JPH022392A - タンパク質水解物の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 よるタンパク質水解物の新規な製法、及びこのようにし
て得られたタンパク質水解物に係る。

詳述すれば、本発明の第１の目的は、発芽したソルガム
（ｓｏｒｇｈｕｍ）穀粒の抽出を介して得られた酵素系
を使用する植物源又は動物源から得たタンパク物質の酵
素加水分解法にある。

本発明の第２の目的は、上述の如くして得られたタンパ
ク質水解物（栄養の分野で使用される）にある。

タンパク質水解物は、一般に、天然のタンパク物質の酵
素的又は化学的な加水分解を介して得られた各種の分子
量を有するポリペプチドの混合物である。

かかる氷解物は、食品の分野において、低タンパク質食
品（これに添加される）の栄養価を高めるために使用さ
れる。

食品添加物としての使用に関しては、これらの氷解物は
いくつかの特殊な性質を有していなければならない。す
なわち、これらが添加される食品生成物のｐ旧こおいて
溶解性及び／又は分散性であって（たとえば、高タンパ
ク質飲料の調製に使用されるものである場合、該氷解物
は酸性ｐｉで溶解するものでなければならない）、許容
される味を有していなければならない。味に関しては、
一般に植物源又は動物源のいずれのタンパク質水解物も
特徴的な苦味（香味料又は甘味料の添加によってマスク
され得ない）を示すため、特別な問題を生ずる。

さらに、栄養の分野での特殊な応用面（衰弱した幼児又
は胃腸病の大人の栄養補給）に関しては、低分子量（代
表的には、平均分子ｍ　７００以下）のタンパク質水解
物が容易に吸収されるとの理由から特に好適である。

しかも、腸管壁からの吸収が遊離のアミノ酸自体よりも
むしろ、小ペブチド（アミノ酸２−５）（内生ペプチダ
ーゼによって遊離のアミノ酸に加水分解される）につい
てよく起るため、上述の低分子量タンパク質水解物は少
量（２０％以下）の遊離アミノ酸を含有していなければ
ならない。

これに関連して、いくつかの特許明細書において、少量
の遊離アミノ酸を含有する低分子量タンパク質水解物を
生成するタンパク物質の酵素加水分解法が開示されてい
る（たとえば、ＥＰ−＾００４４０３２）。しかしなが
ら、公知の方法では、このような結果は、少なくとも２
種類の異ったプロテアーゼを使用することによって達成
される。

これに対し、本発明による酵素加水分解では、単一酵素
系の使用によって、苦味が完全に除去されたタンパク質
水解物を生成し、加水分解の条件（酵素系の濃度、反応
温度及び時間）を調節することによって少量の遊離アミ
ノ酸を含有する低分子量のタンパク質水解物を生成する
ことが可能となる。

詳しくは、本発明による酵素加水分解は、発芽したソル
ガム穀粒からのタンパク質抽出物を酵素系として使用し
て行われる。

事実、各種のソルガム殻拉を数日間（少なくとも２日）
発芽させることにより、これから得られた酵素抽出物は
高分子量タンパク質及び低分子量ポリペプチドの両方を
加水分解でき、加水分解の条件に応じて７００以下の平
均分子量を何する完全に苦味が除去されたタンパク質水
解物を生成することが観察された。

発芽した穀粒から該酵素抽出物を得る方法は一般的なも
のであり、次のように要約される。

発芽したソルガム穀粒を均質化し、 有機溶媒（代表的にはアセトン）で洗浄することにより
、不用なａ機物質［たとえば、タンニン（均質化物質に
苦味及び暗褐色の色を付与する）］を除去し、 ついで、ほぼ中性の緩衝剤（代表的にはリン酸塩緩衝剤
）によって、固状残渣から酵素フラクションを抽出し、
及び 不活性な塩（代表的には、硫酸アンモニウム）を飽和点
まで添加することによって、酵素フラクションを緩衝剤
溶液から塩析させる。

上記沈殿処理は有機溶媒の存在下でも行われ、塩析溶液
と有機溶媒との間に酵素フラクションが位置する。

発芽したソルガム殻粒からの酸プロテアーゼ均質化生成
物の単離及び精製は文献［Ｇ、に、　Ｇａｒｇ及びＴ、
に、　Ｖｉｒｕｐａｋｓｈａ　ｒヨーロピアン・ジャー
ナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、）Ｊ１７、　（＋９７０）、　Ｐ　４−
１２１に開示されており、このようにして精製された酵
素の特性はＧ、に、　Ｇａｒｇ及びＴ、に、　Ｙｉｒｕ
ｐａｋｓｈａ　ｒＥｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
ｊ　１７（１９７０）、　Ｐ　１３−１８に記載されて
いる。

ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィーによって精製
した酵素（上記文献によれば、固有活性度６００Ｕ／ｙ
ｔｇ（タンパク質）／ｈを有することによって特徴づけ
られる）は、アスパラギン酸及びグルタミン酸のカルボ
キンル基を含むペプチド結合を特異的に開裂するエンド
ペプチダーゼと定義される。その限定された特異性から
、タンパク質の配列に関する研究の分野での該エンドペ
プチダーゼの利用が主として調査されてきた。つづいて
行われた研究（たとえば、Ｔ、に、Ｖｉｒｕｐａｋｓｈ
ａ及びに、Ｗａｌｌｅｒ＋４ｅｌｓｒＦＥＢｓ　Ｌｅｔ
ｔｅｒｓＪ　Ｖｏｌ、　４０（２）、　（１９７４）、
［）　２８７−９参照）は、精製に関する簡単かつ迅速
な方法の開発を目的とするものであった。

発明者らは、単に抽出することによって発芽したソルガ
ム殻粒から得られる酵素フラクション（従って、何ら精
製を行っていないらの）が実質的に２種類の活性成分、
すなわち未処理のタンパク質及び大ペプチドに対して活
性なタンパク分解成分及び小ペプチドに対して活性なペ
プチダーゼ成分で構成されること、及び植物源及び動物
源から得たタンパク物質の酵素加水分解において該触媒
系を使用することにより、苦味が完全に除去されたタン
パク質水解物が得られることを見出した。

さらに、タンパク分解活性に関する最適ｐＨは３．２−
４．２、好ましくは３．５−３．９であり、プロテアー
ゼ活性に関する最適ｐＨはこれよりも高く、４．５６．
５、好ましくは５．２−６．２であること、及び加水分
解のｐＨを調節して、２つの活性の一方を抑制して、他
方を促進できることを見出した。これにより、適宜選択
される範囲内の平均分子量を有するタンパク質水解物を
得ることができる。

特に、両方の種類の活性が存在することにより、低分子
量タンパク質水解物の製造において該酵素系を使用でき
る。

この場合、加水分解処理は、タンパク分解活性を発揮す
るに適するｐＨ（３，５−３，９）で開始される。

これにより、タンパク分解活性の発現が初めに生じ、ｐ
Ｉ（の上昇につれて、ペプチダーゼ活性の発現が生ずる
。

微生物源から得た他の酵素系（ＥＰ−Ａ−００４４０３
２）及び抽出処理によって得られた他の種類の酵素系と
は異なり、本発明の粗製酵素抽出物を使用する場合には
、該酵素系が多くの国において栄養の分野で使用されて
いる穀粒から得られたものであり、その安全性がすでに
確認されていることから、毒性に関する問題は全く生じ
ない。

本発明による酵素系は、動物源と共に植物源から得たタ
ンパク物質の加水分解に使用される。特に、本発明の方
法で使用される原料タンパク物質は、一般にタンパク賃
金ｆｆ１５０ないし９５％の大豆、ひまわり、綿、ミル
ク、卵及び同様のタンパク質生成物である。

本発明による酵素加水分解は、実質的には、タンパク物
質を水に分散させ、分散液のｐｉ（を３．０ないし６５
の値に調節し、これに酵素系を添加することによって実
施される。

水中における基質濃度（％ｖ／ｖで表される）は、主と
して、原料の種類及び加水分解の際のｐｌにおける水へ
の溶解度及び／又は分散性に左右される。

最適濃度は２．５ないし２０％の範囲であり、特に水に
溶解するタンパク質については、さらに高い濃度を利用
できる。

最適ＰＨも原料のタンパク物質の種類及び所望の生成物
に左右される。すでに述べたように、本発明のソルガム
酵素抽出物によって発現される２種類の活性は異なる最
適ｐＨを有し、初期ｐＨの選択は原料タンパク質のサイ
ズ及び所望の最終タンパク質水解物の平均分子量に左右
される。

しかしながら、一般に、未処理のタンパク質又は大ペプ
チドを原料とする場合、初期の最適ｐＨは３．５ないし
４．０であり、小ペプチドを原料とする場合には、最適
ｐＨは好ましくは５２口ないし６．０である。

無機酸又は有機酸（たとえば、塩酸、硫酸、クエン酸等
）を添加することにより、又は塩基（たとえば、ＮａＯ
Ｈ，ＫＯＨ等）を添加することによってｐＨを所望の値
に調節する。

ついで、酵素系を濃度１０ないし１０００／ｌＱ、好ま
しくは２０ないし６０Ｕ／ＭＱでタンパク物質分散液に
添加する。

本発明の酵素系のタンパク分解活性の測定にあたっては
、Ｇ、に、　Ｇａｒｇ及びＴ、に、　Ｙｉｒｕｐａｋｓ
ｈａによってｒＥｕｒ、Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ　１
７．　（１９７０）、　ｐ　４−１２に記載された方法
を利用できる。該方法は、０．０５Ｍクエン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３，７Ｘ　２　ｘ（１）に溶解した０、
１２５％アルブミン溶液に所定量の酵素系を添加し、混
合物を５０℃で６０分間インキュベートし、１０％トリ
クロル酢酸（２ＲＱ）を添加して加水分解を停止させ、
遠心分離して上澄液を分離し、Ａｎｓｏｎ法［Ｍ、Ｌ、
Ａｎｓｏｎら「ジャーナル・オブ・ジェネラル・フィジ
オロジー（Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、）ｊ　１
６（１９３３）、　ｐ５９］によって加水分解されたタ
ンパク質の濃度を測定することからなる。酵素のタンパ
ク分解活性の１０は、検定条件下においてチロシン１０
μ９を放出する量として定義される。

酵素加水分解は、温度２５ないし６０℃、好ましくは３
５℃以上、さらに好ましくは３７ないし５５℃で行われ
る。所望生成物の種類に応じて、４ないし４８時間加水
分解を続ける。

原料として水溶性に乏しい基質（たとえば、大豆、カゼ
イン、またはひまわりタンパク生成物）を使用して酵素
加水分解を行う場合には、タンパク分解酵素に対する該
基質のアクセシビリティ−が低いため、収率は一般に低
い。

より高い加水分解収率を得ろためには、この場合、中性
またはわずかにアルカリ性の条件下（これらの条件下で
は、基質が水に溶解し易くなる）でブレー加水分解を行
い、このようにして得られたブレー氷解物をソルガム酵
素抽出物によって加水分解することが好適である。実際
、該ブレー水解物は、ブレー加水分解の条件に応じて、
原料のタンパク物質よりも小さい平均分子ｍを有してお
り、従って、酸性の水性溶媒中に溶解し易くなる（すな
わち、酵素に対して、さらに自由にアクセスする）。

本発明の他の目的は、中性又はわずかにアルカリ性の条
件下で行った酵素的ブレー加水分解により得られたもの
を原料とするソルガム酵素抽出物による酵素加水分解法
にある。

以下の実施例は、本発明の好適な具体例を詳細に説明す
ることを目的とするものであり、本発明の精神を限定す
るものではない。

実施例１ ソルガム酵素抽出物 １ｓｔｉｔｕｔｏ　ｄｉ　Ｃｅｒｅａｌｉｃｏｌｔｕｒ
ａ　（ローフ）から３種類（＾ｒａｌｂａ、　Ｆ２７Ｒ
及びＦ３０Ｒ）のソルガム殻粒（Ｓｏｒｇｈｕｍ　ｖｕ
ｌｇａｒｅ）を人手し、それぞれ下記の如く処理した。

殺菌 スクリーニングした後、穀粒を次亜塩素酸ナトリウム溶
液（８％ＣＬ）２容で処理し、２−３分後、水で完全に
かつ繰返し洗浄した。ついて洗浄した穀粒３％ＨｔＯｔ
　４容で処理し、３−４分後、水で厳重に洗浄した。

魚も このように処理した穀粒を、底部に水を吸収したｐ紙を
収容するブレート（３５×４０ＣＩＩり上に播種し、交
互に３０℃で８時間２０℃で１６時間維持して炉内にお
いて５日間インキュベートした。

粗製抽出物の調製 ５日間インキュベートした後、発芽した穀粒を回収し、
冷アセトン（−１０℃）２容で処理し、８０００ｒｐｍ
で３分間均質化させた。濾過し、冷アセトンで洗浄した
後、ピンク色を帯びた白色の粉末を得た。この粉末を０
．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６８）４容中に
懸濁化させ、温度を４℃に維持しながら、１００００ｒ
ｐＩ１１で４分間均質化させた。混合物を遠心分離し、
酵素活性を有する上澄液を回収した。

該上澄液を一５℃においてアセトン（３０％、ｖ／ｖ）
で処理し、さらに遠心分離する際に分離してくる沈殿物
を廃棄した。アセトン上澄液に、５５％飽和となるまで
硫酸アンモニウムを添加した。このようにして、アセト
ン上層及び塩を含む下履と、これらの中間に存在するタ
ンパク質ディスクとを得た後、液状の両層を除去して該
タンパク質ディスクを回収した。

このタンパク質ディスクをリン酸塩緩衝液に溶解させ、
同じ緩衝液に対して透析し、ついで凍結乾燥させた。

次の第１表は、上述の各種のソルガム殻粒１８０９から
得られた酵素系の特性を示すものである。

第　　１　　表 穀粒の種類　　得られｒこ抽出物　　固有活性度の全体
の単位　　　（Ｕ／ｕ（タンバりＦ２７Ｒ１３０５０２
５，７ 実施例２−７ タンパク質水解物の調製 一般法 以下の実施例で利用する一般法は次のとおりである。

すなわち、基質を水中に濃度４％（ｖ／　ｖ）で分散さ
せ、０．１Ｎ　ＨＣＱを添加してｐＨを所望の値に調節
し、このように１．て得られた分散液に、実施例１に記
載の如くして得られた酵素系を、固有活性度及び塩含量
に応じて基質に対して２−６重量％に相当する量で添加
する。＠濁液を５０℃で適宜選択した時間撹拌し、つい
で遠心分離し、上澄液を分離し、凍結乾燥する。

平均分子量及び分子量分布の測定を下記の方法で行う。

すなわち、氷解物の平均分子１ｊｋ　（ＭＤについては
、６ｖグアニジンで平衡化したＢｉｏＧｅｌ（登録商［
）Ｐ２Ｏ（１，６Ｘ６０ｃｘ）カラムを使用し、流速７
峠／ｈで操作し、１．９ｊｌρずつでフラクションを集
め、２８０ｎｍにおける吸光度を測定する。

既知の分子量（１３８００，６５００，３４５０，１４
５０，１０６０及び４５１）を有する６種類のタンパク
質及びペプチドを使用して、カラムに予め目盛づけする
。ボイド容量及び全体容量については、それぞれ血清ア
ルブミン（ＭＹ　６４０００）及びトリプトファン（Ｍ
Ｙ　２０４）を使用する。

各標準物の分布係数（Ｋａｖ）を次式によって求める。

Ｋａｖ＝　（Ｍｅ　−Ｖｏ）／　（ＭＬ−Ｖｏ）（ここ
で、Ｖｏはボイド容量であり、Ｖｔは全体容量であり、
Ｖｅは各標準物の溶出容量である。）求められた分布係
数Ｋａｖは、分子量の大きい方から小さい方に、０（血
清アルブミン）、　０．２５５．０．３７７．０．４４
９．０．６５８．０．６９４．０．８７７及び１（トリ
プトファン）である。

平均分子量は、Ｈｊｅｒｔｅｎの等式［「ジャーナル・
オブ・クロマトグラフィー（Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔ、）
Ｊ　５０゜（１９７０）、　ｐ　１８９−２０８１によ
って求められる。クロマトグラフィーに供するサンプル
を０．０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐ＋１７）に濃度４０ｍ
９／ｍｌで溶解させ、１００°Ｃに１０分間維持してイ
ンキュベートし、酵素を除去する。遠心分離して上澄液
を回収し、６Ｍグアニジン４容で希釈し、カラムに負荷
する。ついで、２８０ｎｍにおける吸光度を測定して、
分子量分布及び平均分子量を求める。

一方、遊離アミノ酸含量はＢｅｌ　ｌｉｎｇｅｒ法［「
Ｊ。

Ｃｈｒｏｍａｔ、Ｊ　８７．　（１９７３）、　ｐ　５
１３−２２］によって測定されている。この方法では、
ＢｉｏＲａｄの如きラセミ形の樹脂カラム［中性及び塩
基性のアミノ酸は選択的に保持されるが、酸性のアミノ
酸はペプチドフラクションと共に溶出され、直接に又は
独立してＢｅｒｇｍｅｙｅｒ法（Ｈ，Ｕ、　Ｂｅｒｇｍ
ｅｙｅｒ　ｒメソッド・才プ・エンザイマティブク・ア
ナリシス（Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｒｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ａ
ｎａｌｙｓｉｓ）Ｊ　１９６５年発行、第２版、３８１
９７頁）によって定量されるコを使用する。ラセミ形樹
脂の調製は、樹脂を飽和硫酸第二銅溶液２０容中に４℃
で１２時時間開させることにより実施される。上澄液中
に銅が検出されなくなるまで水で厳重に洗浄した後、樹
脂を０．１Ｍ　ＮＨ，ＯＨで平衡化し、カラムに充填す
る。サンプル（１０ｍ９／　ｘＱ）をＨ，０）１でｐＨ
ｌ０とし、カラムに負荷する。Ｑ、ＩＭ　！１１（，０
１（で溶出する際、集められた第１のフラクションはペ
プチド及び遊離の酸性アミノ酸を含有する。ついで、溶
離剤の濃度を２Ｍに増大させることにより、保持されて
いた塩基性及び中性のアミノ酸が溶出される。この溶液
をアンモニウム形のＢｉｏＲａｄ様カラムを通過させる
ことによって、含まれる銅を除去する。集めたフラクシ
ョンを濃縮し、アルカリ性の水で厳重に洗浄する。つい
で、公知のニンヒドリン法によって遊離アミノ酸及びペ
プチドを定量する。

加水分解の収率（η：％）は、原料物質中及び回収され
た氷解物中の全窒素金型をケルクール法で算定すること
によって求められる。収率は次式％式％ 下記の第２表は、各種基質を原料とし、本発明の触媒系
を使用して、上述の一般法に従ってｐＨ３，７、反応時
間２３時間、酵素（ｔｋ　５ＱＵ／　ｘＱ”’Ｑ　行−
）　ｒ：　酵素加水分解により得られたタンパク質水解
物の特性を示すものである。

第２表において、符号Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、及びＥは下記の
分子量によって特徴づけられるタンパク質水解物フラク
ノヨンを示す（他の表においても同じ）。

Ａ　　　　４６８００ないし５２５０ Ｂ　　　　５２５０ないし２２００ Ｃ２２００ないし１０００ Ｄ　　　　１０００ないし　７５０ Ｅ７５０以下 Ｆは：Ｒ離アミノ酸含量（％）であり、Ｇは加水分解の
収率η（％）である。

実施例３ 未処理のタンパク質からのタンパク質水解物の調製 一〆′ 第　　２　　表 基質及び酵素　分子ｍ　　各フラクション（％）　　Ｆ
の固有活性度 （Ｓ、、へ）（ＭＷ）ＡＢＣし　ＤＥ　　圓　Ｑσカ０
、イア注１ Ｓ、Ａ、＝　２２ 血清フル７゛ミン ５００　　　　　０　　　０　　６．８　３２　　９０
　　１８ＳＡ、＝２２ ４３５　　　　０　　　Ｑ、５　２．３　２．５　　８
９　１６注１　　：　ＢｅＬａｃｈｅｍ社製のＥｄｉｂ
ｌｅ　Ａｃ１ｄｉｃ　Ｃａ５ｅｉｎ（９０−１１０メツ
シユ） 注２　　：　Ｃａｒｇｉ１社製の大豆単離生成物Ｐｒｏ
ｒａｍＱＨ３ 第３表は、固有活性度２２を有する本発明の酵素系を使
用し、アルブミンを原料として、５０℃、ｐＨ３，７又
は５８において６時間加水分解することによって得られ
たタンパク質水解物の特性を示すものである。

第　　３　　表 ｐＨＩｌｌ　　　　　各フラクション（％）　　　　Ｆ
ＡＢＣＤ二　−旦一　Σ ３．７　１５３０　　１．７　１３．１　２２．６　２
　　６０．６　６．５５．８　５１００　　１５．２　
１２　　１２．５　６Ｊ　　５３．７　２８実施例４ ブレー氷解物からの氷解物の調製 酸性溶媒に充分には溶解しないタンパク質（たとえば、
大豆、カゼイン、ひまわり等）を原料として加水分解を
行う場合には、酸性ｐＨで働く本発明の酵素系の加水分
解活性を改善するため、中性又はわずかにアルカリ性の
溶媒中でブレー加水分解処理することが好ましく、これ
ら溶媒中では、原料が充分に溶解するようになり、適宜
選択された塩基性又は中性のプロテアーゼ（たとえば、
アルカラーゼ（＾Ｉｃａｌａｓｅ）又は枯草菌（Ｂ、　
５ｕｂｔｉｌｉｓ）生産の天然プロテアーゼ）によって
容易に消化される。

このブレー加水分解工程で実際に利用される方法は４％
タンパク質溶液に３００／ｚ（！（１％　：Ｗ／Ｖ）に
相当する量の塩基性又は中性のプロテアーゼを添加し、
０．５Ｎ　ＮａＯＨを添加することによってプロテアー
ゼに最適な値にＰＨを調節しながら（塩基性プロテアー
ゼについてはｐＨ８、中性のプロテアーゼについてはｐ
）１７）、３７℃で３０−６０分間インキュベートとす
るものである。ついで、０．５Ｎ　）ｌｃＩ２を添加し
てｐｌｌを４．０に調節し、１００℃に１０分間加熱す
ることによって酵素を不活性化する。一般に、得られた
ブレー氷解物は、ソルガム酵素抽出物に対して好適なｐ
ｉ域においてほぼ完全に溶解する。

例として、下記第４表に、アルカラーゼ又は枯草菌から
得た中性プロテアーゼによって処理して得られた未処理
カゼイン及びカゼインブレー氷解物の特性を示す。

第　　４　　表 基質 ＩＩ 各フラクション（％） 方セ゛イン７１し 水解物（アルカ ラーセ゛処理） ２３．８　２２．６　１９．１ ９．７ カ七ゴンフ０レー 氷解物（中性　７６００　２４．９　　＋２．１　１７
．０　２７．０　２１７°口ｔ１−「処理） 下記の第５表は、アルカラーゼによってブレー加水分解
したカゼインを原料とし、固有活性度８Ｕ＃９（タンパ
ク質）／ｈを有するソルガム酵素抽出物を使用し、酵素
濃度３０Ｕ／ｘｉ２．５０℃、６又ｉ；ｉ２３時間、ｐ
［（３，７又は５．８で加水分解を行って得られたタン
パク質水解物の特性を示す。

第　　５　　表 ｐＨ 時間　　Ｍｆ　　　各フラクション（％）ＦＧ（ｈ）　
　−工　」二　−９−Ｊし一上−（％）　　（５υＬ６
　１３５０　４．６　１３．４　１４．８　１０　　５
７　　４　　５２２３　　８６０　　Ｇ　　　？、Ｌ　
　１２．４　　ＩＩ　　　６７　１（１７７６１０２０
１，１５，１９，７１０，１？４　　９　　８４２３　
　５００　０　　０　　１．５　５．４　９３　１８　
　９２同様に、同じ条件下で、ただし中性のプロテアー
ゼによってブレー加水分解したカゼインを原料としてソ
ルガム酵素による酵素加水分解を行い、箪６表に示す特
性を有するタンパク質水解物を得た。

箪６表 ｐＨ 時間　　Ｍｌ　　　各フラクション（％）　　　　　Ｆ
ＧゴΣし一ノー　」ヨ　ＣＤ！辷−０９−０吐６　　［
３３０４，６１２１４，３６，５６２，６７６１２３７
６０００，１６，５４，４８９１５７８６１０５０１，
５１４，７１３，９５，７６３，９１１７２２３５１０
０１３，７５，５９０１２９４実施例５ アルカラーゼでブレー加水分解したカゼインを原料とし
て得られる生成物の特性に対する酵素濃度の影響につい
て試験した。

固有活性度８Ｕ／ｊＩ９を有する酵素系を３種類の濃度
（２０，３０及び５０Ｕ／１１２）で使用した。ソルガ
ム酵素による加水分解を５０℃、ｐＨ３，７において２
３時間で実施した。

得られた結果を第７表に示す。

酵素濃度　ＭＷ 坦ηａ−Ａ ８６０Ｇ　　２３．８ ２０　　１３７０　４．６ 第　　７　　表 各フラクション（％）ＦＧ Ｂ　　四二　」−一旦＝（％）　　Σ ２２．６　　＋９．１　９．７　２７　０．２１３□４
１４．８ｉ０　　５７　　４　　４６７．１　１２．４
　１３　　６７　　６　　７４１．０　５．９　５．５
　８５　１１　　９０実施例６ 加水分解反応時間の影響 大豆単離生成物及びカゼイン（いずれらアルカラーゼに
よってブレー加水分解したもの）を原料とし、得られた
生成物に対する加水分解の反応時間の影響を試験した。

酵素系（固有活性度２２０／ｘｌＪ）濃度３０Ｕ／ｘ１
２．５０℃、ｐＨ３，７において、加水分解を２．６又
は２３時間実施した。

得られた結果を第８表に示す。

第　　８　　表 加水分解　ｉｌｌ　　　　各フラクション（％）　　　
　　ＦＧの反応時 間（ｈ）　　　　　　Ａエ　一旦−〇ＤＥＬ−（％）　
　（９１σ大豆単離生成物 １５．１ ２．２ １７．９ １４．４ １６．７ １５．１ １３．８ ２６　　　０．２ Ｂ５．４　５．５ ９４　　１８．２ カゼイン ８６００　２３．８　２２．６　　＋９．１　９．７　
　２７　　０．２２　　　３２０Ｇ　　１４，７　１８
．ａ　　１４．１　５．３　４８　　　Ｌ、８　４ｇ６
　　　１０５０　　１．５　１４．７　１３．５　５．
２　６５　　５．４　６２２３　　　６９０　０　　７
．０　８．８　３．７　８０　　Ｉｓ　　　１１０一般
的に使用されている他の微生物生産のプロテアーゼと比
へて本発明の酵素系の利点を確認するため、上述の基質
の１つ（すなわち、アルカラーゼでブレー加水分解した
カゼイン）を、アスペルギルス・ニーチー（＾ｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）から得られた市販のプロテ
アーゼによって処理し、該プロテアーゼに関し文献に開
示されている最適条件下（ｐＨ３，０，５０℃、３％（
ｗ／　ｗ）酵素／基質）、６及び２３時間加水分解を行
い、第９表に示す結果を得た。

第　　９　　表 加水分解の　　　ＭＹ　　　フラクンヨンＥ反応時間（
ｈ）（％） ６　　　　　　　　＞１５００　　　　　　６３２３　
　　　　　　　＞１５００　　　　　　６７実施例７ 酵素固有活性度の影響 アルカラーゼでブレー加水分解したカゼイン（４％）を
原料とし、固有活性度８．２２及び３１を有する３種類
の調製物から得た酵素系サンプル（実施例１参照）３Ｑ
ｔｌ／峠を使用し、５０℃、ｐＨ３，７で２３時間イン
キュベートして試験した。さらに、比較のため、［ジャ
ーナル・才ブ・アプライド・バイオケミストリー（Ｊ、
　Ａｐｐｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）Ｊ　５　、　（１９
８３）。

４２０−２８に開示されたようにしてバシトラシン上で
のアフィニティークロマトグラフィーによって精製した
固有活性度１８５を有しかつペプチダーゼ活性を持たな
いソルガムプロテアーゼを使用した。

得られた結果を第１０表に示す。

第　　１０表 Ｓ、Ａ １ｆｔ　　　　　各フラクション（％）　　　　ＦＧＡ
ＢＣユ」−」辷−（転）と（％）− ８５９００２，１２，８ ２２６９００７，０ｇ、８ ３１　　　　５３０　　０　　　１．０６．０＋８５　
　　１３３０　　０　　　１９　　１３３．７　　８０
　　　１５　　　８０ ５、Ｑ　　　＋１５　　　１１　　　８０これらのデー
タは、固有活性度は得られる氷解物の平均分子量に影響
を及ぼすことはないが、ただし、ペプチダーゼ成分を含
有しない固有活性度１８５の公知の精製酵素が低分子量
の氷解物を生成し得ないとの事実から示されるように、
２種類の活性成分（タンパク分解成分及びペプチダーゼ
）は分離されないことを示している。

予想したように、本発明の方法によって得られたタンパ
ク質水解物は全く苦味を有していない。

特に、下記タンパク質水解物について官能試験を行った
。

１、実施例６の方法に従い、加水分解を６時間行って得
られた平均分子１１２００の大豆氷解物２、実施例６の
方法に従い、加水分解を２３時間行って得られた平均分
子量５４０の大豆水解物３、実施例６の方法に従い、加
水分解を６時間行って得られた平均分子ｆｆ１１０５０
のカゼイン氷解物４、実施例６の方法に従い、加水分解
を２３時間行って得られた平均分子量６９０のカゼイン
氷解物５、実施例２の方法に従って得られた平均分子量
７３０の血清アルブミン氷解物（第２表）上記氷解物ｌ
を平均分子量１５４０及び１３８０を有する大豆氷解物
（それぞれ６及び７）でなる２種類の市販生成物と比較
した。

上記氷解物３を下記の３種類の氷解物と比較した ８　水解物３を原料とし、アルカラーゼによって酵素加
水分解して得られた分子量１１４０のカゼイン氷解物 ９、氷解物３を原料とし、ニュートラーゼ（ｎｅｕｔｒ
ａｓｅ）によって酵素加水分解して得られた分子ｆｉ１
２８０のカゼイン氷解物 １０、氷解物３を原料とし、アスペルギルス・ニガーか
ら得た中性のプロテアーゼによって酵素加水分解して得
られた分子ｆｆｉ　１５００のカゼイン氷解物 氷解物２．４及び５に関しては、異なる酵素系によって
得られた同等でないタンパク質水解物であるため、比較
官能試験を行うことができなかった。

官能試験は２５才から５０才までのテスター２０人を１
グループとして実施した。

水解物１．２．６及び７では、３種類の処方で試験した
。

処方Ａ　：水道水の５％（ｖ／　Ｖ）溶液処方Ｂ　：天
然オレンジ香料（０，１５％；ｖ／ｖ）を含有する１０
％（ｗ／　ｖ）ショ糖溶液の５％（ｗ／ｖ）溶液 処方Ｃ；クエン酸（０，２５％：Ｗ／Ｖ）及び天然オレ
ンジ香料（０，１５％）を含有する１０％（Ｗ／Ｖ）シ
ョ糖溶液の５％（ｗ／ｖ）溶液タンパク質水解物３．４
．５．８．９及び１０については、処方Ａとしてのみ試
験した。

得られた結果を第１１表に示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　植物源又は動物源から得たタンパク物質の酸性ｐＨ
   での酵素加水分解によってタンパク質水解物を製造する
   方法において、発芽したソルガム殻粒から得た酵素抽出
   物を酵素系として使用することを特徴とする、タンパク
   質水解物の製法。 ２　請求項１記載の製法において、前記酵素抽出物が、
   発芽したソルガム殻粒を均質化させ、有機溶媒で洗浄し
   、中性の水性溶媒で抽出し、塩を添加して水性溶液から
   沈殿させることによって得られたものである、タンパク
   質水解物の製法。 ３　請求項１記載の製法において、ｐＨが３．０ないし
   ６．５である、タンパク質水解物の製法。 ４　請求項３記載の製法において、ｐＨが３．５ないし
   ４．０である、タンパク質水解物の製法。 ５　請求項１記載の製法において、酵素濃度が１０ない
   し１００Ｕ／ｍｌである、タンパク質水解物の製法。 ６　請求項５記載の製法において、酵素濃度が２０ない
   し６０Ｕ／ｍｌである、タンパク質水解物の製法。 ７　請求項１記載の製法において、前記酵素加水分解を
   反応時間４ないし４８時間で行う、タンパク質水解物の
   製法。 ８　請求項１記載の製法において、前記酵素加水分解を
   温度３７ないし５５℃で行う、タンパク質水解物の製法
   。 ９　請求項１記載の製法において、ソルガム酵素抽出物
   による加水分解前に、原料タンパク物質について中性又
   はアルカリ性条件下で温和な酵素的ブレー加水分解を行
   う、タンパク質水解物の製法。 １０　請求項１−９のいずれか１項記載の製法において
   、原料タンパク物質が、大豆、ひまわり、綿、ミルク及
   び卵から得られたタンパク質含量５０ないし９５％のタ
   ンパク生成物である、タンパク質水解物の製法。