JPH0235096A - 抗原組成物およびそれらの製法および用途 - Google Patents
抗原組成物およびそれらの製法および用途Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の背景］
（産業上の利用分野）
この発明は、カンピロバクター・ピロリ（Ｃａｍｐｙｌ
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）に特異的な抗体の存在
または不存在の検出方法、さらに特定すればカンピロバ
クター・ピロリに対する抗体の存在の検出および／また
はある種の胃腸疾患の診断を目的とする新規抗原組成物
の臨床用途に関するものである。
ｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）に特異的な抗体の存在
または不存在の検出方法、さらに特定すればカンピロバ
クター・ピロリに対する抗体の存在の検出および／また
はある種の胃腸疾患の診断を目的とする新規抗原組成物
の臨床用途に関するものである。
消化性潰瘍疾患、胃炎および他の炎症性胃十二指腸状態
は、全世界に共通する疾病である。多くの研究により、
カンピロバクター・ピロリ感染の存在および消化性潰瘍
疾患またはＢ型胃炎（最も一般的な胃炎形態）に伴う苦
痛の間に相関関係の存在することが示されている。それ
故、胃腸の症状を訴える患者にカンピロバクター・ピロ
リ感染が存在するか否かを測定することは、その症状が
胃炎または消化性潰瘍に由来するものであるという見込
みの決定に有用であり得る。
は、全世界に共通する疾病である。多くの研究により、
カンピロバクター・ピロリ感染の存在および消化性潰瘍
疾患またはＢ型胃炎（最も一般的な胃炎形態）に伴う苦
痛の間に相関関係の存在することが示されている。それ
故、胃腸の症状を訴える患者にカンピロバクター・ピロ
リ感染が存在するか否かを測定することは、その症状が
胃炎または消化性潰瘍に由来するものであるという見込
みの決定に有用であり得る。
（従来の技術）
カンピロバクター・ピロリの多くの現行診断方法は、費
用が高くつき、臨床環境では実施困難であり、過度な時
間浪費および／または患者に不当な侵襲性および不快さ
をもたらすものである。例えば、−試験では、組織のバ
イオプシーを得るために管を口から入れて胃または十二
指腸に通す必要がある。別の試験では、尿素を含有する
溶液を消費した患者の呼吸において放出された二酸化炭
素の増加を測定する（カンピロバクター・ピロリは酵素
ウレアーゼを含む。この酵素は分解された尿素から二酸
化炭素を放出させる）。この差異の検出には高価な器械
類が必要とされる。炭素１４標識尿素を用いる類似試験
を行うと、さらに検出が容易な炭素１４標識二酸化炭素
が生産される。
用が高くつき、臨床環境では実施困難であり、過度な時
間浪費および／または患者に不当な侵襲性および不快さ
をもたらすものである。例えば、−試験では、組織のバ
イオプシーを得るために管を口から入れて胃または十二
指腸に通す必要がある。別の試験では、尿素を含有する
溶液を消費した患者の呼吸において放出された二酸化炭
素の増加を測定する（カンピロバクター・ピロリは酵素
ウレアーゼを含む。この酵素は分解された尿素から二酸
化炭素を放出させる）。この差異の検出には高価な器械
類が必要とされる。炭素１４標識尿素を用いる類似試験
を行うと、さらに検出が容易な炭素１４標識二酸化炭素
が生産される。
しかしながら、患者を放射性同位元素に曝す必要がある
ため、この試験は望ましくない。
ため、この試験は望ましくない。
カンピロバクター・ピロリの感染者は、生物体に特異的
な抗体を産生ずることが知られている。
な抗体を産生ずることが知られている。
しかしながら、先行技術によるこれらの抗体の検出方法
では、広範な臨床用途に適った実用的有用性および正確
さを提供し得る特異的抗原組成物は同定されなかった。
では、広範な臨床用途に適った実用的有用性および正確
さを提供し得る特異的抗原組成物は同定されなかった。
抗原が充分な特異性をもたないため実質的に確実にはカ
ンピロバクター・ピロリ特異抗体のみを誘引し得ない場
合、抗原／抗体複合体の形成はカンピロバクター・ピロ
リに対する抗体の存在に関して決定的な指標とはなり得
ない。逆に言えば、大部分のカンピロバクター・ピロリ
株に共通したものではない抗原または強い免疫応答を発
生しない抗原は、ある種の菌株に感染した患者のカンピ
ロバクター・ピロリ特異抗体と結合し得ない。その場合
、抗原／抗体複合体の形成が認められないことは、必ず
しもカンピロバクター・ピロリ感染の不在を示すことに
はならない。
ンピロバクター・ピロリ特異抗体のみを誘引し得ない場
合、抗原／抗体複合体の形成はカンピロバクター・ピロ
リに対する抗体の存在に関して決定的な指標とはなり得
ない。逆に言えば、大部分のカンピロバクター・ピロリ
株に共通したものではない抗原または強い免疫応答を発
生しない抗原は、ある種の菌株に感染した患者のカンピ
ロバクター・ピロリ特異抗体と結合し得ない。その場合
、抗原／抗体複合体の形成が認められないことは、必ず
しもカンピロバクター・ピロリ感染の不在を示すことに
はならない。
先行技術においては、充分な感度と不充分な特異性とが
同時に見られることも多く、その逆も同様である。さら
に、感度が低い場合には、実用的限界は試料が希釈され
得る度合に左右される。それ故、不正確な陽性シグナル
は、希釈度が高い場合はど容易に排除され得ない。
同時に見られることも多く、その逆も同様である。さら
に、感度が低い場合には、実用的限界は試料が希釈され
得る度合に左右される。それ故、不正確な陽性シグナル
は、希釈度が高い場合はど容易に排除され得ない。
（発明が解決しようとする課題）
従って、この発明の目的は、カンピロバクター・ピロリ
感染の存在に関する高特異性および高感度診断試験の提
供である。
感染の存在に関する高特異性および高感度診断試験の提
供である。
この発明の別の目的は、カンピロバクタ−・ピロりに対
する特異抗体を特異的および高感度で誘引および結合す
る抗原組成物の提供である。
する特異抗体を特異的および高感度で誘引および結合す
る抗原組成物の提供である。
この発明の別の目的は、比較的非侵襲性であり、患者に
殆ど不快感を与えない胃腸症状の診断における補助手順
の提供である。
殆ど不快感を与えない胃腸症状の診断における補助手順
の提供である。
この発明の別の目的は、臨床または家庭環境での投与が
簡単であり、迅速に評価され得る、費用効率の優れたカ
ンピロバクター・ピロリの存在に関する臨床診断試験の
提供および前記診断試験実施用キットの提供である。
簡単であり、迅速に評価され得る、費用効率の優れたカ
ンピロバクター・ピロリの存在に関する臨床診断試験の
提供および前記診断試験実施用キットの提供である。
この発明の別の目的は、カンピロバクタ−・ピロり感染
を低減または排除すべく設計された処置の有効性をモニ
ターする手段の提供である。
を低減または排除すべく設計された処置の有効性をモニ
ターする手段の提供である。
この発明の別の目的は、感度が充分高いため高度希釈試
料の使用が可能な診断試験の提供である。
料の使用が可能な診断試験の提供である。
（発明の構成）
前述および他の目的は、カンピロバクター・ピロリの少
なくともフラグメントを含み、独特の抗体応答を呈し、
かつ大部分のカンピロバクター・ピロリ株に共通した少
なくとも１種のフラグメントを高濃度で何し、非感染個
体に存在する抗体により実質的に認識されない程度の充
分な独自性を呈する抗原組成物を提供することにより達
成されろ。「少なくともフラグメント」なる語は、無傷
の細菌、すなわち完全な有機体がその断片部分と同様に
使用され得ることを意味する。この発明のある態様では
、組成物は、６３０００．５７０００．４５０００およ
びａｔｏｏｏダルトンのフラグメントから成る群から選
ばれる少なくとも１種のフラグメントを多く含む。別の
態様では、抗原組成物は、カンピロバクター・ピロリ鞭
毛の少なくともフラグメントを高濃度で有する。別の態
様では、抗原組成物は、発明者の認識番号８４−１８０
．８４−１８２．８４−１８３．８６−６３および８６
−８６で示される５種の単離体から成る群から選ばれる
少なくとも１種のカンピロバクター・ピロリ株の少なく
ともフラグメントを含宵する。
なくともフラグメントを含み、独特の抗体応答を呈し、
かつ大部分のカンピロバクター・ピロリ株に共通した少
なくとも１種のフラグメントを高濃度で何し、非感染個
体に存在する抗体により実質的に認識されない程度の充
分な独自性を呈する抗原組成物を提供することにより達
成されろ。「少なくともフラグメント」なる語は、無傷
の細菌、すなわち完全な有機体がその断片部分と同様に
使用され得ることを意味する。この発明のある態様では
、組成物は、６３０００．５７０００．４５０００およ
びａｔｏｏｏダルトンのフラグメントから成る群から選
ばれる少なくとも１種のフラグメントを多く含む。別の
態様では、抗原組成物は、カンピロバクター・ピロリ鞭
毛の少なくともフラグメントを高濃度で有する。別の態
様では、抗原組成物は、発明者の認識番号８４−１８０
．８４−１８２．８４−１８３．８６−６３および８６
−８６で示される５種の単離体から成る群から選ばれる
少なくとも１種のカンピロバクター・ピロリ株の少なく
ともフラグメントを含宵する。
前記単離体は、この特許出願の出願に先んじて、１９８
８年２月１６日またはそれ以前にメリーランド２０８５
２、ロックビル、パークローン・ドライブ１２３０１の
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴ
ＣＣ）にそれぞれ５３７２２．５３７２５．５３７２６
．５３７２７および５３７２１の番号で寄託された（以
後、「寄託菌株」として集合的に称する）。この寄託は
、アメリカ合衆国特許法、ブダペスト条約並びに他の適
用可能な法律および規制に従い寄託物の永続性を保証し
、容易に利用できるものである。
８年２月１６日またはそれ以前にメリーランド２０８５
２、ロックビル、パークローン・ドライブ１２３０１の
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴ
ＣＣ）にそれぞれ５３７２２．５３７２５．５３７２６
．５３７２７および５３７２１の番号で寄託された（以
後、「寄託菌株」として集合的に称する）。この寄託は
、アメリカ合衆国特許法、ブダペスト条約並びに他の適
用可能な法律および規制に従い寄託物の永続性を保証し
、容易に利用できるものである。
個々および互いに組み合わせた形の特定抗原を共に含む
上記抗原組成物は、カンピロバクター・ピロリ特異抗体
と結合し得る抗原組成物として作用する。これらの抗原
組成物は、感染している特定菌株とは関係無く殆ど全て
のカンピロバクター・ピロリ感染個体系に存在する抗体
と複合体を形成し易い。さらに、これらの抗原は、非感
染個体の体液に存在する抗体により認識されにくい。強
い抗体検出能を示す組成物に好適な特定抗原には、ドデ
シル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（以後、ｒＳＤＳ−ＰＡＧＥＪと称す）後の見かけの分
子量が約６３０００．５７０００．４５０００および３
１０００ダルトンであるカンピロバクター・ピロリ・フ
ラグメントがあるが、これらに限定される訳ではない。
上記抗原組成物は、カンピロバクター・ピロリ特異抗体
と結合し得る抗原組成物として作用する。これらの抗原
組成物は、感染している特定菌株とは関係無く殆ど全て
のカンピロバクター・ピロリ感染個体系に存在する抗体
と複合体を形成し易い。さらに、これらの抗原は、非感
染個体の体液に存在する抗体により認識されにくい。強
い抗体検出能を示す組成物に好適な特定抗原には、ドデ
シル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（以後、ｒＳＤＳ−ＰＡＧＥＪと称す）後の見かけの分
子量が約６３０００．５７０００．４５０００および３
１０００ダルトンであるカンピロバクター・ピロリ・フ
ラグメントがあるが、これらに限定される訳ではない。
ここに報告された見かけの分子量は全て、リソチーム１
４４００ダルトン、大豆トリプシン阻害物質２１５００
ダルトン、炭酸脱水酵素３１０００ダルトン、卵アルブ
ミン４５０００ダルトン、うし血清アルブミン６６２０
０ダルトン、ホスホリラーゼＢ９２５００ダルトン、ベ
ータ・ガラクトシダーゼ１１６２５０ダルトンおよびミ
オシン２０００００ダルトンといった分子量標準の相対
電気泳動移動に基づく検量線から算出されたものである
。この検量線を使用すると、一般にこの分子１領域では
約１０００ダルトン前後の分子量の限定が可能である。
４４００ダルトン、大豆トリプシン阻害物質２１５００
ダルトン、炭酸脱水酵素３１０００ダルトン、卵アルブ
ミン４５０００ダルトン、うし血清アルブミン６６２０
０ダルトン、ホスホリラーゼＢ９２５００ダルトン、ベ
ータ・ガラクトシダーゼ１１６２５０ダルトンおよびミ
オシン２０００００ダルトンといった分子量標準の相対
電気泳動移動に基づく検量線から算出されたものである
。この検量線を使用すると、一般にこの分子１領域では
約１０００ダルトン前後の分子量の限定が可能である。
ドデシル硫酸ナトリウム（以後、ｒｓＤｓＪと称す）、
ジチオトレイトールおよびグリセリンを含む緩衝夜中で
５分間沸騰させた後１−２μ９の試料を各レーンに適用
する。分離ゲルは１０％アクリルアミドであり、電気泳
動は８℃の恒温で２時間３５ミリアンペアで行なわれる
。バンドは銀染色を用いて分離される。ある好ましい態
様において、カンピロバクター・ピロリの単離された鞭
毛および特に各々約６３０００．５７０００および３１
０００ダルトンの見かけの分子量を有する前記鞭毛の単
離フラグメントは、単独または互いに組み合わせた形で
好みの抗原（複数も可）として使用される。寄託菌株か
ら得られた６３０００．５７０００．４５０００および
３１０００ダルトンのフラグメントは、寄託菌株のみな
らず殆どのカンピロバクター・ピロリにおいて見出され
、それらが由来する供給源に関係無くこの発明の抗原組
成物において有用である。この明細書に具体的に記載さ
れた抗原フラグメントと相同性を有する適当な合成抗原
もまた使用され得る。
ジチオトレイトールおよびグリセリンを含む緩衝夜中で
５分間沸騰させた後１−２μ９の試料を各レーンに適用
する。分離ゲルは１０％アクリルアミドであり、電気泳
動は８℃の恒温で２時間３５ミリアンペアで行なわれる
。バンドは銀染色を用いて分離される。ある好ましい態
様において、カンピロバクター・ピロリの単離された鞭
毛および特に各々約６３０００．５７０００および３１
０００ダルトンの見かけの分子量を有する前記鞭毛の単
離フラグメントは、単独または互いに組み合わせた形で
好みの抗原（複数も可）として使用される。寄託菌株か
ら得られた６３０００．５７０００．４５０００および
３１０００ダルトンのフラグメントは、寄託菌株のみな
らず殆どのカンピロバクター・ピロリにおいて見出され
、それらが由来する供給源に関係無くこの発明の抗原組
成物において有用である。この明細書に具体的に記載さ
れた抗原フラグメントと相同性を有する適当な合成抗原
もまた使用され得る。
この発明に従い、カンピロバクター・ピロリ特異抗体に
関して試験すべき試料を、この明細書に記載された抗原
組成物と接触させる。好ましい態様では、この接触の後
、抗原／抗体複合体形成の程度が、試料がカンピロバク
ター・ピロリ特異抗体に関して陽性であることを示すい
き値を越えるか否かを測定する。抗原／抗体複合体の形
成は常套技術により検出される。陽性シグナル（すなわ
ち、試料がカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含むこ
とを示す指標）として見なされるべき抗原／抗体複合体
の検出範囲は、選択された検出手段により異なるが、−
船釣には陰性対照群から観察される結果からの平均値に
標準偏差の１（および好ましくは３）区間を加えた値よ
り大きい値として定義され得る。陰性対照群は、カンピ
ロバクター・ピロリに感染した個体を含まないと思われ
る集団の構成員である無症候個体で構成されるべきであ
る。例えば好ましい対照群は、１０歳未満の無症候の子
供から成る群である。それらの子供らは感染していない
と思われる集団を形成する。
関して試験すべき試料を、この明細書に記載された抗原
組成物と接触させる。好ましい態様では、この接触の後
、抗原／抗体複合体形成の程度が、試料がカンピロバク
ター・ピロリ特異抗体に関して陽性であることを示すい
き値を越えるか否かを測定する。抗原／抗体複合体の形
成は常套技術により検出される。陽性シグナル（すなわ
ち、試料がカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含むこ
とを示す指標）として見なされるべき抗原／抗体複合体
の検出範囲は、選択された検出手段により異なるが、−
船釣には陰性対照群から観察される結果からの平均値に
標準偏差の１（および好ましくは３）区間を加えた値よ
り大きい値として定義され得る。陰性対照群は、カンピ
ロバクター・ピロリに感染した個体を含まないと思われ
る集団の構成員である無症候個体で構成されるべきであ
る。例えば好ましい対照群は、１０歳未満の無症候の子
供から成る群である。それらの子供らは感染していない
と思われる集団を形成する。
抗原／抗体複合体形成の好ましい検出技術には、固相酵
素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、間接蛍光検定法およびリ
ポソームに基づく検定法かあるが、これらに限定される
訳ではない。別法として、ウェスタン・プロット技術も
使用され得る。この方法の場合視覚検分によりバンドが
検出され、黒いバンドの実質的出現は陽性指標として見
なされ得る。
素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、間接蛍光検定法およびリ
ポソームに基づく検定法かあるが、これらに限定される
訳ではない。別法として、ウェスタン・プロット技術も
使用され得る。この方法の場合視覚検分によりバンドが
検出され、黒いバンドの実質的出現は陽性指標として見
なされ得る。
この発明のある好ましい態様では、この発明による抗原
組成物および抗原／抗体複合体検出手段を共に含む臨床
用キットが提供される。
組成物および抗原／抗体複合体検出手段を共に含む臨床
用キットが提供される。
カンピロバクター・ピロリ感染とある種の胃疾患、例え
ば消化性潰瘍および胃炎間には相関関係が存在するため
、これらの疾患は、この発明に従いカンピロバクター・
ピロリに対する抗体に関して試験することにより診断さ
れ得る。さらに、カンピロバクター・ピロリ感染の処置
後の抗体に関する追跡試験は、この処置の経過のモニタ
ーに使用され得る。カンピロバクター・ピロリ感染は上
部胃腸管の広範な身体部位に生じ得るため、この発明の
検定法は、特定領域のみの試料を得る内視鏡検査および
バイオプシーにより達成され得る正確さにまで改良を加
え得る。
ば消化性潰瘍および胃炎間には相関関係が存在するため
、これらの疾患は、この発明に従いカンピロバクター・
ピロリに対する抗体に関して試験することにより診断さ
れ得る。さらに、カンピロバクター・ピロリ感染の処置
後の抗体に関する追跡試験は、この処置の経過のモニタ
ーに使用され得る。カンピロバクター・ピロリ感染は上
部胃腸管の広範な身体部位に生じ得るため、この発明の
検定法は、特定領域のみの試料を得る内視鏡検査および
バイオプシーにより達成され得る正確さにまで改良を加
え得る。
またこの発明のある態様では、特定抗原の濃度を高めず
に生産されたカンピロバクター・ピロリのフラグメント
が提供される。この場合、抗原混合物を固定し、次いで
試料と接触させ、ざらに固相酵素免疫検定法またはリポ
ソームに基づく検定法により抗原／抗体複合体形成の程
度を測定する。
に生産されたカンピロバクター・ピロリのフラグメント
が提供される。この場合、抗原混合物を固定し、次いで
試料と接触させ、ざらに固相酵素免疫検定法またはリポ
ソームに基づく検定法により抗原／抗体複合体形成の程
度を測定する。
この手順の場合、この明細書に記載された好ましい抗原
の１種またはそれ以上による抗原混合物の濃化は望まし
いが、必要ではない。
の１種またはそれ以上による抗原混合物の濃化は望まし
いが、必要ではない。
この明細書で使用されている抗原組成物は、特定抗原の
濃度が、特定抗原濃度を選択的に高めることのない環境
下でカンピロバクター・ピロリが抽出および断片化され
た結果生じる天然濃度（他の抗原に関して）を越える場
合は常に１種またはそれ以上の特定抗原の濃度で「濃化
」されていると考えられる。
濃度が、特定抗原濃度を選択的に高めることのない環境
下でカンピロバクター・ピロリが抽出および断片化され
た結果生じる天然濃度（他の抗原に関して）を越える場
合は常に１種またはそれ以上の特定抗原の濃度で「濃化
」されていると考えられる。
この明細書で使用されている「フラグメント」なる語は
、細菌性抗原製造における常用技術による細菌細胞の破
壊の結果生じた細菌の一部分または前記部分の合成相同
体、例えば合成または組換え技法により製造されたポリ
ペプチドを包含する。
、細菌性抗原製造における常用技術による細菌細胞の破
壊の結果生じた細菌の一部分または前記部分の合成相同
体、例えば合成または組換え技法により製造されたポリ
ペプチドを包含する。
（図面の簡単な記載）
第を図は、カンピロバクター・ピロリに対する尿ＩｇＧ
抗体を測定することによる、カンピロバクター・ピロリ
感染に関して血清陽性または血清陰性であることが判っ
ている人から得られた尿試料の差異を示す。
抗体を測定することによる、カンピロバクター・ピロリ
感染に関して血清陽性または血清陰性であることが判っ
ている人から得られた尿試料の差異を示す。
第２−４図は実施例５に関するものであり、その項で説
明する。
明する。
第５図は、実施例４に関するものであり、その項で説明
する。
する。
第６図は寄託菌株の全細胞プロフィールであり、ストリ
ップ１−５は各々寄託菌株８６−６３（ＡＴＣＣ５３７
２７）、８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）、８４−
１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）、８６−８６（ＡＴＣＣ
５３７２１）および８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６
）を示す。
ップ１−５は各々寄託菌株８６−６３（ＡＴＣＣ５３７
２７）、８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）、８４−
１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）、８６−８６（ＡＴＣＣ
５３７２１）および８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６
）を示す。
第７図は、第６図の５種の寄託菌株のリボ多糖類プロフ
ィールである（各レーンは第６図の場合と同じ株を示す
）。
ィールである（各レーンは第６図の場合と同じ株を示す
）。
第８図は寄託菌株のウェスタン・プロットであり、各菌
株はその特定菌株に対して生成されたうさぎ血清により
プロットされた。例えば、ストリップＡは、有機体Ａに
対して生成されたうさぎ抗血清と反応した有機体Ａ゛の
全細胞フラグメントに関するものである。レーンＡ−Ｅ
は、各々寄託菌株８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）
、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２１）、８４−１８３
（ＡＴＣＣ５３７２６）、８６−６３（ＡＴＣＣ５３７
２７）および８６−８６（ＡＴＣＣ５３７２１）を表す
。
株はその特定菌株に対して生成されたうさぎ血清により
プロットされた。例えば、ストリップＡは、有機体Ａに
対して生成されたうさぎ抗血清と反応した有機体Ａ゛の
全細胞フラグメントに関するものである。レーンＡ−Ｅ
は、各々寄託菌株８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）
、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２１）、８４−１８３
（ＡＴＣＣ５３７２６）、８６−６３（ＡＴＣＣ５３７
２７）および８６−８６（ＡＴＣＣ５３７２１）を表す
。
第９図は５種の寄託菌株のウェスタン・プロットであり
（各レーンは第８図の場合と同じ菌株を表す）、各レー
ンは、相同有機体に対して生成された抗血清によりプロ
ットされたプロテイナーゼに処理全細胞リゼイトを含む
。蛋白質はプロテイナーゼＫにより消化されるため、第
９図は主としてリポ多糖類を表す。
（各レーンは第８図の場合と同じ菌株を表す）、各レー
ンは、相同有機体に対して生成された抗血清によりプロ
ットされたプロテイナーゼに処理全細胞リゼイトを含む
。蛋白質はプロテイナーゼＫにより消化されるため、第
９図は主としてリポ多糖類を表す。
（好ましい実施態様）
カンピロバクター・ピロリ抗体の含有が疑われる試料は
全てこの明細書に記載された方法に従い試験され得る。
全てこの明細書に記載された方法に従い試験され得る。
好ましくは、試験される試料は、体内流体、例えば血液
、血清、尿、涙液、唾液等である。医学および獣医学適
用の両方が考えられる。ヒト試料に加えて、他のは乳類
、例えば非ヒト霊長動物、馬、豚などからも試料が採取
され得る。記載された試験の感度が優れているため、試
験前に試料を高度希釈することが可能かつ好ましい。希
釈は、試料、試験される抗体および固定された抗原組成
物の各々と融和性の流体を加えることにより行なわれ得
る。血清が試料として使用される場合、血清は、好まし
くは燐酸緩衝食塩水、ｐＨ７，０−７，４（以後、ｒＰ
ＢｓＪと称す）、ＰＢＳ含有含有トウシーンｗｅｅｎ）
２０ （以後、ｒＰＢＳ ＴＪと称す）、ＰＢＳ
Ｔおよびチメロサール（以後、［ＰＢＳ ＴＴＪと称
す）、ＰＢＳ ＴＴ（ゼラチン）（以後、ｒＰＢＳ
ＴＴＧＪと称す）並びにＰＢｓ ＴＴＧおよびうしガン
マグロブリン（以後、ｒＰＢＳＴＴＧＧＪと称す）から
成る群から選ばれた１種またはそれ以上の流体により希
釈され、好ましくはＩｇＧ抗体について試験する場合約
１ ：５００〜約１：１０００、例えば約１：８００の
割合で希釈される。ＩｇＡ抗体について試験する場合好
ましい希釈割合は、約ｌ：５０〜約１＋２００、例えば
１１００である。ＩｇＧ試験が好ましい。
、血清、尿、涙液、唾液等である。医学および獣医学適
用の両方が考えられる。ヒト試料に加えて、他のは乳類
、例えば非ヒト霊長動物、馬、豚などからも試料が採取
され得る。記載された試験の感度が優れているため、試
験前に試料を高度希釈することが可能かつ好ましい。希
釈は、試料、試験される抗体および固定された抗原組成
物の各々と融和性の流体を加えることにより行なわれ得
る。血清が試料として使用される場合、血清は、好まし
くは燐酸緩衝食塩水、ｐＨ７，０−７，４（以後、ｒＰ
ＢｓＪと称す）、ＰＢＳ含有含有トウシーンｗｅｅｎ）
２０ （以後、ｒＰＢＳ ＴＪと称す）、ＰＢＳ
Ｔおよびチメロサール（以後、［ＰＢＳ ＴＴＪと称
す）、ＰＢＳ ＴＴ（ゼラチン）（以後、ｒＰＢＳ
ＴＴＧＪと称す）並びにＰＢｓ ＴＴＧおよびうしガン
マグロブリン（以後、ｒＰＢＳＴＴＧＧＪと称す）から
成る群から選ばれた１種またはそれ以上の流体により希
釈され、好ましくはＩｇＧ抗体について試験する場合約
１ ：５００〜約１：１０００、例えば約１：８００の
割合で希釈される。ＩｇＡ抗体について試験する場合好
ましい希釈割合は、約ｌ：５０〜約１＋２００、例えば
１１００である。ＩｇＧ試験が好ましい。
好ましい希釈剤および希釈割合は、試験されている試料
により異なり得る。例えば、尿は既に比較的希釈されて
おり″、−船釣にはそれ以上希釈しない。しかしながら
、他の検定において必要とされることが多い尿の濃縮は
、この場合不要である。
により異なり得る。例えば、尿は既に比較的希釈されて
おり″、−船釣にはそれ以上希釈しない。しかしながら
、他の検定において必要とされることが多い尿の濃縮は
、この場合不要である。
試験前に、好ましくは尿のｐＨを、抗体機能に適したｐ
ａｌ、約７．０ないし７．４に調節する。
ａｌ、約７．０ないし７．４に調節する。
試料の希釈が必要とされない場合に、希釈率が高いと、
カンピロバクター・ピロリ特異抗体の非存在下で重要な
抗原／抗体複合体が形成されるという可能性が減じられ
ると思われる。陽性シグナルであると考えるべき抗原／
抗体複合体のいき値レベルを調節する際に希釈範囲を考
慮すべきである。
カンピロバクター・ピロリ特異抗体の非存在下で重要な
抗原／抗体複合体が形成されるという可能性が減じられ
ると思われる。陽性シグナルであると考えるべき抗原／
抗体複合体のいき値レベルを調節する際に希釈範囲を考
慮すべきである。
この発明により有用な抗原組成物には、５種の寄託菌株
のフラグメントから単離された特定抗原、寄託菌株の中
から得られた１種またはそれ以上の完全有機体およびそ
れらの混合物が含まれるが、それらに限定される訳では
ない。例えば単離された鞭毛は、抗原組成物における有
効な、抗原であることが判った。蛋白質、リボ多糖類等
であり得るカンピロバクター・ピロリ株の抗原フラグメ
ントは、面性のドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリル
アミドゲル電気泳動の移動度から誘導されたそれらの見
かけの分子量により同定される。
のフラグメントから単離された特定抗原、寄託菌株の中
から得られた１種またはそれ以上の完全有機体およびそ
れらの混合物が含まれるが、それらに限定される訳では
ない。例えば単離された鞭毛は、抗原組成物における有
効な、抗原であることが判った。蛋白質、リボ多糖類等
であり得るカンピロバクター・ピロリ株の抗原フラグメ
ントは、面性のドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリル
アミドゲル電気泳動の移動度から誘導されたそれらの見
かけの分子量により同定される。
好ましい抗原性混合物には、カンピロノ（タター・ピロ
リ株から単離された鞭毛または前記鞭毛のフラグメント
およびカンピロバクター・ピロリ株の単離フラグメント
が含まれ、それらのフラグメントは、６３０００．５７
０００．４５０００または３１０００ダルトンの５ＤＳ
−ＰＡＧＥによる見かけの分子量を有する。５種の寄託
菌株全部のプールから得られた抗原混合物は、殆ど全部
のカンピロバクター・ピロリ株に存在すると思われる少
なくとも１種の抗原を含むものと信じられる。
リ株から単離された鞭毛または前記鞭毛のフラグメント
およびカンピロバクター・ピロリ株の単離フラグメント
が含まれ、それらのフラグメントは、６３０００．５７
０００．４５０００または３１０００ダルトンの５ＤＳ
−ＰＡＧＥによる見かけの分子量を有する。５種の寄託
菌株全部のプールから得られた抗原混合物は、殆ど全部
のカンピロバクター・ピロリ株に存在すると思われる少
なくとも１種の抗原を含むものと信じられる。
それ故、広い特異性が得られるため、抗原混合物は血清
学的検定において有用なものとなり得る。
学的検定において有用なものとなり得る。
抗原組成物が鞭毛または前記６３０００．５７０００．
４５０００もしくは３１０００ダルトンのフラグメント
の少なくとも１種を高い割合で含むことが好ましい。さ
らに好ましくは、組成物の少なくとも５０パーセントま
たはカンピロバクター・ピロリ・フラグメントの少なく
とも５０パーセントは、鞭毛または具体的に分子量を示
したフラグメントである。ある好ましい実施態様では、
濃度は８５パーセントまたはそれ以上に達する。適用性
次第では、抗原組成物が鞭毛または具体的に分子量を示
したフラグメント以外の抗原を実質的に含まないのが望
ましい場合らあり得る。
４５０００もしくは３１０００ダルトンのフラグメント
の少なくとも１種を高い割合で含むことが好ましい。さ
らに好ましくは、組成物の少なくとも５０パーセントま
たはカンピロバクター・ピロリ・フラグメントの少なく
とも５０パーセントは、鞭毛または具体的に分子量を示
したフラグメントである。ある好ましい実施態様では、
濃度は８５パーセントまたはそれ以上に達する。適用性
次第では、抗原組成物が鞭毛または具体的に分子量を示
したフラグメント以外の抗原を実質的に含まないのが望
ましい場合らあり得る。
抗原組成物に対し５ＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動および適当
な染色が行なわれた結果、それが興味の対象である抗原
に対応する充分画定された単一バンドを呈し、池のバン
ドが一切視覚に現れない場合は常に、その抗原組成物は
興味の対象である抗原以外の抗原を実質的に含まないも
のと考えられこの開示は寄託されたカンピロバクター・
ピロリ株由来の好ましい抗原を得るための容易な方法を
提供するが、これらの抗原は、カンピロバクター・ピロ
リの存在に関する試験においてそれらの有効性により示
された通り、大多数のカンピロバクター・ピロリ株に共
通していることを強調しておく。寄託菌株およびこの明
細書の記載はこれらの抗原の容易な分離方法を提供する
が、ただし、この発明は、これらの抗原の使用をそれら
の供給源とは関係無く広く包含するらのとする。
な染色が行なわれた結果、それが興味の対象である抗原
に対応する充分画定された単一バンドを呈し、池のバン
ドが一切視覚に現れない場合は常に、その抗原組成物は
興味の対象である抗原以外の抗原を実質的に含まないも
のと考えられこの開示は寄託されたカンピロバクター・
ピロリ株由来の好ましい抗原を得るための容易な方法を
提供するが、これらの抗原は、カンピロバクター・ピロ
リの存在に関する試験においてそれらの有効性により示
された通り、大多数のカンピロバクター・ピロリ株に共
通していることを強調しておく。寄託菌株およびこの明
細書の記載はこれらの抗原の容易な分離方法を提供する
が、ただし、この発明は、これらの抗原の使用をそれら
の供給源とは関係無く広く包含するらのとする。
この発明による抗原化合物は、好ましくは常用技術を、
用いて基質上に固定される。例えば、ポリスチレン・プ
レートは、この発明に従い製造された抗原懸濁液とイン
キュベーションされ得る。別法として、例えば、電気泳
動ゲルにおいて蛋白質バンドとして分離された抗原は、
公知方法に上りニトロセルロース・シートに移され得る
。トウビン等、「プロンーディングズ・オブ・ザ・ナシ
ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンシーズＪ（Ｐｒｏ
ｃ。
用いて基質上に固定される。例えば、ポリスチレン・プ
レートは、この発明に従い製造された抗原懸濁液とイン
キュベーションされ得る。別法として、例えば、電気泳
動ゲルにおいて蛋白質バンドとして分離された抗原は、
公知方法に上りニトロセルロース・シートに移され得る
。トウビン等、「プロンーディングズ・オブ・ザ・ナシ
ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンシーズＪ（Ｐｒｏ
ｃ。
Ｎａｔ’ １． Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）、７６：４３
５０＝５４（１９７９）、バーネット等、「バイオケミ
ストリーＪ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、１１２：１９５−２
’０３（１９８１）参照。
５０＝５４（１９７９）、バーネット等、「バイオケミ
ストリーＪ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、１１２：１９５−２
’０３（１９８１）参照。
抗原を実質的に不活性な基質と結合させる多数の他の技
術も当業界では知られている。
術も当業界では知られている。
好ましくはこの発明による結合抗原を、カンピロバクタ
ー・ピロリに対する抗体の存在に関して試験される試料
を含む高度希釈流体と接触させる。
ー・ピロリに対する抗体の存在に関して試験される試料
を含む高度希釈流体と接触させる。
抗原および試料を好ましくは少なくとも約１時間インキ
ュベージジンする。インキュベーションがヒト体温、約
３７℃またはその前後で行なわれる場合、かなり短い時
間が要求される。他の温度、例えば４°Ｃでのインキュ
ベーションちまた適しているが、一般的にさらに長いイ
ンキュベーション時間を必要とする。３７°Ｃでの好ま
しいインキュベーション時間は、約１０分間〜約９０分
間である。次に、結合抗原をリンスすることにより、未
結合抗体、すなわち前記抗原に特異的ではない抗体を全
て除去すべきである。好ましくはリンス処理は、緩衝液
、例えばＰＢＳ Ｔ、ＰＢＳ ＴＴまたはトリス／トウ
イーン／塩化ナトリウム／アジドにより行なわれる。多
重リンス処理が好ましい。
ュベージジンする。インキュベーションがヒト体温、約
３７℃またはその前後で行なわれる場合、かなり短い時
間が要求される。他の温度、例えば４°Ｃでのインキュ
ベーションちまた適しているが、一般的にさらに長いイ
ンキュベーション時間を必要とする。３７°Ｃでの好ま
しいインキュベーション時間は、約１０分間〜約９０分
間である。次に、結合抗原をリンスすることにより、未
結合抗体、すなわち前記抗原に特異的ではない抗体を全
て除去すべきである。好ましくはリンス処理は、緩衝液
、例えばＰＢＳ Ｔ、ＰＢＳ ＴＴまたはトリス／トウ
イーン／塩化ナトリウム／アジドにより行なわれる。多
重リンス処理が好ましい。
インキュベーション中、カンピロバクタ−・ピロり特異
抗体は固定された抗原と結合することにより、抗原／抗
体複合体を形成させる。未結合抗体は全てリンス工程中
に実質的に除去される。この発明の抗原の特異性は高い
ため、カンピロノくフタ−・ピロリに特異的ではない抗
体はこの時点で実質的に除去されてしまう。勿論、試験
試料がカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含まなかつ
ｔ二場合、固定抗原はこの時点でヒト抗体を実質的に含
まず、抗原／抗体複合体に関する後続の試験は、当然前
記複合体の実質的存在を示さない。他方、試験試料がカ
ンピロバクター・ピロリ特異抗体を多く含んだ場合、こ
れらの抗体は固定された抗原と結合して多量の抗原／抗
体複合体を形成°するため当然続いて検出される。
抗体は固定された抗原と結合することにより、抗原／抗
体複合体を形成させる。未結合抗体は全てリンス工程中
に実質的に除去される。この発明の抗原の特異性は高い
ため、カンピロノくフタ−・ピロリに特異的ではない抗
体はこの時点で実質的に除去されてしまう。勿論、試験
試料がカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含まなかつ
ｔ二場合、固定抗原はこの時点でヒト抗体を実質的に含
まず、抗原／抗体複合体に関する後続の試験は、当然前
記複合体の実質的存在を示さない。他方、試験試料がカ
ンピロバクター・ピロリ特異抗体を多く含んだ場合、こ
れらの抗体は固定された抗原と結合して多量の抗原／抗
体複合体を形成°するため当然続いて検出される。
抗原／抗体複合体の検出は、広範な種類の公知方法によ
り達成され得る。好ましい方法には、固相酵素免疫測定
法、ウェスタン・プロット技術、間接蛍光検定法または
リポソームに基づく検定法が含まれるが、それらに限定
される訳ではない。
り達成され得る。好ましい方法には、固相酵素免疫測定
法、ウェスタン・プロット技術、間接蛍光検定法または
リポソームに基づく検定法が含まれるが、それらに限定
される訳ではない。
一般的に、固定抗原と複合体を形成するカンピロバクタ
ー・ピロリ特異抗体は、ヒト免疫グロブリンに特異的で
ある、標識または他の手段により検出可能な第２抗体と
の接触により検出される。
ー・ピロリ特異抗体は、ヒト免疫グロブリンに特異的で
ある、標識または他の手段により検出可能な第２抗体と
の接触により検出される。
標識第２抗体は、好ましくはＩｇＧまたはＩｇＡタイプ
、最も好ましくはＩｇＧに属するヒト抗体に特異的であ
り得る。急な血清変換が疑われる場合、１ｇＭ試験が適
当であり得る。好ましくは第２抗体を約１５分間〜約２
時間、好ましくは３０分間〜６０分間約２０°Ｃ〜約３
７℃の温度で固定抗原とインキュベーションする。次い
で、抗原を緩衝液で洗浄する（好ましくは何回も）こと
により、未結合標識抗体を全て除去する。この時点で、
標識抗体は、抗原に存在するヒト免疫グロブリンに結合
した場合以外は実質的に除去される。勿論、実質的にこ
の時点で存在するヒト免疫グロブリンのみが、当然カン
ピロバクター・ピロリ特異抗体である。それ故、標識第
２抗体の存在または不在を測定することにより、カンピ
ロバクター・ピロリ特異抗体の存在は間接的に測定され
得る。標識検出に関する多くの公知技術が存在する。例
えば、フルオレセイン標識抗体は、フルオレセイン特有
の波長での放射光走査により検出され得る。別法として
、酵素標識は、適当な基質とのインキュベーションおよ
び色変化の検査により検出される。
、最も好ましくはＩｇＧに属するヒト抗体に特異的であ
り得る。急な血清変換が疑われる場合、１ｇＭ試験が適
当であり得る。好ましくは第２抗体を約１５分間〜約２
時間、好ましくは３０分間〜６０分間約２０°Ｃ〜約３
７℃の温度で固定抗原とインキュベーションする。次い
で、抗原を緩衝液で洗浄する（好ましくは何回も）こと
により、未結合標識抗体を全て除去する。この時点で、
標識抗体は、抗原に存在するヒト免疫グロブリンに結合
した場合以外は実質的に除去される。勿論、実質的にこ
の時点で存在するヒト免疫グロブリンのみが、当然カン
ピロバクター・ピロリ特異抗体である。それ故、標識第
２抗体の存在または不在を測定することにより、カンピ
ロバクター・ピロリ特異抗体の存在は間接的に測定され
得る。標識検出に関する多くの公知技術が存在する。例
えば、フルオレセイン標識抗体は、フルオレセイン特有
の波長での放射光走査により検出され得る。別法として
、酵素標識は、適当な基質とのインキュベーションおよ
び色変化の検査により検出される。
これは視覚検査により測定され得るか、または適当な波
長での分光光度計装置により自動的に読み取られ得る。
長での分光光度計装置により自動的に読み取られ得る。
例えばウェスタン・プロッティングでは、酵素か第２抗
体とコンジュゲートした場合に陽性シグナルが検出され
得る。適当な基質とインキュベーションすると、この方
法により分離された抗原バンドの間近に色素産物が酵素
的に生成される。反応性バンドの存在は視覚検査により
検出され得る。間接免疫蛍光検定法においては、フルオ
レセイン標識第２抗体は、蛍光活性化検出器または視覚
検査により検出され得る。リポソームに基づく検定法は
、その表面にカンピロバクター・ピロリ抗原が発現され
るリポソームの内側にフルオレセイン、酵素または基質
の存在を伴い得る。
体とコンジュゲートした場合に陽性シグナルが検出され
得る。適当な基質とインキュベーションすると、この方
法により分離された抗原バンドの間近に色素産物が酵素
的に生成される。反応性バンドの存在は視覚検査により
検出され得る。間接免疫蛍光検定法においては、フルオ
レセイン標識第２抗体は、蛍光活性化検出器または視覚
検査により検出され得る。リポソームに基づく検定法は
、その表面にカンピロバクター・ピロリ抗原が発現され
るリポソームの内側にフルオレセイン、酵素または基質
の存在を伴い得る。
これらのリポソームを適当な希釈液中で試験すべき体液
試料とインキュベーションし、充分洗浄する。抗原／抗
体複合体を形成するヒト免疫グロブリンを表面に伴うリ
ポソームは、ポリスチレン管の内壁に特定のヒトＩｇに
対する第２抗体を取り込むことにより認識され得る。カ
ンピロバクター・ピロリ抗原に結合した抗体を伴うそれ
らのリポソームは固定され、非固定リポソームは洗浄除
去される。リポソームは、例えばデタージエントまたは
補体により溶解され得るため、内部に存在した酵素また
は基質は、管内の溶液中で相補性基質（または酵素）と
自由に反応する。生じた色素反応は、視覚検査または分
光光度計による色素測定により検出され得る。別法とし
て、存在するフルオレセインは、蛍光活性化検出器によ
り検出され得る。
試料とインキュベーションし、充分洗浄する。抗原／抗
体複合体を形成するヒト免疫グロブリンを表面に伴うリ
ポソームは、ポリスチレン管の内壁に特定のヒトＩｇに
対する第２抗体を取り込むことにより認識され得る。カ
ンピロバクター・ピロリ抗原に結合した抗体を伴うそれ
らのリポソームは固定され、非固定リポソームは洗浄除
去される。リポソームは、例えばデタージエントまたは
補体により溶解され得るため、内部に存在した酵素また
は基質は、管内の溶液中で相補性基質（または酵素）と
自由に反応する。生じた色素反応は、視覚検査または分
光光度計による色素測定により検出され得る。別法とし
て、存在するフルオレセインは、蛍光活性化検出器によ
り検出され得る。
抗原混合物（異種）に存在しない菌株に対して生成され
たうさぎ抗血清を用いたこの発明のある種の抗原プール
の試験は、そのプールがこれらの株に対して産生された
抗体を検出し得、また相同性菌株に対して産生された抗
体をも検出し得ることを示した。これは、保存抗原およ
び異種（株特異的）抗原の両方を含む抗原プールが、血
清学検定において有用であるべき広範な特異性のタイプ
を有することを示した。
たうさぎ抗血清を用いたこの発明のある種の抗原プール
の試験は、そのプールがこれらの株に対して産生された
抗体を検出し得、また相同性菌株に対して産生された抗
体をも検出し得ることを示した。これは、保存抗原およ
び異種（株特異的）抗原の両方を含む抗原プールが、血
清学検定において有用であるべき広範な特異性のタイプ
を有することを示した。
この発明による抗体検出の感度および特異性は、定めら
れた集団に属する者から得られた血清を用いて測定され
た。最初の分析は４０名の健康な子供に関して行なわれ
、抗体はＩｇＡ検定ではこの群において見出されず、Ｉ
ｇＧ検定では１回だけ見出された（第１および２表）。
れた集団に属する者から得られた血清を用いて測定され
た。最初の分析は４０名の健康な子供に関して行なわれ
、抗体はＩｇＡ検定ではこの群において見出されず、Ｉ
ｇＧ検定では１回だけ見出された（第１および２表）。
胃炎および消化性潰瘍疾患はこの集団では非常に稀であ
るためこのことは重要であり、それを陰性対照群として
用いる。次いで、この集団から得られたＥＬ Ｉ ＳＡ
測定法における光学密度値の分布を用いることにより、
陽性いき値を確立した。この検定は次に高危険度および
低危険度の集団を用い結果を見越して試験されたため、
これは重要である。実施例Ｉおよび２は、この評価の結
果を具体的に説明している。
るためこのことは重要であり、それを陰性対照群として
用いる。次いで、この集団から得られたＥＬ Ｉ ＳＡ
測定法における光学密度値の分布を用いることにより、
陽性いき値を確立した。この検定は次に高危険度および
低危険度の集団を用い結果を見越して試験されたため、
これは重要である。実施例Ｉおよび２は、この評価の結
果を具体的に説明している。
以下、実施例によりこの発明に関してさらに詳しく説明
を行うが、それらはこの発明の非限定的実例に過ぎない
ものとする。
を行うが、それらはこの発明の非限定的実例に過ぎない
ものとする。
［実施例］
実施例１
抗原組成物における５種の全寄託菌株の音波処理物のプ
ールされた懸濁液を用いたＩｇＧ検定。
ールされた懸濁液を用いたＩｇＧ検定。
多様な範囲の抗原を表す５種のカンピロバクター・ピロ
リ株（ＡＴＣＣ寄託番号５３７２２．５３７２１．５３
７２５．５３７２６および５３７２７）から抗原組成物
を調製した。細菌細胞をチタコレート寒天において培養
し、次いで５％が酸素、１０％が二酸化炭素、５％が水
素および残りが窒素で構成される雰囲気中４８時間３５
°Ｃでインキュベージロンした。培養プレートからの細
胞を滅菌蒸留水中（３ｘＱ／プレート）テ採取し、５０
００ｘｇで１０分間２５℃で２回遠心分離し、次いで滅
菌蒸留水に懸濁した。菌株から得られた細胞の濃度を１
．５の光学密度（４５０ナノメートル）に標定し、次い
で懸濁液を等容量で（各々３ｘＱ）−緒に加えた。プー
ルした懸濁液を、ブランワン振動器（モデル５−７５、
ブランワン・インスッルメント、ダンバリー、コネチカ
ット）により３０秒間４回（３０秒間休止）水上で音波
処理に付した。次いで、謂製物を２０分間ｓｏｏｏｘｇ
で２回遠心分離にかけることにより、全細胞を除去し、
上清を４°ｃｒｔ時間１１０００００Ｘで遠心分離ニカ
けた（Ｌ−７８超遠心機、ベックマン・インスッルメン
ト社、フラートン、カリフォルニア）。沈澱を滅菌蒸留
水に懸濁し、ｌ −２ｘｔｉ／ｍＱの標準農度にした。
リ株（ＡＴＣＣ寄託番号５３７２２．５３７２１．５３
７２５．５３７２６および５３７２７）から抗原組成物
を調製した。細菌細胞をチタコレート寒天において培養
し、次いで５％が酸素、１０％が二酸化炭素、５％が水
素および残りが窒素で構成される雰囲気中４８時間３５
°Ｃでインキュベージロンした。培養プレートからの細
胞を滅菌蒸留水中（３ｘＱ／プレート）テ採取し、５０
００ｘｇで１０分間２５℃で２回遠心分離し、次いで滅
菌蒸留水に懸濁した。菌株から得られた細胞の濃度を１
．５の光学密度（４５０ナノメートル）に標定し、次い
で懸濁液を等容量で（各々３ｘＱ）−緒に加えた。プー
ルした懸濁液を、ブランワン振動器（モデル５−７５、
ブランワン・インスッルメント、ダンバリー、コネチカ
ット）により３０秒間４回（３０秒間休止）水上で音波
処理に付した。次いで、謂製物を２０分間ｓｏｏｏｘｇ
で２回遠心分離にかけることにより、全細胞を除去し、
上清を４°ｃｒｔ時間１１０００００Ｘで遠心分離ニカ
けた（Ｌ−７８超遠心機、ベックマン・インスッルメン
ト社、フラートン、カリフォルニア）。沈澱を滅菌蒸留
水に懸濁し、ｌ −２ｘｔｉ／ｍＱの標準農度にした。
音波処理物をアリコートに分け、使用するまで一７０℃
で冷凍した。ＥＬＩ ＳＡにおいて使用するため、音波
処理物を炭酸緩衝液（ｐＨ９６）で１０ｍｇ／ｘＱの濃
度に希釈した。
で冷凍した。ＥＬＩ ＳＡにおいて使用するため、音波
処理物を炭酸緩衝液（ｐＨ９６）で１０ｍｇ／ｘＱの濃
度に希釈した。
９６ウエルのポリスチレン・プレート、例えばバージニ
ア、アレキサンドリアのダイナチク・ラボラトリーズか
ら入手され得るイムロンＩＩの平底ウェルを、５０ミリ
モル炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，６）１００μσ中
ｌウエル当たり１．０μ９の量でこれら５種の選択され
たカンピロバクター・ピロリ株からプールされた懸蜀液
の音波処理物と４°Ｃで一夜インキニベーションした。
ア、アレキサンドリアのダイナチク・ラボラトリーズか
ら入手され得るイムロンＩＩの平底ウェルを、５０ミリ
モル炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，６）１００μσ中
ｌウエル当たり１．０μ９の量でこれら５種の選択され
たカンピロバクター・ピロリ株からプールされた懸蜀液
の音波処理物と４°Ｃで一夜インキニベーションした。
ウェルを吸引乾燥し、次いで０．Ｏ１モル燐酸緩衝食塩
水（ＰＢＳ、ｐＨ７，２）に０．０５％トウイーンー２
０および０ 、 Ｉ ＩＩＩｇ／ｘＱのチメロサールを
含む混合物（ＰＢＳ−ＴＴ）で２回洗浄し、次いで２０
０μＱのＰＢＳ−ＴＴに０．１％ゼラチンを含む混合物
（ＰＢＳ−ＴＴＧ）で２回洗浄することにより、非特異
的反応性を制限した。
水（ＰＢＳ、ｐＨ７，２）に０．０５％トウイーンー２
０および０ 、 Ｉ ＩＩＩｇ／ｘＱのチメロサールを
含む混合物（ＰＢＳ−ＴＴ）で２回洗浄し、次いで２０
０μＱのＰＢＳ−ＴＴに０．１％ゼラチンを含む混合物
（ＰＢＳ−ＴＴＧ）で２回洗浄することにより、非特異
的反応性を制限した。
多くの患者（彼等の既知カンピロバクタ−・ピロり特性
を下記第１表に記す）から得られた血清試料を調製した
。ＰＢＳ−ＴＴＧにさらに５Ｒ９／蛙のうしガンマグロ
ブリンを含む混合物（以後、「ＰＢＳ−ＴＴＧＧＪと称
す）中１ ：８００に希釈した相異なる試験血清１００
μＱを３つの異なるウェルの各々に加え、プレートを３
７℃で１時間インキュベーションした。ウェルを吸引し
、ＰＢＳＴＴで３回洗浄することにより未結合抗体を除
去し、次いで、１％のうし血清アルブミンおよび０゜１
％のうしガンマグロブリンを含むＰＢＳ−ＴＴ中希釈率
１：５’０００の１００マイクロタイター西洋わさびペ
ルオキシダーゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＧと３７℃で１時間
インキュベーションした。やぎ抗ヒトｒｇＧは、陽性血
清、すなわちカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含む
血清に暴露されたウェルでのみ形成されるべき抗原／抗
体複合体と結合する第２抗体である。ウェルをＰＢＳ−
ＴＴで５回連続洗浄することにより未結合やぎ抗体を除
去した。
を下記第１表に記す）から得られた血清試料を調製した
。ＰＢＳ−ＴＴＧにさらに５Ｒ９／蛙のうしガンマグロ
ブリンを含む混合物（以後、「ＰＢＳ−ＴＴＧＧＪと称
す）中１ ：８００に希釈した相異なる試験血清１００
μＱを３つの異なるウェルの各々に加え、プレートを３
７℃で１時間インキュベーションした。ウェルを吸引し
、ＰＢＳＴＴで３回洗浄することにより未結合抗体を除
去し、次いで、１％のうし血清アルブミンおよび０゜１
％のうしガンマグロブリンを含むＰＢＳ−ＴＴ中希釈率
１：５’０００の１００マイクロタイター西洋わさびペ
ルオキシダーゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＧと３７℃で１時間
インキュベーションした。やぎ抗ヒトｒｇＧは、陽性血
清、すなわちカンピロバクター・ピロリ特異抗体を含む
血清に暴露されたウェルでのみ形成されるべき抗原／抗
体複合体と結合する第２抗体である。ウェルをＰＢＳ−
ＴＴで５回連続洗浄することにより未結合やぎ抗体を除
去した。
Ｑ、００５％の過酸化水素を含むマキルバイン緩衝液（
ｐＨ４、６）中１Ｈ当たり１ 、０ ｍｇの２，２゜ア
ジノージ−（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸Ｘ
ＡＢＴＳ）を含む展開溶液のＯ、ｌ ｍＱ試料を各ウェ
ルに加え、２５℃で３０分間インキュベーションした。
ｐＨ４、６）中１Ｈ当たり１ 、０ ｍｇの２，２゜ア
ジノージ−（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸Ｘ
ＡＢＴＳ）を含む展開溶液のＯ、ｌ ｍＱ試料を各ウェ
ルに加え、２５℃で３０分間インキュベーションした。
この基質混合物はペルオキシダーゼ標識を検出し、約４
１０ｎｍの波長の光を検出し得るＥＬ（ＳＡリーダジー
より検出され得る色素産物を形成する。ＥＬ Ｉ ＳＡ
リーダジー色の示度を定量化する。
１０ｎｍの波長の光を検出し得るＥＬ（ＳＡリーダジー
より検出され得る色素産物を形成する。ＥＬ Ｉ ＳＡ
リーダジー色の示度を定量化する。
検定は３回同様に実施される。各プレートにおける対照
ウェルは、試験血清以外の希釈物が加えられたこと以外
は同じ要領で処理された。１０歳未満の健康な子供４０
名から成る群を試験した場合に観察された結果における
平均＋標準偏差の３倍区間より大きい吸光度水数を陽性
として定めた。
ウェルは、試験血清以外の希釈物が加えられたこと以外
は同じ要領で処理された。１０歳未満の健康な子供４０
名から成る群を試験した場合に観察された結果における
平均＋標準偏差の３倍区間より大きい吸光度水数を陽性
として定めた。
１００μＱの展開溶液を前記と同じ標定された平底マイ
クロタイター・ウェルに入れたとき、陽性いき値を測定
すると４１０ｎｍでの光学密度の０９１０単位であった
。結果を第１表に示す。
クロタイター・ウェルに入れたとき、陽性いき値を測定
すると４１０ｎｍでの光学密度の０９１０単位であった
。結果を第１表に示す。
第１表
５種の全寄託菌株の音波処理物を用いたＩｇＧ検定
対 象 陽性数／黄版！症例
試験数胃腸症状を示す確立し
たカンピ ２８／２９０バクター・ピロリ感染および 胃炎の患者（培養または染色され た組織片における特有の生物の 同定により確認） ９６．６ 確立したカンピロバクタ−・ビ ２Ｂ／２９ ９６．６
０す感染および胃炎にり患した 無症候者 確立した十二指腸潰瘍患者 札限 ９７．８ 確立したカンピロバクタ−・ビ ロり感染にり患していない無症 状者 ３．３ 無症候の子供 １／４０ ２．５ 実施例２ 抗原組成物における５種の全寄託菌株の音波処理物のプ
ールした＠濁液を用いたＩｇＡ検定使用された方法は実
施例１記載の方法と同じであったが、ただし、試験ヒト
血清をＩｇＡ測定においてｌ：５０の希釈率で使用しく
血清中低いＩｇＡａ度であることを示す）、ペルオキシ
ダーゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＡを標識第２抗体として使用
した（１：１０００希釈）。陽性いき値を測定すると、
実施例１と同様に測定された光学密度の０．４７０単位
であった。結果を第２表に示す。
試験数胃腸症状を示す確立し
たカンピ ２８／２９０バクター・ピロリ感染および 胃炎の患者（培養または染色され た組織片における特有の生物の 同定により確認） ９６．６ 確立したカンピロバクタ−・ビ ２Ｂ／２９ ９６．６
０す感染および胃炎にり患した 無症候者 確立した十二指腸潰瘍患者 札限 ９７．８ 確立したカンピロバクタ−・ビ ロり感染にり患していない無症 状者 ３．３ 無症候の子供 １／４０ ２．５ 実施例２ 抗原組成物における５種の全寄託菌株の音波処理物のプ
ールした＠濁液を用いたＩｇＡ検定使用された方法は実
施例１記載の方法と同じであったが、ただし、試験ヒト
血清をＩｇＡ測定においてｌ：５０の希釈率で使用しく
血清中低いＩｇＡａ度であることを示す）、ペルオキシ
ダーゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＡを標識第２抗体として使用
した（１：１０００希釈）。陽性いき値を測定すると、
実施例１と同様に測定された光学密度の０．４７０単位
であった。結果を第２表に示す。
第２表
５種の全寄託菌株の音波処理物を用いたＩｇＡ検定
対 象 陽性数／艮慨ぎ症例
試験数胃腸症状を示す確立し
たカンビ ２ｇ／２９ ９６．６０バクター・ピロリ感
染および 胃炎の患者（培養または染色され た組織片における特有の生物の 同定により確認） 確立したカンピロバクタ−・ピ ２８／２９ ９６．６
０り感染および胃炎にり患した 無症候者 確立した十二指腸潰瘍患者 ４５／４５ １００．
０訃胞 確立したカンピロバクタ−・ピ ３／６１ ４．９０
り感染にり患していない無痛 状者 無症候の子供 Ｑ／４Ｑ Ｑ、（１ 実施例３ カンピロバクター・ピロリに対する血清抗体を有する者
の尿におけるカンピロバクター・ピロリに対するＩｇＧ
抗体 カンピロバクター・ピロリに対する血清抗体を有するこ
とが判っている者（実施例１の血清試験により測定）か
ら得られた尿を評価することにより、特定のＩｇＧ抗体
が尿中に検出され得るか否かを測定した。使用された方
法は実施例１の方法と同じであるが、ただし、ＩＮ水酸
化ナトリウムを用いて尿試料のｐ）ｌを７．４に中和し
、この試料１００μｅを各マイクロタイター・ウェルに
加えた。被験者および尿希釈物の水和状態における差異
を説明するため、尿試料のクレアチニン濃度を測定し、
ＥＬ Ｉ ＳＡでの光学密度をクレアチニン濃度で除し
た比率として結果を表した。これは、尿濃度の変動に関
係無く検定を標準化するものである。ＩｇＧＥＬＩＳＡ
から得られた結果を第１図に示す。血清陽性であること
が判っている、４被験者および血清陰性であることが判
っている１０被験者から得られた値の間に部分的重複は
存在しなかった。陽性のカットオフとして血清陰性者か
ら得られた尿試料における平均＋標準偏差の３倍区間を
用いると、血清陽性者は全て陽性であった。
試験数胃腸症状を示す確立し
たカンビ ２ｇ／２９ ９６．６０バクター・ピロリ感
染および 胃炎の患者（培養または染色され た組織片における特有の生物の 同定により確認） 確立したカンピロバクタ−・ピ ２８／２９ ９６．６
０り感染および胃炎にり患した 無症候者 確立した十二指腸潰瘍患者 ４５／４５ １００．
０訃胞 確立したカンピロバクタ−・ピ ３／６１ ４．９０
り感染にり患していない無痛 状者 無症候の子供 Ｑ／４Ｑ Ｑ、（１ 実施例３ カンピロバクター・ピロリに対する血清抗体を有する者
の尿におけるカンピロバクター・ピロリに対するＩｇＧ
抗体 カンピロバクター・ピロリに対する血清抗体を有するこ
とが判っている者（実施例１の血清試験により測定）か
ら得られた尿を評価することにより、特定のＩｇＧ抗体
が尿中に検出され得るか否かを測定した。使用された方
法は実施例１の方法と同じであるが、ただし、ＩＮ水酸
化ナトリウムを用いて尿試料のｐ）ｌを７．４に中和し
、この試料１００μｅを各マイクロタイター・ウェルに
加えた。被験者および尿希釈物の水和状態における差異
を説明するため、尿試料のクレアチニン濃度を測定し、
ＥＬ Ｉ ＳＡでの光学密度をクレアチニン濃度で除し
た比率として結果を表した。これは、尿濃度の変動に関
係無く検定を標準化するものである。ＩｇＧＥＬＩＳＡ
から得られた結果を第１図に示す。血清陽性であること
が判っている、４被験者および血清陰性であることが判
っている１０被験者から得られた値の間に部分的重複は
存在しなかった。陽性のカットオフとして血清陰性者か
ら得られた尿試料における平均＋標準偏差の３倍区間を
用いると、血清陽性者は全て陽性であった。
いき位階性指標（光学密度を１０００倍し、次いでＨ／
ｄ（ｌによるクレアチニン濃度で積を除することにより
計算された単位による）は、２．６単位であった。
ｄ（ｌによるクレアチニン濃度で積を除することにより
計算された単位による）は、２．６単位であった。
実施例４
ウェスタン・プロット検定
試験血清のウェスタン・プロット分析は以下の要領で行
なわれた。実施例１−３と同様の音波処理物のプールを
、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の存在下１０％ポ
リアクリルアミド・スラブ・ゲル電気泳動により分画し
た。バーネットにより修正された［［アナリティカル・
バイオケミストリーＪ（Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、
）、１１２：１９５−２０３（１９８１）］］ｌ−ウビ
ンの方法［「ブロンーディングズ・オブーザ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンシーズｊ（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔ’ １． Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）、７６：４
３５０−５４（１９７９）］に従い、ゲル上のバンドは
ニトロセルロース・シートへＴｉ気り動により移された
。次いで、ストリップ固相酵素免疫測定法を行なった。
なわれた。実施例１−３と同様の音波処理物のプールを
、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の存在下１０％ポ
リアクリルアミド・スラブ・ゲル電気泳動により分画し
た。バーネットにより修正された［［アナリティカル・
バイオケミストリーＪ（Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、
）、１１２：１９５−２０３（１９８１）］］ｌ−ウビ
ンの方法［「ブロンーディングズ・オブーザ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンシーズｊ（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔ’ １． Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）、７６：４
３５０−５４（１９７９）］に従い、ゲル上のバンドは
ニトロセルロース・シートへＴｉ気り動により移された
。次いで、ストリップ固相酵素免疫測定法を行なった。
簡単に述べると、５ＤＳ−ＰＡＧＥ後、電極緩衝液（１
９２ミリモルのグリシン、２５ミリモルのトリス塩基、
２０％メタノール）に浸しておいたニトロセルロース紙
（ＮＣＰ）でゲルを被覆した。
９２ミリモルのグリシン、２５ミリモルのトリス塩基、
２０％メタノール）に浸しておいたニトロセルロース紙
（ＮＣＰ）でゲルを被覆した。
電気プロッティング・スポンジを脱イオン水でリンスし
、次いで電極緩衝液により飽和させた。ゲルをスポンジ
上に置いた後、ＮＣＰをゲル上に載せ、次いで第２のス
ポンジを被せた。このサンドイッチを電気プロッティン
グ装置中に置き、蛋白質を１８時間１００ｍＡで電気泳
動にかけた。ＮＣＰを０．０５％トゥイーンー８０含有
はう酸緩液液（ｐＨ８、０）中でリンスし、次いでほう
酸緩衝液中３％の脱脂粉乳と室温で１時間インキュベー
ションした。はう酸緩衝液中でリンス後、ＮＣＰを多重
バンドを含む垂直ストリップに切断し、各ストリップを
、３％脱脂粉乳含有はう酸緩衝液中試験血清試料の１＋
４００希釈物中２５℃で４時間インキュベーションした
。１％脱脂粉乳含有はう酸緩液液による１時間洗浄を３
回行った後、ＮＣＰストリップを、１％脱脂粉乳はう酸
緩衝液中１ ：５０００に希釈したペルオキシダーゼ・
コンジュゲートうさぎ抗ヒトＩｇＧと２時間２５℃でイ
ンキュベーションした。はう酸緩液液による２０分洗浄
を３回行った後、反応生成物が最適状態で展開されるま
で、ＮＣＰストリップをＤＡ、Ｂ溶液（５０ミリモルの
トリス、０．０２５％ジアミノベンツノンおよび２滴の
過酸化水素を含む）中に５〜ＩＯ分間入れた。水道水で
ストリップを洗浄することにより反応を止めた。ストリ
ップを視覚検査により読み取った。
、次いで電極緩衝液により飽和させた。ゲルをスポンジ
上に置いた後、ＮＣＰをゲル上に載せ、次いで第２のス
ポンジを被せた。このサンドイッチを電気プロッティン
グ装置中に置き、蛋白質を１８時間１００ｍＡで電気泳
動にかけた。ＮＣＰを０．０５％トゥイーンー８０含有
はう酸緩液液（ｐＨ８、０）中でリンスし、次いでほう
酸緩衝液中３％の脱脂粉乳と室温で１時間インキュベー
ションした。はう酸緩衝液中でリンス後、ＮＣＰを多重
バンドを含む垂直ストリップに切断し、各ストリップを
、３％脱脂粉乳含有はう酸緩衝液中試験血清試料の１＋
４００希釈物中２５℃で４時間インキュベーションした
。１％脱脂粉乳含有はう酸緩液液による１時間洗浄を３
回行った後、ＮＣＰストリップを、１％脱脂粉乳はう酸
緩衝液中１ ：５０００に希釈したペルオキシダーゼ・
コンジュゲートうさぎ抗ヒトＩｇＧと２時間２５℃でイ
ンキュベーションした。はう酸緩液液による２０分洗浄
を３回行った後、反応生成物が最適状態で展開されるま
で、ＮＣＰストリップをＤＡ、Ｂ溶液（５０ミリモルの
トリス、０．０２５％ジアミノベンツノンおよび２滴の
過酸化水素を含む）中に５〜ＩＯ分間入れた。水道水で
ストリップを洗浄することにより反応を止めた。ストリ
ップを視覚検査により読み取った。
第５図は、これらの実験結果を図示したものである。ス
トリップＡは、ヒト抗体の不在下で３％脱脂粉乳含有は
う酸緩液液のみとインキュベーションしたものである。
トリップＡは、ヒト抗体の不在下で３％脱脂粉乳含有は
う酸緩液液のみとインキュベーションしたものである。
ストリップＢは、カンピロバクター・ピロリ感染にも胃
炎にちり患していない胃腸症状を示す患者から得られた
血清とインキュベーションしたものである。ストリップ
Ｃは、カンピロバクター・ピロリにも胃炎にちり患して
いない胃腸症状を示す別の患者から得られた血清とイン
キュベーションしたものである。ストリップＤは、消化
性潰瘍患者から得られた血清とインキュベーションした
ものである。ストリップＥは、第２の消化性潰瘍信者か
ら得られた血清とインキュベーションしたものである。
炎にちり患していない胃腸症状を示す患者から得られた
血清とインキュベーションしたものである。ストリップ
Ｃは、カンピロバクター・ピロリにも胃炎にちり患して
いない胃腸症状を示す別の患者から得られた血清とイン
キュベーションしたものである。ストリップＤは、消化
性潰瘍患者から得られた血清とインキュベーションした
ものである。ストリップＥは、第２の消化性潰瘍信者か
ら得られた血清とインキュベーションしたものである。
ストリップＦは、内視鏡（胃挿管法）によりカンピロバ
クター・ピロリ感染および胃炎の両方にり患しているこ
とが判明した（この場合、生検および培養が胃炎および
生物体の存在を示した）胃腸症状を示す患者から得られ
た血清とインキュベーションしたものである。
クター・ピロリ感染および胃炎の両方にり患しているこ
とが判明した（この場合、生検および培養が胃炎および
生物体の存在を示した）胃腸症状を示す患者から得られ
た血清とインキュベーションしたものである。
ストリップＧは、カンピロバクター・ピロリおよび胃炎
の両方にり患していることが判明した胃腸症状を示す別
の患者から得られた血清とインキュベーションしたもの
である。ストリップＨは、カンピロバクター・ピロリ感
染および胃炎の両方にりＩオしていることが判明した無
症候者から得られた血清とインキュベーションしたもの
である。ストリップ■は、カンピロバクター・ピロリ感
染および胃炎の両方にり患していることが判明した別の
無症候者から得られた血清とインキュベーションしたも
のである。
の両方にり患していることが判明した胃腸症状を示す別
の患者から得られた血清とインキュベーションしたもの
である。ストリップＨは、カンピロバクター・ピロリ感
染および胃炎の両方にりＩオしていることが判明した無
症候者から得られた血清とインキュベーションしたもの
である。ストリップ■は、カンピロバクター・ピロリ感
染および胃炎の両方にり患していることが判明した別の
無症候者から得られた血清とインキュベーションしたも
のである。
実施例５
反応の特異性を調べるため、カンピロバクター・ピロリ
細胞を他の病原性生物の細胞と比較分析した。使用され
た検定法は、カンピロバクター・ピロリまたは対照細胞
とカンピロバクター・ピロリＥＬ Ｉ ＳＡにおける既
知陽性血清とのブレインキュベーションの結果、光学密
度水数が顕著に減少するか否かを測定するものであった
。使用された血清は、ＩｇＡＳ ＩｇＧおよびＩｇＭＥ
ＬＩＳＡにおいて高い値を有するカンピロバクター・ピ
ロリ感染者からのプールであった。プールされた血清は
、蒸留プロピレングリコールモノグリセリド、蒸留モノ
グリセリドおよびステアリルラクチル酸ナトリウム、親
水性エトキンル化ソルビタンモノエステル、マルトデキ
ストラン、レシチン、モノグリセリドもしくはジグリセ
リドと混合、またはカンピロバクター・ピロリ、エシェ
リヒア・コリ（Ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、カ
ンピロバクタ−・フェラス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ ｆｅｔｕｓ）もしくはカンピロバクタ−・ジェジュ
ニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）の全
細胞により混合吸収させた。ｌプレートにおける一夜培
養からの生長細菌を採取し、細胞を蒸留水に信局し、滅
菌蒸留水で２回洗浄し、次いでプールしたヒト血清１．
０酎と混合し、３７℃で４５分間インキュベーションし
た。細菌信局液に対する抗体を５分間１２０００Ｘｇで
の遠心分離により除去した。各吸収後ＥＬ Ｉ ＳＡ測
定用に１００μＱアリコートを取った後、上清を５回再
吸収させた。未吸収血清対照を同じインキュベーション
および遠心分離条件に暴露した。カンピロバクター・ピ
ロリ細胞と陽性血清プールのプレインキュベーンヨンに
より、３種の免疫グロブリン全てにおする光学密度は顕
著に減少した。カンピロバクタ−・ジェジュニ、カンピ
ロバクタ−・フェラスまたはエシェリヒア・コリによる
プールの吸収の結果、ＩｇＡ（第３図）およびＩｇＧＥ
ＬＩＳＡ（第４図）における光学密度は最少限の減少を
示した。
細胞を他の病原性生物の細胞と比較分析した。使用され
た検定法は、カンピロバクター・ピロリまたは対照細胞
とカンピロバクター・ピロリＥＬ Ｉ ＳＡにおける既
知陽性血清とのブレインキュベーションの結果、光学密
度水数が顕著に減少するか否かを測定するものであった
。使用された血清は、ＩｇＡＳ ＩｇＧおよびＩｇＭＥ
ＬＩＳＡにおいて高い値を有するカンピロバクター・ピ
ロリ感染者からのプールであった。プールされた血清は
、蒸留プロピレングリコールモノグリセリド、蒸留モノ
グリセリドおよびステアリルラクチル酸ナトリウム、親
水性エトキンル化ソルビタンモノエステル、マルトデキ
ストラン、レシチン、モノグリセリドもしくはジグリセ
リドと混合、またはカンピロバクター・ピロリ、エシェ
リヒア・コリ（Ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、カ
ンピロバクタ−・フェラス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅ
ｒ ｆｅｔｕｓ）もしくはカンピロバクタ−・ジェジュ
ニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）の全
細胞により混合吸収させた。ｌプレートにおける一夜培
養からの生長細菌を採取し、細胞を蒸留水に信局し、滅
菌蒸留水で２回洗浄し、次いでプールしたヒト血清１．
０酎と混合し、３７℃で４５分間インキュベーションし
た。細菌信局液に対する抗体を５分間１２０００Ｘｇで
の遠心分離により除去した。各吸収後ＥＬ Ｉ ＳＡ測
定用に１００μＱアリコートを取った後、上清を５回再
吸収させた。未吸収血清対照を同じインキュベーション
および遠心分離条件に暴露した。カンピロバクター・ピ
ロリ細胞と陽性血清プールのプレインキュベーンヨンに
より、３種の免疫グロブリン全てにおする光学密度は顕
著に減少した。カンピロバクタ−・ジェジュニ、カンピ
ロバクタ−・フェラスまたはエシェリヒア・コリによる
プールの吸収の結果、ＩｇＡ（第３図）およびＩｇＧＥ
ＬＩＳＡ（第４図）における光学密度は最少限の減少を
示した。
しかしながら、ＩｇＭ ＥＬ Ｉ ＳＡ（第５図）の場
合、同種および異種生物体による吸収の結果、阻害レベ
ルの多様性は低かった。これらの結果は、ＩｇＡおよび
ＩｇＧにおいて検出された抗原が、ＩｇＭＥＬ Ｉ Ｓ
Ａにおいて検出された抗原よりもカンピロバクター・ピ
ロリに対する特異性が高いことを示す。
合、同種および異種生物体による吸収の結果、阻害レベ
ルの多様性は低かった。これらの結果は、ＩｇＡおよび
ＩｇＧにおいて検出された抗原が、ＩｇＭＥＬ Ｉ Ｓ
Ａにおいて検出された抗原よりもカンピロバクター・ピ
ロリに対する特異性が高いことを示す。
カンピロバクター・ピロリ感染の血清診断におけるカン
ピロバクター・ピロリＥＬＩＳＡの特異性をさらに明確
にするため、他の対照群での抗体レベルを比較した。糞
に白血球が存在する急性細菌性腸炎患者３０名から得た
急性および回復期試料間の血清変換は存在しなかった。
ピロバクター・ピロリＥＬＩＳＡの特異性をさらに明確
にするため、他の対照群での抗体レベルを比較した。糞
に白血球が存在する急性細菌性腸炎患者３０名から得た
急性および回復期試料間の血清変換は存在しなかった。
これらの中には急性カンピロバクタ−・ジェジュニに感
染した患者１２名が含まれ、各々カンピロバクタ−・ジ
ェジュニ抗原に血清変換していた。
染した患者１２名が含まれ、各々カンピロバクタ−・ジ
ェジュニ抗原に血清変換していた。
実施例６
５種の菌株プールの代わりの検定用抗原としての単一カ
ンピロバクター・ピロリ味の使用。
ンピロバクター・ピロリ味の使用。
実施例１の記載と全く同様に株８４−１８３（ＡＴＣＣ
５３７２６）を処理した。しかしながら、この検定を確
立するため、５種の菌株からの音波処理物をプールして
ｌウェル当たり１．０μ９の蛋白質濃度を達成する代わ
りに、株８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６）由来の音
波処理物をｌウェル当たり１．０μ９の濃度で単独使用
した。標準５株の抗原を使用した検定および単一抗原を
使用した検定に関する比較結果を第３表に示す。
５３７２６）を処理した。しかしながら、この検定を確
立するため、５種の菌株からの音波処理物をプールして
ｌウェル当たり１．０μ９の蛋白質濃度を達成する代わ
りに、株８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６）由来の音
波処理物をｌウェル当たり１．０μ９の濃度で単独使用
した。標準５株の抗原を使用した検定および単一抗原を
使用した検定に関する比較結果を第３表に示す。
第３表
５種菌株音波処理物（ｓ−Ａｇ）と単一株８４１８３（
１−Ａｇ）の音波処理物を用いた場合におけるカンピロ
バクター・ピロリ血清ＥＬＩ ＳＡの診断効率の対比。
１−Ａｇ）の音波処理物を用いた場合におけるカンピロ
バクター・ピロリ血清ＥＬＩ ＳＡの診断効率の対比。
陽性であることが判明した血清の数
被験患者
国 玖
既知ｌｓ性ｅ１４ １４ １４１４ １４ａ
９抗原として５種のカンピロバクター・ピロリ味を用い
た標準検定。陽性いき値として光学密度は０．９１０よ
り犬。
９抗原として５種のカンピロバクター・ピロリ味を用い
た標準検定。陽性いき値として光学密度は０．９１０よ
り犬。
ｂ、抗原として単一カンピロバクター・ピロリ味（８４
−１８３）を用いた比較検定。陽性いき値として光学密
度は０．７００より大。
−１８３）を用いた比較検定。陽性いき値として光学密
度は０．７００より大。
Ｃ１抗原として５種のカンピロバクター・ピロリ味を用
いた標準検定。陽性いき値として光学密度は０．４７０
より大。
いた標準検定。陽性いき値として光学密度は０．４７０
より大。
ｄ、抗原として単一カンピロバクター・ピロリ味（８４
−１８３）を用いた比較検定。陽性いき値として光学密
度は０．４７０より大。
−１８３）を用いた比較検定。陽性いき値として光学密
度は０．４７０より大。
ｅ、これらの患者の場合、組織検査において組織にカン
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ｆ、これらの患者の場合、組織または培養にカンピロバ
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にらり患してい
なかった。
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にらり患してい
なかった。
これらの結果は、ある種の保存抗原を有する単一カンピ
ロバクター・ピロリ味を選ぶと、プール抗原を使用した
場合と類似または同一の診断効率を有する検定が開発さ
れ得ることを示している。
ロバクター・ピロリ味を選ぶと、プール抗原を使用した
場合と類似または同一の診断効率を有する検定が開発さ
れ得ることを示している。
実施例７
５菌抹プールの代わりの検定用抗原としての精製カンピ
ロバクター・ピロリ鞭毛の使用。
ロバクター・ピロリ鞭毛の使用。
ダラム陰性菌の鞭毛は、普通、感染した宿主に一般に抗
体を産生させる重要な表面抗原を有する。
体を産生させる重要な表面抗原を有する。
これらの抗原の中で、カンピロバクター・ピロリ感染者
が反応している抗原に事実土倉まれるものがあるか否か
を測定するため、鞭毛を精製してさらに試験を行った。
が反応している抗原に事実土倉まれるものがあるか否か
を測定するため、鞭毛を精製してさらに試験を行った。
実施例１の記載と全く同様に株８４−１８２（ＡＴＣＣ
５３７２５）を生長させた。細胞を滅菌蒸留水中プレー
トから採取した後、懸濁液を２０分間３０００Ｘｇでの
遠心分離にかけた。上清を吸引し、沈澱物を０．１モル
のトリス−ＨＣｌ２（ｐＨ７゜４）に再懸関することに
より、４５０ナノメートル設定での光学密度を１．５と
した。この懸濁液を、４５秒間中高強度でのビルチス・
ブレンジーにおいて０６Ｃで通すことにより処理した。
５３７２５）を生長させた。細胞を滅菌蒸留水中プレー
トから採取した後、懸濁液を２０分間３０００Ｘｇでの
遠心分離にかけた。上清を吸引し、沈澱物を０．１モル
のトリス−ＨＣｌ２（ｐＨ７゜４）に再懸関することに
より、４５０ナノメートル設定での光学密度を１．５と
した。この懸濁液を、４５秒間中高強度でのビルチス・
ブレンジーにおいて０６Ｃで通すことにより処理した。
これは、カンピロバクタ一種から鞭毛を剃る方法である
［ブレーザー等、［インフェクション・アンド・イミユ
ニティ−Ｊ（ｌｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ）、！９８６．５３：４７−５２］。次いで、こ
の懸濁液を室温で１０分間１２０００Ｘｇでの遠心分離
にかけることにより、細胞および細胞層を沈澱させた。
［ブレーザー等、［インフェクション・アンド・イミユ
ニティ−Ｊ（ｌｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ）、！９８６．５３：４７−５２］。次いで、こ
の懸濁液を室温で１０分間１２０００Ｘｇでの遠心分離
にかけることにより、細胞および細胞層を沈澱させた。
次いで、上清を５℃で６０分間５’５０００Ｘｇでの遠
心分離にかけ、剃られた鞭毛を沈降させた。この沈澱物
を４℃でトリス緩衝液に再懸濁し、蛋白質−度を測定し
た。ＥＬ Ｉ ＳＡを確立するために、この調製物を１
マイクロタイター・プレート・ウェル当たり１００ｎ９
の蛋白質農産で用いた。実施例１の記載と全く同じ要領
で、検定における次の工程を行った。標準５株抗原゛を
使用した場合および鞭毛調製物を使用した場合のＩｇＧ
検定間の比較結果を第４表に示す。
心分離にかけ、剃られた鞭毛を沈降させた。この沈澱物
を４℃でトリス緩衝液に再懸濁し、蛋白質−度を測定し
た。ＥＬ Ｉ ＳＡを確立するために、この調製物を１
マイクロタイター・プレート・ウェル当たり１００ｎ９
の蛋白質農産で用いた。実施例１の記載と全く同じ要領
で、検定における次の工程を行った。標準５株抗原゛を
使用した場合および鞭毛調製物を使用した場合のＩｇＧ
検定間の比較結果を第４表に示す。
寄託菌株以外の株を先入観の伴わない方式で選択し、前
記と同様に鞭毛組成物を調製した。これらの組成物をｌ
ウェル当たり１００および５００ｎｇの濃度で試験し、
結果を第４表に示す。
記と同様に鞭毛組成物を調製した。これらの組成物をｌ
ウェル当たり１００および５００ｎｇの濃度で試験し、
結果を第４表に示す。
第４表
抗原として５株音波処理物と精製鞭毛調製物を用いた場
合におけるカンピロバクター・ピロリ血清１ｇＧＥＬＩ
ＳＡの診断効率の対比。
合におけるカンピロバクター・ピロリ血清１ｇＧＥＬＩ
ＳＡの診断効率の対比。
ＩｇＧに対して陽性であることが判明
した血清の数
分離鞭毛調製物 鞭毛調製物
被験患者
匡 玖
既知陽性ｅ１４１４ １４ １４ １３
ａ、抗原として５種のカンピロバクター・ピロリ株を用
いた標準検定。陽性いき値として光学密度は０．９１０
より大。
ａ、抗原として５種のカンピロバクター・ピロリ株を用
いた標準検定。陽性いき値として光学密度は０．９１０
より大。
ｂ、抗原として寄託菌株８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７
２５）から得られた精製カンピロバクター・ピロリ鞭毛
を１０Ｏｎ？／ウエルの濃度で用いた比較検定。陽性い
き値として光学密度は０．０８０より大。
２５）から得られた精製カンピロバクター・ピロリ鞭毛
を１０Ｏｎ？／ウエルの濃度で用いた比較検定。陽性い
き値として光学密度は０．０８０より大。
Ｃ６抗原として非寄託選択菌株から得られた精製カンピ
ロバクター・ピロリ鞭毛を５００ ｎ９／ウエルの濃度
で用いた比較検定。陽性いき値として光学密度は０．０
９０より大。
ロバクター・ピロリ鞭毛を５００ ｎ９／ウエルの濃度
で用いた比較検定。陽性いき値として光学密度は０．０
９０より大。
ｄ、抗原として非寄託選択菌株から得られた精製カンピ
ロバクター・ピロリ鞭毛を１００ ｎ９／ウエルの濃度
で用いた比較検定。陽性いき値として光学密度は０．０
９０より大。
ロバクター・ピロリ鞭毛を１００ ｎ９／ウエルの濃度
で用いた比較検定。陽性いき値として光学密度は０．０
９０より大。
ｅ、これらの患者の場合、組織検査において組織にカン
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ｒ、これらの患者の場合、組織または培養にカンピロバ
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にちり徹してい
なかった。
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にちり徹してい
なかった。
実施例８
５株プールの代わりの検定用抗原としてのカンピロバク
ター・ピロリ鞭毛のプールしたゲルろ過分画の使用。
ター・ピロリ鞭毛のプールしたゲルろ過分画の使用。
カンピロバクター・ピロリ感染者が反応する抗原がどの
カンピロバクター・ピロリ鞭毛関連抗原であるかを測定
するために、先入観を伴わない方式で選択されたカンピ
ロバクター・ピロリ株（実施例７と同様の株）由来の鞭
毛調製物を、ゲルろ過クロマトグラフィー・カラムに通
すことにより分画した。使用されたカラムは、ファーマ
シア・ファースト・プロティン・リキッド・クロマトグ
ラフィツク（ＦＰＬＣ）装置におけるスーパローズ１２
カラム（ファーマンア・ラボラトリーズ、ニューシャー
シー、ピスキャタウエイ）であった。鞭毛調製物を２０
ミリモルのトリス緩衝液（ｐＨ８。
カンピロバクター・ピロリ鞭毛関連抗原であるかを測定
するために、先入観を伴わない方式で選択されたカンピ
ロバクター・ピロリ株（実施例７と同様の株）由来の鞭
毛調製物を、ゲルろ過クロマトグラフィー・カラムに通
すことにより分画した。使用されたカラムは、ファーマ
シア・ファースト・プロティン・リキッド・クロマトグ
ラフィツク（ＦＰＬＣ）装置におけるスーパローズ１２
カラム（ファーマンア・ラボラトリーズ、ニューシャー
シー、ピスキャタウエイ）であった。鞭毛調製物を２０
ミリモルのトリス緩衝液（ｐＨ８。
０）に懸濁した。流速は０ 、３ ＲＱ／分であり、１
００分間にわたって分画を集めた。初回ピークは２０な
いし３０分間にカラムを通過し、他のピークは６０分後
に観察された。初回ピークの内容の分析は、５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ、次いで銀染色によるものであった。この感受性
株を用いると、３バンドのみがピークを示す分画におい
て分離された。これらは６３０００．５７０００および
３１０００ダルトンにおいて移動した。ＥＬ Ｉ ＳＡ
を確立するために、これらの分画をプールし、この調製
物を１マイクロタイター・プレート・ウェル当たり＋０
０ｎｇの蛋白質濃度で使用した。実施例１の記載と全く
同じ要領でこの検定における次の工程を行った。標準５
株抗原を使用した場合および鞭毛調製物のゲルろ過分画
を使用した場合のＩｇＧ検定間の比較結果を第５表に示
す。
００分間にわたって分画を集めた。初回ピークは２０な
いし３０分間にカラムを通過し、他のピークは６０分後
に観察された。初回ピークの内容の分析は、５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ、次いで銀染色によるものであった。この感受性
株を用いると、３バンドのみがピークを示す分画におい
て分離された。これらは６３０００．５７０００および
３１０００ダルトンにおいて移動した。ＥＬ Ｉ ＳＡ
を確立するために、これらの分画をプールし、この調製
物を１マイクロタイター・プレート・ウェル当たり＋０
０ｎｇの蛋白質濃度で使用した。実施例１の記載と全く
同じ要領でこの検定における次の工程を行った。標準５
株抗原を使用した場合および鞭毛調製物のゲルろ過分画
を使用した場合のＩｇＧ検定間の比較結果を第５表に示
す。
第５表
抗原として５株音波処理物と鞭毛調製物のゲルろ過分画
を用いた場合におけるカンピロバクター・ピロリ血清１
ｇＧＥＬＩＳＡの診断効率の対比。
を用いた場合におけるカンピロバクター・ピロリ血清１
ｇＧＥＬＩＳＡの診断効率の対比。
ＩｇＧに対して陽性であることが判明
した血清の数
分離鞭毛調製物
鞭毛調製物
被験患者
群 玖
既知陽性ｃ１４ １４ １４ａ、抗原とし
て５種のカンピロバクター・ピロリ株を用いた標準検定
。陽性いき値として光学密度は０．９１０より大。
て５種のカンピロバクター・ピロリ株を用いた標準検定
。陽性いき値として光学密度は０．９１０より大。
ｂ、ゲルろ過クロマトグラフィー・カラムを通過させた
カンピロバクター・ピロリ鞭毛の選択分画を１ｏｏｎ９
／ウエルの濃度で用いた比較検定。
カンピロバクター・ピロリ鞭毛の選択分画を１ｏｏｎ９
／ウエルの濃度で用いた比較検定。
陽性いき値として光学密度は０．１００より大。
Ｃ９これらの患者の場合、組織検査において組織にカン
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ピロバクター・ピロリの存在が見出され、培養からはカ
ンピロバクター・ピロリが単離され、生検によると胃炎
にり患していた。
ｄ、これらの患者の場合、組織または培養にカンピロバ
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にもり患してい
なかった。
クター・ピロリが存在しておらず、胃炎にもり患してい
なかった。
実施例９
カンピロバクター・ピロリに対する血清抗体の持続性。
カンピロバクター・ピロリに対する高レベルのＩｇＡま
たはＩｇＧ血清抗体を有する５名の被験者を別の試験用
に選択した。最初の評価から少なくとも１年（平均１．
２５年）後に各被験者から第２の試料を得て再試験を行
った。第１および第２血清における平均抗体レベルを第
６表に示す。
たはＩｇＧ血清抗体を有する５名の被験者を別の試験用
に選択した。最初の評価から少なくとも１年（平均１．
２５年）後に各被験者から第２の試料を得て再試験を行
った。第１および第２血清における平均抗体レベルを第
６表に示す。
第６表
５名の血清陽性者におけるカンピロバクター・ピロリに
対する血清抗体の持続性。
対する血清抗体の持続性。
カンピロバクター・ピロリＥＬ
Ｉ ｇＧ １．１２±０．２７ １．１
８±０．３５ｇＡ １．０４±０．２７ 【 ０４±０．３３ ａ、平均上平均値の標準誤差。
８±０．３５ｇＡ １．０４±０．２７ 【 ０４±０．３３ ａ、平均上平均値の標準誤差。
ｂ、血清ｌの少なくとも１年後に得られた血清２゜
５名全員のレベルは依然として安定した状態であった。
この間に血清陽性から血清陰性に変換した血清は無かっ
た。
た。
実施例！０
カンピロバクター・ピロリにより攻撃されたボランティ
アにおける血清変換。
アにおける血清変換。
カンピロバクター・ピロリを摂取したヒトボランティア
は、無塩酸症を伴う急性胃炎の症状を現した［モリスお
よびニコルワン、［アメリカン・ジャーナル・オブ・ガ
ストロエンテロロノーＪ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏ「Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、１
９８７．８２：１９２−１９９参照］。その後、症状は
明確となったが、慢性胃炎を生じ、カンピロバクター・
ピロリ感染は持続していた。系列血清試料を得、カンピ
ロバクター・ピロリに対する抗体に関して試験した。カ
ンピロバクター・ピロリ特異性１ｇＧおよびＩｇＡに関
する検定を実施例１および２の記載と全く同じ要領で行
った。ＩｇＭに関する検定も実施例１と全く同様に行っ
たが、ただし、血清を１ ：４００に希釈して非特異的
反応性を減少させ、ＩｇＭに特異的なペルオキシダーゼ
・コンツユゲートやぎ抗体によりにより血清ＩｇＭを検
出し、反応を６０分間行わせた。結果を下記第７表に示
す。［ｇＡおよびＩｇＧクラスにおける血清変換は、実
験的攻撃の６０ないし４３１日後の間に発生した。１８
Ｍ血清変換基準は具体的には定義されなかったが、攻撃
の８ないし２２日後の間に光学密度が約４倍増加し、徐
々に下降することが重要である。カンピロバクター・ピ
ロリ特異性１ｇＭの増加は、感染経過においてＩｇＡま
たはＩｇＧ応答よりもかなり早いことは注目すべき点で
ある。
は、無塩酸症を伴う急性胃炎の症状を現した［モリスお
よびニコルワン、［アメリカン・ジャーナル・オブ・ガ
ストロエンテロロノーＪ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏ「Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、１
９８７．８２：１９２−１９９参照］。その後、症状は
明確となったが、慢性胃炎を生じ、カンピロバクター・
ピロリ感染は持続していた。系列血清試料を得、カンピ
ロバクター・ピロリに対する抗体に関して試験した。カ
ンピロバクター・ピロリ特異性１ｇＧおよびＩｇＡに関
する検定を実施例１および２の記載と全く同じ要領で行
った。ＩｇＭに関する検定も実施例１と全く同様に行っ
たが、ただし、血清を１ ：４００に希釈して非特異的
反応性を減少させ、ＩｇＭに特異的なペルオキシダーゼ
・コンツユゲートやぎ抗体によりにより血清ＩｇＭを検
出し、反応を６０分間行わせた。結果を下記第７表に示
す。［ｇＡおよびＩｇＧクラスにおける血清変換は、実
験的攻撃の６０ないし４３１日後の間に発生した。１８
Ｍ血清変換基準は具体的には定義されなかったが、攻撃
の８ないし２２日後の間に光学密度が約４倍増加し、徐
々に下降することが重要である。カンピロバクター・ピ
ロリ特異性１ｇＭの増加は、感染経過においてＩｇＡま
たはＩｇＧ応答よりもかなり早いことは注目すべき点で
ある。
第７表
カンピロバクター・ピロリにより攻撃されたボランティ
アにおけるカンピロバクター・ピロリ抗原に対する血清
変換。
アにおけるカンピロバクター・ピロリ抗原に対する血清
変換。
ｑ旦玖 １玖−−すを−↓又Ａ Ｉｇ’、μ８
５ ０．１５４ ０．１１４ ０
．１６３１１ ８ ０．１１１ ０゜
１３ｇ ０．２２７１８ １５ ０
．１８５ ０．１？９ ０．５９１２２
１９ ０．０４９ ０．１６５ ０．
６４７３３ ３０ ０．１５７ ０．
１７７ ０．５２４６０ ５７ ０．
１３８ ０．１４５ ０ ４４５４３１
４２８ ＞２．０００ ０．７２８ ０
．１７１５８１ ５７８ ＞２．０００
０．４７６ ０．２２３ａ、示された各値は３回
測定した平均である。
５ ０．１５４ ０．１１４ ０
．１６３１１ ８ ０．１１１ ０゜
１３ｇ ０．２２７１８ １５ ０
．１８５ ０．１？９ ０．５９１２２
１９ ０．０４９ ０．１６５ ０．
６４７３３ ３０ ０．１５７ ０．
１７７ ０．５２４６０ ５７ ０．
１３８ ０．１４５ ０ ４４５４３１
４２８ ＞２．０００ ０．７２８ ０
．１７１５８１ ５７８ ＞２．０００
０．４７６ ０．２２３ａ、示された各値は３回
測定した平均である。
ｂ、血清希釈率はｌ：８００である。陽性測定いき値は
０．９１０である。
０．９１０である。
Ｃ１血清希釈率はＩ：５０である。陽性測定いき値は０
．４７０である。
．４７０である。
ｄ、血清希釈率は１ ：４００である。陽性いき値は確
立されなかったが、攻撃の２２日後に得られた血清は、
それ以前の試料よりも約４倍の増加を示す。
立されなかったが、攻撃の２２日後に得られた血清は、
それ以前の試料よりも約４倍の増加を示す。
実施例１１
数種の検出技術を用いる抗体検出用のカンピロバクター
・ピロリ特異性試験キットを構築した。
・ピロリ特異性試験キットを構築した。
抗体検出用試験キットの一つは、複数のウェルを含む区
画された封入体、カンピロバクター・ピロリ抗原により
使用前に被覆されたプレート並びにペルオキシダーゼ標
識やぎ抗ヒトＩｇＧおよび０゜００５％過酸化水素含有
マキルバイン緩衝液にＡＢＴＳを含む変色インジケータ
ーから成る酵素検出用ＥＬ Ｉ ＳＡ材料で構成される
ものであった。
画された封入体、カンピロバクター・ピロリ抗原により
使用前に被覆されたプレート並びにペルオキシダーゼ標
識やぎ抗ヒトＩｇＧおよび０゜００５％過酸化水素含有
マキルバイン緩衝液にＡＢＴＳを含む変色インジケータ
ーから成る酵素検出用ＥＬ Ｉ ＳＡ材料で構成される
ものであった。
当然、他の酵素および展開剤も使用され得た。例えば、
アルカリ性ホスファターゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＧは、ノ
エタノールアミンおよび塩化マグネシウム援＆ｍ中ｐ−
ニトロフェニルホスフェートと組み合わせて使用され得
る。
アルカリ性ホスファターゼ標識やぎ抗ヒトＩｇＧは、ノ
エタノールアミンおよび塩化マグネシウム援＆ｍ中ｐ−
ニトロフェニルホスフェートと組み合わせて使用され得
る。
ウェスタン・プロット技術を用いろ２番目の抗体検出用
試験キットは、容器、カバー、ニトロセルロース・シー
トおよびポリアクリルアミド・スラブ・ゲルで構成され
、中にドデシル硫酸ナトリウム、界面活性剤、ｐＨ修正
剤、脱脂粉乳および過酸化水素含有トリスにＤＡＢを含
む変色インジケーターを含む酵素検出用材料が存在する
ものであった。また、このウェスタン・プロット分析キ
ットは、ペルオキシダーゼ標識やぎまたはう、さぎ抗ヒ
ト免疫グロブリンおよびカンピロバクター・ピロリ抗原
の供与体を含む。
試験キットは、容器、カバー、ニトロセルロース・シー
トおよびポリアクリルアミド・スラブ・ゲルで構成され
、中にドデシル硫酸ナトリウム、界面活性剤、ｐＨ修正
剤、脱脂粉乳および過酸化水素含有トリスにＤＡＢを含
む変色インジケーターを含む酵素検出用材料が存在する
ものであった。また、このウェスタン・プロット分析キ
ットは、ペルオキシダーゼ標識やぎまたはう、さぎ抗ヒ
ト免疫グロブリンおよびカンピロバクター・ピロリ抗原
の供与体を含む。
間接免疫蛍光検定法を用いる別の抗体検出用カンピロバ
クター・ピロリ特異性試験キットは、カンピロバクター
・ピロリ抗原、ヒト試験血清、燐酸緩衝食塩水およびフ
ルオレセイン・コンジュゲートやぎ抗ヒトＩｇＧを内包
する区画された容器を含み得る。
クター・ピロリ特異性試験キットは、カンピロバクター
・ピロリ抗原、ヒト試験血清、燐酸緩衝食塩水およびフ
ルオレセイン・コンジュゲートやぎ抗ヒトＩｇＧを内包
する区画された容器を含み得る。
最後に、別種の抗体検出用カンピロバクター・ピロリ特
異性試験キットはリポソームを使用するものであり、容
器、ヒト試験血清、表面にカンピロバフタ−・ピロリ抗
原を有する蛍光マーカー（または酵素または基質）充填
リポソームおよび表面活性剤を含む。この検定では、容
器は、やぎ抗ヒ）ＩｇＧにより予め被覆された管または
ウェルであり得る。
異性試験キットはリポソームを使用するものであり、容
器、ヒト試験血清、表面にカンピロバフタ−・ピロリ抗
原を有する蛍光マーカー（または酵素または基質）充填
リポソームおよび表面活性剤を含む。この検定では、容
器は、やぎ抗ヒ）ＩｇＧにより予め被覆された管または
ウェルであり得る。
この明細書で使用されている語および記載事項は、単な
る説明として記された好ましい態様であって、当業界の
熟練者が前記特許請求の範囲により定義されたこの発明
を実践する場合に可能なこととして認めると思われる多
くの変形に対する限定を意図するものではない。
る説明として記された好ましい態様であって、当業界の
熟練者が前記特許請求の範囲により定義されたこの発明
を実践する場合に可能なこととして認めると思われる多
くの変形に対する限定を意図するものではない。
この発明は下記の態様を包含する。
（１）カンピロバクター・ピロリに対する特異抗体の存
在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピロ
リの少なくともフラグメントを含み、６３０００．５７
０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラグ
メントから成る群から選ばれる少なくとも１種のフラグ
メントを高濃度で有する組成物。
在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピロ
リの少なくともフラグメントを含み、６３０００．５７
０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラグ
メントから成る群から選ばれる少なくとも１種のフラグ
メントを高濃度で有する組成物。
（２）６３０００．５７０００．４５０００および３１
０００ダルトンのフラグメントから成る群から選ばれる
カンピロバクター・ピロリのフラグメントが、組成物の
少なくとも約５０重量％の濃度で存在する、１記載の抗
原組成物。
０００ダルトンのフラグメントから成る群から選ばれる
カンピロバクター・ピロリのフラグメントが、組成物の
少なくとも約５０重量％の濃度で存在する、１記載の抗
原組成物。
（３）抗原組成物における全カンピロバクター・ピロリ
・フラグメントの少なくとも５０％が、６３０００．５
７０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラ
グメントから成る群から選ばれるフラグメントである、
１記載の抗原組成物。
・フラグメントの少なくとも５０％が、６３０００．５
７０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラ
グメントから成る群から選ばれるフラグメントである、
１記載の抗原組成物。
（４）抗原組成物における全カンピロバクター・ピロリ
・フラグメントの少なくとも８５％が、６３０００．５
７０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラ
グメントから成る群から選ばれるフラグメントである、
ｌ記載の抗原組成物。
・フラグメントの少なくとも８５％が、６３０００．５
７０００．４５０００および３１０００ダルトンのフラ
グメントから成る群から選ばれるフラグメントである、
ｌ記載の抗原組成物。
（５）抗原組成物が、６３０００，５７０００．４５０
００および３１０００ダルトンのフラグメントから成る
群から選ばれるカンピロバクタ−・ピロりのフラグメン
ト以外の抗原を実質的に含んでいない、１記載の抗原組
成物。
００および３１０００ダルトンのフラグメントから成る
群から選ばれるカンピロバクタ−・ピロりのフラグメン
ト以外の抗原を実質的に含んでいない、１記載の抗原組
成物。
（６）組成物が６３０００の分子量を有するカンピロバ
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
（７）組成物が５７０００の分子量を有するカンピロバ
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
１記載の抗原組成物。
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
１記載の抗原組成物。
（８）組成物が４５０００の分子量を有するカンピロバ
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
（９）組成物が３１０００の分子量を有するカンピロバ
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
クター・ピロリ・フラグメントを高濃度で含んでいる、
ｌ記載の抗原組成物。
（ｌＯ）カンピロバクター・ピロリに対する特異抗体の
存在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピ
ロリの少なくともフラグメントを含み、カンピロバクタ
ー・ピロリ鞭毛の少なくともフラグメントを高濃度で含
む組成物。
存在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピ
ロリの少なくともフラグメントを含み、カンピロバクタ
ー・ピロリ鞭毛の少なくともフラグメントを高濃度で含
む組成物。
（１１）鞭毛が、組成物中の全抗原の総重傷に基づき少
なくとも約５０％の濃度で存在する、ｌＯ記載の抗原組
成物。
なくとも約５０％の濃度で存在する、ｌＯ記載の抗原組
成物。
（１２）組成物が実質的に前記鞭毛またはそのフラグメ
ント以外の抗原を含んでいない、ＩＯ記載の組成物。
ント以外の抗原を含んでいない、ＩＯ記載の組成物。
（１３）組成物が、６３０００．５７０００および３１
０００ダルトンの鞭毛フラグメントから成る群から選ば
れるフラグメントを高濃度で含む、１０記載の組成物。
０００ダルトンの鞭毛フラグメントから成る群から選ば
れるフラグメントを高濃度で含む、１０記載の組成物。
（１４）ＡＴＣＣ寄託番号５３７２２．５３７２１．５
３７２５．５３７２６および５３７２７に相当する菌株
から成る群から選ばれるカンピロバクター・ピロリの少
なくとも１株の少なくともフラグメントを含む抗原混合
物。
３７２５．５３７２６および５３７２７に相当する菌株
から成る群から選ばれるカンピロバクター・ピロリの少
なくとも１株の少なくともフラグメントを含む抗原混合
物。
（１５）前記菌株のフラグメントが、組成物の少なくと
も約５０重量％の濃度で存在する、１４記載の抗原混合
物。
も約５０重量％の濃度で存在する、１４記載の抗原混合
物。
（１６）組成物が実質的に前記菌株以外の抗原を含んで
いない、１４記載の抗原混合物。
いない、１４記載の抗原混合物。
（１７）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在
検出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において
検出可能最の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原
組成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物
がカンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメント
を含み、６３０００．５７０００．４５０００および３
１０００ダルトンのフラグメントから成る群から選ばれ
るフラグメントを高濃度で含むものである方法。
検出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において
検出可能最の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原
組成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物
がカンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメント
を含み、６３０００．５７０００．４５０００および３
１０００ダルトンのフラグメントから成る群から選ばれ
るフラグメントを高濃度で含むものである方法。
（１８）さらに、上記接触により生じる抗原／抗体複合
体の形成度合の測定および陽性指示いき値に対する前記
度合の比較工程を含む、１７記載の方法。
体の形成度合の測定および陽性指示いき値に対する前記
度合の比較工程を含む、１７記載の方法。
（１９）上記測定が、固相酵素免疫測定法、ウェスタン
・プロット技術、間接蛍光検定法およびリポソームに基
づく検定法から成る群から選ばれる技術により行なわれ
る、１８記載の方法。
・プロット技術、間接蛍光検定法およびリポソームに基
づく検定法から成る群から選ばれる技術により行なわれ
る、１８記載の方法。
（２０）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在
検出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において
検出可能量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原
組成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物
がカンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメント
を含み、カンピロバクター・ピロリ鞭毛の少なくともフ
ラグメントを高濃度で有するものである方法。
検出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において
検出可能量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原
組成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物
がカンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメント
を含み、カンピロバクター・ピロリ鞭毛の少なくともフ
ラグメントを高濃度で有するものである方法。
（２１）試験試料を、１，６．７．８．９．１０または
１３記載の固定抗原組成物の有効量と接触させることを
含むカンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在検出
方法であって、さらに抗原／抗体複合体の形成度合が陽
性指示いき値を越えるが否かを測定する段階を含む方法
。
１３記載の固定抗原組成物の有効量と接触させることを
含むカンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在検出
方法であって、さらに抗原／抗体複合体の形成度合が陽
性指示いき値を越えるが否かを測定する段階を含む方法
。
（２２）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在
検出方法であって、抗体の存在下において検出可能量の
抗原／抗体複合体の形成に有効な出の固定抗原組成物を
試験試料と接触させる工程を含む方法であり、抗原組成
物がカンピロバクタ−・ピロりの少なくとも！菌株の少
なくともフラグメントを含むものであり、さらに、固相
酵素免疫測定法およびリポソームに基づく検定法から成
る群から選ばれる技術により抗原／抗体複合体の形成度
合を測定し、陽性指示いき値に対して前記度合を比較す
る工程を含む方法。
検出方法であって、抗体の存在下において検出可能量の
抗原／抗体複合体の形成に有効な出の固定抗原組成物を
試験試料と接触させる工程を含む方法であり、抗原組成
物がカンピロバクタ−・ピロりの少なくとも！菌株の少
なくともフラグメントを含むものであり、さらに、固相
酵素免疫測定法およびリポソームに基づく検定法から成
る群から選ばれる技術により抗原／抗体複合体の形成度
合を測定し、陽性指示いき値に対して前記度合を比較す
る工程を含む方法。
（２３）陽性指示いき値が、類似陰性対照試料において
誘導された平均応答値に標準偏差の少なくとも１倍区間
を加えることにより決定される、２２記載の方法。
誘導された平均応答値に標準偏差の少なくとも１倍区間
を加えることにより決定される、２２記載の方法。
（２４）体液試料を、１．６．７．８．９．１０または
１３記載の抗原組成物の有効量と接触させ、次いで上記
接触中における抗原／抗体複合体の形成度合が陽性指示
いき値を越えるか否かを測定することを含む、胃炎また
は消化性潰瘍疾患の存在に関する臨床診断試験方法。
１３記載の抗原組成物の有効量と接触させ、次いで上記
接触中における抗原／抗体複合体の形成度合が陽性指示
いき値を越えるか否かを測定することを含む、胃炎また
は消化性潰瘍疾患の存在に関する臨床診断試験方法。
（２５）上記測定が、固相酵素免疫測定法、ウェスタン
・プロット技術、間接蛍光検定法およびリポソームに基
づく検定法から成る群から選ばれる検出方法により行な
われ、上記体液が、血液、尿、血清、涙液および唾液か
ら成る群から選ばれる、２４記載の方法。
・プロット技術、間接蛍光検定法およびリポソームに基
づく検定法から成る群から選ばれる検出方法により行な
われ、上記体液が、血液、尿、血清、涙液および唾液か
ら成る群から選ばれる、２４記載の方法。
（２６） Ｉ、６．７．８．９、ｌＯまたは１３記載の
抗原組成物で被覆されたマルチウェル・プレートおよび
前記プレートにおける抗原／抗体複合体の存在検出用材
料を含むカンピロバクター・ピロリ特異抗体の検出用診
断試験キット。
抗原組成物で被覆されたマルチウェル・プレートおよび
前記プレートにおける抗原／抗体複合体の存在検出用材
料を含むカンピロバクター・ピロリ特異抗体の検出用診
断試験キット。
（２７）検出手段が、酵素検出用ＥＬ Ｉ ＳＡ材料、
正常うさぎ血清、酵素標識抗ヒトＩｇＧおよび変色イン
ジケーターを含む、２６記載の診断試験キット。
正常うさぎ血清、酵素標識抗ヒトＩｇＧおよび変色イン
ジケーターを含む、２６記載の診断試験キット。
（２８）変色インジケーターか、２．２゛−アジノージ
（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸）、過酸化水
素およびマキルバイン援液液を含む、２７記載の診断試
験キット。
（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸）、過酸化水
素およびマキルバイン援液液を含む、２７記載の診断試
験キット。
（２９）酵素がアルカリホスファターゼであり、変色イ
ンジケーターがジェタノールアミンおよび塩化マグネシ
ウム緩衝液中にｐ−ニトロフェニルホスフェートを含む
ものである、２７記載の診断試験キット。
ンジケーターがジェタノールアミンおよび塩化マグネシ
ウム緩衝液中にｐ−ニトロフェニルホスフェートを含む
ものである、２７記載の診断試験キット。
（３０）抗ヒト抗体がＩｇＡに対して誘導される、２６
記載のキット。
記載のキット。
（３１）ニトロセルロース・シートまたはナイロン膜シ
ート、ポリアクリルアミド・スラブ・ゲル、ドデシル硫
酸ナトリウム、界面活性剤、ｐＨ修正剤、脱脂粉乳、変
色インジケーター供与体、抗ヒト免疫グロブリンおよび
１１６．７．８．９．１０または１３記載の抗原組成物
を含む、ウェスタン・プロット技術を用いるカンピロバ
クター・ピロリ特異抗体検出用カンピロバクター・ピロ
リ特異性診断試験キット。
ート、ポリアクリルアミド・スラブ・ゲル、ドデシル硫
酸ナトリウム、界面活性剤、ｐＨ修正剤、脱脂粉乳、変
色インジケーター供与体、抗ヒト免疫グロブリンおよび
１１６．７．８．９．１０または１３記載の抗原組成物
を含む、ウェスタン・プロット技術を用いるカンピロバ
クター・ピロリ特異抗体検出用カンピロバクター・ピロ
リ特異性診断試験キット。
（３２）カンピロバクター・ピロリ感染の早期検出方法
であって、試験試料を、抗体の存在下において検出可能
量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原組成物と
接触させることを含む方法であり、抗原組成物がカンピ
ロバクター・ピロリの少なくともフラグメントを含み、
６３０００．５７０００．４５０００．３１０００ダル
トンのフラグメントから成る群から選ばれるフラグメン
トを高濃度で有し、またカンピロバクター・ピロリ鞭毛
の少なくともフラグメントを有するものであり、さらに
ＩｇＭに基づく抗原／抗体複合体の形成範囲の測定段階
を含む方法。
であって、試験試料を、抗体の存在下において検出可能
量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原組成物と
接触させることを含む方法であり、抗原組成物がカンピ
ロバクター・ピロリの少なくともフラグメントを含み、
６３０００．５７０００．４５０００．３１０００ダル
トンのフラグメントから成る群から選ばれるフラグメン
トを高濃度で有し、またカンピロバクター・ピロリ鞭毛
の少なくともフラグメントを有するものであり、さらに
ＩｇＭに基づく抗原／抗体複合体の形成範囲の測定段階
を含む方法。
第１図は、カンピロバクター・ピロリに対する尿ＩｇＧ
抗体を測定することによる、カンピロバクター・ピロリ
感染に関して自涜陽性または血清陰性であることが判っ
ている人から得られた尿試料の差別を示す図である。 第２．３および４図は、それぞれ、実施例５におけるＩ
ｇＡ ＥＬＩＳＡ、ＩｇＧ ＥＬＩＳＡおよびＩｇＭＥ
ＬＩＳＡの結果を示すグラフである。 第５図は、実施例４のウェスタン・プロットの結果を示
す図である。 第６図は寄託菌株の全細胞プロフィールを示す図であり
、ストリップｌ−５は各々寄託菌株８６−６３（ＡＴＣ
Ｃ５３７２７）、８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）
、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）、８６−８６（
ＡＴＣＣ５３７２１）および８４−１８３（ＡＴＣＣ５
３７２６）を示す。 第７図は、第６図の５種の寄託菌株のリボ多糖類プロフ
ィールを示す図である（各レーンは第６図の場合と同じ
株を示す）。 第８図は寄託菌株のウェスタン・プロットを示す図であ
る。レーンＡ−Ｅは、各々寄託菌株８４１８０（ＡＴＣ
Ｃ５３７２２）、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）
、８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６）、８６−６３（
ＡＴＣＣ５３７２７）および８６−８６（ＡＴＣＣ５３
７２１）を表す。 第９図は５種の寄託菌株のウェスタン・プロットを示す
図である（各レーンは第８図の場合と同じ菌株を表す）
。 図面のイル書（内容に変更なし） 兜学芸度りレアチニン；岬ｘ １０００特許出願人 マ
ルチン・ジェイ・ブレイサー代 理 人 弁理士 青
山 葆 ほか１名光パず密曳 尤学懇度 一二Ｆ＝フ５Ｌ５− ＡＢＣＤＥＦＧＨ量 −二Ｆ＝−５−Ｅ− ｍ−ｒ！：”Ｃと１５〜 ＢＣＤ、Ｅ −二巳ｒ茫シー亀 −＝−ラ＝虱３− ＡＢＣＤε
抗体を測定することによる、カンピロバクター・ピロリ
感染に関して自涜陽性または血清陰性であることが判っ
ている人から得られた尿試料の差別を示す図である。 第２．３および４図は、それぞれ、実施例５におけるＩ
ｇＡ ＥＬＩＳＡ、ＩｇＧ ＥＬＩＳＡおよびＩｇＭＥ
ＬＩＳＡの結果を示すグラフである。 第５図は、実施例４のウェスタン・プロットの結果を示
す図である。 第６図は寄託菌株の全細胞プロフィールを示す図であり
、ストリップｌ−５は各々寄託菌株８６−６３（ＡＴＣ
Ｃ５３７２７）、８４−１８０（ＡＴＣＣ５３７２２）
、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）、８６−８６（
ＡＴＣＣ５３７２１）および８４−１８３（ＡＴＣＣ５
３７２６）を示す。 第７図は、第６図の５種の寄託菌株のリボ多糖類プロフ
ィールを示す図である（各レーンは第６図の場合と同じ
株を示す）。 第８図は寄託菌株のウェスタン・プロットを示す図であ
る。レーンＡ−Ｅは、各々寄託菌株８４１８０（ＡＴＣ
Ｃ５３７２２）、８４−１８２（ＡＴＣＣ５３７２５）
、８４−１８３（ＡＴＣＣ５３７２６）、８６−６３（
ＡＴＣＣ５３７２７）および８６−８６（ＡＴＣＣ５３
７２１）を表す。 第９図は５種の寄託菌株のウェスタン・プロットを示す
図である（各レーンは第８図の場合と同じ菌株を表す）
。 図面のイル書（内容に変更なし） 兜学芸度りレアチニン；岬ｘ １０００特許出願人 マ
ルチン・ジェイ・ブレイサー代 理 人 弁理士 青
山 葆 ほか１名光パず密曳 尤学懇度 一二Ｆ＝フ５Ｌ５− ＡＢＣＤＥＦＧＨ量 −二Ｆ＝−５−Ｅ− ｍ−ｒ！：”Ｃと１５〜 ＢＣＤ、Ｅ −二巳ｒ茫シー亀 −＝−ラ＝虱３− ＡＢＣＤε
Claims (10)
- （１）カンピロバクター・ピロリに対する特異抗体の存
在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピロ
リの少なくともフラグメントを含み、６３０００、５７
０００、４５０００および３１０００ダルトンのフラグ
メントから成る群から選ばれる少なくとも１種のフラグ
メントを高濃度で有する組成物。 - （２）カンピロバクター・ピロリに対する特異抗体の存
在検出用抗原組成物であって、カンピロバクター・ピロ
リの少なくともフラグメントを含み、カンピロバクター
・ピロリ鞭毛の少なくともフラグメントを高濃度で含む
組成物。 - （３）ＡＴＣＣ寄託番号５３７２２、５３７２１、５３
７２５、５３７２６および５３７２７に相当する菌株か
ら成る群から選ばれるカンピロバクター・ピロリの少な
くとも１株の少なくともフラグメントを含む抗原混合物
。 - （４）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在検
出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において検
出可能量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原組
成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物が
カンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメントを
含み、６３０００、５７０００、４５０００および３１
０００ダルトンのフラグメントから成る群から選ばれる
フラグメントを高濃度で含むものである方法。 - （５）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在検
出方法であって、試験試料を、抗体の存在下において検
出可能量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原組
成物と接触させることを含む方法であり、抗原組成物が
カンピロバクター・ピロリの少なくともフラグメントを
含み、カンピロバクター・ピロリ鞭毛の少なくともフラ
グメントを高濃度で有するものである方法。 - （６）試験試料を、請求項１または２記載の固定抗原組
成物の有効量と接触させることを含むカンピロバクター
・ピロリに対する抗体の存在検出方法であって、さらに
抗原／抗体複合体の形成度合が陽性指示いき値を越える
か否かを測定する段階を含む方法。 - （７）カンピロバクター・ピロリに対する抗体の存在検
出方法であって、抗体の存在下において検出可能量の抗
原／抗体複合体の形成に有効な量の固定抗原組成物を試
験試料と接触させる工程を含む方法であり、抗原組成物
がカンピロバクター・ピロリの少なくとも１菌株の少な
くともフラグメントを含むものであり、さらに、固相酵
素免疫測定法およびリポソームに基づく検定法から成る
群から選ばれる技術により抗原／抗体複合体の形成度合
を測定し、陽性指示いき値に対して前記度合を比較する
工程を含む方法。 - （８）体液試料を、請求項１または２記載の抗原組成物
の有効量と接触させ、次いで上記接触中における抗原／
抗体複合体の形成度合が陽性指示いき値を越えるか否か
を測定することを含む、胃炎または消化性潰瘍疾患の存
在に関する臨床診断試験方法。 - （９）請求項１または２記載の抗原組成物で被覆された
マルチウェル・プレートおよび前記プレートにおける抗
原／抗体複合体の存在検出用材料を含むカンピロバクタ
ー・ピロリ特異抗体の検出用診断試験キット。 - （１０）カンピロバクター・ピロリ感染の早期検出方法
であって、試験試料を、抗体の存在下において検出可能
量の抗原／抗体複合体の形成に有効な量の抗原組成物と
接触させることを含む方法であり、抗原組成物がカンピ
ロバクター・ピロリの少なくともフラグメントを含み、
６３０００、５７０００、４５０００、３１０００ダル
トンのフラグメントから成る群から選ばれるフラグメン
トを高濃度で有し、またカンピロバクター・ピロリ鞭毛
の少なくともフラグメントを有するものであり、さらに
ＩｇＭに基づく抗原／抗体複合体の形成範囲の測定段階
を含む方法。
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