JPH0228196A - Ａ／１６６８６抗生物質のアグリコン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、次の構造式Ｉ Ｈ 式中、Ｒは−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ２−
ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ
ｚ−ＣＨ（ＣＨｓ）！、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ
Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨり　ｚおよび対応する
四水素化基である、 の化合物およびそれらの酸付加塩および任意の比率のそ
れらの混合物、それらの調製および抗生物質としてのそ
れらの使用に関する。

本発明は、要約すれば、抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ
Ｉ、Ａ２、Ａ３、Ａ’　　ｌ、Ａ’　　２、Ａ′３のア
グリコン、それらのそれぞれテトラヒドロ誘導体および
それらの混合物に関する。アグリコンは前述した因子の
選択的加水分解によって製造される。

これらの化合物は、抗菌活性、とくに広く拡散したグラ
ム陽性バクテリアに対する抗菌活性を有し、そしてとく
に創傷の感染およびアクネの処置に有用である。

前述の物質は、抗生物質Ａ／１６６８６と関係し、そし
て抗生物質Ａ／１６６８６因子ＡＩ、Ａ２、Ａ３、Ａ’
　　ｌ、Ａ’　　２、Ａ’　３と表示する化合物、それ
らの対応するテトラヒドロ誘導体およびそれらの混合物
の選択的加水分解処理によって製造される。

抗生物質Ａ／１６６８６は、米国特許第４，３０３．６
４６号中にグラム陽性バクテリアに対して活性な物質と
して、その製造およびそれを含有する製薬学的組成物と
一緒に記載されている。

次いで、３つの密接に関係する成分は、因子ＡＬ　Ａ２
およびＡ３と命名される抗生物質Ａ／１６６８６から単
離することができることが発見されｔ：。これらの物質
ならびにそれらの調製および使用は、米国特許第４，４
２７，６５６号に記載されている。因子Ａ２は主要量で
得られる成分であり、そして生物学的活性について最も
関連があるが、因子Ａ８よびＡ３は少量で得られる。

Ａ／１６６８６生成性培養物に適当な前駆体添加するこ
とによって抗生物質Ａ／１６６８６の因子Ａ２およびＡ
３の生成を選択的に増大する方法は、欧州特許出願第２
５９７８０号に記載されている。欧州特許出願筒８８１
１６９４７．８号は（特願昭６３−２８９０２８号）は
、抗生物質Ａ／１６６８６の因子Ａ″　１、Ａ’　　２
およびＡ’　３およびそれらの調製を記載している。欧
州特許出願筒８８１１９００１．１号（特願昭６３−３
２２２５８号）は、抗生物質Ａ／１６６８６因子ＡＩ、
Ａ２、Ａ３、Ａ’　　ｌ、Ａ’　２およびＡ″３および
それらの製造方法を記載している。

本発明の化合物は、また、それぞれ、Ａ／１６６８６因
子Ａｌアグリコン、Ａ／１６６８６因子Ａ２アグリコン
、Ａ／１６６８６因子Ａ３、Ａ／１６６８６四水素化さ
れたＡＩアグリコン（式１、Ｒ−−Ｃｏ　（ＣＨ２）＠
−ＣＨ５）　、Ａ／Ｉ　６６８６四水素化された因子Ａ
２アグリコン（式１、Ｒ＝　　Ｃｏ　（ＣＨｚ）　ｓＣ
Ｈ（ＣＨ３）　２）　、Ａ／　ｌ　６６８６四水素化さ
れた因子Ａ３アグリコン（Ｒ−−Ｃ○（ＣＨり、ｃＨ（
ＣＨ３）りとして識別される。

本発明の化合物は、抗生物質Ａ／１６６８６因子ＡＩ、
Ａ２、Ａ３、Ａ’　１．　Ａ’　２、Ａ’　３、それら
の２またはそれ以上の混合物、それらのそれぞれのテト
ラヒドロ誘導体およびそれらの２またはそれ以上の混合
物から選択される出発物質を選択的に加水分解すること
によって製造することができる。したがって、選択的加
水分解は、単一の因子またはそれらの２またはそれ以上
の混合物、例えば、米国特許第４．４２７．６５６号に
記載されているようにアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏ
ｐｌａｎｅｓ）種ＡＴＣＣ３３０７６Ｃ発酵培養物収集
所ＡＴＣＣに受託されそして、現在、１９８１年１月３
１日から、ブダペスト条約に従って、自由に入手可能で
ありかつ受は入れられている菌株である）について実施
することができる。

Ａ／１６６８６因子の混合物の他の例は、次の通りであ
る：欧州特許出願第２５９７８０号の方法から得られる
もの、ここで因子Ａ２および／またはＡ３の比は発酵過
程の間は選択的に増加する、および適当な条件下に前述
のアクチノプラネス（Ａｃｔ　１ｎｏｐｌａｎｅｓ）種
ＡＴＣＣ３３０７６によって、あるいは適当な条件下に
適当な期間の間、群Ａ因子またはそれらの混合物を同一
の菌株の菌糸体と接触させることによって、前述した欧
州特許出願筒８８１１６９４７．８号は（特頭昭６３−
２８９０２８号）に記載されている方法に従い、得るこ
とができる八およびＡ′の因子を含有する混合物。

四水素化された因子ＡＩ％Ａ２、Ａ３、Ａ’　　ｌ、Ａ
″　２、Ａ’　　３の混合物は、例えば、欧州特許出願
第８８１１９００１．１号（特願昭６３−３２２２５８
号）に記載されているように抗生物質Ａ／１６６８６複
合体を水素化することによって得ることができる。

前述したすべての場合において、出発物質は遊離塩基ま
たは酸付加塩、米国特許第４．３０３゜６４６号および
米国特許第４．４２７，６５６号および対応する欧州特
許出願第８８１１６９４７゜８号は（特願昭６３−２８
９０２８号）に記載されているものの形態であることが
できる。

出発物質が２またはそれ以上のＡ／１６６８６因子の混
合物から成るとき、選択的加水分解から得られる生成物
の混合物を本発明の式■の化合物に相当する純粋な成分
に分割することができる。

この明細書および特許請求の範囲において表現「選択的
加水分解」は、ペプチド、アミドおよびラクトンの結合
を包含するＡ／１６６８６抗生物質の基本構造の他の部
分に影響を及ぼさないで、Ａ／１６６８６分子の糖部分
と残部との間の半アセタール結合の開裂を可能とする、
制御した条件下に実施する加水分解を意味する。

したがって、本発明のそれ以上の選択的加水分解法は、
抗生物質Ａ／１６６８６因子ＡＩ、Ａ２、Ａ３、Ａ’　
　ｌＳＡ’　　２、Ａ’　　３、それらの２またはそれ
以上の混合物、それらのそれぞれのテトラヒドロ誘導体
およびそれらの２またはそれ以上の混合物から選択され
る出発物質を、 ａ）ヨウ化トリメチルシリルまたは塩化トリメチルシリ
ルとヨウ化ナトリウムの存在下に接触させ、次いで得ら
れたトリメチルシリル誘導体を温和な条件下に加水分解
するか、あるいはｂ）強酸と低級アルカノールまたは低
級アルカノールの混合物の存在下に無水条件下に接触さ
せる、 という事実によって特徴づけられる、式■の化合物を製
造する選択的加水分解法である。

上の節ａ）選択的に加水分解の手順は、Ｔ、モリタ（Ｍ
ｏｒｉｔａ）ら、ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイ
アティー、ケミカル・コミュニュケーションズ（Ｊ、　
Ｃ，Ｓ、、　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍ１！１．）、１９７８
、第８７４ページおよび同−論文中に引用された参考文
献に従い、Ａ／１６６８６抗生物質のグルコシドのアセ
タールを、対応するトリメチルシリルエーテルに転化す
ることを包含する。

トリメチルシリルエーテルの形成は、一般に、非プロト
ン性有機溶媒の存在下に、出発Ａ／１６６８６物質をモ
ル過剰量のヨウ化トリメチルシリルまたは塩化トリメチ
ルシリルと、例えば、出発物質の１ｇ当たり１〜３ｍ（
２の／１０ゲン化トリメチルシリルと接触させることに
よって実施する。

塩化トリメチルシリルを使用するとき、ヨウ化ナトリウ
ムを反応混合物に塩化トリメチルシリルの１モル当たり
０．０１〜１モルの範囲のヨウ化ナトリウムの比率で添
加する。非プロトン性有機溶媒は、一般に、塩素化低級
炭化水素（例えば、ジクロロメタン、四塩化炭素）、ジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドおよびアセ
トニトリルおよびそれらの混合物である。反応温度は、
通常、１０°０−１００°Ｃ１好ましい２０°Ｃ〜８０
°Ｃの範囲である。

当業者は理解できるように、反応時間は出発物質の種類
および純度およびこめ方法の特定の条件に依存して変化
することができる。一般に、反応は０．５〜５時間で完
結する。

いずれの場合においても、反応の過程は、この分野にお
いて知られているように、薄層クロマトグラフィーまた
はＨＰＬＣ技術によって監視することができる。例えば
、試料を間隔をおいて抜き出し、そしてアッセイして、
反応が完結するときを決定することができる。次いで、
反応を停止して、最終生成物と反応の塊との長時間の接
触のマイナスの結果を防止することができる。

次いで、トリメチルシリルエーテル結合は温和な条件下
に容易に加水分解される。表現「温和な条件」は、反応
条件が抗生物質の分子の他の部分に影響を及ぼさないで
、トリメチルシリルエーテル結合を開裂するために適当
でなくてはならないことを意味する。一般手順に従って
、トリメチルシリル誘導体を含存する反応溶液を水また
は低級アルカノールまたはそれらの混合物と、０℃〜室
温の温度において、ｐＨ値３〜５に保持し、ｐＨ値およ
び温度に依存して変化させた時間、通常０゜１〜２４時
間の間接触させる。

したがって、シリル化反応が完結したとき、反応混合物
を次いで過剰の水または低級アルカノールまたはそれら
の混合物中に、３〜５のｐＨ値を維持するために適当量
の温和な塩基の存在下に、注ぐ。次いで、式■の反応生
成物をこの混合物から回収し、そして既知の方法、例え
ば、蒸発、溶媒を使用する抽出、非溶媒の添加による沈
澱、カラムクロマトグラフィーなどに従い精製する。時
には、有機溶液を小さい体積に濃縮して、粗製加水分解
生成物を沈澱させる。

粗製加水分解生成物からの本発明の抗生物質の単離、そ
れらの分割および精製は、それ自体既知の方法、例えば
、溶媒を使用する抽出、非溶媒の添加または溶液のｐＨ
の変化による得られた溶液からの沈澱、分配クロマトグ
ラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン交換ク
ロマトグラフィ、親和クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ技
術などによって実施する。

選択的加水分解を上の調製手順ｂ）に従って実施すると
き、強酸は通常強鉱酸、例えば、塩酸または臭化水素酸
または強アリールまたはアルキルスルホン酸、例えば、
ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンス
ルホン酸、それらの水素化誘導体、例えば、トリフルオ
ロメタンスルホン酸などである。

強酸は、また、酸の形態の乾燥した強力チオン交換樹脂
であることができる。このタイプのゲルおよび巨大多孔
質の両者の乾燥した樹脂は、商業的に入手可能な樹脂、
例えば、Ｄｏｗｅｘ’ＤＲ−２０２０、ＤＲ−２０３０
、ＤＲ−２０９０またはＤｏｗｅ　ｘ”Ｍｌ　５−ＤＲ
％　Ｍｌ　８−ＤＲ％Ｍ３１−ＤＲおよびＭ３２−ＤＲ
である。必要に応じて、商業的に入手可能な乾燥した樹
脂は、さらに、無水メタノールを使用する反復洗浄によ
り、共沸蒸留により、あるいは減圧下の１００〜１１５
℃における加熱により、脱水することができる。

この反応は、通常、溶媒の存在下に実施し、そして溶媒
は有機極性溶媒、例えば、ジメチルホルムアミドまたは
ジメチルスルホキシドまたは、さらに過剰の同一の低級
アルカノール（すなわち、Ｃｒ　　Ｃａアルカノール）
またはそれらの混合物であることができる。酸は、通常
、１〜５％（Ｗ／Ｖ”）好ましくは２−３．５％（Ｗ／
ｖ）の大過剰の溶媒中に溶解する。

上の節ｂ）の方法の典型的な実施態様に従い、Ａ／１６
６８６出発物質を選択した溶媒中の酸の溶液（または懸
濁液）に過剰の低級アルカノール、好ましくはブタノー
ルの存在下に添加し、そしてこの混合物を、グリコシド
アセタール結合の開裂が完結するまで、１５〜８０°Ｃ
の温度に維持する。

また、この場合において、反応時間は出発物質のタイプ
および純度および特定の反応条件に依存して変化する。

反応の過程は、上の節ａ）に従う手順について示したよ
うに薄層クロマトグラフィーＴＬＣまたはＨＰＬＣ技術
により監視することができる。一般に、反応時間は０．
１−１ｏ時間の範囲であることができる。また、この場
合において、反応生成物は反応混合物から回収し、そし
て既知の方法、例えば、節ａ）に従う手順について上に
述べたものに従って精製する。

選択的加水分解を因子Ａｔ、Ａ２、Ａ３、Ａ′Ｌ　Ａ’
　　２、Ａ’　　３またはそれらのテトラヒドロ誘導体
の２またはそれ以上の混合物から成る基質について実施
し、そして単一のアグリコン誘導体を得ようとするとき
、加水分解生成物の分割および精製は、好ましくは、カ
ラムクロマトグラフィーまたは調製用ＨＰＬＣの方法に
より実施する。

調製用ＨＰＬＣの操作は、通常、Ａ／１６６８６抗生物
質因子の分割および精製に普通の条件下に実施する。前
記分割および精製の操作の実施例は、例えば、米国特許
第４，４２７，６５６号において見いだすことができ、
ここでＣ１８アルキルンラン化カラムおよび水性アンモ
ニウムホルメートおよびアセトニトリルの溶離混合物を
使用する。

調製用ＨＰＬＣの間、各注入から溶離された液体を分析
用ＨＰＬＣによって検査し、そして各Ａ／１６６８６因
子アグリコン中の分画を分割する。

上の化合物の各々が濃縮した分画を一緒にし、そして真
空下に濃縮乾固する。溶離された溶液の濃縮からの１種
または２種以上の固体生成物を、残留塩類の除去後、水
性鉱酸中に溶解し、そして得られる溶液を凍結乾燥して
、鉱酸の付加塩、例えば、二塩酸塩を形成してそれぞれ
の純粋な１種まｔ；は２種以上の生成物を生成する。上
の作業は、得られる生成物の純度が満足すべきないもの
であるとき、ｌまたは２以上の反復することができる。

カラムクロマトグラフィーの作業は、例えば、シラン化
シリカゲルで、水ニア七トニトリル混合物を溶媒として
使用し、そして希釈しＩ；塩酸ニアセトニトリル混合物
溶離剤として使用することによって実施することができ
る。必要に応じて、カラムクロマトグラフィー法によっ
て分離された生成物は調製用ＨＰＬＣによって精製する
。また、この場合において、最終アグリコン生成物を鉱
酸の付加塩の形態で、上に記載したのと同一の手順によ
って単離することが通常好ましい。必要に応じて、カラ
ムクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣがら得られる固体
の残留物は、巨大多孔質樹脂（例えば、ＸＡＤ−２）の
クロマトグラフィーおよび酸性溶液を使用する溶離によ
って脱塩することができる。

抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａｌ、Ａ２、Ａ３アグリフ
ンおよびそれらのテトラヒドロ誘導体を、酸／塩基滴定
、アミノ酸分析（定量および配列決定）、ＩＲ，紫外線
、ＮＭＲスペクトル測定および急速原子衝突スペクトル
測定（ＦＡＢ−ＭＳ）にかける。これらの分析試験から
得られるデータは割り当てた構造を確証する。

弐■において示すように、本発明の抗生物質は、慣用の
手順に従って酸付加塩を形成できる２つの塩基の結合を
有する。

式■の化合物の代表的および適当な酸付加塩は、有機酸
および無機酸の両者、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸
、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、
コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン
酸、７マル酸、パルミチン酸、コール酸、パモン酸、ム
チン酸、グルタミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グ
リコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリ
ン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホ
ン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸など
との標準の反応によって形成した塩類を包含する。

本発明の遊離アミノまたは非塩化合物の対応する付加塩
への転化およびその逆、すなわち、本発明の化合物の酸
付加塩の非塩への転化は、通常の技術の範囲内であり、
そして本発明によって包含される。

例えば、本発明の化合物は、水性溶媒中の非塩の形態を
水溶液中に溶解し、次いでわずかに過剰の選択した酸を
添加することによって、対応する酸付加塩に転化するこ
とができる。次いで、得られる溶液または懸濁液を凍結
乾燥して所望の塩を回収する。

最終塩が非塩の形態が可溶性である溶媒中に不溶性であ
る場合、化学量論量またはわずかに過剰の選択した酸の
添加後、非塩の形態の有機溶液からの濾過により回収す
る。

必要に応じて、非塩の形態は、水性溶媒中に溶解した対
応する酸の塩から、中和して非塩の形態を遊離させるこ
とによって、得ることができる。

中和後、脱塩が必要なとき、通常の脱塩手順を使用でき
る。

例えば、シラン化シリカゲル、非官能化ポリスチレンお
よび制御孔のポリデキストラン樹脂［セファデックス（
Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ２０］または活性炭のカラムク
ロマトグラフィーを便利に使用できる。不必要な塩類を
水溶液で溶離した後、所望の生成物を水および極性また
は非極性の有機溶媒の混合物、例えば、５０　：　５０
〜ｌＯＯ％のアセトニトリルの水／アセトニトリルの直
線の勾配または段階的勾配によって溶離する。

この分野において知られているように、製薬学的に許容
され得る酸または製薬学的に許容され得る酸以外の酸と
の塩の形成は、便利な精製技術として使用できる。形成
および単離後、上の式Ｉの抗生物質の塩の形態は、対応
する非塩または製薬学的に許容され得る塩に転化するこ
とができる。

Ａ／１６６８６抗生物質のアグリコンは、とくにグラム
陽性微生物に対して活性である。抗生物質Ａ／１６６８
６アグリコン因子Ａｌ、Ａ２、Ａ３の微生物の活性スペ
クトルを、次の表Ｉに報告する： 表 Ａ／１６６８６抗生物質アグリコ １膣 因子Ａ２ アグリコン ａ）接種１０　’ｃｆｕ／ｍα ｂ）３０％のウシ血清を添加した Ｃ）臨床分離物 ン （二塩酸塩）の生体外活性 Ｍ　　Ｉ　　Ｃ（ｍｃｇ／　ｍＱ　　）因子Ａ２　　　
　因子Ａ３ アグリコン　　　アグリコン ０．０．３２　　　　０．５ ０．２５　　　　　０．５ ０．０３２　　　　　０．００８ ０．０３２　　　　　０．０１６ ０．５１ ０．０６３　　　　　０．１２５ ０．１２５　　　　　０．２５ ０．１２５　　　　　０．５ ０．１２５　　　　　０．５ ０．１２５　　　　　０．２５ ０．１２５　　　　　０．５ ＾／１６６８６因子Ａ２ ■ ０．０６３ ０．０６３ Ｏ，１２５ ０，２５ ０，２５ ０，２５ ０，２５ ０，２５ 最小阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃ）を、ブロス（管）または寒
天の系統的２倍希釈法によって決定する。培地および増
殖条件ニアイソ〜センシテスト（Ｉｓｏ−３ｅｎｓｉｔ
ｅｓｔ）のブロス［オキソイド（Ｏｘｏ　ｉ　ｄ）］　
、ブドウ球菌属の種および糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ　　ｆａｅｃａｌｉｓ）について；トッ
ド−ヘイウィツト（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉ　ｔ　ｔ）のブ
ロス［デイ７コ（Ｄｉｒｃｏ）］、他の連鎖法菌属の種
について；ウィルキンスーチャルグレン（Ｗｉ　Ｉｋｉ
ｎｓ　−Ｃｈａｌｇｒｅｎ）寒天、Ｐ、ａｃｎｅｓにつ
いて［Ｔ、Ｄ、ウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）および
ＳチャルグレンＣｈａ１ｇｒｅｎ）：抗微生物剤および
化学療法（Ａｎｔ　１ｍ１ｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　　
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）、１Ｏ１９２６（１９７６）］
。特記しない限り、最終の接種物は約１０’コロニー形
成単位／ｍＱまたはスポット（ｓｐｏｔ）である。ＭＩ
Ｃは、３７°Ｃにおいて１８〜２４時間のインキュベー
ジコン後、可視の増殖示さない最低濃度として読む：嫌
気性生物について、インキュベーションは嫌気的雰囲気
（Ｎ２：　ｃｏ□：Ｎ２．８０：１０：１０）中で３７
°Ｃにおいて４８時間である。

同一実験におけるテトラヒドロ誘導体の活性は、上に報
告したアグリコンのそれと同一のレベルを有する。Ａ／
１６６８６アグリコン因子Ａ２は表皮ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｍｉｄｉｓ
）に対してすぐれた活性を示すので、それを関連する臨
床的に興味あるｌ系列の表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ｅｐｉｄｅｒｍｉｍｉｄｉｓ）の
臨床的分離物病原体に対して試験した（表ＩＩ）：表■ 選択したＳ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄａ
ｒｍｉｄｉｓ株（臨床分離物）に対するＡ／１６６８６
因子Ａ２アグリコン（二塩酸塩）の生体外活性５Ｌａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　
３５４　　０．５　　　　　０．５Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄａｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　３５７　　
１　　　　　　　１Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅ
ｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　３９３°　０．１２５１Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ
　Ｌ　４２０゜０．１２５ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄａｒｍｊｄｉ
ｓ　Ｌ　５８０”５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐ
ｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　５８６Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　６００”５ｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　
Ｌ　６１９”５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄ
ｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　８３８゜５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　８４８”５ｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ
　８７４゜５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅ
ｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　１０６５０．２５ ０．０３２ ０．１２５ ０．１２５ ０．０６３ ０．５ ０．０３２ ０．０３２ ａ）メチシリン耐性 抗生物質Ａ／１６６８６アグリコンは、また、化膿連鎖
球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｐｙｏｇｅｎｅ
ｓ）で感染したマウスにおいて活性である。代表的実験
において、５匹のマウス［チャールス・リバー（Ｃｈａ
ｒｌｅｓ　　Ｒｉｖｅｒ）］の群を、化膿連鎖球菌（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃ２
０３ＳＫＦ１３４００で腹腔内に感染させた。未処置動
物が４８時間以内に敗血症で死ぬように、接種を調節し
た。

感染直後、動物をＡ／１６６８６因子Ａ２アグリコンで
１回皮下的に処置する。第１０日に、ＥＤ、。

（ｍｇ／ｋｇ）についての値を、スパーマン（Ｓｐｅｒ
ｍａｎ）およびカーバー［フインネイ（Ｆ　ｉ　ｎｎｅ
ｙ）　、Ｄ、Ｊ、　、生物学的アッセイにおける統計学
方法（ＳｔａｔｓｔｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　
　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓａｙ）、ｐ、５２４　；
Ｃ，グリンフィン・アンド・カンパニー（Ｇｒｉｆｆｉ
ｎ　　ａｎｄＣｏ、）によって、各投与量において生存
する動物のバーセントシこ基づいて計算する。

Ａ／１６６８６因子Ａ２アグリコンが示すＥＤｓ。

は、０．１１ｍｇ／ｋｇ　（抗生物質Ａ／１６６８６因
子Ａ２についての０．１４に比較して）。

本発明の抗生物質は、主としてダラム陽性の広く拡散し
たバクテリアによる感染に対する薬物の調製に有用であ
る。とくに、本発明の化合物は皮膚および創傷の感染お
よびアクネの局所的処置に有用である。

薬物として調製するため、本発明の化合物は、異なるル
ートによって、遊離化合物の形態で、あるいは製薬学的
に許容されうる酸とのそれらの付加塩の形態で投与する
ことができる。医学的使用のため、本発明の化合物は、
経口的、局所的または非経口的投与に適当な、製薬学的
に許容されうる投与形態、例えば、錠剤、カプセル剤、
ロゼンジ、ゲルール（ｇｅｌｕｌｅ）、顆粒剤、散剤、
軟膏、ゲル、液状溶液、クリーム、注射用溶液、懸濁液
などの中に混入する。例えば、前記投与形態の配合はレ
ミンドンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｔｉｃａｌ　　５ｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、
ｌ９８５　メルク・パブリジング・カンパニー（Ｍｅｒ
ｃｋ　　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　　Ｃｏｍｐａｎｙ）、
ペンシルバニア州イーストン。局所的ルートは、通常、
本発明の化合物の投与に最も適当な方法である。

投与単位は０．０１〜９９％、好ましくは０゜５〜８０
％の活性成分を含有することができる。

１日の投与量は、いくつかの因子、例えば、体重、感染
微生物、感染のひどさ、患者の年令、投与の期間および
方法に依存することがある。一般に、本発明の化合物は
、約２ｍｇ〜約１００　ｍｇ／　ｋｇ体重の範囲の１日
の投与量で有効であり、必要に応じて１日当たりｌまた
は２以上の回数に分ける。

とくに、局所的投与のために、軟膏、クリーム、溶液、
ゲルおよびローションは親水性または疎水性の基剤を有
することができ、そして０．１−１５重量％の活性成分
を含有することができる。局所的投与の形態は、また、
吸収促進剤［参照、Ｗ。

Ａ、リッジエル（Ｒｉｔｓｃｈｅｌ）によびＯｌＬ、ス
ズロツケル（Ｓｐｒｏｃｋｅｌ）、今日の薬物（Ｄｒｕ
ｇ　　ｏｆ　　Ｔｏｄａｙ）、Ｖｏｌ。

２４．６１４−６２３ページ、１９８８］および防腐剤
を含有することができる。

明らかなように、上の投与量は示したのみであり、そし
て最も適当な投与量は特定の場合および用途において、
所望の作用を生成するために要求される量を決定のため
に有用な、生物学的試験に頼ることによって調節するこ
とができる。

次の実施例は、本発明の例示を目的とし、本発明の範囲
を限定しない。

実施例 実施例１ Ａ／１６６８６因子Ａ２ １０ｍｇのジメチルホルムアミドおよび１９＋ｎＱのア
セトニトリルの混合物に、ヨウ化ナトリウム（５０ｍｇ
）およびＡ／１６６８６因子Ａ２（米国特許第４，４２
７，６５６号に従って得られた）を添加し、次いで２ｍ
ｇのトリメチルシリルクロライドを添加する。この懸濁
液は透明上なる。７５°Ｃ１：おいて２時間加熱し、９
０ｍｇのヨウ化ナトリウムを添加し、そして反応混合物
をさらに７５°Ｃにおいて２時間加熱する。

冷水を添加した後、ｐＨをＮａ、Ｃｏ３で４にし、そし
て反応混合物をブタノールで３回抽出する。

ブタノール層を真空下に蒸発させ、その間トルエンを反
復して溶液に添加する。固体の残留物（１゜２ｇ）を調
製用ＨＰＬＣにかけ、水およびアセトニトリルの１　：
　１　（Ｖ／Ｖ）の混合物の５ｍ（２中に溶解した各々
の部分ｔこついて次の装置を使用する。計器：この装置
はウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）型５９０ポンプ、ウォ
ーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ラムダ−マックス（Ｍａｘ）
型４８１ＬＣ検出器、２５４ｎｍにセットした、および
レオデイン（Ｒｅｏｄｙｎｅ）インジェクター　５ｍ＋
２のループを装備した、を組み立てることによって構成
する。

カラム：リクロソープ（ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−
１８，１０ミクロン、２５０ｍｍＸ５０ｍｍＦメルク（
Ｍｅｒｃｋ）］ 移動相二０．０モルのＨＣＯＯＮＨ４：　ＣＨ，ＣＮ（
６０：４０） 流速：３０ｍＱ／分 この操作は、分析用ＨＰＬＣによって監視する（参照、
実施例４．１）。抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ２アグ
リコンが濃縮した分画の群を、分離し、そして−緒にす
る。

ブタノールを添加して発泡を防止し、そして溶媒を真空
下に蒸発させる。残留物（５００ｍ　ｇ、７５％の力価
を、再び、上に記載した同一の装置を使用して調製用Ｈ
ＰＬＣによって精製する。１００ｍｇの５つの部分を水
およびアセトニトリルのＩ　：　ｌ　（Ｖ／Ｖ）の混合
物の５ｍ（２（各部分）中に溶解し、そしてクロマトグ
ラフィーにかけ、０．０５モルのＨＣＯＯＮＨ，：ＣＨ
，ＮＨ６２：３８　（Ｖ／Ｖ）の混合物で溶離する。純
粋な成分を含有する分画をプールし、溶媒を真空下に蒸
発させ、その間ブタノールを反復して添加して残留する
ブタノール溶液（１００ｍ＋２）を得る。この溶液を飽
和塩化ナトリウム溶液（７Ｘ５０ｍｆｆ）で、残留する
ＨＣＯＯＮＨ，が存在しなくなるまで、洗浄する。有機
相を真空下に濃縮して２０ｍ１２の体積にし、そして沈
澱を濾過し、そして少量のブタノールで洗浄する。濾液
および洗液を蒸発乾固する。４ｍｆｆの水中に溶解した
固体の残留物に、１０％のＨＣＩをｐＨ３，５に添加し
、そして形成した沈澱をミリポア（Ｍｉｌｌｐｏｒｅ”
）フィルターで濾過する。この溶液を凍結乾燥して、■
２０ｍｇの純粋なＡ／１６６８６因子Ａ２アグリコンニ
塩酸塩を得る。

実施例２ Ａ／１６６８６因子Ａ１Ａ２、Ａ３アグリコン２．３％
（Ｗ／Ｖ）のＨＣＩを含有する、１８０ｒｒｌの無水ジ
メチルホルムアミドおよび６０ｎ＋Ｑのブタノールの混
合物中のＩＯｇのＡ／１６６８６複合体（米国特許第４
．３０３．６４６号に従って得られた）の溶液を、７０
〜７５°Ｃ（浴温度）に２時間撹拌しながら加熱する。

０℃に冷却した後、反応混合物を固体のＮａ、Ｃｏ、で
ｐＨ４にし、濾過し、そしてブタノールを回転装置内で
真空下に蒸発させる。エチルエーテルを添加することに
よって、沈澱を形成する。−１５°Ｃに一夜放置した後
、上澄み液を廃棄し、そして残留する溶媒を真空下に蒸
発する。油状残留物（６ｇ）を１００ｍ（ｌの水Ｂよび
アセトニトリルのｌ　：　Ｉ　　ＣＶ／ν）混合物中に
溶解し、そして８００ｇのシラン化シリカゲル（７０−
２３０メツシユ）［メルク（Ｍｅｒｃｋ）］　を含有す
るクロマトグラフィーのカラムの供給し、このカラムは
２Ｑの水で洗浄し、２Ｑの２％の水性ＨＣＯＯＮＨ４で
コンディショニングし、そして最後に水で洗浄すること
によって調製した。水（１１２）をこのカラムに通過さ
せ、次いで１％（Ｗ／Ｖ）のＭＣＩ（２１を通過させた
。最後に、このカラムを、順次に、１％＋７）ＨＣ！　
：　ＣＨｓＣＮ、　９０　：　ｌ　Ｏ（２１２）の混合
物；１％のＨＣＩ　：ＣＨ，ＣＮ、ｇ５：１５（２Ｑ）
の混合物および１％のＨＣＩ　：　ＣＨ，ＣＮ。

７５：２５Ｃ２Ｑ”）で溶離する。各＊３０ｍＱの分画
を集め、分析用ＨＰＬＣにより検査する（参照、実施例
４．１）。それぞれ因子Ａｔ、Ａ２、Ａ３のアグリコン
を含有する分画の群をプールし、ブタノールを添加し、
そして溶媒を真空下に蒸発乾固する。

アグリコンＡ２を含有する部分を数ｍＱの希釈した）（
ＣＩ中ｌこ溶解し、凍結乾燥して、１．０５ｇの純粋な
Ａ／１６６８６因子Ａ２アグリコンニ塩酸塩を得る。

アグリコン因子Ａ／１６６８６Ａｌ　（０，９ｇ）を含
有する部分を、３０ｍＱの水ニアセトニトリル、ｌ：ｌ
、中に溶解し、そして前述のように調製した８００ｇの
シラン化シリカゲル６０［メルク（Ｍｅｒｃｋ）］　を
含有するクロマトグラフィーのカラムに供給する。この
カラムをＩＱの水で、次いで２ａの１％のＨＣＩで洗浄
し、最後に次の比率の１％のＨＣｌ　：　ＣＨ３ＣＮ混
合物で溶離する：９０：　ｉｏ　（２（２）；８５：　
１５　（１（２）；８ｏ：２ｏ　（ＩＱ）；７５：２５
　（ｔｌ。

３ｍＱの分画を集め、そして分析用ＨＰＬＣにより検査
する（参照、実施例４．１）。アグリコン因子Ａｌを含
有する分画２５０−２８０をプールし、そしてブタノー
ルの添加後、蒸発乾固する。

固体の残留物（３００ｍｇ）を半調製用ＨＰＬＣにより
、２ｍＱの水およびアセトニトリルのｌ：１混合物中に
溶解した各々２０ｍｇの分画について次の装置を使用し
て精製する。

計器：へウレットーパッカード（Ｈｅｗｌｌｅｔｔ−Ｐ
ａｃｋａｒｄ）液体クロマトグラフ、工０８０型、２５
４ｎｍにセットした紫外線検出器を装備した、およびレ
オデイン（Ｒｅｏｄｙｎｅ）インゼクター　２００ｍＱ
のループ。

カラム；ハイパー・リクロソープ（Ｈｉ　ｂ　ａ　ｒＬ
ｉＣｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−８，７ミクロン、２５０ｍ
ｍＸ　１０ｍｍ　［メルク（Ｍｅｒｃｋ）］移動相：　
０．０５モ／ｌ、（７）ＨＣＯＯＮＨ，：ＣＨ，ＣＮ（
６０：４０） 流速：５．５ｍｆ：ｌ／分 純粋なアグリコン因子Ａｌを含有する分画を集め、−緒
にしそして、ブタノールの添加後、真空下に蒸発乾固す
る。残留物を少量の水中に溶解し、そしてＨＣＯＯＮＨ
，が存在しなくなるまで、凍結乾燥する。残留物を再び
数ｍＱの希釈したＨＣＩ中に溶解し、そして凍結乾燥し
て、１４０ｍｇの純粋なＡ／１６６８６因子Ａｌアグリ
コンニ塩酸塩を得る。

アグリコンＡ３　（０，０８ｇ）を含有する分画を３０
ｍＱの水中に溶解し、そして前述のように調製した８０
０ｇのシラン化シリカゲル６０［メルク（Ｍｅｒｃｋ）
］　を含有するクロマトグラフィーのカラムに供給する
。このカラムを１１２の水で、次いで２Ｑの１％のＨＣ
Ｉで洗浄し、そしてこのカラムを１％のＨＣＩ　：ＣＨ
，ＣＮ、７５：２５の混合物（１０ｉ２）で溶離する。

３０ｍ１２の分画を集め、そしてＨＰＬＣにより検査す
る。分画１９１−２３０を一緒にし、そしてブタノール
をそれに添加する。溶媒を真空下に蒸発させ、残留物を
脱塩し、再び希釈したＨＣＩ中に溶解し、次いで因子Ａ
ｔについて前述のように凍結乾燥して、３００ｍｇの純
粋なＡ／１６６８６因子Ａ３アグリコンニ塩配塩得る。

実施例３ Ａ／１６６８６テトラヒドロ因子Ａ１、Ａ２、Ａ３アグ
リコン １０ｇのＡ／１６６８６テトラ水素化因子ＡＩ、Ａ２、
Ａ３、Ａ’　　ｌ、Ａ″　２、Ａ″３の混合物Ｆ欧州特
許出願第８８１１９００１．１号（特願昭６３−３２２
２５８号）おけるようにして得ｔ；］の試料を、実施例
２の条件下に３時間加水分解する。

反応混合物を実施例２におけるように処理し、モしてテ
トラ水素化アグリコンを二塩酸塩として回収する。

実施例４ 分析のアッセイおよび物理化学的特性 ４．１−分析用ＨＰＬＣ 装［ｉ！＝ヘウレットーパノカード（Ｈｅｗｌｌｅｔｔ
−Ｐａｃｋａｒｄ）液体クロマトグラフ、型１０８４Ｂ
、２５０ｎｍにセットされた紫外線検出器を装備しｔ；
。

カラムＨ工）レバシル（Ｅｒｂａｓ　ｉ　１）Ｃ−１８
，１０ミクロン、２５０ｍｍＸ４．６ｍｍ　［カル口・
エルボ（Ｃａｒｌｏ　　Ｅｒｂａ）］。

移動相：Ａ）０．０５モルのＨＣＯＯＮＨ。

Ｂ）ＣＨ３ＣＮ 流速：１．５ｍｆｆ／分 勾配のプロフィル： 分　　　　　０　　１５　　１６　　２８　　３０Ｂ％
　　３８　　３８　　５５　　５５　　３８これらの条
件下に、保持時間（１、）は、次の通りである： 抗生物質Ａ／１６６８６因子ＡＩアグリコン１４．４０
　（６，８２） 抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ２アグリコン１９．３３
　（９，６９） 抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ３アグリコン２０．９６
　（１２，８５） それぞれのジ−マンノシル化化合物についての値は、カ
ッコ内に報告されている。

抗生物質Ａ／１６６８６テトラヒドロ因子Ａｔアグリコ
ン １７、　４０　　（８，９７；　　ｔｏ、６６）抗生物
質Ａ／１６６８６テトラヒドロ因子Ａ２アグリコン ２０．３８　　（１２，２４，１５，３３）抗生物質Ａ
／１６６８６テトラヒドロ因子Ａ３アグリコン ２２、　６５　　（１９，０３；２０．　５５）それぞ
れのジ−マンノシル化化合物についての値は、カッコ内
に報告されている。

４．２−アミノ酸分析 酸加水分解をＡ／１６６８６アグリコンについて６Ｎ　
　ＨＣＩで１０５°Ｃにおいて２０時間実施する。アミ
ノ酸の混合物を、強く酸性のスルホン酸ジビニルベンゼ
ン樹脂［ドウウェソクス（Ｄ。

ｗｅｘ）］のカラムクロマトグラフィーにより分離し、
濃度が０．０５Ｎから２Ｎに増加する水性ＭＣＩで溶離
する。

アミノ酸は、真性試料との比較により、１ＨＮＨＲおよ
びＧＣ−ＭＳを基準にして同定する。

完全な分子におけるアミノ酸の比およびそれらの配列は
、ＮＭＲ実験により決定する。

すべての化合物は、同一のアミノ酸組成および配列を示
す。

下表ＩＩＩは、アグリコンの各々におけるアミノ酸残基
のタイプおよび数を示す。

表ＩＩＩ アミノ酸　　　　　　　　　　　　単位の数スレオーベ
ーターヒドロキシ アスパラギン酸　　　　　　　　　　Ｉアスパラギン酸
　　　　　　　　　　　ｌアロスレオニン　　　　　　
　　　　　３グリシン　　　　　　　　　　　　　　　
１アラニン　　　　　　　　　　　　　　　１４−ヒド
ロキシフェニルグリシン　　　５０イシン フェニルアラニン　　　　　　　　　　　１３−クロロ
−４−ヒドロキシ フェニルグリシン　　　　　　　　　　１オルチニン　
　　　　　　　　　　　　２アグリコンの各々の１モル
当たり２当量のアンモニアを、それぞれの酸加水分解混
合物中で、２つの第一アミド基の証拠を提供する、アミ
ノ酸自動分析により滴定する。さらに、”Ｎ　　ＮＭＲ
実験から得られる窒素原子の合計の数（Ｉ９）は、分子
中のアミノ酸の数Ｉこ従うペグチド結合に含まれる窒素
原子の数を２だけ越え（表ＩＩＩ）、そしてアグリコン
の滴定が遊離のカルボキシル基の存在を示さない。これ
らの考察は、２つの第一アミド基は、それぞれ、アスパ
ラギン酸およびスレオ−ベーターヒドロキシアスパラギ
ン酸の単位上に存在することを支持する。

’Ｈ−ＮＨＲスペクトルは、アスペクト（Ａｓｐｅｃｔ
）３０００コンピユーターを装備したプルツカ−（Ｂｒ
ｕｃｋｅｒ）ＡＭ５００分光光度計で５ＱＱＭＨｚで記
録する。下表ＩＶは、Ｄ２〇二ＤＭＳ０，４　：　ｌ中
の、ｐＨ４，６、温度４０°Ｃ１内部標準ＴＭＳ　（デ
ルタ＝Ｏ，ＯＯｐｐｍ）における、抗生物質Ａ／１６６
８６因子Ａ２の化学シフト（デルタ、ｐｐｍ）を示す。

第１図は、因子Ａ２アグリコンの’Ｈ−ＮＨＲスペクト
ルを報告する。他のアグリコンのＩＨ−Ｎ　ＨＲスペク
トルは、アスパラギン部分に対応する脂肪酸に起因する
シグナルを除外して、因子Ａ２のアグリコンのそれと同
一である。すべてのスペクトルにおいて、糖部分に対応
するシグナルは存在しない。テトラヒドロアグリコンの
スペクトルは、脂肪酸側鎖のビニル部分の共鳴シグナル
を示さない。

４．３−ラクトン環 ラクトン環の存在は、ＩＲスペクトル中の１７６０ｃｍ
−’における吸収によって支持される（参照、下の実施
例４．４）。ラクトン結合の位置は、ａ）そのカルボキ
シル基とのラクトンの結合に起因するアミノ酸の同定、 ｂ）そのカルボキシル基とのラクトンの結合に起因する
ヒドロキシ−アミノ酸の同定、によって確立される。

工程ａ）に従い、因子Ａ２アグリコンをＣａ（ＢＩ３）
！で還元し、次いで、同時継続欧州特許出願第８８１１
９００１．１号（特願昭６３−３２２２５８号）に記載
されているように加水分解する。加水分解物中の２−ア
ミノ−２−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル）エ
タノールの存在は、式■のアグリコン構造を形成するカ
ルボキシル部分中のラクトン結合の位置を確証する。

工程ｂ）に従い、因子Ａ２アグリコンを、欧州特許出願
環８８１１６９４７．８号は（特願昭６３−２８９０２
８号）に記載されているように、フェニルイソシアネー
トと反応させ、次いで加水分解する。ヒドロキシアスパ
ラギン酸の一定量対他のヒドロキシル化アミノ酸の減少
は、式■のアグリコン構造中のラクトン結合中に含まれ
るヒドロキシ基の位置を確証する。

４．４−ＩＲスペクトル パーキン−エル？　−（Ｐ　ｅ　ｒ　ｋ　ｉ　ｎ−Ｅ　
Ｉ　ｍｅ　ｒ）５８０型分光光度計を使用して、スジョ
ール・ムル（ｎｕｊｏｒ　　ｍｕｌｌ）として記録した
因子Ａ２のＩＲスペクトルを、添付図面の第２図に示す
。次の吸収最大が観測される：　３７００−３１００（
ｎｙ　　ＮＨおよびｎｙ　　ＯＨ）、３０２０−２８０
０　（ｎｕｊｏｌ）、１７６０（ｎｙ　　Ｃ−０ラクト
ン）、１６４０　（ｎｙ　　Ｃ−０、アミド■）、１５
１０（デルタ　ＮＨ，アミドＩＩ）、１４６０および１
３７５　（ｎｕ　ｊ　ｏ　ｌ）、１２３０（ｎｙＣ−０
、ラクトン）、８４０および８１５　ｃ　ｍ−’　（ガ
ンマＣＨ芳香族）。

他のアグリコンのスペクトルは、実質的な差を示さない
。

４．５−紫外線スペクトル パーキン−エル？−（Ｐ　ｅ　ｒ　ｋ　ｉ　ｎ−Ｅ　Ｉ
　ｍｅ　ｒ）型３２０分光光度計を使用して、０．ＩＮ
　　ＨＣｌ中で記録した因子Ａ２の紫外線スペクトルを
、添付図面の第３図に記載する。このスペクトルは次の
吸収を示す：２３３ｎｍ（Ｅ１％、１ｃｍ２０６．７）
および２７１ｎｍ（Ｅ１％、１ｃｍ１０９．３）。

他の不飽和のアグリコンの紫外線スペクトルは、実質的
な差を示さない。テトラヒドロアグリコンは、２３２ｎ
ｍおよび２７５ｎｍにおいて吸収最大を示す。

４．６−ＦＡＢ−ＭＳスペクトル 急速７子衝突質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）は、ＭＳ
−５０−ＴＣ計器によりマトリックスとしてグリコール
を使用して記録する。衝突ガスＸｅ；動力学的エネルギ
ー５ｋｅＶ；加速電圧８ｋＶ０プロトン化分子のイオン
に低い質量のアイソトープ（ＭＨ”）は、次の分子量有
する＝２２１４．９（因子ＡＩアグリコン）、２２２８
．９（因子Ａ２アグリコン）および２２４２．９　（因
子Ａ３）。テトラヒドロアグリコンのプロトン化分子の
イオン（ＭＨ”）は、それぞれ、次の分子量を示す：２
２１８．９．２２３２．９および２２４６．９゜これら
のデータは理論的なデータの０３ダルトンの範囲内であ
り、そして割り当てた構造と一致する。

４．７−元素分析 元素分析は、次の概算のパーセント組成示す。

因子Ａｔアグリコン　　因子Ａ２アグリコン　　因子Ａ
３アグリコンポＣ％　　　　　　　　　５５．０　　　
　　　　　　　　　　　５３．８　　　　　　　　　　
　　　　　　５４．９本Ｈ％　　　　　５．３　　　　
　　　６．０　　　　　　　　５．８＊Ｎ％　　　　１
２．４　　　　　　　１１．９　　　　　　　　１３．
１００％　　　　　４．７　　　　　　　５．１　　　
　　　　　４．８灰分％　　　　０．５　　　　　　　
０．３　　　　　　　　０．７林重量損失％　８．４　
　　　　　　１１．２　　　　　　　　７．９テトラヒ
ドロ因子Ａ１　　テトラヒドロ因子Ａ２　　テトラヒド
ロ因子Ａ３アグリコン　　　　　アグリコン　　　　　
アグリコン零Ｃ％　　　　　　　　　５５．２　　　　
　　　　　　　　　　５６．３　　　　　　　　　　　
　　　　　５５．４＊Ｈ％　　　　５．８　　　　　　
　６．２　　　　　　　　６．３＊１４％　　　　　１
２．２　　　　　　　　１３，０　　　　　　　　　１
２．２Ｃ１％　　　　　４．８　　　　　　　　４．６
　　　　　　　　　４．６灰分％　　　　０．５　　　
　　　　０．２　　　　　　　　０．２＊＊重量損失％
　７．３　　　　　　　６．８　　　　　　　　６．５
＊試料は不活性雰囲気下に約１４０°Ｃで前もって乾燥
しである。

林熱重量測定分析 実施例５ ０−ジョン、溶液およびゲル化の代表的実施例５．１−
ローション 次の成分を使用して、２パーセント（Ｗ／Ｗ）の水性ア
ルコールローションを配合する（ローションの１００ｇ
について） 因子Ａ２アグリコン　　　　　　２．ＯＯｇ乳酸９０％
（ｗ　／　ｗ　）溶液　　　０．１０７ｇ水酸化ナトリ
ウムｌＯ％ 溶液、　　　　　　　　　　　　　ｐＨ４にエタノール
９６％　　　　　　ｌｏｎｇとする量精製した水　ＢＰ ５．２−溶液 創傷の感染のための溶液を形成するために正常な生理的
塩類溶液中で再構成するだめの、あるいは局所的使用の
ためのローションを調製するために水性アルコールビヒ
クル中で再構成するための、凍結乾燥した粉末を含有す
るバイアルを、１〜２ｍＱの精製した水中に１０ｍｇ、
２５ｍｇ、５０ｍｇおよびｌ　ＯＯｍｇの活性アグリコ
ンを溶解し、バイアルを充填し、そして凍結乾燥して２
％の残留する湿った含量を得る。

５．３−ゲル 次の成分を使用して、ゲルの局所的形態を調製できる； 活性アグリコン　　　　　　　　２．ＯＯｇ乳酸９０％
（ｗ　／　ｗ　）溶液　　　０．１０７ｇメトセル　　
　　　　　　　　　　３．ＯＯｇエタノール９６％　　
　　　　ｌｏｏｇとする量精製した水　ＢＰ 水酸化ナトリウム１１０５（／ｗ） 溶液　　　　　　　ｐＨ４，０とする量活性アグリコン
を精製した水中に溶解し、濾過し、次いでこの溶液およ
び乳酸を２５℃において、残留する水のメトセル分散に
添加する。エタノールを添加し、そして混合して分散を
完結した後、ｐＨ値を１０％の水酸化ナトリウムの添加
により４．０に調節する。

本発明の主な特徴および態様は、次の通りである。

■１式Ｉ ＣＨ 式中、Ｒは−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＣＨｓ、　−Ｇｏ−ＣＨ−ＣＨＣＨ＝　ＣＨＣＨｚ
　　ＣＨ（ＣＨ３）　　！、−〇〇−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ
冨ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ｃ　Ｈ３）　！および対応す
る四水素化基である、 の化合物およびそれらの酸付加塩および任意の比率のそ
れらの混合物。

２、Ｒは−Ｃｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨフＣＨ−ＣＨ２−Ｃ
Ｈ２−ＣＨ３、−ＧＯ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ＝　ＣＨＣＨ
２ＣＨ（ＣＨｓ　）　２、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝
ＣＨ−ＣＨ，−ＣＨ，−ＣＨ（ＣＨＩ）２である上記第
１項記載の化合物およびそれらの製薬学的に許容されう
る酸付加塩。

３、Ｒは式：　−Ｇｏ　（ＣＨ２）ｓ　　ＣＨ３、Ｃｏ
　（ＣＨｚ）ｓＣＨ（ＣＨｓ）＊または−Ｃ０（ＣＨ２
）ｓＣＨ（ＣＨｘ）ｚの四水素化基である、上記第１項
記載の化合物およびそれらの製薬学的に許容されうる酸
付加塩。

４、式■ Ｈ 式中、Ｒは−ＣＯ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨｚ−
ＣＨ！−ＣＨｓ、　　　ＣＯ−ＣＨ＝　ＣＨＣＨ＝　Ｃ
Ｈ−ＣＨｘ　　ＣＨ（ＣＨｓ　）　　ｘ、−ＣＯ−ＣＨ
−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＨ，−ＣＨ。

ＣＨ（ＣＨｚ）　ｚおよび対応する四水素化基である、 の化合物およびそれらの酸付加塩および任意の比率のそ
れらの混合物を調製する方法であって、遊離化合物また
は酸付加塩の形態の、抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ１
、Ａ２、Ａ３、Ａ″　１％Ａ′２、Ａ’　３、それらの
２またはそれ以上の混合物、それらのそれぞれのテトラ
ヒドロ誘導体およびそれらの２またはそれ以上の混合物
から選択される出発物質を選択的に加水分解し、そして
２またはそれ以上の化合物の混合物を使用しかつ純粋な
式■の化合物を望むとき、得られる反応生成物をそれ自
体この分野において知られている手順にによって単一の
成分に分割することを特徴とする方法。

５、選択的に加水分解は、出発物質を、ａ）ヨウ化トリ
メチルシリルまたは塩化トリメチルシリルとヨウ化ナト
リウムの存在下に接触させ、次いで得られたトリメチル
シリル誘導体を温和な条件下に加水分解するか、あるい
はｂ）強酸と低級アルカノールまたは低級アルカノール
の混合物の存在下に無水条件下に接触させる、 という事実によって特徴づけられる上記第４項記載の方
法。

６、反応を非プロトン性有機溶媒の存在下にｌＯ℃〜１
００℃、好ましくは２０　’（：４〜８０℃の温度にお
いて実施する、上記８５項記載の工程ａ）の方法。

７、塩化トリメチルシリルの１モル当たり０゜０１〜１
モルのヨウ化ナトリウムの存在下に過剰の塩化トリメチ
ルシリルを使用し、そして非プロトン性有機溶媒は塩素
化低級塩素化炭化水素、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルスルホキシド、アセトニトリルおよびそれらの混合物
から選択される、上記第６項記載の方法。

８、塩化トリメチルシリルの使用量は出発物質の１ｇ当
たり１〜３ｍＱである、上記第７項記載の方法。

９、得られるトリメチルシリル誘導体の温和な条件下の
加水分解は、それを水、低級アルカノールまたはそれら
の混合物と０°Ｃ〜室温の温度でｐＨ３〜５において接
触させることによって実施する、上記第５〜８項のいず
れかに記載の方法。

１０、．５１Ｅ応は有機極性溶媒中で実施し、強酸は強
鉱酸、強アリールスルホン酸、強アルキルスルホン酸、
強硫酸、それらの誘導体および酸の形態である乾燥した
カチオン交換樹脂から選択され、そして低級アルカノー
ルはＣ，−Ｃ６アルカノール、好ましくはブタノールで
ある、上記第５項記載の工程ｂ）の方法。

１１、強酸は塩酸であり、反応の溶媒はジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシドまた過剰の同一の低級ア
ルカノールまたはそれらの混合物であり、そして反応温
度は１５°Ｃ〜８０°Ｃの間である、上記第１０項記載
の方法。

１２、出発物質は因子ＡＩ、Ａ２、Ａ３、Ａ′１、Ａ’
　　２、Ａ’　　３またはそれらのテトラヒドロ誘導体
の２またはそれ以上の混合物であり、そして得られる加
水分解生成物は好ましくはカラムクロマトグラフィーま
たは調製用ＨＰＬＣ法を使用することによって実施する
、上記第４〜１１項のいずれかに記載の方法。

■３、薬物として使用するための上記第１項記載の化合
物。

１４、抗生物質の製造のための上記第１項記載の化合物
の使用。

１５、創傷の感染またはアクネの局所的処理のための抗
菌薬物の製造のための上記第１項記載の化合物の使用。

１６、抗菌的に有効量の上記第１項記載のを哺乳動物に
必要に応じて投与することからなる、哺乳動物における
感染症を防除する方法。

１７、感染症は創傷の感染またはアクネであり、そして
化合物を局所的に投与する、上記第１６項記載の方法。

１８、抗菌的に有効量の上記第１項記載の化合物を含有
する創傷の感染またはアクネを処置するための局所的製
薬学的配合物。

【図面の簡単な説明】

第１図は、因子Ａ２アグリコンの’Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルを示し、第２図は、因子Ａ２アグリコンのＩＲスペク
トルを示し、第３図は因子Ａ２アグリコンの紫外線スペ
クトルを示すものである。 Ｆ工Ｇ。 ３： 菌各ＡＺ？クリコンの Ｕ、　Ｖ、人へｌ＋７トル 手続補正書砺式） ％式％ １、事件の表示 平成１年特許願第９２７７３号 ２、発明の名称 Ａ／１６６８６抗生物質のアグリコン ３、補正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 名称　グルボ・レベチット・ニス・ピー・エイ４、代理
人　〒１０７ ５、補正命令の日付 ６、補正の対象 図面（第１図） ７、補正の内容 別紙のとおり。 平成１年７月２５日（発送口） 図面の浄書（内容に変更なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒは−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＿２
   −ＣＨ＿２−ＣＨ＿３、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ
   Ｈ−ＣＨ＿２−ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２、−ＣＯ−ＣＨ＝
   ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＣＨ（ＣＨ＿
   ３）＿２および対応する四水素化基である、の化合物お
   よびそれらの酸付加塩および任意の比率のそれらの混合
   物。 ２、式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒは−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＿２
   −ＣＨ＿２−ＣＨ＿３、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ
   Ｈ−ＣＨ＿２−ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２、−ＣＯ−ＣＨ＝
   ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２−ＣＨ（ＣＨ＿
   ３）＿２および対応する四水素化基である、の化合物お
   よびそれらの酸付加塩および任意の比率のそれらの混合
   物を調製する方法であって、遊離化合物または酸付加塩
   の形態の、抗生物質Ａ／１６６８６因子Ａ１、Ａ２、Ａ
   ３、Ａ′１、Ａ′２、Ａ′３、それらの２またはそれ以
   上の混合物、それらのそれぞれのテトラヒドロ誘導体お
   よびそれらの２またはそれ以上の混合物から選択される
   出発物質を選択的に加水分解し、そして２またはそれ以
   上の化合物の混合物を使用しかつ純粋な式 I の化合物
   を望むとき、得られる反応生成物をそれ自体この分野に
   おいて知られている手順によって単一の成分に分割する
   ことを特徴とする方法。 ３、薬物として使用するための特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ４、抗生物質の製造のための特許請求の範囲第１項記載
   の化合物の使用。 ５、創傷の感染またはアクネ（ａｃｎｅ）の局所的処理
   のための抗菌薬物の製造のための特許請求の範囲第１項
   記載の化合物の使用。 ６、抗菌的に有効量の特許請求の範囲第１項記載のを哺
   乳動物に必要に応じて投与することからなる、哺乳動物
   における感染症を防除する方法。 ７、抗菌的に有効量の特許請求の範囲第１項記載の化合
   物を含有する創傷の感染またはアクネを処置するための
   局所的製薬学的配合物。