JPH02225478A

JPH02225478A - ストレプトピロン類

Info

Publication number: JPH02225478A
Application number: JP4736089A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Kawazu; 河津　一儀; Akio Kobayashi; 昭雄小林; Kazuto Oe; 大江　和人
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp; Mitsubishi Chemical Industries Ltd
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1989-02-28
Filing date: 1989-02-28
Publication date: 1990-09-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、細胞分裂阻害活性を有するストレプトピロン
類に関するものである。

（従来の技術および発明が解決しようとする問題点）細胞分裂阻害剤は、細胞分裂機構の解明研究の為の試薬
として欠かせないものであり、種々の作用機構による阻
害剤が求められている。しかじながら、従来知られてい
る薬物のほとんどは、呼吸阻害作用による細胞分裂阻害
剤であり、染色体の複製等の細胞分裂における本質的な
部分を抑制するものはコルヒチン等、数種の薬物に限ら
れていた。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、ウニ卵への細胞分裂阻害活性を指標とし
て、各種の微生物の代謝物を採索したところ、ストルブ
トマイセス属菌が新規化合物であるストレプトピロン類
を生産し、しかも本化合物が呼吸■害ではなく、前核融
合阻害活性に基づく良好な細胞分裂阻害活性を有するこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明の要旨は、下記一般式〔Ｉ〕で示されるス
トレプトピロン類に存する。

（式中、Ｒ１及びＲｔはアルキル基を表わす。）以下本
発明を説明するに、本発明のストレプトピロンＲ′及びＲ２で表わされるアルキル基としては、メチル
基、エチル基等が挙げられる。具体的には、例えば下記
構造式のものが挙げられる。

本発明化合物は、ストレプトマイセス属に属する菌株で
、具体的には、例えば、ストレプトマイセス・アルブル
ス　ＭＣＩ　　２４２５菌株（Ｓｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅ
ｓ　ａｌｂｕｌｕｓ　Ｍ　Ｃ　ｒ　　２　４　２　５　
）を培養することによって得られる。

このストレプトマイセス・アルブルス　ＭＣＩ２４２５
菌株（以下、「本菌株」と略す）は、微工研菌寄第１０
５６７号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１０５６７）として寄託さ
れている。

上記ストレプトマイセス・アルブルス　ＭＣＩ２４２５
菌株の形態学的特徴、各種培地上の性状および生理学的
・生化学的性質は以下に示す通りである。

（１）形態学的特徴各種の合成培地上で、コロニー表面は、はじめ白色、の
ちに灰色〜明るい茶灰色を呈し、コロニー裏面は黄味白
色を呈する。本生菌糸及び気菌糸はよく発達し、分枝し
、気菌糸上に分節型の長い胞子連鎖部を形成する。胞子
連鎖部は６〜８回位ラセン状に巻いており、胞子は楕円
形で、その大きさは０．　６〜０．　８　Ｘ　Ｏ．　９
〜１．０μ鴫である。胞子表面はトゲ状の突起におおわ
れる。

（２）各種培地上における性状２７℃、１４時間培養後の特徴Ｏ　シュクロース・硝酸塩培地生育は中程度で、灰色を呈し、コロニー裏面は灰色を呈
する。気菌糸の発達は中程度で胞子形成は旺盛である。

可溶性色素はなし。

Ｏ　グルコース・アスパラギン培地生育は中程度で、灰色〜薄い灰色を呈し、コロニー裏面
は黄味白色を呈する。気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成
もまた旺盛である。可溶性色素はなし。

Ｏ　グリセリン・アスパラギン培地生育は良好で、白色〜灰色を呈し、コロニー裏面は黄味
白色〜淡いオリーブ色を呈する。気菌糸の発達は旺盛で
、胞子形成もまた旺盛である。可溶性色素はなし。

○　デンプン・無機塩培地（ｒｓＰ４）生育は良好で、
白色〜灰色を呈し、コロニー裏面は黄味白色〜淡いオリ
ーブ色を呈する。気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成もま
た旺盛である。可溶性色素はなし。

○　チロシン培地（ＩＳＰ７）生育は良好で、白色を呈し、コロニー裏面は黄味白色を
呈する．気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成は中程度であ
る。可溶性色素はなし。

○　酵母エキス・麦芽エキス培地（ＩＳＰ２）生育は良
好で、灰色を呈し、コロニー裏面は黄味白色を呈する。

気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成もまた旺盛である。可
溶性色素はなし。

Ｏ　オートミール培地（ＴＳＰ８）生育は良好で、灰色〜薄茶色を呈し、コロニー裏面ば黄
味白色を呈する。気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成もま
た旺盛である。可溶性色素はなし。

Ｏ　ベネット培地生育は良好で、灰色を呈し、コロニー裏面は黄味白色を
呈する。気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成もまた旺盛で
ある。可溶性色素はなし。

Ｏ　リンゴ酸カルシウム培地生育は中程度で、白色を呈し、コロニー裏面は白色を呈
する。リンゴ酸カルシウムを溶解して、コロニー周辺は
透明帯となる。気菌糸の発達は中程度で、胞子形成は貧
弱である。可溶性色素はなし。

Ｏ　普通寒天培地生育は良好で、白色〜灰色を呈し、コロニ裏面は黄味白
色を呈する。気菌糸の発達は旺盛で、胞子形成もまた旺
盛である。可溶性色素はなし。

（３）生理学的性状 ■　生育温度範囲　　　　：１０°Ｃ〜３０°Ｃ■　メ
ラニン様色素の生成：（ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地上）■　デンプン
の加水分解　：　　　＋ ■　ゼラチンの液化　　　・　　　十〇　脱脂乳の凝固　　　　・ ■　脱脂乳のペプトン化　： ■　硝酸塩の還元　　　　・ ■　炭素源の資化性　　　・Ｄ−グルコース　　　　　　＋Ｌ−アラビノースＤ−キシロースＤ−フラクトース　　　　　＋シュクロースＬ−ラムノースラフィノースイノシトール　　　　　　　＋Ｄ−マンニトール　　　　　＋十：利用する、　−：利用しない（４）細胞壁組成用本の方法（日本放線菌研究余線、放線菌の固定実験法
、１９８５年）により分析した結果、本菌株（ＭＣＩ　
　２４２５）の細胞壁主要成分はＩ、Ｌ−ジアミノピメ
リン酸及びグリシンを含有する細胞壁タイプＩ型であっ
た。

（５）分類学的考察ストレプトピロンを生産する本菌株（ＭＣＩ２４２５）
はコロニー色調が灰色〜明るい茶灰色を呈する。メラニ
ン様色素を産生じない。胞子形成様式は文節型様式を示
し、胞子着生部はラセン状に巻いている。胞子表面はト
ゲ状突起を持つ。

これらの特徴について、Ｎｏｎｏｍｕｒａ（Ｊ、Ｆｅｒ
ｍｅｎｔ。

Ｔｅｃｂｎｏｌ、　　Ｖｏｌ、　５２　：　７８〜９２
．１９７４年）によって提案されているストレプトマイ
セス属のＩＳＰ菌種検索表によって、本国の帰属を検索
し、その結果、本菌株（ＭＣＩ　　２４２５）はストレ
プトマイセス　アルブルス（Ｓ　　ａｌｂｕｌｕｓ）に
類似した種であることが示唆された。そこで、Ｅ、　　
ＢＳｈｉｒｌｉｎｇとり、　Ｇｏｔｔｌｔｅｂらの、イ
ンターナショナル　ジャーナル　オン　システマテイン
ク　バクテリオロジ−（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　
Ｂａｃｔ、）　Ｖｏｌ、　２２、Ｎｏ、４：２７１−２
７２ページ（１９７２年発行）に記載されているＳ　　
ａｌｂｕｌｕｓの形態学的性状、培養上の性質及び各種
の生理学的性と本菌株（Ｍ（、ｒ　　２４２５）の各種
性状を対比したところ、本菌株は５ａｌｂｕｌｕｓの記
載によく合致した。

従って本菌株（ＭＣＩ　　２４２５）はストレプトマイ
セス・アルブルスと固定された。

本発明で使用するストレプトマイセス屈に属する菌株は
、他の放線菌と同様に、その性質が変化しやすく、例え
ば、紫外線やＸ線、ニトロソグアニジン等の薬品等によ
り変異し得るが、これらの変異株であっても、本発明の
ストレプトピロン類を生産する性質を失わない限り、本
発明に使用できる。

本菌株の培養は、通常の放線菌が利用し得る栄養物を含
有する培地で培養することができる。例えば、炭素源と
しては、グルコース、水あめ、グリセリン、デキストリ
ン、スクロース、澱粉、糖蜜、動・植物油等が使用でき
る。また窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンス
テイープリカ、綿実かす、肉エキス１、ペプトン、酵母
エキス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等
が使用できる。その他、必要に応じてナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、リ
ン酸、硫酸、或いは、他のイオンを生成し得る無機塩類
等公知の種々の添加剤を添加することもできる。

本菌株の培養は、好気的条件下での培養法、特に深部培
養法が好適である。培養温度は、通常２０〜３７°Ｃ１
好ましくは２６〜３０°Ｃの範囲から選ばれる。

本発明のストレプトピロン類の生産は、培地や培養温度
等によって異なるが、振とう培養およびタンク培養の場
合、通常２〜１０日間の培養でその生成物の蓄積が最高
に達する。

かくして得られた培養液から、常法に従い、溶媒抽出、
カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィ
ー等の処理により、本発明のストシブトビロン類を単離
・精製することができる。

［発明の効果］本発明のストレプトピロン類は、後述するようにウニ卵
細胞に対し、前核融合阻害に基づく細胞分裂阻害活性を
有しており、細胞分裂機構研究用試薬としての有用性が
期待される。

また、本発明のストレプトピロン類と同様の作用を有す
るコルヒチンが制ガン作用を有することが知られており
［キャンサー（Ｃａｎｃｅｒ）　、　　３巻１２４頁、
１９５０年］、従って、本発明のストレプトピロン類に
も、制ガン剤としての用途が期待される。

（実施例）以下に本発明を実施例を挙げて更に詳細に説明するが、
本発明はその要旨を越えない限り以下の実施例によって
限定されるものではない。

［ストレプトマイセス・アルブルス　ＭＣＩ　　２４２
５菌株の培養］水あめ４．０％、大豆油０．３％、大豆粉２．０％、二
かす１．０％、サングレイン０．５％、炭酸カルシウム
０．３％、硫酸鉄７水塩０．　ＯＯ１％、塩化コバルト
６水塩０．　ＯＯ０１％および塩化ニッケル６水塩ｏ、
ｏｏｏｉ％を含有する種培地（ｐ　Ｈ７，０）を４０ｍ
１ずつ２００ｍ１の三角フラスコ１０本に分注して、１
２１°Ｃで２０分間高圧滅菌した。

次いで、ストレプトマイセス・アルブルスＭＣＩ２４２
５菌株を１白金耳ずつ植菌し、２８°Ｃで７日間、２１
　Ｏｒ、ｐ、ｍ、にて振とう培養した。

得られた種培養物２００ｍｊ２を上記種培地と同−ａ成
の培地１８ｆｆｉを含む３０１！、容のタンクに移植し
、２７°Ｃで７日間通気撹拌培養（通気量１００％、２
１０ｒ、ｐ、ｍ、）　シた。

得られた培養物１８ｆｆｉをフィルタープレスでろ過し
て、ろ液（培養ブロス）１５ｒを得た。

［ストレプトピロンの単離］ストレプトマイセス・アルブルス　ＭＣＩ　　２４２５
菌株の培養ブロス１５！から酢酸エチル５！を用い、３
回抽出した。抽出液に硫酸マグネシウムを加えて乾燥後
、微圧下濃縮して褐色油状物８．５ｇを得た。

得られた油状物をベンゼン−酢酸エチル混合液を展開溶
媒とするシリカゲル（３００ｇ、メルク社製Ｓｉｌｉｃ
ａｇｃｌ　　６０　）カラムクロマトグラフィーに付し
、２０１Ｉ１１ずつ分画した。酢酸エチル２０％を含む
展開溶媒にて溶出された活性画分を減圧ａ縮し、得られ
た黄色油状物４５ｍｇを分取し、高速液体クロマトグラ
フィー（カラム：　ＵｎｉｓｉｌＱＣｌｌｌ、　　Ｉ　
Ｏ，７Ｘ　２５０　ｉ＋ｍ、粒径５μｍ；溶離液：８０
％メタノール：流量：５ｍｉ／胴；検出；Ｋｌ検出器）
に付した。保持時間２０分前後のピーク担当部を集め、
減圧濃縮し、純粋な無色油状活性物質ストレプトピロン
５＋＋Ｂを得た。なお、上記の精製・単離操作はウニ卵
に対する活性を指標にして、すべて室温で実施した。

かくして得られたストレプトピロンの理化学的性質を表
１に示した。また、そのＩＨおよびＩＩＣＮＭＲスペク
トルのデータは、それぞれ表２および表３に示す通りで
あり、以上の結果から、本物質は下記に示す構造である
ことが判明した。

表ＣＮＭＲデータ（１２５Ｍ！ｂ、ＣＤＣ１：ｌ）測定からは、ＤＮＡ合成は抑制されていないことも判り
、本発明物質の特異な効果が示された。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記一般式〔 I 〕で示されるストレプトピロン
類。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕（式中、Ｒ＾１及びＲ＾２はアルキル基を表わす。）