JPH02215390A - 酵素的ローズマリー酸の製造方法 - Google Patents
酵素的ローズマリー酸の製造方法Info
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- JPH02215390A JPH02215390A JP1319079A JP31907989A JPH02215390A JP H02215390 A JPH02215390 A JP H02215390A JP 1319079 A JP1319079 A JP 1319079A JP 31907989 A JP31907989 A JP 31907989A JP H02215390 A JPH02215390 A JP H02215390A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、ローズマリー酸シンサーゼの存在下に３−（
３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸とカフェオイル−
コエンザイムＡ （Ｃａｆｆｅｏｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｓ
Ａ）との酵素反応による式； のローズマリー酸を製造する方法に関するものである。
３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸とカフェオイル−
コエンザイムＡ （Ｃａｆｆｅｏｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｓ
Ａ）との酵素反応による式； のローズマリー酸を製造する方法に関するものである。
（従来技術）
核置換桂皮酸類と核置換フェニル乳酸とのエスーカフェ
酸と３− （３，４−ジヒドロキシフェニル）′のＲ（
＋）一形態のエステルである−は、天然物としてまず植
物自体、即ちローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ 。
酸と３− （３，４−ジヒドロキシフェニル）′のＲ（
＋）一形態のエステルである−は、天然物としてまず植
物自体、即ちローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ 。
ｆｆ１ｃｉｎａｌｉｓ）から得られる。これは、数年来
、潜在的な消炎剤として集中的に研究されている。従来
、Ｒ５は、植物から或いは植物細胞培養のいずれかから
得られていた。
、潜在的な消炎剤として集中的に研究されている。従来
、Ｒ５は、植物から或いは植物細胞培養のいずれかから
得られていた。
近年、コレウス プルメイ（Ｃｏｌｅｕｓ ｂｌｕａ＋
ｅｉ）からの細胞培養が多量のローズマリー酸を製造す
ることができるということが確立された。細胞塊の抽出
の際、Ｍ、 ＰｅｔｅｒｓｅｎおよびＡ、 Ｈ８Ａｌｆ
ｅｒｍａｍ（Ｚ、 Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、 」起（
１９８８） ５０１−５０４）によって２つの酵素が単
離され、且つその有効性について同定された。即ち、カ
フェオイル−コエンザイムＡおよび３−（３，４−ジヒ
ドロキシフェニル）乳酸からのローズマリー合成用の有
効な酵素が発見され、他方の酵素として、ＮＡＤｆｂの
存在下にケト酸をヒドロキシル酸にまで還元するジヒド
ロキシフェニルビバレート−リダクターゼが発見された
。
ｅｉ）からの細胞培養が多量のローズマリー酸を製造す
ることができるということが確立された。細胞塊の抽出
の際、Ｍ、 ＰｅｔｅｒｓｅｎおよびＡ、 Ｈ８Ａｌｆ
ｅｒｍａｍ（Ｚ、 Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、 」起（
１９８８） ５０１−５０４）によって２つの酵素が単
離され、且つその有効性について同定された。即ち、カ
フェオイル−コエンザイムＡおよび３−（３，４−ジヒ
ドロキシフェニル）乳酸からのローズマリー合成用の有
効な酵素が発見され、他方の酵素として、ＮＡＤｆｂの
存在下にケト酸をヒドロキシル酸にまで還元するジヒド
ロキシフェニルビバレート−リダクターゼが発見された
。
（発明が解決しようとする課題）
本発明の目的は、ドーパから容易に入手可能なケトドー
パを出発物質として使用し、特にカフェロイルーコエン
ザイムＡがカフェ酸の付加の下に再生されるローズマリ
ー酸合成のための実際に使用可能な方法を提供すること
である。
パを出発物質として使用し、特にカフェロイルーコエン
ザイムＡがカフェ酸の付加の下に再生されるローズマリ
ー酸合成のための実際に使用可能な方法を提供すること
である。
冒頭に記載した方法の上記の目的のために開発された方
法は、３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸を脱
水酵素およびＮＡＤ）Ｉｔの存在下にケトドーパからの
酵素反応により予め或いは同時に形成されることを実質
的に特徴とする。
法は、３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸を脱
水酵素およびＮＡＤ）Ｉｔの存在下にケトドーパからの
酵素反応により予め或いは同時に形成されることを実質
的に特徴とする。
その際、脱水酵素として、例えばＤ−ラクテート−脱水
酵素、特にＤ−ヒドロキシイソカプロエート脱水酵素が
使用される。
酵素、特にＤ−ヒドロキシイソカプロエート脱水酵素が
使用される。
カフェ酸、ＡＴＰおよびコエンザイムＡ−リガーゼの添
加によるカフェオイル−コエンザイムＡの回収は、ロー
ズマリー酸合成のために特にその場で同時に行われる。
加によるカフェオイル−コエンザイムＡの回収は、ロー
ズマリー酸合成のために特にその場で同時に行われる。
添付された第１図並びに実施例に基づいて以下の記載か
らその他の特徴は明らかである。
らその他の特徴は明らかである。
第１図において、ヒドロキシドーパおよびコエンザイム
Ａとローズマリー酸シンサーゼとの反応が生成物溶液の
形成下に生じ、該生成物溶液から一方で未反応ヒドロキ
シドーパおよび他方でコエンザイムＡが分離されること
が理解されよう。
Ａとローズマリー酸シンサーゼとの反応が生成物溶液の
形成下に生じ、該生成物溶液から一方で未反応ヒドロキ
シドーパおよび他方でコエンザイムＡが分離されること
が理解されよう。
分離された未反応のヒドロキシドーパは、直接反応にも
どすことができるが、一方コエンザイムＡは、カフェ酸
、ＡＴＰおよびコエンザイムＡ−リガーゼと反応して合
成に必要なカフェオイル−コエンザイムＡに戻される。
どすことができるが、一方コエンザイムＡは、カフェ酸
、ＡＴＰおよびコエンザイムＡ−リガーゼと反応して合
成に必要なカフェオイル−コエンザイムＡに戻される。
反応（Ｃ）は、反応混合物において合成反応（Ａ）と同
時に進行する。
時に進行する。
脱水酵素によるケトドーパからのヒドロキシドーパの回
収（反応Ｂ）は、反応（Ａ）に続けることができ、或い
は以下の実施例１に示されるように反応混合物Ａ中でそ
のまま生じる。
収（反応Ｂ）は、反応（Ａ）に続けることができ、或い
は以下の実施例１に示されるように反応混合物Ａ中でそ
のまま生じる。
実施例１：必須法、バッチ添加
ｐＨ７，５を有するトリス−マレイン酸緩衝液（２５ｍ
モル）中の「ケトドーパＪ （１０＋ｗモル／ｆｆ１）
とＮＡＤＨ２（２０−モル／２）の溶液にカフェオイル
−コエンザイムＡ（１０−モル／１２）、Ｄ−ヒドロキ
シイソカフ。
モル）中の「ケトドーパＪ （１０＋ｗモル／ｆｆ１）
とＮＡＤＨ２（２０−モル／２）の溶液にカフェオイル
−コエンザイムＡ（１０−モル／１２）、Ｄ−ヒドロキ
シイソカフ。
ロエートー脱水酵素（５０／ｄ）およびローズマリーシ
ンサーゼ（１０／ａｄ）を加え、８時間攪拌下に放置し
た。限外濾過によりタンパク賞を分離し、濾液を濃縮し
、そして酢酸エステルで抽出した。
ンサーゼ（１０／ａｄ）を加え、８時間攪拌下に放置し
た。限外濾過によりタンパク賞を分離し、濾液を濃縮し
、そして酢酸エステルで抽出した。
生成物溶液を濃縮し、ローズマリー酸、未反応（＋）ヒ
ドロキシドーパおよびケトドーパを分取）ＩＰＬＣで互
いに分離した。未反応ヒドロキシドーパおよびケトドー
パも酵素として利用できる。実施例２ 必須法、連続添
加 ｐＨ７，５を有するトリス−マレイン酸緩衝液（２５−
ル）中の「ケトドーパ」（３０−モル／ｌ）、蟻酸アン
モニウム（１０抛モル／ｌ）溶液を攪拌可能な限外濾過
膜、例えば、アミコン膜（Ａ端１ｃｏｎｚｅｌｌｅ）に
加えた。この限外濾過膜中に、予めＤ−ヒドロキシイソ
カプロエート−脱水酵素（２００／ｄ） 、ホルメート
−脱水酵素（２００／ａｔ）およびポリマー固定化ＮＡ
ＤＨｚ （例えば、ＰＥＧ−ＮＡＤＴｏ ） （１ｍモ
ル／ｉりを導入した。２〜３時間保持した後、ＵＶ分光
測光法および／または旋光測定法で分析し、変位を測定
した。
ドロキシドーパおよびケトドーパを分取）ＩＰＬＣで互
いに分離した。未反応ヒドロキシドーパおよびケトドー
パも酵素として利用できる。実施例２ 必須法、連続添
加 ｐＨ７，５を有するトリス−マレイン酸緩衝液（２５−
ル）中の「ケトドーパ」（３０−モル／ｌ）、蟻酸アン
モニウム（１０抛モル／ｌ）溶液を攪拌可能な限外濾過
膜、例えば、アミコン膜（Ａ端１ｃｏｎｚｅｌｌｅ）に
加えた。この限外濾過膜中に、予めＤ−ヒドロキシイソ
カプロエート−脱水酵素（２００／ｄ） 、ホルメート
−脱水酵素（２００／ａｔ）およびポリマー固定化ＮＡ
ＤＨｚ （例えば、ＰＥＧ−ＮＡＤＴｏ ） （１ｍモ
ル／ｉりを導入した。２〜３時間保持した後、ＵＶ分光
測光法および／または旋光測定法で分析し、変位を測定
した。
流出溶液にカフニオイル酸およびＡＴＰ （各３０１１
モル／２）を混合し、そしてｐＨ７，５を有するトリス
−マレエート緩衝液中のローズマリー酸シンサーゼ（５
０／ｄ） 、カフェオイル−コエンザイムＡ（３０１１
１モル／ｌ）、ＡＴＰおよびコエンザイムーリガーゼ（
５０／ｄ）を含有する第２の限外濾過膜に導入した。１
時間保持した後、流出液をローズマリー酸および（÷）
ヒドロキシケトドーパについて分析し、分取ＨＰＬＣで
分離した。未反応（＋）−ヒドロキシケトドーパを再利
用した。
モル／２）を混合し、そしてｐＨ７，５を有するトリス
−マレエート緩衝液中のローズマリー酸シンサーゼ（５
０／ｄ） 、カフェオイル−コエンザイムＡ（３０１１
１モル／ｌ）、ＡＴＰおよびコエンザイムーリガーゼ（
５０／ｄ）を含有する第２の限外濾過膜に導入した。１
時間保持した後、流出液をローズマリー酸および（÷）
ヒドロキシケトドーパについて分析し、分取ＨＰＬＣで
分離した。未反応（＋）−ヒドロキシケトドーパを再利
用した。
実施例３ 必須法、半連続添加
Ａ、実施例２において、第１段階からの生成物溶液を回
収し、バッチ式で限外濾過膜中カフェオイル−コエンザ
イムＡ１カフェ酸、ＡＴＰ 、ローズマリー酸−シンサ
ーゼおよびコエンザイムーリガーゼと（上記の量で）反
応させた。
収し、バッチ式で限外濾過膜中カフェオイル−コエンザ
イムＡ１カフェ酸、ＡＴＰ 、ローズマリー酸−シンサ
ーゼおよびコエンザイムーリガーゼと（上記の量で）反
応させた。
Ｂ、実施例２において、バッチ添加物中でヒドロキシド
ーパを製造しく実施例１参照：但しカフェオイル−コエ
ンザイムＡおよびローズマリー酸−シンサーゼなし）、
第２の実施例の第２段落のように生成物溶液を反応させ
た。
ーパを製造しく実施例１参照：但しカフェオイル−コエ
ンザイムＡおよびローズマリー酸−シンサーゼなし）、
第２の実施例の第２段落のように生成物溶液を反応させ
た。
第１図は、本発明の反応を示す模式図である。
Claims (5)
- （１）ローズマリー酸シンサーゼ（Ｒｏｓｍａｒｉｎｓ
■ｕｒｅ−Ｓｙｎｔｈａｓｅ）の存在下にカフェオイル
−コエンザイムＡ（Ｃａｆｆｅｏｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｍ
Ａ）を用いて３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳
酸から酵素反応することによって式： ▲数式、化学式、表等があります▼ のローズマリー酸を製造する方法において、脱水酵素お
よびＮＡＤＨ＿２の存在下にケトドーパ（Ｋｅｔｏｄｏ
ｐａ）からの酵素反応によって予めまたは同時に３−（
３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸を形成させること
を特徴とする方法。 - （２）Ｄ−ヒドロキシイソカプロエート−脱水酵素の存
在下に３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸を形
成させる請求項１に記載の方法。 - （３）カフェ酸（Ｋａｆｅｅｓ■ｕｒｅ）、ＡＴＰおよ
びコエンザイムＡ−リガーゼ（ＣｏＡ−Ｌｉｇａｓｅ）
の存在下にカフェオイル−コエンザイムＡをそのまま回
収する請求項１または２に記載の方法。 - （４）カフェ酸（Ｋａｆｅｅｓ■ｕｒｅ）、ＡＴＰおよ
びコエンザイムＡ−リガーゼ（ＣｏＡ−Ｌｉｇａｓｅ）
の存在下にカフェオイル−コエンザイムＡをそのまま回
収し、その際例えば、アセチルホスフェートおよびアセ
チルキナーゼを用いて同時に回収する請求項１、２また
は３に記載の方法。 - （５）２段階においてローズマリー酸合成を行う方法で
あって、 第１の限外濾過膜中でケトドーパから３−（３，４−ジ
ヒドロキシフェニル）乳酸を形成し、第１膜の生成物流
を第２の限外濾過膜中でカフェオイル−コエンザイムＡ
と第２の膜の生成物流から単離されるローズマリー酸を
得るためにカフェオイル−コエンザイムＡの同時回収し
ながら反応させる請求項１〜４のいずれかに記載の方法
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3841914.9 | 1988-12-13 | ||
| DE3841914A DE3841914C1 (ja) | 1988-12-13 | 1988-12-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02215390A true JPH02215390A (ja) | 1990-08-28 |
Family
ID=6369049
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1319079A Pending JPH02215390A (ja) | 1988-12-13 | 1989-12-11 | 酵素的ローズマリー酸の製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5011775A (ja) |
| JP (1) | JPH02215390A (ja) |
| DE (1) | DE3841914C1 (ja) |
| IN (1) | IN170179B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2022540791A (ja) * | 2019-06-25 | 2022-09-20 | ホンタオシム リサーチ インスティテュート オブ アナリカル サイエンス アンド テクノロジー リミテッド カンパニー | ロスマリン酸を産生するための株および方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030138537A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-24 | Bailey David T. | Methods of preparing improved water-soluble extracts containing antioxidants and uses thereof |
-
1988
- 1988-12-13 DE DE3841914A patent/DE3841914C1/de not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-11-23 IN IN972/CAL/89A patent/IN170179B/en unknown
- 1989-12-11 JP JP1319079A patent/JPH02215390A/ja active Pending
- 1989-12-13 US US07/448,130 patent/US5011775A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2022540791A (ja) * | 2019-06-25 | 2022-09-20 | ホンタオシム リサーチ インスティテュート オブ アナリカル サイエンス アンド テクノロジー リミテッド カンパニー | ロスマリン酸を産生するための株および方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5011775A (en) | 1991-04-30 |
| IN170179B (ja) | 1992-02-22 |
| DE3841914C1 (ja) | 1990-06-07 |
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