JPH02215380A - 安定な液体酵素濃縮物およびその製造方法 - Google Patents
安定な液体酵素濃縮物およびその製造方法Info
- Publication number
- JPH02215380A JPH02215380A JP1317876A JP31787689A JPH02215380A JP H02215380 A JPH02215380 A JP H02215380A JP 1317876 A JP1317876 A JP 1317876A JP 31787689 A JP31787689 A JP 31787689A JP H02215380 A JPH02215380 A JP H02215380A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- starch
- solution
- amylase enzyme
- amylase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、バチルス−ステアロテルモフィルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ５ｔｅａｒｏｔｈｅｒｓｏ ｈｉｌｕｓ）
からのα−アミラーゼ酵素を含む液体酵素濃縮物および
その製造方法に関する。
ｉｌｌｕｓ ５ｔｅａｒｏｔｈｅｒｓｏ ｈｉｌｕｓ）
からのα−アミラーゼ酵素を含む液体酵素濃縮物および
その製造方法に関する。
近年、種々の熱安定なα−アミラーゼ酵素が開発されて
いる。このような熱安定なα−アミラーゼ酵素としては
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓによ
り（米国特許第４，５１９．９３４号）； Ｃｌｏｓｔ
ｒｉｄｉｕｍｔｈｅｒｍｏａ＊ ｌｏｌ ｔｉｃｕｍ（
米国特許第４．５７８，３５２号）により；およびは匹
上山比ｕｍ ｔｈｅｒｍｏｈ ｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉ」
（米国特許第４．６１３．５７０号）により製造される
ものがある。特に商業的に重要なのは、バチルス−ステ
アロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔ
ｈｅｒｖｏ ｈｉｌｕｓ）により製造されたα−アミラ
ーゼ酵素である。この酵素は、Ｓ、 Ｌ、 Ｐｆｕｅｌ
ｌｅｒおよびＷ、 Ｈ，ＩＩ！ｌ１ｉｏｔｔ、 Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｅａ、、 ２４４４８（１９６９）
によりそして米国特許第２．６９５．８６３号および同
第４．２８４．７２２号に記載されている。
いる。このような熱安定なα−アミラーゼ酵素としては
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓによ
り（米国特許第４，５１９．９３４号）； Ｃｌｏｓｔ
ｒｉｄｉｕｍｔｈｅｒｍｏａ＊ ｌｏｌ ｔｉｃｕｍ（
米国特許第４．５７８，３５２号）により；およびは匹
上山比ｕｍ ｔｈｅｒｍｏｈ ｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉ」
（米国特許第４．６１３．５７０号）により製造される
ものがある。特に商業的に重要なのは、バチルス−ステ
アロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔ
ｈｅｒｖｏ ｈｉｌｕｓ）により製造されたα−アミラ
ーゼ酵素である。この酵素は、Ｓ、 Ｌ、 Ｐｆｕｅｌ
ｌｅｒおよびＷ、 Ｈ，ＩＩ！ｌ１ｉｏｔｔ、 Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｅａ、、 ２４４４８（１９６９）
によりそして米国特許第２．６９５．８６３号および同
第４．２８４．７２２号に記載されている。
液体のバチルス−ステアロテルモフィルスαアミラーゼ
剤は市販されている。しかしながら、このような製剤は
、しばしば、かなりの量のＮａＣ１を含む、酵素剤中の
高い塩濃度は、相分離を引き起こす傾向のため、酵素が
液体洗剤や別の用途に使用される場合に望ましくない、
塩化物イオンは、金属容器および装置の腐蝕を引起し得
るので、同様に望ましくない。さらに、市販の液体α−
アミラーゼ剤は、色が薄黒くかつその濃縮物は貯蔵時に
沈澱を形成する傾向を示し得る。これらの理由から、市
販のバチルス−ステアロテルモフィルスα−アミラーゼ
液剤は、液体洗剤製造業者および化粧用に容認できる酵
素製品を配合する必要のある他の者により簡便な受入れ
を得られていない。
剤は市販されている。しかしながら、このような製剤は
、しばしば、かなりの量のＮａＣ１を含む、酵素剤中の
高い塩濃度は、相分離を引き起こす傾向のため、酵素が
液体洗剤や別の用途に使用される場合に望ましくない、
塩化物イオンは、金属容器および装置の腐蝕を引起し得
るので、同様に望ましくない。さらに、市販の液体α−
アミラーゼ剤は、色が薄黒くかつその濃縮物は貯蔵時に
沈澱を形成する傾向を示し得る。これらの理由から、市
販のバチルス−ステアロテルモフィルスα−アミラーゼ
液剤は、液体洗剤製造業者および化粧用に容認できる酵
素製品を配合する必要のある他の者により簡便な受入れ
を得られていない。
本発明の目的は、良好な酵素および物理的安定性を有し
、はとんど着色しておらず、そして腐蝕性でない、バチ
ルス−ステアロテルモフィルスのα−アミラーゼを含む
液体酵素濃縮物を提供することである。
、はとんど着色しておらず、そして腐蝕性でない、バチ
ルス−ステアロテルモフィルスのα−アミラーゼを含む
液体酵素濃縮物を提供することである。
バチルス−ステアロテルモフィルスα−アミラ−ゼに関
する上記引例は、純粋なα−アミラーゼ酵素剤の多段階
製造方法を開示している。しかしならが、この手順は小
規模の製造にしか適しておらず商品の製造には費用がか
かり過ぎるであろう。
する上記引例は、純粋なα−アミラーゼ酵素剤の多段階
製造方法を開示している。しかしならが、この手順は小
規模の製造にしか適しておらず商品の製造には費用がか
かり過ぎるであろう。
本発明者は、大規模な商業的製造に容易に適合する、安
定な液体酵素濃縮物を与える費用のかからない方法を見
出した。
定な液体酵素濃縮物を与える費用のかからない方法を見
出した。
本発明によれば、
ａ）バチルス−ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｓＬｅａｒｏｔｈｅｒｍｏ ’ ） ａ−アミ
ラーゼ酵素の水溶液と粒状デンプンとを混合してα−ア
ミラーゼ酵素を吸収し； ｂ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを水
溶液から分離し； Ｃ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを洗
浄し； ｄ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンの、
カルシウムイオンを含む緩衝溶液中でのスラリーを形成
し； ｅ）工程ｄ）のスラリーをデンプンのコ化温度より高い
温度に加熱してα−アミラーゼ酵素およびデンプン水解
物の溶液を形成し； ｆ）工程ｅ）において形成された溶液を不溶性の固形分
から分離し；そして ｇ）工程ｆ）において得られる溶液を濃縮する工程から
なることを特徴とする、バチルス−ステアロテルモフィ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏ ｈ
ｉｌｕｓ）からのα−アミラーゼ酵素を含む安定な液体
酵素濃縮物の製造方法が提供される。
ｕｓｓＬｅａｒｏｔｈｅｒｍｏ ’ ） ａ−アミ
ラーゼ酵素の水溶液と粒状デンプンとを混合してα−ア
ミラーゼ酵素を吸収し； ｂ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを水
溶液から分離し； Ｃ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを洗
浄し； ｄ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンの、
カルシウムイオンを含む緩衝溶液中でのスラリーを形成
し； ｅ）工程ｄ）のスラリーをデンプンのコ化温度より高い
温度に加熱してα−アミラーゼ酵素およびデンプン水解
物の溶液を形成し； ｆ）工程ｅ）において形成された溶液を不溶性の固形分
から分離し；そして ｇ）工程ｆ）において得られる溶液を濃縮する工程から
なることを特徴とする、バチルス−ステアロテルモフィ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏ ｈ
ｉｌｕｓ）からのα−アミラーゼ酵素を含む安定な液体
酵素濃縮物の製造方法が提供される。
同様に、本発明によれば、４５０ｎ−での吸光度が約４
未満でありかつＣｌ−−濃度が約２００ｍＭ未満である
、前述の方法により製造されたバチルス−ステアロテル
モフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｗ
ｏ ｈｉｌｕｓ）からのα−アミラーゼ酵素を含む安定
な液体酵素濃縮物が提供される。
未満でありかつＣｌ−−濃度が約２００ｍＭ未満である
、前述の方法により製造されたバチルス−ステアロテル
モフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｗ
ｏ ｈｉｌｕｓ）からのα−アミラーゼ酵素を含む安定
な液体酵素濃縮物が提供される。
微生物のバチルス−ステアロテルモフィルスにより製造
される熱安定性のα−アミラーゼ酵素剤が本発明の実施
において使用され得る。この製剤は、酵素、塩化ナトリ
ウムおよび種々の別の防腐剤または安定剤を含む濃縮水
溶液として入手し得る。
される熱安定性のα−アミラーゼ酵素剤が本発明の実施
において使用され得る。この製剤は、酵素、塩化ナトリ
ウムおよび種々の別の防腐剤または安定剤を含む濃縮水
溶液として入手し得る。
本発明の実施において、市販の酵素溶液は水で希釈され
次いで酵素は水溶液から粒状デンプンに吸収される。い
かなる粒状デンプンもこの目的に使用され得る。特に適
したデンプンは、コーン湿式摩砕工業の製品として比較
的純粋な形で容易に入手し得る粒状コーンスターチであ
る。
次いで酵素は水溶液から粒状デンプンに吸収される。い
かなる粒状デンプンもこの目的に使用され得る。特に適
したデンプンは、コーン湿式摩砕工業の製品として比較
的純粋な形で容易に入手し得る粒状コーンスターチであ
る。
本発明者は、デンプンがずっと多量の酵素を冷溶液から
吸収することを見出した。このため、吸収を約１０℃未
満、好ましくは約５℃未満のしかし溶液の凍結を引き起
こす温度未満でない温度で行うことが好ましい。
吸収することを見出した。このため、吸収を約１０℃未
満、好ましくは約５℃未満のしかし溶液の凍結を引き起
こす温度未満でない温度で行うことが好ましい。
本発明の実施において、酵素１００〜２０．０００単位
に対してデンプンＩｇ、好ましくは酵素１ 、０００〜
ｉｏ、ｏｏｏ単位に対してデンプン１ｇとなるように充
分なデンプンが添加される。酵素溶液は、デンプンが、
結果として得られるデンプン、酵素および水の混合物の
約ｌＯ〜約４０重量％、好ましくは約２０〜約３０重量
％からなるように充分な水で希釈する。
に対してデンプンＩｇ、好ましくは酵素１ 、０００〜
ｉｏ、ｏｏｏ単位に対してデンプン１ｇとなるように充
分なデンプンが添加される。酵素溶液は、デンプンが、
結果として得られるデンプン、酵素および水の混合物の
約ｌＯ〜約４０重量％、好ましくは約２０〜約３０重量
％からなるように充分な水で希釈する。
α−アミラーゼ酵素溶液は、カルシウムイオンの添加に
よって安定化される。これは、約１〜約１００ｍＭ 、
好ましくは約１抛阿の濃度になるように充分な酢酸カル
シウムを酵素溶液に添加することにより行われるのが好
都合である。これによって、ｐＨを約５．５〜約７．０
の範囲、即ち酵素を粒状デンプンに吸収するための所望
のｐＨ範囲に維持する緩衝溶液が得られる。
よって安定化される。これは、約１〜約１００ｍＭ 、
好ましくは約１抛阿の濃度になるように充分な酢酸カル
シウムを酵素溶液に添加することにより行われるのが好
都合である。これによって、ｐＨを約５．５〜約７．０
の範囲、即ち酵素を粒状デンプンに吸収するための所望
のｐＨ範囲に維持する緩衝溶液が得られる。
酵素をデンプンに吸収させた後、吸収されたαアミラー
ゼ酵素を含むデンプンが水溶液から分離される。いかな
る普通の分離技術、例えば遠心分離または濾過も分離に
適している。
ゼ酵素を含むデンプンが水溶液から分離される。いかな
る普通の分離技術、例えば遠心分離または濾過も分離に
適している。
吸収された酵素を含むデンプンは次に洗浄されて塩およ
び着色物質を取り除く。洗浄工程は好ましくは低温（約
り℃〜約１０℃）で行われ、かつ洗浄水は約１〜約１０
０ｍＭのカルシウムイオンを含む。
び着色物質を取り除く。洗浄工程は好ましくは低温（約
り℃〜約１０℃）で行われ、かつ洗浄水は約１〜約１０
０ｍＭのカルシウムイオンを含む。
吸収された酵素を含むデンプンを洗浄した後、デンプン
はカルシウムイオンを含む緩衝溶液中でスラリーにされ
る。緩衝溶液のｐＨは約５．５〜約７．０、好ましくは
約６．０〜約６．５の範囲に維持される。カルシウムイ
オンの添加および溶液の緩衝は、酢酸カルシウムの濃度
が約１〜１００ｍＭ 、好ましくは約１０ｍＭになるよ
うに充分な当該塩を添加することにより共に行われるの
が好都合である。
はカルシウムイオンを含む緩衝溶液中でスラリーにされ
る。緩衝溶液のｐＨは約５．５〜約７．０、好ましくは
約６．０〜約６．５の範囲に維持される。カルシウムイ
オンの添加および溶液の緩衝は、酢酸カルシウムの濃度
が約１〜１００ｍＭ 、好ましくは約１０ｍＭになるよ
うに充分な当該塩を添加することにより共に行われるの
が好都合である。
吸収された酵素を含むデンプンの、緩衝溶液中でのスラ
リーを次いでデンプンのフ化温度より高い温度に加熱す
る。種々のデンプンはそれぞれ特有のコ化温度を有して
いるので、この温度は使用したデンプンによって多少変
わるであろう。吸収に使用したデンプンがコーンスター
チである場合、スラリーを約り０℃〜約８０℃の温度で
加熱するのが好都合である。デンプンの大部分が溶解す
るまでこのスラリーは当該温度で保持される。これは通
例約１５〜約３０分間でなし遂げられる。加熱工程に続
いて、溶液はいかなる不溶性の固形分からも分離され次
いで濃縮されて所望の濃度の酵素濃縮物を与える。
リーを次いでデンプンのフ化温度より高い温度に加熱す
る。種々のデンプンはそれぞれ特有のコ化温度を有して
いるので、この温度は使用したデンプンによって多少変
わるであろう。吸収に使用したデンプンがコーンスター
チである場合、スラリーを約り０℃〜約８０℃の温度で
加熱するのが好都合である。デンプンの大部分が溶解す
るまでこのスラリーは当該温度で保持される。これは通
例約１５〜約３０分間でなし遂げられる。加熱工程に続
いて、溶液はいかなる不溶性の固形分からも分離され次
いで濃縮されて所望の濃度の酵素濃縮物を与える。
この分離工程は、慣用の分離手段、例えば遠心分離また
は濾過により行われる。この工程の実施の際に、濾過助
剤、例えば珪藻土を溶液に添加するのが好都合である。
は濾過により行われる。この工程の実施の際に、濾過助
剤、例えば珪藻土を溶液に添加するのが好都合である。
得られる透明にされた溶液の濃縮は、膜分離法、例えば
限外濾過により行われるのが好都合である。
限外濾過により行われるのが好都合である。
本発明の方法により得られる透明にされ脱色さ１７、た
酵素濃縮物は、デンプンがα−アミラーゼ酵素の存在下
に加熱される時に形成されるデンプン水解物を含む。こ
の水解物は酵素の安定性に寄与するので、このことは末
法のもう一つの利点である。
酵素濃縮物は、デンプンがα−アミラーゼ酵素の存在下
に加熱される時に形成されるデンプン水解物を含む。こ
の水解物は酵素の安定性に寄与するので、このことは末
法のもう一つの利点である。
本発明の方法により製造される酵素濃縮物は約４未満、
好ましくは約２未満の、４５０ｎｍでの吸光度を有して
いる。酵素濃縮物のＣ１−濃度は約２００ｍＭ未満、好
ましくは約１００ｍＭ未満である。
好ましくは約２未満の、４５０ｎｍでの吸光度を有して
いる。酵素濃縮物のＣ１−濃度は約２００ｍＭ未満、好
ましくは約１００ｍＭ未満である。
α−アミラーゼ酵素溶液は、本特許で使用される酵素単
位を定義する次の方法によって分析される。
位を定義する次の方法によって分析される。
！ニー乙且ｊ：ヨ鑓しケ支定
酵素活性は、可溶性デンプン溶液のヨウ素結合能力の減
少を測定することにより測定される。分析されるべき溶
液は０．０（１２５Ｍ塩化カルシウム溶液で希釈されて
１１１１あたり約０．２５単位の活性の最終濃度とする
。適当に希釈された酵素溶液１１１１を０．０３Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ６，０）および０．０３Ｍ塩化カルシウム
を含む０．５％可溶性デンプン溶液１０ｊ１１！に添加
する０反応は約１０分間６０℃で行われる０反応溶液１
ｄを０．（１２Ｎ塩酸５０ｍを含む容積１００Ｈ１ノメ
スフラスコに入れ、その後ここに０．０５％ヨウ素溶液
３ｍを添加し、水を加えて全容積をｉｏｏ ｄにする。
少を測定することにより測定される。分析されるべき溶
液は０．０（１２５Ｍ塩化カルシウム溶液で希釈されて
１１１１あたり約０．２５単位の活性の最終濃度とする
。適当に希釈された酵素溶液１１１１を０．０３Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ６，０）および０．０３Ｍ塩化カルシウム
を含む０．５％可溶性デンプン溶液１０ｊ１１！に添加
する０反応は約１０分間６０℃で行われる０反応溶液１
ｄを０．（１２Ｎ塩酸５０ｍを含む容積１００Ｈ１ノメ
スフラスコに入れ、その後ここに０．０５％ヨウ素溶液
３ｍを添加し、水を加えて全容積をｉｏｏ ｄにする。
発色した青色を６２０ｎｍでの吸光度として測定す。
１分間６０℃で１０■／デンプンを分解するのに必要な
酵素の量を１単位として定義する。
酵素の量を１単位として定義する。
酵素活性（単位／ｄ）＝
１単位
〔但し、
Ｄｏ一対照溶液（酵素溶液の代わりに水が添加される）
の吸光度 Ｄｓ＝反応溶液の吸光度 希釈係数＝試料１ｙｄに相当する希釈された酵素溶液の
容積（ｄ）） ■上 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ＋ Ｅｎｇｌｅｓｙｏｏｄ
Ｃ１１ｆｆｓ。
の吸光度 Ｄｓ＝反応溶液の吸光度 希釈係数＝試料１ｙｄに相当する希釈された酵素溶液の
容積（ｄ）） ■上 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ＋ Ｅｎｇｌｅｓｙｏｏｄ
Ｃ１１ｆｆｓ。
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｚａに所在のＥｎ
ｚｙｍｅ Ｂｉｏ−３ｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ、から入手
できるバチルス−ステアロテルモフィルスＧ−ＺＹＭＥ
”からの市販のα−アミラーゼ酵素を次の方法で処理す
る。液体酵素５００ｇ（Ｉｇあたり３４００単位）を１
０ｍＭ酢酸カルシウム溶液１０００ｇに溶解した溶液を
Ｏ″Ｃに冷却する。次いで粒状コーンスターチ（コード
３００５＊ Ｎｅｓ Ｊｅｒｓｅｙ。
ｚｙｍｅ Ｂｉｏ−３ｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ、から入手
できるバチルス−ステアロテルモフィルスＧ−ＺＹＭＥ
”からの市販のα−アミラーゼ酵素を次の方法で処理す
る。液体酵素５００ｇ（Ｉｇあたり３４００単位）を１
０ｍＭ酢酸カルシウム溶液１０００ｇに溶解した溶液を
Ｏ″Ｃに冷却する。次いで粒状コーンスターチ（コード
３００５＊ Ｎｅｓ Ｊｅｒｓｅｙ。
Ｂｎｇｌｅｗｏｏｄ Ｃ１１ｆｆｓ、 Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｚａに所在のＣＰＣｌ−ｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ、）５００ｇを攪拌しながら
添加する。この混合物を４℃で３０分間保持しその後酵
素を含むデンプンを濾過により集める。固体を１０ｍＭ
酢酸カルシウム溶液１０００ｇで洗浄する。
ｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｚａに所在のＣＰＣｌ−ｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ、）５００ｇを攪拌しながら
添加する。この混合物を４℃で３０分間保持しその後酵
素を含むデンプンを濾過により集める。固体を１０ｍＭ
酢酸カルシウム溶液１０００ｇで洗浄する。
重さが８８０ｇの湿った濾過ケークを１０ａ＋Ｍ酢酸カ
ルシウム６２０ ｄを用いてスラリーにする。この混合
物を次に７５°Ｆに加熱しそしてこの温度で１５分間保
持する。デンプンをコ化しそしてデンプンの大部分をこ
の処理によって溶解する。この溶液を次に珪藻土と混合
しそして濾過する。濾液１０００ｄをＹＭＩＯ膜を装着
した容積２２のアミコン（Ａ＠１ｃｏｎ）限外濾過セル
（ｃｅｌｌ）を用いて最終容積２４０ ｌｉまで濃縮す
る。薄い黄色の濃縮物は、α−アミラーゼ酵素１．４４
Ｘ １０ｂ単位を含んでいた。これは酵素の８５％回
収を示す。デンプン水解物を含むこの濃縮物は良好な安
定性を示しかつプロピレングリコールおよび洗剤配合物
に使用される同様の物質と相溶性である。
ルシウム６２０ ｄを用いてスラリーにする。この混合
物を次に７５°Ｆに加熱しそしてこの温度で１５分間保
持する。デンプンをコ化しそしてデンプンの大部分をこ
の処理によって溶解する。この溶液を次に珪藻土と混合
しそして濾過する。濾液１０００ｄをＹＭＩＯ膜を装着
した容積２２のアミコン（Ａ＠１ｃｏｎ）限外濾過セル
（ｃｅｌｌ）を用いて最終容積２４０ ｌｉまで濃縮す
る。薄い黄色の濃縮物は、α−アミラーゼ酵素１．４４
Ｘ １０ｂ単位を含んでいた。これは酵素の８５％回
収を示す。デンプン水解物を含むこの濃縮物は良好な安
定性を示しかつプロピレングリコールおよび洗剤配合物
に使用される同様の物質と相溶性である。
■）
例１の一般手順をパイロットプラントにおいて例１で用
いた原料の１００倍の量を用いて繰り返す。
いた原料の１００倍の量を用いて繰り返す。
この大規模法でも例１で得られたものと同様の、良好な
色および安定性を有する濃縮物が得られた。
色および安定性を有する濃縮物が得られた。
■ユ
例１の手順を繰り返して、酵素溶液を本発明の方法によ
り処理する前後の原料の色およびＣ１−濃度を測定する
。色は４５０ｎｍでの溶液の吸光度として測定する。Ｃ
１−濃度はイオン選択性電極およびＣｏｌｅ−Ｐａｌｍ
ｅｒ ｐＨイオンメーターを用いてＮａＣ１として測定
する。処理前の酵素溶液は４２００単位／ｉを含みそし
て処理後の酵素溶液は５４００単位／−のα−アミラー
ゼ活性を含んでいた。第１表に示した結果は本発明の方
法により達成される色およびＣ１−濃度の減少を示して
いる。
り処理する前後の原料の色およびＣ１−濃度を測定する
。色は４５０ｎｍでの溶液の吸光度として測定する。Ｃ
１−濃度はイオン選択性電極およびＣｏｌｅ−Ｐａｌｍ
ｅｒ ｐＨイオンメーターを用いてＮａＣ１として測定
する。処理前の酵素溶液は４２００単位／ｉを含みそし
て処理後の酵素溶液は５４００単位／−のα−アミラー
ゼ活性を含んでいた。第１表に示した結果は本発明の方
法により達成される色およびＣ１−濃度の減少を示して
いる。
処理前 １２．３ ２１５０処理
後 １．９ ２５．８従って、
本発明によれば、上述した目的、意図および利点を完全
に満足する、安定な、脱色された、液体酵素濃縮物およ
びその製造方法が提供されることが明らかである。発明
はその実施態様と共に開示されているが、多くの選択、
修正および変更は上述の記載に照らせば当業者に明らか
であることは明白である。したがって、上記のような全
ての選択、修正および変更を特許請求の範囲の精神およ
び範囲の中に含むことを意図する。
後 １．９ ２５．８従って、
本発明によれば、上述した目的、意図および利点を完全
に満足する、安定な、脱色された、液体酵素濃縮物およ
びその製造方法が提供されることが明らかである。発明
はその実施態様と共に開示されているが、多くの選択、
修正および変更は上述の記載に照らせば当業者に明らか
であることは明白である。したがって、上記のような全
ての選択、修正および変更を特許請求の範囲の精神およ
び範囲の中に含むことを意図する。
Claims (12)
- （１）ａ）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ
ｓ￥）α−アミラーゼ酵素の水溶液と粒状デンプンとを
混合してα−アミラーゼ酵素を吸収し； ｂ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを水
溶液から分離し； ｃ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを洗
浄し； ｄ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンの、
カルシウムイオンを含む緩衝溶液中でのスラリーを形成
し； ｅ）工程ｄ）のスラリーをデンプンのコ化温度より高い
温度に加熱してα−アミラーゼ酵素およびデンプン水解
物の溶液を形成し； ｆ）工程ｅ）において形成された溶液を不溶性の固形分
から分離し；そして ｇ）工程ｆ）において得られる溶液を濃縮する工程から
なることを特徴とする、バチルス＝ステアロテルモフィ
ルス（￥Ｂａｃｉｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ￥）からのα−アミラーゼ酵素を含む安
定な液体酵素濃縮物の製造方法。 - （２）粒状デンプンがコーンスターチである、請求項１
記載の方法。 - （３）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ￥
）の水溶液が粒状デンプンで処理されてα−アミラーゼ
酵素を吸収する前に、該溶液に酢酸カルシウムが添加さ
れる請求項１記載の方法。 - （４）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ￥
）を含む溶液全てが、約５．５〜約７．０のｐＨ範囲内
に維持される、請求項１記載の方法。 - （５）工程ｅ）が、少なくとも約１５分間約７０℃〜約
８０℃の温度で行われる、請求項２記載の方法。 - （６）ａ）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ
ｓ￥）α−アミラーゼ酵素の水溶液と粒状デンプンとを
混合してα−アミラーゼ酵素を吸収し； ｂ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを水
溶液から分離し； ｃ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンを洗
浄し； ｄ）吸収されたα−アミラーゼ酵素を含むデンプンの、
カルシウムイオンを含む緩衝溶液中でのスラリーを形成
し； ｅ）工程ｄ）のスラリーをデンプンのコ化温度より高い
温度に加熱してα−アミラーゼ酵素およびデンプン水解
物の溶液を形成し； ｆ）工程ｅ）において形成された溶液を不溶性の固形分
から分離し；そして ｇ）工程ｆ）において得られる溶液を濃縮する工程から
製造される、バチルス＝ステアロテルモフイルス（￥Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌ
ｕｓ￥）からのα−アミラーゼ酵素を含む安定な液体酵
素濃縮物。 - （７）粒状デンプンがコーンスターチである、請求項６
記載の安定な液体酵素濃縮物。 - （８）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ￥
）の水溶液が粒状デンプンで処理されてα−アミラーゼ
酵素を吸収する前に、該溶液に酢酸カルシウムが添加さ
れる請求項６記載の安定な液体酵素濃縮物。 - （９）バチルス＝ステアロテルモフィルス（￥Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ￥￥ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ￥
）を含む溶液の全てが、約５．５〜約７．０のｐＨ範囲
内に維持される、請求項６記載の安定な液体酵素濃縮物
。 - （１０）工程ｅ）が、少なくとも約１５分間約７０℃〜
約８０℃の温度で行われる、請求項６記載の安定な液体
酵素濃縮物。 - （１１）４５０ｎｍでの吸光度が約４未満でありかつＣ
ｌ＾−濃度が約２００ｍＭ未満である、請求項６記載の
安定な液体酵素濃縮物。 - （１２）４５０ｎｍでの吸光度が約２未満でありかつＣ
ｌ＾−濃度が約１００ｍＭ未満である、請求項１１記載
の安定な液体酵素濃縮物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US282,644 | 1988-12-12 | ||
| US07/282,644 US5010008A (en) | 1988-12-12 | 1988-12-12 | Stable liquid enzyme concentrate and process for its production |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02215380A true JPH02215380A (ja) | 1990-08-28 |
Family
ID=23082463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1317876A Pending JPH02215380A (ja) | 1988-12-12 | 1989-12-08 | 安定な液体酵素濃縮物およびその製造方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5010008A (ja) |
| JP (1) | JPH02215380A (ja) |
| AR (1) | AR242633A1 (ja) |
| BR (1) | BR8906418A (ja) |
| CA (1) | CA2005140A1 (ja) |
| DE (1) | DE3941054A1 (ja) |
| DK (1) | DK622889A (ja) |
| FI (1) | FI895924A7 (ja) |
| FR (1) | FR2640281B1 (ja) |
| GB (1) | GB2225784B (ja) |
| MX (1) | MX164331B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991018976A1 (en) * | 1990-06-08 | 1991-12-12 | Novo Nordisk A/S | HEMICELLULASES PRODUCED BY $i(BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS) |
| GB2340834B (en) * | 1997-06-04 | 2001-06-06 | Dsm Nv | High-activity phytase compositions |
| TW409035B (en) * | 1997-06-04 | 2000-10-21 | Gist Brocades Bv | Starch-based enzyme granulates |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3980772A (en) * | 1969-12-02 | 1976-09-14 | Baxter Laboratories, Inc. | Methods of dissolving blood clots and the like with streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix |
| US3661786A (en) * | 1970-01-27 | 1972-05-09 | Procter & Gamble | Detergent compositions containing stabilized alpha-amylase |
| US3944470A (en) * | 1973-06-29 | 1976-03-16 | The Procter & Gamble Company | Stabilization and enhancement of enzymatic activity |
| NZ183818A (en) * | 1976-04-19 | 1980-05-08 | Cpc International Inc | Heat -and acid-stable alpha-amylase and process for converting starch to a starch hydrolysate |
| US4284722A (en) * | 1978-08-16 | 1981-08-18 | Cpc International Inc. | Heat and acid-stable alpha-amylase enzymes and processes for producing the same |
| US4305837A (en) * | 1980-10-30 | 1981-12-15 | The Procter & Gamble Company | Stabilized aqueous enzyme composition |
| US4519934A (en) * | 1983-04-19 | 1985-05-28 | Novo Industri A/S | Liquid enzyme concentrates containing alpha-amylase |
| US4578352A (en) * | 1983-07-13 | 1986-03-25 | Cpc International Inc. | Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production |
| US4613570A (en) * | 1985-02-08 | 1986-09-23 | Cpc International Inc. | Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production |
-
1988
- 1988-12-12 US US07/282,644 patent/US5010008A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-11-21 GB GB8926327A patent/GB2225784B/en not_active Expired
- 1989-12-01 AR AR89315593A patent/AR242633A1/es active
- 1989-12-08 JP JP1317876A patent/JPH02215380A/ja active Pending
- 1989-12-08 MX MX18641A patent/MX164331B/es unknown
- 1989-12-11 CA CA002005140A patent/CA2005140A1/en not_active Abandoned
- 1989-12-11 FR FR898916333A patent/FR2640281B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1989-12-11 DK DK622889A patent/DK622889A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-12-12 DE DE3941054A patent/DE3941054A1/de not_active Withdrawn
- 1989-12-12 BR BR898906418A patent/BR8906418A/pt not_active Application Discontinuation
- 1989-12-12 FI FI895924A patent/FI895924A7/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2005140A1 (en) | 1990-06-12 |
| US5010008A (en) | 1991-04-23 |
| GB2225784A (en) | 1990-06-13 |
| FR2640281A1 (fr) | 1990-06-15 |
| AR242633A1 (es) | 1993-04-30 |
| GB2225784B (en) | 1992-06-17 |
| MX164331B (es) | 1992-08-03 |
| FI895924A0 (fi) | 1989-12-12 |
| BR8906418A (pt) | 1990-08-28 |
| DE3941054A1 (de) | 1990-06-13 |
| DK622889A (da) | 1990-06-13 |
| GB8926327D0 (en) | 1990-01-10 |
| FI895924A7 (fi) | 1990-06-13 |
| FR2640281B1 (fr) | 1994-09-02 |
| DK622889D0 (da) | 1989-12-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5281526A (en) | Method of purification of amylase by precipitation with a metal halide and 4-hydroxybenzic acid or a derivative thereof | |
| JPH05502791A (ja) | 酵素の結晶化方法 | |
| Moseley et al. | Purification and characterization of the amylase of B. subtilis NRRL B3411 | |
| Saha et al. | Behavior of a novel thermostable β-amylase on raw starch | |
| Nishimura et al. | Ribonuclease of Bacillus subtilis | |
| US5264568A (en) | Process for preparing pyrodextrin hydrolyzate by enzymatic hydrolysis | |
| JPH02215380A (ja) | 安定な液体酵素濃縮物およびその製造方法 | |
| JPH10512758A (ja) | 界面活性剤に基づく抽出法 | |
| JPS63102678A (ja) | アミラーゼ酵素並びにその生成方法 | |
| US3272717A (en) | Process for preparing thermally stable amylase composition | |
| EP0001470A1 (en) | A process for enzymatic treatment of waste water of wheat starch plants | |
| JPS6111593B2 (ja) | ||
| US5089607A (en) | Procedure for the separation of starch from a residual flow of the starch preparation and starch thus obtained | |
| US2594356A (en) | Isolation of alpha-amylase from malt extract | |
| US4235970A (en) | Protease inactivated α-amylase preparations | |
| EP0263484B1 (en) | Method for isolation and purification of amylases, and adsorbents used for the same as well as devices for the isolation and purification | |
| KR830002846B1 (ko) | 덱스트로오스를 함유하는 시럽 제조방법 | |
| IL43573A (en) | Enzymes fixed on a solid cellulose support | |
| Miranda | Recovery of clostridium thermosulfurogenes beta-amylase from fermentation broth by two-phase partition | |
| CA1085756A (en) | Starch hydrolysates from high protein starch sources | |
| Nath et al. | Increase in stability of xylanase from an alkalophilic thermophilic Bacillus (NCIM 59) | |
| JPH10136979A (ja) | 新規酸性α−アミラーゼ及びその製造法 | |
| JPH034777A (ja) | 穀物の液化方法 | |
| JPH0372083B2 (ja) | ||
| JPS646740B2 (ja) |