JPH02242664A

JPH02242664A - 細胞電気処理チャンバ

Info

Publication number: JPH02242664A
Application number: JP6445589A
Authority: JP
Inventors: Katsuyuki Imai; 克行今井
Original assignee: Shimadzu Corp
Current assignee: Shimadzu Corp
Priority date: 1989-03-15
Filing date: 1989-03-15
Publication date: 1990-09-27

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は電気刺激を利用して細胞どおしを融合させたり
、細胞に遺伝子を導入させたりするのに使用する細胞電
気処理チャンバに関するものである。

細胞融合や遺伝子導入の技術は農業や水産業の分野にお
ける増殖や研究、医学や食品の分野における新種の開発
などに利用されている。

（従来の技術）細胞融合や遺伝子導入に用いられる細胞電気処理チャン
バは、平坦面をもつ底面上に対向電極が配置されたもの
が殆んどである。

細胞融合を起こさせるときは、チャンバに細胞懸濁液を
入れ、細胞が底面上に沈殿するのを待って交流電圧を印
加して電気泳動を起こさせて細胞とおしを接触させ、そ
の後、直流高電圧パルスを印加して融合を起こさせる。

パルス印加後は融合を促進させるために１例えば１５分
間程度静置する。

（発明が解決しようとする課Ｍ）細胞には器壁に付着する性質のものがある。特に、卵や
動物細胞の多くは器壁付着性である。細胞融合の際には
、沈殿させた後に融合を起こさせるので、器壁付着性の
細胞の場合には電気泳動が起こりに＜＜、融合が起こり
にくい。

また、融合や遺伝子導入処理の後、静置する間に器壁付
着性細胞が底面に付着し１回収が困難になる。

本発明は、器壁付着性の細胞であっても、細胞が器壁に
付着して融合や回収が困難になることのない細胞電気処
理チャンバを提供することを目的とするものである。

（課題を解決するための手段）細胞が底面に付着するのを防ぐために１本発明ではチャ
ンバの底面をなくした。

そのため、本発明の細胞電気処理チャンバでは、対向面
が平行平面になるように一対の電極が絶縁部材により保
持されており、前記一対の電極が対向している空間の上
面及び下面が開口している。

（作用）一対の電極が対向している空間に細胞懸濁液を入れると
、細胞懸濁液は表面張力によってこのチャンバ内に保持
される。細胞は細胞懸濁液の下面界面に沈殿し、引っか
かることがないので、電気泳動を十分に起こし、バール
チェーンや配列を作る。

（実施例）第１図は一実施例を表わす平面図、第２図はそのＡ−Ａ
線位置での断面図である。第２図にはさらにシャーレや
蓋とともに顕微鏡の対物レンズまで示しである。

２は絶縁物製のボディであり、一対の電極４゜６がボデ
ィ２に接着剤によって取りつけられて保持されている。

電極４と６の対向面４ａ、６ａは平行な平面である。対
向面４ａ、６ａの間隔は、対向面４ａ、６ａ間に細胞懸
濁液８を入れたとき表面張力によって細胞懸濁液８を保
持できる大きさであり１例えば０．５〜２ｍｍの範囲の
適当な値に設定されている。

電極４，６の対向面４ａ、６ａの断面形状のエツジ部は
、細胞懸濁液８が表面張力によって安定して保持される
ように、９０度以下であることが必要であり１図のよう
に鋭角であることが望ましい。

電極４，６が対向している空間の両端部がボディ２に接
触しないように、ボディ２には空間１０゜１２が設けら
れている。

１４は電極４につながる端子、１６は電極６につながる
端子である。

１８はこのチャンバ１の下側に置かれるシャーレ又はス
ライドガラス、２０はチャンバ１の上側に置かれる蓋で
あり、シャーレ１８と蓋２０によってチャンバ１を挾む
ことによって電気処理中に細胞懸濁液８を雑菌から守る
ことができる。２２は倒立顕微鏡の接眼レンズである。

次に、本実施例を用いて細胞融合を行なうときの操作を
説明する。

チャンバ１をクリーンベンチ内で空中に保持し、電極４
，６間に細胞懸濁液８を先の細いピペットなどを用いて
静かに注入する。細胞懸濁液８は表面張力によって対向
電極の平行平面部分に溜められる。強いショックを与え
なければチャンバ１をどの方向に向けても細胞！！ｉ濁
液８は滴下しない。

電極４，６間の下面に細胞懸濁液８が十分入っているの
を確認し、チャンバ１をシャーレ１８上に置き、端子１
４．１６を電源装置のリードに接、続する。蓋２０を被
せ、顕微鏡２２で観察しながら電極４，６間に電圧を印
加する。融合の場合は、まず交流電圧によって細胞を電
気泳動させて互いに接触させ、その後直流高電圧パルス
を印加して融合させる。

第３図は本実施例のチャンバ１をスタンド２４に取りつ
けた状態を表わしている。

スタンド２４はチャンバ１の端子１４．１６を挾む一対
のリード２６（一方のリードだけが示されており、他方
のリードも同じ形状をしており。

紙面前方にあるため図には現われていない）をもち、チ
ャンバ１の端子１４．１６はそれぞれり−ド２６に沿っ
て上下方向に移動させることができる。２８はリード２
６につながる端子であり、他方のリードにも同じ形状の
端子が設けられている。

図の状態はチャンバ１が水平方向に置かれた状態である
。チャンバ１をリード２６に沿って上方に上げ、リード
２６の幅が広くなった部分２６ａの位置でチャンバ１を
保持することができる。その位置では例えば鎖線１′で
示される垂直方向など、チャンバ１を任意の方向に向け
ることができる。垂直方向のチャンバ１′の状態では、
電極４゜６間で細胞懸濁液８を収容している部分が垂直
方向に配置されることになる。

チャンバ１を水平方向に配置したとき、第４図に示され
るように、電極４，６間で細胞懸濁液８の下面が湾曲す
ることがある。卵や細胞８ａが湾曲した界面に沈殿する
と、電極４，６間に電圧を印加したとき電気力線が卵や
細胞８ａに十分に作用しないことがありうる。そのよう
な場合は、第３図に破線１′で示されるようにチャンバ
１を垂直方向に保持し、縦方向の空間に沿って細胞が沈
降する時間を大きくとり、その間に細胞を配列させて電
気パルスを印加すると、電気力線を有効に作用させるこ
とができる。

また、チャンバ１は垂直方向だけではなく、任意の角度
に保持することができ、細胞の沈降速度を制御して細胞
の配列を調整することができる。

（発明の効果）本発明のチャンバでは、容器の下面底面が存在しないの
で、細胞が器壁付着性のものであっても。

従来のように細胞が底面に付着する問題がない。

電極間の上面と下面が開口しているので、洗浄が極めて
容易であり、洗浄不良による汚染が少なくなる。

構造が簡単であるため、安価に製作することができる。

また、チャンバの上面からも下面からも細胞懸濁液を注
入したり回収したりすることができ、操作が容易である
。

【図面の簡単な説明】

第１図は一実施例を表わす平面図、第２図はそのＡ−Ａ
線位置での断面図をシャーレ、蓋及び顕微鏡の対物レン
ズとともに示したものである。第３図は一実施例のチャ
ンバをスタンドに装着した状態を示す断面図、第４図は
電極間で細胞懸濁液の界面が湾曲した場合を示す断面図
である。１・・・・・・チャンバ、２・・・・・ボディ、４，６
・・・・・・電極、４ａ、６ａ・・・・・・電極対向面
、８・・・・・・細胞懸濁液。特許出願人　株式会社島津製作所

Claims

【特許請求の範囲】

（１）対向面が平行平面になるように一対の電極が絶縁
部材により保持されており、前記一対の電極が対向して
いる空間の上面及び下面が開口している細胞電気処理チ
ャンバ。