JPH02303484A - 新規なスーパーオキシド ジスムターゼ及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明はセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）ｓｐ、Ｙ−４に
よって生産される新規なスーパーオキシド　ジスムター
ゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）及び
その製造方法に関するものである。

（背景技術） 本発明においてスーパーオキシド　ジスムターゼの生産
菌株として使用するセラチアｓｐ、　Ｙ−４は先に本発
明者等によって見い出された新菌株で、１９８９年９月
７日イ寸けにてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒ
ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）　（ＡＴＣＣ）に受託番号Ａ
ＴＣＣ５３９４０で寄託されている。この菌株は既にプ
ロテアーゼ生産菌株として韓国において特許出願されて
いる（出願番号：第８７−６７４６号）。

スーパーオキシド　ジスムターゼはスーパーオキシド　
ラジカル（Ｏ２）を過酸化水素及び酸素に変換する不均
化反応を触媒する酵素である。スーパーオキシド　ラジ
カルは細胞の生存に必須である酸素が還元されることに
より生成するが、このラジカルは生きている細胞の微細
構造に直接及び間接に致命的な障害を引き起こす（八ｎ
ｎｕ、　Ｒｅｖ、　Ｐｈｙｓ。

Ｃｈｅｍ、、２２．　１７１．　１９７１）。

またこのラジカルは多数の生物学的反応において生成す
ることがあり（Ａｍ、　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ、、１０７
．３９７゜１９８２）　、ｍ生物及び細胞における化学
的障害もこのようなスーパーオキシド　ラジカルと関連
している。例えば、ストレプトシトシン（ｓ　ｔｒｅｐ
ｔｏｚｏｔθｃｉｎ）によってスーパーオキシド　ラジ
カルが生成し、インシュリン分泌細胞が血漿膜障害を受
けて糖尿病を引き起こす場合（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏ、ｇ
ｉａ、　１８．５５．１９８０）及びピラジン誘導体で
あるパラコートが生体内で比較的安定な遊Ｍ基を容易に
還元するために致命的に作用する場合（Ｊ、Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、、１３．５０５．１９７７）がある。

スーパーオキシド　ジスムターゼはスーパーオキシド　
ラジカル等の遊離基の生成を抑制することによって皮膚
病（Ｐｆｆｏｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　
ＬＩＳＡ。

？５．５３９５．１．９７８）　、リウマチ性関節炎（
Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　２７．５３５．１９７８）、
脂質の過酸化及び肝疾患（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　
１６０　３４３．１９７６）　、動脈硬化等の心臓疾患
（Ｐｒｏｃ、　Ｓｏｃ、Ｅｘｐ、　Ｂｉｏ＋、＆　Ｍｅ
ｄ、。

１５９３０、１９７８）のほか、抗酸化作用による老化
を防止し、組織内における生理学的機能を助けることが
できる。このように、スーパーオキシド　ジスムターゼ
は酸素を代謝するすべての有機体の生存に必須なもので
あり、医学的治療及び予防にも非常に幅広く利用するこ
とができる。

従来、微生物学的方法によってスーパーオキシド　ジス
ムターゼを製造する種々の技術が提案されており、例え
ば、セラチア　マルセスセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍ
ａｒｃｅｓｃｅｎｃｅ）　（ＡＴＣＣ２１０７４＋　　
米国特許第４５６３３４９号）、バチルス　スブチリス
（８ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）　（ＩＦＯ３
０２２；　Ａｇｒｉ、旧Ｏ１，Ｃｈｅｍ、、　４７＋２
８６５、１９８３）等を生産菌株として使用する方法、
大腸菌Ｂ　（Ｊ、　［１ｉ０１．　Ｃｈｅｍ、、　　２
４７．４７８２．１９７２を使用する方法等が知られて
いる。

従来このような菌株等を培養するための培地の成分とし
ては、適当な炭素源、窒素源、菌の生育に必要な各種の
無機塩（塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、炭酸亜鉛等）、アミノ酸源及びビタミン類等のほ
か、菌株の特性によって必要になる核酸又は核酸含有物
質が適当に配合された培地が使用され、培養中に生ずる
泡を除去するために油（大豆油、とうもろこし油）、合
成消泡剤（ツイーン、アンチフオーム（Ａｎ　Ｌｉｆｏ
ａａ＋）（商品名）等）等が添加されることもある。

しかし、上述のような従来方法では菌株を醗酵させるの
に必要な時間が４８時間以上にもなり、酵素の生産性も
不良で、これを産業的に利用するには改善の余地が多か
った。

そこで、本発明者等は、より経済的な方法でスーパーオ
キシド　ジスムターゼを製造することができる方法につ
いて研究を行った結果、プロテアーゼ生産能を有するセ
ラチアｓｐ、Ｙ−４菌株が従来のものとは異なる新しい
形態のスーパーオキシドジスムターゼを生産すること及
びこの菌株の培養培地の組成を一部変更することにより
培養時間を大幅に短縮できるほか、酵素の生産性を大幅
に向上させることができることを見い出し、本発明に至
ったものである。

本発明の第１の目的は新しい形態のスーパーオキシド　
ジスムターゼを提供することにある。

本発明の他の目的は菌株の培養時間を大幅に短縮でき、
かつ酵素の生産性を大幅に向上させることができるより
経済的なスーパーオキシド　ジスムターゼの製造方法を
提供することにある。

（発明の開示） 本発明はセラチアｓｐ、Ｙ−４（受託番号：　ＡＴＣＣ
５３９，１０）菌株によって生産される物質であること
を特徴とする新規なスーパーオキシド　ジスムターゼに
関するものである。

また、本発明は醗酵培地においてセラチアｓｐ、Ｙ−４
菌株を培養し、培養物からスーパーオキシド　ジスムタ
ーゼを分離精製することを特ｉ枚とするスーパーオキシ
ド　、ジスムターゼの製造方法に関するものである。

本発明方法においては、醗酵培地としてマンガン塩、糖
質原料及びパラコートを含有するものを使用するのが好
ましい。

本発明方法では、先ず、種培地でセラチアｓｐ、Ｙ−４
菌株を２８°Ｃにおいて１８〜２４時間振盪培養した後
、これを醗酵培地において培地ｌ容当り０．３〜１．０
容／分（０，３〜１．ＯＶＶＭ）　（７）通気量及び３
５０〜４５０ｒｐＩｌ＋の撹拌速度において５％の割合
で接種し、２７〜３１°Ｃにおいて８時間培養し、その
後撹拌速度を２００〜３００ｒｐｍに低下させて引続き
１８〜２２時間培養する。

この際初期の６時間の期間に誘導物質として０．５Ｉの
パラコートを添加する。

上述の種培地の組成としては、例えば、塩化ナトリウム
０．１％、塩化カリウム０．０５％、塩化マンガン０．
０２％、硫酸マグネシウム０．０２％、炭酸亜鉛０、０
０２％、脱脂大豆粕１．０％、カゼイン１．０％及びリ
ン酸二水素アンモニウム０．６％を含有するものをｐＨ
調節せずに使用する。醗酵培地の組成としては、例えば
、塩化ナトリウム０．１％、塩化カリウム０．０５％、
塩化マンガン０．０２％、硫酸マグネシウム０．０２％
、炭酸亜鉛０．００２％、脱脂大豆粕１．０％、カゼイ
ン１．０％、リン酸二水素アンモニウム０．６％、乳糖
０．５％及びパラコート０．５ｍＭを含有するものをｐ
Ｈ調節せずに使用する。

本発明方法においては、醗酵培地として、塩化カルシウ
ム、炭酸カルシウム、大豆油、アクトコール（Ａｃｔｏ
ｃｏｌ、商品名）等を使用せず、その代りにマンガン塩
、糖質原料及びパラコートを添加したものを使用する。

マンガン塩を新たに添加した本発明方法において使用す
る醗酵培地は、高純度に精製されたスーパーオキシド　
ジスムターゼの活性部位にマンガンが結合する点に着眼
したもので、さらに適当な糖質原料が菌株の生育を増加
させる点に着眼してグルコース、乳糖、ガラクトース等
のような糖質原料を１種以上添加し、さらに生体内で容
易にスーパーオキシド　ラジカルを還元するための誘導
物質としてパラコートを新たに添加したものである。

本発明方法に従ってセラチアＳρ、Ｙ−４菌株を培養す
る際の醗酵時間の経過に伴う酵素生産性の変化量は次の
表１に示す通りである。

表　　１ 本発明においてスーパーオキシド　ジスムターゼ生産菌
株として使用するセラチアｓｐ、Ｙ−４（ＡＴＣＣ５３
９４０）は、従来使用されている生産菌株と比較して酵
素生産性及び酵素力価が著しく高く、これをセラチア　
マルセスセンス（ＡＴＣＣ２１０７４）及ヒ枯草菌（Ｉ
ｐｏ　３０２２）と比較すると、次の表２に示す通りで
ある。

表　　２ 註）１．酵素生産性は酷酵液１　ａｌｌ当りの単位数で
示した。

２、酵素力価は菌体内に含有されているタンパク質１　
ｍｇ当りの単位数で示した。

３゜セラチアｓｐ、Ｙ−４ＡＴＣＣ５３９４０において
、（１）では従来の１０テアーゼ生産培地を使用し、（
２）では本発明方法における醗酵培地を使用した。

４、各菌株の醗酵培地としては次の物質を含有するもの
を使用した二 ａ、セラチアｓｐ、Ｙ−４（ＡＴＣＣ５３９４０）の場
合ｌ）塩化ナトリウム０．１％、塩化カリウム０．０５
％、硫酸マグネシウム０．０２％、塩化力ルシュム０．
０２％、大豆油０．５％、リン酸二水素すｌ−ＩＪラム
０．５％、脱脂粉乳１．０％；ｐｌ＋６．５に調節。

２）実施例１に示す醗酵培地。

ｂ、セラチア　マルセスセンス（ＡＴＣＣ２１０７４）
の場合カゼイン１．５％、脱脂大豆粕１．０％、リン酸
二水素アンモニウム０．６％、塩化ナトリウム０．１％
、塩化カリウム０．０５％、塩化カルシウム０．０２％
、硫酸マグネシウム０．０２％、炭酸カルシウム１．０
％、炭酸亜鉛０．００２％、大豆油０，６％、アクトコ
ール０．１％；ｐｔ＋７．０に調節。

Ｃ１枯草菌（ＩＦＯ３０２２）の場合 ペプトン１．５％、リン酸−カリウム０．１１％、リン
酸二カリウム０．１％、塩化ナトリウム０．５％、硫酸
マグネシウム０．０１％、酵母エキス０．０１％、肉エ
キス０．０１％、　ｐＨ７，２に調節。

酸素力価の測定は最も広く使用されているマ、ンコード
ーフリドピッチ（ＭｅＣｏｒｄ−Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ法
（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２４４．　６０４９．
１９６９）によって測定することができる。　すなわち
、０．２１６Ｍ　　リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，８
０）　２５　ｍｌ、　１０．７＋Ｍ　　エチレンジアミ
ン四酢酸１　　ｍｆ、　１．１ｍＭ　シト’）口＆Ｃ１
ｍｊ２．及び０．１０８ｍＭキサンチンナトリウム５抛
！を混合し、さらに蒸留水を加えて全体を１００１１１
１にした後に、この混合液を反応液とする。

この反応？ｌ！２．８ｍｆを光路長１　ｃｍのセル（ｃ
ｅｌりに入れ、温度を２５°Ｃに維持して反応させ、次
いで酵素力価を測定できる適当な濃度のキザンチンオキ
シダーゼン容液０．　Ｉｍ　ｌを入れ、シトクロームＣ
の還元速度を波長５５０ｎｍにおいて１分間の吸光度増
加値について測定し、しかる後にスーパーオキシドジス
ムターゼ溶液０．１ｍｆを入れ、１分間の吸光度増加値
を測定する。このようにしてシトクロームＣの還元速度
、すなわち吸光度増加値が５０％抑制される量を１単位
とする。

タンパク質の定量は標準物質としてウシ血清アルブミン
を使用するクーマシーブリリアントブル−（Ｃｏｏｍａ
ｓｉｅ　Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ）Ｇ−２５０法
（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃ−ｈｅｍ、、　７９．５４４．１
９７７）によって行う。

上述の方法によりセラチアＳρ、Ｙ−４菌株を醗酵培養
した後に遠心分離のような既知の分離方法により醗酵液
から菌体を回収し、回収した菌体を水又は緩衝液中に懸
濁させ、超音波、磨砕装置等により破砕する。次に、破
砕された菌体を遠心分離等により分離し、硫酸アンモニ
ウム及びアセトンで処理し、生成した沈澱を遠心分離に
より回収した後に、水又は緩衝液に溶解し、この溶液を
透析膜に通して低分子物質を透析除去し、上澄液（助酵
素）８液）を得る。

セラチアｓｐ、Ｙ−４菌株がプロテアーゼを生産する場
合には、プロプアーゼは菌体外酵素であるから、菌体を
除去した培養液からプロプアーゼを分離精製するが、ス
ーパーオキシド　ジスムターゼは菌体内酵素であるから
、菌体からスーパーオキシドジスムターゼを分離精製す
ることになる。

最後に、上記助酵素溶液を酵素精製に広く使用されてい
るイオン交換樹脂クロマトグラフィー、ゲル濾過法、又
はこれと類似の方法で分離精製することにより、本発明
の目的物であるスーパーオキシド　ジスムターゼを分離
し、高純度に精製することができる。

本発明方法によって分離精製されたスーパーオキシド　
ジスムターゼの酵素学的性質及び物理化学的性質は次の
通りである。

１９作　用−スーパーオキシド　ラジカル（０□）を過
酸化水素分子及び酸素分子に変換する反応を触媒する。

２、基質特異性−スーパーオキシド　ラジカルに作用す
る。

３．７Ｆｉｔ適ｐｌ＋範囲−ｐＨ７〜９の範囲である（
第１図参照）。

４、ｐＨ安定性　−ｐ１１５〜１１の範囲で安定である
（第２図参照）。

５、作用適温の範囲一１０〜４０°Ｃの範囲である。

６、熱安定性　−この酵素をｐｌ＋　８．０１１街液に
よって最長６０分間にわたって処理し、処理時間別に残
存活性を測定した結果、３７°Ｃでは６０分間処理して
も安定であり、５０°Ｃでは６０分間処理で３５％が失
活し、６０°Ｃでは１０分間処理で４２％失活し、７０
°Ｃでは６０分間処理で完全に失活し、８０°Ｃでは３
０分間処理で完全に失活する（第３図参照）。

７、元素分析　−炭素４０．３８±０．６５％、水素５
．５０±０．３０％、窒素１１．８１±０．６５％。

８、紫外吸収スペクトル及び可視吸収スペクトル−第４
図に示す。紫外線領域の吸収スペクトルでは２８Ｏｎｍ
付近で最高値の吸光度を示し、可視光線領域の吸収スペ
クトルでは４７Ｓｎｍ付近で最高値の吸光度を示す。

９、赤外吸収スペクトル−第５図に示す。測定はＫＢｒ
方法で行った。

１０、等電点　〜この酵素の等電点は１１１１１４．７
付近である。

１１、　分子量　−セファクリルＳ−２００スーパーフ
アインカラム５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ−２００ｓｕｐｅ
ｒｆｉｎｅＣｏｌｕｍｎ　（商品名、ファルマシア・フ
ァイン・ケミカル・ニーピー社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　
Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　ＡＢ）製）を使用し、
ゲル濾過法によって測定した結果、５４．０００である
。

１２、含を金属イオンの分析一原子吸光法によって測定
した結果、この酵素は１．０ｇ原子のマンガンを含有す
る。従って、この酵素はマンガンスーパーオキシド　ジ
スムターゼであることが確実である。

本発明方法によって製造されたスーパーオキシド　ジス
ムターゼは、従来知られているスーパーオキシド　ジス
ムターゼと比較すると、その物理化学的性質が著しく異
なる。先ず、分子量を比較すると、大腸菌Ｂの生産する
スーパーオキシドジスムターゼの分子量は３９．５００
であり、セラチアマルセスセンス（ＡＴＣＣ２１０７４
）の生産するスーパーオキシド　ジスムターゼの分子量
は４８．０００であり、枯草菌（ＩＦＯ３０２２）の生
産するスーパーオキシドジスムターゼの分子量は４１，
０００であり、ストレプトコッカス　ムータンス（ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓ）の生産したス
ーパーオキシド　ジスムターゼの分子量は４０，２５０
であるが、本発明のスーパーオキシド　ジスムターゼの
分子量は５４，０００であり、他の菌株の生産するスー
パーオキシド　ジスムターゼの分子量より著しく大きい
。

上述の根拠から、本発明のスーパーオキシドジスムター
ゼは新規な酵素であるということができる。

（実施例） 以下に、本発明を実施例について説明する。

裏立■土 使用菌株−セラチ７ｓｐ、Ｙ−４（ＡＴＣＣ５３９４０
）種培地　−塩化ナトリウム０．１％、塩化カリウム０
．０５％、塩化マンガン０．０２％、硫酸マグネシウム
０．０２％、炭酸亜鉛０．００２％、脱脂大豆軸１．０
％、カゼイン１．０％、リン酸二水素アンモニウム０．
６％をｐｌ＋調節せずに使用。

醗酵培地−塩化ナトリウム０．１％、塩化カリウム０．
０５％、塩化マンガフ０．０２％、硫酸マグネシウム０
．０２％、炭酸亜鉛０．００２％、脱脂大豆軸ｉ、。

％、カゼイン１．０％、リン酸二水素アンモニウム０．
６％、乳糖０．５％、パラコート０．５ｍＭをｐＨ調節
せずに使用。

培　養　−先ず、種菌培養液を製造するために、２！振
盪フラスコに種培地４００ｍ１を分注し、１２１°Ｃに
おいて１５分間高圧殺菌した後、これにセラチアｓｐ、
Ｙ−４を接種し、２８°Ｃにおいて２００ｒｐｍで２０
時間振盪培養した。次に、１４．５１小型醗酵槽に醗酵
培地１０１を入れ、１２１°Ｃにおいて１５分間高圧殺
菌した後、これに上記種菌培養液を醗酵培地の５％の割
合で接種し、２８°Ｃにおいて４００ｒｐｍ、０．５Ｖ
ＶＭで８時間培養し、その回転数を３０Ｏｒｐｍに減ら
してさらに１９時間培養した。

培養完了液中のスーパーオキシド　ジスムターゼ酵素の
生成量は１３２０単位／　ｍ　ｌであった。

尖施貫又 使用菌株及゛び種培地の組成は実施例１と同じにしたが
、醗酵培地の組成においてパラコートは別個に殺菌して
培養開始後４〜６時間の間に合計で０　、５ｎ＋Ｈにな
るように添加した。その他の条件は実施例１と同じにし
た。

培養完了液のスーパーオキシド　ジスムターゼ酵素の生
成量は１５４０単位／　ｍ　ｌであった。

災施拠主 実施例１で得た醗酵液を２５．　ＯＯＯｒｐｍ　（１５
，０００Ｘ　ｇ）で連続遠心分離して菌体２１２ｇを得
、この菌体を０．１ｍＭエチレンジアミン四酢酸酢酸有
する０、０５Ｍ　リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，８）
　５００　ｍｌ中に懸濁させ４°Ｃ（以下、すべての操
作は４°Ｃで行った）において、超音波破砕機によって
菌体を８０分間破砕した。

破砕された菌体を含有する懸濁液を２０．　ＯＯＯｒｐ
ｍ（以下、遠心分離はすべて２０．００Ｏｒｐｍで実施
したで遠心分離し、破砕された菌株を除去し、上澄液（
助酵素溶液）を回収した。

次いでこの上澄液に硫酸アンモニウムをその飽和濃度（
４５％）まで添加し、生成した沈澱を遠心分離により除
去した後に、上澄液を回収した。回収した上澄液にその
４５〜８０Ｍ量％の硫酸アンモニウムを添加し、生成し
た沈澱を遠心分離により回収した。この沈澱を水１５（
１／！に溶解し、さらにこの溶液にその０〜７０重量％
の硫酸アンモニウムを添加し、生成した沈澱を遠心分離
により回収した。回収した沈澱を０．００２Ｍ酢酸カリ
ウム緩衝液（ｐ）Ｉ　　５．５）８０　ｍｌに溶解し、
コノ溶液をセルロース膜に通して同じ緩衝液で２日間透
析し、透析中に生成した沈澱を遠心分離により除去した
。

この透析処理したン容液を０．０２月・リス塩酸状ｊＪ
ｊｔｅｌ　（ｐＨ８，５）で平浄ｊさせたディーニーイ
ー−セファセルカラム（ＤＩＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｃｅｌ
　Ｃｏｉｕｍｎ）　　（商品名、ファルマシア、ファイ
ン、ケミカル、ニービー社製）（２，６Ｘ　２５　ｃｍ
＞に通して吸着させ、同じ緩衝）液ヲカラム内の溶液の
２倍量供給することにより、吸着されなかった不純物を
洗浄除去した。

洗浄後のカラムに塩化す（・リウムにより０がら０．１
Ｍまでの濃度勾配を与え、溶出液について吸光度を測定
し、溶出液中の酵素活性を有する分画のみを別に集めた
。

この溶出した酵素活性液をセルロース膜に通して蒸留水
で２日間透析し、この透析処理した酵素液を凍結乾燥し
た。この凍結乾燥した酵素を０．０５Ｈトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８，０）　　５　ｍｌに溶解し、同じ緩衝液で
平衡させたセファクリルＳ−２００スーパーフアインカ
ラム（商品名）　　（１，６Ｘ８５ｃｍ）に通してゲル
濾過を行った。得られた溶出液について波長２８０ｎｍ
で吸光度を測定し、溶出液中の酵素活性を有する分画を
集め、さらにセルロース膜に通して蒸溜水で２日間透析
し、この透析処理した酵素液を凍結乾燥し最後に精製さ
れたスーパーオキシド　ジスムターゼ４４１．２　ｍｇ
（１２２２単位／　ｍｇ　）を得た。

尖施炎土 実施例２で得た醗酵液を実施例１と同じ方法で処理して
菌体２０５ｇを得、この菌体を実施例３と同じ方法で精
製した。最後に精製されたスーパーオキシド　ジスムタ
ーゼ４１２ｍｇ　（８９８４単位／Ｔ１１ｇ）を得た。

１施Ｍ工 使用菌株及び種培地として実施例１と同じものを使用し
た。ただし、醗酵培地ではマンガン塩濃度を次の表３に
示すように変化させて酵素生成能を濃度別に測定した。

この際、醗酵培地の組成は実施例１と同じにしたが、２
１振盪フラスコに醗酵培地４０（１／！を分注し、１２
１°Ｃで１５分間高圧殺菌した後に種菌培養液を５％の
割合で接種し、２゜Ｏｒｐｍで２８°Ｃにおいて３０時
間培養した。マンガン塩濃度別の酵素生成量を表３に示
す。

表　　３ スーパーオキシドラジカルを還元するための誘導物質で
あるパラコートの濃度別の酵素生成量を測定するために
、バラニー］・濃度を次の表４に示すように変化させて
実施例５と同じ操作を繰り返した。パラコート濃度別の
酵素生成量を表４に示す。

表４ 実画〇江工 菌株の生育及び酵素生成能に対する乳糖の影響を測定す
るため、乳糖濃度を次の表５に示すように変化させて実
施例５と同じ操作を繰り返した。

乳糖濃度別の菌体生成量及び酵素生成量を表５に示す。

表　　５

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のスーパーオキシド　ジスムターゼの最
適ｐＨ範囲を示すグラフ、 第２図は本発明のスーパーオキシド　ジスムターゼのｐ
ｌ＋安定性を示すグラフ、 第３図は本発明のスーパーオキシド　ジスムターゼの熱
安定性を示すグラフ、 第４図は本発明のスーパーオキシド　ジスムターゼの紫
外吸収スペクトル及び可視吸収スペクトル、 第５図は本発明の赤外吸収スペクトルである。 特許出願人　　永進薬晶工業株式会社 代理人　弁理士　　杉　　村　　暁　　査問　　　　弁
理士　　　杉　　　村　　　興　　　作間　　　弁理士
　　佐　　藤　　安　　徳同　　　弁理士　　冨　　１
）　　　　　典同　　　　弁理士　　　梅　　　本　　
　政　　　大同　　　弁理士　　仁　　平　　　　　　
考方１図 Ｈ 第２図 Ｈ シーーーり３７て ◆−−−−◆ωて

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、セラチアｓｐ．Ｙ−４（受託番号：ＡＴＣＣ５３９
   ４０）菌株によって生産される物質であることを特徴と
   するスーパーオキシド　ジスムターゼ。 ２、分子量が５４，０００であることを特徴とする請求
   項１記載のスーパーオキシド　ジスムターゼ。 ３、醗酵培地においてセラチアｓｐ．Ｙ−４菌株を培養
   し、培養物からスーパーオキシド　ジスムターゼを分離
   精製することを特徴とするスーパーオキシド　ジスムタ
   ーゼの製造方法。 ４、醗酵培地としてマンガン塩、糖質原料及びパラコー
   トを含有するものを使用することを特徴とする請求項３
   記載の製造方法。