JPH02251747A

JPH02251747A - 電気泳動装置

Info

Publication number: JPH02251747A
Application number: JP1074300A
Authority: JP
Inventors: Masayoshi Momiyama; 政慶籾山
Original assignee: Aisin Seiki Co Ltd; Shinsangyo Kaihatsu KK
Current assignee: Shinsangyo Kaihatsu KK; Aisin Corp
Priority date: 1989-03-27
Filing date: 1989-03-27
Publication date: 1990-10-09

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ＤＮＡ断片等の被泳動物を電気泳動させる電
気泳動装置に関する。

〔従来技術〕

近年１分子遺伝化学的手段の発展に伴って１種々の病因
な発症機構が、ＤＮＡ診断で明らかにされている。

このＤＮＡＩ断は、従来１次のように行われている。即
ち、まず被検体であるヒト、動物等における末梢血、胎
児絨毛を採取し、そのＤＮＡを制限酵素により切断する
。そして、アガロースゲル電気泳動法により、切断され
たＤＮＡ断片を分子量の順に分画する０次いで、ゲル上
の該ＤＮＡ断片を変性後、サザンプロット法でニトロセ
ルロースやナイロン製の担体フィルターにトランスファ
ー（転写）する。

一方、目的とする遺伝子に対応するＤＮＡ（又はＲＮＡ
）を標識したＤＮＡプローブを作成しておく、そして、
上記担体フィルター上において。

前記の分画したＤＮＡ断片と上記ＤＮＡプローグとのハ
イブリッドを形成させる。然る後、上記ＤＮＡプローブ
に相同なりＮＡ断片を検出する。

（例えば、「実験医学」ｖｏｊ！５．Ｈａｌｌ、１９８
７、特開昭６ｌ−４７５６４）。

しかして１本発明は、前記電気泳動法により分画したＤ
ＮＡ断片を、前記担体フィルターにトランスファーする
際の技術に関する。

ところで、上記トランスファー技術は、従来は。

前記サザンプロットにより行っている。この方法は、第
６図に示すごとく、切断したＤＮＡ断片４をゲル３上で
電気泳動により分画したものを１例えば次のようにして
ニトロセルロース等の担体フィルター７０上にトランス
ファーするものである。

即ち、第７図に示すごとく、バット９の中にクエン酸三
ナトリウム等のトランスファー用の溶液９１を入れたも
のを準備する。そして、蒸留水で洗ったガラス板８をバ
ット９の基台９２上に置く。

また、上記ゲル３の幅より少し広めに切った濾紙７１を
上記ガラス板８を跨がせて、その両端７１０を上記溶液
９１内に浸漬する。なお、上記濾紙７１は予め上記溶液
９１で濡らしておく。

次に、濾紙７１上に電気泳動処理したゲル３を載置する
１次いで、ゲル３の上にニトロセルロース等の担体フィ
ルター７０を静かに載せる。このとき、空気の気泡が入
らないようにする。

そして、該担体フィルター７０の上に濾紙７２を数枚載
せ、更にその上に乾いたペーパータオル７３を、更にそ
の上にガラス板８を載せる。また。

このガラス板８の上には必要に応じて０．５重１廟位の
重しをのせる。

このとき１重しが重過ぎるとゲル３に亀裂を生じるので
注意する。そして、第７図に示すごとくセットして、こ
のままの状態で４時間から１昼夜放置する。

その後、担体フィルター７０をゲル３から５人手により
剥がし、該フィルター７０を上記溶′ｆＩ９１で洗う、
そして、風乾後、真空オープン中で加熱し、上記ＤＮＡ
断片を上記担体フィルター７０上に固定する。

〔解決しようとする課題〕

しかしながら、上記従来技術には１次の問題点がある。

即ち、上記ゲル３は、寒天等のゲル状物であるため、該
ゲル３上のＤＮＡ断片４のバンド像が歪んだり、また部
分的に破損したりする。つまり。

該担体フィルター７０よりゲル３を手により剥がすとき
、ＤＮＡ断片４のパターンに歪が生じてバンド像が歪ん
だり、また部分的に破損することがある。

本発明は、かかる従来の問題点に鑑みてなされたもので
、ゲル３から担体フィルター７０へＤＮＡ断片４等の被
泳動物を、容易かつ正確にトランスファーＬ、、ＤＮＡ
断片４等に歪、破損を生じさせることのない電気泳動装
置を提供しようとするものである。

【課題の解決手段〕

本発明は、浅い箱状の容器内に寒天等のゲルを入れ、ゲ
ルの両端に微弱電流を通じてＤＮＡ断片等の被泳動物を
電気泳動させる電気泳動装置であって、上記容器の底部
には多数の短冊状の空穴を設け、咳空穴の上方のゲル中
にある被泳動物をトランスファーさせるようにしたこと
を特徴とする電気泳動装置にある。

本発明において、最も注目すべきことは、上記容器の底
部には多数の短冊状の空穴を設けたことにある。

また、上記容器は、浅い箱状のもので、寒天等のゲルを
入れ、該ゲルの両端部には電極を設ける。

また、上記底部の下面には、担体フィルターとの密着性
を向上させるため、空穴と同じ大きさの開口部を有する
弾性板を設けることが好ましい。

かかる弾性板としては、シリコンゴムなどがある。

また、上記ゲルとしては１例えばアガロースポリアミド
を使用する。また、担体フィルターとしては、ニトロセ
ルロースフィルター、ナイロンフィルターなどを使用す
る。しかして、空穴上方のゲル上において、ＤＮＡ断片
等の被泳動物は。

空穴の長さ方向に沿って空穴上方に分画される。

〔作　用〕

本発明にかかる電気泳動装置においては、容器内にゲル
を入れ、上記空穴の上方におけるゲル上において、ＤＮ
Ａ断片等の被泳動物を電気泳動させて分画する。

そして、ゲルから担体フィルターにトランスファーする
時には、ゲル上の該Ｄ　Ｎ　Ａ断片等の被泳動物を上記
短冊状の空穴を通じて真空吸引等により担体フィルター
上にトランスファーする。そのため、該被泳動物に歪み
、破損等を生ずることがない。

また、上記のトランスファーは、上記空穴の上方にある
もののみが、空穴を通って担体フィルター上に移る。そ
れ故、空穴の上方を外れて泳動した浮遊物（ノイズ）は
担体フィルター上にはトランスファーされず、バックグ
ランドノイズを生じない。

〔効　果〕

したがって１本発明によれば、ゲルから担体フィルター
へ、ＤＮＡ等の被泳動物を容易かつ正確にトランスファ
ーＬ、、ＤＮＡ断片等のパターンに歪み、破損を生ずる
ことがない電気泳動装置を提供することができる。

また１本発明によれば、ＤＮＡ断片等のフラグメントが
泳動された部分のみブロッティングされるので、読み取
り、解析におけるバンドパターンの認識が簡素化でき、
Ｓ／Ｎ比が向上する。

〔実施例〕

本発明にかかる電気泳動装置につき、第１図〜第５図を
用いて説明する。

即ち２本例の電気泳動装置は、第１図及び第２図に示す
ごとく、浅い箱状の容器２の底部２０に多数の短冊状の
空穴１を設けてなる。また、底部２０の下面には、空穴
ｌと同じ大きさの開口部を有するシリコン製のゴム板２
５を設けである。

上記容器２は、タテ約１５ｃｍ、　ヨコ約１５Ｃ１１゜
深さ約２Ｃ１１の箱状物により構成する。また、容器２
の両端には電源２１に接続した電極２２．２３を設ける
。

上記空穴１は２幅が約０．５ａｍ、長さ約１４１の短冊
状の細長い貫通穴である。

次に１本電気泳動装置をＤＮＡ断片の分画、トランスフ
ァーに用いた例につき説明する。

まず、第１図及び第２図に示すごとく、容器２内で寒天
等のゲル３を調整し、泳動用緩衝溶液に十分にゲル３を
浸した後、空穴ｌの上方においてゲルスロットにＤＮＡ
断片を注沈させる。そして。

電極２２．２３間に電圧をかける。これによりＤＮＡ断
片はゲル３内を泳動し１分画分離される。

通常、泳動されたＤＮＡ断片は空穴ｌの上方を直線的に
泳いでくるが、中には横の方に泳動して浮遊するものが
あり、このものはバックグラウンドノイズとなり、最終
的なバンドパターンに悪影響を及ぼす。

そして、泳動終了後は担体フィルターにトランスファー
し易くするために、酸性溶液やアルカリ溶液中でゲルを
浸透させる。このとき、ゲルは容器２に入ったままで、
ｌｌ衝溶液中で浸透させる。

なお　従来は９空大のない容器中で泳動させていたので
、ゲルを該容器中より取り出して、ゲルのみを浸透させ
ている。そのため、バンドパターンに歪みが生じ易かっ
た。

しかして、上記処理終了後は１次のようにして担体フィ
ルターへのトランスファーを行なう。

即ち、第３図に示すごとく、まずセラミック多孔体５を
上面に設けた真空吸引器６を準備する。

また、トランスファーすべき担体フィルター４５を準備
する。

また、上記容器２には、電気泳動によりＤＮＡ断片４を
分画したゲル３が入っている。特に、短冊状の空穴ｌの
上方には、これに沿って、第４図に示すごとく、電気泳
動により分画されたＤＮＡ断片４がゲル３上に配列して
いる。

次に、第４図、第５図に示すごとく、上記容器２を、担
体フィルター４５を介してセラミック多孔質板５上に載
置する。即ち、容器２の底部２０下面にあるゴム板２５
を担体フィルター４５上に載せる。このとき、上記セラ
ミック多孔質板５は。

該真空吸引器６の底部６１に立設したポール６２により
支持される０次いで、吸引バイブロ０に接続した真空ポ
ンプ（図示略）を作動させて真空吸引器６内を減圧にす
る。

これにより、上記空穴ｌ内のゲル３が、担体フィルター
４５を介してセラミック多孔質板５上に吸引された状態
となる。そのため、泳動されたＤＮＡ断片は空穴１を通
り抜けて、担体フィルター４５上に固着される。しかし
て、このとき容器２の下方には底部２０があるの丸、上
記空穴１上方のゲル３内にあるＤＮＡ断片のみが担体フ
ィルタ−４５にトランスファー、固着される。

しかして、ＤＮＡ断片４が担体フィルター４５上に固着
された後、容器２を持ち上げ、担体フィルター４５とゲ
ル３とを分離する。この際、担体フィルター４５は多孔
体５上に吸着されているので、容易に分離できる。

上記のごとく、本例装置によれば、担体フィルター４５
と接するゲル３は、前記空穴１の部分のみであるため８
両者の引き離しか容易である。従来は、ゲル全体の下面
が担体フィルター４５上に密着したため、その表面張力
が大きく、引き離しか困難であり、トランスファー後の
泳動バンドパターンに歪や損傷を生じ易かった。

また９本例装置では、空穴ｌを通してトランスファーす
るので、空穴上方の直線状の分画パターンのみをトラン
スファーすることができ、それ以外の前記浮遊泳動物は
トランスファーされない。

そのため、泳動パターンのノイズを除去することができ
、Ｓ／Ｎ比が太き（なる。

それ故、本例装置によれば、泳動物を容易かつトランス
ファーすることができ、また泳動パターンに歪、損傷、
ノイズを生ずることがない。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第５図は本発明の実施例にかかる電気泳動装置
を示し、第１図はその平面図、第２図はその断面図、第
３図はその使用説明図、第４図はその使用時の斜視図、
第５図はその断面図、第６図及び第７図は従来例を示し
、第６図はＤＮＡ断片を分画したゲル体の平面図、第７
図はそのトランスファー時の側面図である。１１０．空穴、　　　　　　２．、、容器。２０、、、底部、　　　　　　３．、、ゲル。４１．　、ＤＮＡ断片。４５、、、担体フィルター

Claims

【特許請求の範囲】

浅い箱状の容器内に寒天等のゲルを入れ、ゲルの両端に
微弱電流を通じてＤＮＡ断片等の被泳動物を電気泳動さ
せる電気泳動装置であって、上記容器の底部には多数の
短冊状の空穴を設け、該空穴の上方のゲル中にある被泳
動物をトランスファーさせるようにしたことを特徴とす
る電気泳動装置。