JPH02242665A - 微生物の培養法 - Google Patents
微生物の培養法Info
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- JPH02242665A JPH02242665A JP6071789A JP6071789A JPH02242665A JP H02242665 A JPH02242665 A JP H02242665A JP 6071789 A JP6071789 A JP 6071789A JP 6071789 A JP6071789 A JP 6071789A JP H02242665 A JPH02242665 A JP H02242665A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は有機溶媒に耐性を有する微生物の培養法に関し
、詳しくは特定の条件を満足する有機溶媒を含有する培
地で当該微生物を培養する方法に関する。
、詳しくは特定の条件を満足する有機溶媒を含有する培
地で当該微生物を培養する方法に関する。
〔従来の技術、発明が解決しようとする課題〕有機溶媒
を含有する培地で微生物を培養する方法についてこれま
でに数例報告されているが、般には有機溶媒の毒性のた
め、低濃度または蒸気の形で接触させて培養するもので
あった。
を含有する培地で微生物を培養する方法についてこれま
でに数例報告されているが、般には有機溶媒の毒性のた
め、低濃度または蒸気の形で接触させて培養するもので
あった。
近年、弁上により有機溶媒耐性菌が発見され、各種有機
溶媒（脂肪族炭化水素類、脂環式炭化水素類、芳香族炭
化水素類、アルコール類、エーテル類など）存在下で当
該微生物を培養する方法が提案された。この方法によれ
ば、高濃度の有機溶媒の存在下で培養が可能であるため
、雑菌汚染の防止や水に難溶性の基質を利用できる等の
メリットがあるけれども、有機溶媒耐性菌の種類が限ら
れていた。
溶媒（脂肪族炭化水素類、脂環式炭化水素類、芳香族炭
化水素類、アルコール類、エーテル類など）存在下で当
該微生物を培養する方法が提案された。この方法によれ
ば、高濃度の有機溶媒の存在下で培養が可能であるため
、雑菌汚染の防止や水に難溶性の基質を利用できる等の
メリットがあるけれども、有機溶媒耐性菌の種類が限ら
れていた。
〔課題を解決するための手段］
そこで、本発明者らは公知種の一般微生物を靜濃度の有
機溶媒存在下で培養する方法をも■立ずべく検討を重ね
た結果、使用する微生物に応じて特定の有機溶媒を選択
することによって目的が達成できることを見出し、本発
明を完成したのである。
機溶媒存在下で培養する方法をも■立ずべく検討を重ね
た結果、使用する微生物に応じて特定の有機溶媒を選択
することによって目的が達成できることを見出し、本発
明を完成したのである。
すなわち、本発明はアクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏ
ｂａｃｔｅｒ）属、アグロバクテリウム（＾ｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルカリゲネス（ＡＩｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ） Ｈ，アクロモナス（＾ｃｈｒｏｍｏｎａｓ
）属、アシネトバクタ−（＾ｃｉｎｅｔｏｂａｃＬｅｒ
）属、エルウィニア（Ｕｒｗｉｎｉａ）属、エンテロバ
クタ−（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテ
リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、シトロバ
クタ−（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フラボバクテリ
ウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、パラコツカ
ス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属、プロテウス（ｐｒｏｔ
ｅｕｓ）属、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）
属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属、ロドコッカス属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ
） 、 マイクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃ
Ｌｅｒ ｉ ｕｍ）属、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、コリネバク
テリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属および
サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属の
いずれかに属し、有機溶媒に耐性を有する微生物を、当
該微生物が許容する有機イ容媒の分配係数（Ｐ）の対数
（ｌｏｇ Ｐ）値以」−のｌｏｇ Ｐ値を有する有機溶
媒を０．３％以上含有する培地で培養することを特徴と
する微生物の培養法に関する。
ｂａｃｔｅｒ）属、アグロバクテリウム（＾ｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルカリゲネス（ＡＩｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ） Ｈ，アクロモナス（＾ｃｈｒｏｍｏｎａｓ
）属、アシネトバクタ−（＾ｃｉｎｅｔｏｂａｃＬｅｒ
）属、エルウィニア（Ｕｒｗｉｎｉａ）属、エンテロバ
クタ−（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテ
リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、シトロバ
クタ−（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フラボバクテリ
ウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、パラコツカ
ス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属、プロテウス（ｐｒｏｔ
ｅｕｓ）属、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）
属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属、ロドコッカス属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ
） 、 マイクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃ
Ｌｅｒ ｉ ｕｍ）属、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、コリネバク
テリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属および
サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属の
いずれかに属し、有機溶媒に耐性を有する微生物を、当
該微生物が許容する有機イ容媒の分配係数（Ｐ）の対数
（ｌｏｇ Ｐ）値以」−のｌｏｇ Ｐ値を有する有機溶
媒を０．３％以上含有する培地で培養することを特徴と
する微生物の培養法に関する。
本発明に用いることができる微生物を例示すると、アク
ロモバクタ−・プリカッラスい、 ｄｅｌｉｃａＬｕｌ
ｕｓ）ＩＡＭ １４３３ アグロバクテリウム・ツメ
ファシェンス（Ａ、 ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＮＩン０
３０５）３．アルカリゲ了スフェカリスＣａ、 ｆａ些
ａｌｉｓ−）ＪＣＭ １４７４．アクロモナス・ヒＦロ
フィラ（Ａ、−ｊ１列−到餅ｌ↓弓）ＪＣ閃１０２１．
−？シトロクター・カルコアセティカス（Ａ、 ｃａｌ
ｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）ＩＦＯ１２５５２，バチルス・
セレウス（Ｂ、 ｃｅｒｅｕｓ）ＩＦＯ３１３１バチル
ス・ズフ゛チリス（埃、 ｓｕｔと１籠ｊユ川）へｌ（
Ｕ １２１９．ブレビバクテリウム・パラマイノリテイ
クム（Ｂ。
ロモバクタ−・プリカッラスい、 ｄｅｌｉｃａＬｕｌ
ｕｓ）ＩＡＭ １４３３ アグロバクテリウム・ツメ
ファシェンス（Ａ、 ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＮＩン０
３０５）３．アルカリゲ了スフェカリスＣａ、 ｆａ些
ａｌｉｓ−）ＪＣＭ １４７４．アクロモナス・ヒＦロ
フィラ（Ａ、−ｊ１列−到餅ｌ↓弓）ＪＣ閃１０２１．
−？シトロクター・カルコアセティカス（Ａ、 ｃａｌ
ｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）ＩＦＯ１２５５２，バチルス・
セレウス（Ｂ、 ｃｅｒｅｕｓ）ＩＦＯ３１３１バチル
ス・ズフ゛チリス（埃、 ｓｕｔと１籠ｊユ川）へｌ（
Ｕ １２１９．ブレビバクテリウム・パラマイノリテイ
クム（Ｂ。
ｄｎｏｌｉ ｔｉｃｕｍ）八ＴＣＣ２１１９５，フ゛レ
ビハクテリ１シム−へ）レボルーム（焦、 ｈｅｌｖｏ
ｌｕｍ）八ＴＣＣ２１３４２，フラボバクテリウム・ラ
クトファーメンタム（Ｂ、 Ｉａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔ
ｕｍ）ＡＴＣＣ２１４２０，ブレビバクテリウム・アン
モニアゲネス（旦、 ｕ皿１Ｂｖｊ五）八ＴＣＣ１３７
４６，フラボバクテリウム・アンモニアゲネスＩＦＯ１
２０７２，ブレビバクテリウム・ロゼラム（Ｂ、 ｒｏ
ｓｅｕｍ）ＡＴＣＣ１３８２５，フルビハ′クテリウム
・フラバム（Ｂ、 ｆｌａｖｕｍ） ＡＴＣＣ１３８２
６、クロモバクテリウム・ココラタム（Ｃ，ｃｈｏｃｏ
ｌａｔｕｍ）ＴＦＯ３７５８，コリネバクテリウム・グ
ルタミクム（以旺旦ａｍｌｃ、朋）ＪＣ門１３１８．コ
リネバクテリウム・フラヘシエンス（Ｃ，ｆｌａｖｅｓ
ｃｅｎｓ） ＴＡＭ １６４２＋ コリネバクテリウ
ム・ヒドロカルボキシダンス（Ｃ。
ビハクテリ１シム−へ）レボルーム（焦、 ｈｅｌｖｏ
ｌｕｍ）八ＴＣＣ２１３４２，フラボバクテリウム・ラ
クトファーメンタム（Ｂ、 Ｉａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔ
ｕｍ）ＡＴＣＣ２１４２０，ブレビバクテリウム・アン
モニアゲネス（旦、 ｕ皿１Ｂｖｊ五）八ＴＣＣ１３７
４６，フラボバクテリウム・アンモニアゲネスＩＦＯ１
２０７２，ブレビバクテリウム・ロゼラム（Ｂ、 ｒｏ
ｓｅｕｍ）ＡＴＣＣ１３８２５，フルビハ′クテリウム
・フラバム（Ｂ、 ｆｌａｖｕｍ） ＡＴＣＣ１３８２
６、クロモバクテリウム・ココラタム（Ｃ，ｃｈｏｃｏ
ｌａｔｕｍ）ＴＦＯ３７５８，コリネバクテリウム・グ
ルタミクム（以旺旦ａｍｌｃ、朋）ＪＣ門１３１８．コ
リネバクテリウム・フラヘシエンス（Ｃ，ｆｌａｖｅｓ
ｃｅｎｓ） ＴＡＭ １６４２＋ コリネバクテリウ
ム・ヒドロカルボキシダンス（Ｃ。
ｈ ｄｒｏｃａｒｂｏｏｘ ｄａｎｓ）＾ＴＣＣ２１７
６７、コリネバクテリウム・ハーキュリス（Ｃ，ｈｅｒ
ｃｕｌｉｓ） ＡＴＣＣ１３８６８＋エルウイニア・ハ
ービコラ惟、血０違呈１」ユ＾ＴＣＣ２１４３４シトロ
バクタ−・フレランブイ（（、、ｆｒｅｕｎｄｉｉ）Ａ
ＴＣＣ６７５０、マイクロバクテリウム・アンモニアゲ
ネスム（性、徂ｌ凹山狂加」但ＡＴＣＣ１５３５４，フ
ラボハクテＩＦＯ３３２０，クレブシェラ・ニューモニ
アエ（ｋ。
６７、コリネバクテリウム・ハーキュリス（Ｃ，ｈｅｒ
ｃｕｌｉｓ） ＡＴＣＣ１３８６８＋エルウイニア・ハ
ービコラ惟、血０違呈１」ユ＾ＴＣＣ２１４３４シトロ
バクタ−・フレランブイ（（、、ｆｒｅｕｎｄｉｉ）Ａ
ＴＣＣ６７５０、マイクロバクテリウム・アンモニアゲ
ネスム（性、徂ｌ凹山狂加」但ＡＴＣＣ１５３５４，フ
ラボハクテＩＦＯ３３２０，クレブシェラ・ニューモニ
アエ（ｋ。
Ｌ姐叫鋲、ｑｅ）ＩＦＯ３３１８，ロドコッカス・エリ
スロポリス（Ｉｌｌ、虹Ｌ１匹ル壮け）ＩＦＯ１２３２
０，ロドコッカスイクイ（Ｒ，皿丑）ＩＦＯ３７３０，
ノカルディア・１スヒ−（Ｎ、Ｈ）八ＴＣＣ２＋１４５
．パラコツカス・デニトリフィカンス（Ｐ、ｄｅｎｉｔ
ｒｉｆｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１３３０１，プロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ、 ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）ＩＩ７０３８４
９．サツカロマイセス・ウハルム（Σ、■ａｒｕｍ）
ＡＴＣＣ２６Ｇ０２などがある。
スロポリス（Ｉｌｌ、虹Ｌ１匹ル壮け）ＩＦＯ１２３２
０，ロドコッカスイクイ（Ｒ，皿丑）ＩＦＯ３７３０，
ノカルディア・１スヒ−（Ｎ、Ｈ）八ＴＣＣ２＋１４５
．パラコツカス・デニトリフィカンス（Ｐ、ｄｅｎｉｔ
ｒｉｆｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１３３０１，プロテウス・ミ
ラビリス（Ｐ、 ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）ＩＩ７０３８４
９．サツカロマイセス・ウハルム（Σ、■ａｒｕｍ）
ＡＴＣＣ２６Ｇ０２などがある。
これら微生物を培養する際に用いる有機ン容媒は、その
有機溶媒の分配係数（Ｐ）の対数（ｌｏｇ Ｐ）（ｉｔ
！を考慮して各微生物ごとに決定する。すなわち、微生
物の生育が可能な最低のｌｏｇＰ値（限界ｌｏｇＰ値）
以上の有機溶媒を選択して使用する。
有機溶媒の分配係数（Ｐ）の対数（ｌｏｇ Ｐ）（ｉｔ
！を考慮して各微生物ごとに決定する。すなわち、微生
物の生育が可能な最低のｌｏｇＰ値（限界ｌｏｇＰ値）
以上の有機溶媒を選択して使用する。
分配係数（Ｐ）は混り合わない２種の溶媒系における平
衡状態での物質の活動度の比として表わされ、物質の濃
度が小さい場合は、その濃度を活動度とみなすことがで
きる。生物反応に使用可能な有ｎ溶媒を決定する際、溶
媒の極性もしくは陣ＴＦＯ３０８４，エンテロバクタ−
・クロアセ（Ｅ、 ｃｌｏａｃａｅ）水性を指標にする
が、ｌｏｇ Ｐ ’ｐｉ容媒の極性の指標として使うと
、生物反応と良好な相関関係が得られ、ｌｏｇＰ＜２の
極性７８媒では反応性は低く、ｌｏＢ Ｐ−２〜４の溶
媒中では反応性が中程度、ｌｏｇＰ＞４の非極性溶媒で
は反応性が高いことなどが知られている（Ｃ，Ｌａａｎ
ｅ、 Ｓ、 Ｂｏｅｒｅｎ、 ａｎｄ Ｋ、 Ｖｏｓ；
ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔ＜！ｃｈｎｏ１． ３ ２５１１
９８５およびＣ，Ｌａａｎｅ ５１ｉｏｃｒｅｎ、
Ｋ、Ｖｏｓ、 ａｎｄ Ｃ，νｅｅｇｅｒ；Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏＢｙａｎｄ Ｑｉｏｅｎｚｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ＋ ３０＋ ８１．１９８７）。
衡状態での物質の活動度の比として表わされ、物質の濃
度が小さい場合は、その濃度を活動度とみなすことがで
きる。生物反応に使用可能な有ｎ溶媒を決定する際、溶
媒の極性もしくは陣ＴＦＯ３０８４，エンテロバクタ−
・クロアセ（Ｅ、 ｃｌｏａｃａｅ）水性を指標にする
が、ｌｏｇ Ｐ ’ｐｉ容媒の極性の指標として使うと
、生物反応と良好な相関関係が得られ、ｌｏｇＰ＜２の
極性７８媒では反応性は低く、ｌｏＢ Ｐ−２〜４の溶
媒中では反応性が中程度、ｌｏｇＰ＞４の非極性溶媒で
は反応性が高いことなどが知られている（Ｃ，Ｌａａｎ
ｅ、 Ｓ、 Ｂｏｅｒｅｎ、 ａｎｄ Ｋ、 Ｖｏｓ；
ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔ＜！ｃｈｎｏ１． ３ ２５１１
９８５およびＣ，Ｌａａｎｅ ５１ｉｏｃｒｅｎ、
Ｋ、Ｖｏｓ、 ａｎｄ Ｃ，νｅｅｇｅｒ；Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏＢｙａｎｄ Ｑｉｏｅｎｚｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ＋ ３０＋ ８１．１９８７）。
本発明者らは、有段〆容媒存在下における微生物の増殖
においζも、上記の如（ｌｏＢ Ｐ値を指標として使用
可能な有機；６媒を特定する方法を解明したのである。
においζも、上記の如（ｌｏＢ Ｐ値を指標として使用
可能な有機；６媒を特定する方法を解明したのである。
ＩｏｇＰ値は以下の方法によって求めることができる。
（１） 計算により求める方法
ｌｏｇ Ｐ値は溶質分子を構成している各成分の疎水性
の和として表わされ置換基Ｘを基ｆｆ１Ｊｌｘ物質（Ｉ
Ｉ）に導入して化合物において疎水性置換基定数π８は
次式で表わされる。
の和として表わされ置換基Ｘを基ｆｆ１Ｊｌｘ物質（Ｉ
Ｉ）に導入して化合物において疎水性置換基定数π８は
次式で表わされる。
πＸ ＝ｌｏｇ ＰＭ−１ｏｇ Ｐ、ＩＩｏｇＰは物質
を構成している置換基のπＸと基ｔ％物質の分配係数の
対数（１０ｇＰ１１）値の和として表わされる。
を構成している置換基のπＸと基ｔ％物質の分配係数の
対数（１０ｇＰ１１）値の和として表わされる。
ここで、ｌｏｇ Ｐまたはπ値は実験的に求めることが
望ましいが、分配に影響を与える構成因子（例えば環化
、枝分れ２多重結合、置換基等の疎水性）に関する／！
ｉ水性フラグメント定数（ｈｙｄｎｏｐｔ＋ｏｂｉｃｆ
ｒａｇｍａｎｔａｌ ｃｏｎｓＬａｎＬ：ｆ）を定め、
ｌｏｇ Ｐ ＝Σ［からｌｏｇＰを算出することができ
（Ｎｙｓ、 Ｇ、Ｇ、、 ｌ１ｅｋｋｅｒＲ，Ｆｌ、
Ｃｈｉｍ、 Ｔｈｃｍｐ、、 ５．５２１＋ １９７３
；Ｒ，Ｆ、Ｒｅｋｋｅｒ。
望ましいが、分配に影響を与える構成因子（例えば環化
、枝分れ２多重結合、置換基等の疎水性）に関する／！
ｉ水性フラグメント定数（ｈｙｄｎｏｐｔ＋ｏｂｉｃｆ
ｒａｇｍａｎｔａｌ ｃｏｎｓＬａｎＬ：ｆ）を定め、
ｌｏｇ Ｐ ＝Σ［からｌｏｇＰを算出することができ
（Ｎｙｓ、 Ｇ、Ｇ、、 ｌ１ｅｋｋｅｒＲ，Ｆｌ、
Ｃｈｉｍ、 Ｔｈｃｍｐ、、 ５．５２１＋ １９７３
；Ｒ，Ｆ、Ｒｅｋｋｅｒ。
１’ｈｅ １ｌｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ Ｆｒａｇｍｅｎ
ｔａｌ Ｃｏｎ５ｔａｎＬ、 １ＥＩｓｅｖｉｅｒＮｅ
ｉｖＹｏｒｋ、 １９７７）、第１表ではこの算出方法
により算出したｌｏｇ Ｐ値を記載しである。ただしｐ
−キシレンについては以下（２）の方法により求めたＩ
ｏｇＰ（直である。
ｔａｌ Ｃｏｎ５ｔａｎＬ、 １ＥＩｓｅｖｉｅｒＮｅ
ｉｖＹｏｒｋ、 １９７７）、第１表ではこの算出方法
により算出したｌｏｇ Ｐ値を記載しである。ただしｐ
−キシレンについては以下（２）の方法により求めたＩ
ｏｇＰ（直である。
（２）実験により求める方法（Ｆｌａｓｋ ｓｈａｋｉ
ｎｇ法）有機溶媒（例えばｎ−オクタツール）と水との
間ζこおける？８￥ｒの濃度比を求めることによって決
定する。相手の相で予め飽和しておいた有機溶媒と水を
それぞれ一定体積ずつとり、マイヤー中に入れる。通常
はいずれかの相に予め薬物を熔解しておき、平換■後の
両相の濃度をしかるべき方法（通常は比色法）で定量し
、分配係数Ｐを求める。
ｎｇ法）有機溶媒（例えばｎ−オクタツール）と水との
間ζこおける？８￥ｒの濃度比を求めることによって決
定する。相手の相で予め飽和しておいた有機溶媒と水を
それぞれ一定体積ずつとり、マイヤー中に入れる。通常
はいずれかの相に予め薬物を熔解しておき、平換■後の
両相の濃度をしかるべき方法（通常は比色法）で定量し
、分配係数Ｐを求める。
ごのとき、薬物濃度を変化させて測定し、濃度によって
Ｉ）の値が変らない領域での値を採用する（芋１）−１
弘、化学の領域、増Ｉす１２２号、■〕７３１９７９）
。
Ｉ）の値が変らない領域での値を採用する（芋１）−１
弘、化学の領域、増Ｉす１２２号、■〕７３１９７９）
。
上記の方法によって各種有機溶媒についてｌｏｇ Ｐ値
を求め、各微生物ごとに所定のｌｏｇ Ｐ（ｌＩ′！の
有機溶媒で生育試験を行い、生育が可能な最低のＩｏｇ
Ｐ値（限界ＩｏｇＰ値）を決定し、この限界ｌｏｇ Ｐ
値以上の有機溶媒を使用して当該微生物の培養を行う。
を求め、各微生物ごとに所定のｌｏｇ Ｐ（ｌＩ′！の
有機溶媒で生育試験を行い、生育が可能な最低のＩｏｇ
Ｐ値（限界ＩｏｇＰ値）を決定し、この限界ｌｏｇ Ｐ
値以上の有機溶媒を使用して当該微生物の培養を行う。
１１［１記微生物の培養は、微生物の生育に必要な栄養
物質を含み、かつ菌体生産２発酵生産などの目的に適合
する培地を用いて行う、具体的にはグルコース、シュー
クロース、Ｂ粉加水分解物等の糖類、ヘンゼン、トルエ
ン、ｐ−キシレンなどの炭化水素類、エチルアル二１−
ルなどのアルコール類等から選ばれた炭素源；ペプトン
、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカー、カ
ザミノ酸硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等か
ら選ばれた窒素源；無機塩類および微量成分を含有する
培地などのはかＬ Ｂ培地、ペプトン−酵母エキス−グ
ルコース培地が用いられる。
物質を含み、かつ菌体生産２発酵生産などの目的に適合
する培地を用いて行う、具体的にはグルコース、シュー
クロース、Ｂ粉加水分解物等の糖類、ヘンゼン、トルエ
ン、ｐ−キシレンなどの炭化水素類、エチルアル二１−
ルなどのアルコール類等から選ばれた炭素源；ペプトン
、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカー、カ
ザミノ酸硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等か
ら選ばれた窒素源；無機塩類および微量成分を含有する
培地などのはかＬ Ｂ培地、ペプトン−酵母エキス−グ
ルコース培地が用いられる。
また、限界ｌｏｇ Ｐ値以上の有ｎ溶媒としては、ヘキ
ナン、ヘプタン、オクタン、イソオクタンノナン デカ
ン、ドデカンなどの脂肪族炭化水素ｔＪ１、シクロペン
クン、シクロヘキサン、シクロオクタンなどの脂環式炭
化水素類、ヘンセン、トルエン、Ｐ−キシレン、スチレ
ン、エチベンゼンプロビルベンゼン、クロロベンゼン、
０−ジクロロヘンゼンなどの芳香族炭化水素類、１−ヘ
プタツール、■−オクタツール、１−デカノールなどの
アルコール類、ｎ−へキシルエーテル、ジフェニルエー
テル メトキシトルエンなどのエーテル類等から選択さ
れる。有機溶媒は培地中における濃度が０．３％以上、
通常０．５〜５０％、好ましくは１０〜５０％となるよ
うな範囲で用いる。
ナン、ヘプタン、オクタン、イソオクタンノナン デカ
ン、ドデカンなどの脂肪族炭化水素ｔＪ１、シクロペン
クン、シクロヘキサン、シクロオクタンなどの脂環式炭
化水素類、ヘンセン、トルエン、Ｐ−キシレン、スチレ
ン、エチベンゼンプロビルベンゼン、クロロベンゼン、
０−ジクロロヘンゼンなどの芳香族炭化水素類、１−ヘ
プタツール、■−オクタツール、１−デカノールなどの
アルコール類、ｎ−へキシルエーテル、ジフェニルエー
テル メトキシトルエンなどのエーテル類等から選択さ
れる。有機溶媒は培地中における濃度が０．３％以上、
通常０．５〜５０％、好ましくは１０〜５０％となるよ
うな範囲で用いる。
培養は微生物の性質を考慮して２０〜４０°Ｃ・好まし
くは３０〜３７°Ｃの温度で１〜４日間、好ましくは１
〜２日間行う。
くは３０〜３７°Ｃの温度で１〜４日間、好ましくは１
〜２日間行う。
次に、本発明を実施例により説明する。
臭施例ユ
ＬＢ培地（バタトトリプトン１０ｇ、バクト酵母エキス
５ｇ、蒸留水ｉｆ）に各種菌株を接種し、１晩培養した
。これを別のガラス製シャーレに作成した固体ＬＢ培地
にレプリカもしくは１株ごとに白金耳等で接種し、検討
する有機溶媒の数に相当するプレートを用意した。
５ｇ、蒸留水ｉｆ）に各種菌株を接種し、１晩培養した
。これを別のガラス製シャーレに作成した固体ＬＢ培地
にレプリカもしくは１株ごとに白金耳等で接種し、検討
する有機溶媒の数に相当するプレートを用意した。
各プレートに第１表に示した所定の有機溶媒１０ｍ１を
加え、プレートをテープでシールして３０“Ｃにて２晩
培養し、菌株の生育のを無を検定した。
加え、プレートをテープでシールして３０“Ｃにて２晩
培養し、菌株の生育のを無を検定した。
その結果、各菌株はいずれもその菌株の許容するｌｏｇ
Ｐ値以上の値を有する有機溶媒中で生育することを認
めた。
Ｐ値以上の値を有する有機溶媒中で生育することを認
めた。
＊菌株番号
ｌ シトロハククー・フレランブイ＾ＴＣＣ６７５０２
アクロモバクタ−・プリカッラス１＾Ｍ １４３３３
エルウィニア・ハーヒ゛コラへＴＣＣ２１４３４４アシ
ネトバクタ−・カルコアセティ＃０１２５５２５ エン
テロバクタ−・クロアセＩＦＯ３３２０６プロテウス・
ミラビリスＩＦ０３８４９７ フラボバクテリウム・リ
テシエンスＩＦ０３０８４８ アルカリゲネス・フェカ
リスＪＣＭ １４７４９ アクロモナス・ヒドロフイソ
ＪＣＭ １０２７１０ アグロバクテリウム・ツメフ
ァシェンス１Ｉｉ０３０５８１１ ノカルディア・エ
スピーＡＴＣＣ２１１４５１２バチルス・ズブチリスＡ
１１ｌｌ １２１９１３ バチルス・セレウスＩＦＯ
３１３１１４クレブシェラ・ニューモニ究ｉ０３３１８
１５ ブレビバクテリウム・バラノイハライクムＡＴ
ＣＣ２１１９５１６ブレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネス＾１’ＣＣ１３７４６１７フラボバクテリウム・ロ
ゼラムＡＴＣＣ１３８２５１８コリネバクテリウム・フ
ラヘシエンスＩＡＭ １６４２１９ ：Ｉリネハクテ
リウム・ヒトＩＩＩｔＩルネキシダシス ＡＴＣＣ２１
７６７２０コリネバクテリウム・ハーキュリス＾ＴＣＣ
１３８６８２１フラボバクテリウム・スアベオレンスＩ
Ｆ０３１５２２２ マイクロバクテリウム・アンモニ
アゲネスムＡＴＣＣ１５３５４２３ロドコッカス・エリ
スロポリスＩＦＯ１２３２０２４コリネバクテリウム・
グルタミクムＪＣＭ １３１８２５ ブレビバクテリ
ウム・ヘルボルム＾ＴＣＣ２１３４２２６ブレビバクテ
リウム・ラクトファーメンタムＡＴＣＣ２１４２０２７
ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ１３８２６２８
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＩＰＯ１２Ｑ７
２２９ クロモバクテリウム・ココラタムＩＦ０３７
５８３０ バラコツカス・デニトリフィカンスＩＰ０
１３３０１３１ ロドコッカス・イクイＩＦＯ３７３
０３２サツカロマイセス・ウハルム＾ＴＣＣ２６６０２
実施例２ グルコース１．０ｇ酵母キエス２．５ｇおよびペプトン
５．０ｇに蒸留水１．ＯＮを加え、ｐｌ＋７．２に調製
した培地を５００ ｍｌ容三角フラスコに１００ｍ２分
注し、これにシトロバクタ−・フレランブイＡＴＣＣ６
７５０株を植菌し、プロピルベンゼンを３０ｍ２添加し
た後、３０°Ｃで４８時間振盪培養した。
アクロモバクタ−・プリカッラス１＾Ｍ １４３３３
エルウィニア・ハーヒ゛コラへＴＣＣ２１４３４４アシ
ネトバクタ−・カルコアセティ＃０１２５５２５ エン
テロバクタ−・クロアセＩＦＯ３３２０６プロテウス・
ミラビリスＩＦ０３８４９７ フラボバクテリウム・リ
テシエンスＩＦ０３０８４８ アルカリゲネス・フェカ
リスＪＣＭ １４７４９ アクロモナス・ヒドロフイソ
ＪＣＭ １０２７１０ アグロバクテリウム・ツメフ
ァシェンス１Ｉｉ０３０５８１１ ノカルディア・エ
スピーＡＴＣＣ２１１４５１２バチルス・ズブチリスＡ
１１ｌｌ １２１９１３ バチルス・セレウスＩＦＯ
３１３１１４クレブシェラ・ニューモニ究ｉ０３３１８
１５ ブレビバクテリウム・バラノイハライクムＡＴ
ＣＣ２１１９５１６ブレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネス＾１’ＣＣ１３７４６１７フラボバクテリウム・ロ
ゼラムＡＴＣＣ１３８２５１８コリネバクテリウム・フ
ラヘシエンスＩＡＭ １６４２１９ ：Ｉリネハクテ
リウム・ヒトＩＩＩｔＩルネキシダシス ＡＴＣＣ２１
７６７２０コリネバクテリウム・ハーキュリス＾ＴＣＣ
１３８６８２１フラボバクテリウム・スアベオレンスＩ
Ｆ０３１５２２２ マイクロバクテリウム・アンモニ
アゲネスムＡＴＣＣ１５３５４２３ロドコッカス・エリ
スロポリスＩＦＯ１２３２０２４コリネバクテリウム・
グルタミクムＪＣＭ １３１８２５ ブレビバクテリ
ウム・ヘルボルム＾ＴＣＣ２１３４２２６ブレビバクテ
リウム・ラクトファーメンタムＡＴＣＣ２１４２０２７
ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ１３８２６２８
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＩＰＯ１２Ｑ７
２２９ クロモバクテリウム・ココラタムＩＦ０３７
５８３０ バラコツカス・デニトリフィカンスＩＰ０
１３３０１３１ ロドコッカス・イクイＩＦＯ３７３
０３２サツカロマイセス・ウハルム＾ＴＣＣ２６６０２
実施例２ グルコース１．０ｇ酵母キエス２．５ｇおよびペプトン
５．０ｇに蒸留水１．ＯＮを加え、ｐｌ＋７．２に調製
した培地を５００ ｍｌ容三角フラスコに１００ｍ２分
注し、これにシトロバクタ−・フレランブイＡＴＣＣ６
７５０株を植菌し、プロピルベンゼンを３０ｍ２添加し
た後、３０°Ｃで４８時間振盪培養した。
ぞの結果、シトロバクタ−・フレランブイＡＴＣＣ６フ
５０株の乾燥菌体８０ｎ＋ｇが得られた。
５０株の乾燥菌体８０ｎ＋ｇが得られた。
実施例３
実施例２において菌株としてエンテロバラタークロアセ
ＩＰ０３３２０株を用い、有機）６媒としてｎヘキサン
を用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥菌
体９０ｍｇを得た。
ＩＰ０３３２０株を用い、有機）６媒としてｎヘキサン
を用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥菌
体９０ｍｇを得た。
実施例４
実施例２において菌株としてアシネトバクターカルコア
セティカスＩＦ０１２５５２株を用い、有機）６媒とし
てｎ−ヘキサンを用いたこと以外は実力缶例２と同様に
して行い、乾燥菌体９０■を得た。
セティカスＩＦ０１２５５２株を用い、有機）６媒とし
てｎ−ヘキサンを用いたこと以外は実力缶例２と同様に
して行い、乾燥菌体９０■を得た。
実施例５
実施例２において菌株としてプロテウス・ミラビリスＩ
Ｆ０３８４９株を用い、有機溶媒としてｎ−ヘキサンを
用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥菌体
１１０ｍｇを得た。
Ｆ０３８４９株を用い、有機溶媒としてｎ−ヘキサンを
用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥菌体
１１０ｍｇを得た。
実施例６
実施例２において菌株としてバチルス・ズブチリスＡＨ
Ｕ １２１９株を用い、有機溶媒としてｎ−ヘキシルエ
ーテルを用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、
乾燥菌体１２０ ＋ｎｇを得た。
Ｕ １２１９株を用い、有機溶媒としてｎ−ヘキシルエ
ーテルを用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、
乾燥菌体１２０ ＋ｎｇを得た。
実施例７
実施例２において菌株としてノカルディア・エスピーＡ
ＴＣＣ２１１４５株を用い、有機溶媒としてイソオクタ
ンを用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥
菌体８０ｍｇを得た。
ＴＣＣ２１１４５株を用い、有機溶媒としてイソオクタ
ンを用いたこと以外は実施例２と同様にして行い、乾燥
菌体８０ｍｇを得た。
〔発明の効果］
本発明によれば微生物を培養するにあたり、特定の要件
を満足する有機溶媒を選択することによって高濃度の有
機溶媒の存在下に培養を行うことができる。そのため、
雑菌による）η染の心配なしに微生物を培養したり、水
に難溶性の基質の利用が可能になるという利点が得られ
るほか、水に難溶性の生産物を効率よく生産することが
できる。
を満足する有機溶媒を選択することによって高濃度の有
機溶媒の存在下に培養を行うことができる。そのため、
雑菌による）η染の心配なしに微生物を培養したり、水
に難溶性の基質の利用が可能になるという利点が得られ
るほか、水に難溶性の生産物を効率よく生産することが
できる。
Claims (2)
- （１）アクロモバクター属、アグロバクテリウム属、ア
ルカリゲネス属、アクロモナス属、アシネトバクター属
、エルウィニア属、エンテロバクター属、ブレビバクテ
リウム属、シトロバクター属、フラボバクテリウム属、
パラコッカス属、プロテウス属、バチルス属、クレブシ
エラ属、クロモバクテリウム属、ロドコッカス属、マイ
クロバクテリウム属、ノカルディア属、コリネバクテリ
ウム属およびサッカロマイセス属のいずれかに属し、有
機溶媒に耐性を有する微生物を、当該微生物が許容する
有機溶媒の分配係数（Ｐ）の対数（ｌｏｇＰ）値以上の
ｌｏｇＰ値を有する有機溶媒を０．３％以上含有する培
地で培養することを特徴とする微生物の培養法。 - （２）有機溶媒が脂肪族炭化水素類、脂環式炭化水素類
、芳香族炭化水素類、アルコール類およびエーテル類の
うちの少なくとも１種である請求項１記載の微生物の培
養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6071789A JPH02242665A (ja) | 1989-03-15 | 1989-03-15 | 微生物の培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6071789A JPH02242665A (ja) | 1989-03-15 | 1989-03-15 | 微生物の培養法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02242665A true JPH02242665A (ja) | 1990-09-27 |
Family
ID=13150320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6071789A Pending JPH02242665A (ja) | 1989-03-15 | 1989-03-15 | 微生物の培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02242665A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63240778A (ja) * | 1987-03-30 | 1988-10-06 | Res Dev Corp Of Japan | 微生物の培養法 |
-
1989
- 1989-03-15 JP JP6071789A patent/JPH02242665A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63240778A (ja) * | 1987-03-30 | 1988-10-06 | Res Dev Corp Of Japan | 微生物の培養法 |
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