JPH02223589A - マクロライド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、殺虫および殺ダニ活性を有する新規なマクロ
ライド化合物に関するものである。

（従来の技術および発明が解決しようとする課題）標的
とする生物は現在用いられている殺虫薬および殺ダニ薬
に対してその耐性を急速に増しているので、新規な殺虫
薬および殺ダニ薬の必要性が大きくなっている。節足動
物の殺虫薬に対する耐性は広がっており、少なくとも４
００種が１またはそれ以上の殺虫薬に対して耐性を有し
ている。

ＤＤＴ，カルバメート類および有機リン酸エステル類な
どの比較的古い殺虫薬に対する耐性の増加はよく知られ
ている。しかし、比較的新しいピレスロイド系殺虫薬お
よび殺ダニ薬のいくつかに対しても耐性は現れてきてい
る。従って、新規な殺虫薬および殺ダニ薬が必要とされ
ている。

ノミ、マダニ、サシバエ（ｂｉｔｉｎｇ　ｆｌｙ）のよ
うな外部寄生生物の抑制は、畜産における重要な問題と
して長い間認識されて来た。従来の家畜の処置法は、よ
く知られたヒツジ用浸洗液のように殺虫薬を局所適用す
ることである。実際にこのような処置法は今なお広く用
いられている。しかし、最近の研究目標は、特に経口に
よって動物に投与することができ、そしてこの処置され
た動物の血液を寄生生物が摂取したときに寄生生物に毒
性を及ぼすことによって外部寄生生物を抑制するであろ
う化合物を見つけることにある。

（課題を解決するための手段） 本発明は、ｒＡ８３５４３Ｊと命名された新規な発酵産
物を提供するものであり、この産物は個々の成分Ａ８３
５４３Ａ，Ａ８３５４３ＢＳＡ８３５４３Ｃ，Ａ８３５
４３Ｄ，Ａ８３５４３Ｅ。

Ａ８３５４３Ｆ，Ａ８３５４．３Ｇ、Δ８３５４３Ｈお
よびＡ８３５４３Ｊからなっている。Ａ８３５４３およ
び個々のＡ８３５４３成分は、昆虫、特に鱗翅目（　Ｌ
　ｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）の種、例えば南部アワヨトウ
の幼虫（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ａｒｍｙｗｏｒｍ）、なら
びに双翅目（Ｄ　ｊｐｔｅｒａ）の種、例えばクロバエ
（ｂｌｏｗ　ｆｌｙ）、サシバエ（ｓｔａｂｌｅ　ｆｌ
ｙ）および蚊の抑制に有用であり、したがって、Ａ８３
５４３化合物を用いる殺虫組成物および昆虫またはダニ
の数を減少させる方法に有用である。

本発明のＡ８３５４３化合物は、式１ ［式中、Ｒは、■１または下記式（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）または（ｄ） から選択される基であり、 Ｒ２は、下記式 で示される基であり、 ＲＩＳＲ３、Ｒ５およびＲｏは水素原子またはメチル基
であり、 Ｒ４はメチル基またはエチル基である］で示される化合
物、またはＲが水素原子以外である該化合物の酸付加塩
である。

製造の容易性から見ると好ましい本発明化合物は、Ｒ，
Ｒ’、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ８が以下の組み合わせ
のいずれかである上記式１の化合物、またはＲが水素原
子以外である該化合物の酸付加塩である Ｒ　　　Ｒ’　　　Ｒ３Ｒ’　　　Ｒ５Ｒ８（ａ）　　
メチル　　Ｈエチル　メチル　メチル（ｂ）　　メチル
　　Ｈエチル　メチル　メチル（Ｃ）　　メチル　　Ｈ
エチル　メチル　メチル（ａ）　　メチル　メチル　エ
チル　メチル　メチル（ａ）　　メチル　　Ｈメチル　
メチル　メチル（ａ）ＨＨエチル　メチル　メチル （ｄ）メチル　　１１　　　エチル　メチル　メチル（
ａ）　　メチル　　Ｈエチル　　Ｈメチル（ａ）　　メ
チル　　Ｈエチル　メチル　　ＨＨメチル　　Ｈエチル
　メチル　メチルＨメチル　メチル　エチル　メチル　
メチルＨメチル　　Ｈメチル　メチル　メチルＨＨＨエ
チル　メチル　メチル Ｈメチル　　Ｈエチル　　Ｈメチル Ｈメチル　　Ｈエチル　メチル　　Ｈ Ａ　８３５４．３　Ａのアミノ糖は、β−Ｄ−ホロスア
ミン（ｆｏｒｏｓａｍｉｎｅ）であることがわかってお
り、Ａ３３５４３Ａの中性の糖はα−２，３，４−１−
リＯ−メチルラムノースである。

９つのＡ３３５４３成分はその特徴が調べられている。

これらの成分は、ＲかＨ以外である式１の化合物である
。これらは、以下の構造を有する：Ｈ（ａ）　　メチル
　　Ｈエチル　　ト■メチル アミノ糖をＡ３３５４３成分から除去し、偽アグリコン
（ＲがＨである式１の化合物）を得ることができる。成
分Ａ、Ｂ、ＣおよびＧは、共通の偽アグリコン（ｐｓｅ
ｕｄｏａｇｌｙｃｏｎｅ）（Ａ　８３５４３　Ａ偽アグ
リコンまたは偽−Ａ）を有する。後に、Ａ３３５４３Ａ
偽アグリコンは、Ａ３３５４３成分として天然に産生さ
れることがわかった。成分り、Ｅ。

Ｆ、ＨおよびＪは、各々、特有の偽アグリコンを有して
いる。Ａ　８３５４．３偽アグリコン類は、以下の構造
を有する： Ａ　　（ａ）　　メチル Ｂ　　（ｂ）　　メチル Ｃ（ｃ）　　メチル Ｄ　　（ａ）　　メチル Ｅ　　（ａ）　　メチル Ｆ　　（ａ）　　　Ｈ Ｇ　　（ｄ）　　メチル Ｈエチル Ｈエチル Ｈエチル メチル　エチル Ｈメチル Ｈエチル Ｈエチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル メチル Ａ３３５４３Ａ　　メチル Ａ３３５４３Ｄ　　メチル Ａ３３５４３Ｅ　　メチル Ａ３３５４３Ｆ　　　　Ｈ Ａ８３５４３１１　　メチル Ｈエチル メチル　エチル Ｈメチル Ｈエチル Ｈエチル メチル　メチル メチル　メチル メチル　メチル メチル　メチル Ｈメチル ’Ｒ＝Ｈ８ 偽アグリコンは、例えばＡ３３５４３成分への中間体と
して有用である。

以下に、Ａ３３５４３の成分および偽アグリコンの物理
学的特性およびスペクトル特性を示す。

以下の記述においては次の略語を用いる。

ＥＴ−ＭＳ：電子衝撃質量スペクトル ＦＡＢ−ＭＳ　：高速原子衝撃質量スペクトルＦＤ−Ｍ
Ｓ・フィールド・デイソープション質量スペクトル ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィーＩＲ：赤外線 ＮＭＲ：核磁気共鳴 ＵＶ　　紫外線 Ａ３３５４３Ａの特性 分子量ニア３１ 実験式：　Ｃ４，Ｈ，５Ｎｏ、。

ＦＤ−ＭＳ：第４図参照 ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）：測定値−７３２，４７０６、
理論値（Ｃ，、Ｈ，、ＮＯ，０）＝７３２．４．６８７
（第８図参照） Ｅ　Ｉ　−ＭＳ　：測定値−７３１，４６］２、理論値
−７３１，４６０８（第１０図参照）ＵＶ（ＥｔＯＨ）
λｍａｘ：２４３ｎｍ（ε８，９２０）ＩＲ（ＣＨＣρ
３）ニジ（ラクトン）］−７１３ｃｘ−’（共役ケトン
）　１６５７ｃｘ−’、２９４０ｃｒｔｒ−’付近にＣ
−Ｈ振動および１．０６０ｃｍ−’付近にＣ−、Ｏ振動
の多重ピーク（第１図参照） ［α几”　：　−１２１，８°（ｃｌ、０３、ＣＨＣρ
３）［α］Ｓ８５　：＋６．３°（ｃｌ、０３、ＣＩ（
Ｃａ２）Ａ８３５４３Ａについて観察された’Ｈおよび
”ＣＮＭＲデータを第１表に示す（アセトン−ｄ。

中）。

第１表 アセｊ・ンーｄ６中におけるＡ　８３５４．３　Ａ３３
．８３ １２９．１２ １２９．６６ ７６．３１” ３７、６５ ４６．４２ ４９．７４ １４７．７８ １４４．２７ ２０２．４６ ４７．７４ ８０．４１ ３０．３３ ２１．８５ ３．０７／２．４５ ２．９４ ３．４８ ５．８６ ５．８９ １．９９／１．３４ ４．３１ ２．３６／１．３６ ０．９３ ２．８７ ７．０１ ３．３０ １．５１ １．７８／１．１７ １．５０ ８．９７ １５．７１ ７７．６１ ８］、８７ ８２．４３ ６８．０３ １７．６４ ５６．６６本 ５８、３９” ６０．１２ ］、０３．４５ ３１．２／１ １８．１４ ６５、３４ ７３．３５ １８．８７ １．１２ ４．８１ ３．５］ ３．００ ３．４８ １．１８ ３．３７ ３．４１ ３．４５ ４．４５ １．９２／１．３７ １．８４／１．５２ ２．１２ ３．５６ １．２ま た。

゛、Ｘ同一の肩記号を付した共鳴値は交換されることも
ある。

Ａ３３５４３Ｂの特性 分子ｆｉｌニア１７ 実験式：Ｃ，ｏＨ８３Ｎ○１゜ ＦＡＢ−ＭＳ：（第９図参照） Ａ３３４３Ｂの特性 分子量、７０３ 実験式：　Ｃ３ｅ　Ｈｏ　＋　Ｎ　Ｏ、。

Ｆｌ’）−ＭＳ・（第５図参照） Ａ８３５４３Ｄの特性 分子量＝７４５ 実験式　〇　４２８６７Ｎ　Ｏｆ。

ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ：　２４４ｎｍ（ε　９，９
１０）Ｉ　Ｒ（ＣＨＣ（２３）　：　Ｉ／　（ラクトン
Ｈ７０８ｃａ−’（共役ケトン）　１６５８ｃｒ’、２
９４０ａｒ’付近にＣ−Ｈ振動および１０７０ｃｍ−’
付近にＣ−Ｏ振動の多重ピーク（第２図参照） ［α］も８１１ニー１４２．９°（Ｃ１，０２、ＣＨＣ
ｌ２ｓ）［α］込６５ニー２９．９°（ｃ　　１．０２
、ＣＨＣ１２３）ＦＤ−ＭＳ：第６図参照 Ａ３３５４３Ｄについて観察されたＩＨおよび３ＣＮＭ
Ｒデータを第２表に示す（アセトン−ｄ８中）。

募２人、アセトン−ｄ。中におけるＡ３３５４３ＤのＩ
Ｈおよび１３ＣＮＭＲデータ １７２．６８ ３４、．３８ ４９．０１ ４２．８３ １２３．２７ １３７．２６ ２０．８１ ４４．４］ ７６．７２ ３８、６４ ４．７．０４ ５０．０５ １４８．４．７ １４５．１９ ２０３．１６ ４８．４７ ８１．０３ ３０、９９ ３、０８／２．４．３ ２．９０ ３．４７ ５．５４ ■、７４ ２．１８ ２．０１／１．４５ ４．３２ ２．３７／１．３７ ２．７８ ７．０４ ３．３０ ３゜５３ １．４９ ３５．１２ ７６．８４ ２９．１６ ９．５５ １６．３２ ９７．１１ ８２、５８ ８３．１５ ６８．７１ ＋８．２６ ５７．３１＊ ５９．０２” ６０．７１ １０４．１４ ３１．９６ １８．８３ ６６、０６ ７４．１２ ］、９．４２ ■、４９ ４．６５ １．４８ ０．８１ １．１２ ４．８５ ３．５４ ３．４０ ３．０３ ３．５０ １．１８ ３．４０ ３．４３ ３．４７ ４．４７ １．９４／１．３９ １．８１／１．４９ ２．１２ １．２０ Ｏいくつかの帰属はＩＨ／Ｉ３Ｃ相関関係で示した。

Ｘ共鳴値が交換されることもある。

Ａ８３５４３Ｅの特性 分子量ニア１７ 実験式：　Ｃ４ｏＨｅｓＮ　Ｏ＋。

ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ−１−１）：測定値−７，１８，４５
２６、理論値（Ｃ４，Ｈ６，Ｎｏ　、。）＝　７１８．
４５３ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａＸ：　２４４ｎｍ（ε　
８，６００）ＩＲ（ＫＢｒ）（第１３図参照） Ａ８３５４３Ｅについて観察されたＩ）（および皿３Ｃ
ＮＭＲデータを第３表に示す（アセトン−ｄ。

中）。

第３表：アセトン−ｄ。中におけるＡ３３５４３Ｅ１７
２．４６ ３４．９５　　３ ４８．８８ ４２．１１ １２９．７８ １３０．３９ ０６／２，４０ ２．９５ ３．４３ ５．８６ ５．９０ （第３表の続き） （第３表の続き） ３７．１８ ７７．０６ ３８．３１ ４７、１８ ５０．４０ １４８．３７ １４４．８４ ２０３．０９ ４８．０５ ８］、３５ ３４．９８ ２２．２５ ３３．７３ ７２．９７ ２１．６１ １．９６／１．３９ ４．３３ ２．３６／１．３６ ０．９３ ２．８６ ７．０６ ３．３４ ３．５５ １．６２／１．４８ １．７７／１．１３ １．５０ ４．６８ １．１２ １．１３ ４．８３ ３．３７ ３、Ｏ２ −０ＣＨ３ ３−○ＣＨ３ イー０ＣＨ３ １パ ２°。

３°゛ ４“ ５′。

６″′ １．１８ ３．４３ ３．４０ ４．４７ １．９３／１．３９ １．８２／１，５０ ２．１２ ３．５７ １．２１ ６いくつかの測定値はＩＨ／Ｉ３０相関関係で示した。

Ａ３３５４３Ｆの特性 分子量ニア１７ 実験式：　Ｃ４ｏＨｏｓＮ　Ｏ＋。

ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）：測定値−７１８，４５３４、
理論値（Ｃ，、Ｈ，４ＮＯ、、）＝　７１８．４５３Ｕ
Ｖ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ：２４３ｎｍ（ｇ　　１０．５
００）および２８２ｎｍ（ｔ：　　１０９）ＩＲ（ＫＢ
ｒ）：（第１４図参照） Ａ８３５４３Ｆについて観察された’Ｈおよび１３ＣＮ
ＭＲデータを第４表に示す（アセトン−ｄ６中）。

第４表；アセトン−ｄ６中におけるＡ３３５４３Ｆ３．
０６／２．４．２ ２．９５ ３．４５ ５．８７ ５．９２ ２．１６ ］、、９７／１．３５ ２．３３／１．３４ ０．９４ ２．８４ ３、２２／２．５０ ２２．４１ ３４．４，５ ７７．０９ ２９．０５ ９．５６ ９７．１９ ７８．３８ ８２、５８ ８３．１５ ６８、７４ １８．２５ ５９、　Ｏ２ ５７，３１ ６０，６９ １００，１９ ３２，４］ １８．８６ ６６．１６ ７４−．０１ １９．４，６ ４１．０１ １．７０／１，１７ １．５１ ４．３２ １．４８ ０．８１ ３．５３ ３．３８ ３．００ ３．４８ １．１８ ３．４３ ３．４０ ３．４７ ４．５３ １．８０／］、、３８ １．８３／１．５３ ２．１３ ４．０１ １．２２ ８いくつかの測定値はＩＨ／１３Ｃ相関関係で示しＡ３
３５４３Ｇの特性 分子量　７３１ 実験式：　Ｃ４ＩＨｅ　６　Ｎ　Ｏ１゜ＦＡＢ−Ｍｓ（
Ｍ＋１）・測定値−７３２，４６６１、理論値（Ｃ，，
８，６ＮＯ，０）＝７３２．４６８ＵＶ（ＥｔＯＨ）λ
ｍａｘ：　２４３ｎｍ（ε　８，９７０）ＩＲ（ＫＢｒ
）：（第１５図参照） Ａ８３５４３Ｇについて観察されたＩＨおよび３ＣＮＭ
Ｒデータを第５表に示す（アセトン−ｄ６中）。

束１：アセトンーｄ、中におけるＡ３３５４３Ｇの’Ｈ
および”ＣＮＭＲデータ 位置　　１３ＣＩＨ− ］　　　　１７２．５９ ２　　　　３４．６７　　３．０４／２．４６３　　　
　４８．７２　　　　２．９４４　　　　４．２．２５
　　　　３．５０５　　　１２９．８５　　　　５．８
４６　　　１３０．２６　　　　５．８９＋３Ｃ ３７，１２ ７６，９９ ３８、２８ ４７，２３ ５０，４３ １４８，２８ １４４，６１ ２０３，２０ ４７，９４ ８１，７３ ３５、２０ ２１，６８ ３１，４１ ７６，４，７ ２８、８４ ９，６１ １５，２９ ９６，９８ ７８，２３ Ｂ２．４６ ８３．０５ ６Ｂ、６４ （第５表の続き） ＩＨ″ １．９５／１，３４ ４．３２ ２．３６／１．３６ ２．８７ ７．０４ ３．３０ ３．５７ １．５５ １．６４／１．１６ １．６４／１．３６ ４．６４ １．４８ ０．８０ １．１８ ４．８１ ２．２９ ６“ ２−ＯＣＨ。

３’　−ＯＣＨ、。

４−ＯＣＩ−Ｌ １”′ ２′。

３パ ４゛′ ５°′ ６°。

１７．１８ ６０．７０ ９９．５１ ２９．６２ １９．３１ ６２．１３ ６９．９３ １８．２２ １．１２ ３．４２ ３．３９ ３．４６ ４．８０ ］、８７／１．４８ １．７３ ２．２９ １．１７ ０いくつかの測定値は’Ｈ／”Ｃ相関関係で示した。

Ａ３３５４３Ｈの特性 分子量８７１７ 実験式：　Ｃ４０ＨＢ３Ｎ　ＯＩ。

ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ：　２４３ｎｍ（Ｂ１０．１
００）！ ＩＲ（ＫＢｒ）：第１５図参照末 ＊Ａ３３５４３Ｈ：Ｊ（５８：４２）混合物で測定した
。

Ａ３３５４３Ｊの特性 分子量ニア１７ 実験式：　Ｃ４，ｏＨｅ３Ｎ　Ｏ、。

ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ：　２４３ｎｍ（ε　１０，
１００）末 ＩＲ（ＣＨＣσ３）：第１６図参照１ ＊　Ａ３３５４３Ｈ：　Ｊ（５８：　４２）混合物で測
定した。

Ａ３３５４３ＨおよびＪは、Ａ３３５４３から混合物（
Ｈ：　Ｊ比−５８：４２）として分離され、以下に説明
する分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に
よって分離することかできる。Ａ３３５４３ＨおよびＪ
の構造は、アセトン−ｄｏ中におけるＡ３３５４３Ｈ：
Ｊ混合物の’Ｈおよび”ＣＮＭＲの測定に基づく。ＮＭ
Ｒスペクトルは類似しており、Ａ　８３５４．３　Ａの
ものと比較した。１１およびＪスペクトルの主要な変化
は、ラムノース糖付近に集中する。成分Ｉ）およびＪは
、その糖に２つのＯＣＨ３だけを有する。成分Ｈにおい
て、Ｈ−１は’ＨＮＭＲスペクトルで約０．１６シフト
しており、１３ＣＮＭＲスペクトルで３δシフトしてい
る（各々、４．８１および９９．６８）。これらのシフ
トは、２位のメトキシにメチルがないためである。成分
Ｊにおけるシフトは、同様に、３位のメトキシにメチル
がないことに対応している。

Ａ　８３５４．３　Ａ偽アグリコンの特性分子量二５９
０ 実験式：　Ｃ３，Ｈ，ｏ０８ ＵＶ（ＥｔＯＨ）λｍａｘ：　２４３Ｈｍ（ε１０，３
０Ｉ　Ｒ（ＣＨＣＣ３）：　ν（ラクトン）１７２４ｃ
ｍ−’（共撓ケトンＨ６５２ｃπ−“、３０１７ｃｍ−
”付近にＣ−Ｈ振動の多重ピーク、１１４０ｃｍ”付近
にＣ−〇振動の多重ピーク（第３図参照） ＦＤ−ＭＳ：第７図参照 Ｅ　Ｉ−ＭＳ　：第１１図参照 Ａ３３５４３Ｄ偽アグリコンの特性 分子量：６０４ 実験式：　ＣＧ４Ｈ５２０９ Ａ８３５４３成分は、以下の分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃシステ
ムの１つを用いて互いに分離することができる。

システムＩ カラＡ：ＯＤＳ、３μ、４．５　Ｘ　５０１！ｍ（Ｉ　
ＢＭ）溶媒：　ＣＨ，ＯＨ：　ＣＨ３ＣＮ：　Ｈ２Ｏ（
２：２：］、）流速＋　１．０１１１σ／分 検出：２４５ＨｍのＵＶ 温度二室昌 欧　　　　保持時間Ｑけ 八　　　　　　　　８．５０ Ｂ　　　　　　　　６１５ Ｃ３，９２ Ｄ　　　　　　　　１１．４７ システム■ カラム：４．６Ｘ１００ｍ＊、○ＤＳ ［ＡＱ−３吋、Ｓ−５；ワイ・エム・シー・インコーホ
レイテッド（ＭＭＣ，Ｉｎｃ、、　ＭｔＦｒｅｅｄｏｍ
＋　　ＮＪ）］ ２ア 溶媒：　Ｃ１１３０Ｈ：Ｃ）１ｓＣＮ＋０．０５％ＮＨ
４０Ａｃ（Ｈ２Ｏ）（Ａ）３５　：　３５　：　３０　
−　ｐＨ７，８（Ｂ）４５：４５：１Ｏ−ｐＨ６，７ 流速　２　、０　ｆｆｆｆ／分 操作時間：３５分 検出：ＵＶ、２５０Ｈｍ 勾配：２０分間に１０％Ｂから２５％Ｂまで、３０分間
に５０％Ｂまで 成　分　　　　　　保持時間（分） Ａ　　　　　　　　　　２２．６２ 八−偽アグリコン　　７．２７ ８　　　　　　　　１２．６５ Ｃ１０，６２ Ｄ　　　　　　　　　２５．４７ Ｅ　　　　　　　　　１９．２２ Ｆ　　　　　　　　　１６．３０ ０　　　　　　　　１８．９２ ８　　　　　　　　１６．３０ Ｊ　　　　　　　　　　１７．５０ システム■ カラム：４．６×Ｊ、ＯＯ朋、０ＤＳ （ＡＱ−３０１、Ｓ−５、ワイ・エム・シー・インコー
ホレイテッド） 溶媒：　ＣＨ３０Ｈ：ＣＨ，ＣＮ：０．０５％ＮＨ４０
Ａｃ（Ｉ１２０）３５　：　３５　：　３０　−　ｐＨ
６，０流速＋２．０Ｕ１２／分 操作時ｖ１：１０分 検出：ＵＶ、２５Ｏｒ＋ｎ＋ 欣　　　　保持時間（分） Ｆ　　　　　　　４．．３２ Ｈ３，４，２ Ｊ　　　　　　　３．４２ Ａ８３５４３成分は、水に溶解しないが、メタノール、
エタノール、ジメチルポルムアミド、ジメチルスルホキ
シド、アセトニトリル、アセトンなどの溶媒に溶解する
。

Ａ３３５４３、ならびにＡ３３５４３ＡＳＡ８３５４３
Ｂ、Ａ３３５４３Ｃ，Ａ３３５４３Ｄ。

Ａ３３５４．３Ｅ、Ａ３３５４３Ｆ、Ａ３３５４．３Ｇ
、Ａ３３５４３ＨおよびＡ３３５４３Ｊなとの個々の成
分を反応させて種々の塩を形成させることができる。こ
れらの化合物のこのような形態の全てが本発明の一部で
ある。Ａ３３５４３の塩は、例えばＡ３３５４３の分離
および精製に有用である。また、いくつかの塩は改良さ
れた水への溶解性を有する。

Ａ３３５４３塩は塩の調製のための常法を用いて調製さ
れる。例えば、Ａ３３５４３を適切な酸で中和して酸付
加塩を形成させることができる。

酸付加塩が特に有用である。代表的かつ適切な塩として
は、例えば、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、コハク酸、ク
エン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、コール酸、パモ
酸（ｐａｍｏｉｃ　ａｃｉｄ）、ムチン酸、グルタミン
酸、樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒
石酸、ギ酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、
メタンスルホン酸、ペンセンスルホン酸、ソルビン酸、
ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸のような有機酸および無
機酸との通常の反応によって形成される塩が挙げられる
。

有用性についての記述においてＪＡ８３５４３Ａ３３４
３う用語は、好ましくは、Ａ３３５４３、個々の成分Ａ
３３５４３Ａ、、Ａ３３５４３Ｂ、Ａ３３５４３Ｃ，Ａ
３３５４３Ｄ、Ａ３３５４３Ｅ、Ａ３３５４３Ｆ、Ａ３
３５４３Ｇ、Ａ３３５４３Ｈ，およびＡ３３５４３Ｊな
らびにこれらの酸付加塩からなる群から選択されたもの
を指す。

発酵産物Ａ３３５４３は、ＮＲＲＬ　　１８３９５、Ｎ
ＲＲＬ　　１８５３７、ＮＲＲＬ　　１８５３８および
ＮＲＲＬ　　１８５３９、またはＡ３３５４３を産生す
るその突然変異体から選択された新規な微生物サツカロ
ポリスポラ・スピノサ（Ｓａｃ、ｃｈａｒｏｐｏｌｙｓ
ｐｏｒａ　５ｐｉｎｏｓａ）の菌株を、適切な培養培地
中、水中の好気性条件下で、回収可能な量のＡ３３５４
３が産生されるまで培養することによって製造される。

発酵法に詳しい者なら認識しているであろうが、Ａ３３
５４３の成分比は産生に用いた発酵条件によって変化す
るであろう。通常、Ａ３３５４３はＡ３３５４３Ａを約
８５〜９０％、Ａ８３５４３Ｄを約１０〜１５％および
少量のＡ３３５４３ＢＸＣ，Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＪな
らびにＡ　８３５４−３　Ａ偽アグリコンを含有する。

後記のようにして、Ａ３３５４３Ａ、Ａ３３５４３ＢＸ
Ａ８３５４３ＣＳＡ８３５４３Ｄ、Ａ３３５４．３Ｅ、
Ａ３３５４３Ｆ、Ａ３３５４３Ｇ、Ａ８３５４３　Ｈお
よびＡ　８３５４３　ＪならびにＡ３３５４３Ａ偽アグ
リコンのような個々の成分を分離し、単離することがで
きる。

すなわち、本発明は、ＮＲＲＬ　　１８３９５、ＮＲＲ
Ｌ　１８５３７、ＮＲＲＬ　１８５３８、もしくはＮＲ
ＲＬ　　１８５３９、またはＡ３３５４３を産生するそ
の突然変異体から選択されるサツカロポリスポラ・スピ
ノサ株を、同化可能な炭素、窒素および無機塩の供給源
を含む培養培地中、水中の好気性発酵条件下で、回収可
能な量のＡ３３５４３が産生されるまで培養することか
らなるへ８３５４３化合物の製造方法を提供するもので
もある。次いで、当技術分野で自体既知の方法によって
、個々の成分を単離することができる。

本発明は、ＮＲＲＬ　　１８３９５、ＮＲＲＬＩ８５３
７、ＮＲＲＬ　　１８５３８もしくはＮＲＲＬ　　１８
５３９またはＡ３３５４３を産生するその突然変異体か
ら選択された微生物サツカロポリスポラ・スピノサの、
生物学的に精製された培養物をも提供するものである。

これらの微生物は、Ａ３３５４３を産生するが故に有用
である。

以下の記述において好都合なように、菌株を以下のよう
に表示する：Ａ３３５４３．１、Ａ３３５４３．３、Ａ
３３５４３．４およびＡ３３５４３５ｏバージン・アイ
シング（Ｖｉｒｇｉｎ　ｌ５ｌａｎｄｓ）から人手した
土壌試料から単離した培養物（Ａ８３５４３）の化学的
突然変異によって培養物Ａ３３５４３．１を得た。培養
物Ａ３３５４３．３、Ａ３３５４３．４およびＡ３３５
４．３．５は、化学的突然変異によるＡ３３５４３．１
培養物の誘導体から得た。

（以下、余白） 培養物Ａ３３５４３．１、Ａ３３５４３．３、Ａ３３５
４３．４およびＡ３３５４３．５はミツドウェスト・エ
リア・ノーザーン・リージョナル・リサーチ・センター
（Ｎ　ＲＲＬ　）［Ｍｉｄｗｅｓｔ　Ａｒｅａ　Ｎｏｒ
ｔｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃ
ｅｎｔｅｒ、　ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒ
ｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ、　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ
　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
、　１８１５　Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　５
ｔｒｅｅｔ。

Ｐｅｏｒｉａ、　１ｌｌｉｎｏｉｓ、　６１６０４］に
寄託され、その貯蔵培養物コレクションの一部となって
おり、ここから下記受託番号の下にだれでも利用できる
。

Ｎ　ＲＲＬ番号　　　菌株番号 １８３９５　　　　Ａ３３５４３．１ １８５３７　　　　Ａ３３５４３．３ １８５３８　　　　Ａ３３５４３．４ １８５３９　　　　Ａ８．３５４３．５リリー・リサー
チ・ラボラトリーズ（Ｌｉｌｌｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）のメルフ（Ｐｒｅｄｅｒｉ
ｃｋ　Ｐ、ＭｅｒｔＺ）によって、培養物Ａ３３５４３
．１の分類学的研究が行われた。これらの研究によると
、微生物Ａ３３５４３暑、Ａ３３５４３．３、Ａ３３５
４３．４およびＡ３３５４３．５は、サツカロポリスボ
ラ属の新規な種の一員として分類され、３ａｃｃｈａｒ
ｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　５ｐｉｎｏｓａ　ｓｐ、　ｎｏ
ｖ、と命名される。この分類は、直接の研究室比較およ
び類似の種の公表された記載の検討に基づいている。

用いた方法 以下の方法は、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ）種の特徴付けのためのインターナショナル・
ストレプトマイセス・プロジェクト（ＩＳＰ）推奨の方
法［シャーリング（Ｅ、　Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）お
よびゴツトリーブ（Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）、「スト
レプトマイセス種の特徴付けのための方法」、Ｉｎｔ、
　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉ。

１、　１６：３１３−３４０　（１９６６）］、および
ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）種の特徴付けのための
推奨の方法［ゴートン（Ｒ，Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎ）、バ
ーネット（Ｄ、　Ａ、　Ｂａｒｎｅｔｔ）、ハンダーハ
ン（Ｊ、　Ｅ、　Ｈａｎｄｅｒｈａｎ）およびバング（
Ｃ，Ｈ，Ｐａｎｇ）、［ノカルジア・コエリアカ（Ｎｏ
ｃａｒｄｉａ　ｃｏｅｌｉａｃａ）、ノカルジア・オー
トトロフィカ（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａｕｔｏｔｒｏｐｈ
ｉｃａ）、およびノカルジン・ストレイン（Ｎｏｃａｒ
ｄｉｎ　５ｔｒａｉｎ）Ｊ、Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、　２４（ｆ）＋　５４８３　（１９
７４）］である。

ｌ５ＣＣ−ＮＢＳセントロイド・カラー・チャート、標
準サンプルＮｏ、　　２１０６　（Ｎａｔｉｏｎａｌ　
Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆ　５ｔａｎｄａｒｄｓ、　１９５８
．　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ’Ｃｏｍｍ
ｅｒｃｅ、　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ、Ｃ，）を用
い、裏側および気中菌糸それぞれの色の名前を付与した
。

光学顕微鏡および走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を用いて
形態を調べた。

全細胞の加水分解物中の炭水化物およびジアミノピメリ
ン酸（ＤＡＰ）の異性体を、ベラカー等［ベラカ−（Ｂ
、　Ｂｅｃｋｅｒ）、レチェバリアー（Ｍ、　Ｐ、　Ｌ
ｅｃｂｅｖａｌ　１ｅｒ）、ゴートン（Ｒ，Ｅ、　Ｇｏ
ｒｄｏｎ）およびレチェバリアー（Ｊ（、Ｅ、　Ｌｅｃ
ｈｅｖａｌｉｅｒ）、「全細胞加水分解物のペーパーク
ロマ）・グラフィーによるノカルジアおよびストレプト
マイセスの迅速な識別」、Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、　１２．４２１−４２３　（１９６４）］および
レチェバリアー等［レチェバリアー（Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅ
ｃｂｅｖａｌ　１ｅｒ）およびレチェバリアー（Ｉｔ、
　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉａ）、「好気性放線菌の分類にお
ける規準としての化学組成」、Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓ
ｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　２０．４３５−４４３　
（１９７０）コのり０？トゲラフイー法で調べた。

リン脂質は、レチェバリアー等の方法［Ｍ、　Ｐ、　Ｌ
ｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ａｎｄ　Ｈ，Ｌｅｃｈｅｖａｌ
ｉａ、　　ｉｎ　Ａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｌａｂｏ
ｌａｔｏｒｙ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、　Ｄｉｅｔｚ　ａｎ
ｄ　Ｔｈａｙｅｒ（ｅｄｓ、）。

５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　５ｌ）ｅｃｉａｌＰｕｂｌｉｃ
ａｔｉｏｎ　Ｎｏ、６．　ＡｒｌｉＡｒｌｌｎ、　ＶＡ
、　ｐｐ、２２７−２３３（１９８０）］によって測定
した。

メナキノン組成は、クロッベンステッドの方法［Ｒ，Ｍ
、Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ、　　ｉｎ　Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｓ
ｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ、　Ｍ、Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ　
ａｎｄ　Ｄ、Ｅ、Ｍｉｎｎｉｋｉｎ（ｅｄｓ、）、　＋
９８５．　ｐｐ、１７３−１９６］およびコリンズの方
法［Ｍ、　Ｄ、　Ｃｏ１１ｉｎｓ、同書、ｐｐ２６７−
２８５］に従って測定した。

抗生物質に対する耐性は、菌を蒔いたｌ５ＰＮｏ、２寒
天プレートの表面に抗生物質感受性ディスクを当てて測
定した。

デンプン加水分解は、ｌ５ＰＮｏ、４（無機塩−デンプ
ン）寒天プレートでヨウ素を用いてデンプンの存在につ
いての試験を行うことによって測定した。

脂肪酸分析は、ＨＰ５８９８Ａマイクロバイアル・アイ
デンティフィケーション・システム（Ｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ耳ミ
ラー（Ｌ、Ｍｉｌｌｅｒ）およびバーガー（Ｔ、　Ｂｅ
ｒｇｅｒ）、［全細胞脂肪酸のガスクロマトグラフィー
による細菌の同定Ｊ、ＨｅｗＩｅｔＬ−Ｐａｃｋａｒｄ
　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏｔｅ　２２８−４１．
８ｐｐ、　（１９８５）］を用いて行った。

同一の条件下で増殖させた全細胞の凍結乾燥品から脂肪
酸メチルエステルを得た。

主要な成分の分析を２次元的に行い、コンピューター処
理した。主要な成分のプロットの測定値の単位（第１２
図参照）は標準偏差値である。

ミコール酸は、ミンニキンによって提案された方法［ミ
ンニキン（Ｄ、　Ｅ、　Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）、ハッチン
ソン（１，Ｇ、　Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ）およびカルデ
イコツト（Ａ、　Ｂ、　Ｃａ１ｄｉｃｏｔｔ）、ｒ　ミ
コール酸含有細菌のメタノール分解物の薄層クロマトグ
ラフィー」、Ｊ、　ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈＬ刀狙
、　２２１−２３３　（１９８０）］によって測定した
。

培養特性 培養Ａ３３５４３．１は、複合培地および規定培地の両
方でよく増殖した。培養物は、用いた培地全てに気中菌
糸体を産生じた。気中胞子の集合体は主に淡い黄味がか
ったピンク色であったが、多（の培地上では白色であっ
た。

裏側は黄色〜黄褐色であった。特有の色素はなかった。

いくつかの培地中に可溶性の褐色色素が放出されていた
。

これらの培養特性を第６表に示す。

築旦人：Ａ３３５４３．］の培養特性４ＩｓＰ培地３　
　　　良　２６４．１．グレイ　良　２６３．白ＩＳＰ
培地４　　　　良　９２．ｙ白　　　良　２６３．白Ｉ
ｓＰ培地５　　　　優　７３．　ｐ、　ＯＹ　　　優　
３ｔ、　ｐ、　ｙＥピンクＳＰ培地７　　　　優　７７
、　ｍ、　ｙＢｒ　　　優　３１．１）、　Ｙピンク無 無 ■、茶 １、茶 ＡＩＡ寒天５　　　優　８９．　ｐ、　Ｙ　　　優　３
１、ｐ、　ｙＥピンク茶ＡＴＣＣＮｏ、　１７２　　　
優　９２．ｙ白　　　優　３１．　ｐ、　ｙピンク　無
ＴＰＯｃ　　　　　　　　　　　　優　　９０．　　ｇ
Ｙ、　　Ｙ　　　　　　優　　３１．　　ｐ、　　ｙピ
ンク　　無ＴＷＡ’　　　　並９３．ｙグレイ　劣２６
３．白　無ａ３０’Ｃで２１日間インキュベートした。

５放線菌単離寒天、デイフコ（Ｄｉｒｃｏ）。

０　トマトペーストオートミール寒天（Ｔｈｅ　Ａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　ｖｏｌ、　　２゜Ｓ、Ａ、Ｗ
ａｋｓｍａｎ、　ＴＨｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　
Ｗｉｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、、　Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　１
９６１）。

６水道水寒天（Ｇｏｒｄｏｎ、　Ｂａｒｎｅｔｔ、　Ｈ
ａｎｄｅｒｈａｎ　ａｎｄ　Ｐａｎｇ＋前出）０イース
トデキストロ−ス ｄ　Ｐａｎｇ，前出）。

形態学的特徴 培養Ａ８３５４３．１は発酵液中に崩壊した大きく広が
った基底菌糸体を産生ずる。培養物を寒天培地で増殖さ
せ場合は、崩壊は観察されなかった。

培養物をＩＳＰ培地１で平板培養した場合は、中央が盛
り上がっており、裏側が黄褐色である、直径８〜ｌＱｉ
ｍの白色円形コロニーが観察された。

はとんどの培地上に充分に形成された気中菌糸が存在し
た。気中菌糸は、かぎ状および開いた環のように配列し
た胞子の長い鎖に分れた。螺旋体も観察されたが、それ
らは短くかつ不完全であった。

一般的形態はＲｅｃｔｕｓ−ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｓ（Ｒ
　Ａ　）であった。

気中菌糸は、胞子鎖に多くの空間を有する特有のビーズ
様の外観を有していた。この特徴は、胞子の鞘（ｓｌｌ
ｅａｔｈ）が胞子鎖を包んでいることを示した。この胞
子の鞘は極めて特有なとげて覆われていた。このとげは
長さが約１μｍであり、端部が丸くなっていた。

胞子の形状は長方形であり、大きさは平均約１゜ＩＸｌ
、５μ肩であった。胞子鎖の長さは胞子５０個をゆうに
越えていた。ジグザグ形の特徴、硬化（ｓｃｌｅｒｏｔ
ｉａ）、胞子外または運動型細胞は観察されなかった。

生理学的特性 培養Ａ３３５４３．１は以下の炭水化物から酸を生成し
た：アドニトール、Ｄ−アラビノース、エリスリトール
、フルクトース、グルコース、グリセロール、マンニト
ール、マンノース、リボースおよびトレハロース。

この培養物は以下のものから酸を生成しなかった：Ｉ、
−アラビノース、セロビオース、セルロース、デ牛スト
リン、ダルシトール、エタノール、ガラクトース、グリ
コーゲン、イノシトール、イヌリン、ラクトース、マル
トース、メリシトース、メレビオース、α−メチル−Ｄ
−グルコシド、ラフィノース、Ｌ−ラムノース、サリシ
ン、ソルビトール、Ｌ−ソルボース、スクロース、キシ
リトールまたはキシロース。

ガラクトース、マルトースおよびメリシト−スについて
増殖が観察されたが、これらの炭水化物から酸は生成さ
れなかった。

培養Ａ３３５４３．１は以下の有機酸のナトリウム塩を
利用した・酢酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、乳酸
塩、リンゴ酸塩、プロピオン酸塩、ピルビン酸塩および
コハク酸塩。この培養物は安息香酸塩、ムチン酸塩、シ
ュウ酸塩または酒石酸塩を利用しなかった。

Ａ３３５４３１は、アラントイン、リンゴ酸カルシウム
、カゼイン、エラスチン、馬尿酸塩、ヒポキサンチン、
テストステロン、Ｌ−チロシンおよび尿素を分解した。

アデニン、エスクリン、グアニン、デンプンまたは牛サ
ンチンを分解することができなかった。

Ａ３３５４３．］は、カタラーセ、ホスファターゼ、ウ
レアーゼおよびＨ２Ｓを生成した。ゼラチンを液化し、
硝酸塩を減少さぜた。リゾチームに対して耐性ではなく
、メラニン色素類を生成しなかった。スキムミルクをペ
プトン化および加水分解しなかった。Ａ３３５４３．１
は、１１％以下のＮａＣρｌこ対して耐性があった。５
０℃、８時間では生存することができず、１５６Ｃ〜３
７°Ｃの温度で増殖した。

Ａ３３５４３．１は、セファロチン（３０μｇ）、ヘニ
シリンＧ（１０単位）およびリフアンピン（５μｇ）に
耐性であった。バシトラシン（１０４１位）、ゲンタマ
イシン（１０μ９）、リンコマイシン（２μｇ）、ネオ
マイシン（３０μｇ）、オレアンドマイシン（１５μ９
）、ストレプトマイシン イクリン（３０μｇ）、トブラマイシン（１０μｇ）お
よびバンコマイシン（３０μいに感受性であった。

細胞壁分析 加水分解したＡ８３５４３．１の全細胞は、メソ−ジア
ミノピメリン酸を含有していた。全細胞抽出物における
診断用糖類はガラクトースおよびアラビノースであった
。すなわち、Ａ８３５４３１は、■型細胞壁パターンお
よびＡ型動パターン（レチェハリアー等、前出）を有す
る。この細胞は、ミコール酸を含有していない。

全細胞のリン脂質測定によって、ホスファチジルコリン
およびカルシオリピンの存在が示された。

ホスファチジルエタノールアミンは検出されなかった。

すなわち、八８３５４３．１はｐＨｌ型リン脂質パター
ン［レチェバリアー（Ｍ．　Ｐ．　Ｌｅｃｈｅｖａｌ　
ｉｅｒ）、スターン（Ａ．　Ｅ．　Ｓｔｅｒｎ）および
レチェバリアー（Ｉｔ．　ＡＬｅｃｈｅｖａＩｉｅｒ）
、［放線菌（Ａｃｔ　ｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）の分類学
におけるリン脂質」、ＡｃＬｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ，　
Ｚｂｌ．　ＢａｋｔＳｕｐｐｌ．　１１，　Ｋ．Ｐ．Ｓ
ｃｈａａｌ　ａｎｄ　Ｇ．Ｐｕｌｖｅｒｅｒ（ｅｄｓ）
。

Ｇｕｓｔａｖ　Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ，　Ｎｅ
ｖ　Ｙｏｒｋ，　１９８１］を有している。

検出された主要なメナキノンはＭＫ−９（Ｈ，）であっ
た。微量のＭＫ−９（Ｈｅ）が観察された。

ファージ培養 多くのストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔ
ｅ）、サツカロポリスポラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙ
ｓｐｏｒａ）およびアミコラドブシス（Ａｍｙｃｏｌａ
ｔｏｐｓ　ｉｓ）ファージをＡ８３５４３、１にプレー
トした。プラークは観察されなかった。

Ａ３３５４３．１の固有特性 上述のように、培養Ａ３３５４３暑は、■型細胞壁パタ
ーンおよびＡ型全細胞糖パターンを有する。以下の１３
種の属は、この細胞化学的パターンを有する。ノカルジ
ア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、ロドコノマイコバクテリウ
ム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ファエノポリス
ポラ属（Ａｃｔ　１ｎｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ）、アミコ
ラ−ｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）。これらの属は、ミコール
酸の存在または非存在、脂肪酸組成、ならびにリン脂質
およびメナキメンタイプによって識別される。ファエニ
ア、シュートノカルシアおよびサツカロポリスボラは、
Ａ３３５４３．１と同一の化学分類学特性を有するが、
これらの属は、形態学的特徴および培養特性においてＡ
３３５４３．１と異なる。

ファエニア属（ミクロポリスボラ属）は、気中菌糸およ
び基底菌糸の両方に生じる滑らかな胞子および短い胞子
鎖を有している。その気中菌糸はまばらで、白色である
。この属は好熱性であり、６０°Ｃで増殖する。Ａ３３
５４３．１は、これらの性質のいずれも有しておらず、
従ってファエニア属とは異なる。

シュートノカルシア属は、気中菌糸および基底菌糸の両
方に胞子を有する。求頂性の発芽および分芽胞子によっ
て識別される。特徴的な菌糸のジクザグ形態を有する。

菌糸は区画されておらず関節で接合されていると記され
ている［ヘンセン（ＡＨｅｎｓｓｅｎ）およびシャツｙ
　−（Ｄ、　５ｃｈａｆ　ｅｒ）、「シュートノカルシ
ア属の訂正解説」（ヘンセン）および「新規な種シュー
トノカルシア・スピノサ（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉ
ａ　５ｐｉｎｏｓａ）の解説」（シャファー）、Ｉｎｔ
、　Ｊ、　５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　２１：２
９−３４　（１９７１）参照］。この属は非常にゆっく
り増殖する。無糸分裂はないかまたはまれに観察される
。Ａ３３５４３．１はこれらの性質のいずれも有してい
ない。

サツカロポリスポラ属は、胞子箱および胞子鎖の特有の
ビーズ様外観によって特徴付けられる。

この特徴は八８３５４３．１において非常に顕著である
。サツカロポリスポラ属についても、無糸分裂が観察さ
れた。このタイプの種Ｓ、　ｈｉｒｓｕｔａを、さとう
きびバガス（ｓｕｇａｒ−ｃａｎｅ　ｂａｇａｓｓｅ）
から単離した。Ａ３３５４３．１が得られた栽培養物は
糖粉から単離した。Ａ３３５４３．］はこの属の多くの
特性を有しているので、サツカロポリスポラ属の菌株で
あると思われる。

サツカロポリスポラ属の唯一正式に公表されている種は
、Ｓ、　ｅｒｙｔｈｒａｅａおよびＳ、　ｈｉｒｓｕｔ
ａである。

既知の亜種は、Ｓ、ｈｉｒｓｕｔａ　５ｕｂｓｐ、　ｔ
ａｂｅｒｉおよびＳ、ｈｉｒｓｕｔａ　５ｕｂｓｐ、　
ｋｏｂｅｎｓｉｓである。Ａ３３５４３．１は、気中お
よび裏側の色または可溶性色素の生成においてこれらの
菌株と異なる。

生化学的な類似性は、できる限り多くの生化学的測定に
基ついて類似係数の表を作成することによって調べた。

シャツカードＵａｃｃａｒｄ）の係数Ｓｊおよび普通の
適合係数８８□を用いた［クリロヴイッツ（Ｗ、　Ｋｕ
ｒｙｌｏｗｉｃｚ）、パス牛−ヴイッツ（Ａ、　Ｐａｓ
ｚｋｉｅｗｉｃｚ）、つ゛オツニッカ（Ｌ　Ｗｏｚｎｉ
ｃｋａ）、タルツアトゥコヴスキー（Ｗ、　Ｋｕｒｚａ
ｔｋｏｗｓｋｉ）およびスツルガ（Ｔ、Ｓｚｕｌｇａ）
、「ストレプトマイセスの数値分類学」、Ｐａ１ｉｓｈ
　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｗａｒｓ
ａｗ、　］９７５．　ｐ、３７］。

第７表にこれらの類似係数を示す。

Ａ３３５４３．１　　　　　　　　１００　１００Ｓ、
　ｅｒｙｔｈｒａｅａ Ｓ、ｈｉｒｓｕｔａ Ａ８３５４３．１および既知のサツカロポリスボラ種の
脂肪酸分析によって、各々、飽和脂肪酸および分枝鎖状
脂肪酸の両方を有することがわかった。Ａ３３５４３．
１の脂肪酸組成は、他の種のものと類似しているが、同
一ではない。第８表で、Ａ３３５４３．１および既知の
サツカロポリスボラ種の脂肪酸組成を比較する。

脂肪酸　Ａ３３５４３．Ｉ　Ｓ、ｅｒｙｔｈｒａｅａ　
Ｓ、ｈｉｒｓｕｔａ　　５ｕｂｓｐ。

ｋｏｂｅｎｓｉｓ １５：０　イソ １５：０　アンチイソ １６：０　イソ ＋６：１　　）ランス　９ １７：１　イン　Ｆ １７：１　イソ　Ｇ １７：０　イソ １７°０　アンチイソ １７：Ｉ　　Ｂ １．７：ＩＣ １７：０ １６：１　２０＋１ １８−１　イン　Ｆ ＴＢＳＡ　　ＩＯＭｅ １１．８０ ０．６４ ２２．４７ １．１５ 】７５９ １５．３０ ４．７７ １．６５ ２．７４ １．２７ ７．５７ １．１５ ２５、７０ ７．９７ １３．３７ １２．４６ １５．４４ １．３８ １５．６１ １９、０５ ２．６３ ３．７５ ２６、２６ １４．１９ １．９０ １、Ｏｊ ２．０７ １１．３１ ２．７０ １．４３ ６．８３ １．７７ ６．８２ １９、４１ １２、７２ ０．６７ １．８１ ０．９４ ４．８５ ７．４７ １．００ ’　ＴＢＳＡ−ラベルクロステアリン酸第８表に示した
脂肪酸組成の主要成分の分析は充分なばらつきを示して
おり、培養物が同−腐肉の全く異なった種であることを
示唆している。第８表のデータの主成分のプロットを第
１２図に示す。

第９表において、Ａ３３５４３．１と既存のサツカロポ
リスポラ種および亜種との生理学的特性を比較する。

アデニン エスクリン デンプン キサンチン １ランドイン　　　　　＋ ＮａＣり耐性（％）１１ 以下の糖からの ガラクトース スクロース が ＋ 十 十 ＋ Ｄ 十 十 ＋ ＋ 木ＮＤ−未測定 この比較によって、Ａ３３５４３．１は、前述のサツカ
ロポリスボラの種とは充分に異なっており、サツカロポ
リスボラの新規な種であることがわかり、サツカロポリ
スボラ・スピノサ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒ
ａ　５ｐｉｎｏｓａ）という名称が選・ばれた。スピノ
サ（ｓｐｉｎｏｓａ）という名称は、この種のとげがあ
る胞子装飾を反映している。

Ａ３３５４３．３、Ａ３３５４３．４およびＡ３３５４
３．５菌株は、巨視的に見るとＡ３３５４３．１菌株を
充分に類似しており、サツカロポリスポラ・スピノサの
菌株として分類される。この４種の菌株は、産生するＡ
３３５４３の量が異なる。Ａ３３５４３．３菌株は、Ａ
３３５４３．１菌株に比べ約４倍のＡ３３５４３を産生
じ、Ａ３３５４、３．４　オヨびＡ３３５４３．５ｍ株
は、Ａ３３５４３．１菌株の約８〜９倍産生ずる。

他の微生物の場合と同様、本発明のＡ３３５４３を産生
する培養物サツカロポリスボラ・スピノサＮＲＲＬ　　
１８３９５、ＮＲＲＬ１８５３７、ＮＲＲＬ　　１８５
３８およびＮＲＲＬ　　１３５３９の性質は変異の対象
となる。即ち、当技術分野において知られている物理的
および化学的方法によってこれらの菌株の突然変異体を
得ることができる。例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−
Ｎニトロソグアニジンのような化学物質による処理によ
って、他の菌株を得ることができる。回収可能な量のＡ
３３５４３を産生するという性質を保持しているサツカ
ロポリスポラ・スピノサＮＲＲＬ　　１８３９５、ＮＲ
ＲＬ　　１８５３７、ＮＲＲＬ］、８５３８およびＮＲ
ＲＬ　　１８５３９菌株の天然の、および銹発された突
然変異体は、本発明の一部を構成する。

サツカロポリスポラ・スピ／す培養物の増殖に用いる培
養培地は、多数の培地のいずれであってよい。しかし、
製造の経済性、最高収量、および生成物単離の容易性の
面から、ある種の培養培地が好ましい。すなわち、例え
ば、大規模発酵において好ましい炭素供給源は、グルコ
ースおよびマルトースであるが、リボース、キシロース
、フルクト−ス、カラクト−ス、マンノース、マンニト
ール、水溶性デンプン、ポテトデキストリン、オレイン
酸メチル、大豆油のような油などを用いることもできる
。

好ましい窒素供給源は、綿の実の粉末、ペプトン化ミル
クおよび温浸大豆のあらびき粉であるが、魚のあらびき
粉、コーン浸漬リカー、イースト抽出物、酵素−加水分
解したカゼイン、ビーフ抽出物などを用いることもでき
る。

培養培地に添加することができる栄養無機塩は、亜鉛、
ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム
、塩素、炭酸、硫酸、硝酸などのイオンを生成しうる通
常の水溶性塩類である。

微生物の増殖および成長に必要な必須微量元素も培養培
地中に入れるべきである。通常、このような微量元素は
、他の培地成分中の不純物として、微生物増殖の際の要
求を満たすに充分な量で見いだされる。

通常、泡立ちが問題である場合は、少量（すなわち、０
．２ｍＱ／のの消泡剤（ポリプロピレングリコールなど
）を大規模発酵の培地に加えてもよい。

しかし、Ａ　８３５４３を製造する培養物の場合、慣用
の消泡剤はＡ３３５４３の産生を抑制する。

培地に大豆油またはプルロニックＬ−１０１（ＢＡＳＦ
）を含有さぜる（１〜３％）ことによって、泡立ちを制
御することができる。泡立ちが増大する場合にはさらに
油を添加してもよい。

特定のＡ３３５４３成分の割合（％）は、培地を変える
ことによって変化しうる。例えば、バリン、イソ酪酸ま
たはプロピオン酸の添加によって、産生されるＡ３３５
４３Ｄの割合（％）が増大する。

かなりの量のＡ３３５４３の製造には、撹拌したバイオ
リアクターでの水中好気性発酵が好ましい。／Ｊ）■の
Ａ３３５４３は振盪フラスコ培養で得てもよい。胞子形
の微生物を大きいバイオリアクターに接種すると通常産
生の時間的ずれが生じるので、栄養成長接種物を用いる
のが好ましい。この栄養成長接種物は、少量の培養培地
に胞子形の微生物または微生物の菌糸体フラグメンｊ・
を接種し、新鮮な、活発に増殖している微生物培養物を
得ることによって調製される。次いで、この栄養成長接
種物を大きいバイオリアクターに移す。栄養成長接種物
の培地は大規模発酵に用いるものと同じであってよいが
、他の培地も適している。

約り４℃〜約３３°Ｃの温度で増殖させると、Ａ３３５
４３産生微生物によってＡ　８３５４．３が産生される
。Ａ　８３５４．３産生の最適温度は約２８〜３０°Ｃ
である。

水中好気性培養法での常法通り、培地を通常のタービン
羽根ポンプで撹拌しながら、容器の底から滅菌空気を吹
き込む。通常、曝気速度および撹拌速度は、０．３４気
圧の内部容器圧での空気飽和が３５％あるいはそれ以上
、好ましくは５０％あるいはそれ以上である溶解酸素の
レベルを維持するのに充分なものであるべきである。

Ａ　８３５４．３成分の生成は、ブロスの抽出物を試験
することによって発酵中に追跡することができる。実施
例１に記載するようなシステムを用いるＨ　Ｐ　Ｌ　Ｃ
は、このための有用な検定法である。

水中好気性発酵条件下での産生に次いで、当技術分野で
用いられる方法により発酵培地からＡ８３５４３成分を
回収することができる。Ａ３３５４３産生微生物の発酵
中に産生されるＡ３３５４３は、菌糸体およびブロスの
両方で生じる。Ａ３３５４３は親油性である。したがっ
て、発酵で相当量の油を用いると、全ブロスの抽出がよ
り効果的になる。極く少量の油を用いた場合、Ａ３３５
４３の大部分が菌糸体中にある。その場合、培地を始め
に濾過して菌糸体の集合体（バイオマス）とブロスを分
離することによってＡ３３５４３の回収をさらに効果的
に行う。

種々の方法によってバイオマスからＡ３３５４３を回収
することができる。好ましい方法としては、分離したバ
イオマスを水で洗浄して残存するブロスを除去し、Ａ３
３５４３が可溶である極性溶媒（例えば、メタノールま
たはアセトン）とバイオマスとを混合し、溶媒を分離お
よび濃縮し、この濃縮物を非極性溶媒で抽出し、そして
／または逆相シリカゲル吸着剤（例えば、ＲＰ−Ｃ８ま
たはＲＰ−Ｃ１８）もしくは多孔性ポリマー（例えば、
ＨＰ−２０）などに吸着させる方法が挙げられる。

適当な溶媒（例えば、少量のＴ　ＨＦを含有するアセト
ニトリル：メタノール混合液）を用いて活性物質を吸着
剤から溶離する。

同様の方法で、Ａ　８３５４．３を個々の成分へ８３５
４３Ａ、Ａ３３５４３Ｂ、、Ａ３３５４．３Ｃ１Ａ８３
５４．３Ｄ、Ａ３３５４．３Ｅ、Ａ３３５４３Ｆ、Ａ３
３５４３Ｇ、Ａ３３５４３ＨおよびＡ３３５４３Ｊ、な
らびにＡ３３５４３Ａ偽アグリコンに分離することがで
きる。好ましい分離法としては、逆相シリカゲル（Ｃ＋
ｅまたはＣ８）クロマトグラフィー法が挙げられる。

別法では、培地成分および菌糸体を含む培養固形物を、
抽出または分離をすることなく、好ましくは水を除去し
た後に、Ａ　８３５４．３の供給源として用いることが
できる。例えば、Ａ３３５４３の産生の後、凍結乾燥、
ドラム乾燥、または共沸蒸留と乾燥によって、全発酵ブ
ロスを乾燥してもよい。次いで、この乾燥ブロスを直接
、例えば飼料プレミックスに直接混合して、用いること
ができる。

殺虫および殺ダニ活性 本発明の化合物は、昆虫およびダニの抑制に有用である
。したがって、本発明は、昆虫またはダニを抑制する量
のＡ３３５４３化合物を昆虫またはダニの生息場所に適
用することからなる昆虫またはダニを抑制する方法を提
供するものである。

Ａ３３５４３化合物は多くの昆虫およ゛びダニに対して
活性を示す。さらに具体的には、本発明化合物は、鱗翅
目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）の昆虫の１種である南部
アワヨトウの幼虫（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ａｒｍｙｗｏｒ
ｍ）に対して活性を示す。この目に属する他の代表的な
種類としては、ヒメハマキ（ｃｏｄｌｉｎｇ　ｍｏｔｈ
）、ネキリムソ（ｃｕｔｗｏｒｍｓ）、イガ（ｃｌｏｔ
ｈｅｓ　ｍｏｔｈｓ）、インディアンミールモス（Ｉｎ
ｄｉａｎｍｅａｌ　ｍｏｔｈ）、ハマキムシ（ｌｅａｆ
　ｒｏｌｌｅｒｓ）、オオタバコガの幼虫（ｃｏｒｎｅ
ａｒｗｏｒｍ）、コツトンボウルウオーム（ｃｏｔｔｏ
ｎ　ｂｏｌｌｗｏｒｍ）、アワツメイガ（Ｅｕｒｏｐｅ
ａｎ　ｃｏｒｎ　ｂｏｒｅｒ）、アオムシ（ｉｍｐｏｒ
ｔｅｄ　ｃａｂｂａｇｅｗｏｒｍ）、イラクサキンウワ
バ（ｃａｂｂｂａｇ　１ｏｏｐｅｒ）、ピンクボウルウ
オーム（ｐｉｎｋ　ｂｏｌｌｗｏｒｍ）、ミノムシ（ｂ
ａｇｗｏｒｍ）、東部テンマ＝６０ フケムシ（Ｅａｓｔｅｒｎ　ｔｅｎｔ　ｃａｔｅｒｐｉ
ｌｌａｒ）、サトウニブウオーム（ｓｏｄ　ｗｅｂｗｏ
ｒｍ）およびフォールアーミーウオーム（ｆａ］Ｉ　ａ
ｒｍｙｗｏｒｒｎ）が挙げられる。

本発明化合物は、同翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）の昆虫
の１種であるコツトンアリマキ（ｃｏｔｔｏｎ　ａｐｈ
ｉｄ）に対しても活性を示す。同翅目の他の種類として
は、ヨコバイ（ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒｓ）、プラントポ
ツパー（ｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒｓ）、ヨーロッパナシ
キジラミ（ｐｅａｒ　ｐｓｙｌｌａ）、アップルサッカ
ー（ａｐｐｌｅ　５ｕｃｋｅｒ）、カイガラムシ（ｓｃ
ａｌｅ　１ｎｓｅｃｔｓ）、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆ
ｌｉｅｓ）、アワフキ（ｓｐｉｔｔｌｅ　ｂｕｇｓ）、
ならびにその他多数の宿主特異的なアリマキ種が挙げら
れる。

さらに、Ａ３３５４３化合物は、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒ
ａ）の１種であるサシバエ類（ｓｔａｂｌｅ　ｆｌｉｅ
ｓ）、クロバエ類（ｂｌｏｗ　ｆｌｉｅｓ）および蚊に
対して活性を示す。この目の他の種類としては、普通の
イエバエ（ｈｏｕｓｅ　ｆｌｙ）が挙げられる。

Ａ３３５４３化合物は昆虫およびダニの生息数を減少す
るのに有用であり、昆虫またはダニを不活化させる有効
量のＡ３３５４３化合物を生息場所に適用することから
なる昆虫またはダニの生息数を抑制する方法に用いられ
る。

昆虫またはダニの「生息場所」とは、昆虫もしくはダニ
か生息しているかまたはそれらの卵が存在している環境
を指し、それらを取り巻く空間、それらが食へた食物、
またはそれらが接触した物を包含する。例えば、植物を
摂取する昆虫またはダニは、これらの昆虫またはダニが
食べるかまたは存在する植物の部分（特に葉）に活性化
合物を適用することにより抑制することができる。

本発明化合物は、織物、紙、貯蔵穀物、または種に活性
化合物を適用することによって、これらの物質を保護す
るのにも有用である。

「昆虫またはダニを抑制する」という用語は、昆虫もし
くはダニの生存数の減少かまたは昆虫もしくはダニの卵
の生存数の減少を意味する。ある化合物によって達成さ
れる減少の程度は、もちろん、化合物の適用量、使用し
た実際の化合物、および標的となる昆虫またはダニの種
類による。少なくとも、昆虫を不活化させる量またはダ
ニを不活化させる量を用いるべきである。

［昆虫を不活化させる量］および［ダニを不活化させる
ｆｆ１Ｊという用語は、処置される昆虫またはダニの数
の測定可能な減少を生じるのに充分な量を表すために用
いる。一般に、活性化合物約１〜約］、　ＯＯＯｐｐｍ
（または０．０１〜１　ｋｇ／ｈａ）の範囲の量が用い
られる。

好ましい具体例としては、本発明は、昆虫を不活化させ
る有効量の本発明のＡ３３５４３化合物を植物に適用す
ることからなる、感受性の鱗翅目の昆虫を抑制する方法
に関する。

他の好ましい具体例としては、本発明は、有害虫を抑制
する有効量のＡ３３５４３化合物を経口的または非経口
的に動物に投与することからなる、動物において双翅目
のサシバエ（ｂｉｔｉｎｇ　ｆｌｉｅｓ）ヲ抑制する方
法に関する。

ダニ／昆虫スクリーニング Ａ３３５４３化合物を、以下のダニ／昆虫スクリーニン
グによって殺ダニ活性および殺昆虫活性について調べた
。

被験化合物をそれぞれ、ｒＴｏｘｉｍｕｌ　ＲＪ（スル
ポン酸塩／非イオン系界面活性剤混合物）２３７および
ｒＴｏｘｉｍｕｌ　Ｓ」（スルホン酸塩／非イオン系界
面活性剤混合物）１３ｇを１リツトル当たりに含有する
アセトン／アルコール（］：］）混液に溶解して、製剤
化した。次いで、これらの混合物を水で希釈し、標示し
た濃縮物を得た。

ナミハダニ［Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｕｒｔｉｃａｅ
　Ｋｏｃｈコおよびコツトンまたはメロンアリマキ［Ａ
ｐｈｉｓ　ｇｏｓｓｙｐｊｉＧｌｏｖｅｒ］をカポチャ
子葉に導入し、二葉の表面に定着させた。同し処理ポッ
トの他の植物は寄生されない状態においた。次いて、デ
ビルバイス噴霧スプレー（ＤｅＶｉｌｂｉｓｓ　ａｔｏ
ｍｉｚｉｎｇ　５ｐｒａｙｅｒ）を用いてｌ０ｐｓｉで
葉に被験溶液５Ｒσをスプレーした。

流れ落ちるまで葉の両表面を被覆し、次いで、１時間乾
燥させた。次に、２つの寄生していない葉を切除し、南
部アワヨトウの幼虫［５ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｅｒｉｄ
ａｎｉａ　Ｃｒａｍｅｒ］を入れたベトす皿中に入れた
。

特記したこと以外は、同様の製剤および評価方法を用い
て、他の昆虫についても評価した。

標準の暴露期間が経過した後、致死率（％）を評価した
。結果を以下の表に示す。６表では、以下の略語を使用
している。

ＣΔ　　コツトンアリマキ　　　　　Ａｐｈｉｓ　ｇｏ
ｓｓｙｐｉｉＣＢＷ　　コツトンボウルウオーム　　Ｈ
ｅｌ　１ｏｔｈｉｓ　ｚｅａ処　置　日数°　使用量（
ｐｐｍ）　　抑制率（％）ｂ局所的’　　１　　　　１
．００　　２０．００５．００　１００．００ １０．００　１００．００ ５０．００　１００．００ １００．００　１００．００ （第１０表の続き） 食物６ 局所的。

食物 １．００ ５．００ １０．００ ５０．００ １００．００ １０、　ＯＯ ５０，００ ｉｏｏ、ｏ。

Ｏ，５０ １，００ ５，００ ｔｏ、ｏ。

５０、　Ｏ０ １００，００ ０，５０ １，００ ５，００ １０，００ ３０，００ ｔｏｏ、ｏ。

１００．００ １００．００ １００、’ＯＯ ０，００ ０，００ ３０，００ １０，００ ４０，００ ８０、Ｏ０ １００，００ １００，００ ７０，００ １５，００ ４５，００ １００，００ １００，００ °処置から観察までの日数。

ｂ２回の試験の平均。

０製剤化したＡ３３５４３Ａ　　ｌｘ（！で処置した。

４食物はＡ３３５４３Ａで表面処理し、乾燥させ、そし
て食させた。

０卵はＡ３３５４３Ａで局所的に処理し、対照卵が完全
に畔化するまで維持した。

ｓ５（ｄ） ３５（ｅ） ５（ｇ） ５ｇ（ｄ） ２ｇ（ｅｆ） ０（ｇ） ０（ｇ） １００（ａ） ８０（ｃ） ８５（ｂｃ） ９０（ａｃ） ５８（ｄ） ０（ｇ） ０（ｇ） １００（ａ） １００（ａ） ９３（ｂｅ） １００（ａ） １００（ａ） ０（ｇ） ２０（ｆ） １００（ａ） １００（ａ） １００（ａ） １００（ａ） １００（ａ） ９５（ａｂ） ８０（ｃ） ’（）内の同一文字の処置は０．０５レベルで似ている
。

２１回当たり幼虫２０匹で４回反復する局所的ピペット
法；処置から観察まで１日。

新生　小葉／　　　３ ツルナシインゲンマメ０ ５．００ １０．００ ５０、００ １００．００ 新生 局所的４ １．００ ５．００ ｔｏ、　ｏ。

５０．００ １００．００ 新生　小葉／　　　４ ツルナシインゲンマメ０ ０．５０ １．００ ５．００ ５０、００ ２齢 局所的６ １０、００ １００、００ １０、００ ４０、００ １００、００ １００．００ ６０、００ １００、００ ＬＯＱ　　００ ｔｏｏ、　ｏ。

６６、６７ １００、００ ｔｏｏ、　００ ＋、００．００ ０．００ ０．００ ８０、００ １００．００ ２齢　小葉／　　　４ ツルナシインゲンマメ４ １．００ ５．００ １０、００ ０．００ ｇｏ、　００ １００．００ ３齢　局所的。

３齢　小葉／　　　４ ツルナシインゲンマメ０ ５齢　局所的０ ５齢　小葉／ １．００ ５．００ １０、００ ５０、００ ０．５０ ５．００ ＋０．００ ５０、００ １０、００ ５０、００ １０、００ ０．００ １３．３３ ７３．３３ ０．００ ４０、００ １００、ＤＯ ｔｏｏ、　ｏ。

０．００ ６処置から観察までの日数。

５反復試験した平均。

１回。

ｄ２回。

°３回。

′製剤化したＡ３３５４３Ａ 置した。

処置 局所的５ 使用量（ｐｐｍ） １．００ ５．００ １０．００ ５０．００ ｉｏｏ、。

１１１１１２で局所的に処 抑制率″（％） ０．００ ２０．００ ２０．００ １００、　Ｏ０ １００，００ ａ　１回；処置後３日月に観察した。

５ぺ１・り皿中の成虫に製剤化したＡ３３５４３Ａ（１
村）を注いた。

トウモロコシ カポチャ カポチャ カポチャ ＣＲＷ ７．５ ３．７５ ＳＡＷ　　２５０ ３１、２５ １５．６３ ７．８ １．９ ＳＭ　　　　２５０ ６２．５ ３１、２５ ＣＡ 較するものである。

トウモロコシ　　　　　ＣＬＨ２００ ツルナシインゲンマメ　ＳＡＷ　　１００１２．５ ツルナシインゲンマメ　ＳＭ　　　１００１２．５ カポチャ　　　　　　　ＣＡ　　　１００トウモロコシ
　　　　　ＣＲＷ　　　６第１５表は、野外ポット試験
において、南部アワヨトつの幼虫に対するＡ３３５４３
Ａ処置の効果および持続性をメソミル（ｍｅｔｈｏｍｙ
ｌ）のものと比Ａ３３５４３Ａ Ａ８３５４３Ａ Ａ８３５４３Ａ Ａ８３５４３Ａ メソミル メソミル メソミル メソミル 無 ６致死率（％）で結果を示した。

第１６表は、Ａ３３５４３Ａによって示されるＬＣ５０
値、即ち被験昆虫またはダニを５０％抑制する致死化合
物濃度を、既知の殺虫剤メソミルによって示される値と
比較するものである。

ｍ１６考：Ａ３３５４３のＬＣ５０値８ＣＲＷ ダレインアフィド ３Ｍ ＳＡＷ／小葉 〉２５０ １．３ ５．４ ７１．４ １１．４ ”２４時間後に１００％の抑制を示した最少濃度（微量
滴定プレート上で） ｂ２つのロフトで試験した。

’　ＣＲＷに対する使用量は土壌中の重量による・その
他の全てはスフライ濃度による。

標準的なインビトロでの蚊の幼虫の殺虫試験にオイテ、
Ａ３３５４３の各成分は、ネッタイシマカ（ｙｅｌｌｏ
ｗ　ｆｅｖｅｒ　ｍｏｓｑｕｉｔｏ）［Ａｅｄｅｓ　ａ
ｅｇｙｐｔｉコ幼虫に対して活性である。第１７表およ
び第１８表に、これらの試験における各成分の活性を示
す。

０．０１Ｂ、０．０３１ｂ ０、０１６ ’　０．３１２ｐｐｍで処置した後、２４時間目。

ｂ２つの試験の結果。

野外試験 野外において、Ａ３３５４３Δを評価した。これらの試
験において、Ａ３３５４３Ａは、ブロッコリー上のアオ
ムシ（ｉｍｐｏｒｔｅｄ　ｃａｂｂａｇｅ　ｗｏｒｍ）
およびイラクサキンウワバ（ｃａｂｂａｇｅ　Ｉｏｏｐ
ｅｒ）、ならびに大豆上のビーンルーパー（ｓｏｙｂｅ
ａｎ　Ｉｏｏｐｅｒ）（７５％）およびフォールアーミ
ーウオーム（ｆａｌｌ　ａｒｍｙｗｏｒｍ）　（２５％
）の混合虫に対して活性を示した。

殺虫性組成物 本発明の化合物は、組成物の形態で適用され、これらは
本発明の一部分でもある。これらの組成物は、昆虫また
はタニを不活化する量のＡ３３５４３化合物および植物
学的に許容される不活性担体からなる。活性成分、すな
わちＡ３３５４３化合物は、ｊ）単一のＡ３３５４３成
分、２）２またはそれ以上の成分の混合物、３）分離し
たＡ３３５４３混合物、または４）Ａ８３５／１３が産
生される発酵培地の乾燥部分と一緒のＡ３３５４３、ず
なわち粗製の乾燥発酵ブロスとして存在してもよい。

本発明の組成物は、適用時に水に分散させる濃縮製剤で
あるか、または追加の処理を必要とせずに適用されるタ
スト製剤もしくは顆粒製剤である。

本製剤は、農芸化学の分野では常法である方法および処
方に従っ−Ｃ製造されるが、本発明化合物が１またはそ
れ以上存在するので新規かつ重要な製剤である。

本化合物または粗乾燥物を用いる分散剤は、最も多くは
、本化合物または徂乾燥物の濃縮製剤から調製された水
性懸濁液またはエマルジョンである。このような水溶性
、水懸濁性または乳化性製剤とは、水和剤（Ｗｅｔｔａ
ｂｌｅ　ｐｏｗｄｅｒ）として通常知られている固形物
、または乳剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉａｂｌｅ　ｃ。

ｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）もしくは水性懸濁剤として通常
知られている液状物のいずれかである。

圧縮して水分散性の顆粒を形成させることもできる水和
剤は、活性化合物、不活性担体および界面活性剤の緊密
な混合物からなる。活性化合物の濃度は、通常、約１重
量％から、好ましくは１０重量％から、約９０重回％ま
でである。不活性担体は、通常、アクパルジャイト・ク
レイ、モンモリナイト・クレイ、珪藻土および精製シリ
ケート類の中から選択する。

有効な界面活性剤（水和剤の約０．５％〜約１０％を構
成する）は、硫酸化リグニン、縮合ナフタレンスルホネ
ート類、ナフタレンスルホネート類、アルキルベンセン
スルホネート類、硫酸アルキル類、ならひにアルキルフ
ェノール類のエチレンオキサイド付加物などの非イオン
性界面活性剤などから選ばれる。

本化合物の乳剤は、水混和性溶媒または水−非混和性有
機溶媒と乳化剤との混合物のいずれかである不活性担体
中に溶解された都合の良い濃度、例えば液体１ａに対し
約５０〜約５００ｇ（約１０％〜約５０％に等しい）の
化合物を含有している。

有用な有機溶媒としては、芳香族炭化水素が挙げられ、
特にキシレン類、および石油留分、特に重芳香族ナフサ
などの石油の高沸点ナフタレン分溜およびオレフィン分
溜などが含まれる。他の有機溶媒としては、テルペン系
溶媒、例えばロジン誘導体、シクロヘキサノンなどの脂
肪族ケトン類、および２−エトキシエタノールなどの複
合アルコール類を使用してもよい。

乳剤に適した乳化剤は、上述のような普通の非イオン系
界面活性剤から選ばれる。

水性懸濁剤は、水性ビヒクル中、濃度約５重量％〜約５
０重量％の範囲で分散させた本発明の水不溶性化合物の
懸濁液からなる。この懸濁剤は、本発明化合物を細かく
粉砕し、水および既述の界面活性剤の中から選ばれる界
面活性剤からなるビヒクルに入れ、激しく混合すること
によって調製する。水性ビヒクルの密度および粘性を増
加させるために、無機塩および合成または天然ゴムなど
の不活性成分を加えることもできる。水性混合物を調製
し、それをサンド・ミル、ポール・ミルまたはピストン
型ホモジナイザーなどの装置でホモジナイズすることに
よって、化合物の粉砕と混合を同時に行うのが最も効率
的であることが多い。

さらに、本発明化合物は、顆粒剤として用いることもで
きるが、これは土壌への適用に特に有用である。この顆
粒剤は、通常、化合物を約０．５重量％〜約１０Ｍ量％
含有し、クレイまたは同等の安価な物質のみからなる不
活性担体、またはそれらが大部分を占める不活性担体に
分散されている。

このような製剤は、通常、本発明化合物を適当な溶媒に
溶解し、それを、前もって約０．５〜３ｒｔｕｔｒの範
囲の適当な粒径に調製しておいた顆粒担体に適用するこ
とによって製造される。このような製剤は、担体および
化合物の生地またはペーストを製造し、次いて、粉砕お
よび乾燥して所望の顆粒粒径とすることによって製剤化
することができる。

本発明化合物を含有するダスト製剤は、粉末形態の化合
物を適当なダスト状農業用担体、例えばカオリン・クレ
イ、粉砕火山岩などと緊密に混合することによって簡単
に製造できる。ダスト製剤は、本発明化合物を約１％〜
約１０％含有するのが適当である。

何らかの理由で望ましいと考えられる場合、適切な有機
溶媒、通常は農業化学において広く用いられているスプ
レー油のような非刺激性の石油を用いて、溶液の形で本
発明化合物を散布することも実用的である。

殺虫剤および殺ダニ剤は、一般に液状担体中に活性成分
を分散させた形で適用される。通常、適用割合は担体中
の活性成分の濃度を参考にする。

最も広く用いられている担体は水である。

本発明化合物はエアロゾル製剤の剤形で適用することも
できる。このような製剤では、圧力を発生するプロペラ
ントの混合物である不活性担体に活性化合物を溶解する
かまたは分散する。エアロゾル製剤を容器に充填し、こ
れから混合物が噴霧弁を通って噴霧される。プロペラン
ト混合物は、有機溶媒と混合されていることもある低沸
点ハロゲン化炭素、または不活性ガスもしくはガス状炭
化水素で加圧された水性懸濁液のいずれかからなる。

昆虫およびダニの生息場所に適用する化合物の実際の量
は限定されるものではなく、本明細書に挙げた例に基づ
いて、当業者が容易に決定することができる。普通は、
化合物濃度が１０　ｐｐｍ−５０００ｐｐｍであれば良
好な抑制が得られるものと予想される。本発明化合物の
多くは、１００〜１０００　ｐｐｍの濃度で充分である
。大豆および綿のような農作物については、化合物の適
切な適用量は約０．０１〜１ｋｙ／ｈａであり、通常は
噴霧製剤５〜５０ｇａｌ／Ａである。

化合物を適用する生息場所は、昆虫またはダニが存在し
ている全ての生息場所、例えば、栽培野菜、果物および
実のなる木、ブドウの木および鑑賞用植物などであって
よい。

毒物の作用に耐えるタニの卵の固有の能力の故に、他の
公知の殺ダニ剤のように繰り返し適用して新しく発生す
る幼虫を抑制するのが望ましい。

外部寄生生物撲滅活性 Ａ３３５４３化合物は双翅目の昆虫に対しても活性であ
る。

第１９表〜第２１表に、Ａ３３５４３ＡおよびＡ３３５
４３Ｄのインビトロ試験の結果を示す。

＋００ １活性一致死率（％） ２．５　　　３０　　１００　　１００　　１００　　
２０　　１００１．２５　　２０　　１００　　１００
　　１００　　１０　　９００．６２５　　０　　　７
０　　６０　　９０　　　０　　６００．３１２　　０
　　　５０　　２５　　５０　　　０　　　０冒し学的
に添加した血清試料に２４〜４８時間、インビトロで暴
露した後の昆虫の致死率。

２ＡＳＦミサシバエの成虫。

ＬＢＦ−クロバエの幼虫。

ｐｐｍ＝　１００万分の１濃度。

インビボ試験では、Ａ３３５４３化合物はテンジクネズ
ミおよびヒツジにおいて、明確な毒性の徴候を伴わずに
クロバエ幼虫およびサシバエ成虫に対して全身性の殺虫
活性を示した。代表的な化合物Ａ　８３５４．３　Ａお
よびＡ３３５４３Ｄを、研究室において標的動物で試験
し、活性範囲を測定した。以下に、この試験を説明する
。

テンジクネズミの全身系試験 この試験系にテンジクネズミ成体を用いた。被験化合物
をポリビニルピロリドン水溶液またはボレエチレングリ
コール２００に溶解し、この溶液の適切な量を経口的に
、または腹腔内注射によって投与する。以下の表に示す
ように種々の投与量の化合物を用いる。

特記した場合を除いて、３０分でテンジクネズミから血
液を採取し、血液試料を遠心分離した。

歯科用ガーゼ芯（デンタル・ウイックス）に血清をしみ
込まぜ、次いで、ペトリ皿中でサシバエの成虫に暴露し
た。クロバエの幼虫は、試験管中で暴露した。２４およ
び４８時間後、この昆虫を調べ、死に至った数を数えた
。この試験の結果を死んだ昆虫の割合（％）で記録する
。

ヒツジの全身系試験 上記のテンジクネズミ試験において説明した試験方法を
用いてヒツジを試験する。試験化合物を腹腔内もしくは
静脈内注射によって、または第−胃内に投与し、これら
の試験の２４時ａ■目に血液試料を採取した。

Ａ３３５４３ΔおよびＡ３３５４３Ｄを用いたテンジク
ネズミとヒツジの全身系試験の結果を第２２表〜第２５
表に示す。

Ａ３３５４３Ａは、１回のガベージで経１コ的に５００
　ｍｇ／　ｋｇを投与したとき、腸線虫Ｎｅｍａｔｏｓ
ｐｉｒｏｉｄｅｓ　ｄｕｂｉｕｓに実験的に感染させた
マウスにおいて、または体重１ｋｇ当たり５０π９を腹
腔内もしくは第一胃内に１回で投与して処置したヒツジ
において駆虫活性を示さなかった。

第２２表：Ａ３３５４３Ａのインビボでの殺虫活性“１
０（ＩＰ）　　　Ｏ０ ３０（ＩＰ）　　９０　５０ ５０（ＩＰ）　　１００　１００ ５０（ＯＲ）　　１００　６０” Ｎ　　　　１０（ＩＰ）　　　　Ｏ Ｎ　　　　１０（ＩＲ）　　　　Ｏ Ｎ　　　　３０（ＩＰ）　　　　８Ｏ Ｎ　　　　３０（ＩＲ）　　　１００ Ｎ　　　　５０（ＩＰ）　　　　２０ ５０（ＩＩン）１００ ２Ｘ２５（ＩＲ）　　　１００ °致死率（％）として活性を測定した。

ＡＳＦ−サシバエの成虫、ＬＢＦ−クロバエの幼虫、Ｔ
ｏｘ−宿主動物に対する毒性（Ｎ−無）、ＩＰ−腹腔内
、ＩＲ−第一胃内、ＩＶ−静脈内、ＯＲ−経口。

ＩＰ　　３０分 ５時間 ２４時間 ＩＰ　　３０分 ５時間 ２４時間 ＩＰ３０分 ５時間 ２４時間 ＩＰ　　３０分 ５時間 ２４時間 経口　５時間 末５時間血液試料、３０分では試料採取しなかった。

ＡＳＦ−サシバエの成虫。

ＩＰ−腹腔内。

５０Ｘ１３８．６　００　０　０１０　０　１０　０２
０１０２００１０１０１００（ＩＰ） ２５ｘ２３４．］　　００　０２０２５１０１００１０
９０２０９００６０　０５００（ＩＲ） ＩＸ１２５．９００２５１０］００　００００００００
００（ＩＶ） 未ｌ１ｔ３０．９００　　　００００　　　０００１０
００００８Ｌ−クロバエの幼虫。

Ａ＝サシバエの成虫。

ＩＰ−腹腔内。

ＩＲ−第一胃内。

ＩＶ−静脈内 ５投与量＜ｔｎｇ／ｋｇ″）および投与回数。

０投与後の血液を採取した時間。

’Ｌ−クロバエの幼虫。

Ａ−サシバエの成虫。

ＩＰ−腹腔内。

ＩＲ−第一胃内。

ＩＶ＝静脈内 ５投与量（ｓｇ／＆ｙ）および投与回数。

０投与後の血液を採取した時間。

ヒツジの腸線虫１１ａｅｍｏｎｃｈｕｓ　ｃｏｎｔｏｒ
ｔｕｓに対するインビトロ試験において、Ａ３３５４３
Ａは１００　ｐｐｍの濃度で虫の３０％を殺した。

外部寄生生物撲滅法 本発明は、有効量のＡ３３５４３化合物を宿主動物に投
与することからなる、宿主動物の血液を消費する昆虫外
部寄生生物の数を抑制する方法を提供するものでもある
。昆虫外部寄生生物には、昆虫およびダニ目寄生生物が
含まれる。動物への投与は、皮膚、経口または非経口経
路であってよい。

寄生性の昆虫およびダニとしては、吸血性および肉食性
の種、ならびに生存期間の全てまたはその一部（例えば
、幼虫段階たけもしくは成虫段階だけ）においてのみ寄
生する種が挙げられる。代表的な種としては、以下のも
のが挙げられる。

（ｅａｒ　ｔｉｃｋ） （ｂｒｏｗｎｄｏｇｔｉｃｋ） 本発明方法は、外部寄生生物から家畜動物および愛玩動
物を保護するために用いてもよい。例えば、本発明化合
物を、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコな
と、ならびにラクダ、ウマ、シカのような外来の動物、
および通常野生動物と称されている他の種に投与するの
も有用である。

また、本発明化合物を、七面鳥、ニワトリ、アヒルなど
のような家禽およびその他の鳥類に投与するのも有用で
ある。本発明方法は、好ましくは家畜動物に、最も好ま
しくはウシおよびヒツジに適用される。

効果的に適用するための量、時機および方法は、寄生生
物の種類、寄生生物撲滅薬適用の程度、およびその他の
因子によって広範に変化するであろう。適用は、宿主の
生存期間の全体にわたって定期的に、または寄生生物か
攻撃するピークの季節にたけ行うことができる。一般に
、本発明化合物約０．００００５〜９５．０％、好まし
くは５％まで、最も好ましくは約１％までの化合物を含
有する液体製剤の局所適用によって、外部寄生生物の抑
制が得られる。約５〜１００２ｇ／ｋｇの投与割合で効
果的な寄生生物の抑制が達成される。

本発明化合物は、慣用の獣医学的方法によって宿主動物
に適用される。通常、本発明化合物は、化合物および生
理学的に許容される担体からなる外部寄生生物撲滅組成
物に製剤化される。例えば、液体組成物を、外部寄生生
物の抑制が望まれる動物に単にスプレィしてもよい。ま
た、布に毒性化合物を含ませたバック・ラバーのような
装置によって動物自体を処置してもよい（例えば、これ
に対して動物を歩かせ、接触させる）。また、宿主動物
に活性薬物を投与するために浸液タンクも用いられる。

本発明化合物は、全身性の外部寄生生物撲滅活性を呈す
る。本発明化合物は、該化合物の１つを投与した宿主動
物の組織に浸透する能力を有する。

宿主動物の血液またはその他の生組織を摂取する昆虫寄
生生物はそれによって殺される。本発明化合物は、皮膚
、経口または経皮経路によって投与される。

＝９５ また、本発明は、生理学的に許容される不活性担体およ
びＡ３３５４３化合物を含有する外部寄生生物撲滅組成
物を提供するものもある。これらの組成物は、当技術分
野で知られている方法によって、例えば多数の生理学的
に許容される補助薬または希釈剤のうぢの１つに本発明
化合物を溶解することによって製造することができる。

経口投与は、動物の飼料または飲料水に本化合物を混合
することによって、または錠剤、カプセル、ポーラス、
またはインブラント剤のような投薬形態で投Ｌｊするこ
とによって行うことができる。経皮投与は、注射可能な
製剤を皮下、腹腔内および静脈内注射することによって
好都合に行われる。

本発明化合物は、飲薬、錠剤またはカプセルのような通
常の形態で経口投与用に製剤化することができる。もち
ろん、このような組成物は、経口的に許容される不活性
担体を必要とする。本化合物は、皮下、皮膚、第一胃内
、腹腔内、筋肉内、または静脈内注射のための注射溶液
または懸濁液として製剤化することもてきる。ある種の
適用において、本化合物は、普通の動物飼料の一成分と
して好都合に製剤化される。具体的には、まず、液体ま
たは微粒子の固体担体に本化合物を分散させたプレミッ
クスとして本化合物を製剤化するのが普通である。プレ
ミックスは、１ポンド当たり化合物約２〜２５０ｇを含
有することができる。

次に、このプレミックスは、慣用の混合によって、最終
の飼料中に配合される。

外部寄生生物の攻撃は、通常、宿主動物の生存期間の相
当な期間にわたって起こるので、一定の期間にわたって
放出を持続する形態で本発明化合物を投与するのが好ま
しい。慣用的な方法としては、物理学的に溶解を抑制す
るマトリックスの使用が挙げられる。ここで、マトリッ
クスは、植物ろうまたは高分子量のポリエチレングリコ
ールのようなワックス状の半固体である。本発明化合物
を投与するための良い方法は、レイビイ（米国特許箱４
，２５１，５０６号）およびシンプソン（英国特許第２
，０５９，７６７号）が開示しているような持続性のポ
ーラスを用いることである。このようなポーラス用には
、本発明化合物は、ネビイン（米国特許筒４，２７３，
９２０号）が開示しているような高分子マトリックスの
カプセルに入れられる。シリコーン含有ゴムからのよう
に移植物の使用によって、本発明化合物の持続放出を達
成することもできる。

以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明する
。

実施例１　：Ａ３３５４３のＨＰＬＣ検定法Δ８３５４
３を製造するための発酵を監視するのに以下の分析ＨＰ
　Ｌ　Ｃ法が有用である。

全ブロス試料を遠心し、デカンテーションして上清を除
去した。バイオマスに充分量のメタノールを添加し、試
料を初めの容量に戻し、混合し、この混合物を最低１５
分間放置した。遠心し、０゜４５μのフィルターで上清
を濾過した。

別の方法として、全ブロスをアセトニトリル（ブロス、
溶媒−１゛４）またはアセトンで抽出することかできる
。

カラム支持体：８Ｘ１００ｚｘカラム、シリカゲル−４
μ球状Ｃ３８［ツバ（Ｎｏｖａ）　Ｃｌ　８、ウォータ
ーズ（Ｗａｔｅｒｓ月。

移動相：０．０５％酢酸アンモニウムを含有しているＣ
　Ｈ’　−ＣＮ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　Ｉ（２０（４５
／４．５／１０）。

流速：４靜／分。

検知：２５０ｎｍのＵＶ。

保持時間：Ａ３３５４３Ａ　−３，６〜３．７分、八８
３５４３Ｄ　−４，４〜４５分。

実施例２：培養物Ａ３３５４３．］による八へ３５４３
の調製 Ａ、振盪フラスコ発酵 凍結乾燥ペレット、または液体窒素中に維持された懸濁
液としての、培養サツカロポリスボラ・スピノサ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｐｏｌｙＳｐｏｒａ　５ｐｉｎｏｓａ）　
Ｎ　ＲＲＬ１８３９５を、組成ＡまたはＢの栄養培地に
接種した（培地Ｂは、大規模産生用として好ましい）。

栄養培地Ａ 成　　　分　　　　　　　　　　使用量（％）トリプチ
カーセ大豆ブロスｘ　　　　　３．０イースト抽出物　
　　　　　　　　　０３ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，２ グルコース　　　　　　　　　　　　　０．５マルトー
ス　　　　　　　　　　　　　０．４脱イオン水を適量
加えて全量を１ρにする。

ｐＨ調整はしない。

Ｘパルティモア・バイオロジカル・ラボラトリーズ（Ｂ
ａｌｔｉｍｏｒｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ）栄養培地Ｂ 成　　　分　　　　　　　　　　使用量（％）酵素加水
分解したカゼイン本　　　　３．０イースト抽出物　　
　　　　　　　　０．３Ｍｇ５Ｏ，・７８２０　　　　
　　　　　０．２グルコース　　　　　　　　　　　　
　１．０脱イオン水を適量加えて全量を１ｅにする。

ｐＨ６，２、ＮａＯＨで６．５に調整。

宜ＮＺ　アミン（Ａｍｉｎｅ）　Ａ、　シェフイールド
・プロダクツ［５ｈｅｒｆｉｅｌｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
、　Ｐ、０１Ｂｏｘ　６３８　Ｎ。

ｒｗｉｃｈ、　　ＮＹ　１３８１５］。

栄養種培地ＡまたはＢに２，５％寒天を加えて斜面板（
スラント）または平板（プレート）を調製す〜１００ ることかできる。接種したスラントを３０’Ｃで約１０
〜１４日間インキュベートした。充分に成長したスラン
ト培養物を滅菌器具でこすって胞子をほぐし、菌糸体の
マットを取って柔らかくした。

このようにしてほぐした胞子および培養増殖物を得、そ
の約１／４を第１段階の栄養種培地５０順に接種した。

別の方法として、液体窒素アンプルから第１段階の培地
に接種してもよい。

培養物を液体窒素中に維持する場合、同量の栄養培養物
（４８〜７２時間インキュベーション、３０°Ｃ）およ
び懸濁培地を用いてアンプルを調製した。懸濁培地は、
ラクトース（ｌｏｏｇ）、グリセロール（２００π１２
）を含んでおり、これに脱イオン水を適量加えて全量を
ＩＱにした。

液体窒素アンプルを用いて、５００＋１２のエルエンマ
イヤーフラスコに栄養培地１００ｍρ（または２５０靜
のフラスコに培地５Ｍ）を接種した。

培養物を、２インチ（５，０８ｃｘ）の円を２５　Ｏｒ
ｐｍで旋回する振盪器を用い、３０℃で４８時間インキ
ュベートした。

このインキュベートした培養物（５％Ｖ／Ｖ接種物）を
用いて、以下の組成を有する製造培地１゜Ｏ靜に接種し
た 製造培地■ 成　　　　分　　　　　　　使用Ｍ（％）グルコース　
　　　　　　　　　　４ 部分的に酵素加水分解した 植物タンパク末　　　　　　　　　　１．５〜３綿実綿
実粉本末　　　　　　　　　ｉ、。

ＣａＣ０３（試薬級または工業用）０．３大豆油　　　
　　　　　　　　　　１．０水道水を適量加えて全量を
１ｆ２にする。

（滅菌前に、ＮａＯＨでｐＨ７，０に調製した）末シェ
フトン（Ｓｈｅｆｔｏｎｅ）　Ｈ，シェフイールド・プ
ログクツ（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）■
プロフロ（Ｐｒｏｆｌｏ）、）レイダーズ・プロティン
（Ｔｒａｄｅｒｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ、　Ｐ、Ｏ，Ｂｏｘ
　８４０７．　Ｍｅｍｐｈｉｓ。

ＴＮ　３８１０８） 接種した製造培地を、５００靜のエルシンマイヤーフラ
スコ中、２インチの円を２５　Ｏｒｐｍで旋回する振盪
器を用い、２８〜３０’Ｃで６〜８日間日間インキュト
ート。

Ｂ、撹拌バイオリアクター発酵 大量の接種物を得るために、インキュベートした第１段
階の培地を上記Ａのようにして調製し、その１０靜を用
いて、第１段階の栄養培地と同一の組成を有する第２段
階栄養培地４００ｍ（ｌに接種した。この第２段階の培
地を２ａの広ロエルエンマイヤーフラスコ中、２インチ
の円を２５０　ｒｐｍで旋回する振盪器を用い、３０°
Ｃで約４８時間インキュベートした。

このようにして調製したインキュベートした第２段階の
栄養培地（２のを用いて、上記への記載に従って調製し
た滅菌製造培地８０〜１１５ｅに接種した。必要に応じ
て、起泡を抑制するために、さらに大豆油を加えた。

接種した製造培地を、１６５Ｑの撹拌バイオリアクター
中、２８°Ｃの温度で５〜８日間発酵させた。この撹拌
容器中への空気の吹き込み速度および撹拌速度は、空気
飽和の５０％またはそれ以」二の溶解酸素レベルを維持
するようにコンピューターで調節した。

実施例３　：Ａ３３５４３Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの単離 実施例２の記載に従って調製した発酵ブロス（２２５の
を濾過助剤［１％ハイフロ（Ｈｙｆｌｏ）］を用いて濾
過し、分離したバイオマスを水（〜５０ので洗浄した。

次いで、バイオマスをメタノール（〜１００ρ〉と−緒
に約１時間撹拌し、濾過した。

メタノール濾液を約１ρの量に濃縮した。濃縮物をジエ
チルエーテルく各１ｇ）で３回抽出した。

エーテル抽出物を合わせて、約２００１１１１２の量に
濃縮した。

濃縮物の一部（８酎）をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけたＥＲＰ−８０バー（Ｌｏｂｅｒ）、サイ
ズＢ１イー・エム・サイエンス（Ｅ、　Ｍ、　５ｃｉｅ
ｎｃｅ。

ａ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｅ、　Ｍ、　Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、　）］。

この操作を、合計１２回繰り返した。［オートプレプ（
Ａｕｔｏｐｒｅｐ）Ｊモードの調製用クロマトグラフィ
ー処理を行うための装置および実施方法は以下のとおり
であった 完全な「オートプレプＪＨＰ　Ｌ　Ｃシステムは、３つ
のレイニン・ラピッＩ・（Ｒａｉｎｉｎ　Ｒａｂｉｔ）
　ＩＩＰＸポンプ、１つの圧力モジュール、１つのギル
ソン・モデル（Ｇｉｌｓｏｎ　Ｍｏｄｅｌ）　２０　　
］　ＢＨＰＬＣ分画コレクター、１つのｒｓｃ○Ｖ４吸
収検出器および１つのアップル・マツ牛ントッシュ・プ
ラス（Ａｐｐｌｅ　Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ　ＰＩＬＩＳ）
コンピューターからなっていた。完全なシステムハ、レ
イニン・インストウルメント・カンパニー・インコーホ
レイテラＦ（ＲａｉｎｉｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ
ｍｐａｎｙ、　Ｉｎｃ、　）によるタイナマックス・Ｈ
Ｐ　Ｌ　Ｃ・メソッド・マネージャー（Ｄｙｎａｍａｘ
　ＩＩＰＬＣＭｅｔｈｏｄ　Ｍａｎａｇｅｒ）マニュア
ルの説明に従って配置した。［オートプレプＪＨＰＬＣ
配置は、実質的に同一の結果が得られる実質的に同一の
条件下で、繰り返し調製用分離を行うために、システム
オートメーションを利用した。多数の操作によって得ら
れた対応する分画の回収および貯留によって、大ぎいカ
ラムを必要とせずにクロマトグラフィーの容量が得られ
た。

８　、０　ＲＩ２／分の流速、イソクラチックモードで
、２つの溶媒混合液（Ａ）および（Ｂ）を用いた。

済繊系 ＣＨ３０Ｈ９５１００ ＣＨ３ＣＮ　　　　９５　　　１００ Ｈ７○　　　　　　１０ 用いたインクラチック混合液は、溶媒Ｂの６０％を含有
していた。

各回の操作時間は、２８，０分であった。

各回の最初の１６分間に得られた溶出液は廃棄した。こ
れに続く溶出液を各々２分ずつ（１６所の６回−分画中
に回収した。

１２回の各々から自動的に混合された分画から、６つの
最終分画が得られた（クロマトグラフィーによる力、ト
）。

蚊の幼虫活性について各最終分画を分析することによっ
て、および分析用）Ｉ　Ｐ　Ｌ　Ｃによって、活性Ａ３
３５４３化合物の存在を測定した。

次に、各活性分画を、それらの活性およびＨＰＬＣプロ
フィールに従って合わせ、同一の「オートプレプＪＴ（
Ｐ　Ｌ　Ｏおよび溶媒系を用いて、たたし高分解能を有
する８μＣ−１８逆相シリカケルを充填した２　１．４
ｘｚＸ　２５ｃｍ調製用カラム［レイエン０ダイナマツ
クス（Ｒａｉｎｉｎ　Ｄｙｎａｍａｘ）］を用いて、さ
らに精製し、Ａ３３５４３成分Ａ、、Ｂ、ＣおよびＤを
得た。因子ＡおよびＤをＣＨ３０Ｈ／Ｈ，Ｏから結晶化
した。

Ａ　８３５４．３　ＣのＦＤ−ＭＳを第５図に示し、Ａ
　８３５４．３　ＢのＦＡＢ−ＭＳを第９図に示す。

実施例４：Ａ３３５４３ΔおよびＤの精製１）製造培地
２００ｍρを１０．フラスコ中で用い、２）大豆油を製
造培地から除外し、そして３）インキュベーションを３
０’Ｃて４〜６日間行う以外は、実施例２のＡの記載に
従って、発酵ブロス（１０のを調製した。このブロスを
濾過した。Ａ３３５４３Ａを４　ｍｃ９／順含有し、１
叶当たりのＡ３３５４３Ｂ、ＣまたはＤの量が検出不能
である濾液を廃棄した。

バイオマスを水で洗浄し、メタノールで１時間抽出した
。抽出液（７のは、Ａ　８３５４３　Ａを７２　ｍｃｇ
／　ｍ（ｌおよびＡ３３５４３Ｄを７１１ｃｔｉ／　ｍ
Ｑ金含有ていた。

メタノール抽出液の体積を５ｇに濃縮し、水（２の中で
、ＨＰ−２０樹脂［１５０ｍ（、ミツビシ・ケミカル・
インタストリーズ・リミテッド（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、　Ｌｔｄ
、、　　Ｊａｐａｎ）］に加えた。この混合物を１時間
撹拌した。

次いて、ＨＰ−２０樹脂温合物をガラスカラム中に入れ
た。最初の流出液およびメタノール：水（１，１、ｌに
よる溶出液は活性ではなかった。

メタノール：水（７：３．１のによる第２の溶出液は、
痕跡量のＡ３３５４３Ａを含有していた。

次のメタノール（１のを用いた溶出液は、Ａ３３５４３
ＡおよびＡ３３５４３Ｄ活性を含んでいた。

メタノール溶出液を濃縮し、別の操作によって得た２つ
の類似した分画と混合し、濃縮乾固した。

残留物をメタノール・ＴＩ（Ｆ（／Ｉ　：　］）７７５
ｍに溶解し、１０容量倍のアセトニトリルに添加しζ沈
澱させた。混合物を濾過し、濾液をｄ！！縮乾固した。

残留物をメタノール（２５ｒｚのに溶解し、メタノール
中で調製したＬ　Ｈ−２０セフアデツクス（Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ）　［ファルマシア・エル・°ケイ・ビー・バイ
オテクノロジー・インコーホレイテッド（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｃ
、、　Ｉｌ、Ｓ、Ａ、）］の５．５Ｘ９Ｑｃｍカラムに
入れ、実施例１に記載のＨＰ　Ｌ　Ｃ法を用いて１２５
の２５１分画を集め、分析した。

目的の化合物を含有する分画を合わせて、濃縮した。残
留物をメタノール（１０ｒのに溶解し、８μＣ〜１８逆
相シリカゲル（レイニン・ダイナマックス）を予め充填
した４１１πｚＸ２５ｃｍ調製用カラムに入れた。

このカラムを、メタノール・アセトニトリル水（３７，
５・３７．５　：　２５）中て調整した。試料を入れた
後、このカラムを下記溶媒の１８０分直線勾配液を用い
て展開させた。

溶媒系 ＣＨ３０Ｈ３７，５４５ ｃ■１３ｃＮ　　　３７．５　　４５ Ｈ３Ｏ２５１０ 勾配液を１００％Ａから１００％Ｂまで変え、２５ｍり
の分画を集めた。

Ａ３３５４３Ａを含有する分画を溜め、濃縮乾固し、ｔ
　−Ｂ　ｕｏ　Ｈ（５ｘｃ）に溶解し、凍結乾燥してＡ
３３５４３Ａの純品７７８ｚｇを得た。

ＣＨＣρ３中でのＡ３３５４３ＡのＩＲスペクトルを第
１図に示す。Ａ３３５４３ＡのＦＤ−ＭＳスペクトルを
第４図に示し、Ａ３３５４３ＡのＦＡＢ−ＭＳスペクト
ルを第８図に示し［Ｆ　Ａ　Ｂ分散用トンチオトレイト
ール・ジチオエリスリトール（５：１）］、そしてＡ　
８３５４．３　ＡのＥｌ−ＭＳスペクトルを第１０図に
示す。

八８３５　／ｌ　３１）を含有する分画を６回の同様の
分離によって得たＤ含有分画と混合し、濃縮し、溶媒は
異なるが同一のカラムを用いて」二記に従ってクロマト
グラフィー処理した。このカラムをメタノール：アセト
ニトリル、水（４，０：　４０　：　２０）中で調整し
た。１８０分の直線勾配操作てカラムを展開するのに用
いた溶媒系は、以下のものであった。

済繊系 ＣＨ３０Ｈ４０９５ ＣＨ３ＣＮ　　　　　４０　　　９５ Ｈ，０２０１０ Ａ８３５４３Ｄを含有する各分画を合わせて、濃縮した
。残留物をｔ−ＢｕＯＨ（５ｘのに溶解し、凍結乾燥し
て、Ａ３３５４３Ｄ　　２１２ｒｚｇを得た。

ＣＨＣｏ、３中てのＡ３３５４３Ｄの冊くスペクトルを
第２図に示し、Ａ３３５４３ＤのＦＤ−ＭＳスペクトル
を第６図に示す。

実施例５：Ａ３３５４３成分Ｅ、Ｆ、Ｇ、トＩおよびＪ
ならひにＡの偽アグリコンの単離実施例２に記載した方
法と同様の方法を用いて調製した発酵ブロス（８のを実
施例４の記載に従って処理した。目的の化合物を含有す
るＬＨ−２０セフアデツクスカラムからの分画を同様の
発酵によって得た対応の分画と混合した。成分Ｅ、Ｆ、
Ｇ、Ｈ，ＪおよびＡの偽アグリコンは非常に少量しか製
造されないので、後の精製用に充分な量を得るためには
多数の発酵が必要である。

この方法で調製し、固体状物質を約１６９含有している
微量の因子の貯留物を、実施例４の記載に従って、８μ
Ｃ−１８逆相シリカゲル（ＯＤＳ）を充填したＨ　Ｐ　
Ｌ　Ｃカラム（レイニン・グイナマックス）に入れた。

このカラムをＣＨ３０Ｈ：　ＣＨ。

ＣＮ：Ｈ７Ｏ（７５ニア５：５０）中で調整し、以下の
溶媒系を用いて勾配を溶媒（Ａ）１００％から溶媒（Ｂ
）５０％まで変え、２５πＱ分画を集めた。

＋１２ 直煤糸 ＣＨ３０Ｈ７５９５ ＣＨ３ＣＮ　　　　　７５　　　９５ Ｈ３０５０］○ 以下の分画を溜めた。

貯留　　　　　　　分　画 実施例３の記載に従って、貯留５の一部（１００ｆｆ１
２）を濃縮し、残留物をメタノール（１靜）に溶解し、
２１．４ｘ７１Ｘ２５０ｚｚＨＰＬＣカラム（レイニン
・グイナマックス）に入れた。このカラムを、以下の溶
媒系の溶媒系（Ａ）を用いて調整し、１００％溶媒（Ａ
）から５０％溶媒（Ｂ）までの１２０分の直線勾配液を
用いて展開し、７．５ｆｆｆ２／分で１５Ｒａづつ分画
を集めた。

済煤系 ＣＨ３０Ｈ３０９５ ＣＨ３ＣＮ　　　　　　　　　　　　　３０　　９５Ｈ
２０（１，Ｎ　ＮＨ，ＯＡＣ，ｐＨ５，ｏ）　　　　４
０Ｈ２０−−１０ ５０％（Ｂ）でさらに６０分間、溶出を続けた。下記分
画を溜めた。

貯留　　　　分画　　　　　　成分 １　　　　３７　　　　　　　Ｆ ２　　　　３８−４８　　　　　　　Ｆ３　　　　５２
−６３　　　　　　Ｂ５Ｇ４　　　　６５−７０　　　
　　８．Ｊこれらの貯留物を、同様の出発物質を用いた
別のクロマトグラフィー操作によって得た貯留物と混合
した。混合した貯留物を、」二記に従いカラムクロマト
グラフィーでさらに精製し、常法によりＩ（Ｐ−２０樹
脂」二で脱塩し、濃縮し、凍結乾燥し、以下の成分を得
た。

成分　　　量（ｍｙ）　　　分子量末　　　（Ｒ＊＊Ｅ
　　　　　２４９　　７１７　　第１３図参照Ｆ　　　
　　　　４　　７１７　　第１４図参照Ｇ　　　　　１
０４　　７３１　　　第１５図参照Ｈ’、Ｊ　　　　　
８７　　７１７　　第１６図参照偽Ａ　　　　２８８　
　５９０　　第３図参照Ｘ質量スペクトルによる。

”ＫＢｒディスク法。

Ａ３３５４３Ａ偽アグリコンのＦＤ−ＭＳおよびＥｌ−
ＭＳスペクトルを、各々第７図および第１１図に示す。

実施例６・培養物Ａ３３５４３．３によるΔ８３５４３
の調製 Ａ６振盪フラスコ発酵 以下の栄養培地Ｃを用いること以外は、実施例２のＡの
方法と同様の方法を用いて、培養サツカロポリスポラ０
スピノサ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　５ｐ
ｉｎｏｓａ）ＮＲＲＬ　　１８５３７を振盪フラスコ中
で培養した。

栄養培地Ｃ 成　　分　　　　　　　　　　　使用量酵素加水分解し
たカゼイン末　　３０．０９イースト抽出物　　　　　
　　　　３．０ｇＭｇ５Ｏ，・７Ｈ，００，２ｇ グルコース　　　　　　　　　　　１０．０ｇグリセロ
ール　　　　　　　　２０ｚρ脱イオン水を適量加えて
全量をｌρにした。

ｐＨ６，６、ＮａＯＨで７．０に調整した。

末ＮＺ　　アミン（Ａｍｉｎｅ）　Ａ を第１段階の栄養培養物（２５０πａのフラスコ中、培
地Ｃ５Ｃ５０１Ｎに接種し、これを約４８〜７２時間イ
ンキュベートした。インキュベートした第１段階培養物
を第２段階培養物（２ｆｆのフラスコ中、培地Ｃ４００
靜）に接種しく接種物１０ｍρ）、これを約４８時間イ
ンキュベートシた。インキュベートした第２段階培養物
（５のを以下の組成を有する製造培地（１１５のに接種
した。

製造培地■ 成　　分 グルコース ペプトン化ミルク末 綿実の粉末東京 ａＣＯ３ オレイン酸メチル 水道水を適量加えて全量を 使用量（ｇ／の ３０好／ρ １ｇにした。

Ｂ、撹拌バイオリアクター発酵 実施例２のＢの一般的な方法に従って、培養物の液体窒
素アンプルを調製した。１つのアンプル末ペプトナイズ
ド・ミルク・ニュートリエンド（Ｐｅｐｔｏｎｉｚｅｄ
　Ｍｉｌｋ　Ｎｕｔｒｉｅｎｔ）、シェフイールド・プ
ロダクツ；　５ｍ９／ｙｔｔ（１／日の割合で４０口か
ら追加の継続的な補給を行ってもよい。

本末プロフロ（Ｐｒｏｆｌｏ）。

（滅菌前のｐＨをＮａＯＨで７，０に調整した）接種し
た製造培地を１６５ρの撹拌バイオリアクター中、３０
°Ｃの温度で約８〜１０日間またはそれ以上発酵させた
。溶解酸素（Ｄｏ）は、実施例２のＢの記載に従って、
空気飽和の５０％以上のレベルのＤｏを維持するように
セットしたコンピューターシステムで調節した。

実施例７；培養物Ａ３３５４３．５によるＡ３３５４３
の調製 Ａ　振盪フラスコ発酵 実施例２のＡと同様の方法を用い、栄養培地Ｂを用いて
、培養サツ力ロポリスボラスピノサＮＲＲＬ］８５３９
を振盪フラスコ中で培養した。

Ｂ　撹拌バイオリアクター発酵 実施例２のＢの一般的な方法に従って、培養物の液体窒
素アンプルを調製した。１つのアンプルを第１段階栄養
培養物（２５０ｚｉ！のフラスコ中、培地Ｂ５Ｑｍのに
接種し、これを４８〜７２時間インキュベートした。イ
ンキュベートシた第１段階培養物を第２段階培養物（２
Ｉ２のフラスコ中、培地Ｂ４０Ｃ）ｌのに接種しく接種
物１．０ｏ２）、これを約４８時間インキュベートシた
。このインキュベートした第２段階の培養物（２のを以
下の組成のいずれかの製造培地（１１５ρ）に接種した
。

製造培地■ 成分 グルコース 部分的に酵素加水分解した 植物性タンパク末 綿実の粉末本末 Ｃａ　ＣＯｓ オレイン酸メチル 水道水を適量加えてＩＱにした。

使用量（ｇ／の 本シェフトン（Ｓｈｅｆｔｏｎｅ）　Ｈ本末プロフロ（
Ｐｒｏｆｌｏ） （滅菌前のｐＨをＮＨ４ＯＨで７ ０に調整した） ＝１１９ 製造培地■ 成　　分　　　　　　　　　　　使用量（％）グルコー
ス　　　　　　　　　　　８ 綿実の粉末＊　　　　　　　　　３ ペプトン化ミルク＊ｘ２ トウモロコシ浸漬リカー　　　　１ ＣａＣＯ３（工業用）０．５ オレイン酸メチル　　　　　　　　３０水道水を適量加
えて全量をＩＱにした。

本末プロフロ（Ｐｒｏｆ　ｌｏ） χ束ペプチオプーイズド・ミルり・二ニートリエンド（
Ｐｅｐｔｉｏｎｉｚｅｄ　Ｍｉｌｋ　Ｎｕｔｒｉｅｎｔ
）（滅菌前にｐＨをＮａＯＨで７，０に調整した）接種
した製造培地を、１６５ρ撹拌バイオリアクター中、３
０°Ｃの温度で約８〜１０日間またはそれ以上発酵させ
た。実施例６の記載に従ってＤＯレベルを調節した。

実施例８：培養物Ａ３３５４．３．４によるＡ３３５４
３の調製 ＋２０ 栄養培地Ｂおよび製造培地■を用いたこと以外は、実施
例２および７の方法と同様の方法を用いて、培養サツカ
ロポリスポラ・スピノサＮ　ＲＲＬ　　１８５３８を培
養した。

実施例９ 実施例８の記載に従って、発酵ブロスを調製した。以下
のようにブロスからＡ３３５４３を分離した。

１、ブロスに同量のアセトンを添加し、セラミックフィ
ルターまたは濾過助剤とフィルタープレスを用いて濾過
した。

２、濾液ブロスをｐＨ］　Ｏに調整した。

３、酢酸エチル（ブロスの埼〜与容量倍）を添加した。

４、非混和性の水性部分をデカントして除去することに
よって酢酸エチル抽出物を回収し、真空下、酢酸エチル
抽出物の容量を壜にｄり縮した。

５、濃縮した酢酸エチル溶液を０．１Ｍ酒石酸水溶液（
壜容量）で抽出し、相を分離した。

６、真空蒸発によって水相から可溶性酢酸エチル（約５
％）を除去した。逆浸透操作を用いて水溶液を濃縮した
。

７、′ＩｆＩ＆縮した水溶液を水酸化ナトリウムでｐＨ
１０〜１１に調整した。

８、濾過によって沈澱物を分離し、水で洗浄し、真空乾
燥して、Ａ３３５４３を得た。

実施例１０　：　Ａ３３５４３Ａ偽アグリコン主として
成分Ａを含有するＡ３３５４３の試料（約１００ｏ）を
メタノール（５０ｍ１２）、水（２顧）および濃ＨＣρ
（３πのに溶解した。この溶液を５０°Ｃで濃縮乾固し
た。残留物をジエチルエーテル（各２００ｍので２回処
理し、不溶性物質を廃棄した。

粗製の偽アグリコンを含有するエーテル溶液を合わせて
、これを濃縮乾固した。残留物をメタノール（２０＋ａ
のに溶解し、実施例３に記載のＡＵＴ○Ｐ　ＲＥ　Ｐ　
−ＨＰ　Ｌ　Ｃシステムを用いて精製し、Ａ８．３５４
３Ａ偽アグリコンの純品２０＋９を得た。

実施例１１ 実施例１０に記載の方法と同様の方法を用いて、Ａ３３
５４３１）からＡ３３５４３Ｄ偽アグリコンを調製した
。

火靴昨Ｌλ 以下の製剤は、本発明において有用な、５つの殺虫組成
物の代表的なものである。

Ａ、水性懸温液 Ａ３３５４３Ａ “ゼオシル（Ｚｅｏｓｙｌ）　２００”（シリカ）“Ａ
Ｆ−１００”（シリコン系の消泡剤）キサンタン溶液（
２％） 水道水 Ｂ、乳剤 Ａ３３５４３Ｄ ｙ≠向ン古↑生剤自己台形ηン １２．５％ １．０％ ０．２％ １０．０％ ６６．３％ １２．４％ ２．０％ 実施例Ｕ 以下に組成物を例示し、本発明の方法を実施するのに用
いる製剤の種類を説明する。

Ａ、飼料プレミックス Ａ　８３５４−３　Ａ　　　　　　　　　　　１０％米
の籾殻　　　　　　　　　　　　８５軽鉱油　　　　　
　　　　　　　　　５Ｂ、飼料プレミックス Ａ３３５４３Ｅ　　　　　　　　　　　２５％ムラサキ
ウマゴヤシのあらびき粉　６０粉末クレイ　　　　　　
　　　　　　　５糖みつ　　　　　　　　　　　　　　
１０Ｃ１懸濁液 八８３５４．３　Ａ ナフタレンスルホン酸塩 非イオン系界面活性剤 溶融シリカ 水 旦−慮適蓋遼 Ａ３３５４３Ａ ２０％ 非イオン系界面活性剤 プロピレングリコール 水 ０．８ ６４．２ Ｅ　点滴懸濁液 Ａ３３５４３Ｂ 非イオン系界面活性剤 軽鉱油 Ｆ、注射用溶液 Ａ３３５４３Ａ プロピレングリコール Ｇ、注射用懸濁液 Ａ　８３５４．３　Ｃ フロピレンゲリコール 水 １５％ ２５％ Ｈ６注射用懸濁液 Ａ３３５４３Ｄ　　　　　　　　　　、３０％ポリビニ
ルピロリドン　　　　　　　　２水　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　６８

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＣＨＣｏ、３中でのＡ３３５４３Ａの赤外ス
ペクトルを示すグラフであり、 第２図は、Ａ３３５４３Ｄの赤外スペクトルを示すグラ
フであり、 第３図は、Ａ３３５４３Δの偽アグリコンの赤外スペク
トルを示すグラフであり、 第４図は、Ａ３３５４３Ａのフィールド・デイソープシ
ョン質量スペクトルを示すグラフであり、第５図は、Ａ
８３５４３　Ｃのフィールド・デイソープション質量ス
ペクトルを示すグラフであり、第６図は、Ａ３３５４３
Ｄのフィールド・デイソープション質量スペクトルを示
すグラフであり、第７図は、Ａ３３５４３Ａの偽アグリ
コンのフィールド・ティソープション質量スペクトルを
示すグラフであり、 第８図はＡ３３５４３Ａのフィールド・デイソープジョ
ン質量スペクトルを示すグラフであり、第９図は、Ａ３
３５４３Ｂの高速原子衝撃質量スペクＩ・ルを示すグラ
フであり、 第１０図は、Ａ　８３５４．３　Ａの電子衝撃質量スペ
クトルを示ずグラフてあり、 第１１図は、Ａ３３５４３Ａの偽アグリコンの電子衝撃
質量スペクトルを示すグラフであり、第１２図は、Ａ３
３５４３．］の主成分の分布を示すグラフであり、 第１３図は、Ａ３３５４３Ｅの赤外スペクトルを示すグ
ラフであり、 第１４図は、Ａ３３５４３Ｆの赤外スペクトルを示すグ
ラフであり、 第１５図は、Ａ３３５４３Ｇの赤外スペクトルを示すグ
ラフであり、 第１６図は、Ａ３３５４３Ｈ，Ｊの赤外スペクトルを示
すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式１： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、Ｈまたは下記式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）
   または（ｄ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ａ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｃ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｄ） から選択される基であり、 Ｒ＾２は、下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される基であり、 Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾５およびＲ＾６は水素原子または
   メチル基であり、 Ｒ＾４はメチル基またはエチル基である］ で示されるＡ８３５４３化合物、またはＲが水素原子以
   外である該化合物の酸付加塩。 ２、Ｒ、Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾４、Ｒ＾５およびＲ＾６
   が以下の組み合わせのいずれかである請求項１に記載の
   Ａ８３５４３化合物、またはＲが水素原子以外である該
   化合物の酸付加塩： ▲数式、化学式、表等があります▼ ３、Ｒが（ａ）の基であり、Ｒ＾１、Ｒ＾５およびＲ＾
   ６がＣＨ＿３であり、Ｒ＾３がＨであり、Ｒ＾４がエチ
   ルである請求項２に記載の化合物Ａ８３５４３Ａ、また
   はその酸付加塩。 ４、Ｒが（ａ）の基であり、Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾５お
   よびＲ＾６がＣＨ＿３であり、Ｒ＾４がエチルである請
   求項２に記載の化合物Ａ８３５４３Ｄ、またはその酸付
   加塩。 ５、請求項１〜４のいずれかに記載のＡ８３５４３化合
   物および植物学的に許容される担体を含有する殺虫また
   は殺ダニ組成物。