JPH02221297A - 抗生物質ｌ１７３９２（デグルコテイコプラニン）及びその塩の製造のための改良した化学的方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は任意的に抗生物質Ｌ１７３９２又はデグルコテ
イコグラニンと呼称する抗生物質及び塩基と酸によるそ
の塩の取得に関する。

本発明を要約すれば、本発明はティコプラニン化合物又
はティコプラニン類似化合物を有機非プロトン溶剤の存
在において制御した強酸加水分解に付することによる抗
生物質Ｌ１７３９２　（デグルコテイコブラニン）及び
塩基と酸によるその塩を製造するｔ；めの化学的方法及
びその精製方法を提供する。

この抗生物質は主としてダラム陽性菌（たとえば、ぶど
う状球菌（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）及び連鎖
状球菌（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）菌株）に対す
る抗菌活性を有している。この抗生物質はティコプラニ
ン化合物又はティコプラニン類似化合物の化学的変換に
よって取得される。

ティコプラニンは、菌株アクチノプラネス　ティコマイ
セチフス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｔｅｉｃｈｏｍ
ｙｃｅｔｉｃｕｓ）変種ＡＴＣＣ３１１２１を、同化で
きる炭素、窒素及び無機塩源を含有する培養基中で培養
することによって取得される、以前はティコマイシンと
呼ばれた抗生物質の国際的非専有名称（ＩＮＮ）である
（米国特許第４．２３９，７５１号参照）。

上記の特許中に記した手順によれば、因子ＡＩ＋Ａ、及
びＡ、を含有する抗生物質複合体（ティコマイシンと同
一）を、適当な水に不溶性の有機溶剤を用いる抽出及び
一般的な手順による有機溶剤からの沈殿によって、醗酵
流体培養基から回収する。

単離した抗生物質複合体の主体となる因子を、セファデ
ックス■上のカラムクロマトグラフィーによって、他の
因子から分離する。因子Ａ１と因子Ａ３は僅かな量で存
在するのみである。英国特許第２１２１４０１号は、一
方、抗生物質因子Ａ２は五つの密接に関連する共産生主
成分の混合物であることを開示している。

醗酵及び精製（たとえば、カラムクロマトグラフィーに
よる）操作によって、現在、比較的少量の因子Ａ、を伴
なう本質的に因子Ａ２から成るティコプラニン生成物を
得ている。

最近の研究はティコプラニン因子Ａｘ及びソノ個々の成
分は、下式Ｉ によって表わすことができることを示しているが、式中
で ＲはＮ［（Ｃｌ〜ＣＩり脂肪族アシル］−り一グルクサ
ミン残基であり、 Ｒ１はＮ−アセチル−Ｄ−グルクサミン残基であり、且
つ Ｒ１はＤ−マンノース残基である。

上記のすべての糖部分はＯ−グリコシド結合によって中
心分子に結合している。同じ構造式を有する物質はヨー
ロッパ特許公告第００９０５７８量中に開示してあり、
且つ抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂと命名されている。こ
の物質は、適当な培地中の菌株ストレプトマイセス　バ
ージニアエ（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｖｉｒｇｉ
ｎａｅ）　Ｎ　ＲＲＬ　１２５２５又はストレプトマイ
セス　バージニアエ　ＮＲＲＬ１５１５６の醗酵、抗生
物質Ａ４１０３０、少なくとも７因子の抗生物質複合体
、抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂを包含する、その成分へ
の単離、精製及び分離を含む微生物学的方法によって取
得される。

ヨーロッパ特許第１１９５７４及び１１９５７５号にお
いては、一つ又は二つの糖部分が開裂させであるティコ
プラニン因子Ａ２の部分的加水分解物を記している。こ
れらの生成物は、それぞれ、抗生物質Ｌ１７０５４及び
Ｌ１７０４６と呼ばれる。これらの生成物はティコプラ
ニン因子Ａを、ある特定の酸加水分解条件に付すること
によって取得することができる。Ｌ１７０５４に対して
は、加水分解は、０．５Ｎ塩酸を用いて７０〜９０℃で
１５〜９０分間にわたって行なうことが好ましい。Ｌ１
７０４６に対しては、加水分解は、ＩＮ〜３Ｎの濃度の
塩酸を用いて７０〜９０°Ｃの温度で３０〜６０分間に
わたって行なうことが好ましい。

抗生物質Ｌ１７０５４は上記式Ｉによって表わすことが
できるが、その中でＲは水素によって置換され　Ｒ１は
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基であり且つＲ２は
Ｄ−マンノース残基である。

抗生物質Ｌ１７０４６は、Ｒ及びＲ２が共に水素によっ
て置換され、且つＲ１がＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン残基である場合の前記式Ｉによって表わすことができ
る。ヨーロッパ特許公開第３０１２４７号はデマンノシ
ルテイコブラニン誘導体、すなわち、Ｒ及びＲ１が前記
のとおりであり且つＲ：が水素である場合の前記式Ｉの
化合物を記している。この明細書及び特許請求の範囲中
で、“ティコプラニン化合物”という用語によって、米
国特許第４．２３９．７５１号に従がうアクチノプラネ
ス　テイコマイセテス（Ａ　ｃｔ　ｉｎｏｐｌａｎｅｓ
ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ３１
１２１の醗酵及びその後の精製、その何らかのさらに精
製した調製品、ティコプラニン因子Ａ２、ティコプラニ
ン因子Ａ３、ティコプラニン因子Ａ２の各主成分から選
択した物質を指示する。′ティコプラニン化合物″の用
語は、１９８８年９月２５〜３０日の第１７回クロマト
グラフィーについての国際シンポジウム、ウィーンにお
いてＭ、ザノールによって与えられた報告中に記したテ
ィコプラニンＲ３−１及びＲ５−２並びにヨーロッパ特
許出願公開第３０６６４５号中に記載のティコプラニン
Ｒ５−３（化合物Ａ）及びＲ５−４（化合物Ｂ）をも包
含する。これらの化合物は、Ｒ１及びＲ２が前記のとお
りであり且つ基Ｒの脂肪族アシル部分が、それぞれ１０
−メチル−ウンデカノイル、ドデカノイル、６−メチル
−オクタノイル及びノナノイルである場合の上記式Ｉに
よって表わすことができる。′ティコプラニン類似化合
物”の用語によって、ここでは、Ｒが水素又はＮ−［（
Ｃ＊−Ｃ＋ｚ）脂肪族アシル］−Ｄ−グルコサミン残基
であり、Ｒ１が水素又はＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン残基であり、Ｒ２が水素又はＤ−マンノース残基であ
り、但しＲ，Ｒ’及びＲ２が同時に水素であることがで
きない場合の前記と同一の基礎構造式Ｉを有する化合物
及び任意の割合における上記の物質及び／又は化合物の
いずれかの二つ以上の混合物を指示する。

ヨーロッパ特許出願公開第１４６０５３号は、脂肪族カ
ルボン酸、アルファーハロゲン化脂肪族カルボン酸、脂
肪族及び脂環式アルカノール並びにフェニル置換したア
ルカノールから選択した有機プロトン溶剤を用いること
を特徴とする、ティコプラニン化合物又はティコプラニ
ン類似化合物を制御した強酸加水分解に付すことによる
抗生物質Ｌ１７３９２　（デグルコテイコプラニン、す
なわち、Ｒ，Ｒ’及びＲ１が同時に水素原子である場合
の式Ｉの化合物）を製造するための化学的方法を記して
いる。

ヨーロッパ特許出願公開第１４６０５３号の開示によれ
ば、たとえば強鉱酸又は強有機酸のような溶剤と相客す
る強酸を使用することが必要であり且つ反応を約２０°
Ｃ乃至約１００°Ｃの温度において行なう。

“ジャーナル　オプ　アンチビオティックス”第３９巻
、第１Ｏ号、１４３０〜１４４２頁、１９８６年１０月
中で、デグルコテイコプラニンの製造とＮＭＲ特性を記
している。該文献中では、ティコプラニン及びティコプ
ラニン類似化合物の有機極性溶剤中の加水分解によるデ
グルコテイコプラニンの製造のための異なる方法を報告
している。

本発明の目的によれば、抗生物質Ｌ１７３９２（デグル
コテイコプラニン）及び塩基と酸によるその塩は、Ｎ、
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ヘキサメチルホ
スホルアミド（ＨＭＰＡ）、１．３−ジメチル−３，４
，５，６−ケトラヒドロー２（ＬＨ）ピリミドン（ＤＭ
ＰＶ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はそれ
らの混合物から選択した極性非プロトン有機溶剤中でテ
ィコプラニン化合物又はティコプラニン類似化合物を制
御した強酸加水分解条件に付することによって取得する
ことができるということが見出された。

本発明の方法に対して適する“制御した強酸性加水分解
条件”とは、基質の化学構造及びキラル中心の望ましく
ない他の修飾又は変化を同時に生ずることなしにティコ
プラニン化合物及び／又はティコプラニン類似化合物の
全糖部分の除去を生じさせるために十分な酸強度を提供
することができる反応条件である。

たとえばグリコペプチド抗生物質のような複雑な分子構
造からの全糖部分の除去は、穏和な酸加水分解条件は通
常は糖部分の部分的な除去を与えるにすぎず、一方、強
酸性加水分解条件は物質の部分的分解及び／又はキラル
中心の立体配置の変化を促進するから、常にかなりの困
難が存在する。

たとえば、公知のグリコペプチド抗生物質のアボパルシ
ンについては、本当のアグリコンを単離することは決し
てできない。

以下の科学的文献は上記の考察を支持する二〇。

Ａ、ニレスタッドら、Ｊ　、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
、　３６　＊１６８３　（９８３）；Ｃ，Ｍ、ハリスら
、Ｊ、Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１０５．６９１５　　（１９８３）
；Ｗ。

Ｊ、マツクガーレンら、Ｊ　、ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ、　３立、１６７１　　（１９８３）。Ｍ、Ｒ，
バートンら、（Ｊ　、　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
、　　３土、１７０　（１９７５））は水性の２Ｎ　　
Ｈ，Ｓｏ、及び水性の６Ｎ　ＨＣｌの両者による１００
℃におけるティコマイシン因子Ａ、の加水分解処理を記
している。

本発明の方法においては、デグルコテイコプラニンのモ
ル収率が著るしく高い（約６５％）ことが見出された。

従来の方法のデグルコテイコプラニンの収率は使用する
溶剤／反応物の特定の組合わせに依存する。たとえば、
溶剤としてトリフルオロ酢酸を且つ酸媒体としてＨＣＩ
を用いることＴｏよって、本発明のものに匹敵する収率
を得ることが可能であり、一方、Ｈ，ＳＯ，を用いるこ
とによって従来の方法の収率は１０％よりも低くなる。

明らかに、きわめて高い収率（粗生成物の約９０％）を
与える従来において開示された別の方法は、不均一な媒
体中で行ない（液状極性溶剤中に出発材料を懸濁させ、
鉱酸を吹込む）、且つ実際に、きわめて低い純度を有す
る生成物を与えるという欠点を有している。たとえば、
ヨーロッパ特許出願公開第１４６．０５３号の実施例４
においては、ベンジルアルコール中のｌＯｇのティコプ
ラニン複合体の懸濁物から出発し、鉱酸として６０℃の
温度のＭＣＩを用い、９．２ｇの粗グルコティコプラニ
ンを取得している。

しかしながら、クロマトグラフィーによる精製後に１．
５ｇの実質的に純粋な生成物を回収しうるにすぎない。

その上、この方法のスケールアップの見地からは、たと
えば粒度分析のよりよい均−化及び反応過程の間の低い
分析的困難性のような、生成物の品質のより良い再現性
を有するためには、均一な媒体中で反応を行なうことが
重要である。

本発明の方法によって、良好な純度を有するデグルコテ
イコプラニンの良好な収率を達成すること及び反応を均
一媒体中で行なうことが可能となる。

本発明の目的に従って、先に概説した“制御した強酸加
水分解条件”は、溶剤、酸の種類、その濃度及び反応の
温度を適切に選択することによって提供することができ
る。実際に、本発明によって、ティコプラニン複合体、
その何らかの精製した調製品、ティコプラニン因子Ａ２
、ティコプラニン因子Ａ３Ｎティコプラニン因子Ａ、の
各主成分、Ｒが水素又はＮ−［（ｃｓ−ｃｔ＊）脂肪族
アシル］−Ｄ−グルコサミン残基であり　Ｒ１が水素又
はＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基であり、Ｒｚが
水素又はＤ−マンノース残基であり、但しＲ，Ｒ’及び
Ｒ３が同時に水素であることはできないことを条件とす
る前記式Ｉの化合物、及び任意の割合における上記の物
質のいずれかの二つ以上の混合物から選択した物質を、
Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、ヘキサメ
チルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、１．３−ジメチル−
３，４゜５．６−ケトラヒドロー２（Ｈ）ピリミドン（
ＤＭＰＶ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）並び
にそれらの混合から選択した有機非プロトン溶剤及び強
無機酸と強有機酸から選択した、溶剤と相客する強酸を
使用することにより制御した強酸加水分解条件に付する
ことを特徴とする、ティコプラニン化合物又はティコプ
ラニン類似化合物をデグルコテイコプラニン及び塩基と
酸によるその塩に変換させるための方法を提供すること
ができる。

有機非プロトン溶剤は反応温度で液体であり且つティコ
プラニン出発物質を完全に溶解することができるもので
なければならない。

特に好適な有機非プロトン溶剤はジメチルスルホキシド
である。

本発明の方法の制御した強酸加水分解条件を提供するた
めに必要な強酸は強鉱酸又は強有機酸である。

強無機酸の中で、塩酸、臭化水素酸、濃硫酸及び濃りん
酸が好適である。強有機酸の中で、アルファーハロゲン
化低級脂肪酸、アルカンスルホン酸、ポリフルオロアル
カンスルホン酸、シクロアルカンスルホン酸及びアリー
ルスルホン酸が好適であり、特に以下のものがもつとも
好適であるニトリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、メタ
ンスルホン酸、エタンスルホン酸、トリフルオロメタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シクロヘキサンスル
ホン酸、しょうのうスルホン酸、アルファー及びベータ
ーナフタレンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸。

濃酸を出発ティコプラニン又はティコプラニン類似化合
物に対して大過剰（重量で）に使用することが好ましい
。硫酸とりん酸は通常は工業的に入手することができる
最高濃度において使用する。特に、９５〜９８％（ｗ　
／　ｗ　）ｉ［と８５〜９８％（Ｗ／Ｗ）オルトりん酸
が申し分ない結果を与える。しかしながら、本発明の方
法は、たとえば３０〜８０％というような、上記よりも
低い濃度の強無機酸を用いて行なうこともできる。有機
酸の中では、９８％（ｗ／ｗ）メタンスルホン酸と９８
％（Ｗ／Ｗ）トリフルオロ酢酸を本発明の好適実施形態
に従って使用することが好ましい。

反応混合物中の水の含量は加水分解反応の理論的必要量
に適合するために十分でなければならない。一方におい
て、たとえば反応生成物の分解及び／又は物質のキラル
中心の異性化のような、望ましくない副反応を防止する
ためにできる限り低い水の量を反応混合物中で保つこと
が望ましい。

反応の理論的必要量に適合し、同時に反応速度及び反応
操作を工業的に価値ある水準に保つためには、通常は加
水分解プロセスを、出発ティコプラニン又はティコプラ
ニン類似化合物の重量で約１％乃至約２０％にわたる量
の水の存在で行なう。

十分な量の水は、酸と共に供給することができ、又は出
発物質中に最初から含まれていることもある。本質的に
無水の出発物質、溶剤及び酸を使用する場合には、望ま
しい量の水を直接に溶剤に対して又は反応混合物に対し
て添加すればよい。

鉱酸を用いる場合には、反応混合物中の酸の全濃度は使
用する特定の酸に依存するが、通常は１％（ｗ　／　ｖ
　）乃至ｌＯ％（ｗ／ｖ）の範囲である。

たとえば、Ｈ，ＳＯ，を用いる場合には、濃度は２〜７
％（ｗ／ｖ）、−層好ましくは３〜５％とすることがで
き、一方、ＨＣＩを用いるときは、それよりも低い濃度
、たとえば、１〜３％（Ｗ／Ｖ）の濃度を用いることが
好ましい。

制御した強酸加水分解条件の一般的実例として、ティコ
プラニン又はティコプラニン類似化合物を室温において
モル的に過剰な選択した溶剤中で撹拌し、次いで適当な
酸を添加する。次いで反応混合物を、撹拌と共に望まし
い温度において、デグルコテイコプラニンの満足しうる
収率を達成するために十分な時間にわたって反応させ且
つ保持する。反応時間は通常は分析的な試験によって反
応をモニターすることによって決定される。本発明の範
囲を制限することなしに概念的な指示を与えるためには
、反応時間は一般に、出発物質、溶剤（類）、強酸、そ
の濃度及び反応の温度に依存して、０．２５〜２０時間
の範囲とすることができる。反応の温度は、下記の因子
を考慮に入れながら、各反応系に対して適当に選択する
：出発物質、有機非プロトン溶剤の種類、酸の種類と濃
度、及びそれらの相互の割合。比較的低い反応温度は、
満足できる転化率を達成するｔ；めに比較的長い反応時
間を必要とする。一般に、制御した強酸加水分解方法は
約５０℃乃至約１２０℃の温度で行なわれる。

好適な温度範囲はａｏ−ｉｏｏ℃であり、７５〜８５°
Ｃがもつとも好適である。

反応の終りに、反応混合物を撹拌下に脱イオン水中に注
下し、ｐＨを、たとえば１０％ＮａＯＨ水溶液のような
塩基水溶液によって約７．０に調節する。次いで反応混
合物を濾過する。濾過によって取得した固体を少量の水
で洗ったのち、減圧下で５０°Ｃにおいて２時間乾燥す
る。

本発明の好適実施形態においては、約８５℃の温度の９
８％（ｗ　／　ｗ　）　Ｈｚ　Ｓ　Ｏ４の存在において
ＤＭＳＯを溶剤として使用する。反応混合物の全容量中
の硫酸の濃度は一般に３〜５％の範囲である。一般に、
加水分解後に固体粗生成物は約３０〜３５％の純度を有
している。

本発明の他の局面において、上記のようにして取得した
粗デグルコティコプラニンをＤＭＳＯ／水混合物からの
簡単な酸−塩基沈殿によって容易に精製することができ
、それによって、それ以上の精製処理を回避することが
できる。

実際に、従来の加水分解方法の使用においては、カラム
クロマトグラフィーによって、たとえば、吸着剤として
シラン化シリカゲルを且つ溶離液として親水性混合物を
使用する逆相カラムクロマトグラフィーの使用によって
、デグルコテイコプラニンを精製することが必要であっ
た。

いうまでもなく、この分野で公知の、どのような精製処
理をも本発明の方法によって取得した粗デグルコテイコ
プラニンの精製のために用いることができるけれども、
クロマトグラフィ一方法から成る精製処理は、プロセス
のスケールアップに対して適当ではない溶離時間と溶剤
の量を必要とするという欠点を有している。

それ故、本発明のもう一つの目的は、デグルコテイコプ
ラニンを約４よりも低いか又は約ＩＯよりも高いｐＨに
おいてＤ　Ｍ　Ｓ　Ｏ／　Ｈ２０を含有する適当な溶剤
混合物中に溶解し、溶液のｐＨを６〜８、好ましくは７
に調節することによって生成物を再沈殿させ、それによ
って生じる純固体を濾過することから成る該デグルコテ
イコプラニンの精製のための方法である。

適度な少量の溶剤中で酸又は塩基塩としてデグルコテイ
コプラニンを可溶化して、それを沈殿させるときの最終
生成物の損失を低下させるためには、溶液のｐ）（を４
よりも低いか又はＩＯよりも高い値にしなければならな
い。

たとえば、ＨＣＩ、ＨＢｒ又はＨ，ＳＯ，のような強鉱
酸の添加を用いて酸塩形態を取得することが好ましい。

デグルコテイコプラニンを塩基塩形態で溶解することを
所望する場合にはＮａＯＨのようなアルカリ水酸化物を
使用することが好ましい。

ＤＭＳＯ４／Ｈ！Ｏ溶剤混合物はデグルコテイコプラニ
ン出発物質に対して良好な溶解力を示す。

ＤＭＳＯ／水混合物中のＤＭＳＯ濃度は通常は３０〜７
０％（Ｖ／Ｖ）　、好ましくは４０〜６０％の範囲であ
る。一般に、この後者の混合物の重量で１０〜２０部の
割合を用いて、上記の酸性又は塩基性ｐＨ値において、
粗デグルコテイコブラニンの重量で１部を溶解すること
が可能である。

本発明のこの特定の局面の一好適実施形態においては、
約４のｐＨ値とするために十分な１０％塩酸水溶液の存
在において４０〜６０％のＤＭＳＯ／水を含有するＤＭ
ＳＯ／水混合物を用いて粗デグルフテイコプラニン（３
０〜３５％のＨＰＬＣ力価）を溶解する。

６〜８、好ましくは７の中性の値へのｐＨの調節による
溶液からの沈殿によって取得したデグルコテイコプラニ
ンは、遊離塩基の形態にある生成物であり、それはその
後の精製処理を何ら必要としない。

粗デグルコテイコプラニンが３０％未満の純度を有して
いる場合には、溶液／沈殿処理を繰返すことが必要なこ
ともある。残留ＤＭＳＯを除去するために、この処理に
対して最初にアセトン、次いで脱イオン水を用いる固体
の最終二重スラッジ化を導入することもできる。かくし
て取得した生成物は以下に記す用途において使用するた
めに申し分のない物理化学的及び生理学的特性を示す実
質的に純粋なデグルコテイコプラニンである。

実質的に純粋なデグルコテイコプラニンは、９５％を越
えるＨＰＬＣ力価（２５４ｎｍの紫外波長における極大
面積百分率）、重量で１０〜１５％の水と溶剤の含量及
び重量で０．５％未満の無機残留物を有している。

本発明の方法によって取得したときのデグルコテイコプ
ラニンの物理化学的特性は前記のヨーロッパ特許出願公
開第１４６０５３号中に記されている。

本発明の方法に従って取得したデグルコテイコプラニン
は、場合によっては、一般に公知の手段によって塩基及
び酸による相当する塩に変換することができる。

塩基及び酸によるデグルコテイコプラニン及び薬学的に
許容できるその塩は人間及び獣医学において、該作用成
分に感受性である病原菌によって生じる感染症の予防と
治療のために用いる抗菌性製剤の作用成分として使用す
ることができる。このような処置においては、これらの
化合物を、そのままで又は何らかの割合の混合物の形態
で使用することができる。デグルコテイコブラニンの生
体内及び試験管内活性に関するデータ、並びにその処方
方式は、ヨーロッパ特許出願公開第１４６０５３号中に
開示されている。

しかしながら、デグルコテイコプラニンは、たとえばヨ
ーロッパ特許出願公開第２１８０９９号及び国際特許出
願公開筒ＷＯ８８１０６６００号中に記載のもののよう
な、価値のある半合成ティコプラニン誘導体の製造のた
めの出発材料として用いることができる。

以下の実施例は本発明を実施することができる方法を例
証するが、本発明の全体的な範囲を制限するものとみな
すべきではない。

４．５ｇのティコプラニン複合体ナトリウム塩（すなわ
ち、ティコマイシン因子Ａ＋−Ａｘ及びＡ、を含有し且
つ米国特許第４．２３９，７５１号に従かう菌株ＡＴＣ
Ｃ３１！　２１の醗酵によって取得した抗生物質複合体
のナトリウム塩）を室温（２０°Ｏ）ｌニオｕ’テ約４
２ｍＱ　ノＤＭＳ　Ｏ及び１ｍ４の９５％Ｈ２Ｓ０４（
全反応混合物中の４％Ｗ／Ｖに相当する）中に懸濁させ
た。

ティコプラニンが溶解するまで混合物を撹拌したのち、
８５°Ｃで２０時間加熱した。加水分解は１時間ごとに
５０倍に希釈した３０マイクログラムの溶液の試料をＨ
ＰＬＣに注入することによってモニターした。

室温まで冷却させたのち、反応混合物を撹拌下に７０ｗ
Ｑの脱イオン水中に注下し、１０％ＮａＯＨによってｐ
Ｈを７．０に調節した。取得した沈殿物を濾過によって
集め、濾紙上で少量の水で洗い、次いで減圧下に５０°
Ｃで乾燥して６１％のモル収率で２．７４ｇ（５２％力
価）の粗デグルコテイコズラニンを取得した。

実施例２〜７ 次の第１表中に記した反応条件を用いる以外は実質的に
実施例１の手順に従ってデグルコテイコプラニンを調製
した： 実施例８−Ａ）抗生物質ＬＩ７０４６の製造（プ機械的
撹拌機と温度計を備えｆ−、３Ｑの四ツロ丸底フラスコ
中に５０ｇのティコプラニン（ＨＰＬＣ力価８２％）を
室温（２２〜２４℃）において撹拌しながら２．５０の
アセトンと３０Ｃ１＋（２の３０％ＨＣＩ水溶液中に溶
解した。

撹拌を４８時間続けたのち、溶液を氷水浴中で３°Ｃに
冷却し、溶液の温度を１０℃以下に保ちながら、２０％
ＮａＯＨ水溶液で徐々に中和した。

次いで減圧下にアセトンを完全に留去しく浴温４０℃）
、残留する２ａの水懸濁液をｐＨ７において濾過した。

粗製固体プソイドアグリコン（３３，２ｇ）を再びｐＨ
９，５（ＮａＯＨ水溶液）の蒸留水１．２Ｑ中に溶解し
、生じた溶液を濾過によって清澄化し、沈殿したプソイ
ドアグリコンをｌＯ％ＨＣＩ水溶液で再び６．５のｐＨ
とした。濾過後に、白色の湿った固体を２００＋ＩＩＱ
の新しいアセトンによってスラッジ化し、再び濾過した
のち、室温で減圧下に２０時間乾燥した。

５４％の収率で２３．５ｇの首題の化合物を取得した（
ＨＰＬＣ力値７０％）。公知の手順（ヨーロッパ特許出
願公開第１４６．０５３号中に記載のような手順）で粗
生成物の精製を行なって、純度９０％の首題の化合物１
２．８ｇを得た。

Ｂ）−デグルコテイコプラニンの製造 ティコプラニン複合体の代わりに上記めようにして調製
したプソイドアグリコンを使用し且つ溶剤として４０％
のＤＭＳＯ，鉱酸として９５％のＨｚＳＯａ（１ｍＱ−
４，１ｗ／ｖ）を用い、反応温度を１００℃に保つ（２
０時間）以外は、実質的に実施例１の手順に従うことに
よって、３−１ｇ（６１％のモル収率）の粗デグルコテ
イコプラニンを調製した。

実施例９−粗デグルコティコプラニンの精製実施例１に
おいて調製し。たｌ　０５２ｇの粗製淡褐色固体デグル
コテイコプラニンを撹拌下にＤＭＳｏ　Ｃ７，５Ｑ　）
、脱イオン水（７，５１及び３００ｍＱの２０％の塩酸
水溶液（３００ｍ１２）の混金物中に溶解した。溶解が
完了したときに、さらに４．５Ｑの水を撹拌下に加え、
３５０ｍＭの２０％ＮａＯＨ水溶液を用いて溶液のｐｉ
（を７とした。

次いで懸濁液を５℃で２時間冷却し、固体のデグルコテ
イコプラニンを濾過したのち、空気中で室温において乾
燥した。６５％の収率で５２５ｇの生成物（ＨＰＬＣ力
価６８％、ＤＭＳＯ含量１７％）を取得した。１９１２
の母液は１４ｇのデグルコテイコプラニン（２，５％）
を含有した。

第二の部分のＩ　０００ｇの出発物質を上記と同一の手
順に従って加水分解し且つ精製した。６５゜３％の収率
で５２２．５　ｇのデグルコテイコマイシン（力価６７
．５％）を得た。精製したデグルコテイコマイシンの両
試料（５２５＋５２２．５ｇ）を混合したのち、激しい
撹拌下に１５ａのアセトン中に懸濁させた。撹拌を６０
分間続け、次いで固体を濾過によって回収したのち乾燥
した。

９６０ｇの生成物を取得した。（ＨＰＬＣ分析：ＴＤ７
１％、Ｈ！０１４．６％、溶剤ＤＭＳＯ２゜５％、アセ
トン９％）。

残存する溶剤を除去するために、９２０　ｇの固体デグ
ルコテイコプラニンを再び脱イオン水（８゜５１中に懸
濁し、さらに４時間撹拌した。濾過及び３０℃における
減圧下の乾燥は８０５ｇの純度８０％のデグルコティコ
プラニンを与えた。その結果を次の第２表中に要約する
。

実験の部 ＨＰＬＣ分析はＵＶ　（２５４ｎｍ）検出器とＣ。

エルバＲＰ１８．５μｍ、１５０Ｘ４ｍｍプレバックカ
ラムを備えたヒユーレットバラカート１０８２Ｂ型装置
によって行なった。移動相は次のとおりであった： Ａ　）　　０．００２５　Ｍ　　Ｎ　ａ　Ｈｚ　Ｐ　Ｏ
４水溶液／ＣＨ３ＣＮ９５　：　５　（ｖ／ｖ） Ｂ）　　０．００２５Ｍ　　ＮａＨｚＰＯ＊水溶液／Ｃ
Ｈ３ＣＮ３０　：　７０　（Ｖ／Ｖ）タロマドグラムは
１．５ｍｆｆ／分の流速で４５分間にわたるＡ中の８％
のＢからＡ中の７５％のＢに至る線形グラジェント溶出
により取得した。

反応はアセトニトリル／水混合物２：８によって適切に
希釈した３０マイクロリツトルの溶液を所定の時間に注
入するＨＰＬＣによってモニターした。

本発明の主な特徴および態様を記すと次のとおりである
。

１、ティコプラニン複合体、さらに精製したその調製品
、ティコプラニン因子Ａ２、ティコプラニン因子Ａｌ、
ティコプラニン因子Ａ２の各成分、式Ｉ 式中で Ｒは水素、又は［（Ｃ９〜Ｃｌ２）脂肪族アシル］−Ｄ
−グルコサミン残基であり、Ｒ１は水素又はＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミン残基であり： Ｒ１は水素又はＤ−マンノース残基であり；但しＲ，Ｒ
’及びＲ２が同時に水素であることはできない、 のティコプラニン類似化合物から選択した物質及び任意
の割合の上記の物質のいずれかの二つ以上の混合物を、
Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、ヘキサメ
チルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、１．３−ジメチル−
３，４，５，６−ケトラヒドロー２（ｌＦ＋）ピリミド
ン（ＤＭＰＵ）　、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
又′はそれらの混合物から選択した有機非プロトン溶剤
；及び強鉱酸及び強を機酸から選択した、溶剤と相客す
る強酸の使用による均一媒体中の制御した強酸加水分解
に付することを特徴とする、ティコプラニン化合物又は
ティコプラニン類似化合物をデグルコテイコプラニン及
び塩基と酸によるその塩に変換するための方法。

２、有機非プロトン溶剤はジメチルスルホキシドである
、上記第１項に記載の方法。

３、鉱酸は塩酸、臭化水素酸、硫酸及びりん酸から選択
する、上記第１又は２項記載の方法。

４、鉱酸は硫酸である、上記第１〜３項記載の方法。

５、有機酸はメタンスルホン酸、トリフルオロメタンス
ルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ
−トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルホン酸、し
ょうのうスルホン酸、アルファー及びベーターナフタレ
ンスルホン酸から選択する、上記第１項記載の方法。

６、さらに、反応温度を６０〜１００°Ｃとすることを
特徴とする上記１〜５項に記載の方法。

７、さらに、反応温度を７５〜８５°Ｃとすることを特
徴とする、上記第１〜５項記載の方法。

８、さらに、非プロトン溶剤に添加する水の量（重量に
よる）は溶液の１〜２０％であることを特徴とする、上
記第１〜７項記載の方法。

９、さらに、全反応混合物中の酸の濃度は１％（重量／
容量）〜ｌＯ％（重量／容量）の範囲であることを特徴
とする、上記第１〜８項記載の方法。

１０、硫酸の濃度は２〜７％（を量／容量）の範囲であ
る、上記第４項に記載の方法。

１１、適当なｐＨのＤＭＳＯ／Ｈ，Ｏ含有溶剤ａ合物中
にデグルコテイコプラニンを溶解し、溶液のｐＨを実質
的に中性の値に調節することによって生成物を再沈殿さ
せ且つその結果上じる純粋な固体を濾過することから成
るデグルコテイコプラニンの精製のための方法。

１２、ＤＭＳＯ／水混合物中のＤＭＳＯの濃度は３０〜
７０％（容量／容量）の範囲である、上記第１１項記載
の方法。

１３、ＤＭＳＯ／水混合物中のＤＭＳＯの濃度は４０〜
６０％（容量／容量）の範囲である、上記第１１項記載
の方法。

１４、さらに、デグルコテイコプラニンを、強鉱酸の添
加によって約４のｐＨとしたＤＭＳＯ／水を含有する溶
剤混合物中に溶解することを特徴とする、上記１１−１
３項記載の方法。

１５、強鉱酸は塩酸、臭化水素酸及び硫酸から選択する
、上記第１４項記載の方法。

１６、さらに、デグルコテイコブラニンをアルカリ水酸
化物の添加によって約１０の９ＨとしたＤＭＳＯ／水を
含有する溶剤混合物中に溶解することを特徴とする、上
記第１１〜１３項記載の方法。

１７、アルカリ水酸化物はＮａＯＨ水溶液である、上記
第１６項記載の方法。

１８、固体を６〜８のｐＨにおいて沈殿させる、上記第
１４〜１７項記載の方法。

１９、固体をｐＨ７において沈殿させる、上記第１４〜
１７項記載の方法。

２０、さらに、デグルコテイコプラニンの沈殿後に、先
ずアセトンにより次いで脱イオン水による固体の二重ス
ラッジ化を行なうことを特徴とする、上記第１１−１９
項記載の方法。

２１、上記第１−１０項記載の方法に従って調製したデ
グルフテイコプラニンを精製するための上記第１１〜２
０項記載の方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、テイコプラニン複合体、さらに精製したその調製品
   、テイコプラニン因子Ａ＿２、テイコプラニン因子Ａ＿
   ３、テイコプラニン因子Ａ＿２の各成分、式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I 式中で Ｒは水素、又は［（Ｃ＿３〜Ｃ＿１＿２）脂肪族アシル
   ］−Ｄ−グルコサミン残基であり、 Ｒ＾１は水素又はＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基
   であり； Ｒ＾２は水素又はＤ−マンノース残基であり；但しＲ、
   Ｒ＾１及びＲ＾２が同時に水素であることはできない、 のテイコプラニン類似化合物から選択した物質及び任意
   の割合の上記の物質のいずれかの二つ以上の混合物を、
   Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ヘキサメチ
   ルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、１，３−ジメチル−３
   ，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）ピリミドン（
   ＤＭＰＵ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はそ
   れらの混合物から選択した有機非プロトン溶剤；及び強
   鉱酸及び強有機酸から選択した、溶剤と相容する強酸の
   使用による均一媒体中の制御した強酸加水分解に付する
   ことを特徴とする、テイコプラニン化合物又はテイコプ
   ラニン類似化合物をデグルコテイコプラニン及び塩基と
   酸によるその塩に変換するための方法。 ２、適当なｐＨのＤＭＳＯ／Ｈ＿２Ｏ含有溶剤混合物中
   にデグルコテイコプラニンを溶解し、溶液のｐＨを実質
   的に中性の値に調節することによって生成物を再沈殿さ
   せ且つその結果生じる純粋な固体を濾過することから成
   るデグルコテイコプラニンの精製のための方法。