JPH02232561A - 新規な潜血検出用試験片。 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、尿、吐物、胃腸内容物、脳髄液、糞便等の如
き体液及び体排出物（排泄物を含む）中の血液の定性及
び定量に有用な改良された潜血検出用試薬組成物に関す
る。

「発明の背景」 体液及び体排出物（排泄物を含む。以下同じ。）中の潜
血の検出並びにその多寡を知ることは疾病の診断、予後
の経過を観察する上で貴重な資料を与え、現在臨床医学
上欠くことの出来ない重要な検査の一つとなっている。

即ち、潰瘍及び癌など粘膜のびらんを伴う疾病では胃内
容物及び吐物に血液が認められ、糞便中にも潜在性血液
がしばしば見られる。また、発疹チフス、壊血病、紫斑
病、脳出血、腎炎、腎臓結石、身体の大部分にわたる火
傷或は種々の溶血性毒素の作用などにより、尿中にも血
液成分或は補血分子族が排出される。臨床医学の見地か
らすれば、このような体液或は体排出物中の血液を顕微
鈍的識別では検出出来ないほど微々たる量であっても確
実Ｋ察知できる高感度な潜血検出法が要求される。

このような体液或は生体排出物中の潜血検出法としては
、これまでＫ種々の方法が知られているが、現在主とし
て行われている方法は、血液成分テアるヘモグロビン、
ミオグロビン或はそれらの分解産物が、酸素源から受容
体に酸素を移動させるのを触媒する能力を有することを
利用したもので、受容体が染料プレーカーサーであれば
、それが酸化状態Ｋなるまでは無色であるが酸化された
状態では発色する性質を利用して、その発現した色調か
ら血液成分であるヘモグロビン或はその分解産物等の存
在を検知し出血の有無を、更Ｋはその多寡を知るもので
ある。色変化の速さ、色の濃さまたは密度は、存在する
血液の定量手段となる。

しかしながら、これらの試験法は、測定用器具或は装置
を必要とし、操作が煩雑である等の欠点を有するため、
これに代クて初心者κも簡易に測定出来る診断用試験紙
法が開発されている。

ところが、従来の潜血検出用試験紙の多くは溶血検体（
ヘモグロビン又はミオグロビン）での呈色速度及び感度
は満足のいくものであクたが、非溶血検体（赤血球）で
の呈色速度は遅く、また、感度も十分であるとは言い難
く、溶血検体と非溶血検体とでは呈色に差が認められる
と言５問題点があった。

「発明の目的」 本発明は、上記した如き現状Ｋ鑑みなされたもので、溶
血検体のみならず非溶血検体の場合に於いても高感度の
測定が可能な新規な潜血検出用試薬組成物を提供するこ
とを目的とする。

「発明の構成」 本発明は、血液中に存在する補血分子族の存在で色変化
をともなって酸化される指示薬、該指示薬を酸化するの
に有効な酸化剤、ｐＨを４〜７の範囲に維持する緩衝剤
、感度を上げる為の賦活剤及び溶血活性の高いサイトリ
シンを含んで成る体液及び体排出物中の潜血検出用試薬
組成物である。

即ち、本発明者らは、調製が容易で溶血検体のみならず
非溶血検体に対しても感度の高い測定が可能な潜血検出
用試薬組成物を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、血液
中に存在する補血分子族の存在で色変化をともなって酸
化される指示薬、該指示薬を酸化するのκ有効な酸化剤
，ＰＨを４〜７の範囲に維持する緩衝剤、感度を上げる
為の賦活剤を含んでなる自体公知の潜血検出用試薬組成
物Ｋ溶血活性の高いサイトリシン（細胞溶解素）を添加
することＫよりその目的を達成し得ることを見出し本発
明を完成するに至った。

本発明の潜血検出用試薬組成物は、自体公知の潜血検出
用試薬組成物の調製方法忙準じて容易にこれを調製し得
る。

即ち、血液中に存在する補血分子族の存在で色変化をと
もなって酸化される指示薬、該指示薬を酸化するのＫ有
効な酸化剤、緩衝剤、賦活剤及び溶血活性の高いサイ｝
　ＩＪシン等の本発明に係る潜血検出用試薬組成物を構
成する各試薬類を、常法Ｋより、紙、繊維等の吸収性担
体に１乃至数回に分けて含浸，乾燥させる。これを適当
な大きさに切断し、ディスクとする、或は適当な大きさ
Ｋ切断したものを、更Ｋ、適当な支持体上に、両面接着
テープ等を用いて固定化し、スティックとする等は任意
である。

本発明に於いて用いられる溶血活性の高いサイトリシン
としては，例えば、サポニン、メリチン、グラミシ．ジ
ン、ポリミキシンＢ等、溶血活性が高く、水によく溶け
、且つ、ｐＨ４〜７の範囲で安定なサイ｝　ＩＪシンが
好ましく挙げられるが、゛′なかでもサポニンが特に好
ましい。

サポニンは、植物界に広く分布する配糖体であり、ステ
ロイド又はトリテルイノイドを非糖部とする一群の化合
物の総称であり、共通した性質としては、水溶液は持続
性の起泡注をもち、溶血作用を示す。

ステロイド系サポニンの具体例としては、例えば、・ノ
ギトニン，ソラニン、サルササポニン、オスラジン、チ
モサポニン、アモノニン、カンモニン　サボトキシン、
シオスシン、Ｊｌ’ニン、スズ奴、また、トリテルベノ
イド系サポニンの具体例としては、例えば、チャサポニ
ン類、ツパキサポニン類、パナキロン、ムクロジサポニ
ン、ホウレンソウサポニン、エスクリン等が挙げられる
が、いずれもこれらＫ限定されるものではない。

これら本発明に係る溶血活性の高いサイトリシンは、夫
々、単独で用いても良・いし、二種以上適宜組み合わせ
て用いてもよく、その使用濃度としては、該検出用試薬
液中に溶解可能な範囲であれば特に限定されるものでは
ないが、通常０．０１〜５η〜％、好ましくは０．０５
〜２．Ｏｗ／ｖ％の範囲で添加される。

一方、溶血作用を有することが知られている化合物であ
っても、例えばラウリル硫酸ナトリウム等の陰イオン界
面活性剤等では、溶血活性が低いため、試験紙上で溶血
作用を発現させるためＫは濃度をかなり高《せねばなら
ないが、そのような濃度でこれらを用いた場合には、逆
ｋ呈色阻害が認められ、不都合が生ずる。即ち、溶血作
用を有する化合物であクても溶血活性の低い化合物の場
合Ｋは、本発明の目的忙用いることはできない。

本発明の潜血検出用試薬組成物で用いられる他の試薬類
，即ち、指示薬（色素）、酸化剤、緩衝剤等は、特Ｋ本
発明の為Ｋ選択されたものである必要はなく既存の潜血
検出用試薬組成物に於いて用いられている指示薬（色素
）、酸化剤、緩衝剤等が何ら支障なく使用することがで
きる。

即ち、指示薬（色素）としては、血液成分であるヘモグ
ロビン、ミオグロビン或いはその分解産物の存在下で色
変化を伴って酸化されるものであればいずれにてもよく
、例えば、アニリン類、フェノール類％０−｝ルイジン
、ｐ−トルイジン、０−フ二二レンジアミン、Ｎ，Ｎ’
−　シメチルーｐ−フェニレンジアミン，　Ｎ，Ｎ’−
　シエチル−ｐ−７二二レンジアミン、ｐ−アニンジン
、ジアニシジン、〇一トリジン、０−クレゾール、ｍ−
クレゾール、ｐ−クレゾール、α−ナ７トール、β−ナ
フトール、カテコール、クアヤコール、ビロガロール等
が挙げられる。

また、酸化剤としては、例えば有機ノ・イドロノソーオ
キサイドがその代表的なものとして挙げられるが、その
具体例としては、例えば、クメン・・イＰロパーオキサ
イｒ，ジイソプロピルベンゼンノ−イＰロパーオキサイ
ド、パラメンタンノ−イドロノκ−オキサイＰ、２，５
−ジメチルヘキサン−２，５一ジハイドロパーオキサイ
ド等が挙げられる。

また、ハイドロＪ−オキサイＰは一般に不安定で、特に
他物質との接触Ｋよりそれ自身分解したり、或は他物質
を変質させたりすることが多いので、通常は、これを、
例えばカプセル化物質等によりマイクロカプセルとする
などして他物質と隔離した状態にして使用するが、この
ような目的で用いられるカプセル化物質としては、例え
ばゼラチン、アルギニン、カラゲニン、アラビアゴム、
カゼイン、アルブミン等の蛋白質や多糖類等が挙げられ
る。

しかしながら、カプセル化物質は特にこれらに限定され
るものではなく、また他の物質との隔離の方法も所謂マ
イクロカプセル化に限定されるものでないことは言うま
でもない。

本発明に於いて用いられる、感度を高める為の賦活剤と
しては、例えばアクリ・ジン、塩酸アクリジン、２−メ
トキシアクリジン、７，８−ペンゾキノリン、キノリン
、６−メトキシキノリン、４，６ージメチルキノリン、
６−メチルキノリン、７一メチルキノリン，２．６−１
メチルキノリン、２ーメチルキノリン等が挙げられる。

また、緩衝剤としては、例えば酒石酸、リン酸、フタル
酸、クエン酸、酢酸塩等、ｐＨを４〜７の範囲に維持す
る緩衝剤が挙げられるが、これら緩衝剤の種類や検出組
成物中の濃度については、使用する色素に応じて、適宜
選択して用いるべきであることは言うまでもない。

本発明の新規な試薬組成物は種々の形態で用いることが
可能である。即ち、該組成物を構成する各試薬類を、水
、適当な有機溶剤或はこれらの混合溶剤ｋ溶解したもの
を含浸液とし、これＫ吸収性担体を浸漬させて、試薬類
を含浸、乾燥させた後、適当な大きさに切断してディス
クとしたり、適当な支持体上に固定化してスティックと
する等任意であることは先に述べたとおりである。

吸収性担体としては、紙、セルロース、化学損維、合成
樹脂製織布及び不織布等通常この種目的κ用いられる吸
収性担体がいずれも例外なく挙げられる。

吸収性担体を保持させる支持体としては、例えば、ガラ
ス繊維、ポリ塩化ビニル、テフロン、ボリスチレン、ポ
リビニルアセタール、アセチルセルロース，ニトロセル
ロース．ｙｔｒｖｔｘ化ヒニリデン及びボリデロピレン
等の合成高分子化合物のシート或はこれらをコーティン
グした厚紙等が挙げられる。

これら吸収性担体及び支持体の大きさ、寸法等Ｋついて
は特Ｋ制約はなく、通常この種目的に用いられている大
きさ、寸法Ｋ準じたものを用いることで足りる。

また、吸収性担体の支持体への接着方法に関しても、接
着剤を使用する方法、接着テープを使用する方法等、通
常この種の分野で行われているいずれの方法で行っても
よく特別な方法は必要としない。

以下に実施例を示すが本発明はこれら実施例Ｋより何ら
限定されるものではない。

「実施例」 実施例１． （１）検体尿の調製 １）等張尿の調製 デール尿に浸透圧計（　ＦＩＳＫＥ社製）で浸透圧を測
定しながら塩化ナ｝　ＩＪウム或ぱ蒸留水を加えて０．
９％生理食塩水と等張な液を調製した。

１１）検体尿の調製 １０ｔｔｔｌのメスフラスコＫ血液を０．　１　ｄ添加
し、ｉ）で調製した等張尿を加えて全容１０ｍｌとした
。

これを上記等張尿を用いて、血液濃度が２万倍希釈とな
るようＫ調製したものを非溶血検体とした。

また、溶血検体は、血液０．１ゴを等張尿で全容１ａｗ
／！とする代りに蒸留水で全容１０ゴとした以外は非溶
血検体の調製法に準じてこれを調製した。

（２１含浸液の調製 〔第Ｉ液〕 アラビアゴムの３０％水溶液６００ｄを６０℃に加熱し
、これにクメンハイドαノぐ−オキサイト４０ｔを加え
更Ｋゼラチン５％を含む０，５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ
５　）　３００屑ｌを加えて６０℃Ｋ保った後、これを
水冷し、サポニン（チャサポニン）１２を含む０．　５
　Ｍクエン酸緩衝液（　ｐＨ５　）　３００　ｘｔｌを
加えて第Ｉ液とした。

〔第■液〕

ｏ−トリジン６ｔと６−メトキシキノリン０．５２をク
ロロホルムＩＩ！Ｋ溶解し、第■液とした。

（３）試験片の作成 第１液にクロマト用テ紙を浸漬し、試液を含浸させた後
、乾燥器に入れて６０〜８０℃で乾燥させた。次いで、
これを第■液に浸漬し、更に試液を含浸させた後、再度
これを乾燥させた。このようＫして作製した試験紙を６
ｗ角の正方形に切断し、両面テーデを用いてポリ塩化ビ
ニルシ一ト（６■Ｘ　８　ａｎ　）　Ｋ貼り付け試験片
とした。

（４）呈色度の測定 検体尿に試験片を瞬時浸漬し、１０秒毎の呈色を色彩色
差計（ミノルタ社製，　ＣＲ−１２１　）で、測定した
。

尚、呈色状況は、陰性尿の呈色の感覚色度（Ｌ．ａ．ｂ
）の測定数値を基準とし、呈色の度合を感覚色度差（Δ
Ｅａｂ　）で表わした。結果を表１に示す。

比較例１． 実施例１の第Ｉ液からサポニンを除いたものを第ｉ液と
した以外は実施例１と全く同様にして含浸液の調製及び
試験片の作製を行い、実施例１と全く同様にして呈色度
の測定を行った。結果を表１に併せて示す。

表　　１ 数値は、陰性尿での色度を基準とした時の色度差（ΔＥ
ａｂ）である。

表１から明らかな如く、サポニンを添加した場合（実施
例１）は、サボニ／無添加の場合（比較例１）と比べて
、溶血検体と非溶血検体での色度差の値の差が小さく，
また、溶血検体の色度差の値が総体く高くなっているこ
とが判る。

即ち、従来の試験紙では、溶血検体と非溶血検体での呈
色差が大きかったが、サポニンの添加忙より、非溶血検
体での呈色が促進され、溶血検体との呈色差が改善がさ
れ、これまで以上Ｋ判定が明確Ｋなることが判る。

実施例２． 実施例１Ｋ於いて、チャサポニンを・ジギトニンに代え
ても全く同様の結果が得られた。

実施例３． 実施例１に於いて、チャサポニンをチゴニンに代えても
全く同様の結果が得られた。

実施例４． 実施例１に於いて、チャサポニンをメリチンＫ代えても
全く同様の結果が得られた。

実施例５． 実施例１に於いて、チャサポニンをグラミシジンに代え
ても全く同様の結果が得られた。

実施例６． 実施例１に於いて、第■液調製時に、６−メトキシキノ
リン０．５２を用いる代わりに６−メチルキノリン０．
４５２を使用した以外は、実施例１と同様にして含浸液
の調製及び試験片の作製を行い、実施例１と全く同様に
して呈色度の測定を行ったところ実施例１と全く同様の
結果が得られた。

実施例２ 実施例１に於いて、第■液調製時Ｋ、６−メトキシキノ
リン０．５２を用いる代わりに、アクリジン０．５５５
’を使用した以外は、実施例１と同様Ｋして含浸液の調
製及び試験片の作製を行い、実施例１と全く同様Ｋして
呈色度の測定を行ったところ実施例１と全く同様の結果
が得られた。

「発明の効果」 以上述べた如く、本発明は、高感度で且つ精度あり、従
来の潜血検出用試薬組成物では避けられなかった非溶血
検体測定時の呈色感度の低下を著しく低減せしめた点Ｋ
顕著な効果を奏する発明であり、斯業Ｋ貢献するところ
極めて大なる発明である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）血液中に存在する補血分子族の存在で色変化をと
   もなって酸化される指示薬、該指示薬を酸化するのに有
   効な酸化剤、ｐＨを４〜７の範囲に維持する緩衝剤、感
   度を上げる為の賦活剤及び溶血活性の高いサイトリシン
   を含んで成る体液及び体排出物中の潜血検出用試薬組成
   物。
2. （２）溶血活性の高いサイトリシンがサポニンである請
   求項（１）に記載の組成物。
3. （３）サポニンが、ジキトニン、ソラニン、サルササポ
   ニン、オスラジン、チモサポニン、ジオスシン、ジトニ
   ン、アモノニン、サポトキシン、カンモニン、スズラン
   サポニン類、スミロニン、チゴニン、トコロサポトキシ
   ン、トリリン、トリラリン、ユッコニン、チャサポニン
   類、ツバキサポニン類、パナキロン、ムクロジサポニン
   、ホウレンソウサポニン、エスクリンである請求項（２
   ）に記載の組成物。