JPH02250832A - 魚類の免疫増強剤及び養魚用餌料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【発明の目的】

［Ｂ業上の利用分野］ 本発明は、魚類の肝機能を強化してその免疫力を高める
ための剤及び本則を含む養魚用餌料に関する。 ［従来の技術］ （１）背景 今日、各地の河川、湖沼、海湾などの内水面においては
、コイ、ニジマス、ウナギ、アユ、ボラ、ブリ、クロダ
イ、クルマエビ、マダイ、イカ、タコ、アワビ、カキ、
ホタテガイなどの養殖が盛んに行われており、３万ｋｍ
にも及ぶ長大な海岸線を持つ我が国では、遠洋漁業にお
ける制約とも相まって、養殖乃至栽培漁業が益々重要性
を加えつつある。 （２従来技術の問題点 しかし、狭い水圏内に多数の魚介を飼養するこれら集約
漁業では、食べ刺し餌料や排泄物の腐敗などのため、生
活環境が自然状態に比べて劣悪な状態となるのが常であ
り、このため伝染性の病気が蔓延しやすい、そこで、餌
料中に抗生物質などの薬剤を添加することが普通に行わ
れているが、薬剤の投与は耐性菌の出現を促進するのみ
でなく、当該薬剤が魚介類の体内に蓄積され、結局最終
捕食者であるヒトが摂取することになるから、公衆衛生
的にも好ましくない（現に、抗生物質の残存量は厳しく
規制されている。）。 従って、若し可能ならば、魚介類自体の免疫力を高める
ことによって疾病に罹患しにくくすることにより、薬剤
の飼養を不必要とすることが望まれる。 ［発明が解決しようとする課題］ 本発明は、上の課題に応え、魚類の生体防御機能を高め
るための非抗生物質系稟剤及び当該薬剤を含有する餌料
を開発することによって、上記問題を解決するための手
段を提供するのを目的とする。

【発明の構成】

［課題を解決するための手段〕 （１）概念 本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を加えた
過程で、グリチルリチンの持つ哺乳動物に対する肝機能
及び免疫増強作用に着目し、魚類への薬理作用を観察し
たところ、下等な魚類においても哺乳動物の場合と類似
の作用が観察されたのみでなく、実際に連鎖球菌に対す
る免疫試験においても、有意の差異が認められた０本発
明は、この知見を基礎とするものである。 （２１概要 本発明の要旨は、グリチルリチンを魚類の免疫増強剤と
して利用すること及びそのための簡便な手段として、グ
リチルリチンを養魚用の餌料中に含有させる点に存する
。 以下、発明を構成する諸要素等につき項分けして説明す
る。 （３）　　グリチルリチン グリチルリチン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ）　　（下
式）は、南ヨーロッパから中央アジアにかけて自生する
マメ科植物カンゾウ（甘草）　ＣＧＩｙｃｙｒｒｈｊｚ
ａ　１ｌａｂｒａＬ、　、　Ｇ、１１ａｂｒａ　Ｌ、ｖ
ａｒ、１１ａｎｄｕｌｊｆｅｒａ　Ｒｅ１．ｅｔ　Ｈｅ
ｒｄ。 Ｇ、ｅｃｈｉｎａｔａ　Ｌ、、　Ｇ、　ｕｒａｌｅｎｓ
ｆｓ　ｆｉ＃ｓｃｈ　ｅｔ　ＤＣ，等）の根に含まれる
トリテルペン系配糖体であって、そのアグリコンはグル
クロン酸ダイマーである。 Ｇ４＋　　グリチルリチンの魚類に対する作用（ａ）測
定項目 （イ）肝機能及び免疫増強機能：グリチルリチン投与開
始から３週間後に、各群から５尾づつ取り上げ、増重率
、ヘマトクリット値（赤血球容積率）、血清蛋白量、血
清アルブミン量、ＧＯＴ　（グルタミン酸−オキサロ酢
酸トランスアミナーゼ）値、ＧＰＴ（グルタミン酸−ビ
ルピン酸トランスアミナーゼ）値、補体価、リゾチーム
活性、副腎マクロファージ貧食活性及びＴＮＰ−ＢＳＡ
に対する凝集抗体価を測定した。 （Ｔ？）感染防御能：グリチルリチン投与開始から４週
間後に、連鎖球菌Ｓ−２４３３株の生菌で攻撃し、感染
防御機能の変化を観察した。 （ｂ）実験方法 （イ）供試魚：高知県土佐市宇佐町の養殖業者より購入
した平均体重１５．８ｇのブリ稚魚を用いた。 （υ）飼育方法：供試魚を帆８ＬのＦＲＰ製水槽に収容
し、エアレーションを行いながら飼育した。 （八）供試グリチルリチン：純度９８％以上の高純度品
。 に）グリチルリチンの投与法：魚体重の１２％量のイカ
ナゴミンチにグリチルリチンを、魚体重ＩＫｇ当たり夫
々０（対照）　、２．５．５．０゜２５．０及び５０．
０ＩＩ１ｇを展着剤（（スタッシュ）大日本製薬■製）
と共に、−日一回、３５日日間（５週間）投与した。 （ホ）免疫方法：グリチルリチン投与前に、ＴＮＰ化牛
血清アルブミン（ＴＮＰ−ＢＳＡ）を供試魚の腹腔内に
接種した。対照区には整理食塩水を同様に接種した。 （へ）血液及び血漿の採取：第二回目の抗原接種から３
週間口に、各区１０尾の魚を取り上げ、ヘパリン処理し
たシリンジを用いて心臓穿刺法により血液を採取した。 この血液を一夜４℃で保存後、遠心分離して血漿を採取
した。 （ト）血漿成分の測定：ヘマトクリット値の測定は常法
により行った。血清蛋白量は、ビユレット法により測定
した。血清中のＧＯＴ及びＧＰＴ値の測定は、夫々＜Ｇ
ＯＴ　ＵＶテストワコー）及び＜ＧＰＴ　ＵＶテストワ
コー）（共に和光純薬■製）を用いて実施した。 （チ）血清補体価の測定：ウサギ赤血球を用い、Ｓａ　
ｆａｔ　ｉら（１９８２）の方法により測定した。 （す）副腎細胞の貧食活性の測定：採血した供試魚から
直ちに副腎を取り出し、０．１５％の食塩を含むＬ　−
Ｉｓ　（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）培地中で鋏
を用いて細切した後、白金メツシュで濾過して１×１０
７細胞／−濃度の白血球浮遊液を作成した。賞食用粒子
には、各抗原を感作したラテックス（０，８１μｉ、Ｄ
ｉｆｃｏ）とＦＸＣを用いた。感作ラテツクスの作製は
、高木・補出（１９ｇ２　＞の方法により行った。貧食
は、細胞浮遊液０．５−と自己血清０．４ｍ、　　ｌＸ
ｌ０’細胞／−に調整した貧食粒子０．１−を混合し、
２５℃で３時間反応させた。 反応後、混合液１００μｇを取り出し、４００×ｇの角
速度で５分間遠心して得られた沈渣を１０−のウシ胎児
血清に懸濁してスメアを作製した。このスメアを乾燥後
、１０％ホルマリン加エタノールで固定し、ペルオキシ
ダーゼ染色及びギムザ染色を行った後、検鏡し、１００
個の貧食細胞に取り込まれた粒子数を算出した。 （ヌ）凝集抗体価の測定：　ＴＨＰ−ＢＳ＾を感作させ
たヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）を抗原として、マイクロタ
イター法により測定した。抗原の感作は、グルタルアル
デヒド処理５Ｒ８Ｃを用い、常法に従って行った。 （ル）実験的感染試験：グリチルリチン投与４週間後に
、供試魚を連鎖球菌に対する感染試験を行った。 先ず、ＢＨ１平板にて３０℃、２４時間培養した５ｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ、２４３３株の生菌体を滅
菌リン酸塩緩衝液に５．２　Ｘ　１０’　ＣＦＵ／−と
なるように懸濁し、この懸濁液各０．１−を、各区１０
尾の供試魚の腹腔内に接種しな。 この実験的感染１０日間飼育を続け、生残率の変化を調
べた。なお、各斃死魚は、夫々の腎臓から菌分離を行い
、抗５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ血清を用いて連鎖球菌
症による斃死であることを確認した。 （ｃ）実験結果 （イ）体重変化：グリチルリチン投与量と非投与区の体
重変化は添付第１図に示される。 図示の如く、グリチルリチン投与量が増加する程、実験
開始時−実験終了時曲線間の開きが大きくなる傾向が窺
われ、グリチルリチンの投与が稚魚の体重増加に有効で
あることが知られる。この原因は不明であるが、略々下
記のいづれかと考えてよいであろう。 ■　餌の質をグリチルリチンが改善した。 ■　免疫増強作用（補体価の上昇）との共同作用による
体質改善。 ■　グリチルリチンによるの解毒作用の効果。 ■　グリチルリチンによる肝機能向上の効果。 （ロ）血液性状の変化：グリチルリチンの投与によるヘ
マトクリット値及び血清蛋白量の変化は第２図に示され
る。 図示の通り、ヘマトクリット値及び血清蛋白量は、いづ
れもグリチルリチンの投与によって増加しており、投与
が血液の性状を良化していることが判る。因に、イワシ
ミンチのような酸化油脂含量の高い餌料を与えた場合、
ヘマトクリット値が低下することが知られているが、グ
リチルリチンを投与するとこの欠点が改善又は解消され
る。 （約肝機能の向上：グリチルリチンの投与が血清中のＧ
ＯＴ及びＧＰＴの値に及ぼす影響は第３図に示される。 図示のように、グリチルリチンの投与によって、かつ投
与量に比例してＧＯＴ及びＧＰＴの値が低下しており、
グリチルリチンによる肝機能向上の事実を窺うことがで
きる。 −ｉにハマチ養殖用の餌料は酸化油脂及び細菌の量が多
いため質が悪く、被養魚の肝機能を低下させ易い、この
ため連鎖球菌症などに感染する場合が多いが、グリチル
リチンは、肝機能強化を通じてこの問題を克服できる可
能性を示す、なお、本実験時の餌料は、前記の如くイカ
ナゴミンチが主体であるが、実際に利用されるイワシミ
ンチでは、より大きな差異が現れるであろう。 （ニ）免疫増強作用：第４図は、グリチルリチンの投与
が免疫力に関連する指標である補体価、リゾチーム活性
、貧食率及び凝集抗体価に及ぼす影響を示す。特に、グ
リチルリチン多量投与群におけるマクロファージ貧食率
の上昇は著しい、これらの結果から、グリチルリチンは
、既に）−１１Ｖ（エイズウィルスなど）に対して認め
られているのと同様、魚類の病原菌に対しても免疫力を
強化する作用を奏する事実が推測される。このため、被
投与魚体の病原細菌やウィルスに対する抵抗力が増大し
、魚体を良好な健康状態に保つ効果を奏すべきことが期
待される。 〈ホ）連鎖球菌症に対する感染防御効果：第５図は、グ
リチルリチンの投与開始から４週間後に、連鎖球菌Ｓ−
２４３３株のＬ　Ｏｍ。量を接種したときのグリチルリ
チン投与量と生存率との関係を示す、このグラフから、
グリチルリチンは抗生物貫程劇的な作用を呈しないもの
の、投与量５０ｍｇ／にｇ以上のレベルでは、生存率増
加のため原著な効果を奏することが明瞭である。 因に、実際の養魚場では、たとえ病気が発生してもＬ　
Ｄ　ｍ。程のレベルとは側底ならないので、この程度の
緩和な効果であっても実用的に充分である。 （５１投与量及び餌料組成 本発明に係る魚類の肝機能剤及び強化及び養魚用餌料は
、対象魚類に対し、体重ＩＫｇ当たり５ｍｇ以上、好ま
しくは１０１１ｇ以上投与される。所望によりナトリウ
ム塩若しくはカリウム塩のような易溶性の塩又はカルシ
ウム塩若しくはアルミニウム塩のような難溶性の塩の形
で適用されてもよい。 相手が魚類である関係で、投与は餌料中に混ぜて行うの
が普通である。餌料としては、魚類の種類に応じ、魚粉
、サナギ粉、生魚肉のミンチ、穀粉、麩などが利用され
るが、いずれにしても、公知の粘結剤、例えばα化澱粉
、コムギブルチン、カゼインナトリウム、アルギン酸ナ
トリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム、各種植物ガム、ダイズホエイ
等を用いて水中で容易には崩壊しない程度の粘結性を与
えておく必要がある。 ［作用］ 発明者の研究により、グリチルリチンは、魚類に対して
も肝機能向上、解毒、免疫増強等の作用を有することが
発見された。従って、これを魚類の養殖に利用すれば、
ＰＯＶの高い劣悪な餌料にも悪影響を受けず、かつ高密
度の養殖でも疾病に冒され難い良好な飼育成績を奏する
。しかもグリチルリチンは天然物であって、抗生物質の
ように自然界の微生物バランスを崩したり又は魚体中に
蓄積したりすることがないから、安全な餌料添加物とし
て好適に利用されることが出来る。 ［実施例］ 以下、実施例により発明実施の態様を説明するが、例示
は単に説明用のもので、発明思想の制限又は限定を意味
するものではない。 生イワシ１ｋｇに、α化澱粉５０ｇ、グリチルリチン２
０ｍｇ及びビタミンＥ（酸化防止剤＞　１０ｍｇをミン
チでにかけて播潰物をラドン状に押し出し、熱風で軽く
乾燥させてブリ稚魚用生餌料約１ｋｇを得た。 【発明の効果］ 以上説明しかつ実証した通り、本発明は、魚類の生体防
御機能を高めるための非抗生物質薬剤及び当該薬剤を含
有する餌料を開発することによって、上記問題を解決す
るための手段を提供しえたことにより、栽培漁業の発展
に寄与しうる。 （以下余白）

【図面の簡単な説明】

第１図は、グリチルリチンの投与によるブリ稚魚の体重
増加を示すグラフ、第２図は、グリチルリチンの投与に
よるヘマトクリット値及び血清蛋白量の変化を示すグラ
フ、第３図は、グリチルリチンの投与が血清中のＧＯＴ
及びＧＰＴの値に及ぼす影響を示すグラフ、第４図は、
グリチルリチンの投与と、補体価、リゾチーム活性、貧
食率及び凝集抗体価の変化との相関を示すグラフ、第５
図は、投与開始から４週間後に、連鎖球菌Ｓ−２４３３
株のＬＤｉａ量を接種したときのグリチルリチン投与量
と生存率との関係を示すグラフである。各グラフの縦横
パラメータその他の説明は、各図中に記載済み。 購 図 グリチルリチン添加量 （岨／体重１にｇ・日） グリチルリチン添加量 （ｍｇ／体重ＩＫｇｅ日） グリチルリチン添加量 （脂ｇ／体重ＩＫｇ・日） グリチルリチン添加量 （ＩＩｇ／体重ＩＫｇ・日） グリチルリチン添加量 （ｍｇ／体重ＩＫｇ・日）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　グリチルリチンを有効成分とする魚類の免疫増強剤
   。 ２　グリチルリチンを有効成分として含む養魚用餌料。