JPH0227360B2 - Shinkikoseibutsushitsu - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は一般式 （式中R₁およびR₄はメチル基又は水素原子を、
R₂は水酸基又は水素原子を、またR₃はアミノ基
又は水酸基を意味する。但し、R₄がメチル基の
ときはR₂は水酸基であり且つR₁は水素原子を意
味し、またR₄が水素原子のときはR₂は水素原子
を意味する。）で示されるアミノグリコシド化合
物またはこれの酸付加塩に関する。 上記化合物（₁）はカナマイシンＡまたはカ
ナマイシンＢにおいて3″位のアミノ基がメチル化
され且つ3′、4′位が共にデオキシ化されているか
又は、3″位のアミノ基がＮ−メチル化され且つ
4″位がメチル化されている点に化学構造上の特徴
を有する化合物である。 本発明によつて提供される化合物（₁）はす
ぐれた抗菌活性を示し、抗菌剤として有望であ
る。また化合物（₁）はこれを原料として各種
の誘導体を製造することができる。そのような誘
導体としては１位のアミノ基をＬ（−）−γ−アミ
ノ−α−ヒドロキシ酪酸により化学的合成手段に
よりアシル化した化合物を挙げることができる。
又他の有意な抗菌活性を有する誘導体として微生
物変換による方法で製造される種々の化合物を挙
げることができる。そのような化合物としては化
合物（₁）をミクロモノスポラ属に属するゲン
タミン生産菌株およびシソミシン生産菌株又はそ
れらの変異株と接触させることにより得られるも
のであつて、例えば １ 3′，4′−ジデオキシ−3″−Ｎ−メチル−4″−
Ｃ−メチル−6′−Ｎ−メチルカナマイシンＢあ
るいはその4″のエピマー［−B₁］ ２ 3′，4′−ジデオキシ−3″−Ｎ−メチル−4″−
Ｃ−メチルカナマイシンＢ あるいはその4″のエピマー［−B₂］ ３ 3′，4′−ジデオキシ−3″−Ｎ−メチル−4″−
Ｃ−メチルカナマイシンＡあるいはその4″のエ
ピマー［−A₂］ ４ 4′，5′−ジデヒドロ−3′，4′−ジデオキシ−
3″−Ｎ−メチル−4″−Ｃ−メチルカナマイシン
Ａあるいはその4″のエピマー［−SK−A₁］ ５ 4′，5′−ジデヒドロ−3′，4′−ジデオキシ−
3″−Ｎ−メチル−4″−Ｃ−メチルカナマイシン
Ｂあるいはその4″のエピマー［−SK−B₁］ ６ 4′，5′−ジデヒドロ−3′，4′−ジデオキシ−
3″−Ｎ−メチルカナマイシンＢ［−SK−B₂］ を挙げることが出来る。これら誘導体は本発明者
らの先願に係る特願昭53−3188および特願昭53−
147396に記載されている。 つぎに化合物（₁）の抗菌活性をカナマイシ
ンＡ（以下KM−Ａと略記する）およびカナマイ
シンＢ（以下KM−Ｂと略記する）と対比して表
示すると次の通りである。

【表】 上表から明らかなように、化合物（₁）は
種々のグラム陽性細菌及びグラム陰性細菌に対
し、広範囲でかつ強力な抗菌活性を有し、医薬品
として有用である。 本発明によれば、化合物（₁）は、KM−Ａ
またはKM−Ｂをミクロモノスポラ属に属するゲ
ンタミシン生産菌株またはその変異株と接触させ
ることによつて製造される。 この製造法で使用される菌株はKM−Ａ及び
KM−Ｂの3′位、4′位のデオキシ化と4′位のＣ−
メチル化と6′位のＮ−メチル化のそれぞれを場合
によつては行い、3″位をＮ−メチル化しうるもの
であれば特に制限はない。そのような菌株として
はミクロモノスポラ エキノスポラNRRL・
2985（IFO−13149）、ミクロモノスポラ プルプ
レアNRRL・2953（IFO−13150）など公知の菌株
のほか、ミクロモノスポラ属の新菌株であるミク
ロモノスポラ sp.K−6993株を挙げることが出
来る。このミクロモノスポラ sp.K−6993株
は：本発明者らが沖縄県石垣島の土壌よりあらた
に分離した菌株で、ゲンタミシンを生産すること
が確認されている。 また、変異株はミクロモノスポラ属に属するゲ
ンタミシン生産菌株を、例えば紫外線照射、コバ
ルト60照射、Ｘ線照射のほか、ニトロソ化合物、
アクリジン色素化合物、核酸塩基類似物質等の変
異誘発剤を用いる通常の人工変異手段で得られる
ものである。好適な変異株としては、ゲンタミシ
ン生産能が無いかもしくは極端に生産能が低下し
て、かつ、さきに述べたKM−ＡおよびKM−Ｂ
をデオキシ化、メチル化出来る性質をもつもので
ある。それら変異株の代表例は本発明者らがあら
たに取得した、ミクロモノスポラ sp.K−6993
−Ｙ−41株およびミクロモノスポラ エキノスポ
ラNRRL・2985−Ｎ−６株を挙げることができ
る。 つぎに、ミクロモノスポラ sp.K−6993（以下
Ｋ−6993と略記する）とその変異株であるミクロ
モノスポラ sp.K−6993−Ｙ−41（以下Ｙ−41と
略記する）およびミクロモノスポラ エキノスポ
ラNRRL 2985−Ｎ−６株（以下Ｎ−６と略記す
る）の３株についてその菌学的性質を記載する。 なお、これらの菌株は、それぞれ微工研寄託受
理番号4304号、同4305号および同4303号としてい
ずれも工業技術院微生物工業技術研究所に寄託さ
れている。又これらの菌株はアメリカンタイプカ
ルチユアコレクシヨンにそれぞれATCC第31348
号、第31349号および第31350号として寄託されて
いる。 形態的性質 上記３株の形態的特徴は比較的似ている。３
株共、真性気中菌糸は作らないが、直径0.5〜
1.0μで分枝した基生菌糸を形成する。 胞子は基生菌糸から分枝した胞子柄の先端に
１ケのみ着生する。胞子の形は長円型か卵型で
ある。３株共、ツアペツク寒天、酵母エキス・
麦芽エキス寒天培地でよく発育し、卵アルブミ
ン寒天上では紫系の色を示す。Ｋ−6993及びＮ
−６株はミクロモノスポラエキノスポラ
NRRL、2985（IFO−13149）と同様の形態的特
徴を示した。 Ｙ−41株は前記２株とくらべ、胞子の着生が
よくなく、発育の色調は全体的にやや薄い。

【表】

【表】 炭素源の資化性 プリドハム・ゴツトリープ（Pridham−
Gottlieb）の培地を基礎培地として、各々の炭
素源を1.0％加えたもので、資化性を検し、そ
の結果を第２表に示す。

【表】

【表】 生理学的性質

【表】 第３表中ミルク、繊維素については、37℃で
１ケ月培養したのちの結果を示し、ゼラチンの
液化、硝酸還元、チロシナーゼの生成について
は29℃、２週間後の結果を示した。 Ｋ−6993株は真性気中菌糸を形成せず、基生
菌糸に単一の胞子を着生することから、ミクロ
モノスポラ属に関する菌株である。 すでに報告されている、ミクロモノスポラ属で
ゲンタミシンを生産する菌株としてはつぎのもの
がある。ミクロモノスポラ プルプレア
NRRL・2953（Micromonospora purpurea）、ミ
クロモノスポラ エキノスポラ バリエタス エ
キノスポラNRRL・2985（Micromonospora
echinospora var.echinospora）、ミクロモノスポ
ラ エキノスポラ バリエタス フエルギニア
NRRL・2995（Micromonospora echinospora
var.ferruginea）、ミクロモノスポラ エキノス
ポラ バリエタス パリダNRRL・2996
（Micromonospora echinospora var.pallida）
［以上、アンチミクロビアル・エージエント・ア
ンド・ケモテラピー1963年116貢〜124貢
（Antimicrobial Agents and Chemoth−
eraphy）及び特公昭44−21934に記載］ミクロモ
ノスポラ サガミエンシスMK−65
（Micromonospora sagamiensis）、ミクロモノ
スポラ サガミエンシス バリエタス ノンレデ
ユカンスMK−62（Micromonospora
sagamiensis var.nonreducans）、ミクロモノス
ポラ サガミエンシス バリエタス フラバMm
−628（Micromonospora sagamiensis var.
flava）［以上、特公昭50−39155及び特公昭51−
6755に記載］これら７株についての分類学上の特
徴をＫ−6993株と比較して、その相違点を第４表
に掲載する。 この結果ミクロモノスポラ エキノスポラに近
い新菌株と考えられる。

【表】

【表】 つぎに、KM−Ａ及びKM−Ｂを化合物（₁）
に変換するには、KM−Ａ及びKM−Ｂを含む培
地中で、通常上記菌株を用いて培養すればよい。
本発明の培養においては通常の抗生物質生産のた
めの培養法が用いられる。培養のための栄養源と
してはいろいろなものが用いられる。炭素源とし
ては、ブドウ糖、澱紛、可溶性澱紛、デキストリ
ン、シヨ糖、糖蜜などが単独域いは組合せて用い
られるし、菌の資化性にもよるが、炭化水素、ア
ルコール類、有機酸、動植物油なども用いうる。
窒素源としては無機塩、例えば塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウム等が、天然窒素源としては、
大豆粉、脱脂大豆粉、綿実粕、グルテンミール、
コーンミール、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー等が単
独域いは組合せて用いられる。その他に必要に応
じて、アミノ酸類、核酸類、ビタミン類、塩化ナ
トリウム、炭酸カルシウム、リン酸塩、硫酸マグ
ネシウム、塩化コバルトなどの無機塩類も加える
ことができる。 培養方法としては、液体培養法とくに深部撹拌
方式による方法が適している。培養温度は25℃か
ら45℃、好ましくは、28℃〜32℃で、PHは中性付
近がよい。また、培地の液性、添加物の量、温
度、撹拌数、通気量などの培養条件は用いる菌株
などに応じて適宜選択されなければならないこと
はいうまでもない。化合物（₁）を得るため、
原料のKM−Ａ及びKM−Ｂの添加時期は培養開
始時でもよいし、また、培養開始後菌が発育した
後でもよいが培養開始後72時間頃までに行うのが
望ましい。添加量は0.1ｇ〜10ｇ／程度で一度
に加えてもよいが分割して加えてもよい。また、
KM−ＡおよびKM−Ｂはそのままの形でもよい
が、塩例えば硫酸塩でもよい。KM−Ａまたは
KM−Ｂとの接触時間は原料添加後、化合物（
_１）が最も多く蓄積される時間が選択される。 これは、例えば大腸菌Ｋ−12 ML−1629を試
験菌として、培養液中の化合物の量をペーパーデ
イスク法を用いることによつて追跡できるが、通
常原料添加後３〜７日である。 化合物（₁）の採取法は、その培養液からの
単離、精製も含めて、通常アミノグリコシド抗生
物質の採取に利用される方法が用いられる。すな
わち、カチオンおよびアニオン交換樹脂による吸
脱着法、活性炭による吸脱着法、セルロースのカ
ラムクロマトグラフイーによる吸脱着法、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフイーなどの方法を適当
に組合せて用いることができる。具体的には、例
えば培養液のPHを２乃至３に調整したのち、濾過
して菌体を除き、PHを６〜７に中和しこの構造を
有する物質の吸着、溶離に適切なカルボン酸、ス
ルホン酸等の基を有する樹脂例えばカチオン交換
樹脂であるアンバーライト1RC−50（商品名）
（NH₄ ⁺型）、ダウエツクス50W（商品名）（NH₄ ⁺
型）に吸着させ、１規定のアンモニア水で溶出す
る。この溶出液を減圧濃縮して、アンバーライト
CG−50（商品名）（NH₄ ⁺型）でアンモニア水を
用いた濃度勾配によるイオン交換クロマトグラフ
イーを行う。これら化合物（₁）をさらに分離
精製するには、例えば、シリカゲルカラムクロマ
トグラフイーを用い、また必要があればアンバー
ライトCG−50（NH₄ ⁺型）およびダウエツクス１
×２（商品名）（OH^-型）等によるカラムクロマ
トグラフイーをくり返して行う事も出来る。 上記の方法で得られた化合物（₁）の代表的
なものをあげると次の通りである。 4″−Ｃ−メチル−3″−Ｎ−メチルカナマイシン
Ａあるいはその4″のエピマー［−A₃］ 3′，4′−ジデオキシ−3″−Ｎ−メチル−6′−Ｎ
−メチルカナマイシンＢ［−B₃］ 3′，4′−ジデオキシ−3″−Ｎ−メチル−カナマ
イシンＢ［−B₄］ 塩基性である本化合物（₁）は無機酸又は有
機酸例えば塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、ステアリ
ン酸、プロピオン酸、酒石酸、マレイン酸等と無
毒の塩を容易に形成する。 次に実施例により本発明の製造法をさらに説明
する。 実施例 １ ミクロモノスポラ sp.K−6993−Ｙ−41株に
よる目的化合物［−A₃］の製造 デキストリン５％、脱脂大豆エスサンミート特
級（商品名）3.5％、炭酸カルシウム0.7％を含む
液体培地（PH7.5）100mlを500mlのフラスコに分
注し、滅菌する。そのフラスコにベネツト斜面寒
天培地に30℃で２週間培養して良く生育させたミ
クロモノスポラ sp.K−6993−Ｙ−41株を一白
金耳接種し29℃で48〜72時間振盪して種母培養液
を得た。 別に500mlフラスコに100mlの本培養培地を調製
し、それに上記種母培養液１mlを植菌する。この
本培養培地の組成は、デキストリン５％、脱脂大
豆粉エスサンミート特級3.5％、炭酸カルシウム
0.7％、塩化コバルト0.000025％（PH7.5）であり、
オートクレーブで120℃20分間滅菌して使用する。
植菌後24時間目に別に除菌したKM−Ａを培地１
ml当り、1000mcg（力価）添加した。添加後120時
間29℃で振盪培養を行つて得られたフラスコ600
本分の培養液60を４規定の塩酸でPH2.0に調整
したのちに菌体を濾別した。濾液を４規定の水酸
化ナトリウムでPH7.0に再調整し、アンバーライ
トIRC−50（NH₄ ⁺型）４を充填したカラムを通
過させ目的化合物［−A₃］を吸着させた。樹
脂を十分に水洗して１規定のアンモニア水12で
溶出し、溶出液を減圧濃縮後乾燥して粗溶出物を
得た。この粗溶出物をアンバーライトCG−50
（NH₄ ⁺型）1.6を充填したカラムに吸着させ、
樹脂を水洗したのち、水７と0.7規定のアンモ
ニア水７とを用いた濃度勾配溶出操作を行い、
各フラクシヨン（各15ml）を大腸菌Ｋ−12を試験
菌としたペーパーデイスク法及びシリカゲル薄層
クロマトグラフイー（メルク社製、キーゼルゲル
Kieselgel 60F₂₅₄（商品名）厚さ0.25mm、展開溶
媒（第５表のＡ）で２時間展開後ニンヒドリン発
色Rf値0.11）により検出する。目的化合物［−
A₃］区分は添加したＫ−Ａと共に３−Ｎ−メ
チル−KM−Ａに先行して溶出されてくる。この
溶出液を濃縮乾固して得た［−A₃］の粗区分
をシリカゲルカラム［ワコーゲルＣ−200（商品
名）］20mm×1200mmに付し、展開溶媒（第５表の
Ａ）で溶出分画し、上記と同様にシリカゲル薄層
クロマトグラフイーで検出し、［−A₃］の含ま
れる区分を集め、濃縮乾固して［−A₃］の粗
区分２ｇを得た。この粗区分にはまだKM−Ａも
含まれているのでこれを除くために再びシリカゲ
ルカラム（ワコーゲルＣ−200）20mm×1000mmに
付し、上記シリカゲルカラムクロマトグラフイー
と同様の展開溶媒で溶出分画して、上記シリカゲ
ル薄層クロマトグラフイーで検出する。溶出して
きた〔Ｉ−A₃〕区分を集め減圧濃縮後乾燥して
〔Ｉ−A₃］の白色粗粉末を462mg得た。この粗粉
末をアンバーライトCG−50（NH₄ ⁺型）20mm×
500mmカラムに吸着させ水１と0.7規定アンモニ
ア水１とで濃度勾配溶出操作を行い、各フラク
シヨン（各15ml）を上記薄層クロマトグラフイー
により検出した。この〔Ｉ−A₃〕溶出区分を濃
縮乾固して388mgの粗粉末を得た。さらに精製す
るためにこの粗粉末300mgをダウエツクス１×２
（OH^-型）８mm×300mmのカラムにチヤージし水
で溶出する。溶出されたきた［Ｉ−A₃］区分を
上記シリカゲル薄層クロマトグラフイーで検出し
て集め、これを凍結乾燥して249mgの純粋な目的
化合物［Ｉ−A₃］の白色粉末を得た。 この［Ｉ−A₃］遊離塩基（凍結乾燥品）はつ
ぎの理化学的性質を示す。 塩基性の白色粉末（80℃で18時間真空乾燥） 溶解性：水に極めて良く溶ける。メタノール
とエタノールには溶けにくく、アセトン、クロ
ロホルム、ベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブチ
ル、エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有機溶媒に
は不溶である。 元素分析値（C₂₀H₄₀N₄O₁₁・H₂Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） 45.28 7.98 10.56 実験値（％） 45.33 7.93 10.39 融点：168〜170℃ 旋光度：〔α〕²⁵ _D＋163.6゜（Ｃ＝0.5％、in H₂O
） 紫外線吸収スペクトル：末端吸収 赤外線吸収スペクトル（KBr）：第１図吸収
極大（cm^-1） 1045、1145、1360、1450、1595、1635、2910、
3375 NMRスペクトル（重水中）：特徴的ピーク
1.38ppm……３級4″−Ｃ−メチル、2.72ppm…
…3″−Ｎ−メチル、5.13ppm……1″−アノメリ
ツクプロトン、5.28ppm……1′−アノメリツク
プロトン マススペクトル：主なイオンピーク（ｍ／
ｅ） 110、125、126、128、130、145、146、162、
163、174、189、190、191、192、205、233、
245、246、264、275、306、334、352、362、
388、446、513（Ｍ＋１） 薄層クロマトグラフイーによるRf値：第５
表（末尾） 以上の理化学的性質特にマススペクトルに於け
る典型的なフラグメントイオンピークおよび
MMRの結果ならびにKM−Ａから誘導されるこ
とに基いて次式で示される4″−Ｃ−メチル−3″−
Ｎ−メチルカナマイシンＡあるいはその4″のエピ
マーであると認められる。 実施例 ２ ミクロモノスポラsp.K−6993−Ｙ−41株によ
る目的化合物〔Ｉ−B₃〕の製造 デキストリン５％、脱脂大豆粉エスサンミート
特級3.5％、炭素カルシウム0.7％を含む液体培地
（PH7.5）100mlを500mlフラスコに分注し、滅菌す
る。そのフラスコにベネツト斜面寒天培地に30℃
で２週間培養して良く生育させたミクロモノスポ
ラsp.K−6993−Ｙ−41株を−白金耳接種し、29
℃で48〜72時間振盪して種母培養液を得た。 別に500mlフラスコに100mlの本培養培地を調製
し、それに上記種母培養液１mlを植菌する。本培
養培地の組成は、デキストリン５％、脱脂大豆粉
エスサンミート特級3.5％、炭素カルシウム0.7
％、塩化コバルト0.000025％（PH7.5）であり、
120℃20分間滅菌して使用する。植菌後24時間目
に別に除菌したKM−Ｂを培地１ml当り300mcg
（力価）添加した。添加後120時間29℃で振盪培養
を行つて110の培養液を得た。この培養液を４
規定塩酸でPH2.0に調整し菌体を濾別したのちそ
の濾液を４規定水酸化ナトリウムでPH7.0に戻し
アンバーライトIRC−50（NH⁺ ₄型）７のカラム
に通し、水洗後１規定のアンモニア水21で溶出
し減圧濃縮してアメ状の粗溶出物を得た。この粗
溶出物を４等分してアンバーライトCG−50
（NH₄型）900mlを充填したカラム４本にそれぞ
れ吸着させ、樹脂をよく水洗した後、各カラムに
ついて水3.5と0.8規定アンモニア水3.5とを用
いた濃度勾配分画溶出操作を行い、各フラクシヨ
ン（各15ml）を実施例１と同様にシリカゲル薄層
クロマトグラフイー（Rf値0.26）で検出して、そ
れぞれのカラムから〔−B₄〕に先行して溶出
されてくる〔−B₃〕区分を集め濃縮乾固して
520mgの〔−B₃〕の粗粉末を得た。この粗粉末
を13mlのメタノールに溶解し不溶物を濾別した後
に約３mlまで濃縮した。この濃縮液に0.1規定の
硫酸のメタノール溶液を徐々に加えPH4.0に調整
すると白色沈澱を生じた。更に確実に沈澱させる
ためにアセトンを加えた後にこの白色沈澱を濾取
し真空乾燥して749mgの〔−B₃〕の硫酸塩を得
た。この硫酸塩をダウエツクス−１×２（OH^-
型）10mm×500mmカラムにチヤージし水で溶出す
る。溶出されてきた〔−B₃〕区分を上記と同
様にシリカゲル薄層クロマトグラフイーで確認
し、この溶出区分を集め濃縮乾固して〔−B₃〕
の白色粉末を284mg得た。さらに純粋にするため
にこの白金粉末をアンバーライトCG−50（NH⁺ ₄
型）13mm×250mmカラムに吸着させ、水200mlと
0.8規定アンモニア水200mlとで濃度勾配溶出操作
を行い、各フラクシヨン（各３ml）を上記シリカ
ゲル薄層クロマトグラフイーで確認し〔−B₃〕
区分を集め凍結乾燥して純粋な〔−B₃〕の白
色粉末を98mg得た。 この〔−B₃〕遊離塩基（凍結乾燥品）は次
の理化学的性質を示す。 塩基性の白色粉末（80℃18時間真空乾燥） 溶解性：水に極めて良く溶け、メタノールに
も溶ける。 エタノールとアセトンにはやや溶けにくく、
クロロホルム、ベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブ
チル、エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有機溶剤
には不溶である。 元素分析値（C₂₀H₄₁N₅O₈・0.5H₂Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） 49.17 8.66 14.33 実験値（％） 48.95 8.59 14.35 融点：112〜116℃ 旋光度：〔α〕²⁵ _D＋134.8゜（Ｃ＝１％、inH₂O） 紫外線吸収スペクトル：末端吸収 赤外線吸収スペクトル（KBr）：第２図吸収
極大（cm^-1） 1035、1110、1140、1335、1375、1475、1565、
1630、2920、3400 NMRスペクトル（重水中）：特徴的ピーク
2.51ppm……3″−Ｎ−メチル、2.60ppm……
6′−Ｎ−メチル、5.07PPm……1″−アノメリツ
クプロトン、5.38ppm……1′−アノメリツクプ
ロトン マススペクトル：主なイオンピーク（ｍ／
ｅ） 110、112、114、125、126、130、134、142、
143、144、145、158、163、176、191、272、
305、320、338、366、449、479、480（Ｍ＋１） 薄層クロマトグラフイーによるRf値：第５
表 以上の理化学的性質特にマススペクトルに於け
る典型的なフラグメントイオンピークおよび
NMRの結果ならびにKM−Ｂから誘導されるこ
とに基いて次式で示される3′，4′−ジデオキシ−
3″−Ｎ−メチル−6′−Ｎ−メチルカナマイシンＢ
であると認められる。 実施例 ３ ミクロモノスポラsp.K−6993−Ｙ−41株によ
る目的化合物〔−B₄〕の製造 実施例２の第１回目のアンバーライトCG−50
（NH⁺ ₄型）カラムを用いたアンモニア水の濃度勾
配溶出において〔−B₃〕に続いて溶出されて
きた〔−B₄〕区分（シリカゲル薄層クロマト
グラフイー、展開溶媒第５表のＡ、Rf値0.19で検
出）を集め、濃縮して85mgの〔−B₄〕の粗粉
末を得た。この粗粉末を0.5mlの水に溶解してシ
リカゲルプレート（メルク社製、キーゼルゲル
Kieselgel 60PF₂₅₄（商品名）厚さ0.3mm、20cm×
20cm、150℃活性化）３枚に帯状にチヤージして
展開溶媒（第５表のＡ）で展開した。展開後ニン
ヒドリン発色で目的化合物の位置を確認してか
ら、その位置をシリカゲルごとかき取り、同じ展
開溶媒でシリカゲルから溶出した。この溶出液を
減圧濃縮乾固して56mgの粗粉末を得た。この粗粉
末を更に精製するために20mlのメタノールに溶解
し0.1規定の硫酸のメタノール溶液でPH4.0に調整
し、アセトンを加えて生じた白色沈澱を濾取し真
空乾燥して95mgの〔−B₄〕の硫酸塩を得た。
この硫酸塩をダウエツクス１×２（OH^-型）８mm
×300mmカラムにチヤージし水で溶出して、溶出
されてきた〔−B₄〕区分を上記シリカゲル薄
層クロマトグラフイーで確認して集め濃縮した。
この濃縮液をアンバーライトCG−50（NH⁺ ₄型）
８mm×180mmカラムに吸着させ水200mlと0.8規定
のアンモニア水200mlとで濃度勾配溶出操作を行
い、各フラクシヨン（各2.5ml）を上記シリカゲ
ル薄層クロマトグラフイーで確認して〔−B₄〕
区分を集め凍結乾燥して純粋な〔−B₄〕の白
色粉末を52mg得た。 この〔−B₄〕遊離塩基（凍結乾燥品）は次
の理化学的性質を示す。 塩基性の白色粉末（80℃18時間真空乾燥） 溶解性：水に極めて良く溶け、メタノールに
も溶ける。エタノールとアセトンにはやや溶け
にくく、クロロホルム、ベンゼン酢酸エチル、
酢酸ブチル、エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有
機溶剤には不溶である。 元素分析値（C₁₉H₃₉N₅O₈・0.5H₂Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） 48.09 8.50 14.76 実験値（％） 48.10 8.49 14.37 融点：204〜208℃（褐変） 旋光度：〔α〕²⁵ _D＋131.1゜（Ｃ＝１％、in H₂O） 紫外線吸収スペクトル：末端吸収 赤外線吸収スペクトル（KBr）：第３図吸収
極大（cm^-1） 1035、1110、1140、1335、1380、1480、1565、
1630、2920、3400 NMRスペクトル（重水中）：2.48ppm……
3″−Ｎ−メチル、5.06ppm……1″アノメリツク
プロトン 5.25ppm……1′−アノメリツクプロ
トン マススペクトル：主なイオンピーク（ｍ／
ｅ） 112、126、130、145、158、163、176、191、
242、246、258、273、302、305、320、338、
366、429、438、465、466、（Ｍ＋１） 薄層クロマトグラフイーによるRf値：第５
表 以上の理化学的性質特にマススペクトルに於け
る典型的なフラグメントイオンピークおよび
NMRの結果およびにKM−Ｂから誘導されるこ
とに基いて次式で示される3′，4′−ジデオキシ−
3″−Ｎ−メチルカナマイシンＢであると認められ
る。

【表】 【図面の簡単な説明】

第１図から第３図はそれぞれ本発明の目的化合
物〔−A₃〕、〔−B₃〕および〔−B₄〕の赤
外線吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中R₁およびR₄はメチル基又は水素原子を、
   R₂は水酸基又は水素原子を、R₃はアミノ基又は
   水酸基を意味する。但し、R₄がメチル基のとき
   はR₂は水酸基であり且つR₁は水素原子を意味し、
   またR₄が水素原子のときはR₂は水素原子を意味
   する。） で示されるアミノグリコシド化合物またはこれの
   酸付加塩。 ２ 式 で示される特許請求の範囲第１項記載のアミノグ
   リコシド化合物またはこれの酸付加塩。 ３ 式 で示される特許請求の範囲第１項記載のアミノグ
   リコシド化合物またはこれの酸付加塩。 ４ 式 で示される特許請求の範囲第１項記載のアミノグ
   リコシド化合物又はこれの酸付加塩。