JPH0967265A - 魚類病原ウイルスに対する抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 魚類病原ウイルスに対する新規な抗ウイルス
剤の提供。 【解決手段】 スピルリナの熱水抽出物を含んで成る魚
類病原ウイルスに対する抗ウイルス剤、該抗ウイルス剤
を含んで成る魚餌、及び該抗ウイルス剤又は魚餌を与え
ることを特徴とする魚類の養殖又は飼育方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は魚類の養殖に関し、
さらに詳しくは、魚類病原ウイルスに対する抗ウイルス
剤、該抗ウイルス剤を含んで成る抗ウイルス魚餌、及び
前記抗ウイルス剤又は抗ウイルス魚餌を投与することを
特徴とする魚類の養殖方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】魚類の養殖業及び栽培業の発展に伴い人
工種苗の生産量が増加している。この産業において、安
全で美味かつ鮮度のよい魚介類を安価に大量に生産する
ことが大きな目標である。そのためには、疾病の発生が
なく高密度に集約的生産が可能な飼育技術が要求されて
いる。疾病のなかでウイルス症は一旦発生すると治療法
がなく防疫に頼らざるを得ない現状にある。ウイルス症
の防疫手段として、採卵親類の病原体保有の有無や既往
病歴の把握などの健康状態の調査をはじめ、採卵の消
毒、飼育用水の殺菌、飼育施設の消毒など、病原体の侵
入を防ぐ対策がとられているが、未だ完全な対策がなく
有効な手法の模索が続いている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、魚類
の養殖における病原ウイルスによる魚類の疾患を防止す
るための新規な手段を提供しようとするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】従って本発明は、スピル
リナの熱水抽出物を含んで成る魚類病原ウイルスに対す
る抗ウイルス剤を提供する。本発明はさらに、上記の抗
ウイルス剤を含んで成る抗ウイルス性魚餌を提供する。
本発明はさらに、前記抗ウイルス剤又は抗ウイルス性魚
餌を与えることを特徴とする魚類の養殖又は飼育方法を
提供する。

【０００５】

【発明の実施の形態】魚の餌にスピルリナから抽出した
抗ウイルス性物質を配合することにより、ウイルス症の
防御をはかる。スピルリナから抗ウイルス性物質を抽出
する方法は、スピルリナ（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）属に属
する藻類、たとえばスピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉ
ｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）の生の藻体または
乾燥した藻体を使用する。抽出は好ましくは、生薬を煎
じるときのように予め容器内にスピルリナの藻体を蒸留
水に懸濁させ、必要により撹伴しながら、冷却器を取り
付けて蒸発の水分ロスを防ぎながら加熱した後、時間は
１０〜１２０分間、好ましくは４０〜６０分間、温度は
７０〜１００℃、好ましくは８０〜９５℃におく。

【０００６】抽出液を遠心分離後上澄みをとる。残渣に
蒸留水を加え再度同様に抽出する。この操作をもう一度
繰り返し３回分の抽出液を合わせ凍結乾燥する。抽出時
のスピルリナ粉末の濃度は臨界的ではないが例えば５重
量％〜５０重量％、好ましくは３０重量％〜４０重量％
である。抽出が終了すれば定法、例えば遠心分離または
濾過により藻体と抽出液とを分離する。好ましくはこの
抽出液を濃縮して濃縮液を得、あるいはさらに乾燥して
乾燥抽出物を得る。この濃縮及び乾燥は、常用技術、例
えば減圧濃縮、凍結乾燥、噴霧乾燥等により行うことが
出来る。

【０００７】こうして得られたスピルリナ抽出物を、蛋
白質沈殿剤、例えばトリクロロ酢酸１０％を含む溶液と
し、沈殿を生成させる。この沈殿を遠心分離、濾過等の
常法に従って除去し、上清を得る。次に、透析、ダイア
フィルトレーション等の常法によりトリクロロ酢酸を除
去し、所望により凍結乾燥等により乾燥させる。次に、
これを水溶液とした後、例えばトヨパール（Ｔｏｙｏｐ
ｅａｒｌ）、ＤＥＡＥセルロース、セファロース等を用
いてのカラムクロマトグラフィーにより精製し、フェノ
ール硫酸反応において４８０nmに吸収を有する単一ピー
クを示す画分を得、これを所望により常法に従って、濃
縮、透析、凍結および乾燥して白色粉末を得る。

【０００８】こうして得られた物質は、次の性質を有す
る。 （１）本物質の水溶液中に１０％フェノールを加えた後
濃硫酸を一気に加えて撹伴したところ、４８０nmに極大
吸収をもつ黄色を呈した。 （２）本物質をトリフルオロ酢酸に溶かし減圧封管後、
恒温槽の中で加熱保持することにより加水分解を行っ
た。放冷後乾固し純水に溶かしミリポアフィルターで濾
過し構成する糖類を分析したところラムノース、グルコ
ース、フルクトース、リボース、ガラクトース、キシロ
ース、マンノース、グルクロン酸、ガラクツロン酸が検
出された。 （３）ゲル濾過により分子量は２５万〜３０万であっ
た。 （４）ＣＨＮ以外にＳ，Ｐ，Ｃａ，Ｍｇが検出されたの
で硫酸やリン酸が結合した多糖類である可能性も含まれ
る。

【０００９】本発明の魚類病原ウイルス用抗ウイルス剤
は、スピルリナの熱水抽出液それ自体又はそれを濃縮し
たもの、あるいはさらに乾燥して個体にしたものであっ
てもよい。さらに、これらの抽出物に、魚餌又は原料と
して常用されている原料を加えて増量したもの、さらに
それを圧縮してペレット化したもの等であってもよい。
ここで増量剤としては、魚餌中に通常用いられている原
料、例えば魚粉、酵母、種々の由来の澱粉、小麦粉、大
麦粉、トウモロコシ粉末等を単独で、又は２種類以上混
合して用いることができる。

【００１０】本発明の魚餌は、常用の魚餌に上記の抗ウ
イルス剤を配合したものである。常用の魚餌としては特
に制限はなく、例えば、魚粉、酵母、小麦粉、脱脂粉
乳、ミネラルミックス、ビタミンミックス、塩類等微量
成分等を配合したもの、さらにはそれらの配合物を圧縮
してペレット化したもの等が挙げられる。本発明の魚餌
は、上記の抗ウイルス剤を、スピルリナ熱水抽出物の乾
燥生成物として約２〜３０重量％、好ましくは５〜１５
重量％添加することにより製造される。抗ウイルス剤
は、魚餌製品に加えて均一に混合して製造してもよく、
または魚餌原料の１つとして原料配合し、次にこれをペ
レット化等により製品化してもよい。

【００１１】

【実施例】次に実施例により本発明をさらに具体的に説
明する。参考例１．スピルリナからの熱水抽出物ＳＰＥおよび硫
酸化多糖類スピルランのＳＰＩの製造。 スピルリナの藻体粉末２００ｇを２５０mlの熱湯（９５
〜１００℃）で１時間抽出したのち濾過により藻体を除
去した。濾液を減圧濃縮しさらに凍結乾燥しＳＰＥ粉末
を９．２ｇ得た。

【００１２】このＳＰＥ粉末１ｇを１０％トリクロロ酢
酸溶液１００ml中に溶解し冷蔵庫で一夜放置し沈殿を析
出させ沈殿部を遠心分離で除去後、上清をセロファンチ
ューブで一夜透析し透析内液を得た。これを凍結乾燥し
蒸留水に溶かしたものを、トヨパール（Ｔｏｙｏｐｅａ
ｒｌ）ＨＷ−６０Ｓ（溶離剤：水）、ＤＥＡＥセルロー
ス（溶離液：０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液）及びセフ
ァロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ（溶離液：０．１
Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍクエン酸緩衝液：pH
７．０）を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製
した。検出はフェノール硫酸反応法によって行った。最
終的に抗ウイルス活性の強い２０mgの画分ＳＰＩが得ら
れた。

【００１３】実施例１．供試細胞としてマスノスケの胚
由来のＣＨＳＥ−２１４細胞およびコイの上皮腫由来の
ＥＰＣ細胞を、培地として１０％ＦＢＳ、１００ＩＵ／
mlのペニシリン、１００μｇ／mlのストレプトマイシ
ン、Ｔｒｉｓ緩衝液添加のＭＥＭを用い、細胞を播いた
後、プレートの各ウェルから細胞培養液を０．１ml宛除
去し、代わりに等量のＳＰＥ溶液またはＳＰＩ溶液を添
加し、細胞に作用させた後、２０℃で２４時間培養を行
った。

【００１４】その後、Ｈａｎｋｓ′ＢＳＳで細胞を洗浄
しプラック数が１００個となるようにウイルスを接種し
た。ウイルスの１時間吸着後、細胞を再度洗浄し、重層
剤を添加し、１５℃で７〜１４日培養を行い、１０％ホ
ルマリンで固定、０．１％、クリスタルバイオレットで
染色しプラック数を計測した。結果を表１に示す。表中
でＳＶＣＶ，ＰＦＲＶにはＥＰＣ細胞を用いたが、他の
ウイルスにはＣＨＳＥ細胞を用いた。

【００１５】

【表１】

【００１６】実施例２．実施例１においてウイルス液と
ＳＰＥ溶液またはＳＰＩ溶液を等量混合後、直ちに２４
時間培養した細胞に接種し、ウイルスを細胞に吸着させ
た以外は、実施例１と同様に試験した。結果を表２に示
す。

【００１７】

【表２】

【００１８】実施例３．実施例１において、細胞を播い
て２４時間培養後の細胞にウイルスを吸着させたのち、
細胞をＨａｎｋｓ′ＢＳＳで洗浄後、ＳＰＥ溶液または
ＳＰＩ溶液を含む重層剤を添加して培養した以外は実施
例１と同様に試験した。結果を表３に示す。

【００１９】

【表３】

【００２０】実施例４．北海道さけます孵化場より発眼
卵として分与を受け、卵消毒後、魚類隔離飼育室に収容
し脱塩素処理水道水を用いて孵化・飼育したＳＰＦ（Ｓ
ｐｅｃｉｆｉｃＰａｔｈｏｇｅｎ Ｆｒｅｅ）サクラマ
ス稚魚の臍嚢吸収直後のものを供試した。４Ｌ容プラス
チック製小型水槽を４槽用い各々にサクラマスを１００
尾ずつ入れて、１０〜１５℃の脱塩素処理水道水を０．
５Ｌ／min の流量で流し、エアーポンプにより通気しな
がら３週間飼育した。この間、第１と第３の水槽ではＳ
ＰＥを１０％の割合で混合した養魚用飼料を１日３回、
給餌した。第２と第４の水槽ではＳＰＥを混合しない養
魚用飼料を同様に給餌した。

【００２１】そののち第１と第２の水槽の飼育水を５０
０mL容量にし、１０⁵ ＴＣＩＤ₅₀／mlに調整したＩＨＮ
Ｖのウイルス液を０．５ml添加し、１時間浸漬攻撃を行
った。１時間後、再び流水飼育に戻し１カ月間供試魚を
観察した。この間は給餌をしなかった。第２の水槽では
実験開始後、２日目から体色黒化、眼球突出が現れ、１
７日目からウイルスの攻撃による死亡が現れた。３０日
目の生存率は、第１槽で６５％、第２槽で４３％、第３
槽で９３％、第４槽で９８％であった。前述のごとく、
本発明のスピルリナからの抽出物は、魚介類の病原ウイ
ルスに対して抗ウイルス作用を有し、魚用餌の成分とし
て有用である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 スピルリナの熱水抽出物を含んで成る魚
   類病原ウイルスに対する抗ウイルス剤。
2. 【請求項２】 前記魚類病原ウイルスがラブドウイルス
   科に属する伝染性造血器壊死症ウイルス、コイの春ウイ
   ルス症ウイルス、パイク稚魚のラブドウイルス病ウイル
   ス、アメリカウナギ及びヨーロッパウナギのラブドウイ
   ルス、又はヘルペスウイルス科に属するサケ科魚類のヘ
   ルペスウイルス（オンコリンクスマソウウイルス）、伝
   染性膵臓壊死症ウイルスである請求項１に記載の抗ウイ
   ルス剤。
3. 【請求項３】 前記熱水抽出物が、次の性質： （１）該抽出物の水溶液に１０％フェノールを加えたの
   ち濃硫酸を加えた場合に４８０nmに最大吸収を有する黄
   色を呈する； （２）トリフルオロ酢酸により加熱加水分解を行う場
   合、ラムノース、グルコース、フルクトース、リボー
   ス、ガラクトース、キシロース、マンノース、グルクロ
   ン酸及びガラクツロン酸を生成する； （３）ゲル濾過による分子量は２５万〜３０万である；
   を有する多糖類である，請求項１又は２に記載の抗ウイ
   ルス剤。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗
   ウイルス剤を含んで成る抗ウイルス用魚餌。
5. 【請求項５】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗
   ウイルス剤又は請求項４に記載の抗ウイルス魚餌を与え
   ることを特徴とする魚類の養殖又は飼育方法。