JPH02204412A - 天然のキラー細胞活性を強める方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業−１−の利用分野〕 免疫系は二つの成分、即ち体ｉα性（液嚢性）成分及び
細胞性成分からなっている。天然のキラー細胞（Ｎ　Ｋ
細胞）は、免疫系の細胞性成分の要素である。ＮＫ細胞
はほとんどの正常な哺乳類に存在する。これらは種々の
細胞に対【ノて細胞溶解活性を示す。

体液付成分は主として細菌及び毒性分子に対して防御す
る。液嚢性成分は抗体又は免疫グロブリンからなってい
る。細胞性成分はＴ細胞、又はＴリンパ球からなってい
る。主要な細胞、性免疫系の主要なイフエクター細胞は
キラーＴリンパ球、マクロファージ及び天然のキラー細
胞である。キラーＴ細胞は、主としてウィルス感染′Ｓ
胞に対し作用する。キラー’１ｍ胞に密接に関連してい
る別の種類のキラー細胞がＮ　Ｋ細胞である。この主要
な標的は腫瘍細胞及びウィルス及び他のものによって感
染された細胞である。

Ｔ細胞は検出可能な自発的な活性を有しない。

むしろ、これらは特定の抗原にさられたどきに活性化さ
れる。これに対して、ＮＫ細胞は予め感作されることな
く非特異的な細胞毒反応性を標的細胞に対し示す。他の
因子もＴ！Ｉｌｌ胞及びＮＫ細胞を活性化するか又はこ
れらの反応性を増加する。これらの因子の一つ、Ｔ細胞
生長因子、又はインターロイキン２（ｌＬ２）は、細胞
活性及び増！ｌａを促進する。他の因子のあるものは細
胞の機能を抑制し得るが、一方史に別の因子、例えばイ
ンタフ了、ロンはいずれかに細胞活性を制御する。

本発明者は強められたＮ　Ｋ　＠鞄店性を必要とする哺
乳類にある挿のポリアミン化合物を投り−することから
なるＮ　Ｋ細胞活性を強ぬる新規な方法を発見した。

〔課題を解決する手段〕

本発明は以下の式 〔式中ＡはＣ３−２０アルキレン又は １１は０−４であり、ＲはＣ０−４アルギルである〕の
ある挿のポリアミン化合物を投り、することからなるＮ
　＋（細胞活性を強める方法に関する。

本発明のポリアミン化合物はＮＫｍ胞活性を強める。Ｎ
Ｋ細胞は、広範囲の種々の細胞、主として腫瘍細胞及び
ウィルス及び他の外来物質によって感染された細胞に対
し自発的な細胞溶解活性を示す。ＮＫＩ胞は更シこ循環
する腫瘍細胞の破壊及び腫瘍の転移に対する宿主の抵抗
性に於いて役割を果たすことが知られている。従って、
この証拠はＮＫ細胞が免疫監視に於いて重要な役割を果
たし得ることを示唆している。本発明のポリアミン化合
物がＮＫ細胞を強める能力は以下の様に立証できる。

以下に挙げたポリアミン化合物をマウスに腹腔内注射し
た。マウスの牌臓のリンパ球を単離し、Ｎ　Ｋ細胞活性
なＹＡＣ−１標的繍胞に対して測定した。ＹＡＣ−１標
的細胞に対するリンパ球活性は、化合物がｑえられない
ときと比較して増加し）た。

本発明のポリアミン化合物は所望の効果を達成するため
に処置される哺乳類に種々の方法で投与できる。化合物
は単独又はｈ、いに糾合わせ−て没り。

することが出来、又はこれらは当業者に良く知られる製
剤組成物の形態で投与出来る。

化合物は経口的又は非縫口的、例えは静脈内、腹腔内、
又は皮下で投与され得る。投与される化合物の量は広い
範囲で変化し、ＮＫ細胞活性を強める任意の有効量であ
り得る。処置される哺乳類、処置される症状のひどさ、
投与経路、及び用いられる特定の化合物に依存して投与
される化合物の有効量は一日あたり哺乳類体重キログラ
ムあたりＩｍｇ　−１０００ｍｇで変化する。

固体単位投与形は慣用の種類のものであり得る。

従って、固体形は本発明の化合物及び担体、例えは潤滑
剤及び不活性充填剤、例えば乳糖、庶塘、及びコーンス
ターチを含有している慣用のゼラチン型のものであり得
るカプセルであり得る。別の具体例に於いて化合物は慣
用の錠剤基剤、例えば乳糖、庶糖、及びコーンスターチ
を結合剤、例えばアラビアゴム、コーンスターチ、又は
ゼラチン、崩壊剤、例えばコーンスターチ、馬鈴薯澱粉
、又はアルギン酸、及び潤滑剤、例えばステアリン酸又
は硫酸マグネシウムと紹合わせてこれらと共に錠剤化す
ることが出来る。

非経口投与のためには化合物は滅菌液体、例えば水及び
油である製薬担体を有し表面活性剤及び他の製剤上受は
入れられる助剤を添加した又は添加しない生理的に受は
入れられる希釈剤中の化合物の溶液又は懸濁液の注射可
能な投与物として投与し得る。これらの製剤中で用いる
ことの出来る油の例は石油、動物、植物、又は合成起源
のもの、例えばピーナツ油、大豆油、及び鉱油である。

般に、水、塩水、水性デキストロース及び関連糖溶液、
エタノール及びグリコール類、例えばプロピレングリコ
ール又はポリエチレングリコールが好ましい液体担体で
、特に注射溶液に良い。

本発明の化合物がＮ　＋（細胞活性を強める能力は次の
実施例で例示できる。

〔実施例〕

実施例　ｌ マウスに腹腔的経路で以下に挙げる化合物を注射した。

マウスの牌臓を無菌的に除去し、完全なＲＰＭＩ−１６
４０中で細かく裂き、そして滅菌ガーゼを通して濾過し
、単一細胞懸濁液を得た。

赤血球を細胞をＡＣＫ緩衝液中に懸濁することによって
溶菌した（０．１５５Ｍ　Ｎ　ＨａＣｌ　、　Ｏ，ｌａ
Ｍ　Ｅ　ＤＴＡ、及び０．０１Ｍ　Ｋ　ＨＣＯ、）。実
験群あたり３匹のマウスからの牌臓細胞をプールし、洗
浄し、トリパン青除外による生存性を行い、そして９６
個のウェルの丸底（ＹＡＣ−１ターゲツト）（コスタ−
／しＮｏ、３７９９）絹織土合養クラスタープレートに
加えた（０．１２〜１．ＯＸ　１０６１０．１ｍ１）。

ＮＫ感受性ＹＡＣ−１リンパ腫′！Ｒ＠を牌臓細胞媒介
細胞毒腫瘍細胞標的として使用した。Ｙ　Ａ　Ｃ−１（
１０’）を１時間１００μＣ１の５１Ｃ「で３７℃で標
識した。標識した標的細胞を洗浄し、異なる数の牌臓イ
フエクター細胞を含有している９６ウエルプレートに三
重（１０’／ウエル）で加えて、ウェルあたり０．１１
完全ＲＰＭＩ−１６４０で種々のＦＡＴ比率（１００／
１〜＋２／Ｉ）を与えた。これらのプレートを５０　ｇ
で３分間遠心し、３７℃で４時間培養した（ＹＡＣ−１
）。この培養基間に続いて、プレートを３００ｇで５分
間遠心し、上澄み液を上澄み収集システム（スカトロン
、スターリン、ＶＡ）で収穫し、そして放出する６１Ｃ
，をベックマンガンマ５５００カウンターで測定した。

単独で培養した標的細胞からの上澄み液を自発的な放出
について検定し、そして最大放出を１％ナトリウムドデ
シルサルフェート（ＳＤＳ）を添加することによって測
定した。溶解単位（ＬＵ）として表現した細胞毒性を以
下の様に測定した。

本つづき 実施例　２ ジアセチルプトレシン（ＤＡＰ）を腹腔内経路でマウス
に０時間に於いて投与した。マウスｌＩ＋、臓を無菌的
に除去し、完全ＲＰ　Ｍ　Ｉ　−１６４０中で細かく裂
き滅菌カーゼを通して濾過し、単一細胞懸濁液を得た。

赤血球をＡＣＫ緩ＩＪ液中に懸濁することによって溶菌
した（０．１５５Ｍ　Ｎ　ＨａＣｌ　、　０゜１ノＭＥ
ＤＴＡ、及びＯ，ＯＩＭ　Ｋ　ＨＣＯ３）。実験群あた
り３匹のマウスからの牌臓縛胞をプールし、洗浄し、ト
リパン青除外による生存性を行い、そして９６個のウェ
ルの丸１＆　（ＹＡＣ−１ターゲツト）（コスタールＮ
ｏ、３７９９）　Ｍ４織培養クラスタープレートに加え
た（　０．１２〜１．ＯＸ　１０’１０．１＋＋Ｉ）。

ＹＡＣ−１リンパ腫細胞を牌臓細胞媒介細胞毒Ｉｌｌ瘍
繍胞標的として使用した。ＹＡＣ−１（１０’）を１時
間１００μＣ１の８１Ｃｒで３７℃で標識した。標識し
た標的細胞を洗浄し、異なる数の牌臓イフェクター細胞
を含有している９６つエルプレートに三重（１０４／ウ
エル）で加えて、ウェルあたり０．１１完全ＲＰＭＩ−
１６４０中で種々（７）Ｅ：Ｔ比率（１０゜／！〜１２
／ｌ）を与えた。これらのプレートを５０　ｇで３分間
遠心し、３７℃で４時間培養した（ＹＡＣ−１）。この
培養基間に続いて、プレートを３００ｇで５分間遠心し
、ト、澄み液を上澄み収集システム（スカトロン、スタ
ーリン、ＶＡ）で収穫し、そして放出する６１Ｃ，をベ
ックマンカンマ５５００カウンターで測定した。単独で
培養した標的細胞からの上澄み液を自発的な放出につい
て検定し、そして最大放出を１％ナトリウムトデシルサ
ルフェー）　（ＳＤＳ）を添加することによって測定し
た。特異的溶解％として表現１ノた細胞毒性を次のよう
にして計算した。

第１図に示すようにＤＡＰでの処理は生体内に於いてネ
ズミＮ　Ｋ細胞活性を増加した。

実施例　３ 肝臓の転移を以ｒの様に誘発ざぜた。Ｃ５７ＢＬ／６マ
ウスをベントハルビタールの吸引によって麻酔にかけた
。マウスを７０％のエタノールで下準備し、ｆｆｉ菌カ
ーセで乾燥８′せ、そして次に滅菌はさみを用いて左肋
骨下の小さな切開を行った。

稗臓を露出させ、その短い胃管を胃牌の靭帯と共に切断
し、牌臓茎についている動物の腹壁」二に来るようにし
た。ＨＢ　Ｓ　Ｓ中に３ＸＩ０５腫瘍細胞を含有してい
る１１の単一細胞懸濁液を露出した膜外の牌臓の上の極
に注射した。注射が完Ｙした後、針を除去し、１分間経
過させ、腫ｉ細胞が門脈循環に流れ込んで行くようにし
た。牌臓の茎をクリップでとめ、ＩＩ！Ｘｉを除去し、
モして牌臓の茎を腹腔内に落とした。腹壁筋組織及び皮
膚を一つの層でとじた。動物をランダムにそれぞれの処
理群に割り当て回復させた。腫瘍注射後３日までに、組
織学的にミクロ転移が明らかであった。

各群を次にＩ）　Ａ　Ｐで腹腔内、皮下、又は経口的に
処置した。対照群を燐酸塩緩衝化された塩水（ＰＢＳ）
で処置した。転移の病巣を測定し、そして対照群からの
転移病巣減少パーセントを測定したがＤＡＰで処置した
各群は以下の通りである。

１検屍の前に一匹が死亡 ｐ＜０．０１

【図面の簡単な説明】

第１図は生体内に於いてネズミのＮＫ細胞活性を増加し
たＤＡＰでの処置を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中ＡはＣｓ＿３＿−＿２＿０アルキレン又は▲数式
   、化学式、表等があります▼であり、ｍ及び ｎは０〜４であり、ＲはＣ＿１＿−＿４アルキルである
   〕のある種のポリアミン化合物を含んでいる強められた
   ＮＫ細胞活性を必要とする哺乳類に投与するためのＮＫ
   細胞活性を強める薬剤。 ２、天然のキラー細胞活性を強めることに有用な 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中ＡはＣ＿３＿−＿２＿０アルキレン又は▲数式、
   化学式、表等があります▼であり、ｍ及び ｎは０〜４であり、ＲはＣ＿１＿−＿４アルキルである
   〕のポリアミン化合物の製剤組成物を製造する用途。