式中ｎは０〜１０を表わす）。

しかしながら、ポリガラクトサミン（α−１，４−ガラ
クトサミノガラクタン）の内、微生物起源のものは非常
に少なく、例えば不完全菌由来のＰＦ−１０１及びＰＦ
−１０２が知られている程度であり　（特公昭５６−１
２６３９号、特開昭６２−２９４０９３号）、本発明の
ような少糖類であるガラクトサミノオリゴ糖は従来全く
未知の化合物であって、新規である。

（発明が解決しようとする問題点） 上記したＰＦ−１０１、ＰＦ−１０２は、生理活性を有
するアミノ多糖類であるポリグルコサミンとは比較的類
縁の多糖であるにもかかわらず、強力な凝集活性以外に
は格別の生理活性が確認されていないのが技術の現状で
ある。

（問題点を解決するための手段） 本発明はこのような技術の現状に鑑みてなされたもので
あって、ＰＦ−１０１又はＰＦ−１０２をベースとした
新規な生理活性物質を開発する目的でなされたものであ
る。

そこで各方面から広く且つ深く検討した結果、これら多
糖類の分解生成物であるオリゴ糖に着目するに到った。

そして分解方法１分離精製方法についても鋭意研究の結
果、各種のオリゴ糖をそれぞれ単離することに成功し、
且つそれらをそれぞれ同定してすべてが文献未載の新規
化合物であることを確認し、本発明を完成するに到った
ものである。

本発明に係るガラクトサミノオリゴ糖は、いずれも新規
物質であり、単独又は混合して抗腫瘍性等各種の有益な
生理活性が強く期待されるものである。

本発明を実施するに際して、出発原料として、化学構造
が明確化され且つ微生物を起源とする大量生産安定供給
が確保されるという観点から、各種ポリガラクトサミン
の中から特に前記したＰＦ−１０２に着目した。

ＰＦ−１０２は、Ｄ−ガラクトサミンが主にα−１，４
結合した分子量１６万以上の塩基性多糖、α−１，４−
ポリガラクトサミンであって、次の式で示される天然多
糖類である： このＰＦ−１０２は、和歌両県の腐植層から分離した不
完全菌［１菌の培養液中に蓄積される凝集活性物質の１
つであって、培養液に塩類を添加して析出させた酸水溶
液溶解性の析出物を更に精製して得られたものであって
、次の理化学的性質を有するものである。

（１）凝集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝集する
。

（２）凝集活性ｐ）ｌ範囲；ｐＨ２〜９で安定に凝集活
性を示す。

（３）凝集活性温度範囲；０−１００℃で凝集活性が認
められる。

（４）凝集活性イオン強度；炭酸およびＦｅ２（ＳＯ４
）３により凝集活性が阻害されるがそれ以外の各種イオ
ン及びイオン強度によって凝集活性に影響はなく、Ｎａ
Ｃ１，Ｋ、ＳＯ４でＩＭまで全く影響を与えない。

（５）元素分析；窒素８．６４％、炭素４２．８０％、
水素６．８７％ 一般式：（Ｃｊ（□１ＮＯ４・スＨ２０）ア（６）呈色
反応；ニンヒドリン反応　　　　士キサントプロティン
反応 エーリッヒ反応 モリッシュ反応 フェノール硫酸法　　　　士 レローゼンテスト （７）電気泳動；密度勾配等重点電気泳動により単一物
質として確認され、等重点（ｐＩ）は８．５である。

（８）物質の色；淡黄色 （９）塩基性、酸性、中性の区別 ０．５％ｗ／ｖで水に懸濁した場合のＰＨは７．５（脱
イオン水のｐＨ５，８）である。

（１０）溶剤に対する溶解性 ・熱水に難溶 ・冷水に難溶 ・希酸に易溶 ・希アルカリに難溶 ・アルコール類、アセトン、クロロホルム。

ベンゼン、ｎ−ペンタンに不溶。

（１１）平均分子量　１６万以上 上記したＰＦ−１０２の酸塩としては、燐酸塩、塩酸塩
、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩などが例示される。

上記した凝集活性物質ＰＦ−１０２は、例えば本発明者
らが和歌山系の腐植層より分離した不完全菌１−１菌に
よって生産される。不完全菌［１菌はベニシロマイセス
属（Ｐａｅｃｉｌｏ［１ｙｃｅｓ）に属すものと認めら
れ、ベニシロマイセス［１と命名され、該菌株は微工研
にＦＩＥＲＭ　Ｐ−３９２８（ＦＥＲＮ　ＢＰ−１１８
０）として寄託されている。

次にベニシロマイセスＩ　−１（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃ
ｅｓ　ｒ　−１）の菌学的性質を示す。

［ａ］顕顕微上下の観察 本菌は分生胞子柄（ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒｅ）を欠き
、分生胞子は栄養菌糸または栄養菌糸束から直接生えて
いる一本一本独立したフィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ
）の先端に長い連鎖をなして派生している。フィアライ
ドは半透明で２０〜４５μの長さを持ち、基部はやや太
＜　（１，０〜１．５μ）先端はやや先細り（０，５〜
１．０μ）で、直線的あるいは先端部がやや湾曲したも
のもある。分生胞子は電子顕微鏡により葉巻タバコ型（
あるいは桿菌型）であり、そのサイズは４〜６Ｘ１．０
〜１．４μである。

分生胞子は普通２５〜３５個の連鎖をなしているが、ま
れにはもつと長鎖のものもｗｔ祭される。この分生胞子
の連鎖は非常にもろく、−寸したショックで簡単にくず
れる。

〔ｂ〕各培地における生育状態（２５℃平面培養）（１
）ツアペック寒天培地 コロニーの生育は良く１４日目上直径約４５ｍｍに達す
る。白色のビロード状から羊毛状の菌叢で、中央部に房
状に盛上りがあり、コロニー周辺は円形である。水滴・
シワ共になし。コロニー裏面は培養初期白色、培養後期
中央部が淡黄色を呈する。

寒天への色素産生は認められない。

（２）麦芽寒天培地 コロニーの生育は良く、１４日目上直径約５４＋ｎｍ、
コロニー周辺は円形にならず梅林状を呈する。

菌叢の中央部は白色だが、周辺部は淡黄色を呈する。菌
叢の厚さは中程度で、中央部はやや凹状である。水滴・
シワ共に認められず、コロニー裏面は全面淡黄色を呈す
。寒天培地に淡黄色色素の産生あり。

（３）ポテトデキストロース寒天培地 コロニーの生育は非常に良＜１４日目上直径約６０ａｖ
＋に達する。白色のビロード状乃至羊毛状の可成り厚い
菌叢を形成し、中央部はやや盛上り、皿中央部は淡い黄
色を呈するやや薄い菌叢、その周辺部は白色の比較的厚
い菌叢となる。表面にシワはないが数個のうすい褐色の
水滴が認められる。コロニー裏面に放射状の数本のシワ
があり、同心円状の黄色の濃淡が認められる。寒天への
淡黄色色素の拡散がある。

（４）　ＹｐＳｓ寒天培地（組成スターチ１．５％、イ
ーストエキス０．４％、　に、ＨＰＯ４０，１％、Ｍｇ
ＳＯ４０，０５％。

寒天２％） コロニーの生育は良好で１４日目上直径約５０ｍｍに達
する。白色の全体にふっくらとした羊毛状の厚い菌叢で
ある。水滴・シワなし。コロニー裏面は特記すべき特徴
なし。色素産生なし。

（５）　ＭＹ２．寒天培地（組成グルコース２０％、ポ
リペプトン０．５％、イーストエキス０．３％、モルト
エキス０．３％、寒天２％） コロニーの生育はあまり良くなく１４日目上直径約３０
＋ＩＩｍである。気菌糸はあまりたたず細かいシワが多
く、周辺部、は淡黄色、中央部は淡褐色を呈する。コロ
ニーの裏面は淡黄色で、細かいシワがある０色素産生な
し。

以上の形態的特徴及び培養上の性質から本菌はモノフィ
アライド（ｍｏｎｏｐｈｉａｌｉｄｅ）の不完全菌と考
えられオニオンとパロン共著のｍｏｎｏｐｈｉａｌｉｄ
ｉｃｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ
（Ａｇｎｅｓ、　Ｈ，Ｓ、　０ｎｉｏｎｓａｎｄ　Ｇ、
　Ｌ、　Ｂａｒｒｏｎ；　１９６７、Ｍｙｃｏｌｏｇｉ
ｃａｌ　ｐａｐｅｒｓＮｏ、１０７、Ｃｏ＠ｍｏｎすａ
ａｌｔｈ　Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ
ｅ。

Ｋｅｙ、　Ｅｎｇｌａｎｄ）に記載されているペエシロ
マイセスバシリスポラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　
ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓ）の特徴に類似している点
が多い。

即ち不完全菌の分類１最も重要な特徴とされる分生胞子
の形態はＰ、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓの分生胞子
の形態に極めて似ており、マイアライドの形態なども良
く似ている。しかし、一方各種の培地での培養上の特徴
については多少の差違が認められ、上記文献の記載のＰ
、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓは生育速度が本菌に比
較して遅く、菌糸は初期白色、培養後期に桃色がかる（
ｐｉｎｋｉｓｈ）と記述されているが、本菌では初期白
色、培地によっては後期淡黄色を呈する点で異なる。し
かし前述文献にも Ｐ、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓの菌株には培養上の
特徴や分生胞子の大きさにおいて変動がある。（Ｓｔｒ
ａｉｎｓ　ｏｆＰ、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓ　ｓ
ｈｏｗ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｉｎ　５ｐ
ａｒｅ　５ｉｚｅ）と記述されていることを考慮すると
、本菌はＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｂａｃｉｌｌｉｓｐ
ｏｒｕｓかその類縁菌と考えられるが決定的根拠がない
のでベニシロマイセスＩ−１とした。

不完全菌の分類上の指標としてはあまり重要視されない
性質であるが１次に本閑の生理学的性質について示す。

〔Ｃ〕生理的性質 （１）炭素源の利用性 ツアペック培地を基本培地としてその蔗糖の代りに各種
の炭素源を加えて、生育度をみた結果、可溶性澱粉、グ
リコーゲン、トレハロース、ラフィノース、セロビオー
ス、マルトース、蔗糖、グルコース、フラクトース、ガ
ラクトース、マンノース、イノシトール、ソルビトール
、グリセリンを非常に良く利用する。

次にイヌリン、ラクトース、アラビノース、リボース、
マニトール、乳酸、コハク酸は可成り良く利用出来た。

キシロース、ラムノース、クエン酸の利用性は低く、酒
石酸、シュウ酸は全く利用出来ない。

（２）窒素源の利用性 ツアペック培地を基本培地としてその窒素源を色々変え
て生育度をみた結果、アンモニア態、アミノ態、硝酸態
のいずれの窒素をも良く利用出来る。

（３）生育温度 最適生育温度は２３〜２５℃であり、３０’Ｃでは生育
がみられるが、３５℃では生育出来ない。

（４）生育ＰＨ Ｇ、Ｙｅ培地（組成グルコース２％、酵母エキス０．２
％）でＰＨ２〜１０の範囲で生育をみたところ、いずれ
のｐＨでも良く生育した。

ペーシロマイセスＩ−１は通常の糸状菌の液体培養方法
で培養することができる。

ペーシロマイセスＩ−１の胞子または菌糸を液体培地に
接種し、好気的に培養する。炭素源としてはブドウ糖、
麦芽糖、蔗糖、Ｒ粉、廃糖蜜等を使用することが出来る
が好ましくはブドウ糖を用いるのが良い、窒素源として
は硫酸アンモニウム、硝酸ソーダなどの無機窒素、ペプ
トン、酵母エキスなどの有機窒素が使用出来る。

培養温度は本凝集活性物質生産菌が凝集活性物質を生産
する範囲内で適宜変更し得るが通常は２０〜２５℃で培
養することが好ましい。培養時間は培養条件によって異
なるが、通常４〜５日程度であり、凝集活性物質が最高
に達する時間を見積って適当な時間に終了すればよい。

本発明においては、培養濾液または濾液濃縮液に各種塩
を添加し、沈澱が生じない場合は必要によってはアルカ
リを添加してｐＨを７〜９として、析出させ、析出物を
分離し、水洗し、これを希酸水溶液に溶解し、再び塩を
添加するか、アルカリ等の添加によってＰＨを７〜９と
して、析出させて、高度に精製されたＰＦ−１０２を得
ることができる。

ＰＦ−１０２の含有液に添加される塩としては、次の例
示の塩を含めて塩の１又は２以上である。

即ち、塩化カリ、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩
化アンモニアなどの塩酸塩、硝酸カリ、硝酸ナトリウム
などの硝酸塩、酢酸ソーダなどの酢酸塩、硫酸２カリ、
硫安、硫酸カルシウム、硫酸銅などの硫酸塩、リン酸２
カリ、リン酸１カリ、リン酸２ソーダ、リン酸１ソーダ
などのリン酸塩などが例示される。

添加する塩は溶解した状態であれば、どれでもよいが、
好ましいのはＰＦ−１０２含有液に対し０．５〜５０％
、より好ましくは２〜４０％程度である。

添加する塩の種類によってはｐｌ＋が７以上になるので
、この場合はｐＨの調整を行なうことなく、ＰＦ−１０
２が析出するので、析出物を分離すればよし１ａ 塩を添加しても析出を生じない場合はカセイソーダ等の
アルカリを用いて、ｐＨを７〜９、好ましくは等電点で
ある８、５附近にｐＨ調整を行えばよい。

ＰＦ−１０２含有液に塩の添加と場合によってｐ１１７
〜９の調整を行えば、夾雑物の妨害によって容易に析出
しなかったＰＦ−１０２が析出を起し、夾雑物とは分離
して析出する。この析出物は遠心分離又は濾布による濾
過によって分離できる。

培養液をＰＨ８，５の等電点処理をしてもＰＦ−１０２
の析出は全く起らなかったことからみれば、塩の添加だ
けでＰＦ−１０２の析出が完全に起るということはきわ
めて意外なことである。

分離した析出物は多量の塩を含んでいるので、これを水
や溶媒で洗滌して脱塩し、酸に溶解する。

酸としては酢酸などの有機塩、塩酸などの無機酸などい
ずれの酸でもよく、また、濃度としては０．０１〜３モ
ル程度のものがよい。

析出物を酸に溶解した後は、２１１７〜９の等電点附近
の処理のみで容易に析出するようになっているので、カ
セイソーダ等のアルカリを添加し、ｐＨ７〜９、好まし
くはｐＨ８，５とｐＨ調整し、析出物を得る。

更に、精製するためには、この析出物を水等で洗滌し、
再び酸に溶解し、ｐＨ７〜９のｐＨ調整を行い、析出物
を得ることができる。

この精製処理は何度でも行なうことができ、精製が完了
した時点で、析出物はほぼ純粋となり、前記した化学構
造を有するα−１，４−ガラクトサミノガラクタンであ
るＰＦ−１０２が得られるのである。

このようにして得たポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２
）を酸やアルカリ又は酵素で加水分解した後、単離精製
すれば目的とするガラクトサミノオリゴ糖を単品である
いは数種類を混合物として得ることができる。

例えば酸加水分解の場合は、塩酸等常用される酸液を用
いて、通常、加温しながら酸加水分解を行うのである。

しかる後に、減圧濃縮したり、または、濾液を活性炭で
脱色した後アニオン交換樹脂で処理したりして、塩酸を
除去する。このようにして得たガラクトサミノオリゴ糖
混液をクロマ１−グラフィー等分離精製処理に付して、
各フラクションを回収し、各ガラクトサミノオリゴ糖を
それぞれ単離すればよい。

このように、ポリガラクトサミンを酸又はアルカリによ
って加水分解することによりオリゴ糖を得ることができ
るのであるが、オリゴマー、特に重合度の高いものの収
率が比較的低い０例えば塩酸によってポリガラクトサミ
ンを加水分解する時、ランダムな分解の結果、得られる
オリゴ糖の量はモノ−ガラクトサミン、ジ−ガラクトサ
ミン、トリーガラクトサミン、テトラ−ガラクトサミン
、ペンタ−ガラクトサミンの順であり、重合度が大きい
程その収量は低下するということになる。

そこで、ポリガラクトサミンを分解して、重合度が比較
的大きな種々の重合度のオリゴ糖を得るには、上記のよ
うに化学的方法によったのでは収率等の面から限界があ
るとの観点に達し、検討の結果、生物学的方法に着目す
るに到った。つまり、ポリガラクトサミンを分解して重
合度の異なる各種オリゴ糖を高収率で生産することので
きるポリガラクトサミン分解酵素の必要性がクローズア
ップされてきたのである。

そこで本発明者らは、広範な微生物についてはポリガラ
クトサミン分解菌を検索した結果、シュードモナス属に
属する細菌が、新規なポリガラクトサミン分解酵素を生
産することを見出し、この酵素を利用することにより新
規なオリゴ糖を各種得ることに成功したものである。

この新規なポリガラクトサミン分解酵素の理化学的性質
は次のとおりである： （１）作用および基質特異性 ポリガラクトサミン（α−１，４ガラクトサミノガラク
タン）に作用してオリゴガラクトサミンを生成する。

その他の多糖類、例えばポリヘキソース、キチン、澱粉
（α−１，４グルカン）、グリコーゲン（α−１，４グ
ルカン）、プルラン（α−１，４グルカン）、デキスト
ラン（α−１，６グルカン）、ラミナラン（β〜１．３
グルカン）、カルボキシルセルロース（β−１，４−グ
ルカン）、キトサン（β−１，４−ゲルコサミノグルカ
ン）、エチレングリコールキチン（β−１，４Ｎ−アセ
チルゲルコサミノグルカン）、 Ｐｓｓｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍの
Ｎ−アセチルガラクトサミノガラクタン（β−１，３Ｎ
−アセチルガラクトサミノガラクタン）（Ｙ、　Ａｋｉ
ｙａｍａ、、ａｔ、　ａｌ、、Ａｇｒｉｃ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｓ、、５０（３）７４７．１９８６
）などには全く作用しない。

（２）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 クエン酸リン酸ナトリウム緩衝液を用いた場合、至適ｐ
Ｈは４．５〜７．０であり、安定範囲はｐＨは４．５〜
８．０である。

（３）酵素活性の測定法 酵素活性は基質にＰａｅｃｉｌｏｍｙｅｅｓ　Ｉ　−１
菌の生産するＰＦ−１１又はＰＦ−１０２（その主構成
糖はα−１，４ガラクトサミノガラクタン）を用いた、
この０．５％１０．１モル酢酸緩衝液ｐＨ６，０溶液０
　、５ｍ１２に酵素溶液０　、５ｍ１２を加え、３７℃
、１０分間反応させ、生じる還元力をＳｏｍｏｇｙｉ−
Ｎｅｌｓｏｎ法で測定した。なお酵素単位は１分間当り
に１μモルのガラクトサミンに相当する還元力を増加さ
せる活性を１単位とした。

（４）作用適温及び温度安定性の範囲 ２０〜７０℃の範囲で測定した結果、この酵素の至適温
度は５５℃であり、それ以上で急激に低下する。

つぎに温度安定性についてみた。ｐＨｌ１ｉ、０の条件
で各温度で０〜８０分間保った時の残存活性をみたとこ
ろ、５０℃、１時間で７０％の活性が残存している。

（５）金属イオン等の影響 各種金属イオン及び阻害剤１　ｍＭ　（ＰＣＭＢのみ０
．１ｍＭ）を含む溶液中に３７℃、１時間放置後、残存
酵素活性を測定し、相対値で示した。（表−１）表−１
，金属等の影響 阻害物　　残存活性（％）　　阻害物　　残存活性（％
）無添加　　　　１００ ＫＣＩ　　　　　　　９６　　　　　　ＮａＣｌＣａＣ
１，９８ＬｉＣｌ ＢａＣｌ２９９　　　　　　ＭｎＣｌ２ＣｏＣｌ２８８
　　　　　　ＮｉＣ１゜ＣｄＣｌ２９８　　　　　５ｎ
Ｃ１２ ＦｅＣ１，５ＦｅＣ１゜ ＺｎＣ１，９２ＨｇＣ１２ Ｐｂ（Ｃ１ｌ、Ｃ００）２９５　　　　　　Ｎ）１４Ｃ
１（ＮＨ４）−ＳＯ４，１００ＣｕＳ０４ｔｒｉｓ　ｌ
）　　　　　９７　　　　　　ＳＤＳ　２）ＮＢＳ　３
）　　　　　８８　　　　　　ＥＤＴＡ　４）阿ＩＡ　
５）　　　　　１００　　　　　　ＰＣＭＢ　６）１）
トリス（ヒドロキシル）アミノメタン２）ドデシル硫酸
ナトリウム ３）　Ｎ−ブロモコハク酸イミド ４）エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム５）モノヨー
ド酢醸 ６）パラオキシ安息香酸第二水銀 以上の結果から、このポリガラクトサミン分解酵素はス
ズ、鉄、銅、無機水銀及びＳＯ８により阻害される。

（６）酵素の精製法 本酵素の単離、精製は常法に従って行うことができる。

例えば、エタノールによる沈殿物をセファデックスＧ−
５０カラムクロマトグラフイー、側−セファデックスＣ
−２５カラムクロマトグラフイーフエニル−セファロー
ス４Ｂカラムクロマトグラフイーなどの精製手段又はこ
れらの組合せにより精製される。

（７）分子量 本酵素の分子量はポリアクリルアミドゲルスラブ電気泳
動法により測定すると、３１，０００と計算される。

（８）ポリアクリルアミドゲル電気泳動精製酵素を常法
に従って、７．５％のポリアクリルアミドゲル（ｐＨ８
，６）電気泳動にかけたところ、単一のバンドが認めら
れた。

（９）等重点 常法によりシュークロース密度勾配の等電点電気泳動を
行った。その結果、この酵素の等重点はρＩ＝６．７で
ある。

本酵素は、その作用及び基質特異性において従来全く知
られていない新規酵素である。

上記したポリガラクトサミン分解酵素は５例えばシュー
ドモナスｓｐ　Ｈ８８１によって生産される。

シュードモナスｓｐ　ｔ１８８１は本発明者らが土壌中
より分離した菌株であり、その菌学的性質は下記のとう
りである。

（ａ）形態 顕微鏡的′１１察（肉汁寒天培地３０℃、１６時間培養
）（１）細胞の大きさ：０．３〜０．６Ｘ１．Ｏ〜２．
０ミクロンの桿菌 （２）細胞の多形性：認められない （３）運動性：極鞭毛を有し、運動性有り（４）胞子の
有無：形成せず （５）ダラム染色性：陰性 （６）抗酸性：陰性 （ｂ）各種培地における生育状態 （１）肉汁寒天平板培養：３０℃、２４時間でうす黄茶
色のコロニー、表面円滑で光沢を有し半ないし不透明で
ある。色素の生成はない。

（２）肉汁寒天斜面培養：よく生育する。

（３）肉汁液体培養：培養液表面に厚膜状に生育、液内
には中程度に生育６ （４）肉汁ゼラチン穿刺培養二表面に生育し、層状に液
化する。

（５）リドマスミルク：アルカリ性、完全に液化する。

（ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元：陰性 （２）脱窒反応：陰性 （３）　ＭＲテスト：陽性 （４）　ＶＰテスト：陰性 （５）インドールの生成：陰性 （６）硫化水素の生成：陰性 （７）澱粉の加水分解：陰性 （８）クエン酸の利用：コーザー、クリステンセンの両
培地で利用する。

（９）無機窒素の利用：硝酸塩、アンモニアとも利用す
る。

（１０）色素の生成：　ＫｉｎｇＡ　ｉ陰性、Ｋｉｎｇ
Ｂ　；弱い青蛍光の色素を生成、Ｆ　ａｇａｒ　＋、弱
い青蛍光の色素を生成、Ｐ　ａｇａｒ　；陰性 （１１）ウレアーゼ：陽性 （１２）オキシダーゼ：陽性 （１３）カタラーゼ：陽性 （１４）生育の範囲：生育Ｐｌ＋５〜９、至適温度３０
〜４０℃ （１５）酸素に対する態度：好気性 （１６）　Ｏ−Ｆナス１−：酸化 （１７）カゼインの分解：陽性 （１８）　ＤＮＡの分解：陽性 （１９）耐塩性：２％食塩；陽性、５％食塩；陰性（２
０）糖類から酸及びガスの生成 酸の生成　　ガスの生成 （１）　Ｌ−アラビノース　　　　＋ （２）Ｄ−キシロース　　　　　＋ （３）Ｄ−グルコース　　　　　＋ （４）Ｄ−マンノース　　　　　＋ （５）Ｄ−フラクトース （６）Ｄ−ガラク１−−ス　　　　＋ （７）マルトース （８）シュークロース　　　　＋ （９）ラクトース （１０）トレハロース　　　　　＋ （＋１）　Ｄ−ソルビトール （１２）　Ｄ−マンニトール （１３）イノシトール （１４）グリセリン （１５）デンプン （ｄ）その他の性質 （１）窒素源欠乏培地で菌体内にポリ−β−ハイドロキ
シブチル酸エステル（ＰＨ８）を蓄積する。

（２）アルギニン、ベタインを唯一の炭素源として生育
し、アルギニンデヒドロラーゼ活性を持たない。

（３）脂肪酸（ツイーン８０．６０．２０）を分解する
。

（４）　４０℃で生育する。４℃では生育不能。

上述の新規なポリガラクトサミン分解酵素生産能を有す
る本菌の分類学的性質を、「バージエズ・マニュアル・
オブ・デターミイテイブ・バクテリオロジー」第８版（
１９７４年）及び「バージエズ・マニュアル・オブ・シ
ステマテイツク・バクテリオロジー」第１巻（１９８４
年）の分類と対比すると、本菌はグロスファクターを要
求せず、ＰＨ８を蓄積し、アルギニン、ベタインを唯一
の炭素源として生育し、アルギニン・デヒドロラーゼ陰
性、脱窒反応陰性、４０°Ｃで生育可能からセクション
２（あるいはＩｔＮＡグループ２）のＰ、　ｃｅｐａｃ
ｉａ、　Ｐ、　ｇｌ、ａｄｉｏｌｉ。

Ｐ、　ｍａｒｇｉｎａｔｅの類縁菌と思われるがＰ、　
ｃｅｐａｃｉａとは硝酸塩の還元陽性、炭素源の資化性
ではＤ（−）−トレハロース、マルトース、ラクトース
、マレイン酸において異なる。Ｐ、　ｇｌａｄｉｏｌｉ
とは、マル１へ一ス、ラフ１〜−ス、マレイン酸、ｍ−
ハイドロキシブチル酸エステルの資化性の結果が異なる
。

Ｐ、　ｍａｒｇｉｎａｔｅとは、ｚ−ハイドロキシブチ
ル酸エステルの結果が異なる。また、Ｐ、　ｃｅｐａｃ
ｉａ、　Ｐ。

ｍａｒｇｉｎａｔｅは、非蛍光性色素を生成するが本菌
はＫｉｎｇＢ＊　Ｆ　ａｇａｒ及びＬ−グルタミン酸、
Ｌ−アルギニン、し−スレオニン、Ｌ−ヒスチジンを唯
一の炭素源とした時弱い蛍光色素（青白蛍光）は生成す
るが非蛍光性色素の生成は種々の培地条件においても認
められない。これらの結果から、本菌はＰ。

ｃｅｐａｃｉａ、　Ｐ、　ｇｌａｄｉｏｌｉ、　Ｐ、　
ｍａｒｇｉｎａｔｅとは異なる５ｐｅｃｉａｓである・ 本菌の生理学的諸性質で特徴的なことは、Ｏ−Ｆテスト
において単糖のみならずフル１−−ス、シュークロース
、ラクトース、セルビオースなどの二糖類からも酸を生
成することである。この性質はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
属、低温性のＰ、　ｆｒａｇｉ、　ｐ。

ｔａｅｔｒｏｌｅｎｓ（いずれもセクション５　）Ｐ、
　１ｕｎｄｅｎｓｉｓと似ているが生育温度で違いがあ
る。

以上の結果より本菌はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの新菌種
と認められ、本菌をシュードモナスｓｐ　Ｈ８８１と命
名し、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に、
微工研菌寄第８９５５号（ＦＥＲＭ　Ｐ−８９５５）と
して寄託されている。

ポリガラクトサミン分解酵素生産菌の培養培地としては
、炭素源、窒素源、無機物、その他の栄養素を程よく含
有する培地ならば、合成培地あるいは天然培地のいずれ
でも使用可能である。該培養培地の好適な例としては、
ポリガラクトサミン０．２５％、グルコース０．２５％
、酵母エキス０．０５％。

ポリペプトン０．０５％、ｐＨ７，０の例が挙げられる
。

培養温度は２０〜４０℃、好ましくは３０〜３８℃の範
囲、培養開始ｐＨは６〜８、好ましくは７付近で３５〜
７２時間振盪又は深部撹拌培養すれば、培養液中にポリ
ガラクトサミン分解酵素が得られる。そして、ボリガラ
ク１−サミン分解酵素は必要に応じて単離精製される。

例えば、培養濾液をエタノール沈殿法によって粗酵素を
分離し、これを水性媒質に溶解し、セファデックスＧ−
５０ゲル濾過、　　ＣＭ−セファデックスＣ−２５イオ
ン交換クロマトグラフイー、フェニル−セファロースＣ
Ｌ−４Ｂ疎水クロマトグラフィー等の処理により精製さ
れたポリガラクトサミン分解酵素が得られる。

このようにして得た新規ポリガラクトサミン分解酵素を
、ポリガラクトサミンに作用させると、各種のガラクト
サミノオリゴ糖を効果的に得ることができる。この処理
は酵素を用いる加水分解の常法にしたがって行えばよく
、例えば次のような方法が例示される。

先ず、ポリガラクトサミンを低濃度の酸に溶解せしめる
。酸としては、例えば酢酸、ギ酸等の有機酸のほか、硫
酸を除く無機酸が広く使用できる。

こうして得られた多糖類溶液のｐＨを調整した後、上記
により調製したポリガラクトサミン分解酵素を加えて、
３７℃前後の適温で酵素分解を行う。

低分子の分解反応生成物を反応液から取り出し、これを
イオン交換樹脂に吸着せしめた後、適当な濃度勾配の溶
剤で溶出して、各種のガラクトサミノオリゴ糖両分を得
、これを精製して目的とするオリゴ糖をそれぞれ得るの
である。

既述したような酸又はアルカリ加水分解、あるいは酵素
分解を単独でまたはこれらを適宜組合わせることによっ
て、目的とするガラクトサミノオリゴ糖を単独で又は混
合物として得ることができる。即ち、上記によりポリガ
ラクトサミンを加水分解すれば、極めて効果的に、ガラ
クトサミンオリゴ−２糖〜１２糖をそれぞれ得ることが
できるし、必要な場合には各オリゴ糖の適宜の混合物も
自由に得ることができるのである。

このようにして得られた少糖類は、ＩＩＰＬＣ，ＴＬＣ
等の標準品として利用できるほか、キチン、キトサンの
オリゴマーと同様な又は異なった生理活性が期待され、
例えば抗腫瘍活性が特に有望であるところから、各種の
医薬として又はその原料ないし中間体としても利用する
ことができる。

抗腫瘍活性は、各オリゴ糖単独で期待されるばかりでな
く、オリゴ糖混合物（例えば３糖、４糖。

５糖の混合物）とした方が更に強力な抗腫瘍活性が期待
できる場合もあり、いずれにせよ、本発明に係るオリゴ
糖は抗腫瘍剤として利用することが可能である。また、
食品添加物、栄養剤、保健剤、農薬、工業薬品としても
利用可能である。

次に本発明の実施例を示す。

実施例１ ポリガラクトサミンの調製 グルコース６００ｇ、ポリペプトン６０ｇ、ＣａＣ１□
・２ｔ（２０１２５ｇを水道水１７Ｑに溶解し、′ａＮ
ａｏｌ＋溶液でρ１１７．０に調整した後３０Ｑ容ジャ
ーファーメンタ−に移した。

この培地溶液に蒸気を注入することにより加圧。

加熱滅菌（１２１℃、２０分間）を行った。冷却後の培
地（最終液量２０Ｑ）に、５００ｎ＋１２三角フラスコ
に１５０＋ｎＲ同組成の培地（グルコース３％、ポリペ
プトン０．３％、ＣａＣ１，０，５％、ｐ）１７．０）
で２６℃、４日間振盪培養したベニシロマイセスＩ　−
Ｉ　Ｆ［ＥＲＭ　Ｐ−３９２８（ＦＥＲＭＢＰ−１１８
０）を容量比で約１０％無菌的に接種した。接種後２７
℃、通気量０．５ＶＶＭ、撹拌数２０ＯＲＰＭ　ノ条件
で５日間培養した。

培養終了後培養物を濾布濾過することにより培養濾液ｉ
ｎを得た。この培養濾液を５０℃〜６０°Ｃに加熱しな
がら分画分子量１６万の限外濾過膜（三菱レイヨン・エ
ンジニアリング社製ＵＦ膜チューブラ−モジュールＦタ
イプ）を通過させることにより、低分子画分を除き液量
が約３０になる迄濃縮した。更に、約１．４０００ＸＧ
で遠心分離することにより菌体残渣、熱変性蛋白質を除
去した。

遠心分離後に上澄液画分３Ｑに食塩約７５０　ｇ　（約
２５％濃度）を加え攪拌し、溶解後、濃ＮａＯＨでｐｌ
＋を７．０〜８．５に調整した。−夜放置し塩析物を十
分析出させた後、サラン製の布（塩化ビニリデンと塩化
ビニールの共重合体）上に塩析物を回収した。

更にこの塩析物の上から大量の微アルカリ性の水（ｐＨ
７，０以上）を撒布することにより余分の食塩及び培養
液に同時に混在している中性糖、その他の夾雑物を洗い
流した。

次に、水洗後の塩析物に０．１Ｍ塩酸溶液を容量比で約
３倍量加え溶解した。この溶解物に濃ＮａＯＨ溶液を加
えポリガラクトサミンの等電点であるｐｌ＋８．５に合
せた。−夜放置し十分析出物を析出させた後、上記と同
様サラン製の布上に析出物を回収し、大量の水道水で洗
った。この水洗物をもう１度０．１Ｍ塩酸に溶解後、等
電点沈澱を行い水洗を繰返すことにより精製した。

この精製した析出物を１２１℃、１５分間滅菌後、凍結
乾燥することにより、ポリガラクトサミンを主成分とす
るＰＦ−１０２の精製粉末（ポリガラクトサミンとして
の純度約９９％）を７ｇ得た。

また、用途により上記精製粉末の１部を０．１Ｍ塩酸に
溶解し分画分子量３０万の限外濾過膜（アミコン社製分
子篩膜タイプＸＭ　３００）で分画し、平均分子量１６
〜３０万のものと平均分子量３０万以上のものに分画す
ることもできる。

実施例２ ガラクトサミノオリゴ糖の調製 精製ポリ−ガラクトサミン（ＰＦ１０２）　１００ｇを
４規定塩酸、２Ｑに分散させ、冷却管付き三角フラスコ
中にて、８０℃、８時間、塩酸加水分解した。

分解後、この塩酸溶液を濾紙濾過して未分解残渣を除去
し、これに活性炭約１００ｇを加えて脱色した。次に、
陰イオン交換樹脂ＡＧ３Ｘ４Ａ　（米国バイオ−ラッド
社製）を充填したカラム（８Ｘ　７５ｃ＋＋＋）にこの
溶液を通過させ、塩酸を除去した。

次いで、得られたガラクトサミノオリゴ糖混液を活性化
してカラムに充填したい一セファデックスＣ−２５（２
，５Ｘ　１００ｃＩ１１）に吸着させ充分水洗後、Ｏ〜
２．５モル食塩による直線的濃度勾配で溶出させ、その
結果、１２のピークを分画した（第１図）。なおこの場
合、ΔＯＤ、＝２ｎｍはインドール塩酸法によるガラク
トサミンの測定結果である。

得られた各ピークのガラクトサミノオリゴ糖を再度活性
炭により脱色し１重合度ｎ　＜　４にあっては電気透析
機、ミクロ　アシライザーＧ−１１００（旭化成社製）
で脱塩し、吸引濃縮液後、凍結乾燥して、また重合度３
　＜　ｎにあっては限外濾過膜（Ｕｌ＋−０５ウルトラ
フィルターアトバンチツク１−−ヨー社製）にて脱塩、
濃縮し、凍結乾燥して各両分のガラ９１へサミノオリゴ
糖を得た。この時、得られた各両分の回収量は第１表に
示した。

また、得られた各ガラクトサミノオリゴ糖の各旋光度を
測定したところそれらの旋光度と重合度との間に第２図
の関係が成り立ち、各両分はガラクトサミノオリゴ糖が
重合度の小さい順に順次溶出されていることが分かった
。すなわち、第２図はガラクトサミノオリゴ糖の分子旋
光度と重合度との関係を表わしたグラフであって、比旋
光度〔α〕Ｄと分子量との積が分子旋光度ＣＭ）ｎであ
り。

（Ｍ）ｎ／ｎと（ｎ−１）／ｎとは直線関係が成立する
ことを示している（ｎは重合度を表わす）。

第１表 両分　溶出食塩濃度（モル）　ガラクトサミノオリゴ糖
（ｇ）１　　　　　０．２７　　　　　　　　　　１１
．９２　　　　０．４８　　　　　　　　　　９．７３
　　　　０．７３　　　　　　　　　　６．２４　　　
　０．９４　　　　　　　　　　５．７５　　　　　１
．１６　　　　　　　　　　３．６６　　　　　１．３
３　　　　　　　　　　３．０７　　　　　１．５８　
　　　　　　　　　２．３８　　　　１．７３　　　　
　　　　　　２．１９　　　　　１．８６　　　　　　
　　　　１．６１０　　　　　　１．９９　　　　　　
　　　　　　　１．１１１　　　　２．１０　　　　　
　　　　　１．０１２　　　　２．２２　　　　　　　
　　　０．８実施例３ ポリガラクトサミン分解酵素の調製 シュードモナスｓｐ　８８８１．　ＦＥＲＭ　Ｐ−８９
５５を５００ｍ１２三角フラスコ中で、グルコース０．
５％、酵母エキス０．０５％、ポリペプトン０．０５％
の組成を有する種培地１００ｍρに植菌し、３０℃で２
０時間培養する。

得られた種培養液を３０Ωのジャーファーメンタ−中で
、ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）０．２５％、グ
ルコース０．２５％、酵母エキス０．０５％、ポリペプ
トン０．０５％の酵素生産培地１８Ｑに植菌し、３０℃
で通気量Ｉ　ＶＶＭ、攪拌数２０ＯＲＰＭで４８時間培
養した。

得られた培養液を遠心分離（１４，ＯＯＯｒｐｍ）　Ｉ
、て、菌体を除き、得られた培養濾液に冷却したエタノ
ールを６０％濃度まで加えて、タンパク質を沈殿させ、
この沈殿タンパク質を遠心して、溶液から分離する。得
られたタンパク質を０．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ５，０
）で平衡化したＣトセファデックスＣ−２５カラム（２
、５Ｘ　６０ｃｍ）に吸着させ、Ｏ−０，５モル食塩の
濃度勾配を有する同緩衝液を用いて溶出させる。

溶出した酵素活性区分を集め、限外濾過装置（分画分子
量１万）を使って濃縮する。次に、２モル食塩を含む０
．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ６、０）溶液とし、同緩衝液
で平衡化したセファデックスＧ−５０カラム（５Ｘ　９
０ｃｍ）クロマトグラフィーにかける。次いで。

活性区分の食塩濃度を４モルにまで高め、同様な溶液で
平衡化したフェニル−セファロースＣＬ−４Ｂカラム（
２，５Ｘ　２０ｃｍ）に吸着させ１食塩の逆濃度勾配を
持つ０．１モル酢酸緩衝液で溶出して精製ポリガラクト
サミン分解酸！５０ｍｇ　（収率２３．１％、比活性５
２μｇ　ｇａｌＮ／ｍｉｎ／ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）を
得る。

実施例４ ガラクトサミノオリゴ糖の調製 〈酵素分解−囲セファデックスＣ−２５クロマト〉精製
ポリガラクトサミン２５ｇを約４．８Ｑの０．１モル酢
酸に溶解し１次いで水酸化ナトリュウムでＰＨ６，０に
調製して水を加えて全液量を５Ｑとした。

このポリガラクトサミン溶液を基質とし、精製ポリガラ
クトサミン分解酵素５ｍｇ（約５００ユニツト）（本１
ユニツトは１分間にガラクトサミン１μモル精製する酵
素力価）を加え３７℃で１時間酵素分解した。

分解後、１００℃、１０分間加熱して酵素反応を止め、
不溶物を遠心して除いた。次いで、得られた溶液のＰＨ
を酢酸を用いて５．０に調整し、弱陽イオン交換体Ｃト
セファデックスＣ−２５カラム（２Ｘ　４０ｃｏ＋）に
吸着させた。

この方ラムを０．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ５，０）で洗
浄後、０〜２．５モルの食塩による直線的濃度勾配で溶
出させ、単離される各両分を集めた。

各両分は電気透析機、マイクロ・アシライザーＧ３（旭
化成社製）にて脱塩し、凍結乾燥して精製ガラクトサミ
ノオリゴ糖とした。

この時、得られた各両分の回収量は表−２に示した。

第　　２　　表 （ガラクトサミノオリゴ糖）（ｇ） ガラクトサミン　　　　　　　　　０．１８ガラクトサ
ミノオリゴー２９　　０．３６ガラクトサミノオリゴー
３９　　　１．８０ガラクトサミノオリゴ−４糖　　１
．６５ガラクトサミノオリゴー５糖　　１．２０ガラク
トサミノオリゴー６糖　　０．８４ガラクトサミノオリ
ゴー７糖　　０．６０ガラクトサミノオリゴー８糖　　
０．４８ガラクトサミノオリゴー９糖　　０．３９ガラ
グトサミノオリゴ−１０糖０．２４ガラクトサミノオリ
ゴー１１＆ｌｆ　　　Ｏ，１８ガラクトサミノオリゴ−
１２糖　　０．１２実施例５ ガラクトサミノオリゴ糖の調整 〈酵素分解−Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ　Ｘ　８クロマト〉精製
ポリガラクトサミン２５ｇを約４．８Ｑの０．１モル酢
酸に溶解し１次に、水酸化ナトリウムでρ１１６．０に
調整し、全液量を５Ｑとした。このポリガラクトサミン
溶液を基質とし、これに精製したポリガラクトサミン分
解酵素１０ｍｇ（約１０００ユニツト　＊１ユニットは
１分間にガラクトサミン１μモルを生成する酵素力価）
を加え３７℃で酵素分解した。

分子量３０００以下の分解反応生成物はホローファイバ
ーＨＩＰ−３（アミコン・ファー・イースト・リミテッ
ド社製、ＤＣ−２型ホローフアイバー）を用いて連続的
に反応液から取り出し、直接陽イオン交換樹脂ダペック
ス５０１ｉ１　Ｘ　８　（２，５Ｘ　５０ｃｍ）に吸着
させた。

ダペックス５０Ｗ　ｘ　８からのガラクトサミノオリゴ
糖の溶出は０〜４モルの塩酸濃度勾配によって行った。

次いで、得られる各ガラクトサミノオリゴ糖溶液は陰イ
オン交換樹脂ＣＤＲ２Ｏ（三菱化成製）で処理し、塩酸
を除いた。この溶液を凍結乾燥して精製ガラクトサミノ
オリゴ糖を得た。得られた各ガラクトサミノオリゴ糖量
は第３表に示した。

第３表 （ガラクトサミノオリゴ糖）（ｇ） ガラクトサミン　　　　　　　　　０．８ガラクトサミ
ノオリゴー２糖　　　１．６ガラクトサミノオリゴー３
＆！７．０ ガラクトサミノオリゴー４糖　　　４．０ガラクトサミ
ノオリゴー５糖　　　３．０ガラクトサミノオリゴ−６
糖　　　１．２実施例６ ガラクトサミノオリゴ糖の調整 〈塩酸分解−Ｄｏｗｅｘ５０１ｉ１　Ｘ　８クロマト〉
精製ポリガラク１−サミン２５ｇを濃塩酸（１２規定）
２５０ｍＱに分散し、８０℃、４時間、加水分解した。

次いで、この溶液を減圧濃縮して、塩酸を除去し、ダペ
ックス５０Ｗ　Ｘ　８　（２，５Ｘ　５０ｃｍ）のカラ
ムクロマトグラフィー（０〜５モルの塩酸濃度勾配で溶
出）を行いガラクトサミノオリゴ糖を分離精製した。

精製した各ガラクトサミノオリゴ糖はＡＧ３Ｘ４Ａで処
理して塩酸を除去した後、凍結乾燥して精製ガラクトサ
ミノオリゴ糖を得た。

結果を第４表に示した。

第４表 （ガラクトサミノオリゴＭ）　　　　　　（ｇ）ガラク
トサミン　　　　　　　　　８．０ガラクトサミノオリ
ゴー２糖　　　６．０ガラクトサミノオリゴー３糖　　
　４．０ガラクトサミノオリゴー４糖　　　２．０ガラ
クトサミノオリゴー５糖　　　１．０ガラクトサミノオ
リゴー６糖　　　０．８このようにしてガラクトサミノ
オリゴ糖が得られたが、これらはいずれも新規物質であ
り、ガラクトサミンオリゴ−２ｌ１１Ｉｌｉ〜１２糖の
物性は以下に示すとおりである。

■、物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−２糖１）α−
１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの２糖 Ｇａ１Ｎ１−＋、Ｇａ１Ｎ（但し、Ｇａ１Ｎはａ−Ｄ−
ガラクトサミノピラノシル基を示す。） ２）色および形状：淡黄色不定形の粉末３）味：甘味を
有する。

４）溶解性：薄い酸（塩酸などの鉱酸あるいは蟻酸や酢
酸などの有機酸など）、塩化ナトリウム、塩化カリウム
などの塩の水溶液および水にそれぞれ可溶であり、ジメ
チルスルホオキシドを除く一般的な有機溶媒（メタノー
ル、エタノール、アセトン、クロロホルムなど）に難溶
性である。

５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４２．３５、Ｈ：　７．０６、Ｎ　：　８．２４
、Ｏ：　４２．３５予想される分子式：Ｃ１□１（２４
０’ＪＮ２６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　３４０．２ ７）下記の呈色反応を示す。

インドール塩酸反応、エルソンーモルガン反応、ソモギ
ーネルソン反応にそれぞれ陽性、モルガンー二ルソン反
応、ローリ−・フォーリン反応に僅かに陽性、フェノー
ル硫酸反応、ヨード反応に陰性。

８）旋光度 〔α〕ら’　：　＋１２７．４ ９）融点 １６４℃ １．０）第３図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第４図に赤外部吸収スペクトルを示す。

２、　物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−３糖１）α
−１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの３糖 Ｇａ１Ｎ１−）４ＧａｌＮ、−）４ＧａｌＮ（但し、Ｇ
ａ１Ｎはａ−Ｄ−ガラクトサミノピラノシル基を示す。

） ２）色と形状二同上 ３）味：弱い甘味を呈する。

４）溶解性二同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４３．１１．　Ｈ：　６．９９、Ｎ　：　８．３
８、Ｏ：　４１．５２予想される分子式：Ｃ１，Ｈ３５
０□３Ｎｆｆ６）分子量と構造式は下記の通り。

分子ｌｉｔ：　５０１．３ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕♂’　：　＋１５８．３ ９）融点 特定の融点を有さす。１６０℃以上で炭化を始める。

１０）第５図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第６図に赤外部吸収スペクトルを示す。

３、物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−４糖１）α−
１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの４糖 Ｇａ１Ｎ１−＋、Ｇａ１Ｎ１−＋４ＧａｌＮ１−＋４Ｇ
ａｌＮ　（但し、Ｇａ１Ｎはα−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル基を示す。）２）色と形状：同上 ３）味：僅かな甘味を有する。

４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４３．５０、Ｈ：　６．９５、Ｎ　：　８．４６
、Ｏ：　４１．０９予想される分子式：　Ｃ２４Ｈ，，
０，□Ｎ４６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　６６２．４ ■）α−１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの
５糖 Ｇａ１Ｎ、−＋４ＧａｌＮ１−＋４ＧａｌＮ、−＋４０
ａ１．Ｎ□−＋４０ａｌＮ　（但し、Ｇａ　ＩＮはα−
０−ガラクトピラノシル基を示す。） 色と形状二同上 味：弱い甘味を有する。

溶解性：同上 ７）呈色反応二同上 ８）旋光度 〔α〕♂’　：　＋１７４．１ ９）融点：同上 １０）第７図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第８図に赤外部吸収スペクトルを示す。

４、物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−５糖Ｃ：　４
３．７４、Ｈ：　６．９３．Ｎ　：　８．５１、Ｏ：　
４０．８３予想される分子式：　Ｃ３ｏ　Ｈｓ　７０２
　ｔＮｓ６）分子量と構造式は下記の通り。

分子＋ｉｉ　：　８２３．４ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕′Ｄ。：　＋１８３．８ 融点：同上 第９図に紫外部吸収スペクトルを示す。

第１０図に赤外部吸収スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−６糖α−１→４結
合のみで構成されるガラクトサミンの６糖 Ｇａ１Ｎ、→４ｃａｌＮ工→４ＧａＩＮ□→４ＧａＩＮ
工→４ＧａＩＮ１→、Ｇａ１Ｎ　（但し、Ｇａ１Ｎはａ
−Ｄ−ガラクトピラノシル基を示す。） 色と形状：同上 味：同上 溶解性：同上 下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４３．９０、Ｈ：　６．９１．　Ｎ　：　８．５
４、○：　４０．６５予想される分子式’　ｃ、　ａ　
ｏ６８　ｏ、、５　ＮＧ６）分子量と構造式は下記の通
り。

分子量：　９８４．６ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕も’　：　＋１９０．２ 融点：同上 第１１図に紫外部吸収スペクトルを示す。

第１２図に赤外部数スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミノオリゴー７糖α−１→４結
合のみで構成されるガラクトサミンの７糖 Ｇａ１Ｎ、　−＋４ＧａｌＮ１−＋４ＧａｌＮ１−＋、
Ｇａ１Ｎ１→４ＧａｌＮ□−＋、Ｇａ１Ｎ、　−＋４Ｇ
ａｌＮ ２）色と形状二同上 ３）味：同上 ４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４４．０２、Ｈ：　６．９０、Ｎ　：　８．５６
、Ｏ：　４０．５２予想される分子式二Ｃ４□Ｈ７，０
□９Ｎ？６）分子量と構造式は下記の通り。

分子ｆｆｉ　：　１１４５．７ ＧａｌＮ１＋、Ｇａ１Ｎ、→−，Ｇａ　ｌＮ２）色と形
状二同上 ３）味：同上 ４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４４．１０、Ｈ：　６．８９、Ｎ　：　８．５８
．０　：　４０．４３予想される分子式：　Ｃ４５Ｈｓ
ｏＯｉｚＮｓ６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　１３０６．８ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕も’　：　＋１９４．９ 融点二同上 第１３図に紫外熱吸収スペクトルを示す。

第１４図に赤外部吸収スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−８＆ｆα−１→４
結合のみで構成されるガラクトサミンの８Ｍ ７）呈色反応二同上 ８）旋光度 〔α〕も’　：　＋１９８．５ ９）融点：同上 １０）第１５図に紫外熱吸収スペクトルを示す。

１１）第１６図に赤外部吸収スペクＩ−ルを示す。

８、物質の名称：ガラクトサミノオリゴ糖−９糖１）α
−１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの９糖 Ｇａ１Ｎ、÷４ＧａｌＮ１→−ｐ４ＧａｌＮ色と形状：
同上 味：同上 溶解性：同上 Ｃ：　４４．１７、　Ｈ：　６．８８、　Ｎ　：　８．
５９、　Ｏ：　３６．０６予想される分子式：Ｃ，４１
＋□。１．０３７Ｎ９６）分子量と構造式は下記の通り
。

分子量：　１４６７．９ 融点：同上 第１７図に紫外熱吸収スペクトルを示す。

第１８図に赤外部吸収スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−１０糖α−１→４
結合のみで構成されるガラクトサミンの１０糖 Ｇａ１Ｎ、→４ＧａＩＮ１→ｙ＊４ＧａｌＮ２）色と形
状二同上 ３）味：同上 ４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４４．２３、Ｈ：　６．８８、Ｎ　：　８．６０
、Ｏ：　４０．２３予想される分子式：ＣＧ、Ｈ工１２
０４１Ｎ工。

６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　１６２９．０ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕ら’　：　＋２０１．２ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕ら’　：　＋２０３．４ 融点：同上 第１９図に紫外部吸収スペクトルを示す。

第２０図に赤外部吸収スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−１１糖α−１→４
結合のみで構成されるガラクトサミンの１１Ｍ Ｇａ１Ｎ□＋４ＧａｌＮ１−）７＋４ＧａｌＮ色と形状
二同上 味：同上 溶解性：同上 下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４４．２７、Ｈ：　６．８８、Ｎ　：　８．６１
．　Ｏ：　４０．２５予想される分子式：　ＣＧ１．Ｈ
ｉｚｚＯ４ｓＮｘ、６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　１７９０．１ ７）呈色反応二同上 ８）旋光度 〔α〕も０：　＋２０５．２ 融点：同上 第２１図に紫外部吸収スペクトルを示す。

第２２図に赤外部吸収スペクトルを示す。

物質の名称：ガラクトサミンオリゴ−１２糖α−１→４
結合のみで構成されるガラクトサミンの１２糖 Ｇａ１Ｎ、−←４　Ｇ　ａ　ｌ　Ｎ　□出フ４　Ｇ　ａ
　ｌ　Ｎ色と形状二同上 味：同上 溶解性二同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４４．３１、Ｈ：　６．８７、Ｎ　：　８．６２
、Ｏ：　４０．２１予想される分子式：　ＣｔｚＨｔ３
４０４ｇＮｔｚ６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　１９５１．２ ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 （ａ　）３’　：　＋　２０６．８ ９）融点：同上 １０）第２３図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第２４図に赤外部吸収スペクトルを示す。

（発明の効果） 本発明に係るガラクトサミノオリゴ糖は、いずれも文献
未載の新規化合物であって、医薬、農薬、食品添加物、
工業薬品及びそれらの中間体とじて有用な化合物である
。

本発明に係る新規化合物の具体的用途としては、例えば
凝集剤、抗腫瘍剤等が大いに期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１において分画されたガラクトサミノ
オリゴ糖のＣトセファデックスＣ−２５カラムクロマト
グラフイーのパターンを図示したものであり、第２図は
、ガラクトサミノオリゴ糖の分子旋光度と重合度との関
係を図示した図面である。 第３．５．７．９．１１．１３．１５．１７．１９．２
１．２３図は、ガラクトサミンオリゴ−２糖〜１２糖の
紫外部吸収スペクトルをそれぞれ示した図面である。 第４．６．８，１０．１２．１４．１Ｇ、■８．２０．
２２．２４図は、ガラクトサミンオリゴ−２糖〜１２糖
の赤外部吸収スペクトルをそれぞれ示した図面である。 代理人　弁理士　戸　１）親　男 ０、Ｄ４９２ ０−４〜間 ｔｎ　Ｏ（ＪＩ　ＯＵＩ ＮａＣＲ（Ｍ） （ｎ−１）／ｎ 手続補正書輸発） 昭和６３年 ８月１５日 ６、補正の対象　　図　面 ７、補正の内容 （１）第２１図を別紙のとおり補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の式で示されるガラクトサミノオリゴ糖：▲数
   式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。 ２、α−１，４−ポリガラクトサミンを分解することを
   特徴とする下記の式で示されるガラクトサミノオリゴ糖
   の製造方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。