JPH02264799A - 低温殺菌され精製されたフオン・ビルブラント因子濃縮物およびその調製方法 - Google Patents
低温殺菌され精製されたフオン・ビルブラント因子濃縮物およびその調製方法Info
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- JPH02264799A JPH02264799A JP2029777A JP2977790A JPH02264799A JP H02264799 A JPH02264799 A JP H02264799A JP 2029777 A JP2029777 A JP 2029777A JP 2977790 A JP2977790 A JP 2977790A JP H02264799 A JPH02264799 A JP H02264799A
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、精製され低温殺菌（バスッリゼーション処理
）されたフオン・ビルプラント（ｗｏｎ Ｗｉｌｌｅｂ
ｒａｎｄ）因子濃縮物の調製方法、およびこの方法によ
って調製されそして７オン・ビルプラント症候群の治療
に適した当該濃縮物に関する。
）されたフオン・ビルプラント（ｗｏｎ Ｗｉｌｌｅｂ
ｒａｎｄ）因子濃縮物の調製方法、およびこの方法によ
って調製されそして７オン・ビルプラント症候群の治療
に適した当該濃縮物に関する。
前記症候群はフオン・ビルプラントタンパク質の先天的
な不足および／または欠陥によって特徴付けられる。
な不足および／または欠陥によって特徴付けられる。
血友病Ａの治療にはますます高度に精製され、今日では
ほんの痕跡量でしかフオン・ビルプラント因子を含まな
い第■：Ｃ因子濃縮物が用いられており、そのため純粋
でウィルスに関し安全なフオン・ビルプラント因子濃縮
物が必要どされている。
ほんの痕跡量でしかフオン・ビルプラント因子を含まな
い第■：Ｃ因子濃縮物が用いられており、そのため純粋
でウィルスに関し安全なフオン・ビルプラント因子濃縮
物が必要どされている。
フオン・ビルプラント病患者は、場合によっては高用量
で、生涯療法を受けねばならないことから、純度および
安全性の高い製品が必要とされている。有利な調製物は
フイブリノゲン、免疫グロブリンおよびイソアグルチニ
ンの低いものである。
で、生涯療法を受けねばならないことから、純度および
安全性の高い製品が必要とされている。有利な調製物は
フイブリノゲン、免疫グロブリンおよびイソアグルチニ
ンの低いものである。
血漿中では、フオン・ビルプラント因子は５〜１０ ｍ
９ ／ Ｑの濃度、および第■因子、いわゆる抗血友
病グロブリン、と非共有結合的に結合した複合体の形で
循環する。寒冷沈降物（ｃｒｙｏｒ）−ｒｅｃｉｐｉｔ
ａｔｅ） Ｉこおいては、フオン・ビルプラント因子は
フオン・ビルプラント因子／第■因子複合体として非常
に濃縮されており、そこからあるいは血漿または血漿画
分から既知の分画方法を用いて単離することができる。
９ ／ Ｑの濃度、および第■因子、いわゆる抗血友
病グロブリン、と非共有結合的に結合した複合体の形で
循環する。寒冷沈降物（ｃｒｙｏｒ）−ｒｅｃｉｐｉｔ
ａｔｅ） Ｉこおいては、フオン・ビルプラント因子は
フオン・ビルプラント因子／第■因子複合体として非常
に濃縮されており、そこからあるいは血漿または血漿画
分から既知の分画方法を用いて単離することができる。
西独特許出頭公開第３，５０４．３８５号（ＵＳＰ４．
５７８，２１８）は、第■因子調製物を遊離の硫酸塩基
を有する不溶性マトリックス、例えばデキストラン硫酸
に結合する第■因子複合体の処理方法を開示しているが
、明らかにこの場合、第■因子複合体を第■：Ｃ因子と
フオン・ビルプラント因子に分離することはできない。
５７８，２１８）は、第■因子調製物を遊離の硫酸塩基
を有する不溶性マトリックス、例えばデキストラン硫酸
に結合する第■因子複合体の処理方法を開示しているが
、明らかにこの場合、第■因子複合体を第■：Ｃ因子と
フオン・ビルプラント因子に分離することはできない。
ＣＢ ２，０７９，２９２は寒冷沈降物よりのフオン・
ビルプラント因子の取得方法を記載しているがこれも第
■：Ｃ因子をフオン・ビルプラント因子から分離するも
のではない。
ビルプラント因子の取得方法を記載しているがこれも第
■：Ｃ因子をフオン・ビルプラント因子から分離するも
のではない。
ＥＰ Ｏ，０２２，０５２（ｔｌｓＰ ４，２１０．５
８０）は、血漿をナトリウムヘパリンで処理してフィブ
ロネクチンをフオン・ビルプラント因子と共に沈降させ
る方法を記載している。抗血友病因子はその上清から得
られる。その沈降物をＤＥＡＥ−セルロースでのクロマ
トグラフィーにかけるとフィブロネクチンが得られる。
８０）は、血漿をナトリウムヘパリンで処理してフィブ
ロネクチンをフオン・ビルプラント因子と共に沈降させ
る方法を記載している。抗血友病因子はその上清から得
られる。その沈降物をＤＥＡＥ−セルロースでのクロマ
トグラフィーにかけるとフィブロネクチンが得られる。
アガロースゲルをクロマトグラフィーに用いるとフオン
・ビルプラント因子がボイドボリュームで溶出されるこ
とが記載されている。しかしながら、使用されるヘパリ
ン量は高価であり、また工業規模で製造するにはゲル濾
過がボトルネックとなる。更に毒性のあるＫＳＣＮが用
いられる。
・ビルプラント因子がボイドボリュームで溶出されるこ
とが記載されている。しかしながら、使用されるヘパリ
ン量は高価であり、また工業規模で製造するにはゲル濾
過がボトルネックとなる。更に毒性のあるＫＳＣＮが用
いられる。
欧州特許筒０．０８３．４８３号には、Ｊ、 Ｌａｂ、
Ｃｌ１ｎ。
Ｃｌ１ｎ。
Ｍａｄ、 ９３．４０（１９７９）が第■：Ｃ因子およ
びフオン・ビルプラント因子の分離方法を記載しそこで
は分離が免疫吸着によって行われる旨、従来技術に関し
て記載されている。しかしながら、この方法では第■：
Ｃ因子だけが十分な純度で得られるに過ぎない。
びフオン・ビルプラント因子の分離方法を記載しそこで
は分離が免疫吸着によって行われる旨、従来技術に関し
て記載されている。しかしながら、この方法では第■：
Ｃ因子だけが十分な純度で得られるに過ぎない。
これら二因子を分離する別法がＢｒ１ｔ−Ｊ。
Ｈａｅｍａｔｏｌ ４３． ６６９（１９７９）に記載
されているがそこではアミノヘキシル−アガロースが用
いられる。この方法もフオン・ビルプラント因子の取得
には適していない。
されているがそこではアミノヘキシル−アガロースが用
いられる。この方法もフオン・ビルプラント因子の取得
には適していない。
ＥＰ ０．０８３．４８３それ自体は少量でしかフオン
・ビルプラント因子を含まない第■：Ｃ因子の取得方法
を記載している。しかしながらそこにはフオン・ビルプ
ラント因子の取得方法については記載がない。
・ビルプラント因子を含まない第■：Ｃ因子の取得方法
を記載している。しかしながらそこにはフオン・ビルプ
ラント因子の取得方法については記載がない。
これらすべての方法に共通しているのは、それらでは、
複合体を完全に解離させた後、天然（ｎａｔｉｖｅ）
ＦＶＩＩＩ：ＣおよびｖＷＦを定量的に遊離し得ないこ
とである。これらの方法はいずれも低温殺菌された、従
ってウィルスに関し安全な製品を記載していない。精製
中にｖＷＦがタンパク質加水分解的に分解されないよう
に、これらの方法では、有毒物質、例えばＤＦＰおよび
大豆トリズシン阻害剤または緩衝剤例えばＫＳＣＮおよ
びＮａＮ、が用いられている。最後に、これらの方法は
、大規模生産のボトルネックとなる工程を含んでおり、
不利である。これらには例えばゲル濾過、すなわち分子
量による分離、あるいは溶出に塩勾配を用いたクロマト
グラフィー工程が包含される。
複合体を完全に解離させた後、天然（ｎａｔｉｖｅ）
ＦＶＩＩＩ：ＣおよびｖＷＦを定量的に遊離し得ないこ
とである。これらの方法はいずれも低温殺菌された、従
ってウィルスに関し安全な製品を記載していない。精製
中にｖＷＦがタンパク質加水分解的に分解されないよう
に、これらの方法では、有毒物質、例えばＤＦＰおよび
大豆トリズシン阻害剤または緩衝剤例えばＫＳＣＮおよ
びＮａＮ、が用いられている。最後に、これらの方法は
、大規模生産のボトルネックとなる工程を含んでおり、
不利である。これらには例えばゲル濾過、すなわち分子
量による分離、あるいは溶出に塩勾配を用いたクロマト
グラフィー工程が包含される。
本発明は、驚くべきことに、第■：Ｃ因子とフオン・ビ
ルプラント因子を解離しそして精製され低温殺菌された
フオン・ビルプラント因子を高収率で単離することがで
きる方法を記載するものである。本発明の目的は、フオ
ン・ビルプラント症候群治療用の精製され低温殺菌され
た、従ってウィルス的に安全な凝固療法剤を取得するこ
とにある。
ルプラント因子を解離しそして精製され低温殺菌された
フオン・ビルプラント因子を高収率で単離することがで
きる方法を記載するものである。本発明の目的は、フオ
ン・ビルプラント症候群治療用の精製され低温殺菌され
た、従ってウィルス的に安全な凝固療法剤を取得するこ
とにある。
本発明は、アミノ酸を含み５〜３０％ｗ／ｗの炭水化物
濃度を有するｐＨ５，５〜６．５の緩衝液中にＦＶＩＩ
Ｉ：Ｃとの複合体としてフオン・ビルプラント因子（ｖ
ＷＦ）を含む溶液をＦＶＩＩＩ：Ｃが結合する陰イオン
交換体で処理し、そしてフオン・ビルプラント因子濃縮
物を該溶液から取得することより成る低温殺菌されたフ
オン・ビルプラント因子濃縮物の調製方法に、関する。
濃度を有するｐＨ５，５〜６．５の緩衝液中にＦＶＩＩ
Ｉ：Ｃとの複合体としてフオン・ビルプラント因子（ｖ
ＷＦ）を含む溶液をＦＶＩＩＩ：Ｃが結合する陰イオン
交換体で処理し、そしてフオン・ビルプラント因子濃縮
物を該溶液から取得することより成る低温殺菌されたフ
オン・ビルプラント因子濃縮物の調製方法に、関する。
ｖＷＦ濃縮物調製用出発材料として、ｖＷＦがＦＶＩＩ
Ｉ：Ｃとの複合体として存在する溶液、例えば血漿およ
びそれより得られる両分例えば寒冷沈降物、コーン（Ｃ
ｏｈｎ）画分■または細胞培養よりの上清および抽出液
などを用いることができる。
Ｉ：Ｃとの複合体として存在する溶液、例えば血漿およ
びそれより得られる両分例えば寒冷沈降物、コーン（Ｃ
ｏｈｎ）画分■または細胞培養よりの上清および抽出液
などを用いることができる。
出発材料、好ましくは寒冷沈降物またはそれより得られ
る中間画分は低温殺菌したものであってよい。
る中間画分は低温殺菌したものであってよい。
好ましくは１０〜６０％（ｖ／ｗ）濃度で炭水化物好ま
しくはスクロース、および／または好ましくは０．５〜
３．Ｑｍｏ（！７’Ｑ濃度でアミノ酸好ましくはグリシ
ン、および／または好ましくは１〜２０ｒｓｖＩｏＱ／
Ｑでカルシウム塩を添加することにより低温殺菌中の熱
による失活からｖＷＦを保護することができる。更にこ
れらの措置によって同時に酸に敏感なタンパク質、例え
ばフィブロネクチンの沈降を防止することもできる。
しくはスクロース、および／または好ましくは０．５〜
３．Ｑｍｏ（！７’Ｑ濃度でアミノ酸好ましくはグリシ
ン、および／または好ましくは１〜２０ｒｓｖＩｏＱ／
Ｑでカルシウム塩を添加することにより低温殺菌中の熱
による失活からｖＷＦを保護することができる。更にこ
れらの措置によって同時に酸に敏感なタンパク質、例え
ばフィブロネクチンの沈降を防止することもできる。
前記炭水化物は、熱による失活または変性がらタンパク
質を保護するだけでなく、驚くべきほどに沈降を防止す
ることから本発明においては特にフイブリノゲンおよび
ｖＷＦに対し６．５〜５．５）酸性ｐＨ域に村いて可溶
化剤としても働いている。
質を保護するだけでなく、驚くべきほどに沈降を防止す
ることから本発明においては特にフイブリノゲンおよび
ｖＷＦに対し６．５〜５．５）酸性ｐＨ域に村いて可溶
化剤としても働いている。
ＦＶＩＩＩ：Ｃをイオン交換体に吸着させた後、ｖＷＦ
の方はｐＨ５，５で溶液中に保つことができ、そしてこ
れより０．５〜３屑ｏＱ／Ｑ、好ましくは２．７ｒａｏ
Ｑ／Ｑの濃度でグリシンを添加することによりフイブリ
ノゲンを除去することができ、そしてそのグリシン上清
から２〜１５％（ｖ／ｖ） 、好ましくは６％（ｗ／ｖ
）に相当するＮａＣｌ２濃度でｖＷＦを沈降させること
ができる。
の方はｐＨ５，５で溶液中に保つことができ、そしてこ
れより０．５〜３屑ｏＱ／Ｑ、好ましくは２．７ｒａｏ
Ｑ／Ｑの濃度でグリシンを添加することによりフイブリ
ノゲンを除去することができ、そしてそのグリシン上清
から２〜１５％（ｖ／ｖ） 、好ましくは６％（ｗ／ｖ
）に相当するＮａＣｌ２濃度でｖＷＦを沈降させること
ができる。
予め精製されたｖＷＦ中間生成物をウィルス安全性を高
めるために２回目の低温殺菌にかけることができる。
めるために２回目の低温殺菌にかけることができる。
低温殺菌され高度に精製されたｖＷＦは例えば安定化剤
としてクエン酸塩を加えた（ ｃｉｔｒａｔｅｄ）（０
，０２ｍｏＱ／ １２） ＮａＣｌ２（０，０６＋１１
０１２／ Ｑ）中のアルブミン（０，５％）、グリシン
（２％Ｖ／Ｖ）を用いて濾過滅菌し、凍結乾燥すること
ができる。
としてクエン酸塩を加えた（ ｃｉｔｒａｔｅｄ）（０
，０２ｍｏＱ／ １２） ＮａＣｌ２（０，０６＋１１
０１２／ Ｑ）中のアルブミン（０，５％）、グリシン
（２％Ｖ／Ｖ）を用いて濾過滅菌し、凍結乾燥すること
ができる。
解離および精製の条件は大規模製造に移すことができる
。
。
ｖＷ症候群の治療に従来用いられてきた抗血友病寒冷沈
降物、粗製寒冷沈降物または寒冷画分とは対照的に、本
発明による生成物はバラスト（ｂａｌｌｉｓｔ）タンパ
ク質を実質的に含まない。
降物、粗製寒冷沈降物または寒冷画分とは対照的に、本
発明による生成物はバラスト（ｂａｌｌｉｓｔ）タンパ
ク質を実質的に含まない。
本発明による方法は、純度、収率およびウィルス安全性
に関する厳しい要件に合致している：場合によって存在
するウィルスはこの精製方法によりバラストタンパク質
と共に除去され、また低温殺菌により失活される。前述
の方法により調製された生成物の比活性は１００Ｕ （
Ｆ ＶＩ［［Ｒ： ＣｏＦ／ １１９ （タンパク質）
）以上である。
に関する厳しい要件に合致している：場合によって存在
するウィルスはこの精製方法によりバラストタンパク質
と共に除去され、また低温殺菌により失活される。前述
の方法により調製された生成物の比活性は１００Ｕ （
Ｆ ＶＩ［［Ｒ： ＣｏＦ／ １１９ （タンパク質）
）以上である。
手順は次のとおりである：
フオン・ビルプラント因子および第■因子について非常
に濃縮され、そしてＡＱ（ＯＨ）ｓ吸着によりプロトロ
ンビン複合体の因子を除去しである溶解寒冷沈降物をそ
れ自体既知の方法で炭水化物、アミノ酸およびカルシウ
ムイオンを添加することによって安定化して熱による失
活から保護し、そして水性溶液中、６０℃で好ましくは
１０時間加熱する。
に濃縮され、そしてＡＱ（ＯＨ）ｓ吸着によりプロトロ
ンビン複合体の因子を除去しである溶解寒冷沈降物をそ
れ自体既知の方法で炭水化物、アミノ酸およびカルシウ
ムイオンを添加することによって安定化して熱による失
活から保護し、そして水性溶液中、６０℃で好ましくは
１０時間加熱する。
低温殺菌しｔ；溶液は、生理学的伝導度（１２〜１５ｍ
５）およびｐＨ５、５および０．２ｍｏ（１／ （ｌリ
ジンおよび０．２ｒｘｏＱ／Ｑ酢酸ナトリウムの組成を
有する緩衝液で希釈して容量を倍にし、その溶液のｐＨ
を５．５に調節し、そして陰イオン交換体を２０°Ｃで
添加することができる。
５）およびｐＨ５、５および０．２ｍｏ（１／ （ｌリ
ジンおよび０．２ｒｘｏＱ／Ｑ酢酸ナトリウムの組成を
有する緩衝液で希釈して容量を倍にし、その溶液のｐＨ
を５．５に調節し、そして陰イオン交換体を２０°Ｃで
添加することができる。
これらの条件下では、第■因子は、マトリックスとして
の”５ｅｐｈａｄｅｘ、 ’５ｅｐｈａｒｏｓｅ、セル
ロースまたは”ＦｒａｃＬｏｇｅｌに対し結合した官能
基としてのＤＥＡＥおよびＱＡＥを有する塩基性イオン
交換体に結合し、一方ｖＷＦは溶液中に留まる。これら
交換体はこの目的のために次の緩衝液で予め平衡させて
おく ： ０．１ｍｏＱ／ Ｑ酢酸ナトリウム、０ 、
１ ｍ ｏ Ｑ ／ （ｌリジン、０．０１７ｖａｏＱ
／Ｑ ＮａＣ（２、ｐＨ５−５゜ 前述の条件下では、ｖＷＦは上清中にフイブリノゲンお
よびフィブロネクチンと共に留まることから、前述の条
件下ではｖＷＦと第■因子との複合体が解離されること
は明白である。
の”５ｅｐｈａｄｅｘ、 ’５ｅｐｈａｒｏｓｅ、セル
ロースまたは”ＦｒａｃＬｏｇｅｌに対し結合した官能
基としてのＤＥＡＥおよびＱＡＥを有する塩基性イオン
交換体に結合し、一方ｖＷＦは溶液中に留まる。これら
交換体はこの目的のために次の緩衝液で予め平衡させて
おく ： ０．１ｍｏＱ／ Ｑ酢酸ナトリウム、０ 、
１ ｍ ｏ Ｑ ／ （ｌリジン、０．０１７ｖａｏＱ
／Ｑ ＮａＣ（２、ｐＨ５−５゜ 前述の条件下では、ｖＷＦは上清中にフイブリノゲンお
よびフィブロネクチンと共に留まることから、前述の条
件下ではｖＷＦと第■因子との複合体が解離されること
は明白である。
Ｆ■で負荷された陰イオン交換体は、Ｏ，１ｍｏα／Ｑ
リジン、０．１ｍｏ１２／Ｑ酢酸ナトリウム、０．０１
７ｍｏＱ／ Ｑ ＮａＣ０を含む緩衝溶液（ｐＨ５，５
）または１２〜１５ｍ５の伝導度を有する他の緩衝液で
洗浄することができる。溶出に用いられるのは高い塩濃
度、例えば０．３〜ｌ ｍｏＱ／ＱのＮａＣｌまたはそ
の他のアルカリ金属またはアルカリ土類金属ハライドを
有する緩衝液である。
リジン、０．１ｍｏ１２／Ｑ酢酸ナトリウム、０．０１
７ｍｏＱ／ Ｑ ＮａＣ０を含む緩衝溶液（ｐＨ５，５
）または１２〜１５ｍ５の伝導度を有する他の緩衝液で
洗浄することができる。溶出に用いられるのは高い塩濃
度、例えば０．３〜ｌ ｍｏＱ／ＱのＮａＣｌまたはそ
の他のアルカリ金属またはアルカリ土類金属ハライドを
有する緩衝液である。
溶出液は、適切な場合には後処理して低温殺菌され高度
に精製されたＦＶＩＩＩ：Ｃ濃縮物を得ることができる
。
に精製されたＦＶＩＩＩ：Ｃ濃縮物を得ることができる
。
酸性ｐｏ域での前述の解離および選択的吸着は、溶液中
の主たる量のタンパク質であるフイブリノゲンが沈降し
ない場合にだけ可能である。何故ならば真性グロブリン
（フイブリノゲンもその一つである）は水性溶液中でｐ
Ｈ５〜５．５に酸性化することにより沈降することが知
られているからである。
の主たる量のタンパク質であるフイブリノゲンが沈降し
ない場合にだけ可能である。何故ならば真性グロブリン
（フイブリノゲンもその一つである）は水性溶液中でｐ
Ｈ５〜５．５に酸性化することにより沈降することが知
られているからである。
このことは本発明による方法にはあてはまらない。何故
ならば低温処理から溶液中に残留する炭水化物およびカ
ルシウムがフイブリノゲンを酸性ｐＨｉ、、８いてさえ
も溶液中に保つからである。
ならば低温処理から溶液中に残留する炭水化物およびカ
ルシウムがフイブリノゲンを酸性ｐＨｉ、、８いてさえ
も溶液中に保つからである。
タンパク質の低温殺菌が後で行われるとしてもこの工程
も同じく本発明の主題の一部をなしている。
も同じく本発明の主題の一部をなしている。
第■：Ｃ活性の無いフオン・ビルプラント因子はフイブ
リノゲンおよびフィブロネクチンと共に上清中に留まり
（バッチ法）、あるいはカラムを通過しそして次に適当
な分画工程により、量的に大過剰に存在する随伴タンパ
ク質から、例えばグリシン分画および陰イオン交換体上
清のＮａＣｌ沈降によって分離することができる。
リノゲンおよびフィブロネクチンと共に上清中に留まり
（バッチ法）、あるいはカラムを通過しそして次に適当
な分画工程により、量的に大過剰に存在する随伴タンパ
ク質から、例えばグリシン分画および陰イオン交換体上
清のＮａＣｌ沈降によって分離することができる。
このためには、ＤＥＡＥ上清をｐＨ７、３に調節し、そ
してフイブリノゲンを０．５〜３ｗｒｏＱ／Ｑグリシン
、好ましくは２ 、７ ｍ ｏ Ｑ ／ Ｑを用いて３
７℃で沈降させそして除去する。
してフイブリノゲンを０．５〜３ｗｒｏＱ／Ｑグリシン
、好ましくは２ 、７ ｍ ｏ Ｑ ／ Ｑを用いて３
７℃で沈降させそして除去する。
フオン・ビルプラント因子は固体または溶存ＮａＣｌを
グリシン上清に２〜１５％Ｗ／Ｖ１好ましくは６％ｗ／
ｖの最終濃度となるように添加することにより選択的に
沈降させ、そして例えば遠心分離で除去する。
グリシン上清に２〜１５％Ｗ／Ｖ１好ましくは６％ｗ／
ｖの最終濃度となるように添加することにより選択的に
沈降させ、そして例えば遠心分離で除去する。
溶解した沈降物はさらにＲＡｅｒｏｓｉｌで処理するこ
とにより精製することができる。ｖＷＦの随伴タンパク
質、すなわち、フイブリノゲン、フィブロネクチンおよ
び免疫グロブリン、は２８０ｎｍにおけるＯＤを介して
調節される特定のタンパク質濃度でＡｅｒｏｓ ｉ ｌ
に優先的に結合する。また望ましくないイソアグルチニ
ン（同種凝集素）もはっきりと減少する。この、Ａｅｒ
ｏｓ ｉ １処理は低温処理の前および後の両方におい
て行うことができる。
とにより精製することができる。ｖＷＦの随伴タンパク
質、すなわち、フイブリノゲン、フィブロネクチンおよ
び免疫グロブリン、は２８０ｎｍにおけるＯＤを介して
調節される特定のタンパク質濃度でＡｅｒｏｓ ｉ ｌ
に優先的に結合する。また望ましくないイソアグルチニ
ン（同種凝集素）もはっきりと減少する。この、Ａｅｒ
ｏｓ ｉ １処理は低温処理の前および後の両方におい
て行うことができる。
このようにして調製されたフオン・ビルプラント因子沈
降物は溶解し、スクロース／グリシンと混合し、そして
ウィルス安全性を高めるために再び６０℃で１０時間加
熱することができる。
降物は溶解し、スクロース／グリシンと混合し、そして
ウィルス安全性を高めるために再び６０℃で１０時間加
熱することができる。
驚くべさことに、この低温殺菌は実質的に活性の損失な
く行うことができる。なおも存在する残留フイブリノゲ
ンは０．５〜３．ＯｍｏＱ／ Ｑ、好ましくは２．２ｍ
ｏａ／Ｑ、のグリシン沈降により冷却希釈溶液から沈降
させる。フォン・ビルプラント因子は次いでその上清を
２〜１５％ｗ／ｖ、好ましくは８％Ｗ／Ｖ、の塩化ナト
リウム沈降により、高純度でまた低イソアグルチニンカ
価で単離することができる。
く行うことができる。なおも存在する残留フイブリノゲ
ンは０．５〜３．ＯｍｏＱ／ Ｑ、好ましくは２．２ｍ
ｏａ／Ｑ、のグリシン沈降により冷却希釈溶液から沈降
させる。フォン・ビルプラント因子は次いでその上清を
２〜１５％ｗ／ｖ、好ましくは８％Ｗ／Ｖ、の塩化ナト
リウム沈降により、高純度でまた低イソアグルチニンカ
価で単離することができる。
フオン・ビルプラント因子を０ 、０２ｍｏｆｆ／ １
２クエン酸塩、０．０６ｍｏＱ／ Ｑ ＮａＣｌ２ （
ｐＨ６，８）より成る緩衝液に溶解しそしてアミノ酸お
よびアルブミンの添加により安定化した後透析を行う。
２クエン酸塩、０．０６ｍｏＱ／ Ｑ ＮａＣｌ２ （
ｐＨ６，８）より成る緩衝液に溶解しそしてアミノ酸お
よびアルブミンの添加により安定化した後透析を行う。
次に生成物を濾過により滅菌しそして適切な場合には凍
結乾燥する。ｖＷＦの濃縮度は凝集法によりＦ■Ｒ：
ＣｏＦ活性を指標に測定した。
結乾燥する。ｖＷＦの濃縮度は凝集法によりＦ■Ｒ：
ＣｏＦ活性を指標に測定した。
安定化させた血小板はＦ■Ｒ：ＣｏＦおよび抗生物質リ
ストセチン（ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ） Ａの存在下に凝
集する。
ストセチン（ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ） Ａの存在下に凝
集する。
測定手順：
５０μαのフオン・ビルプラント試薬（Ｂｅｈｒｉｎｇ
−ｖｅｒｋｅ） （１ｍ（ｌの蒸留水に再懸濁）８よび
５０μ０の血漿または血漿希釈液をガラスプレート上で
混合し、そしてシェーカーまたは手により室温で！分間
旋回する（サンプルが十分混合されるよう留意しなけれ
ばならない）。１分間経過後、凝集度を塩化ナトリウム
対照と比較する。塩化ナトリウム対照との比較により依
然として陽性である希釈レベルを読み取り、そして試薬
感度を乗じる。ＦＶＩＩＩＲ：ＣｏＦ含量（％）が得ら
れる。
−ｖｅｒｋｅ） （１ｍ（ｌの蒸留水に再懸濁）８よび
５０μ０の血漿または血漿希釈液をガラスプレート上で
混合し、そしてシェーカーまたは手により室温で！分間
旋回する（サンプルが十分混合されるよう留意しなけれ
ばならない）。１分間経過後、凝集度を塩化ナトリウム
対照と比較する。塩化ナトリウム対照との比較により依
然として陽性である希釈レベルを読み取り、そして試薬
感度を乗じる。ＦＶＩＩＩＲ：ＣｏＦ含量（％）が得ら
れる。
以下の実施例は、低温殺菌され、高度に精製されたフオ
ン・ビルプラント因子濃縮物の調製を記したものである
。
ン・ビルプラント因子濃縮物の調製を記したものである
。
実施例 】
１、出発材料
ｌ ｋｇの粗製寒冷沈降物を、０．０８ｍｏＱ／ Ｑ
ＮａＣｌ。
ＮａＣｌ。
０．２７ｍｏＱ／ Ｑグリシン、０．１３Ｕ／＋＊１２
抗トロンビン■および０．６６ ＵＳＰ Ｕ／１＋１２
ヘパリンを含む３ａの緩衝液に３０〜３７°Ｃで加、熱
することにより溶解しＩ；。その結果、ｐＨが６．８〜
６．９であって以下の添加剤を以下の濃度で含む溶液４
Ｑが得られた。
抗トロンビン■および０．６６ ＵＳＰ Ｕ／１＋１２
ヘパリンを含む３ａの緩衝液に３０〜３７°Ｃで加、熱
することにより溶解しＩ；。その結果、ｐＨが６．８〜
６．９であって以下の添加剤を以下の濃度で含む溶液４
Ｑが得られた。
ＮａＣｌ２ ０．０６ ｍｏａ／Ｑグリ
シン ０．２ ｗｔｏＱ／ＱＡＴ ｍ
Ｏ，Ｉ Ｕ／ｍＱヘハ！Ｊ ７
０．５ Ｕ ／ ｔｓ（１２、ＡＱＣＯＨ）ｓ吸着 ８０ｍＱの１％強度ＡＱ（ＯＨ） ｓ懸濁液（Ｂｅｈｒ
ｉｎｇｖｅｒｋｅ。
シン ０．２ ｗｔｏＱ／ＱＡＴ ｍ
Ｏ，Ｉ Ｕ／ｍＱヘハ！Ｊ ７
０．５ Ｕ ／ ｔｓ（１２、ＡＱＣＯＨ）ｓ吸着 ８０ｍＱの１％強度ＡＱ（ＯＨ） ｓ懸濁液（Ｂｅｈｒ
ｉｎｇｖｅｒｋｅ。
Ｍａｒｂｕｒｇ）を１で得た溶液１０００ｍＩ２に添加
し、そして２８〜３０℃の温度で１５分間撹拌した。次
にそれを３０００ｘｇで１５分間遠心分離し、残留物を
捨て、そして上清を安定化剤と混合しそして低温殺菌し
Ｉこ 。
し、そして２８〜３０℃の温度で１５分間撹拌した。次
にそれを３０００ｘｇで１５分間遠心分離し、残留物を
捨て、そして上清を安定化剤と混合しそして低温殺菌し
Ｉこ 。
３、安定化および低温殺菌
２で得られた上清１０００＋１２を以下の安定化剤と混
合した： ５＋ｘＱのＣａＣｆ１．溶液、１ｍｏα／ Ｑ （５ｍ
ｙｒｏＱ／ Ｑ）１０００ｇのスクロース（５００ｇ／
溶液１ ｋｇ）１５０ｇのグリシン（２ｒｘｏ（１／溶
液１１２）ｐＨを２ＮＮａＯＨで７．３に調節した。溶
液量は添加により増大した。１ｋｇの寒冷沈降物から出
発して６．８１２の安定化溶液が得られ、そしてこれを
水浴中６０℃で１０時間加熱した。
合した： ５＋ｘＱのＣａＣｆ１．溶液、１ｍｏα／ Ｑ （５ｍ
ｙｒｏＱ／ Ｑ）１０００ｇのスクロース（５００ｇ／
溶液１ ｋｇ）１５０ｇのグリシン（２ｒｘｏ（１／溶
液１１２）ｐＨを２ＮＮａＯＨで７．３に調節した。溶
液量は添加により増大した。１ｋｇの寒冷沈降物から出
発して６．８１２の安定化溶液が得られ、そしてこれを
水浴中６０℃で１０時間加熱した。
４、 イオン交換体処理
３で得られた溶液６．８ｇを、０．２ｖｒｏＱ／Ｑ酢酸
ナトリウム、ｐＨ５，５および０．２ｍｏ（２／ Ｑリ
ジンを含んだ６．８Ｑの緩衝液で希釈した。ｐＨを希酢
酸で５．５に調節した。
ナトリウム、ｐＨ５，５および０．２ｍｏ（２／ Ｑリ
ジンを含んだ６．８Ｑの緩衝液で希釈した。ｐＨを希酢
酸で５．５に調節した。
その溶液を、０．１諺ｏＱ／Ｑ酢酸ナトリウム、０．１
ｗｒｏ（１／Ｑリジン、１９／ Ｑ ＮａＣｌを含んだ
ｐＨ５，５の緩衝液で平衡させた３００ｍＱのＤＥＡＥ
−”５ｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ ６Ｂと混合した。その
懸濁液を室温で２〜３時間撹拌し、そして吸着の進行を
連続Ｆ■測測定より監視した。負荷された樹脂を次にナ
イロンフィルターバッグに注ぎ、分離し、洗浄し、溶出
し、そして溶出液を後処理してＦＶＩＩＩ：Ｃ濃縮物を
得た。
ｗｒｏ（１／Ｑリジン、１９／ Ｑ ＮａＣｌを含んだ
ｐＨ５，５の緩衝液で平衡させた３００ｍＱのＤＥＡＥ
−”５ｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ ６Ｂと混合した。その
懸濁液を室温で２〜３時間撹拌し、そして吸着の進行を
連続Ｆ■測測定より監視した。負荷された樹脂を次にナ
イロンフィルターバッグに注ぎ、分離し、洗浄し、溶出
し、そして溶出液を後処理してＦＶＩＩＩ：Ｃ濃縮物を
得た。
ＤＥＡＥ上清からのフォン・ビルプラント因子の取得
５、 ２．７Ｍグリシン沈降
この沈降のｔ；めに、Ｉ）ＥＡＥ上清を２ＭＮａＯＨを
用いてｐＨ６，８に調節し、３７℃に加熱し、そして該
ＤＥＡＥ上清はすでに低温殺菌溶液からの０．６ｍｏ１
２／Ｑグリシンを含んでいることから２．１ｍｏα／１
２の結晶グリシ７ （１５７，５９）の添加により２．
７ｍｏｆｆ／ｆｆの最終濃度とした。グリシンは撹拌し
ながら３０分にわたって徐々に計量添加した。この間に
フイブリノゲンが沈降しそしてこれを分離する。
用いてｐＨ６，８に調節し、３７℃に加熱し、そして該
ＤＥＡＥ上清はすでに低温殺菌溶液からの０．６ｍｏ１
２／Ｑグリシンを含んでいることから２．１ｍｏα／１
２の結晶グリシ７ （１５７，５９）の添加により２．
７ｍｏｆｆ／ｆｆの最終濃度とした。グリシンは撹拌し
ながら３０分にわたって徐々に計量添加した。この間に
フイブリノゲンが沈降しそしてこれを分離する。
この間に沈降混合物は２０〜２５℃に温度低下する。
フイブリノゲン沈降物を３０００〜５０００ Ｘ ９で
遠心分離することにより除去する。
遠心分離することにより除去する。
６．６％ＮａＣｌ沈降
前記２．７Ｍグリシン上清に結晶ＮａＣｌ （６０９／
Ｑ）を添加することによりフオン・ビルプラント因子
を沈降させた。沈降は室温で行い、ＮａＣｌ２は３０分
間かけて計量添加し、そして次にその混合物を３０分間
撹拌した。微細沈降物を１５，０００Ｘ９および１０℃
での連続フロー遠心分離（４０ｆｆ／時のスループット
（ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ） ）で除去した。
Ｑ）を添加することによりフオン・ビルプラント因子
を沈降させた。沈降は室温で行い、ＮａＣｌ２は３０分
間かけて計量添加し、そして次にその混合物を３０分間
撹拌した。微細沈降物を１５，０００Ｘ９および１０℃
での連続フロー遠心分離（４０ｆｆ／時のスループット
（ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ） ）で除去した。
７、６％ＮａＣｌ残渣の溶解、安定化および低温殺菌
６％ＮａＣ（ｌ残渣を６０ｒｔｒＱの蒸留水に溶解した
。
。
２８０ｎｍにおける光学密度が４０である溶液８２．５
ｍｆ２が得られた。光学密度が５０以上のときはその混
合物をこの値まで希釈する。
ｍｆ２が得られた。光学密度が５０以上のときはその混
合物をこの値まで希釈する。
安定化のために、８２．５ｇのスクロース（１ｇ／ｍ１
２）および１２．３９のグリシン（２ｍｏＱ／ １２）
を８２．５冨ｑの溶液に添加した。安定化させた溶液量
を１４０１Ｉａとし、ｐＨを２ＭＮａＯＨで６．８に調
節し、そしてその安定化させた溶液を６０°Ｏｉ、：ｌ
Ｑ時間加熱し ｔこ 。
２）および１２．３９のグリシン（２ｍｏＱ／ １２）
を８２．５冨ｑの溶液に添加した。安定化させた溶液量
を１４０１Ｉａとし、ｐＨを２ＭＮａＯＨで６．８に調
節し、そしてその安定化させた溶液を６０°Ｏｉ、：ｌ
Ｑ時間加熱し ｔこ 。
８、安定他剤溶液よりの低温殺菌フオン・ビルプラント
因子の単離 希釈： 低温殺菌した溶液を４０℃に冷却し、次いで０．０３ｍ
ｏｆｆ／＜ｌ ＮａＣαおよび０．０２ｍｏＱ／ｆｆク
エン酸三ナトリウムを含む２８０＋＋ＩＱの緩衝液でｌ
：３の割合で希釈した。２８０ｎｍにおける溶液の光学
密度は希釈後は７．８１であった。
因子の単離 希釈： 低温殺菌した溶液を４０℃に冷却し、次いで０．０３ｍ
ｏｆｆ／＜ｌ ＮａＣαおよび０．０２ｍｏＱ／ｆｆク
エン酸三ナトリウムを含む２８０＋＋ＩＱの緩衝液でｌ
：３の割合で希釈した。２８０ｎｍにおける溶液の光学
密度は希釈後は７．８１であった。
予備的グリシン沈降（２，２ｍｏＱ／ ＋２）５６．７
９のグリシン（１，８＋１ｏ１２／ Ｑ） を、すで
に０．４ｍｏＱ／Ｑグリシンを含む４２０ｍＱの希釈さ
れ低温殺菌された溶液に３５°Ｃで添加した。その溶液
は沈降（３０分）およびその後の撹拌時間（３０分）の
間に２５°Ｃまで温度低下した。
９のグリシン（１，８＋１ｏ１２／ Ｑ） を、すで
に０．４ｍｏＱ／Ｑグリシンを含む４２０ｍＱの希釈さ
れ低温殺菌された溶液に３５°Ｃで添加した。その溶液
は沈降（３０分）およびその後の撹拌時間（３０分）の
間に２５°Ｃまで温度低下した。
沈降物を３０００ Ｘ ９での遠心分離により除去し捨
てた。
てた。
８％ＮａＣ（２沈降
前記２．２Ｍグリシン上清（４２０ｍ１２）にその容量
の０．３８倍の、１１２あたりｌ 、 Ｆ３ｍｏＱのグ
リシンおよび３００ｇのＮａＣｌ２を含む沈降媒質（１
５９，６ｍ１２）を添加した。沈降中の温度は２０℃と
し、そして沈降および撹拌時間は全体で１時間とした。
の０．３８倍の、１１２あたりｌ 、 Ｆ３ｍｏＱのグ
リシンおよび３００ｇのＮａＣｌ２を含む沈降媒質（１
５９，６ｍ１２）を添加した。沈降中の温度は２０℃と
し、そして沈降および撹拌時間は全体で１時間とした。
フオン・ビルプラント因子Ｈ５を含む８％ＮａＣｌ２残
渣を５０００Ｘｙでの遠心分離により除去した。
渣を５０００Ｘｙでの遠心分離により除去した。
８％ＮａＣα残渣の溶解、透析、超遠心分離：８％Ｎａ
Ｃα残渣を次の組成を有するｐＨ６、９の溶解緩衝液３
３ｍ（ｌに溶解した： 溶解緩衝液： ０．０６ｍｏ（２／ Ｑ ＮａＣｌＯ，
０２ｍｏＱ／（２クエン酸三ナトリウム２ ％ グ
リシン ０．５％ ヒトアルブミン その溶液を２０°Ｃで２Ｘ１．５時間撹拌しながら１．
２Ｑの透析緩衝液に対して透析した：透析緩衝液： ０
．０６ｍｏｆ２／ Ｑ ＮａＣ（２０，０２ｒｎｏ（１
／ Ｑクエン酸三ナトリウム２ ％ グリシン （ｐＨ６，８〜６．９） 透析液（６９ｍ１２）をヒトアルブミンで０．５％の最
終濃度となるよう調節し、そして１５．ＯＯＯＸｇおよ
び２０°Ｃで６０時間清澄になるまで遠心分離しｔこ
。
Ｃα残渣を次の組成を有するｐＨ６、９の溶解緩衝液３
３ｍ（ｌに溶解した： 溶解緩衝液： ０．０６ｍｏ（２／ Ｑ ＮａＣｌＯ，
０２ｍｏＱ／（２クエン酸三ナトリウム２ ％ グ
リシン ０．５％ ヒトアルブミン その溶液を２０°Ｃで２Ｘ１．５時間撹拌しながら１．
２Ｑの透析緩衝液に対して透析した：透析緩衝液： ０
．０６ｍｏｆ２／ Ｑ ＮａＣ（２０，０２ｒｎｏ（１
／ Ｑクエン酸三ナトリウム２ ％ グリシン （ｐＨ６，８〜６．９） 透析液（６９ｍ１２）をヒトアルブミンで０．５％の最
終濃度となるよう調節し、そして１５．ＯＯＯＸｇおよ
び２０°Ｃで６０時間清澄になるまで遠心分離しｔこ
。
濾過による滅菌のために、超遠心分離した溶液を溶解緩
衝液を用いてｌ ＬＯｍ（ｌとした。
衝液を用いてｌ ＬＯｍ（ｌとした。
濾過による滅菌、濃度調整、包装および凍結乾燥：
フオン・ビルプラント因子ＨＳ濃縮物の超遠心分離溶液
（ｌｌｏｍＱ）を３０−３５°Ｃに加熱し、次いで細孔
幅０．４５μｍおよび０．２μｍのプレートフィルター
を通して濾過することにより滅菌した。その溶液は１６
０Ｕ／ｍｆｆ Ｆ■： ＣｏＦ活性を含んでいた。
（ｌｌｏｍＱ）を３０−３５°Ｃに加熱し、次いで細孔
幅０．４５μｍおよび０．２μｍのプレートフィルター
を通して濾過することにより滅菌した。その溶液は１６
０Ｕ／ｍｆｆ Ｆ■： ＣｏＦ活性を含んでいた。
実施例 ２
実施例１のバラグラフ６と同様にして６％ＮａＣ（２沈
降物を得、そして更にＡｅｒｏｓ ｉ ｌで処理すルコ
とによりフオン・ビルプラント因子を精製しＩ；。この
ために沈降物をまず６０ｍＱの蒸留水に溶解し、２８０
ｎｍにおける光学密度（ＯＤ）を測定し、そして次にそ
の溶液をＯＤが１０である２００ｒｎＱ、まで希釈した
。湿った（ｍｏｉｓｔ） Ａｅｒｏｓｉｌ ２００をこ
の溶液に添加しく乾燥物質基準で５ ｍｇ／ ｍ（＋）
、そしてその懸濁液を２０℃で３０分間撹拌した。次
に、フオン・ビルプラント因子随伴タンパク質で負荷さ
れＩ；そのＡｅｒｏｓｉｌを遠心分離により除去し、そ
してその上清を実施例１に詳記されているようにして最
終生成物まで後処理した。この生成物は２〜４倍高い比
活性を有しておりしかも高収率は変わらなかった。
降物を得、そして更にＡｅｒｏｓ ｉ ｌで処理すルコ
とによりフオン・ビルプラント因子を精製しＩ；。この
ために沈降物をまず６０ｍＱの蒸留水に溶解し、２８０
ｎｍにおける光学密度（ＯＤ）を測定し、そして次にそ
の溶液をＯＤが１０である２００ｒｎＱ、まで希釈した
。湿った（ｍｏｉｓｔ） Ａｅｒｏｓｉｌ ２００をこ
の溶液に添加しく乾燥物質基準で５ ｍｇ／ ｍ（＋）
、そしてその懸濁液を２０℃で３０分間撹拌した。次
に、フオン・ビルプラント因子随伴タンパク質で負荷さ
れＩ；そのＡｅｒｏｓｉｌを遠心分離により除去し、そ
してその上清を実施例１に詳記されているようにして最
終生成物まで後処理した。この生成物は２〜４倍高い比
活性を有しておりしかも高収率は変わらなかった。
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
シャフト 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）アミノ酸を含み５〜３０％ｗ／ｗの炭水化物濃度を
有するｐＨ５．５〜６．５の緩衝液中にＦVIII：Ｃとの
複合体としてフオン・ビルプラント因子（ｖＷＦ）を含
む溶液をＦVIII：Ｃが結合する陰イオン交換体で処理し
、そしてフオン・ビルプラント因子濃縮物を該溶液から
取得することより成る低温殺菌されたフオン・ビルプラ
ント因子濃縮物の調製方法。 ２）血漿またはそれより得られる画分、好ましくは寒冷
沈降物またはコーン画分 I 、または細胞培養の上清ま
たは抽出液、をＦVIII：Ｃとの複合体としてフオン・ビ
ルプラント因子を含む溶液として用いる請求項１記載の
方法。 ３）フオン・ビルプラント因子を含む溶液が低温殺菌さ
れる請求項１記載の方法。 ４）フオン・ビルプラント因子の溶液が低温殺菌され、
そして好ましくは１０〜６０％ｗ／ｖの濃度でスクロー
スを、好ましくは０．５〜３．０ｍｏｌ／ｌの濃度でグ
リシンをそして好ましくは１〜２０ｍｍｏｌ／ｌの濃度
でカルシウム塩を添加することにより、低温殺菌中に熱
による失活から保護され、そして酸に敏感なタンパク質
、特にフイブリノゲンおよびフイブロネクチン、の沈殿
がかかる添加剤によって同時に防止される請求項１記載
の方法。 ５）低温殺菌の前にまたは後で生成したフオン・ビルプ
ラント因子沈殿を溶解しそして ＾ＲＡｅｒｏｓｉｌで処理する請求項１〜４のいずれか
に記載の方法。 ６）イオン交換体による処理の後、その溶液からフイブ
リノゲンを０．５〜３ｍｏｌ／ｌ、好ましくは２．７ｍ
ｏｌ／ｌの濃度でグリシンを添加することにより沈殿さ
せ、そしてその上清から２〜１５％（ｗ／ｖ）、好まし
くは６％（ｗ／ｖ）、のＮａＣｌ濃度を用いてｖＷＦを
沈殿させる請求項１記載の方法。 ７）低温殺菌され精製されたｖＷＦを、クエン酸塩を加
えた（０．０２ｍｏｌ／ｌ）Ｎａｃｌ（０．０６ｍｏｌ
／ｌ）中のグリシン（２％ｗ／ｖ）、アルブミン（０．
５％）を添加してろ過滅菌し凍結乾燥する請求項１記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3904354.1 | 1989-02-14 | ||
| DE3904354A DE3904354A1 (de) | 1989-02-14 | 1989-02-14 | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02264799A true JPH02264799A (ja) | 1990-10-29 |
| JP2930243B2 JP2930243B2 (ja) | 1999-08-03 |
Family
ID=6374025
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2029777A Expired - Fee Related JP2930243B2 (ja) | 1989-02-14 | 1990-02-13 | 低温殺菌され精製されたフオン・ビルブラント因子濃縮物およびその調製方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6239261B1 (ja) |
| EP (1) | EP0383234B1 (ja) |
| JP (1) | JP2930243B2 (ja) |
| KR (1) | KR0149999B1 (ja) |
| AT (1) | ATE114669T1 (ja) |
| AU (1) | AU638969B2 (ja) |
| CA (1) | CA2009946C (ja) |
| DE (2) | DE3904354A1 (ja) |
| DK (1) | DK0383234T3 (ja) |
| ES (1) | ES2066020T3 (ja) |
| IE (1) | IE900511L (ja) |
| PT (1) | PT93128B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016141648A (ja) * | 2015-02-02 | 2016-08-08 | 学校法人北里研究所 | タンパク質分離方法、タンパク質分析方法、及びタンパク質分離キット |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| AT406867B (de) | 1997-02-27 | 2000-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur gewinnung von hochreinem vwf oder faktor viii/vwf-komplex |
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| PT2193809E (pt) | 1999-02-22 | 2015-08-24 | Baxter Int | Formulações de fator viii livres de albumina |
| DE10022092A1 (de) * | 2000-05-08 | 2001-11-15 | Aventis Behring Gmbh | Stabilisiertes Protein-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
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| DE10246125A1 (de) * | 2002-10-01 | 2004-04-15 | Aventis Behring Gmbh | Konzentrat eines Faktor VIII:C-haltigen von-Willebrand-Faktors und das dazu gehörige Verfahren |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| EP1720519A1 (en) * | 2004-03-04 | 2006-11-15 | Wyeth | Lyophilization method to improve excipient crystallization |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
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| US7566701B2 (en) * | 2004-09-07 | 2009-07-28 | Archemix Corp. | Aptamers to von Willebrand Factor and their use as thrombotic disease therapeutics |
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