JPH02211167A - 基材にポリビニルベースのヒドロゲル及び生化学的活性物質を含む被膜を供給する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は基材を感光性ヒドロゲル形成ポリマー架橋剤お
よび生化学的活性物質の水溶溶液で被覆し、この被膜を
乾燥させ、被覆させた基材をフォトマスクを通して紫外
線暴露させ、そしてこの暴露被膜を現像することからな
る、基材にポリビニルベースのヒドロゲルおよび生化学
的活性物質を含む被膜を写真平版によって供給する方法
に関する。

留置カテーテルとして使用されるセンサー・カテーテル
はある期間、生理学上の値、例えば血圧、酵素、９Ｈ等
を監視するのに使用され得る。長い接触時間中、血液が
センサー・カテーテルの表面に凝固することがある。こ
の凝固は血液の相互に関連した生化学的機構によって引
き起こされ、血栓（ｔｈｒｏｍｂｕｓ）と呼ばれる付着
物を形成する。この血栓（ｔｈｒｏｍｂｉ）の発生は異
質な表面の化学的、物理的および機械的特性による表面
の生物不適合性（ｂｉｏｉｎｃｏｍｐａｔ　１ｂｉｌ　
１ｔｙ）によって開始され得る。血栓の形成は異質な表
面の特性によって引き起こされるだけでなく、血小板と
異質な表面との衝突（これにより血小板の生化学的行動
を刺激して血液循環系の離れた部分において血栓の形成
を引き起こす）によっても起こる。この生化学的反応を
制御し、塞栓症を導いたり、センサー・カテーテルの機
能性を少なくとも損ない得る血栓の発生を避けることが
重要である。多くの場合、センサー・カテーテルでの監
視は、短期間、例えば診断の目的のためにカテーテル挿
入している間実施される。

これらの場合において血栓化の過程は抗凝血物質の投薬
によって制御でき、ヘパリンが最も広く使用される。し
かしながら、長期間のヘパリン投薬は逆の効果、例えば
骨粗頑症（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）（骨組織の軟化
）および“ヘパリンリバウンド効果（ｈｅｐａｒｉｎ　
ｒｅｂｏｕｎｄ　ｅｆｆｅｃｔ）”と呼ばれるヘパリン
を中性化した数時間後、血流中のどこかでヘパリンの活
性が復活することが起こる。新生児の血管系の監視の際
には、ヘパリンは新生児の不安定な代謝に別の問題を起
こし得る。

評論記事（“血栓抵抗生物学的物質としてのヘパリン化
ポリマー（Ｈｅｐａｒｉｎｉｓｅｄ　ｐｏｌｙｍｅｒｓ
　ａｓｔｈｒｏｍｂｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｂｉｏＩＩ
ａｔｅｒｉａｌｓ）”ボリム、プラト、チクノル、イン
ク（Ｐｏｌｙｍ、　ｐｌａｔ、　Ｔｅｃｈｎｏｌ。

ＥｎｇＸｌ　６（２）１１９−２０８（１９８１）にジ
ェイ、イー、ウィルソン（Ｊ　、　Ｅ、　Ｗｉｌｓｏｎ
）によって発表された）から知られるように、血流の中
に導入される医療装置の表面にヘパリンを結合させる試
みが何度かなされた。文献中、ヘパリンの活性および抗
血栓機構（ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃ　ｍｅｃ
ｈａｎｉｓｍ）についてなお論争すべき問題がある。

ジェイ、イー、ウィルソン（Ｊ　、Ｅ、ＷｉｌｓｏｎＸ
上記）による評論によれば、抗血栓性（ａｎｔ　ｉ　−
ｔｈｒｏｍｂ。

ｇｅｎｉｔｙ）はポリマーからヘパリンが浸出すること
によって引き起こされる。装置のまわりの浸出したヘパ
リンの微雰囲気が抗血栓性をもたらす。

ヘパリンのポリマーへの共有結合はその活性の紘少を生
ずる。しかしながら、エム、エフ、エイグーゼン（Ｍ　
、　Ｐ　、　Ａ　、　Ｇ　ｏｏｓｅｎ）およびエム、ヴ
イーセフトン（Ｍ、Ｖ、５ｅｒｔｏｎＸ“ヘパリン−ポ
リ（ビニルアルコール）−ヒドロゲル被膜の特性（ｐｒ
ｏｐｅｒｔ　１ｅｓｏｆ　　ａ　　ｈｅｐａｒｉｎ−ｐ
ｏｌｙ（ｖｉｎｙｌａｌｃｏｈｏｌ）−ｈｙｄｒｏｇｅ
ｌｃｏａｔ　ｉｎｇ）“ザ・ジャーナル・オブ・バイオ
メト。

マット、レス（ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏ
ｍｅｄ、Ｍａｔ。

Ｒｅｓ、）第１７巻、３５９−３７３（１９８３）に発
表）はヘパリンのポリビニルアルコールへの化学的結合
は、ポリマーの抗血栓性に積極的に影響を及ぼすことを
示した。彼らは生物学的活性測定の間Ｐ、Ｖ、Ａ、ヒド
ロゲルからヘパリンが浸出しないことを証明できた。

欧州特許０　１４９　６９３の内容は医療装置の上にヒ
ドロゲル形成ポリマー（例えば、ポリビニルアルコール
）およびヘパリンを含む抗−血栓性被膜を形成する方法
であり、以下の段階、ａ）感光性ヒドロゲル形成ポリマ
ー、例えばポリビニルアルコールまたはポリビニルピロ
リドン、架橋剤およびヘパリンの水溶液を調製し：ｂ）
上記溶液で医療装置を被覆し； Ｃ）被覆した装置の紫外線暴露することを特徴とする。

この新しい方法は実行が容易であり公知の平版印刷法の
原理によっていて、センサー・カテーテルまたは他の医
療器具の製造に特に用いることができる半導体または電
気的に処理された表面材上への抗血栓性被膜の製造を提
供する。

ポリビニルアルコールが感光性テトラゾニウム塩によっ
て架橋される得ることは、さらにティーツノダ（Ｔ、　
Ｔｓｕｎｏｄａ）およびティー、ヤマオカ（Ｔ。

Ｙ　ａｍａｏｋａ）　（ジェイ、オブ・アプライド・ポ
リマー・サイエンス（Ｊ　、ｏｆ　ＡＰＩ）ｌｉｅｄ　
Ｐｏｌｙｍｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ）、第８巻（１９６４
）、ｐｐ、１３７９−１３９０）による記事からも知ら
れている。

現在上記欧州特許０　１４９　６９３に記載のものより
もはるかによい結果が抗血栓形成被膜の形成の間だけで
なく、この被膜が特定の架橋剤の組み合わせ、即ち、ポ
リアゾニウム化合物とグルタルジアルデヒドとの組み合
わせを使用して付着しているならば、基材表面に生化学
的活性物質を含む被膜の形成の間にも得られることがわ
かった。

本発明の内容は、基材を感光性ヒドロゲル形成ポリマー
、架橋剤および生化学的活性物質の水溶液で遠心力によ
って被覆し、この被膜を乾燥させ、被覆された基材をフ
ォトマスクを通して紫外線暴露させ、そしてこの暴露被
膜を被膜の非架橋部分を溶解させて現像することからな
る、基材にポリビニルベースのヒドロゲルおよび生化学
的活性物質を写真平版によって供給する方法において、
基材に塗布される水溶液が架橋剤としてポリアゾニウム
化合物およびグルタルジアルデヒドを含むことを特徴と
する方法に関する。

この特定の架橋剤の使用によって、写真平版による被膜
の十分な選択的な付着が得られる。被覆基材をフォトマ
スクを通して紫外線暴露させたのち、パターン付着物は
水中での現像後十分な分解能（＜　０　、　ｌ　ｘｉ）
をもって現れる。得られた被膜は半透過性で、蛋白質が
ヒドロゲルに浸透するのを妨げ、小さな生化学的分子お
よび電解質だけを通過させる。基材に供給された被膜は
特に優れた基材への付着性を特徴とする。被膜から未反
応の生化学的活性物質を洗い流すと被膜は生化学的活性
物質のどれか溶解することにより望ましくない効果を起
こさないで望ましい生化学活性を示す。例えば、被膜の
中に生化学的活性物質としてヘパリンを投入する時、形
成されたヒドロゲル被膜は抗血栓性を示し、公知のりカ
ルシフイケーションテスト（ｒｅｃａｌｃｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ　ｔｅｓｔ）のような血液凝固テスト（ｂｌｏｏ
ｄ−ｃｌｏｔｔｉｎｇ　　ｔｅｓｔｓ）によって制御さ
れる。

本発明によれば、さらに他の生化学的活性物質、例えば
酵素のような蛋白質、多糖（例えばヘパリン）および蛋
白質物質（例えば抗体、ホルモン）等を固定することが
可能であり、そのため選択的な検出目的のための生物学
的検出器に使用するべき種々の生化学的物質に用いるこ
とが可能になる。

架橋剤の特定の組合せによる使用によって、再現性のあ
る方法で特定の性質を有する被膜を供給することが可能
である。

本発明の方法において、基材はヒドロゲル形成ポリマー
、生化学的活性物質および架橋剤としてポリアゾニウム
化合物およびグルタルジアルデヒドの組み合わせを含む
溶液で遠心力によって被覆される。ポリアゾニウム化合
物として少なくとも２つの側鎖および／または末端ジア
ゾニウム塩基を含むモノマー状またはポリマー状有機化
合物力（使用される。そのようなポリアゾニウム化合物
の好ましい例としては、上述のティー、ツノダ（Ｔ。

Ｔ　５ｕｎｏｄａ）およびティー、ヤマオカ（’ｌ”　
、Ｙ　ａｍａｏｋａ）の上記引用文に言及されているも
の、例えばペンジノン−テトラゾニウム塩（好ましくは
、ベンジジンテトラゾニウムクロライド−塩化亜鉛複塩
）、ジエチルベンジジンテトラゾニウム塩（好ましくは
、ジエチルベンジジンテトラゾニウムクロライド−塩化
亜鉛複塩またはジエチルベンジジンテトラゾニウムスル
フェート）、ジクロロベンジジンテトラゾニウム塩（好
ましくは、ジクロロベンジジンテトラゾニウムクロライ
ド−塩化亜鉛複塩）、ｎ−１リジンテトラゾニウム塩（
好ましくは、〇−トリジンテトラゾニウムクロライド−
塩化亜鉛複塩または０−トリジンテトラゾニウムスルフ
ェート）、０−ジアニシジン−テトラゾニウム塩（好ま
しくは、Ｏ−ジアニシジンテトラゾニウムクロライド−
塩化亜鉛複塩または０−ジアニシジンテトラゾニウムス
ルフェート）およびオリゴマーまたはポリマーポリアゾ
ニウム化合物（例えば、名称ＤＴＳ−１８のちとにＰＣ
ＡＳ、フランスによって入手できるジフェニルアミンジ
アゾニウムスルフェートとホルムアルデヒドとの反応生
成物）が挙げられる。

本発明の方法においてヒドロゲル形成ポリマーとして、
ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンが好
んで使用される。ポリビニルアルコールとして加水分解
８７〜１００％を有する加水分解生成物がよく適合する
。特に好ましくは重合度２６００　ＰＩおよび粘度４０
〜５０ｍＰａ５（４％溶液）を有するポリビニルアルコ
ールが挙げられる。

本発明の方法で使用されるポリビニルピロリドンは、ポ
リビニルアルコールと同様に市場で人手できる薬剤とし
て合格の製品である。

生化学的活性物質としては、蛋白質、蛋白質性または多
糖物質が使用でき、例えば過酸化水素が形成される生化
学的反応を触媒する酵素（例えばグルコースオキシダー
ゼまたはアルコラーゼ）、またはｐ）（を変化させる生
化学反応を触媒する酵素が挙げられる。多糖物質として
は抗血栓物質、例えばヘパリンが使用されてよい。さら
に、選択的に検出する化学的または生化学的反応のため
のセンサーに使用される他の種類の酵素または蛋白質性
物質、例えば抗体、ホルモンおよび他の化学的活性物質
の使用が可能である。

本発明の方法において、０．５〜１２重量％、好ましく
は５〜９重量％、より好ましくは約７重層％のヒドロゲ
ル形成ポリマー、例えばポリビニルアルコールまたはポ
リビニルピロリドンおよび溶液中の上記ヒドロゲル形成
ポリマーを１００重量部として、１〜３好ましくは２〜
２．５重量部のポリアゾニウム化合物、０．５〜１０、
好ましくは５〜８．５重量部のグルタルジアルデヒドお
よびθ〜２０、好ましくは２〜１０重量部のヘパリンま
たはθ〜１０．好ましくは２〜４重量部の酵素の例とし
てのグルコースオキシダーゼを含む水または塩水（例え
ば、０．９重量％ＮａＣＱ溶液または水性緩衝溶液のよ
うな塩水溶液）の溶液によって基材を被覆することが好
ましい。

本発明の方法を行う時、最初に上記成分の水性または塩
水溶液を好ましくは上記の量で調製し、その後基材の表
面をこの溶液で被覆する。基材を回転させることによっ
て滑らかで一様に薄い被膜が得られる。乾燥後、被膜が
施されるべき特定の図柄を有するフォトマスクで被膜を
覆う。被覆された装置はフォトマスクを通して紫外線に
暴露される。この後、被膜を水または水溶液中で現像し
、被膜の放射されていない部分を溶解させ、よって局部
選択的被膜が残る。

これを行うとき、公知の平版印刷法の原理が使われ、例
えばウィリアム・ニス、デフォレスト（Ｗｉｌｌｉａｍ
　Ｓ　、ＤｅＦｏｒｅｓｔ）による本”７オトレジスト
マテリアルズ・アンド・プロセス（Ｐｈｏｔｏｒｅｓｉ
ｓｔ：Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｃｅｓｓｅ
ｓ）″、マククロウ−ヒル。インク、　（ＭｃＧｒａｗ
−Ｈｉｌｌ、　　ｒ　ｎｃ、）（１９７５）に詳細に記
述されている。

本発明の方法で被覆される基材は好ましくは生化学的セ
ンサーの部分であり、シリコン、アルミナ、シリカ、ガ
ラスまたは他の導体、半導体または不導体（例えば、ポ
リマー）によって作られる。

ある場合において、最初に基材にヒドロゲル形成ポリマ
ー、ポリアゾニウム化合物およびグルタルジアルデヒド
を含む溶液を塗布することによって膜の半透過性を高め
る基層を供給するのが好ましい。これを行う時、好まし
くは水または塩水（０，９重量％ＮａＣｌ２）の溶液は
０．５〜１０重量％のヒドロゲル形成ポリマー、および
ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として、２〜３
重量部のポリアゾニウム化合物および０．５重量部以上
のグルタルジアルデヒドを含むものが使用される。

高分子物質からなる基材への膜の付着性はクロム酸およ
゛び硫酸の混合物の中での化学的エツチングによる高分
子表面材の化学的ヒドロキシル化によってＣ−ＯＨ，Ｃ
＝Ｏ１Ｏ＝Ｃ−ＯＨおよび５Ｏ３Ｈ基を形成することに
より高められる。本発明によって使用されるポリアゾニ
ウム架橋剤は、また、これらの基と反応して、生化学的
活性物質、例えばヘパリンを含むポリビニルアルコール
被膜の高分子基材への付着性を高める。この方法におい
て、生化学的活性物質は共有結合によってポリビニルア
ルコールマトリックスおよび高分子基材に強固に結合す
る。

次に本発明を図面を参考に更に説明する。図面において
、第１図は本発明の平版印刷法によって製造されたクラ
ークタイプ（Ｃ１ａｒｋ　ｔｙｐｅ）の酸素センサーを
示す。第２図は本発明の方法によって得られたＩＳＩ？
ＥＴセンサーの第２の態様を包含する。第３図は本発明
方法により得られたクラークまたはｌ５ＦＥＴセンサー
タイプの酸素センサーの第３の態様を表わす。

第１図は本発明の平版印刷法によって製造されたクラー
クタイプの酸素センサーを示す。シリコン基材２は印刷
または集積回路の製造の公知の方法によって基材上に付
着した陰極ｌおよび陽極３を支持する。両方の電極は膜
５およびヒドロゲル被膜８によって表面を保護された親
水性ポリマー被膜７によって覆われている。センサーを
活性化するために電解質がセンサーを囲む生物学的流体
から誘導されて電極およびそれらの間の場所に接触させ
られなければならない。ヒドロゲル８および膜５の内部
の孔６は親水性ポリマー被膜７への電解質の到達を許容
し、よって電解質はセルを活性化するために陰極１への
この被膜を通過することができる。検査下の流体の酸素
または他のガス状成分は膜５および被膜７を通って陰極
ｌに拡散し、電極ｌおよび３の間の電気化学的過程に影
響を及ぼす。これらの電極は直流源に接続していて、陰
極および陽極での還元および酸化過程によって誘導され
た電流量はそれぞれセンサーが挿入された生物学的媒体
の内部の酸素の含有量の測定に使用される。シリコンの
代わりに他の絶縁基材、例えばガラス、セラミックまた
はエポキシドを使用してよい。セルを使用する時、孔６
を通っての酸素の直接の到達が選択的透過性膜５を通っ
て電極への酸素の拡散の変化または増加を起こすことを
妨げなければならない。このため、孔６の陰極Ｉからの
距離ｄははるかに太き（、例えば陰極１の活性表面部分
の幅Ｗより５倍長い。親水性ポリマー被膜７の厚さｈは
とても小さく、好ましくは４μＲ以下である。そこで陰
極１に達する酸素の大部分は膜５を通過する拡散に起因
し、孔６を通って入って親水性ポリマー被膜７を伝わる
酸素は無視してよい。この被膜はヒドロゲル、例えばポ
リビニルアルコールまたはポリビニルピロリドン、ポリ
アクリル−アミド、ヒドロキシエチルメタクリレートま
たはこれらの化合物の誘導体で作られていてよい。陰極
、陽極は銀より形成してもよい。

本発明方法で塗布される親水性ポリマー被膜は抗血栓性
基材８が電解質、酸素、二酸化炭素およびグルコースの
ような比較的小さい生化学的有機分子に対して透過性の
篩として働くように、ポリビニルアルコールヒドロゲル
およびヘパリンを含む。

上記の構造は、酵素グルコースオキシダーゼをそれだけ
で、またはヘパリンと共に親水性ポリマー被膜８の中に
固定するとグルコースセンサーとしても使用できる。親
水性ポリマー被膜８を通る酸素の流れは完全に、または
一部分、次の反応によってさえぎられる。

０、＋／ｙ’ｚＬ＝：＋−７．＋Ｈ１０”””グリコ−
β−ラクトン＋Ｈ２０゜ 酸素の量はグルコース濃度に対して逆比例する。

第２図に示される態様では電極システムはヒドロゲル感
受性ゲートを備えるｌ５ＦＥＴ、好ましくは７　　Ａ（
ｂｏｓ、Ｔａｘｅｓまたは５ｉａＮ４と置換される。第
２図に示されるように、ｌ５ＦＥＴはシリコン基材２の
上にゲート９をになう誘電性絶縁体１２によって覆われ
たソース１０およびドレイン１１を含み、それらは膜５
およびヒドロゲル被膜８によって外側を保護された親水
性ポリマーの被膜７によって覆われている。膜５は親水
性ポリマー被膜７への電解質の到達を許す孔６を備えて
いる。

第３図の態様において半透過性被膜８および膜５は省略
されている。ヒドロゲル被＠７において酵素およびヘパ
リンのような抗血栓性活性物質の両方が本発明方法によ
って結合している。

以下の実施例において本発明の好ましい態様をさらに詳
述する。

（実施例） 塩水に１０重量％ポリビニルアルコールを溶かし、ジフ
ェニルアミン４−ジアゾニウムスルフェートとポルムア
ルデヒドの縮合によって得られたポリマー状ポリアゾニ
ウム化合物（融点１８０゜および水に可溶な黄色パウダ
ー（ＤＴＩＩ８）として得られた）０．２重量％を加え
、原液を調製した。このポリビニルアルコール原液７９
へ１．３重量％のグルタルアルデヒドおよび３．３重量
％のヘパリンを含む溶液３９を加えた。被覆溶液を基材
に回転（遠心力）によって均一な被膜として塗布し、乾
燥させた。その後、被膜を紫外線に暴露してポリビニル
アルコールの架橋を形成し、オーブン内で６０℃に加熱
し、グルタルジアルデヒドの完全な架橋を得た。

この被膜を水中に２５時間投入し、ゆるく結合したヘパ
リンを浸出させ、ポリビニルアルコール／ポリアゾニウ
ム−グルタルジアルデヒド−ヘパリン膜が５５％の含水
率で得られた。

得られた膜は多くの血漿蛋白質に対して不透過であり、
そのことは最も小さい血漿蛋白質の一つ、アルブミンが
この膜を通して拡散しないことから証明された。

共有結合ヘパリンのために膜はりカルシフィケーション
テストの間、抗血栓性特性に関する限り優れた物質であ
ると考えられるシリコーンゴムに比較して優れた結果を
示した。

【図面の簡単な説明】

第１図はクラークタイプ酸素センサーの断面図、第２図
はＩＳＦ’ＥＴセンサーの断面図、第３図はクラークま
たはＩ　５ＦＥＴセンサータイプの別の態様の酸素セン
サーの断面図である。図中の符号は以下に説明する。 ｌ・・・陰極、２・・・基材、３・・・陽極、５・・・
膜、６・・・孔、７・・・親水性ポリマー被膜、訃・・
ヒドロゲル被膜、９・・・ゲート、１０・・・ソース、
１１・・・ドレイン、ｄ・・・陰極１と孔６との間の距
離、 ｈ・・・親水性ポリマー被膜７の厚さ。 第１図 第２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、基材を感光性ヒドロゲル形成ポリマー、架橋剤およ
   び生化学的活性物質の水溶液で遠心力によって被覆し、
   該被膜を乾燥させ、被覆された基材をフォトマスクを通
   して紫外線暴露させ、そして該暴露被膜を現像すること
   からなる、基材にポリビニルベースのヒドロゲルおよび
   生化学的活性物質を写真平版によって供給する方法にお
   いて、基材に塗布される水溶液が架橋剤としてポリアゾ
   ニウム化合物およびグルタルジアルデヒドを含むことを
   特徴とする方法。 ２、ポリアゾニウム化合物として、少なくとも２つの側
   鎖および／または末端ジアゾニウム塩基を含むモノマー
   状またはポリマー状有機化合物が使用される請求項１記
   載の方法。 ３、ポリアゾニウム化合物としてベンジジンテトラゾニ
   ウム塩、ジエチルベンジジンテトラゾニウム塩、ジクロ
   ロベンジジンテトラゾニウム塩、ｏ−トリジンテトラゾ
   ニウム塩、ｏ−ジアニシジンテトラゾニウム塩および／
   またはジフェニルアミンジアゾニウムスルフェートとホ
   ルムアルデヒドとの反応生成物が使用される請求項２記
   載の方法。 ４、ヒドロゲル形成ポリマーとしてポリビニルアルコー
   ルおよび／またはポリビニルピロリドンが使用される請
   求項１記載の方法。 ５、生化学的活性物質として少なくとも一種の蛋白質、
   蛋白質性または多糖物質が使用される請求項１記載の方
   法。 ６、蛋白質、蛋白質性または多糖物質として抗血栓性物
   質または酵素が使用される請求項５記載の方法。 ７、抗血栓性物質としてヘパリンおよび酵素として過酸
   化水素を形成する生化学的反応を触媒する酵素、例えば
   グルコールオキシダーゼまたはアルコラーゼ、またはｐ
   Ｈを変化させる生化学的反応を触媒する酵素が使用され
   る請求項６記載の方法。 ８、０．５〜１２重量％のヒドロゲル形成ポリマーおよ
   び、該ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として１
   〜３重量部のポリアゾニウム化合物、０．５〜１０重量
   部のグルタルジアルデヒドおよび０〜２０重量部のヘパ
   リンを含む水または塩水（０．９重量％ＮａＣｌ）の溶
   液で基材を被覆することを特徴とする請求項１〜７のい
   ずれかに記載の方法。 ９、０．５〜１２重量％のヒドロゲル形成ポリマーおよ
   び、該ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として１
   〜３重量部のポリアゾニウム化合物、０．５〜１０重量
   部のグルタルジアルデヒドおよび０〜１０重量部のグル
   コースオキシダーゼを含む水または塩水（０．９重量％
   ＮａＣｌ）の溶液で基材を被覆することを特徴とする請
   求項１〜７のいずれかに記載の方法。 １０、０．５〜１２重量％のヒドロゲル形成ポリマーお
   よび、該ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として
   ２〜２．５重量部のポリアゾニウム化合物、５〜８．５
   重量部のグルタルジアルデヒドおよび２〜１５重量部の
   ヘパリンを含む水または塩水（０．９重量％ＮａＣｌ）
   の溶液で基材を被覆することを特徴とする請求項１〜７
   のいずれかに記載の方法。 １１、０．５〜１２重量％のヒドロゲル形成ポリマーお
   よび、該ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として
   ２〜２．５重量部のポリアゾニウム化合物、５〜８．５
   重量部のグルタルジアルデヒドおよび２〜４重量部のグ
   ルコースオキシダーゼを含む水または塩水（０．９重量
   ％ＮａＣｌ）の溶液で基材を被覆することを特徴とする
   請求項１〜７のいずれかに記載の方法。 １２、基材に塗布される溶液が５〜９重量％、好ましく
   は約７重量％のヒドロゲル形成ポリマーを含む請求項８
   〜１１の少なくとも１項に記載の方法。 １３、２つの別々の溶液を基材に塗布することを特徴と
   し、その一方がヒドロゲル形成ポリマーおよびポリアゾ
   ニウム化合物を含み、他方が生化学的活性物質およびグ
   ルタルジアルデヒドを含む請求項１〜１２のいずれかに
   記載の方法。 １４、基材が生化学的検出器の一部分である請求項１〜
   １３のいずれかに記載の方法。 １５、基材がシリコン、アルミナ、シリカ、ガラスまた
   は他の不導体からつくられている請求項１４記載の方法
   。 １６、基材が初めにヒドロゲル形成ポリマー、ポリアゾ
   ニウム化合物およびグルタルジアルデヒドを含む溶液を
   塗布されることにより基層を形成される請求項１４およ
   び１５に記載の方法。 １７、０．５〜１２重量％のヒドロゲル形成ポリマーお
   よび、該ヒドロゲル形成ポリマーを１００重量部として
   ２〜３重量部のポリアゾニウム化合物、０．５重量部以
   上のグルタルジアルデヒドを含む水または塩水（０．９
   重量％ＮａＣｌ）の溶液を使用することを特徴とする請
   求項１６記載の方法。