JPH02222835A - 高比重リポ蛋白質分画測定用カラム充填剤の使用方法 - Google Patents
高比重リポ蛋白質分画測定用カラム充填剤の使用方法Info
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- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/282—Porous sorbents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
- B01J20/04—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising compounds of alkali metals, alkaline earth metals or magnesium
- B01J20/048—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising compounds of alkali metals, alkaline earth metals or magnesium containing phosphorus, e.g. phosphates, apatites, hydroxyapatites
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高比重リポ蛋白質及び／又はＩ−（Ｄ Ｌコレ
ステロール分画測定カラム充填剤に関する。
ステロール分画測定カラム充填剤に関する。
近年日本は食生活の洋風化などにより、多量、多品種の
食品が並んだ量販店舗、゛深夜営業店舗が多数出現した
。またグルメブームから、よりおいしい高カロリー食品
を摂取する機会が増えた。そのため糖尿病や高脂血症あ
るいは脂肪肝などの栄養過多が原因と考えられる疾患の
発症が増えた。いわゆる飽食の時代に入ったといえる。
食品が並んだ量販店舗、゛深夜営業店舗が多数出現した
。またグルメブームから、よりおいしい高カロリー食品
を摂取する機会が増えた。そのため糖尿病や高脂血症あ
るいは脂肪肝などの栄養過多が原因と考えられる疾患の
発症が増えた。いわゆる飽食の時代に入ったといえる。
一方凹界的な視点から見ると多くの発展途上国、戦乱に
さらされた国などでは衛生環境の乏しさあるいは飢えな
どにより、不可逆的な栄養失シ１シ伏態となった多ぐの
人々がいる。こうした栄養の過剰あるいは不足など、栄
養障害を原因とする疾患の治療は、単に栄養の制限ある
いは補給など、消極的な方法だけでは必ずしも良好な結
果が得られない。そのため実際の臨床の場では高脂血症
治療薬などの薬物療法、血漿交換−血漿分離法、中心静
脈栄養法など多くの治療方法が検討されている。
さらされた国などでは衛生環境の乏しさあるいは飢えな
どにより、不可逆的な栄養失シ１シ伏態となった多ぐの
人々がいる。こうした栄養の過剰あるいは不足など、栄
養障害を原因とする疾患の治療は、単に栄養の制限ある
いは補給など、消極的な方法だけでは必ずしも良好な結
果が得られない。そのため実際の臨床の場では高脂血症
治療薬などの薬物療法、血漿交換−血漿分離法、中心静
脈栄養法など多くの治療方法が検討されている。
また治療法の確立と共に診断領域でも酵素法の登場、生
化学自動分析装置のｊｊｎ発など臨床検査の進歩により
、血中脂質測定の検査数は増加し、またアポ蛋白質測定
など精密な診断が可能第に増大している。高比重リポ蛋
白質及び／又はＩ−Ｉ Ｄ Ｌコレステロール分画の”
測定は、一連の脂質検査の項目の中でほぼルーチン化さ
れている。それはＨＤＬ−Ｃａ度と動脈硬化性疾患、特
に虚血性疾患の発生率との間に負の相関関係があること
が広く知られており、重要な臨床検査項目と考えられて
いるからである。
化学自動分析装置のｊｊｎ発など臨床検査の進歩により
、血中脂質測定の検査数は増加し、またアポ蛋白質測定
など精密な診断が可能第に増大している。高比重リポ蛋
白質及び／又はＩ−Ｉ Ｄ Ｌコレステロール分画の”
測定は、一連の脂質検査の項目の中でほぼルーチン化さ
れている。それはＨＤＬ−Ｃａ度と動脈硬化性疾患、特
に虚血性疾患の発生率との間に負の相関関係があること
が広く知られており、重要な臨床検査項目と考えられて
いるからである。
化かし最近の医療費の高騰などの問題か生じている先進
諸国、あるいは医療予算の乏しい国々では、臨床検査費
用がかさむことが問題となった。そのためにＨＤＬ−Ｃ
測定は遠沈などの煩雑な操作が必要で、かつ割高である
ことから、臨宋上必要ではあっても、次第に敬遠される
傾向にある。そのためより簡便、安価、かつ確実なＨＤ
Ｌ−Ｃの測定法の開発は急務と考えられている。
諸国、あるいは医療予算の乏しい国々では、臨床検査費
用がかさむことが問題となった。そのためにＨＤＬ−Ｃ
測定は遠沈などの煩雑な操作が必要で、かつ割高である
ことから、臨宋上必要ではあっても、次第に敬遠される
傾向にある。そのためより簡便、安価、かつ確実なＨＤ
Ｌ−Ｃの測定法の開発は急務と考えられている。
本発明者らは鋭意研究の結果、燐酸カルシウム化合物、
特に合成ハイドロキシアパタイトが燐酸イオン雰囲気で
使用することにより高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤ
Ｌ−Ｃを吸着せず低比重リポ蛋白質及び／又はＬＤＬ−
Ｃ，超低比重リポ蛋白質及び／又はＶＬＤＬ−Ｃ，中性
脂肪あるいは燐脂質を選択的に吸着することを発見し、
この吸着剤を用いた高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤ
Ｌ−Ｃ分画測定カラム充填剤を確立するに至った。
特に合成ハイドロキシアパタイトが燐酸イオン雰囲気で
使用することにより高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤ
Ｌ−Ｃを吸着せず低比重リポ蛋白質及び／又はＬＤＬ−
Ｃ，超低比重リポ蛋白質及び／又はＶＬＤＬ−Ｃ，中性
脂肪あるいは燐脂質を選択的に吸着することを発見し、
この吸着剤を用いた高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤ
Ｌ−Ｃ分画測定カラム充填剤を確立するに至った。
以下に本脂質吸着剤及びカラムデザインの詳細な説明を
する。
する。
本高比重リポ蛋白質分画測定カラ１２充ｔＢ剤を摺成す
る成分は燐酸カルシウム化合物と燐含有化合物からなる
。また脂質吸着選択性改善のため二価イオンキレート剤
、ヘパリンあるいはデキストラン硫酸などのポリアニオ
ン、燐タングステン酸、マンガンイオン、マグネシウム
イオン、ニッケルイオンなどの多価金属イオンも添加す
る。（中井継彦著 、ＨＤＬ−代謝・測定・臨休、中外
医学社、 １０２−１４０．１９８６）。カラムに充填
された吸着剤は微粉の流出防止のために粉体の表面にｐ
ｏｌｙｌｌＥＭ＾コーティング処理（文献末永松彦、他
１石油ビッヂ活性炭によるＤｉｒｅｃｔｉｌｅｍｏｐｅ
ｒｒｕｓｌｏｎ １２臨床例の検討人工臓器、 ＭＯｌ
。
る成分は燐酸カルシウム化合物と燐含有化合物からなる
。また脂質吸着選択性改善のため二価イオンキレート剤
、ヘパリンあるいはデキストラン硫酸などのポリアニオ
ン、燐タングステン酸、マンガンイオン、マグネシウム
イオン、ニッケルイオンなどの多価金属イオンも添加す
る。（中井継彦著 、ＨＤＬ−代謝・測定・臨休、中外
医学社、 １０２−１４０．１９８６）。カラムに充填
された吸着剤は微粉の流出防止のために粉体の表面にｐ
ｏｌｙｌｌＥＭ＾コーティング処理（文献末永松彦、他
１石油ビッヂ活性炭によるＤｉｒｅｃｔｉｌｅｍｏｐｅ
ｒｒｕｓｌｏｎ １２臨床例の検討人工臓器、 ＭＯｌ
。
６． Ｎｏ、６．４４２−４４５．１９７７）など、あ
るいはミリポア社製ポアサイズ０．４５μａ ＭＩＬＬ
ｆＰＯＲＥフィルターなどを用いたカラムが例示される
。また０、０１μｍ〜５００μｍのサイズ粒度を調製さ
れた粉体が好適に使用しうる。また好適には８０μｍ〜
３００μｍ１更に好適には１５０μ謂〜ＩＨμｍのサイ
ズ粒度を調製された粉体が使用しうる。またスプレード
ライ法で球状に成形し、粒度を上記のごとく調製された
粉体ら例示される。
るいはミリポア社製ポアサイズ０．４５μａ ＭＩＬＬ
ｆＰＯＲＥフィルターなどを用いたカラムが例示される
。また０、０１μｍ〜５００μｍのサイズ粒度を調製さ
れた粉体が好適に使用しうる。また好適には８０μｍ〜
３００μｍ１更に好適には１５０μ謂〜ＩＨμｍのサイ
ズ粒度を調製された粉体が使用しうる。またスプレード
ライ法で球状に成形し、粒度を上記のごとく調製された
粉体ら例示される。
高比重リポ蛋白質分画測定カラム吸着体の基本゛的溝成
は、燐酸カルシウム化合物からなる吸着体と燐酸イオン
雰囲気、及び金属イオンあるいはポリアニオンなどの脂
質選択性増強物質からなる。
は、燐酸カルシウム化合物からなる吸着体と燐酸イオン
雰囲気、及び金属イオンあるいはポリアニオンなどの脂
質選択性増強物質からなる。
燐酸カルシウム化合物としては例えば合成７Ｘイドロキ
シアバタイト、燐酸三カルシウム、燐酸四カルシウム、
ピロ燐酸カルシウム、塩素アパタイト、フッ素アパタイ
ト、燐酸カルシウム系ガラス、あるいはこれらと他のセ
ラミックス及び／又はガラスとの複合材、金属あるいは
高分子樹脂表面にコーティングしたもの、及び燐酸カル
シラ１４を含有する骨粉なども使用しうる。
シアバタイト、燐酸三カルシウム、燐酸四カルシウム、
ピロ燐酸カルシウム、塩素アパタイト、フッ素アパタイ
ト、燐酸カルシウム系ガラス、あるいはこれらと他のセ
ラミックス及び／又はガラスとの複合材、金属あるいは
高分子樹脂表面にコーティングしたもの、及び燐酸カル
シラ１４を含有する骨粉なども使用しうる。
燐含￥Ｔ化合物は、例えば燐酸ナトリウムや燐酸カリウ
ム等の燐酸塩、燐酸、燐酸イオン、や燐含有有機物、ビ
〔１燐酸等が具体的に例示される。
ム等の燐酸塩、燐酸、燐酸イオン、や燐含有有機物、ビ
〔１燐酸等が具体的に例示される。
その他ひ素含有化合物、ヘパリンあるいは硫酸デギスト
ランなどのポリアニオンも例示される。
ランなどのポリアニオンも例示される。
また二価イオンキレート剤としては、ＥＤＴＡやＥ Ｇ
Ｔ Ａなどが例示しうるが、カルシウムのキレート剤
であるクエン酸なども例示しうる。
Ｔ Ａなどが例示しうるが、カルシウムのキレート剤
であるクエン酸なども例示しうる。
燐酸カルシウム化合物にｆ−ＩＤＬ−Ｃが非吸着性とな
る選択的脂質吸着機能を持たせるには、燐酸カルシウム
化合物が燐酸イオン雰囲気であることが必要である４゜
そのため燐酸カルシウム化合物から燐酸イオンを遊離し
うる塩酸、硫酸などの無機酸、クエン酸、コハク酸、乳
酸、酢酸などの有機酸も構成成分となりうる。更に燐酸
カルシウム化合物及び／又は燐酸カルシウム化合物を含
有する素材を上述した無機酸及び有機酸で処理した物質
も使用しうる。
る選択的脂質吸着機能を持たせるには、燐酸カルシウム
化合物が燐酸イオン雰囲気であることが必要である４゜
そのため燐酸カルシウム化合物から燐酸イオンを遊離し
うる塩酸、硫酸などの無機酸、クエン酸、コハク酸、乳
酸、酢酸などの有機酸も構成成分となりうる。更に燐酸
カルシウム化合物及び／又は燐酸カルシウム化合物を含
有する素材を上述した無機酸及び有機酸で処理した物質
も使用しうる。
燐酸カルシウム化合物としては合成ハイドロギシアバタ
イト、天然ハイドロキシアパタイト、燐酸三カルシウム
、燐酸四カルシウム、ピロ燐酸カルシウム、塩素アパタ
イト、フッ素アパタイトなどを例示できるが、合成ハイ
ドロキシアパタイトが優れた脂質選択性及び吸着能を有
していた。カルシウムと燐のモル比（Ｃａ／Ｐ）が１〜
２である燐酸カルシウムが好適に使用しうる。更に好適
には、カルシウムと燐のモル比（Ｃａ／ Ｐ ）が１．
５〜１．７の燐酸カルシウムが使用しうる。脂質吸着体
の吸着特性を改善のための加工はザンブルミルあるいは
ジェットミルによる粉砕、乾燥粉あるいは６０℃〜１３
００℃の温度で焼成し調製された粉体が好適に使用しう
る。また好適には３００℃〜１２００℃、更に好適には
４００℃〜８００℃の温度で焼成し調製された粉体が使
用しうる。
イト、天然ハイドロキシアパタイト、燐酸三カルシウム
、燐酸四カルシウム、ピロ燐酸カルシウム、塩素アパタ
イト、フッ素アパタイトなどを例示できるが、合成ハイ
ドロキシアパタイトが優れた脂質選択性及び吸着能を有
していた。カルシウムと燐のモル比（Ｃａ／Ｐ）が１〜
２である燐酸カルシウムが好適に使用しうる。更に好適
には、カルシウムと燐のモル比（Ｃａ／ Ｐ ）が１．
５〜１．７の燐酸カルシウムが使用しうる。脂質吸着体
の吸着特性を改善のための加工はザンブルミルあるいは
ジェットミルによる粉砕、乾燥粉あるいは６０℃〜１３
００℃の温度で焼成し調製された粉体が好適に使用しう
る。また好適には３００℃〜１２００℃、更に好適には
４００℃〜８００℃の温度で焼成し調製された粉体が使
用しうる。
本吸着システムのブロック構成、は試料注入部、血清−
選択性増強物質混合部分、粉体−血清接触部分、脂質選
択吸着体本体部分、粉体−血清分離部分、試料分画液放
出部分からなる。
選択性増強物質混合部分、粉体−血清接触部分、脂質選
択吸着体本体部分、粉体−血清分離部分、試料分画液放
出部分からなる。
カラム材質はポリプロピレン、ＴＰＸ１アクリル、ポリ
カーボネート、シリコーンゴム、テフロンなどの高分子
樹脂、また医用抗血栓材料のポリウレタン、セグメント
ポリウレタンなどが例示される。またガラス、セラミッ
クス、金属なども例示される。試料注入部、分画液放出
部は差込み式、パツキン式ワンタッチロック式などが例
示される。
カーボネート、シリコーンゴム、テフロンなどの高分子
樹脂、また医用抗血栓材料のポリウレタン、セグメント
ポリウレタンなどが例示される。またガラス、セラミッ
クス、金属なども例示される。試料注入部、分画液放出
部は差込み式、パツキン式ワンタッチロック式などが例
示される。
脂質吸着剤は萌述した吸着担体と燐酸イオン及び／又は
脂質沈澱物質から使用される。
脂質沈澱物質から使用される。
簡易式カラムは次の様な構成となる。■注射筒接続部
■脂質吸着剤本体カラム部 ■分画液放出部からなる。
■脂質吸着剤本体カラム部 ■分画液放出部からなる。
以下脂質吸着剤の特性とＨＤ ！、−Ｃ測定の実施例を
示す。
示す。
実験例１
湿式法で合成したＣａ／Ｐが１．６６のハイドロキシア
パタイト（ＨＡ）を、ａｔｔｒｉｔ！ｏｎ ５１１１で
粉砕した後、８００℃で焼成した粉末を用いた。
パタイト（ＨＡ）を、ａｔｔｒｉｔ！ｏｎ ５１１１で
粉砕した後、８００℃で焼成した粉末を用いた。
ヒト血清！−ｅまたは０．５Ｍ燐酸緩衝液（ｐｉ！７．
４）０．１ｍ１２を加え、全ｆｆｉを１．１ｍ１２とし
た試料１ｍｆｆに、１−Ｉ Ａを２００ｍｇ添加した。
４）０．１ｍ１２を加え、全ｆｆｉを１．１ｍ１２とし
た試料１ｍｆｆに、１−Ｉ Ａを２００ｍｇ添加した。
室温で１０分間ゆっくりかくはん後、遠心上清をコーニ
ングユニバーサルシルム試薬＝ヘレナ社デンシトメータ
で、リポ蛋白質の分析を行なった。
ングユニバーサルシルム試薬＝ヘレナ社デンシトメータ
で、リポ蛋白質の分析を行なった。
結果を第１図ζこ示ず。第１ａ図は原血清のリポ蛋白質
の分布、第１ｂ図は原血清に２００ｍｇのＨＡを加えた
上清のリポ蛋白質の分布を示す。第１Ｃ図は原血清に１
／１０量の燐酸バッファーを添加した試料のリポ蛋白質
の分布、第１ｄ図は原血清にｌ／１０量の燐酸バッファ
ーを添加した試料に２００ｍｇのＨＡを加えた上清のリ
ポ蛋白質の分布を示す。
の分布、第１ｂ図は原血清に２００ｍｇのＨＡを加えた
上清のリポ蛋白質の分布を示す。第１Ｃ図は原血清に１
／１０量の燐酸バッファーを添加した試料のリポ蛋白質
の分布、第１ｄ図は原血清にｌ／１０量の燐酸バッファ
ーを添加した試料に２００ｍｇのＨＡを加えた上清のリ
ポ蛋白質の分布を示す。
第１６図のβ−リポ蛋白質が吸着されている様子がわか
る。一方α−リポ蛋白質は非吸着性である。この第１ｄ
図に示される特性が本吸看剤のリポ蛋白質に対する選択
性である。
る。一方α−リポ蛋白質は非吸着性である。この第１ｄ
図に示される特性が本吸看剤のリポ蛋白質に対する選択
性である。
なおα−リポ蛋白質とＩ（ＤＬ−Ｃとの相同性及びβ−
リポ蛋白質とＬ Ｄ Ｌ−Ｃとの相同性はすでに広く知
られている。
リポ蛋白質とＬ Ｄ Ｌ−Ｃとの相同性はすでに広く知
られている。
刈摩例２
総コレステロール値（’Ｉ’ ＣＩ（Ｏ）とＨＤ Ｌコ
レステ〔ｌ−ル値（ｔ−ｔ Ｄ Ｌ −Ｃ：）の関係と
Ｉ（Ａ ｍの関係を調べるために燐酸バッファーを添加
した試料１０００ｕ ａに実験例Ｉで用いたＨ Ａを１
００ｍｇ。
レステ〔ｌ−ル値（ｔ−ｔ Ｄ Ｌ −Ｃ：）の関係と
Ｉ（Ａ ｍの関係を調べるために燐酸バッファーを添加
した試料１０００ｕ ａに実験例Ｉで用いたＨ Ａを１
００ｍｇ。
２００ｍｇ、 ３００ｍｇ、４００ｍｇをそれぞれ加え
た。そして室温で１０分間ゆっくりかくはん後、遠心上
清中）’Ｉ’ ＣＩＩ Ｏ値とＩ−ｆＤＬ−Ｃ値を酵素
法で測定した。Ｔ ＣＩＩ Ｏのｆｌｌｌｊ定は和光純
薬社製コレステロール測定キット（ｌを使用、スタンダ
ードは協和メディクス社製２００１１ｇ／ｄＲを用いた
（試料量１０μｅ）。ＨＤＬ−Ｃの測定は協和メディク
ス社製デタミナＩ−Ｉ Ｄ Ｌキットで萌処理、測定は
和光純薬社製コレステロール測定キットＣ■を使用した
。スタンダードは協和メディクス社製５０−ｇ／ｄ（を
用いた（試料ｆｉ５０μｇ）、測定はファルマシアーＬ
ＫＢ社製分光光度計ＵＩＬｒａｓｐｅｃ Ｕで行った。
た。そして室温で１０分間ゆっくりかくはん後、遠心上
清中）’Ｉ’ ＣＩＩ Ｏ値とＩ−ｆＤＬ−Ｃ値を酵素
法で測定した。Ｔ ＣＩＩ Ｏのｆｌｌｌｊ定は和光純
薬社製コレステロール測定キット（ｌを使用、スタンダ
ードは協和メディクス社製２００１１ｇ／ｄＲを用いた
（試料量１０μｅ）。ＨＤＬ−Ｃの測定は協和メディク
ス社製デタミナＩ−Ｉ Ｄ Ｌキットで萌処理、測定は
和光純薬社製コレステロール測定キットＣ■を使用した
。スタンダードは協和メディクス社製５０−ｇ／ｄ（を
用いた（試料ｆｉ５０μｇ）、測定はファルマシアーＬ
ＫＢ社製分光光度計ＵＩＬｒａｓｐｅｃ Ｕで行った。
結果を第１表に示す。ＨＡを３００ｍｇ加えることによ
り各症例ともにＴ ＣＨＯ値はＨＤ Ｌ −Ｃ値とほぼ
同一になる。
り各症例ともにＴ ＣＨＯ値はＨＤ Ｌ −Ｃ値とほぼ
同一になる。
実験例３
総コレステロール値（ＴＣＨＯ）、ＨＤ Ｌコレステロ
ール値（ＨＤＬ−Ｃ）、及びＨＡによる脂質吸着の関係
を調べるために酵素法による同時測定を行った。Ｉ−ｆ
Ａの吸着は血清試料５００μｅに燐酸バッファー５０
０μ４を添加、実験例！で用いたＩ−Ｉ Ａを１５０ｍ
ｇ加えた。室温で１０分間ゆっくりかくはん後、遠心上
清中のＴ ＣＩ−１０値を酵素法で測定した。ＨＤ Ｌ
−Ｃの測定は血清試料２００μＱに、協和メディクス社
製デタミナＨＤ Ｌ沈澱試薬１００μＱを加え、かくは
ん後１０分間静置した後、遠心上清中のＴ ＣＩＩ Ｏ
値を酵素法で測定した。’ｌ’ ＣＨＯの１ｌ１１定は
和光純薬社製コレステロール測定キットＣＩ［を使用し
た。スタンダードは協和メディクス社製５０１ｍｇ／ｄ
１２を用いた（試料ｆｆ１５０μａ）。測定はファルマ
シアーＬＫＢ社製分光光度計Ｕｌｔｒａｓｐａｃ ＩＩ
で行った。
ール値（ＨＤＬ−Ｃ）、及びＨＡによる脂質吸着の関係
を調べるために酵素法による同時測定を行った。Ｉ−ｆ
Ａの吸着は血清試料５００μｅに燐酸バッファー５０
０μ４を添加、実験例！で用いたＩ−Ｉ Ａを１５０ｍ
ｇ加えた。室温で１０分間ゆっくりかくはん後、遠心上
清中のＴ ＣＩ−１０値を酵素法で測定した。ＨＤ Ｌ
−Ｃの測定は血清試料２００μＱに、協和メディクス社
製デタミナＨＤ Ｌ沈澱試薬１００μＱを加え、かくは
ん後１０分間静置した後、遠心上清中のＴ ＣＩＩ Ｏ
値を酵素法で測定した。’ｌ’ ＣＨＯの１ｌ１１定は
和光純薬社製コレステロール測定キットＣＩ［を使用し
た。スタンダードは協和メディクス社製５０１ｍｇ／ｄ
１２を用いた（試料ｆｆ１５０μａ）。測定はファルマ
シアーＬＫＢ社製分光光度計Ｕｌｔｒａｓｐａｃ ＩＩ
で行った。
結果を第２表に示す。・■１Δ１５０Ｂにより吸着さｔ
した試料の’ｌ”ｃＨＯａ度はＨＤＬ−Ｃ５度とほぼ同
一である。
した試料の’ｌ”ｃＨＯａ度はＨＤＬ−Ｃ５度とほぼ同
一である。
以上、実施例からも明らかなように、本発明高比重リポ
蛋白質分画測定カラム充填剤を用いたカラムは、血清中
のＨＤＬ−Ｃを沈澱及び遠心分離操作を行うことなく分
画できることが判る。また本カラムは単に用手法あるい
は自動分析機器で測定する分画試料を調製するプレカラ
ムとして使用できるだけでなく、自動分析装置内に組み
込んで自動化ＨＤＬ−Ｃ測・定システムを構築すること
も例示できる。
蛋白質分画測定カラム充填剤を用いたカラムは、血清中
のＨＤＬ−Ｃを沈澱及び遠心分離操作を行うことなく分
画できることが判る。また本カラムは単に用手法あるい
は自動分析機器で測定する分画試料を調製するプレカラ
ムとして使用できるだけでなく、自動分析装置内に組み
込んで自動化ＨＤＬ−Ｃ測・定システムを構築すること
も例示できる。
第
第
表
表
添付第１図は血清゛リポ蛋白質のＨＡへの吸着の選択性
をみたものである。第１ａ図は原血清のリポ蛋白質の分
布、第１ｂ図は原血清に２００ｍｇのｒ−Ｉ Ａを加え
た上清のリポ蛋白質の分布を示す。 第１ｃ図は原血清にｌ／Ｉｆ）ｆｉｔの燐酸バッファー
を添加した試料のリポ蛋白質の分布、第１ｄ図は原血８
’ｔにｌ／１Ｏｆｆｉの燐酸バッファーを添加した試料
に２００ｍｇのＩ（Ａを加えた上清のリポ蛋白質の分布
を示す。横軸は原点よりの泳動距離を、また縦軸は吸光
度を示す。図に示ずα−Ｌｉｐｏはα−リポ蛋白質を、
β−Ｌｌｐｏはβ−リポ蛋白質をそれぞれ示す。 添付第２図は本吸着カラムのシステム構成を示したもの
である。荷処理ブロック上カラム本体ブロックに大別さ
れる。それぞれ試料注入部、血清−燐酸イオン混合部分
、粉体−血清接触部分、脂質選択吸着体本体部分、粉体
−血清分離部分、試料分画液放出部分からなる。放出さ
れた分画液は化学的方法、酵素法、酵素及び／または抗
体電極法（Ｄｉｅｔｓｃｈｙ ＪＭ、 ｅｆ ａｌ、
ＥｎｚｙｍａＬｉｃ ｍｅａｓｕｒｅＩＩｌｅｎｔ
ｏｒ ｆｒｅｅ ａｎｄ ｅｓｔｅｒｉｒｉｅ
ｄ ｃｈｏｌａｓｔｅｒｏＪ １ｅｖｅｌｓ ｆ
ｎ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｕ
ｓｉｎｇ ｔｈｅ ｏｘｙｇｅｎ ｅｌｅｃｔｒ
ｏｄｅ ｉｎ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｕ
ｃｏｓｅ ａｎａｌｙｚｅｒ、Ｃ１１ｎ Ｃｈｉｃ
ｍ Ａｃｔａ、 ７３ （３） ４０７−４１７．
１９７６） （ディーシイジェーエム、エトアル、エ
ンザイマティックメージャメント オブ フリー アン
ドニステリファイド コレステロール レベルズイン
プラズマ アンドアザ−バイオａジ力ルブリバレーショ
ンズニージングザオキシゲンエレクトロードイン ア
モディファイド グルコースアナライザー）、ＥＩＡ法
、ｒＭＡ法あるいは電気泳動法などによる高比重リポ蛋
白質中のコレステロール測定に際し面処理に使用され、
用手法あるいは自動分析法で測定される。 算１１日 茎ＩＣ口 第４図 第１ｂ■ 第
をみたものである。第１ａ図は原血清のリポ蛋白質の分
布、第１ｂ図は原血清に２００ｍｇのｒ−Ｉ Ａを加え
た上清のリポ蛋白質の分布を示す。 第１ｃ図は原血清にｌ／Ｉｆ）ｆｉｔの燐酸バッファー
を添加した試料のリポ蛋白質の分布、第１ｄ図は原血８
’ｔにｌ／１Ｏｆｆｉの燐酸バッファーを添加した試料
に２００ｍｇのＩ（Ａを加えた上清のリポ蛋白質の分布
を示す。横軸は原点よりの泳動距離を、また縦軸は吸光
度を示す。図に示ずα−Ｌｉｐｏはα−リポ蛋白質を、
β−Ｌｌｐｏはβ−リポ蛋白質をそれぞれ示す。 添付第２図は本吸着カラムのシステム構成を示したもの
である。荷処理ブロック上カラム本体ブロックに大別さ
れる。それぞれ試料注入部、血清−燐酸イオン混合部分
、粉体−血清接触部分、脂質選択吸着体本体部分、粉体
−血清分離部分、試料分画液放出部分からなる。放出さ
れた分画液は化学的方法、酵素法、酵素及び／または抗
体電極法（Ｄｉｅｔｓｃｈｙ ＪＭ、 ｅｆ ａｌ、
ＥｎｚｙｍａＬｉｃ ｍｅａｓｕｒｅＩＩｌｅｎｔ
ｏｒ ｆｒｅｅ ａｎｄ ｅｓｔｅｒｉｒｉｅ
ｄ ｃｈｏｌａｓｔｅｒｏＪ １ｅｖｅｌｓ ｆ
ｎ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｕ
ｓｉｎｇ ｔｈｅ ｏｘｙｇｅｎ ｅｌｅｃｔｒ
ｏｄｅ ｉｎ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｕ
ｃｏｓｅ ａｎａｌｙｚｅｒ、Ｃ１１ｎ Ｃｈｉｃ
ｍ Ａｃｔａ、 ７３ （３） ４０７−４１７．
１９７６） （ディーシイジェーエム、エトアル、エ
ンザイマティックメージャメント オブ フリー アン
ドニステリファイド コレステロール レベルズイン
プラズマ アンドアザ−バイオａジ力ルブリバレーショ
ンズニージングザオキシゲンエレクトロードイン ア
モディファイド グルコースアナライザー）、ＥＩＡ法
、ｒＭＡ法あるいは電気泳動法などによる高比重リポ蛋
白質中のコレステロール測定に際し面処理に使用され、
用手法あるいは自動分析法で測定される。 算１１日 茎ＩＣ口 第４図 第１ｂ■ 第
Claims (6)
- （１）多孔質燐酸カルシウム化合物を構成要素とするこ
とを特徴とする高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレ
ステロール分画測定用カラム充填剤。 - （２）粉体状及び／又は粒状燐酸カルシウム化合物を構
成要素とすることを特徴とする高比重リポ蛋白質及び／
又はＨＤＬコレステロール分画測定用カラム充填剤。 - （３）高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステロー
ル分画特性を増強するために下記の分画特性増強剤を添
加することを特徴とする特許請求の範囲第（１）乃至（
２）項に記載の高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレ
ステロール分画測定用カラム充填剤。 ａ）燐含有化合物 ｂ）界面活性剤 ｃ）脂肪酸 ｄ）ポリアニオン ｅ）アミノ酸 ｆ）蛋白質及び／又は糖蛋白質 ｇ）糖類及び／又は糖類含有化合物 ｈ）重金属塩及び／又は重金属含有化合物 ｉ）多価カチオン - （４）高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステロー
ル分画測定用カラム充填剤が低比重リポ蛋白質及び／又
はＬＤＬコレステロール及び／又は超低比重リポ蛋白質
及び／又はＶＬＤＬコレステロールを吸着することを特
徴とする特許請求の範囲第（１）乃至（２）乃至（３）
項に記載の高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステ
ロール分画測定用カラム充填剤。 - （５）高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステロー
ル分画測定用カラム充填剤が高比重リポ蛋白質及び／又
はＨＤＬコレステロールを吸着しないことを特徴とする
特許請求の範囲第（１）乃至（２）乃至（３）項に記載
の高比重リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステロール分
画測定用カラム充填剤。 - （６）前記吸着カラムが化学的方法、酵素法、酵素及び
／又は抗体電極法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法あるいは電気泳
動法による高比重リポ蛋白質中のコレステロール（ＨＤ
Ｌ−Ｃ）測定に際し前処理に使用され、用手法あるいは
自動分析法に使用される特許請求の範囲第（１）乃至（
２）乃至（３）乃至（４）乃至（５）項に記載の高比重
リポ蛋白質及び／又はＨＤＬコレステロール分画測定用
カラム充填剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63251908A JP2816342B2 (ja) | 1988-10-07 | 1988-10-07 | 高比重リポ蛋白質分画測定用カラム充填剤 |
| PCT/JP1990/000468 WO1991015760A1 (en) | 1988-10-07 | 1990-04-06 | Packing of column for fractionating and assaying high specific gravity lipoprotein and/or hdl cholesterol |
| EP19900905668 EP0481074A4 (en) | 1988-10-07 | 1990-04-06 | Packing of column for fractionating and assaying high specific gravity lipoprotein and/or hdl cholesterol |
| AU53583/90A AU633314B2 (en) | 1988-10-07 | 1990-04-06 | Packing of column for fractionating and assaying high specific gravity lipoprotein and/or hdl cholesterol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63251908A JP2816342B2 (ja) | 1988-10-07 | 1988-10-07 | 高比重リポ蛋白質分画測定用カラム充填剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02222835A true JPH02222835A (ja) | 1990-09-05 |
| JP2816342B2 JP2816342B2 (ja) | 1998-10-27 |
Family
ID=17229746
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63251908A Expired - Lifetime JP2816342B2 (ja) | 1988-10-07 | 1988-10-07 | 高比重リポ蛋白質分画測定用カラム充填剤 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0481074A4 (ja) |
| JP (1) | JP2816342B2 (ja) |
| AU (1) | AU633314B2 (ja) |
| WO (1) | WO1991015760A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001324488A (ja) * | 2000-02-04 | 2001-11-22 | Tosoh Corp | リポ蛋白質分析方法 |
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| JPS6316045A (ja) * | 1986-07-05 | 1988-01-23 | Asahi Optical Co Ltd | 液体クロマトグラフイ−用充填剤およびその製造方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US3737516A (en) * | 1971-03-05 | 1973-06-05 | Du Pont | Calcium-deficient hydroxylapatite for use in column chromatography |
| CA1221307A (en) * | 1982-12-02 | 1987-05-05 | Nobutaka Tani | Adsorbent and process for preparing the same |
| EP0205622B1 (en) * | 1984-12-18 | 1993-09-08 | Kanto Kagaku Kabushiki Kaisha | Calcium-phosphorus type apatite having novel properties and process for its production |
| JPH0788205B2 (ja) * | 1985-09-23 | 1995-09-27 | 東燃株式会社 | クロマトグラフイ−分離用リン酸カルシウム系ヒドロキシアパタイト及びその製造方法 |
| JPH01155263A (ja) * | 1987-12-12 | 1989-06-19 | Asahi Optical Co Ltd | 液体クロマトグラフィー用充填剤及びその製法 |
-
1988
- 1988-10-07 JP JP63251908A patent/JP2816342B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-04-06 WO PCT/JP1990/000468 patent/WO1991015760A1/ja not_active Ceased
- 1990-04-06 AU AU53583/90A patent/AU633314B2/en not_active Ceased
- 1990-04-06 EP EP19900905668 patent/EP0481074A4/en not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
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| JP2001324488A (ja) * | 2000-02-04 | 2001-11-22 | Tosoh Corp | リポ蛋白質分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU5358390A (en) | 1991-10-30 |
| JP2816342B2 (ja) | 1998-10-27 |
| EP0481074A4 (en) | 1992-11-19 |
| AU633314B2 (en) | 1993-01-28 |
| EP0481074A1 (en) | 1992-04-22 |
| WO1991015760A1 (en) | 1991-10-17 |
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