JPH02288896A - 免疫化学的にｈｉｖ抗体と反応する合成ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ｌ−１１Ｖに対する抗体と免疫化学的に反応
づる合成ポリペプチドに関する。

本発明はまた、試験液中のＨＩ　Ｖ又は抗１−Ｉ　Ｉ　
Ｖの検出方法に関するものであり、まノこ上記検出方法
を適用り”る場合に使用すべき免疫化学試薬及びデス１
〜キツ１〜に関する。

ヒト・免疫不全ウィルス・１型（１１１Ｖ−１）は一般
に１後人性免疫不全症候群」（ＡＩＤＳ）の病原体とみ
なされる。最近、２型ヒト免疫不全ウイルス（１」ＩＶ
−２）とげばれるこれに関連したウィルスが同様にＡＩ
ＤＳを引き起こし得ることが判明した。

近年、ト１１Ｖは非常に蔓延し、またざらに将来も蔓延
するであろうど予測される。感染者の治療、さらには非
感染′？ｊｌ＼の伝染防止は最も重要なことである。こ
のウィルスの起源及び蔓延並びにＡＩＤＳ疾患に対して
既に多くの研究がなされているにもかかわらず、依然と
して多数の問題が解決されないでいる。これらの問題の
一つは感染の初期におする診断を可能にするだめの極め
て特異的で高感度な方法がないことである。

）（ＩＶの一般的Ｓ造（ま、含脂質外被又はエンベロー
プに取り囲まれたりボヌクレオ蛋白質コアより成る。イ
の外被又はエンベロープはウィルスの発芽中に感染宿主
細胞の膜から形成される。

ウィルスコード化糖蛋白質はこの外被中に存在する。Ｈ
ＩＶ−２の糖蛋白質は１６個に〔］ダル１−ン（ｐｐ　
ｌ６０）の前駆体蛋白質を経て感染細胞中に合成され、
次いで１２０　Ａ−＋−１ダル１〜ン（ａｐ１２０）の
糖蛋白質の外部エンベロープ及び３６／　４０キロダル
１〜ン（ｇｌ）　３６／（ｌｌ’ｌ　４０）のトランス
メンブラン糖蛋白質に分割される。

１−１１　Ｖ〜２のｇｐ　１２０及び！１１１３６／ｇ
１）　４０は多くの研究の対象となっているが、これら
の蛋白？１の免疫を支配するエビ１〜−プは依然として
部位が特定されていない。

しかし４【がら、Ｉ−Ｉ　Ｉ　Ｖ感染の種々の段階での
確実な診断を可能にするための特異的１１９＾感痕な方
法の開発に関しては、この型の免疫・支配ウィルス性Ｔ
ピト・−ブを同定することがノー常に重要である。

図１〜９に承り−ような１１１．１３．１２．１１．１
０．１（１゜１３、２０及び１０個のアミノ酸を有する
アミノ酸配列を持つ９種類の合成ポリペプチドがそれぞ
れ、例外的に格別に免疫化学的にＨＩ　Ｖ抗体と反応す
ることがここに見出された。

本発明はまた、ＨＩＶ抗体と免疫化学的に依然として反
応する上記のデ１〜ラデカペプチド、トリデカペプチド
、ドデカペプチド、ウンデカペプチド、デカペプチド、
デカペプチド、トリデカペプブード、エイ］→ノペプチ
ド、及びデカペプチドのフラグメン［・を包含し、かつ
ト１１Ｖ抗体と免疫化学的に反応する、上記テトラデ力
ペプヂド、トリデカペプチド、ドデカペプチード、ウン
デカペプチド。

デカペブチ−ド、デカペプチド、トリデカペプチド。

エイニ１ザペプヂド、又はデカペプチドを必須成分とし
て含有する合成ポリペプチド又はそのフラグメン［・を
も包含する。

本発明はさらに免疫化学試薬にも関し、この試　ｎ 薬は少なくとも１９の本発明の合成ペプチドを含有する
。

本発明はまた、試験液中の１−１　ｒ　Ｖに対する抗体
の検出方法を包含するが、この際、少なくとも１９のこ
れらの本発明の合成ペプチドを使用する。

本発明はまた、本発明の合成ペプチドの少なくとも１９
を用いた、試験液中のＨＴ　Ｖの検出方法に関する。

本発明は、ざらにイムノアッセイに使用すべぎテスト−
１ニツトにも関するが、このシース１−＝Ａニツト・は
本発明の免疫化学試薬を少なくとも１９は含有する。

上記合成ペプチドは、試験液中にｌ−Ｉ　Ｔ　Ｖ又（３
Ｌ１−Ｉ　Ｉ　Ｖ抗体の存在していることを’ｆｉｌｆ
定づるための診断方法で使用するのに特に適しているこ
とが判明した。好ましい実施態様においては、配列中の
ＣｙＳ′ＩＡ基が−５−ｓ−架橋にＪζり結合した図３
のアミノ酸配列を含有する環式ペプチドを用いる。

天然１−Ｉ　Ｉ　Ｖに対して、本発明のペプチドは、安
全な非感染性起源のものであるという大きな利点を有す
る。

本発明の合成ペプチドの製造は、ペプチド合成（，１関
する公知の有機化学的方法の１９ににす、又は組換えＤ
ＭＡ法の助りを用いて成し遂げられる。

この後者の方法には、宿主として適当な微生物にＪ３い
て、１９又はそれ以上の該ポリペプチドをコドするポリ
ヌクレオブト配列を有する絹換えポリヌクレオ−ヂドを
発現さける手段にＪ、る所望のポリペプチドの製造を含
む。

ペプチド合成に関する有機化学的方法には、均一相での
、又はいわゆる固相法にＪ：る、縮合反応を用いた必要
なアミノ酸のカップリングが含Ｊ、れる。

均一相におする綜合反応は、以下のＪ：うに実施し得る
： （ａ）縮合剤存在下での、遊離カルボキシル基及びその
他の保護されｌ、：反応基を右する化合物（アミノ酸、
ペプチド）と、＠離アミノ基及びその他の保護された反
応基を石する化合物（アミノ酸、ペプチド）どの綜合、 （ｂ）活性化された。ＩＪルボキシル基及びその他の遊
離又は保護された反応基を有する化合物（アミノ酸、ペ
プチド）ど、遊離アミノ基及びその他のｉｈ離又は保護
された反応基を有する化合物（アミノ酸、ペプチド）ど
の綜合。

カルボキシル基の活性化は、特に、カルボキシル基を、
酸ハロゲン化物、アジド、無水物、イミダゾリド、又は
Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド。

Ｎ−ヒト１］キシーベンツト・リアゾール、もしくはＰ
−二１〜口フェニルエステルのＪ：うへ活性化エステル
に変換づることにより行なうことができる。

上記綜合反応に関する最も一般的方法と１ノでは：カル
ボジイミド法、アジド法、混合酸無水物法、及び「ペプ
チド、分析１合成、生物学（Ｔｈｅ　　Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ、八ｎａＬｙｓｉｓ、　　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ）ｊ第１〜３巻（Ｇｒｏｓｓ、　［及びＨｅ
１ｅｎｈｏｆｏｒ、　Ｊ　　編。

１９７９、１９８０．　１９８１．八ｃａｄｅｍｉｃ　
Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ、）に記載されでいるよう２７活性
化ニス−ｊルを用いる方法が挙げられる。

しかしながら、本発明の上記ペプチド製造においても、
Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　８５．２１
４９（１９６３）に記載のＨｅｒｒｉｆｉｅｌｄの「固
相」法を用いることが可能である。

製造すべきペプチドのアミノ酸のカップリングは、好ま
しくはカルボ−１−シル末端側から間！ｊｒｉ？ｌる。

この方法には、反応基が存在するが又はこのような阜を
導入し得る固相が必〜要て゛ある。これは、例えば反応
性り１］ロメヂル基を有するスチレンどジビニルベンゼ
ンとの共重合体であってもよく、あるい（、↓ヒトｆＴ
Ｉギシメブル又はベンジルアミンと反応し得る高分子固
相であってもよい。

特に適した固相は、例えば、Ｗａｎす（１９７４，ＪＡ
ｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、９５．１３２８）が記載したｐ
−アルコキシベンジルアルコール＠脂（Ａ−ヒト［Ｉ　
Ａ−シメブル。

）」−ノー１−シーメブル−ニｌポリスブレン−１％ジ
ビルベンぜン樹脂）である４１合成後、温和４１条イ′
１下でこの固相からペプチドを分？２１することができ
る。

所望のアミノ酸配列合成後、例えば１〜リフルΔＬ］メ
タンスルホン酸を用い（、叉（，１トリノル２酢酸に溶
解したメタンスルホン酸を用い−で、樹脂からペプチド
を切り離ヅ。低級アル−１−ル、好ましくはメタノール
又はエタノールを用いたニスノル交換にＪ：す、担体か
らペプチドを除去しくもにく、この場合、ペプチドの低
級アルキルＪステルが直接生成り−る。同様に、アンモ
ニアを用いて切り１ｌｌｌｔ−１ど、本発明のペプチド
のアミドが生成する。

縮合反応に関！ｊしない反応基は、既述の通り、酸によ
る加水分解又は還元にＪ：す、非常に容易に再び除去可
能１３４ｇにＪ：って、有効に保護される。

カルボキシル ール，第三ブタノール、ベンジルアルコール、又はｐ−
二１・「１ベンジルアル ル化により有効に保護可能である。

アミノ基を有効に保護し得る基は、工［・−１−ジカル
ボニル ブドー１ジカルボニル基、又はｐ−メｌー＝Ｉシーベン
ジルオキシーカルボニＪＬ／Ｗ、あるいはベンゼンスル
ボニル基又＆ＪｐートルＴンスルホニル阜のようなスル
ホン酸から誘導される酸由来の基であるが、しかし置換
又は非置換アリール又はアラルキル基、例えばベンジル
及び１〜リフエニルメヂルのような　Ｇ そのイ也の基、あるいは−Ａ）し１〜−二１〜ロフ■ニ
ルスルフェニル及び２−ベンゾイル−　１−メチルヒル
のＪ：うな基を用いて〜しよい。特に適したα−アミノ
−保護基は、例えば塩基感応性の９−フルオド レニル−メタキシカルボニル（　Ｆｍｏｃ）ｌ　［Ｃａ
ｒｐｉｎ。

＆　ｌｌａｍ（１９７０）　、１．Ａｍｃｒ．Ｃｈｅｍ
．Ｓｏｃ．９２．　５７４８］　ｒある，１リシンのε
ーアミノ阜を保，ｌることち必要であり、アルギニンの
グアニジン阜についても保護することが好ましい。この
点ｅ　１１７）通例の保護基は、リシンに関してはＢｏ
ｃｉ３、アルギニンに関してはＰｍＪｉ、ｌｙｌ　ｂｓ
Ｊ３又はＭ　ｔ　ｒｉｂりある。

特定の基の性質に依存して、例えば１〜リフル訓［１酢
酸を用いる等の種々の慣用法にＪ、す、あるいは、例え
ば水素及びパラジウムのＪ：うな触媒を用いた、又は氷
酢酸に溶解したｌ−ＩＢｒを用い）こ温和な還元ににす
、保護基を切り離すことができる。

既に上で示した通り、本発明のペプチドし、組換えＤ　
Ｎ　Ａ　？）Ａにより同様に調製切曲゛Ｑある。この方
法は、ペプチドが反復配列に組み込まれている（Ｉｆ’
インタンデノ、（ｉｎ　ｔａｎｃｌｃｍ）　ｊ　）場合
、あるいはペプチドが（より大きな）蛋白質又はポリペ
プチドの成分どしく調製［可能な揚台に特に車装なもの
で′ある。したがって、このタイプのペプチド調製法も
同様に、本発明の範囲内にある。このためには、組換え
ＤＮＡの一成分として、本発明のペプチドをコードし、
ざらに実質的にポリヌクレオヂドセグメントを持ｌこず
、天然の日ＩＶゲノムにおいて上記のポリヌクレオチド
配列が側面に位置する（ｆｌａ旧く）ポリヌクレオヂド
を使用する。

本発明のペプチドを′７１−ドづるこの型のポリヌクレ
オヂド、及びこのポリヌクレオヂドを組み込んだ組換え
ＤＮＡは、同様に本発明の範囲内である。

明確に特許請求の範囲に組み入れられていない１　Ω としても、本発明のペプチド中の１９又（、、Ｉそれ以
上のアミノ酸がその他のアミノ酸で置換可能であるとい
うのは、ｔｈｅ　Ｌｏｓ　八ｌａｍｏｓ　Ｄａｔｅ　Ｂ
ａｎｋ　（−ｃイズウイルス配列データベース）に、１
３いで示されでいるように、自明のことＣある。

さらに、これらのペプチドの官能性誘導体も本発明のペ
プチドに包含される。この誘導体の主なものとして、 （ａ）ペプグードの酸付加塩； （ｂ）ペプチドのアミド、特にＣ−末端アミド（Ｃ）エ
ステル、特にＣ−末端エスフル；（ｄ）トーアシル誘導
体、１ｊにＮ−末端アシル誘導係、殊にＮ−アレデル誘
導体、 を挙げることがＣぎる。

「免疫化学試薬ｊという語は、本発明の合成ペプチドが
適当な支持体と結合するか、又は標識物質と共に提供さ
れることを示寸。

１９ 使用可能な支持体としては、例えば、マイクロデスＩ〜
つ］刃し、管又はモ管、膜、フィルター、試験細片の内
壁、あるいは例えばラテックス粒子、赤血球、染２３＋
ゾル、金属ゾル又はゾル粒子としての金属化合物のよう
な粒子の表面がある。

使用可能４１１物質は、特に、放口４性同位九崇、績 螢光性化合物、酸素、染わ１ゾル、金属ゾル、又はゾル
粒子としての金属化合物である。

試験液中のトＩＴＶに対する抗体の検出方法においては
、本発明の免疫化学試薬を用いるが、この試薬を試験液
と接触させ、試験液中のペプチド及びペプチドと反応Ｊ
”る抗体間で形成される免疫複合体の存在を検出し、こ
のことから試験液中のＨＩ　Ｖ抗体の存在を確定づる。

こ机らの検出方法を用いた場合に起こるべき免疫化学的
反応は、θｆましくはザンドイツヂ反応、膠着反応（ａ
ｇｇ＋ｕｔ：ｎａｔ；ｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）、競合
反応、又はＩｓＨ害反応である、。

抗１−Ｉ　Ｔ　Ｖを用いての試験液中の１−１１　Ｖ検
出に関しては、本発明の免疫化学試薬を使用し、この試
薬を試験液と接触さけて、ペプチド及び抗１−１１　Ｖ
の間で形成される免疫複合体の存在を検出し、これから
試験液中のＨＩＶの存在を確定し得る。

特に適した、使用可能な試験液中での１１１Ｖ検出方法
は、標識物質を有する本発明の合成ペプチドと、口ＩＶ
抗原（試験液中に存在）との間の、固体支持体に結合さ
れた１１ＩＶに対する抗体上の結合部位に関づる競合反
応である。

本発明の試験キット（ま、必須成分として、上記のよう
な免疫化学試薬を含む必要がある。リンドイッチ反応の
実施には、試験キラ＋−＆；Ｌ　、例えばマイクロデス
トウエルの内壁のような固体支持体（ご結合した本発明
の合成ペプチドを包／Ｖていてもよく、本発明の標識化
合成ペプチド又は標識化抗・抗体を用いてもよい。

静 競合反応の実施に関しては、試験キットは固体支持体に
結合しＩこ本発明の合成ペプチドを包含してもよく、次
いでト１１Ｖに対する標識化抗体を用いて試験液中の抗
１−Ｉ　Ｉ　Ｖと競合させｔ　’ｂ　Ｊ：い。

膠着反応においては、粒子又はゾルに固着した本発明の
合成ペプチドを包含する免疫化学試薬を、検出ずべぎｌ
−Ｉ　Ｔ　Ｖに対重る抗体が存在する試験液ど直接接触
ざｌ！ねばならない。

別の実施態様の試験キットでは、例えば、固体支持体と
結合した、ｌ−（Ｉ　Ｖに対する抗体上の結合部位に関
して検出づ−べきｌ−１１Ｖ抗原との競合反応にお（プ
る免疫化学試薬として、本発明の標識化合成ペプチドを
用いる。

実施例１ 図８に示すＪ：うな配列を有するエイ］ザペブヂド（ｃ
ｎｖ−ペプチドｌ−＋　１　Ｖ　−２、ＲＯＤ　、　８
０８−８２７）を、逐次的固相ペプチド合成にＪ、り調
製した。

ＶＥＧＡカップラー２５０Ｃ白動ペブヂド合成機を使用
し、ｐ−ベンジルオニ１ニジ−ベンシルアルニ−ル樹脂
（Ｗａｌｌ（ｌ樹脂；　　０．６−０．７ｍｍｏｌｅｓ
／ｇ　、　Ｂａｃｈｅｍ八Ｇ，スイへ）及びＮ　　　Ｆ
　ｍ（Ｉｃ　−　（Ｗ　Ｆｕ化（「ｍｏｃ。

９−フルオレニルメチルオー１ジカルボニル）アミノ酸
を用いＣ、合成を行イ「っだ。

ＤＭＦ−−ツクｒｊ　ｌコメクン（１：１，容積／容積
）に溶解したＤＣＣ　（ジシク１］ヘキシルカルボジイ
ミドアシル、２当早）、及びＤ　Ｍ　Ａ　Ｐ　（Ｎ，ト
ジメヂルアミノピリジン，１当串）を用いて、４°Ｃ　
′Ｃ１　８　１１．’ｉ間、「ｍｏｃ−Δｌ　ａ−０　
１−ｌの樹脂へのノＪツブリングにＪ、り合成を開始し
た。次いで、樹脂上の未反応アルコール官能基を、塩化
ベンゾイル−ピリジン（１１。

容積／容積）ｌを用いて、２　ＩＩ；’，間ベンゾイル
化して遮断した。

得られたＦｍｏｃ−△ｌａ−樹脂（０．４８ｍｍｏｌ／
　’；ｉ　）を首尾よく、それぞれ３分間及び１０分間
、ＤＭＦに溶解した２５％ピペリジンで処１！Ｔ！ｌノ
て、Ｆｍｏｃｌを除去した。次いで、アミノ酸配列にＪ
、る指図通りに、Ｆｍｏｃアミノ酸の逐次的カップリン
グ工程により、１」〜Δｌａ−樹脂上に樹脂化エイコリ
−ペプチドを調製しｌど。以下の側鎖保護基を用いた：
Δｒｇには一Ｍ　ｔｒ（４−メ１〜キシ、２，３．６−
ドリメチルベンげンスルボニル−）； Ｔｈｒにはーｔ　Ｂ　ｕ　（ｔｅｒｔ．ブチル−）：Ｑ
ｌｕには−０　１：　Ｆ３　ｕ　（ｔｅｒｔブヂル）１
１−シー）。

Ｎ’−３ｏｃ−誘導体（　−　Ｂｏｃ，　　ｔ−ブチル
オキシカルボニル−）どじてＮ末端Ｔｒｐをカップリン
グし　ｌご　１１ 樹脂１ｇ当たりＤＭＦＧ−・７　ｔｒ＆に溶解した各々
３当皐のＦ　ｍｏｃ−アミノ酸．ＤＣＣ．及びＨ　０１
３　ｔを用いて、各カップリング段階を２時間実施し、
２／ｌ その後、］ニタノール．ＤＭＦ及びツク［１［１メタン
で３回洗浄したく各１分間）。Ｋａｉｓｃ＋’のニンヒ
ドリン試験（Ａｎａｆ，Ｂｉｏｃｈｃｍ．３４．５９５
〜５９８．　１９７０）にＪ、リンＪツブリング反応が
完全に進行したか否かをモニターした。Δｒｇ　　　、
Δｌａ　　　、Ａｒ！］Ｑｌｎ　　　、ｐｈｅ　　　、
及び■ＩＣ８０９のカップリング後、陽性ニンヒドリン
反応を観察しＩＣ。各々の場合、１当門の対応りーるＦ
　ｍｏｃアミノ酸，ＤＣＣ及びｌ−１　０　８　１−を
用いて、２肋間、カップリング反応を反復した。次いで
、無水酢酸−ピリジン（２１；容積／容積）を用いて１
０分間アレチル化してすべての残留ｖｔ離アミノ以をブ
［Ｉツクし、その後、ＤＭＦどツク［１１１メタン（各
１分間）て゛それぞれ洗浄した、。

各合成リーイクルの後、−に記と同様にＤＭＦに溶解し
た２５％ピペリジンて・処理してＮ”−Ｆｍｏｃ保護基
を除去した、。

合成完了後、１Ｇられた完全に保護された丁イコザペブ
チド樹脂を、１へリフル′Ａ１ー１酢酸ー水ーヂΔアニ
ソール−■タンジヂΔ−ル（　８７：５：５：３　；容
積／容積）の混合液中で、室温で３時間処理しで、樹脂
からペプチドを効率的に切り頗１し、同時にすべての保
Ｈｌを除去しＩＣｏＣｏジルチルニーデル応混合液に加
えて析出させたのち、粗製ペプチドを単離しＩ（。溶剤
系ブタノール−　１−ピリジン酢酸−水（４　２：２：
１　：容積／容Ｖ４）を用いて、シリカ−６０上でのカ
ラムクロマトグラフィーにより、エイコリペプチドを精
製した。該ペプチドのアミノ酸分析の結果は、［−１的
の合成配列と一致した。

実施例■ 図１〜７及び図９に示す合成ペプチドを、実施例■にＡ
３いて記載したと同様に、アミノ酸配列による指示通り
に固相法にＪ、り合成した。

実施例■ 図８にポリ−アミノ酸配列をイ」する合成土イー１ザペ
プヂド（ｅｎｖ−ペプチド＋＋　ＩＶ−２，ＲＯＤ。

８０８−８２７　：　ｔｈｅ　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ　
Ｄａｔｅ　Ｂａｎｋ　（ｒイズウイルス配列データベー
ス、　ＬＯ３八ｌａｍｏｓ　ＮａｔｌＯｎａＬａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　　Ｄｉｖｉｓｉ
ｏｎ、Ｌｏｓ　　八ｌａｍｏｓ）ニ従−）　だ７　ミ／
酸番号）を、０．０５８　Ｎ　ａ　ｌ−Ｉ　ＣＯ３にＩ
ＩＩＨ９，６，’ＩＩＪ３／ｒｄとイＩるＪ、うに溶解
ｌノた。

ペプチドを微小滴定プレー１〜に結合−するために、本
溶液を８×１２微小滴定プレー１へ中１３１）成／ウー
Ｌルで、４℃にて一晩インキー１べ−１〜した。次いで
ウェルを吸引して空にし、残りの結合部位を、５％スキ
ムミルク粉末及び４％正常＼７ギ血γｉ’ｉ　（！−含
むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液２５０成／ウエ
ルを用いて、室溜１で１１１１間、ブ１−１ツクした。

その後、プレートを空にし、シンカグル上Ｃ′〜１咲、
室温で乾燥した。

ＨＩ　Ｖに夕＝Ｉする抗体の測定に関しでは、試験づべ
さ゛血清標本をＰＢＳ中に稀釈し、ピペツ１−で取り出
して（１００ｍ／つＬル）、３７°Ｃで半時間インキュ
ベートした。次いでそのプレー１へをＰ　Ｂ　Ｓ　。

００５％Ｔ　ｗｃｅｎ−２０（ｆＩ録商標）で４回洗浄
した。ペルオキシダーゼで標識したヤギ抗ヒ１〜イムノ
グロブリン’７Ｒ液を、ピペツ１へｒ　＋１０え（ｉｏ
ｏμｆ！／・シェル）、３７℃で半時間インＡ二１べ−
１〜した。次いてそのプレートをＰ　Ｂ　Ｓ　　Ｏ，０
５％ｌ−ｗｅｅｎ−２０テＡ回洗浄した。ベル′Ａ−１
シダーピに対する培質どしで、次に、オルトフ１ニレン
ジアミン（ＯＰＤ　；　　１６ｍ９／ｄ、＞を含イｊ−
Ｓ＋−る尿素過酸化物（０５ｍび／ｄ）の溶液（１００
成／ウエル）をつＬル中に入れ、室温にてＪＩＢ所ぐイ
ンキニＳへ−１〜した。１Ｍ＋−１２ＳＯ４を　１００
成／つ］ニル添加しＵ３０分後に反応をｔ・−止した。

Ｏｒｇａｎｏｎ　Ｔｃｋｎｉｋａ　？イク［１土リリ゛
リーダーを用いて、４９２ｎｍで゛黄色を読み取った。

抗１１１陽性血清では、０．２０〜０．８５の吸光度（
ｅｘｔｉｎｃシ１ｏｎ）を測定したが、一方、正常対照
ヒ１〜Ｉｆ１１Ｗ！Ｊを使用した揚台の吸光度は０．０
９である。

チドらアミ／酸］紀夕・」１表わブ図佃マ゛ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）免疫化学的にＨＩＶ抗体と反応する、下式に示す
   アミノ酸配列を有する合成テトラデカペプチド及びその
   フラグメント、並びに免疫化学的にＨＩＶ抗体と反応し
   、上記テトラデカペプチドを必須成分として含有する合
   成ポリペプチド又はそのフラグメント。 Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｍ
   ｅｔ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈ
   ｒ−Ｖａｌ （２）請求項１に記載の合成ペプチドを含有する免疫化
   学試薬。 （３）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示す
   アミノ酸配列を有する合成トリデカペプチド及びそのフ
   ラグメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する
   、上記トリデカペプチドを必須成分として含有する合成
   ポリペプチド又はそのフラグメント。 Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇ
   ｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｈ
   ｒ （４）請求項３に記載の合成ペプチドを含有する免疫化
   学試薬。 （５）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示す
   アミノ酸配列を右する合成ドデカペプチド及びそのフラ
   グメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、
   上記ドデカペプチドを必須成分として含有する合成ポリ
   ペプチド又はそのフラグメント。 Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａ
   ｒｇ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ （６）請求項５に記載の合成ペプチドを含有する免疫化
   学試薬。 （７）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示す
   アミノ酸配列を有する合成ウンデカペプチド及びそのフ
   ラグメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する
   、上記ウンデカペプチドを必須成分として含有する合成
   ポリペプチド。 Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｌ
   ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ（８）請求項７
   に記載の合成ペプチドを含有する免疫化学試薬。 （９）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示す
   アミノ酸配列を有する合成デカペプチド及びそのフラグ
   メント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、上
   記デカペプチドを必須成分として含有する合成ポリペプ
   チド及びそのフラグメント。 Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａ
   ｓｎ−Ｈｅｔ−Ｔｙｓ−Ｇｌｕ（１０）請求項９に記載
   の合成ペプチドを含有する免疫化学試薬。 （１１）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示
   すアミノ酸配列を有する合成デカペプチド及びそのフラ
   グメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、
   上記デカペプチドを必須成分として含有する合成ポリペ
   プチド及びそのフラグメント。 Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ａ
   ｓｐ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（１２）請求項１１に記
   載の合成ペプチドを含有する免疫化学試薬。 （１３）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示
   すアミノ酸配列を有する合成トリデカペプチド及びその
   フラグメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応す
   る、上記トリデカペプチドを必須成分として含有する合
   成ポリペプチド及びそのフラグメント。 Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇ
   ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
   ｙ （１４）請求項１３に記載の合成ペプチドを含有する免
   疫化学試薬。 （１５）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示
   すアミノ酸配列を有する合成エイコサペプチド及びその
   フラグメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応す
   る、上記エイコサペプチドを必須成分として含有する合
   成ポリペプチド及びそのフラグメント。 Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇ
   ｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｔｈ
   ｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
   −Ａｌａ（１６）請求項１５に記載の合成ペプチドを含
   有する免疫化学試薬。 （１７）ＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、下式に示
   すアミノ酸配列を右する合成デカペプチド及びそのフラ
   グメント、並びにＨＩＶ抗体と免疫化学的に反応する、
   上記デカペプチドを必須成分として含有する合成ペプチ
   ド及びそのフラグメント。 Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａ
   ｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ａｌａ（１８）請求項１７に記
   載の合成ペプチドを含有する免疫化学試薬。 （１９）請求項２、請求項４、請求項６、請求項８、請
   求項１０、請求項１２、請求項１４、請求項１６、請求
   項１８に記載の免疫化学試薬を使用し、その試薬を試験
   液と接触させ、ペプチドと試験液中のペプチドと反応す
   る抗体との間で形成される免疫複合体の存在を検出し、
   これから試験液中のＨＩＶ抗体の存在を確定することを
   特徴とする、試験液中のＨＩＶに対する抗体の検出方法
   。 （２０）請求項２、請求項４、請求項６、請求項８、請
   求項１０、請求項１２、請求項１４、請求項１６又は請
   求項１８に記載の免疫化学試薬を使用し、その試薬を試
   験液と接触させ、ペプチドと抗ＨＩＶとの間で形成され
   る免疫複合体の存在を検出し、これから試験液中のＨＩ
   Ｖの存在を確定することを特徴とする試験液中のＨＩＶ
   の検出方法。 （２１）少なくとも請求項２、請求項４、請求項６、請
   求項８、請求項１０、請求項１２、請求項１４、請求項
   １６又は請求項１８に記載の１つの免疫化学試薬を含有
   し、イムノアッセイで使用されるテストキット。